JP2026509947A - 養子細胞療法および標的化免疫サイトカインの組合せを用いてがんを処置する方法 - Google Patents

Abstract

本開示は、養子細胞療法（ＡＣＴ）の効能を向上させる方法およびがんを処置する方法に関し、ここで、方法は、治療有効量のＡＣＴ（例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはＴＡＡに対するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む免疫細胞）と治療有効量の標的化免疫サイトカイン（例えば、ＩＬ２部分およびＰＤ１に結合する免疫グロブリン抗原結合ドメインを含む融合タンパク質）とを含む組合せ療法を、それを必要とするがんの対象に投与することを含む。本組合せ療法によって、単独療法としてＡＣＴを投与された対象、または非標的化免疫サイトカインとの組合せでＡＣＴを投与された対象と比較して、抗腫瘍効能の向上、腫瘍制御持続期間の向上および／または全生存期間の延長、が実証される。
【選択図】図１

Description

配列表
本出願の配列表は、ファイル名「１１１９５＿ＳｅｑＬｉｓｔ－１７９２２７－０３００２」、作成日２０２３年１０月２４日、サイズ６５，７０５バイトのＳＴ．２６フォーマットのｘｍｌファイルとして電子的に提出される。提出された本配列表は本明細書の一部であり、その全体を参照によって本明細書に組み入れる。

本開示は、全体として、がんを処置するための、養子細胞療法および標的化免疫サイトカインを含む組合せ療法に関する。

対象自身の免疫細胞（またはドナーの免疫細胞）を使用してがんなどの疾患を処置する養子細胞療法の使用を含めて、種々の免疫療法戦略がある。一般に、養子細胞療法は、対象への遺伝子組換えＴリンパ球の導入を伴う。養子細胞療法のいくつかの例としては、操作されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の使用が挙げられる。一般に、ＣＡＲは、Ｔ細胞シグナル伝達分子の細胞質ドメインにヒンジおよび膜貫通領域を介してカップリングされている、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に特異的な抗体または結合ドメインの単鎖断片可変領域を含む。最も一般的なリンパ球活性化部分は、Ｔ細胞エフェクター機能トリガー部分と連結したＴ細胞共刺激ドメインを含む。ＣＡＲ媒介性養子細胞療法によれば、ＣＡＲ移植Ｔ細胞が標的腫瘍細胞上のＴＡＡを直接認識しかつ攻撃することが可能になる。

ＴＣＲを使用する養子細胞療法は、Ｔ細胞を操作して、２つのサブユニットを有するヘテロ二量体である特定のＴＣＲを発現させること、を伴う。各サブユニットは、受容体を細胞膜に固定する定常領域、および抗原認識を行う超可変領域を含有する。ＴＣＲは、細胞の内側と外側にある腫瘍特異的タンパク質を認識することができる。ＴＣＲ療法を用いれば、Ｔ細胞を、対象のまたはドナーの血液から採取し次いで遺伝子組換えして、新規に操作されたＴＣＲを発現させることが可能であり、このＴＣＲを対象に次いで投与して、対象のがんを標的とすることができる。ＴＣＲは、細胞殺滅を媒介し、Ｂ細胞の増殖を高め、がんの発達および重症度を制限することが報告されてきた。

一因は生細胞培養に関する固有の複雑性および患者間変動を理由に、養子細胞療法剤は、臨床上の活性が安定しないという状況で、限定された成功をもたらす傾向があった。したがって、養子細胞療法の抗腫瘍活性を改善するニーズがある。

免疫サイトカインは、腫瘍病変に優先的に局在しかつ疾患部位で抗腫瘍活性をもたらす可能性を備える抗体－サイトカイン複合体である。サイトカインであるインターロイキン２（ＩＬ－２またはＩＬ２）は、主に活性化Ｔ細胞によって産生される多能性サイトカインである。ＩＬ２は、Ｔ細胞の増殖および分化を刺激し、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の生成ならびに末梢血リンパ球の細胞傷害性細胞およびリンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞への分化を誘導し、Ｔ細胞によるサイトカインならびに細胞溶解性分子の発現を促進し、Ｂ細胞の増殖および分化ならびにＢ細胞による免疫グロブリンの合成を容易にし、ならびに、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の生成、増殖ならびに活性化を刺激する。

ＩＬ２は、サプレッサーＴ細胞としても知られる末梢ＣＤ４＋ ＣＤ２５＋ 制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の維持に関与している。Ｔｒｅｇ細胞は、エフェクターＴ細胞がその（自己の）標的を破壊するのを、細胞－細胞接触をとおしてＴ細胞の援助および活性化を阻害することによりまたはＩＬ－１０もしくはＴＧＦβなどの免疫抑制性サイトカインの放出をとおしていずれかで抑制する。Ｔｒｅｇ細胞が枯渇すると、ＩＬ－２誘導性の抗腫瘍免疫が増強することが示された。しかし、その多能性の効果に起因して、ＩＬ２は腫瘍の成長を阻害するのに最適ではない。抗悪性腫瘍剤としてのＩＬ２の使用はまた、十分な腫瘍応答を発揮するのに必要な用量に伴う重大な毒性によって制限されてきた。

前述のことから、治療効能および安全性プロファイルの改善を備える新規ながん治療法に対するニーズがある。

本開示の技術は、前述のニーズのうちの１つまたはそれ以上を解決するものである。一態様では、本開示の技術は、養子細胞療法（ＡＣＴ）の効能を向上させるための方法であって：
（ａ）がんの対象を選択すること；および
（ｂ）治療有効量の標的化免疫サイトカインとの組合せで治療有効量のＡＣＴを対象に投与することを含み、組合せの投与により、単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、抗腫瘍応答の効能および持続期間の向上がもたらされる、方法に関する。

別の態様では、本開示の技術は、がんを処置するための方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の標的化免疫サイトカインとの組合せで治療有効量の養子細胞療法（ＡＣＴ）を投与することを含み、組合せの投与により、単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、抗腫瘍応答の効能および持続期間の向上がもたらされる、方法に関する。

本開示の方法のいずれかまたは両方の態様に関する種々の実施形態について本明細書に記載する。

一部の実施形態では、ＡＣＴは、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞から選択される免疫細胞を含む。一部の実施形態では、免疫細胞は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する改変ＴＣＲまたはＴＡＡに対するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。一部の実施形態では、ＴＡＡは、ＡＦＰ、ＡＬＫ、ＢＡＧＥタンパク質、ＢＣＭＡ、ＢＩＲＣ５（サバイビン）、ＢＩＲＣ７、β－カテニン、ｂｒｃ－ａｂｌ、ＢＲＣＡ１、ＢＯＲＩＳ、ＣＡ９、炭酸脱水酵素ＩＸ、カスパーゼ－８、ＣＡＬＲ、ＣＣＲ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０（ＭＳ４Ａ１）、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＫ４、ＣＥＡ、ＣＴＬＡ４、サイクリン－Ｂ１、ＣＹＰ１Ｂ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｒｂＢ２／Ｈｅｒ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、Ｆｒａ－１、ＦＯＬＲ１、ＧＡＧＥタンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧｌｏｂｏＨ、グリピカン－３、ＧＭ３、ｇｐ１００、Ｈｅｒ２、ＨＬＡ／Ｂ－ｒａｆ、ＨＬＡ／ｋ－ｒａｓ、ＨＬＡ／ＭＡＧＥ－Ａ３、ｈＴＥＲＴ、ＬＭＰ２、ＭＡＧＥタンパク質（例えば、ＭＡＧＥ－１、－２、－３、－４、－６、および－１２）、ＭＡＲＴ－１、メゾテリン、ＭＬ－ＩＡＰ、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ２、Ｍｕｃ３、Ｍｕｃ４、Ｍｕｃ５、Ｍｕｃ１６（ＣＡ－１２５）、ＭＵＭ１、ＮＡ１７、ＮＹ－ＢＲ１、ＮＹ－ＢＲ６２、ＮＹ－ＢＲ８５、ＮＹ－ＥＳＯ１、ＯＸ４０、ｐ１５、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＣＴＡ－１、ＰＬＡＣ１、ＰＲＬＲ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ（ＦＯＬＨ１）、ＲＡＧＥタンパク質、Ｒａｓ、ＲＧＳ５、Ｒｈｏ、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－３、ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＴＡＧ－７２、ＴＧＦ－β、ＴＭＰＲＳＳ２、トンプソン－ヌーベル抗原（Ｔｎ）、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、チロシナーゼ、およびウロプラキン－３、から選択される。

一部の実施形態では、標的化免疫サイトカインは、（ａ）チェックポイント阻害剤の免疫グロブリン抗原結合ドメインおよび（ｂ）ＩＬ２部分を含む融合タンパク質である。一部の実施形態では、ＩＬ２部分は、（ｉ）ＩＬ２受容体アルファ（ＩＬ２Ｒａ）またはその断片；および（ｉｉ）ＩＬ２またはその断片を含む。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、Ｂ７Ｈ１、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＡＩＲ１、ＴＩＧＨＴ、ＶＩＳＴＡ、またはＶＴＣＮ１の阻害剤である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤はＰＤ－１の阻害剤である。

一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１、１１および２０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに、配列番号５および１５から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）ならびに３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含み、ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は：（ａ）それぞれ、配列番号２、３、４、６、７および８；（ｂ）それぞれ、配列番号１２、１３、１４、１６、７および１７；ならびに（ｃ）それぞれ、配列番号２１、２２、２３、６、７および８、から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１／５、１１／１５および２０／５から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列ペアを含む。

一部の実施形態では、融合タンパク質は、ＩｇＧ１アイソタイプのＨＣＶＲおよび重鎖定常領域を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、ＩｇＧ４アイソタイプのＨＣＶＲおよび重鎖定常領域を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号９、１８および２４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；ならびに、配列番号１０、１９および２５から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は：（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖；（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖；または（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

一部の実施形態では、抗原結合ドメインは重鎖を含み、ＩＬ２部分は配列番号３０または３１のアミノ酸配列を含むリンカーを介して重鎖のＣ末端に付着されている。一部の実施形態では、ＩＬ２部分は配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｌ２部分は野生型ＩＬ２を含む。一部の実施形態では、ＩＬ２は配列番号２９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ２部分は、ＩＬ２Ｒａまたはその断片のＣ末端にリンカーを介して接続されたＩＬ２またはその断片を含む。一部の実施形態では、ＩＬ２Ｒａまたはその断片は配列番号２８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、各単量体の重鎖定常領域をとおして二量体化している二量体融合タンパク質である。

一部の実施形態では、標的化免疫サイトカインはＰＤ－１標的指向化部分およびＩＬ２部分を含む。一部の実施形態では、ＰＤ－１標的指向化部分は、ＰＤ－１に特異的に結合する免疫グロブリン抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは：（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；（ｂ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；または（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。一部の実施形態では、ＩＬ２部分は（ｉ）ＩＬ２Ｒａまたはその断片；および（ｉｉ）ＩＬ２またはその断片を含む。一部の実施形態では、ＩＬ２部分は配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、標的化免疫サイトカインはＲＥＧＮ１０５９７である。

一部の実施形態では、がんは、副腎腫瘍、胆管がん、膀胱がん、脳がん、乳がん、細胞腫、中枢または末梢神経系組織がん、子宮頸がん、結腸がん、内分泌または神経内分泌がんまたは造血器がん、食道がん、線維腫、消化管がん、神経膠腫、頭頸部がん、リー・フラウメニ腫瘍、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、髄膜腫、神経内分泌Ｉ型またはＩＩ型腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性疾患、上咽頭がん、口腔がん、口腔咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、膵島細胞がん、副甲状腺がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、呼吸器がん、肉腫、皮膚がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、気管がん、泌尿生殖器がんおよび子宮がん、から選択される。

一部の実施形態では、上記組合せの投与により、腫瘍成長の遅延、腫瘍細胞数の減少、腫瘍退縮、生存の延長、部分奏効、および完全奏効のうちの１つまたはそれ以上から選択される治療効果が生み出される。一部の実施形態では、治療有効量のＡＣＴは１×１０^６個以上の免疫細胞を含む。一部の実施形態では、治療有効量の標的化免疫サイトカインは、０．００５ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇである。一部の実施形態では、標的化免疫サイトカインは血管内、皮下、腹腔内または腫瘍内に投与される。一部の実施形態では、ＡＣＴは静脈内注入を介して投与される。

一部の実施形態では、ＡＣＴは標的化免疫サイトカインの投与前または投与後に投与される。一部の実施形態では、ＡＣＴは標的化免疫サイトカインの投与と同時に投与される。一部の実施形態では、標的化免疫サイトカインおよび／またはＡＣＴは１つまたはそれ以上の用量で対象に投与される。

一部の実施形態では、方法は、さらなる治療剤または療法を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、さらなる治療剤または療法は、放射線、手術、化学療法剤、がんワクチン、Ｂ７－Ｈ３阻害剤、Ｂ７－Ｈ４阻害剤、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）阻害剤、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有３（ＴＩＭ３）阻害剤、ガレクチン９（ＧＡＬ９）阻害剤、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリン（Ｉｇ）含有抑制因子（ＶＩＳＴＡ）の阻害剤、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）阻害剤、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）阻害剤、ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを備えるＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、アンジオポエチン－２（Ａｎｇ２）阻害剤、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体、カルメット・ゲラン桿菌ワクチン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、細胞毒素、インターロイキン６受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害剤、インターロイキン４受容体（ＩＬ－４Ｒ）阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、抗体薬物複合体、抗炎症薬、ならびにそれらの組合せ、から選択される。

別の態様では、本開示の技術は、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合する抗原結合部分および（ｉｉ）ＩＬ２部分を含む標的化免疫サイトカインとの組合せで、腫瘍の成長を処置しまたは阻害する方法において使用するための、腫瘍関連抗原に特異的に結合する改変Ｔ細胞受容体またはキメラ抗原受容体を含む免疫細胞に関し、ここで、方法は、それを必要とする対象に、治療有効量の免疫細胞および治療有効量の標的化免疫サイトカインを投与することを含む。

実施例２に記載のように、ＭＡＧＥ－Ａ４_{２３０－２３９}四量体陽性ＴＣＲ－Ｔ細胞を生成するためのＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔレンチウイルス構築物の一例を示す構成図である。 実施例２に記載のように、無関係の対照ＴＣＲ－Ｔ細胞、対照ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３、対照ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７、４×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ、４×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３、または４×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７を投与されているマウスにおけるＡ３７５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例２に記載のように、２×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ、２×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３、または２×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７を投与されているマウスにおけるＡ３７５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例２に記載のように、１×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ、１×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３、または１×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７を投与されているマウスにおけるＡ３７５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例２に記載のように、４×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔを投与されているマウスにおけるＡ３７５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例２に記載のように、４×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３を投与されているマウスにおけるＡ３７５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例２に記載のように、４×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７を投与されているマウスにおけるＡ３７５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例２に記載のように、２×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔを投与されているマウスにおけるＡ３７５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例２に記載のように、２×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３を投与されているマウスにおけるＡ３７５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例２に記載のように、２×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７を投与されているマウスにおけるＡ３７５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例２に記載のように、１×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔを投与されているマウスにおけるＡ３７５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例２に記載のように、１×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３を投与されているマウスにおけるＡ３７５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例２に記載のように、１×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７を投与されているマウスにおけるＡ３７５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例２に記載のように、４×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ、４×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３、または４×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７を投与されているマウスの生存パーセントで測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例２に記載のように、２×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ、２×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３、または２×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７を投与されているマウスの生存パーセントで測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例２に記載のように、１×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ、１×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３、または１×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７を投与されているマウスの生存パーセントで測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 図１７Ａ～１７Ｃは、実施例３に記載のように、ＣＡＲ構築物の例を示す構成図のセットの図である：図１７Ａは、ＣＤ３ｚおよび４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインを備える抗ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＤ２０／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ）である；図１７Ｂは、ＣＤ３ｚおよびＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを備える抗ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＤ２０／２８ｚ ＣＡＲ－Ｔ）である；ならびに、図１７Ｃは、ＣＤ３ｚおよび４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインを備える対照ＣＡＲ－Ｔ（ＣＴＲＬ／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ）である。 同上。 実施例３に記載のように、０．５×１０^６個のＣＴＲＬ／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３ ０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５×１０^６個のＣＤ２０／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３ ０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５×１０^６個のＣＴＲＬ／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７ ０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５×１０^６個のＣＤ２０／ＢＢＺ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７ ０．２ｍｇ／ｋｇ、または０．５×１０^６個のＣＤ２０／ＢＢＺ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７ ０．５ｍｇ／ｋｇを投与されているＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例３に記載のように、０．５×１０^６個のＣＴＲＬ／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３ ０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５×１０^６個のＣＤ２０／ＣＤ２８Ｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３ ０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５×１０^６個のＣＴＲＬ／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７ ０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５×１０^６個のＣＤ２０／２８Ｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７ ０．２ｍｇ／ｋｇ、または０．５×１０^６個のＣＤ２０／２８ｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７ ０．５ｍｇ／ｋｇを投与されているＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例３に記載のように、０．５×１０^６個のＣＴＲＬ／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３ ０．２ｍｇ／ｋｇを投与されているＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例３に記載のように、０．５×１０^６個のＣＴＲＬ／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７ ０．２ｍｇ／ｋｇを投与されているＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例３に記載のように、０．５×１０^６個のＣＤ２０／ＢＢＺ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３ ０．２ｍｇ／ｋｇを投与されているＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例３に記載のように、０．５×１０^６個のＣＤ２０／ＢＢＺ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７ ０．２ｍｇ／ｋｇを投与されているＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例３に記載のように、０．５×１０^６個のＣＤ２０／ＢＢＺ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７ ０．５ｍｇ／ｋｇを投与されているＣ５７ＢＬ／６マウスの腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定したｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例３に記載のように、０．５×１０^６個のＣＤ２０／ＣＤ２８Ｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０３ ０．２ｍｇ／ｋｇを投与されているＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例３に記載のように、０．５×１０^６個のＣＤ２０／２８Ｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７ ０．２ｍｇ／ｋｇを投与されているＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例３に記載のように、０．５×１０^６個のＣＤ２０／２８Ｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７ ０．５ｍｇ／ｋｇを投与されているＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ^３）で測定した、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の結果を示すグラフの図である。 実施例４に記載のように、指示された組合せ療法を投与されたリンパ球枯渇マウスにおける７日目にての末梢血Ｂ２２０^＋ Ｂ細胞の頻度および絶対数を示す一対のグラフの図である。 実施例４に記載のように、指示された組合せ療法を投与されたリンパ球枯渇マウスにおける７日目にての末梢血ＧＦＰ^＋ ＣＡＲ Ｔ細胞の頻度および絶対数を示す一対のグラフの図である。 実施例４に記載のように、指示された組合せ療法を投与された非リンパ球枯渇マウスにおける７日目にての末梢血Ｂ２２０^＋ Ｂ細胞の頻度および絶対数を示す一対のグラフの図である。 実施例４に記載のように、指示された組合せ療法を投与された非リンパ球枯渇マウスにおける７日目にての末梢血ＧＦＰ^＋ ＣＡＲ Ｔ細胞の頻度および絶対数を示す一対のグラフの図である。 実施例４に記載のように、指示された組合せ療法を投与されたリンパ球枯渇マウスにおける２１日目にての末梢血Ｂ２２０^＋ Ｂ細胞の頻度および絶対数を示す一対のグラフの図である。 実施例４に記載のように、指示された組合せ療法を投与されたリンパ球枯渇マウスにおける２１日目にての末梢血ＧＦＰ^＋ ＣＡＲ Ｔ細胞の頻度および絶対数を示す一対のグラフの図である。 実施例４に記載のように、指示された組合せ療法を投与された非リンパ球枯渇マウスにおける２１日目にての末梢血Ｂ２２０^＋ Ｂ細胞の頻度および絶対数を示す一対のグラフの図である。 実施例４に記載のように、指示された組合せ療法を投与された非リンパ球枯渇マウスにおける２１日目にての末梢血ＧＦＰ^＋ ＣＡＲ Ｔ細胞の頻度および絶対数を示す一対のグラフの図である。 実施例５に記載のように、指示された組合せ療法を投与されたマウスにおける平均腫瘍体積を示すグラフの図である。 図３７Ａ～Ｄは、実施例６に関する図である。図３７Ａは、指示された腫瘍細胞株とともにｉｎ ｖｉｔｒｏで共培養した後の抗ｈｕＭＵＣ１６または対照のＣＡＲ＋ Ｔ細胞上のＰＤ－１の発現を示すグラフである。図３７Ｂは、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の概略図である。図３７Ｃは、経時的にモニタリングされた平均腫瘍成長（平均値＋ＳＤ）を示すグラフであり、統計学的解析は、ボンフェローニの多重比較検定とともに２元配置ＡＮＯＶＡを使用して行った（^＊＊Ｐ≦０．０１、^＊＊＊Ｐ≦０．００１、^＊＊＊＊Ｐ≦０．０００１）。図３７Ｄは、個々の腫瘍成長曲線の集団であり、この場合、データは、異なる２つの同系腫瘍モデルを用いて行われた実験からの結果を代表する。 同上。 同上。 同上。

本開示の技術は、標的化免疫サイトカインが、改変されたＴＣＲまたはＣＡＲを含む免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を増大するという予想外の発見に、少なくとも部分的には基づいている。がんを処置するための細胞療法（本明細書では「養子細胞療法」、ＡＣＴ、または養子免疫療法と呼ぶ）は、ＴＣＲまたはＣＡＲで改変されている免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を含むが、この場合、ＴＣＲまたはＣＡＲはＴＡＡに標的指向化されている。このような細胞療法は、中程度かつ非永続性の腫瘍制御を示す。ＩＬ２は細胞の増殖および増幅のために投与される；しかし、ネイキッドＩＬ２または非標的化ＩＬ２は対象において毒性をもたらす。対照的に、特定の理論に縛られることなく、ＩＬ２が、チェックポイント阻害剤へと標的指向化されている部分とともに共投与される場合（本明細書では「標的化免疫サイトカイン」と呼ぶ）、その組合せにより、免疫細胞の増殖、増幅および生存を駆動する標的化薬剤がもたらされる、と考えられる。生存の増強は、抗腫瘍応答の持続期間の向上に対応する。本明細書で記載されるように、標的化免疫サイトカインの投与により、ＴＡＡに対するＴＣＲまたはＣＡＲで改変されたＴ細胞の生存の延長および抗腫瘍活性のより長い持続期間がもたらされる。このようなＴＡＡの非限定的な例としては、なかでも、ＭＡＧＥ－Ａ４およびＣＤ２０が挙げられる。前述の共投与によれば、マウスにおいてより大きな抗腫瘍応答（例えば、腫瘍のより大きな縮小）および応答のより長い持続期間がもたらされる。したがって、標的化免疫サイトカインとＴＣＲ改変またはＣＡＲ改変の免疫細胞との本開示の組合せ療法によって実証されることとは、がんの対象における強力かつ永続性の腫瘍制御を誘導する上での予期せぬ相乗的抗腫瘍効能、である。

がんを処置するための方法
本開示は、養子細胞療法（ＡＣＴ）の効能を向上させる方法を含み、ここで、方法は、がんの対象に、治療有効量のＡＣＴおよび治療有効量の標的化免疫サイトカインを含む組合せ療法を投与することを含む。本開示はまた、がんを処置する方法も含み、ここで、方法は、それを必要とする対象に、治療有効量のＡＣＴおよび治療有効量の標的化免疫サイトカインを含む組合せ療法を投与することを含む。

本明細書で使用される場合、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」等の用語は、症状を緩和すること、一時的または永続的なベースでのいずれかで症状の因果関係を排除すること、腫瘍成長を遅延させることもしくは阻害すること、腫瘍細胞量もしくは腫瘍負荷を低減させること、腫瘍退縮を促進すること、腫瘍縮小、壊死および／もしくは消失を引き起こすこと、腫瘍再発を防止すること、転移を防止もしくは阻害すること、転移性腫瘍成長を阻害すること、ならびに／または対象の生存期間を延長させることを意味する。

本明細書で使用される場合、「それを必要とする対象」という表現は、がんの１つもしくはそれ以上の症状もしくは徴候を呈するヒトもしくは非ヒト哺乳動物、ならびに／またはがんと診断されたヒトもしくは非ヒト哺乳動物およびがんのための処置を必要とするヒトもしくは非ヒト哺乳動物を指す。「対象という」用語には、原発性または転移性腫瘍（進行性悪性腫瘍）の対象が含まれる。ある特定の実施形態では、「それを必要とする対象」という表現には、以前の療法（例えば、抗がん剤による処置）に抵抗性もしくは不応性であるか、または以前の療法によって不適切に制御されている腫瘍の対象が含まれる。上記表現には、例えば、毒性の副作用が理由で従来の抗がん療法が賢明ではない腫瘍の対象も含まれる。例えば、上記表現には、１つまたはそれ以上のサイクルの化学療法を受けかつ毒性の副作用を経験してきた対象が含まれる。

本明細書で使用される場合、「腫瘍」または「がん」という用語は、異常細胞の制御不能な（かつ多くの場合急速な）増殖によって特徴付けられる疾患を指す。がん細胞は局所的に広がることもあれば、または血流およびリンパ系をとおして身体の他の部分に広がることもある。種々のがんの例が本明細書に記載されており、その例としては、それらに限定されないが、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、腎臓がん、肝臓がん、脳がん、副腎がん、自律神経節がん、胆道がん、骨がん、子宮内膜がん、眼がん、卵管がん、生殖管がん、大腸がん、髄膜のがん、食道がん、腹膜がん、下垂体がん、陰茎がん、胎盤がん、胸膜がん、唾液腺がん、小腸がん、胃がん、精巣がん、胸腺がん、甲状腺がん、上部気道消化管がん、尿路がん、膣がん、外陰がん、リンパ腫、白血病、肺がん等が挙げられる。「腫瘍」、「がん」および「悪性腫瘍」という各用語は本明細書では互換的に使用される。

ある特定の実施形態では、腫瘍の成長を処置しまたは阻害するための本開示の方法は、それらに限定されないが、肛門がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、胃のがん、頭頸部がん、腎臓がん、肝臓がん、肺がん、骨髄腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、直腸がん、唾液腺がん、皮膚がん、扁平上皮癌、胃がん、精巣がん、および子宮がんの成長を、処置しまたは阻害することを含む。

一部の実施形態では、本開示の方法により、抗腫瘍応答の効能および持続期間の向上がもたらされる。本開示の本態様による方法は、がんの対象を選択すること、および、治療有効量の養子細胞療法との組合せで治療有効量の標的化免疫サイトカインを対象に投与することを含む。ある特定の実施形態では、本方法により、単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象または非標的化免疫サイトカイン（非標的化ＩＬ２サイトカインのような）との組合せでＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、腫瘍阻害の向上が、例えば、約２０％、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超または８０％超だけ、もたらされる。

ある特定の実施形態では、本方法により、単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象または非標的化免疫サイトカイン（非標的化ＩＬ２サイトカインのような）との組合せでＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、抗腫瘍応答の持続期間の向上が、例えば、約２０％、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超または８０％超だけ、もたらされる。ある特定の実施形態では、ＡＣＴとの組合せでの標的化免疫サイトカインの投与により、未処置の対象または単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象もしくは非標的化免疫サイトカイン（非標的化ＩＬ２サイトカインのような）との組合せでＡＣＴを用いて処置された対象を超えて、対象における応答および応答の持続期間が、例えば、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、２０％超、３０％超、４０％超または５０％超だけ、向上する。

ある特定の実施形態では、本開示の方法により、腫瘍の成長および発達の遅延がもたらされる、例えば、未処置の対象またはＡＣＴ単独療法を用いて処置された対象もしくは非標的化免疫サイトカイン（非標的化ＩＬ２サイトカインのような）との組合せでＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、腫瘍の成長を、約３日、３日超、約７日、７日超、１５日超、１か月超、３か月超、６か月超、１年超、２年超または３年超だけ、遅延させることができる。

ある特定の実施形態では、本明細書で開示される組合せのいずれかの投与により、腫瘍の再発が防止され、および／または対象の生存期間が延長される、例えば、未処置の対象または単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象もしくは非標的化免疫サイトカイン（非標的化ＩＬ２サイトカインのような）との組合せでＡＣＴを用いて処置された対象の生存を超えて、１～５日だけ、５日だけ、１０日だけ、１５日、１５日超、１か月超、３か月超、６か月超、１２か月超、１８か月超、２４か月超、３６か月超または４８か月超だけ、生存期間が延長される。

ある特定の実施形態では、ＡＣＴとの組合せでの標的化免疫サイトカインのがんの対象への投与により、腫瘍細胞に関するあらゆる証拠の完全な消失（「完全奏効」）がもたらされる。ある特定の実施形態では、ＡＣＴとの組合せでの標的化免疫サイトカインのがんの対象への投与により、腫瘍細胞または腫瘍サイズの少なくとも３０％以上の低下（「部分奏効」）がもたらされる。ある特定の実施形態では、ＡＣＴとの組合せでの標的化免疫サイトカインのがんの対象への投与により、測定可能な新規病変を含めて腫瘍細胞／病変の完全なまたは部分的な消失がもたらされる。腫瘍減少は、当技術分野で既知の任意の方法、例えば、Ｘ線、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）、細胞学、組織学、または分子遺伝学的解析によって測定することができる。

ある特定の実施形態では、ＡＣＴとの組合せでの標的化免疫サイトカインのがんの対象への投与により、未処置対象、またはＡＣＴ単独療法を用いて処置された対象もしくは非標的化免疫サイトカイン（非標的化ＩＬ２サイトカインのような）との組合せでＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、全体的な奏効率の改善がもたらされる。

ある特定の実施形態では、治療有効量の本開示のＡＣＴおよび治療有効量の本開示の標的化免疫サイトカインをがんの対象に投与することにより、単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象または非標的化免疫サイトカイン（非標的化ＩＬ２サイトカインのような）との組合せでＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、対象の全生存期間（ＯＳ）および無増悪生存期間（ＰＦＳ）の延長がもたらされる。

ある特定の実施形態では、ＰＦＳは、単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象または非標的化免疫サイトカイン（非標的化ＩＬ２サイトカインのような）との組合せでＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも４か月、少なくとも５か月、少なくとも６か月、少なくとも７か月、少なくとも８か月、少なくとも９か月、少なくとも１０か月、少なくとも１１か月、少なくとも１年、少なくとも２年または少なくとも３年だけ、延長される。

ある特定の実施形態では、ＯＳは、単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象または非標的化免疫サイトカイン（非標的化ＩＬ２サイトカインのような）との組合せでＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも４か月、少なくとも５か月、少なくとも６か月、少なくとも７か月、少なくとも８か月、少なくとも９か月、少なくとも１０か月、少なくとも１１か月、少なくとも１年、少なくとも２年または少なくとも３年だけ延長される。

養子細胞療法（ＡＣＴ）
本開示の方法は、ＡＣＴとの組合せでの標的化免疫サイトカインの投与を含む。本明細書で使用される場合、「養子細胞療法」、「ＡＣＴ」または「養子免疫療法」という各用語は、互換的に使用され、がんの対象への改変された免疫細胞の投与を指す。「免疫細胞」（本明細書では「免疫エフェクター細胞」とも互換的に呼ばれる）とは、対象の免疫系の一部でありかつ対象の体内でがんと闘うことを助ける、細胞を指す。本開示の方法で使用するための免疫細胞の非限定的な例としては、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球およびナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞が挙げられる。免疫細胞は、療法を受けている対象に対して自家性であっても異種性であってもよい。

本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞」および「Ｔリンパ球」という用語は互換的に使用される。Ｔ細胞には、胸腺細胞、ナイーブＴリンパ球、未成熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、静止Ｔリンパ球、または活性化Ｔリンパ球が含まれる。Ｔ細胞は、Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞、例えば、Ｔヘルパー１（Ｔｈｌ）細胞またはＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞とすることができる。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ；ＣＤ４^＋ Ｔ細胞）、ＣＤ４^＋ Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ；ＣＤ８^＋ Ｔ細胞）、腫瘍浸潤性細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＩＬ；ＣＤ８^＋ Ｔ細胞）、ＣＤ４^＋ＣＤ８^＋ Ｔ細胞、またはＴ細胞のその他のサブセットとすることができる。特定の実施形態で使用するのに適したＴ細胞の他の例示的な集団としては、ナイーブＴ細胞およびメモリーＴ細胞が挙げられる。また、「ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞」または「ＮＫＴ細胞」も含まれるが、この細胞は、セミインバリアントのａｂ Ｔ細胞受容体を発現するが、ＮＫ１．１などのＮＫ細胞に通常関連するさまざまな分子マーカーも発現する、Ｔ細胞の特殊な集団を指す。ＮＫＴ細胞には、ＮＫ１．１^＋およびＮＫ１．ＧならびにＣＤ４^＋、ＣＤ４、ＣＤ８^＋、およびＣＤ８の各細胞が含まれる。

ＮＫＴ細胞上のＴＣＲは、ＭＨＣ Ｉ様分子ＣＤ Ｉｄによって提示される糖脂質抗原を認識するという点で独特である。ＮＫＴ細胞は、炎症または免疫寛容のいずれかを促進するサイトカインを産生するその能力に起因して、保護効果または有害効果のいずれかを有することができる。また、「ガンマ－デルタＴ細胞（γδ Ｔ細胞）」も含まれ、この細胞は、その表面上に明らかに異なるＴＣＲを保有するＴ細胞の小さなサブセットに対して特殊な集団を指し、ＴＣＲがａ－ＴＣＲ鎖およびｂ－ＴＣＲ鎖と呼ばれる２つの糖タンパク質鎖から構成される大多数のＴ細胞とは異なり、γδ Ｔ細胞のＴＣＲはｇ鎖とｄ鎖から構成される。γδ Ｔ細胞は、免疫監視および免疫調節において役割を果たすことができるが、ＩＬ－１７の重要な給源でありかつ堅牢なＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することが見出された。また、「制御性Ｔ細胞」または「Ｔｒｅｇ」も含まれ、この細胞は、異常または過剰な免疫応答を抑制しかつ免疫寛容において役割を果たす、Ｔ細胞を指す。Ｔｒｅｇは通常には転写因子Ｆｏｘｐ３陽性ＣＤ４^＋ Ｔ細胞であるが、Ｔｒｅｇには、ＩＬ－１０産生ＣＤ４^＋ Ｔ細胞である転写因子Ｆｏｘｐ３陰性制御性Ｔ細胞も含まれる場合もある。

Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺の問題、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含めて、いくつかの給源から得ることができる。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ分離などの当業者に既知のいくつかの技法を使用して、対象から採取される血液のユニットから得ることができる。一実施形態では、個体の循環血液由来のＴ細胞は、アフェレシスによって得られる。アフェレシス生成物は、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球および血小板を含めて、リンパ球を通常は含有する。

Ｔ細胞のような本開示の免疫エフェクター細胞は、既知の方法を使用して分離に続いて遺伝子組換えする（改変免疫細胞を形成する）ことができ、または、免疫細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで遺伝子組換えされる前に、活性化および増幅することができもしくは前駆細胞の場合では分化させることができる。一部の実施形態では、Ｔ細胞のような免疫エフェクター細胞を、本明細書に記載のＴＣＲまたはＣＡＲで遺伝子組換えし（例えば、ＴＣＲまたはＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスベクターで形質導入し）、次いで、ｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化および増幅することができる。Ｔ細胞を活性化および増幅するための技法は、当技術分野で既知であり、本開示の技術とともに使用するのに適している。例えば、ＵＳ６，９０５，８７４；ＵＳ６，８６７，０４１；ＵＳ６，７９７，５１４；ＷＯ２０１２０７９０００；ＵＳ２０１６／０１７５３５８を参照されたい。本開示の方法で使用するのに適したＴＣＲ発現またはＣＡＲ発現の免疫エフェクター細胞は、当技術分野で記載の既知の技法に従って製造することができる。

本開示の方法で使用するために、免疫細胞は、ＴＡＡに対するＴＣＲで改変してもＣＡＲで改変してもよい。換言すると、本開示の方法で使用するためのＡＣＴの非限定的な例としては、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する改変ＴＣＲ、またはＴＡＡに対するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が挙げられる。

ＴＡＡは、それらに限定されないが、以下をはじめとする任意のがんに由来するものとすることができる：副腎腫瘍、胆管がん、膀胱がん、脳がん、乳がん、細胞腫、中枢または末梢神経系組織がん、子宮頸がん、結腸がん、内分泌または神経内分泌がんまたは造血器がん、食道がん、線維腫、消化管がん、神経膠腫、頭頸部がん、リー・フラウメニ腫瘍、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、髄膜腫、神経内分泌Ｉ型またはＩＩ型腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性疾患、上咽頭がん、口腔がん、口腔咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、膵島細胞がん、副甲状腺がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、呼吸器がん、肉腫、皮膚がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、気管がん、泌尿生殖器がんまたは子宮がん。

ある特定の実施形態では、ＴＡＡは以下から選択される：ＡＦＰ、ＡＬＫ、ＢＡＧＥタンパク質、ＢＣＭＡ、ＢＩＲＣ５（サバイビン）、ＢＩＲＣ７、β－カテニン、ｂｒｃ－ａｂｌ、ＢＲＣＡ１、ＢＯＲＩＳ、ＣＡ９、炭酸脱水酵素ＩＸ、カスパーゼ－８、ＣＡＬＲ、ＣＣＲ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０（ＭＳ４Ａ１）、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＫ４、ＣＥＡ、ＣＴＬＡ４、サイクリン－Ｂ１、ＣＹＰ１Ｂ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｒｂＢ２／Ｈｅｒ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、Ｆｒａ－１、ＦＯＬＲ１、ＧＡＧＥタンパク質（例えば、ＧＡＧＥ－１、－２）、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧｌｏｂｏＨ、グリピカン－３、ＧＭ３、ｇｐ１００、Ｈｅｒ２、ＨＬＡ／Ｂ－ｒａｆ、ＨＬＡ／ｋ－ｒａｓ、ＨＬＡ／ＭＡＧＥ－Ａ３、ｈＴＥＲＴ、ＬＭＰ２、ＭＡＧＥタンパク質（例えば、ＭＡＧＥ－１、－２、－３、－４、－６、および－１２）、ＭＡＲＴ－１、メゾテリン、ＭＬ－ＩＡＰ、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ２、Ｍｕｃ３、Ｍｕｃ４、Ｍｕｃ５、Ｍｕｃ１６（ＣＡ－１２５）、ＭＵＭ１、ＮＡ１７、ＮＹ－ＢＲ１、ＮＹ－ＢＲ６２、ＮＹ－ＢＲ８５、ＮＹ－ＥＳＯ１、ＯＸ４０、ｐ１５、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＣＴＡ－１、ＰＬＡＣ１、ＰＲＬＲ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ（ＦＯＬＨ１）、ＲＡＧＥタンパク質、Ｒａｓ、ＲＧＳ５、Ｒｈｏ、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－３、ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＴＡＧ－７２、ＴＧＦ－β、ＴＭＰＲＳＳ２、トンプソン－ヌーベル抗原（Ｔｎ）、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、チロシナーゼ、またはウロプラキン－３。

本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞受容体」とは、ＴＡＡに特異的に結合する分離されたＴＣＲポリペプチド、または、分離された免疫細胞（例えばＴ細胞）上で発現されるＴＣＲを指す。ＴＣＲは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ；マウスにおいて）またはヒト白血球抗原（ＨＬＡ；ヒトにおいて）複合体と会合する、抗原提示細胞の表面上の小抗原決定基（例えば腫瘍関連抗原に含まれる）上のエピトープに結合する。ＴＣＲとはまた、可変結合ドメイン、定常ドメイン、膜貫通領域、および短い細胞質テール（例えば、Ｊａｎｅｗａｙら、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ、３版、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、１９９７年を参照されたい）を有する、ＭＨＣ受容体に結合した抗原ペプチドに特異的に結合することができる免疫グロブリンスーパーファミリのメンバーも指す。

本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、そのサイズにかかわらず、好ましくは２０種類の天然アミノ酸のいずれかから本質的になる任意のポリマーを指す。「タンパク質」という用語は比較的より大きなタンパク質に関連して使用される場合が多く、「ペプチド」は小さなポリペプチドに関連して使用される場合が多いが、当技術分野ではこれらの用語の使用は重複する場合が多い。「ポリペプチド」という用語は、特に断りのない限り、タンパク質、ポリペプチドおよびペプチドを概して指す。本開示に従って有用なペプチドは、遠心分離またはＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動のような標準の分子サイズ測定技法によって判断して、全体として、約０．１～１００ＫＤ以上で最大約１０００ＫＤの間であり、好ましくは約０．１、０．２、０．５、１、２、５、１０、２０、３０～５０ＫＤの間である。

ＴＣＲは細胞表面に見出すことができ、α鎖およびβ鎖（それぞれＴＣＲαおよびＴＣＲβとしても知られる）またはγ鎖およびδ鎖（それぞれＴＣＲγおよびＴＣＲδとしても知られる）を有するヘテロ二量体から一般には構成される。免疫グロブリンと同様に、ＴＣＲ鎖の細胞外部分（例えば、α鎖、β鎖）は、２つの免疫グロブリン領域、可変領域（例えば、ＴＣＲ可変α領域またはＶαおよびＴＣＲ可変β領域またはＶβ；通常はＮ末端にてのＫａｂａｔ付番に基づくアミノ酸１～１１６）、および細胞膜に隣接する１つの定常領域（例えば、ＴＣＲ定常ドメインαまたはＣα、通常はＫａｂａｔに基づくアミノ酸１１７～２５９、ＴＣＲ定常ドメインβまたはＣβ、通常はＫａｂａｔに基づくアミノ酸１１７～２９５）を含有する。また、免疫グロブリンと同様に、可変ドメインはフレームワーク領域（ＦＲ）によって隔てられたＣＤＲを含有する。一部の実施形態では、ＴＣＲはＴ細胞（またはＴリンパ球）の表面に見出され、ＣＤ３複合体と会合する。本開示のＴＣＲの給源は、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、またはその他の哺乳動物のような種々の動物種由来とすることができる。一部の実施形態では、本開示のＴＣＲの給源は、ヒトのアルファ鎖およびベータ鎖を含むＴＣＲを産生するように遺伝子操作されたマウスである（例えば、ＷＯ２０１６／１６４４９２を参照されたい）。

本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性および結合親和性を付与する抗体可変領域内のアミノ酸配列を指す。一般に、各重鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）があり、各軽鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）がある。ＣＤＲの境界を特定するのに使用することができる例示的な慣用法としては、例えば、Ｋａｂａｔの定義、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、ＡＢＭの定義、およびＩＭＧＴの定義が挙げられる。例えば、Ｋａｂａｔ、１９９１、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（Ｋａｂａｔ付番スキーム）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、１９９７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７～９４８頁（Ｃｈｏｔｈｉａ付番スキーム）；Ｍａｒｔｉｎら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：９２６８～９２７２頁（ＡＢＭ付番スキーム）；およびＬｅｆｒａｎｃら、２００３、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５～７７頁（ＩＭＧＴ付番スキーム）、を参照されたい。抗体内のＣＤＲ配列を特定するための公開データベースも利用可能である。

ＴＣＲαおよびＴＣＲβのポリペプチド（および同様にＴＣＲγおよびＴＣＲδのポリペプチド）は、ジスルフィド結合を介して互いに連結している。ＴＣＲを構成する２つのポリペプチドのそれぞれは、定常領域および可変領域を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに細胞質テール（膜貫通ドメインおよび細胞質テールも定常領域の一部である）を含有する。ＴＣＲの可変領域は、その抗原特異性を決定し、免疫グロブリンと同様に３つのＣＤＲを含む。ＴＣＲは、体内のほとんどのＴ細胞上で発現し、そしてＭＨＣ制限抗原の認識に関与することが知られている。ＴＣＲα鎖は、共有結合で連結したＶα領域およびＣα領域を含み、一方、そのβ鎖は、Ｃβ領域に共有結合で連結したＶβ領域を含む。Ｖα領域およびＶβ領域は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）（またはヒトにおいてＨＬＡ）との関連で抗原と結合することができるポケットまたは間隙を形成する。

「ＨＬＡ」という用語は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）系または複合体を指し、これは、ヒトのＭＨＣタンパク質をコードする遺伝子複合体である。これらの細胞表面タンパク質は、ヒトにおいて免疫系の調節を担っている。ＭＨＣクラスＩに対応するＨＬＡ（Ａ、Ｂ、およびＣ）は、細胞内部からのペプチドを提示する。「ＨＬＡ－Ａ」という用語は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座によってコードされるヒト白血球抗原（ＨＬＡ）のグループを指す。ＨＬＡ－Ａは、ヒトＭＨＣクラスＩ細胞表面受容体の主要な３つのタイプのうちの１つである。受容体はヘテロ二量体であり、重α鎖およびより小さなβ鎖から構成される。α鎖はバリアントＨＬＡ－Ａ遺伝子によってコードされ、β鎖（β２－ミクログロブリン）はインバリアントβ２ミクログロブリン分子である。「ＨＬＡ－Ａ２」（「ＨＬＡ－Ａ２^＊０１」とも呼ばれる）という用語は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座にての特定のＭＨＣクラスＩ対立遺伝子の一グループである；α鎖はＨＬＡ－Ａ^＊０２遺伝子によってコードされ、β鎖はβ２－ミクログロブリンまたはＢ２Ｍ遺伝子座によってコードされる。

ＴＣＲは、優れた特異性を備える検出分子であり、抗体と同様に、非常に大きい多様性を呈する。ＴＣＲ分子の一般的な構造、およびペプチド：ＭＨＣへの結合を含めて、かかる分子を製造および使用するための技法は、ＰＣＴ／ＵＳ９８／０４２７４、ＰＣＴ／ＵＳ９８／２０２６３、ＷＯ９９／６０１２０に記載されている。

例えば、非ヒト動物（例えば、げっ歯類、例えば、マウスまたはラット）を遺伝子操作して、少なくとも１つのヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントによってコードされる可変ドメインを含むヒトまたはヒト化ＴＣＲを発現させることができる。例えば、ＷＯ２０１６／１６４４９２を参照されたい。例えば、Ｖｅｌｏｃｉ－Ｔ（登録商標）マウス技術（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）によって遺伝子組換えマウスが提供され、このマウスは、腫瘍および／またはウイルス抗原に対する完全ヒト型治療用ＴＣＲの産生を可能にするとともに、本開示の技術で使用するのに適したＴＣＲを産生するのに使用することができる。当業者であれば、本明細書に記載のアッセイとの併用で標準的な突然変異誘発技法をとおして、変更されたＴＣＲ配列を取得し、それらを特定の結合親和性および／または特異性について試験することができる。当技術分野で既知の有用な突然変異誘発技法には、限定されないが、デノボ遺伝子合成、オリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発、領域特異的突然変異誘発、リンカースキャン突然変異誘発、およびＰＣＲによる部位特異的突然変異誘発が含まれる。

一部の実施形態では、ＴＡＡに対するＴＣＲを生成するための方法は、非ヒト動物（例えば、げっ歯類、例えば、マウスまたはラット）を、例えば、そのゲノム内に再配列されていないヒトＴＣＲ可変遺伝子座を含む遺伝子操作された非ヒト動物を、ＴＡＡ由来の特定のペプチドを用いて免疫すること；上記動物が上記ペプチドに対する免疫応答を開始することを可能にすること；上記動物から上記ペプチドに反応性であるＴ細胞を分離すること；上記Ｔ細胞によって発現されるヒトＴＣＲ可変領域の核酸配列を決定すること；上記ヒトＴＣＲ可変領域を、上記ヒトＴＣＲ可変領域がヒトＴＣＲ定常領域に操作可能に連結されるように、上記ヒトＴＣＲ定常領域の核酸配列を含むヌクレオチド構築物にクローニングすること；ならびに、上記ペプチドに特異的なヒトＴ細胞受容体を上記構築物から発現させること、をそれぞれ含むことができる。Ｔ細胞を分離する工程、上記Ｔ細胞によって発現されるヒトＴＣＲ可変領域の核酸配列を決定する工程、ヒトＴＣＲ定常領域の核酸配列を含むヌクレオチド構築物に上記ヒトＴＣＲ可変領域をクローニングする工程、および、ヒトＴ細胞受容体を発現させる工程は、当業者であれば既知の標準技法を使用して実行される。

本明細書で使用される場合、ＨＬＡ提示ペプチド（ＨＬＡ－Ａ２提示ペプチドのような）とは、細胞の表面で発現されるＨＬＡタンパク質のようなＨＬＡタンパク質に結合されているペプチドを指すことができる。したがって、ＨＬＡ提示ペプチドに結合するＴＣＲは、ＨＬＡによって結合されているペプチドに結合し、場合によりＨＬＡ自体にも結合する。ＨＬＡとの相互作用により、特定のＨＬＡによって提示されるペプチドへの結合のための特異性を付与することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲは、分離されたＨＬＡ提示ペプチドに結合することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲは、細胞の表面上のＨＬＡ提示ペプチドに結合することができる。

本明細書で使用される場合、「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」とは、免疫グロブリン抗原結合ドメイン（例えば、免疫グロブリン可変ドメイン）およびＴＣＲ定常ドメインまたはその一部を含む抗原結合タンパク質を指すが、このタンパク質は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）療法として対象に投与することができる。本明細書で使用される場合、ＴＣＲポリペプチドの「定常ドメイン」は、膜近位ＴＣＲ定常ドメインを含み、同じく、ＴＣＲ膜貫通ドメインおよび／またはＴＣＲ細胞質テールも含む場合もある。例えば、一部の実施形態では、ＣＡＲは二量体であるが、この二量体は、ＴＣＲβ定常ドメインに連結された免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む第１のポリペプチド、ならびに、ＴＣＲα定常ドメインに連結された免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（例えば、κまたはλ可変ドメイン）を含む第２のポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは二量体であるが、この二量体は、ＴＣＲα定常ドメインに連結された免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む第１のポリペプチド、ならびに、ＴＣＲβ定常ドメインに連結された免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（例えば、κまたはλ可変ドメイン）を含む第２のポリペプチドを含む。

本明細書で使用される場合、「可変ドメイン」とは、抗原へのＴＣＲの結合に直接関与するアルファ鎖の可変領域またはベータ鎖の可変領域を指す。本明細書で使用される場合、「定常ドメイン」という用語は、抗原へのＴＣＲの結合に直接関与しないが、種々のエフェクター機能を呈するアルファ鎖の定常領域およびベータ鎖の定常領域を指す。

ＣＡＲとは、Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに連結されたｓｃＦｖまたはその他の抗体剤の抗原結合ドメインを含有する、通常には人工的な、構築されたハイブリッドタンパク質またはポリペプチドである。本開示の文脈では、ＣＡＲは腫瘍関連抗原に指向化されている。ＣＡＲの特徴には、モノクローナル抗体の抗原結合特性を使用してＭＨＣ制限のない様式で、選択された標的に対するＴ細胞の特異性および反応性を再指向化させるＣＡＲ能力が含まれる。ＭＨＣ制限のない抗原認識は、ＣＡＲを発現するＴ細胞に、抗原プロセシングとは無関係に、抗原を認識し、これにより、腫瘍回避の主要なメカニズムを迂回する能力をもたらす。本明細書で開示されるＡＣＴで使用される場合、免疫細胞は、例えば、その両技法が当技術分野で既知であるＲＮＡおよびＤＮＡを使用するトランスフェクションによることを含めて、既知の任意の様式でＣＡＲを発現するように操作することができる。

一部の実施形態では、ＴＣＲまたはＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞は、まずその細胞をその培養培地から回収し、次いで、投与に適した培地および容器のシステム（「薬学的に許容される」担体）中で細胞を洗浄し濃縮することによって、処置有効量で製剤化される。適切な注入培地は、任意の等張培地製剤、通常には生理食塩水、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ）またはＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（Ｂａｘｔｅｒ）であってもよいが、５％デキストロース水溶液または乳酸リンゲル液も利用することができる。注入培地にヒト血清アルブミンを補充してもよい。

本開示の方法において投与されることになる免疫細胞の治療有効数は、典型的には１０^２個超の細胞、例えば、１０^６個を含めてそれ以下の細胞、１０^８個を含めてそれ以下の細胞、１０^９個を含めてそれ以下の細胞、または１０^１０個超の細胞である。対象に投与されることになる細胞の数および／またはタイプは、療法が意図される最終的な用途に左右されるであろう。

本開示のＴＣＲおよびＣＡＲは組換えのものとすることができ、このことは、こういったものは、例えば、ＤＮＡスプライシングおよびトランスジェニック発現をはじめとする組換えＤＮＡ技術として当技術分野で既知の技術または方法によって作製し、発現させ、分離しまたは取得することができる。組換えのＴＣＲまたはＣＡＲは、非ヒト哺乳動物（トランスジェニック非ヒト哺乳動物、例えば、トランスジェニックマウスを含めて）もしくは細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）の発現系で発現させてもよく、または、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから分離してもよい。

標的化免疫サイトカイン
本明細書で使用される場合、「標的化免疫サイトカイン」とは、チェックポイント阻害剤に結合する（すなわち、チェックポイント阻害剤を「標的とする」）部分に連結されているインターロイキン２（ＩＬ２）のようなサイトカインを指す。チェックポイント阻害剤の非限定的な例としては、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、Ｂ７Ｈ１、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＡＩＲ１、ＴＩＧＨＴ、ＶＩＳＴＡ、またはＶＴＣＮ１の阻害剤が挙げられる。一部の実施形態では、標的化免疫サイトカインは、チェックポイント阻害剤の免疫グロブリン抗原結合ドメインを含む。好ましい一実施形態では、チェックポイント阻害剤はＰＤ－１の阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片）である。ある特定の実施形態では、標的化免疫サイトカインは、（ｉ）チェックポイント阻害剤の抗原結合ドメインおよび（ｉｉ）ＩＬ２部分を含む融合タンパク質である。

一部の実施形態では、抗原結合ドメインはヒトＰＤ－１に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは抗体またはその抗原結合断片である。

本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」という用語は、共有結合または非共有結合で結合された２つ以上のポリペプチド配列を含むタンパク質を意味する。本開示により包含される融合タンパク質には、第１のポリペプチドをコードする核酸配列を第２のポリペプチドをコードする核酸配列とつなげて単一のオープンリーディングフレームを形成するキメラ遺伝子構築物の翻訳産物が含まれる。代替的に、融合タンパク質は、宿主細胞で共発現することができる別々のベクター上の２つ以上の遺伝子構築物によってコードすることもできる。全体として、「融合タンパク質」とは、ペプチド結合によってまたはいくつかのペプチドによってつながれた２つ以上のタンパク質の組換えタンパク質である。一部の実施形態では、融合タンパク質は、２つのドメインの間にペプチドリンカーを含む場合もある。

本明細書で開示される融合タンパク質は、１つまたはそれ以上の保存的改変を含むことができる。１つまたはそれ以上の保存的改変を備える融合タンパク質は、所望の機能特性を保持することができ、この特性は、当技術分野で既知の機能アッセイを使用して試験することができる。「保存的配列改変」という用語は、当該アミノ酸配列を含有するタンパク質の結合特性に著しく影響を及ぼさないかまたはそれを変更することがないアミノ酸改変を指す。そのような保存的改変には、アミノ酸の置換、付加および欠失が含まれる。改変は、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介性突然変異誘発のような当技術分野で既知の標準技法によって導入することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられているものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリは当技術分野で定義されている。これらのファミリには以下が含まれる：塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）；酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）；非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）；ベータ－分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）；および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）。１つまたはそれ以上の保存的改変を含む。１つまたはそれ以上の保存的改変を備えるＣａｓタンパク質は、所望の機能特性を保持することができ、この特性は、当技術分野で既知の機能アッセイを使用して試験することができる。本明細書で使用される場合、「保存的配列改変」という用語は、当該アミノ酸配列を含有するタンパク質の結合特性に著しく影響を及ぼさないかまたはそれを変更することがないアミノ酸改変を指す。そのような保存的改変には、アミノ酸の置換、付加および欠失が含まれる。改変は、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介性突然変異誘発のような当技術分野で既知の標準技法によって導入することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられているものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリは当技術分野で定義されている。これらのファミリには以下が含まれる：塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）；酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）；非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）；ベータ－分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）；および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）。

本明細書で使用される場合、「抗体」とは、４つのポリペプチド鎖：ジスルフィド結合によって相互接続された２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）から構成される免疫グロブリン分子（すなわち、「完全な抗体分子」）、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）またはその抗原結合断片を指す。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」）および重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３から構成される）から構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶＬ」）および軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、ＣＤＲと称する超可変性の領域にさらに細分することでき、これらは、フレームワーク領域（ＦＲ）と称するより保存された領域で隔てて配置されている。各ＶＨおよびＶＬは３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、これらは、以下：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で、アミノ末端からカルボキシ末端まで配置している。一部の実施形態では、抗体（またはその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖細胞系配列と同一であってもよく、または自然にもしくは人工的に改変されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は２つ以上のＣＤＲの並列解析に基づいて定義することができる。「抗体」という用語には、完全抗体分子の抗原結合断片も含まれる。

本明細書で使用される場合、「抗原」とは、免疫系にその抗原に対する抗体を産生することまたは特定の細胞性免疫応答を生み出すことを引き起こさせる、あらゆる物質を指す。疾患関連抗原とは、免疫系にその抗原に対する抗体を産生することまたは特定の細胞性免疫応答を生み出すことを引き起こさせる、任意の疾患に関連するあらゆる物質である。

本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合断片」、抗体の「抗原結合部分」等には、天然に存在する、酵素によって入手可能な、合成のもしくは遺伝子操作された任意のポリペプチドまたは糖タンパク質であって、抗原と特異的に結合して複合体を形成するポリペプチドまたは糖タンパク質が含まれる。抗体の抗原結合断片は、例えば、タンパク質消化のようなまたは抗体の可変ドメインおよび場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を伴う組換え遺伝子操作技法のような、適切な任意の標準技法を使用して完全抗体分子から誘導することができる。このようなＤＮＡは、既知でありかつ／もしくは例えば、商業的な給源、ＤＮＡライブラリ（例えば、ファージ－抗体ライブラリを含めて）から容易に入手可能であり、または合成することができる。ＤＮＡは、配列決定しかつ化学的にまたは分子生物学技法を使用することにより操作して、例えば、１つもしくはそれ以上の可変ドメインおよび／もしくは定常ドメインを適切な立体配置に配置すること、または、コドンを導入すること、システイン残基を生成すること、アミノ酸を改変すること、付加することもしくは欠失させること等ができる。

抗原結合断片の非限定的な例としては：（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドのような分離されたＣＤＲ）または拘束されたＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドを模倣するアミノ酸残基からなる最小認識ユニット、が挙げられる。他の操作された分子、例えば、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠損抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ－移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば一価ナノボディ、二価ナノボディ等）、小モジュラー免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインも、本明細書で使用されるような「抗原結合断片」という表現内に包含される。

抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの可変ドメインを通常には含むことになる。可変ドメインは、任意のサイズであっても任意のアミノ酸組成であってもよく、１つまたはそれ以上のフレームワーク配列を備えるフレームに隣接するかまたはその中にある少なくとも１つのＣＤＲを一般には含むことになる。Ｖ_Ｌドメインと会合したＶ_Ｈドメインを有する抗原結合断片では、Ｖ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインは、互いに対して適切な任意の配列で位置することができる。例えば、可変領域は、二量体であってもよく、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｈ－Ｖ_ＬまたはＶ_Ｌ－Ｖ_Ｌの二量体を含有してもよい。代替的に、抗体の抗原結合断片は、単量体のＶ_ＨドメインまたはＶ_Ｌドメインを含有してもよい。

一部の実施形態では、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合で連結した少なくとも１つの可変ドメインを含有することができる。本開示の抗体の抗原結合断片内に見出すことができる、可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な、例示的立体配置としては：（ｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１；（ｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ２；（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ３；（ｉｖ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２；（ｖ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（ｖｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（ｖｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｌ；（ｖｉｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１；（ｉｘ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ２；（ｘ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ３；（ｘｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２；（ｘｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（ｘｉｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；および（ｘｉｖ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌが挙げられる。上に記載の例示的立体配置のいずれをも含めて、可変ドメインおよび定常ドメインのいずれの立体配置においても、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接連結していてもよく、または、完全ヒンジもしくは部分ヒンジもしくはリンカー領域によって連結していてもよい。ヒンジ領域は、単一ポリペプチド分子中の隣接する可変ドメインおよび／または隣接する定常ドメインの間の可撓性または半可撓性リンケージをもたらす、少なくとも２個（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０個またはそれ超）のアミノ酸からなることができる。さらに、本開示の抗体の抗原結合断片は、互いに非共有結合で会合したおよび／または１つもしくはそれ以上の単量体のＶ_ＨドメインもしくはＶ_Ｌドメインと非共有結合で会合した（例えば、ジスルフィド結合によって）、上に記載の可変ドメインおよび定常ドメインの立体配置のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含むことができる。

一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）および３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含み、ここで：ＨＣＤＲ１は配列番号２、１２または２１のアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２は配列番号３、１３または２２のアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ３は配列番号４、１４または２３のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ１は配列番号６または１６のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２は配列番号７のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ３は配列番号８または１７のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、（ｉ）配列番号２、３、４、６、７および８；（ｉｉ）配列番号１２、１３、１４、１６、７および１７；または（ｉｉｉ）配列番号２１、２２、２３、６、７および８のそれぞれのアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む。

一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、それぞれ、配列番号２１、２２、２３、６、７および８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む。

一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１、１１および２０のアミノ酸配列、または、配列番号１、１１および２０と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、ならびに、配列番号５もしくは１５のアミノ酸配列、または、配列番号５もしくは１５と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。配列同一性は、アルゴリズム、例えば、グローバルアラインメント用のＮｅｅｄｌｅｍａｎ Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３～４５３頁（１９７０））、またはローカルアラインメント用のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１４７：１９５～１９７頁（１９８１））を使用して算出することができる。適切な別のアルゴリズムが、Ｄｕｆｒｅｓｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２０：１２６９～１２７１頁（２００２））により記載されており、ソフトウェアＧｅｎｅＰＡＳＴ（ＧＱ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）で使用されている。

一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号１／５、１１／１５および２０／５から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列ペアを含む。

一部の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２６の重鎖定常領域をさらに含む。

一部の実施形態では、融合タンパク質は重鎖および軽鎖を含み、ここで、重鎖は、配列番号９、１８もしくは２４のアミノ酸配列、または、配列番号９、１８もしくは２４と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；軽鎖は、配列番号１０、１９もしくは２５のアミノ酸配列、または、配列番号１０、１９もしくは２５と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号９／１０、１８／１９、または２４／２５のアミノ酸配列を含む重鎖／軽鎖配列ペアを含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２４および２５のアミノ酸配列を含む重鎖／軽鎖配列ペアを含む。

一部の実施形態では、ＩＬ２部分は、（ｉ）ＩＬ２またはその断片；および（ｉｉ）ＩＬ２受容体アルファ（「ＩＬ２Ｒα」または「ＩＬ２Ｒａ」）またはその断片を含む。

一部の実施形態では、ＩＬ２部分は、場合によりリンカーを介して、ＩＬ２ＲａのＩＬ２結合ドメインに融合された野生型（例えば、ヒト野生型）またはバリアントＩＬ２ドメインを含むことができる。一部の実施形態では、その断片のＩＬ２ＲａのＩＬ２結合ドメインは、そのＣ末端でリンカーを介してＩＬ２（野生型もしくはバリアント）ドメインまたはその断片に結合されている。

本明細書で使用される場合、ＩＬ２の「野生型」形態とは、野生型形態が突然変異型ＩＬ２ポリペプチドのアミノ酸の各位置に野生型アミノ酸を有することを除いて、その他の点では突然変異型ＩＬ２ポリペプチドと同じであるＩＬ２の一形態である。例えば、ＩＬ２突然変異型が完全長ＩＬ２（すなわち、他の分子にまったく融合またはコンジュゲートしていないＩＬ２）である場合、この突然変異型の野生型形態は完全長ネイティブＩＬ２である。

一部の実施形態では、ＩＬ２またはその断片は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ２部分は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。

標的化免疫サイトカインは、分子の種々の成分を連結する１つまたはそれ以上のリンカー（例えば、ペプチドリンカーまたは非ペプチドリンカー）を含むことができる。一部の実施形態では、標的化免疫サイトカインの２つ以上の成分がペプチドリンカーによって互いに連結されている。非限定的な例として、リンカーは、（ａ）ＩＬ２部分およびチェックポイント阻害剤の抗原結合ドメイン、（ｂ）ＩＬ２部分内の異なるドメインどうし（例えば、ＩＬ２ドメインおよびＩＬ２Ｒａドメイン）、または（ｃ）抗原結合部分内の異なるドメインどうし（例えば、抗ＰＤ－１抗原結合ドメインの異なる成分どうし）を連結するために使用することができる。

本開示の標的化免疫サイトカインにおいて使用することができる柔軟なリンカーの例としては、Ｃｈｅｎら、Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．、６５（１０）：１３５７～６９頁（２０１３）およびＫｌｅｉｎら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ、２７（１０）：３２５～３０頁（２０１４）に開示されているものが挙げられる。特に有用な柔軟なリンカーは、グリシンおよびセリンの繰返し、例えば、ＧｎＳまたはＳＧｎの単量体または多量体であるか、またはそれらを含む（式中、ｎは１から１０までの整数、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である）。一部の実施形態では、リンカーは、繰返しＧ４Ｓ（ＧＧＧＧＳ；配列番号３２）の単量体または多量体、例えば、（ＧＧＧＧＳ）ｎであるかまたはそれらを含む。

一部の実施形態では、ＩＬ２部分および抗原結合部分は、ＧＧＧＧＳ（配列番号３２）の１つまたはそれ以上の繰返しのアミノ酸配列を含むリンカーを介して接続されている。一部の実施形態では、リンカーは配列番号３０または３１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ２部分はペプチドリンカーを介して抗原結合部分のＣ末端に連結されている。一部の実施形態では、リンカーは配列番号３０のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、標的化免疫サイトカインは、二量体融合タンパク質を含む。一部の実施形態では、二量体融合タンパク質はホモ二量体融合タンパク質であり、この場合、各構成物単量体が本明細書に記載の融合タンパク質を構成する。一部の実施形態では、二量体融合タンパク質の単量体は、各単量体の重鎖定常領域をとおして互いに二量体化している。好ましい一実施形態では、第１の単量体成分のＩＬ２は、二量体タンパク質の第２の単量体コンポーメントに含まれるＩＬ２Ｒａに結合している。

本開示の標的化免疫サイトカインは、ＩＬ２Ｒα、ＩＬ２ＲβおよびＩＬ２Ｒγへの結合の減弱を呈する。一部の実施形態では、標的化免疫サイトカインは、ＲＥＧＮ２８１０、ペンブロリズマブまたはニボルマブと競合しない。一部の実施形態では、標的化免疫サイトカインは、ＩＬ２と比較してヒトＩＬ２Ｒα／β／γ三量体およびＩＬ２Ｒβ／γ二量体の受容体複合体を活性化する上での活性の低減、ならびに、非標的化のＩＬ２Ｒα－ＩＬ２構築物と比較してヒトＩＬ２Ｒα／β／γ三量体およびＩＬ２Ｒβ／γ二量体の受容体複合体を活性化する上での活性の上昇を呈する。一部の実施形態では、標的化免疫サイトカインは、野生型ヒトＩＬ２と比較して、ＩＦＮ－γ放出のレベルで測定して、抗原活性化Ｔ細胞を刺激する上での活性の上昇を呈する。

一部の実施形態では、標的化免疫サイトカインは抗ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２融合タンパク質である。

組合せ療法
全体として、本開示の方法は、治療有効量のＡＣＴおよび治療有効量の標的化免疫サイトカインを含む組合せ療法をがんの対象に投与することを含む。一部の実施形態では、本開示の組合せ療法により、単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象または非標的化免疫サイトカインとの組合せでＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、がんの対象に投与されたＡＣＴの効能が向上し、それによってがんがより効果的に処置される。

医薬組成物に関して、本開示のＡＣＴおよび／または標的化免疫サイトカインは、１つまたはそれ以上の担体、賦形剤および／または希釈剤とともに製剤化することができる。一部の実施形態では、標的化免疫サイトカインは、１つまたはそれ以上の担体、賦形剤および／または希釈剤とともに、融合タンパク質（例えば、二量体融合タンパク質）の形態で製剤化することができる。本本開示のＡＣＴおよび／または標的化免疫サイトカインを含む医薬組成物は、獣医用途またはヒトにおける医薬用途向けのような、特定の用途向けに製剤化することができる。組成物の形態（例えば、乾燥粉末、液体製剤等）および使用される賦形剤、希釈剤および／または担体は、意図される療法用途ならびにＡＣＴおよび／または標的化免疫サイトカインの投与に関する所望の様式に左右されることになる。

本開示の医薬組成物は、ＡＣＴおよび標的化免疫サイトカインのうちのいずれかを含有してもそれらの両方を含有してもよい。このような医薬組成物は、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、髄腔内、局所的または局部的のような、さまざまな経路により対象に投与することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は対象に静脈内または皮下に投与される。医薬組成物は、１回の用量あたり所定量の本開示のＡＣＴおよび／または標的化免疫サイトカインを含有する単位剤形で適宜提示することができる。

一部の実施形態では、本開示の方法は、さらなる治療剤または療法の投与をさらに含む。さらなる治療剤または療法の非限定的な例としては、放射線、手術、がんワクチン、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ＬＡＧ－３阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤またはリガンドのアンタゴニスト（例えば、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、ｇ、またはＶＩＳＴＡに対する抗体）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト［例えば、ＵＳ７，０８７，４１１に記載のアフリベルセプトもしくはその他のＶＥＧＦ阻害融合タンパク質のような「ＶＥＧＦ－Ｔｒａｐ」、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、ベバシズマブもしくはラニビズマブ）、またはＶＥＧＦ受容体の小分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブもしくはパゾパニブ）］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスバクマブ）、トランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、共刺激受容体に対するアゴニスト（例えば、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質に対するアゴニスト）、腫瘍特異的抗原に対する抗体（例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１およびＣＡ１９－９）、ワクチン（例えば、カルメット・ゲラン桿菌ワクチン、がんワクチン）、抗原提示を増加させるアジュバント（例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）、細胞毒素、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、およびビンクリスチン）、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、サイトカイン、例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、およびＩＬ－１５、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣおよび抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）、抗炎症薬（例えば、コルチコステロイドおよび非ステロイド系抗炎症薬）、抗酸化剤のような栄養補助食品、ならびにそれらの組合せが挙げられる。

一部の実施形態では、さらなる治療剤または療法は抗がん薬を含む。本明細書で使用される場合、「抗がん薬」とは、がんを処置するのに有用なあらゆる薬剤を意味し、この薬剤には、それらに限定されないが、以下が含まれる：細胞毒素、ならびに、代謝拮抗剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗生物質、抗有糸分裂剤、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、コルチコステロイド、ミトタン（Ｏ，Ｐ’－（ＤＤＤ））、バイオ医薬品（例えば、抗体およびインターフェロン）および放射性薬剤のような薬剤。本明細書で使用される場合、「細胞毒素または細胞傷害剤」とはまた、化学療法剤をも指し、細胞に有害であるあらゆる薬剤を意味する。例としては、タキソール（登録商標）（パクリタキセル）、テモゾロミド、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、シスプラチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシンならびにそれらのアナログまたはホモログが挙げられる。

本明細書で使用される場合、「治療剤」とは、対象への投与の際に何らかの有益な効果を付与する分子または化合物を指す。有益な効果には、診断上の判定の使用可能性；疾患、症状、障害または病的状態の寛解；疾患、症状、障害または状態の開始を軽減することまたは防止すること；および一般には疾患、症状、障害または病的状態を弱めることが含まれる。

一部の実施形態では、さらなる治療剤または療法とのＡＣＴおよび標的化免疫サイトカインの組合せ投与により、抗腫瘍効能の向上、それらの一次療法のうちの一方もしくそれらの両方の副作用の軽減、ならびに／またはそれらの一次療法のうちの一方もしくはそれらの両方の投薬量の軽減がもたらされる。

本開示はまた、本開示のＡＣＴ（例えば、抗ＴＡＡ ＴＣＲまたはＣＡＲで改変された免疫細胞）および標的化免疫サイトカイン（例えば、チェックポイント阻害剤の免疫グロブリン抗原結合ドメインおよびＩＬ－２部分を含む融合タンパク質）を含むキットも提供する。キットは典型的には、キットの内容物の意図された使用を指示するラベルおよび使用のための使用説明書を含む。本明細書で使用される場合、「ラベル」という用語には、キット上にキット中にもしくはキットとともに供給されるか、または別様にキットに付属している、あらゆる書面または記録資料が含まれる。一部の実施形態では、本開示は、がんに罹患している対象を処置するためのキットを提供し、この場合、キットは：開示されるＡＣＴの治療上有効な投薬量；開示される標的化免疫サイトカインの治療上有効な投薬量；および（ｂ）本明細書で開示の方法のいずれかにおいて投薬量の組合せを使用するための使用説明書を含む。

投与レジメン
本開示は、本開示のＡＣＴおよび／または本開示の標的化免疫サイトカインの組合せを、治療応答を達成する投薬頻度でがんの対象に投与することを含む方法を含む。一部の実施形態では、本開示のＡＣＴは、治療応答が達成される限り、週に約４回、週に２回、週に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、５週間毎に１回、６週間毎に１回、８週間毎に１回、１２週間毎に１回、またはより少ない頻度で投与される、１つまたはそれ以上の用量で対象に投与される。

一部の実施形態では、本開示の標的化免疫サイトカインは、治療応答が達成される限り、週に約４回、週に２回、週に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、５週間毎に１回、６週間毎に１回、８週間毎に１回、１２週間毎に１回、またはより少ない頻度で投与される、１つまたはそれ以上の用量で対象に投与される。

本開示の方法では、開示されるＡＣＴは、開示される標的化免疫サイトカインとの組合せで対象に投与される。本明細書で使用される場合、「との組合せで」という表現は、ＡＣＴが標的化免疫サイトカインの前、後、またはそれと同時に投与されることを意味する。この表現には、ＡＣＴおよび標的化免疫サイトカインの順次投与または同時投与が含まれる。

一部の実施形態では、ＡＣＴが標的化免疫サイトカインの「前に」投与される場合、ＡＣＴは、標的化免疫サイトカインの投与の、１２週間超前に、約１２週間前に、約１１週間前に、約１０週間前に、約９週間前に、約８週間前に、約７週間前に、約６週間前に、約５週間前に、約４週間前に、約３週間前に、約２週間前に、約１週間前に、約１５０時間前に、約１００時間前に、約７２時間前に、約６０時間前に、約４８時間前に、約３６時間前に、約２４時間前に、約１２時間前に、約１０時間前に、約８時間前に、約６時間前に、約４時間前に、約２時間前に、約１時間前に、約３０分前に、約１５分前にまたは約１０分前に投与することができる。

一部の実施形態では、ＡＣＴが標的化免疫サイトカインの「後」に投与される場合、ＡＣＴは、標的化免疫サイトカインの投与の、約１０分後に、約１５分後に、約３０分後に、約１時間後に、約２時間後に、約４時間後に、約６時間後に、約８時間後に、約１０時間後に、約１２時間後に、約２４時間後に、約３６時間後に、約４８時間後に、約６０時間後に、約７２時間後に、約１週間後に、約２週間後に、約３週間後に、約４週間後に、約５週間後に、約５週間後に、約７週間後に、約８週間後に、約９週間後に、約１０週間後に、約１１週間後に、約１２週間後に、または１２週間超後に投与することができる。

本明細書で使用される場合、「同時」投与とは、ＡＣＴおよび標的化免疫サイトカインが、単一の剤形（例えば、共配合の）で対象に投与されること、または、互いに約３０分以内（すなわち、前に、後に、または同時に）、例えば約１５分以内、または約５分以内に別々の剤形で対象に投与されることを意味する。別々の剤形で投与される場合、各剤形は同じ経路を介して投与してもよい（例えば、両方とも静脈内、皮下等に投与される）；または、代替的に、各剤形は異なる経路を介して投与してもよい。いずれにしても、成分を単一の剤形で投与すること、同じ経路により別々の剤形で投与すること、または異なる経路により別々の剤形で投与することは、本開示の目的上「同時」投与とすべてみなされる。

本明細書で使用される場合、「順次」投与とは、選択された療法の各用量が、所定の間隔（例えば、数時間、数日、数週間または数か月）によって隔てられた異なる時点で、例えば、異なる日に対象に投与されることを意味する。例示を目的とするが、順次投与は、ＡＣＴ（または標的化免疫サイトカイン）の初回用量を投与すること、これに続いて１つまたはそれ以上の二次用量を標的化免疫サイトカイン（またはＡＣＴ）を投与すること、場合によりこれに続いてＡＣＴ（または標的化免疫サイトカイン）の１つまたはそれ以上の三次用量を投与することを含むことができる。例示を目的とするが、順次投与は、対象に、ＡＣＴ（または標的化免疫サイトカイン）の初回用量を投与すること、これに続いて標的化免疫サイトカイン（またはＡＣＴ）の１つまたはそれ以上の二次用量を投与すること、場合によりこれに続いて標的化免疫サイトカイン（またはＡＣＴ）の１つまたはそれ以上の三次用量を投与することを含むことができる。

本明細書で使用される場合、「初回」用量、「二次」用量および「三次」用量とは、投与の時系列を指す。したがって、「初回」用量とは、処置レジメンのはじめに投与される用量であり（「ベースライン用量」とも称される）；「二次」用量は、初回用量の後に投与され；「三次」用量は、二次用量の後に投与される。初回、二次および三次の各用量は、選択された療法に関しすべて同じ量を含有してもよく、または、選択された療法に関し異なる量を含有してもよい。

投薬量
全体として、本開示の方法に従って対象に投与されるＡＣＴおよび／または標的化免疫サイトカインの量は、治療有効量である。本明細書で使用される場合、「治療有効量」とは、ＡＣＴとの組合せでの標的化免疫サイトカインの量を意味し、これは以下のうちの１つまたはそれ以上をもたらす：未処置の対象または単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、（ａ）がんの症状の重症度もしくは持続時間の低減；（ｂ）腫瘍成長の阻害の増強、もしくは腫瘍壊死、腫瘍縮小および／もしくは腫瘍消失の増加；（ｃ）腫瘍成長および発達の遅延；（ｄ）腫瘍転移を阻害しもしくは遅らせもしくは停止させる；（ｅ）腫瘍成長の再発の防止；（ｆ）がんの対象の生存の延長；ならびに／または（ｇ）従来の抗がん療法の使用もしくは必要性の低減（例えば、化学療法剤もしくは細胞傷害剤の使用の低減もしくは除外）。

一部の実施形態では、治療有効量のＡＣＴは、約１×１０^６個以上、２×１０^６個以上、３×１０^６個以上、４×１０^６個以上、５×１０^６個以上、６×１０^６個以上、７×１０^６個以上、８×１０^６個以上、９×１０^６個以上、１×１０^７個以上、２×１０^７個以上、３×１０^７個以上、４×１０^７個以上、５×１０^７個以上、６×１０^７個以上、７×１０^７個以上、８×１０^７個以上、９×１０^７個以上、１×１０^８個以上、２×１０^８個以上、３×１０^８個以上、４×１０^８個以上、５×１０^８個以上、６×１０^８個以上、７×１０^８個以上、８×１０^８個以上、９×１０^８個以上、１×１０^９個以上、２×１０^９個以上、３×１０^９個以上、４×１０^９個以上、５×１０^９個以上、６×１０^９個以上、７×１０^９個以上、８×１０^９個以上、９×１０^９個以上の細胞の量で投与される、腫瘍関連抗原に対する改変ＴＣＲまたはＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を含むことができる。一部の実施形態では、対象に投与されるＡＣＴの量は、腫瘍関連抗原に対する改変ＴＣＲまたはＣＡＲを発現する１×１０^６個の以上の免疫細胞を含む。

一部の実施形態では、治療有効量の標的化免疫サイトカインは、約０．０５ｍｇから約６００ｍｇまで、例えば、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇ、または約６００ｍｇの標的指向化サイトカインとすることができる。

一部の実施形態では、対象に投与される標的化免疫サイトカインの量は、０．００５ｍｇ／対照の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、例えば、０．０１ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．０２ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．０３ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．０４ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．０５ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．０６ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．０７ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．０８ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．０９ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．１ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．２ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．３ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．４ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．５ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．６ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．７ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．８ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．９ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、１ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、０．００５ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～５ｍｇ／対象の体重１ｋｇ、例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．０２ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．０４ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．０７ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．０８ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．０９ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、または１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇを含む。

本明細書で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈上他に明確に指示されない限り、複数の参照を含む。本明細書で使用される場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、または「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という各用語およびその変化形は、特に明記しない限り、その後に列挙される項目およびその均等物ならびにさらなる主題を包含することを意味する。本明細書で使用される場合、「一実施形態では」、「種々の実施形態では」、「一部の実施形態では」などの各語句が繰り返し使用される。そのような語句は、必ずしも同じ実施形態を指すわけではないが、文脈がそうでないことを指示しない限り、同じ実施形態を指してもよい。本明細書で使用される場合、「および／または」または「／」という用語は、この用語が関連する項目のいずれか１つ、項目の任意の組合せ、または項目のすべてを意味する。

本明細書で使用される場合、「概」または「約」という用語は、目的の１つまたはそれ以上の値に適用される場合、記載された基準値と同様である値を指す。一部の実施形態では、「概」または「約」という用語は、特に明記しない限り、または文脈から明らかでない限り（そのような数が可能な値の１００％を超えると思われる場合を除く）、記載された基準値のいずれかの方向（よりも大きいまたはよりも小さい）において２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ未満に入る値の範囲を指す。

本開示は、本開示の技術の原則を例示するにすぎない。本明細書に記載されるいかなる例も、限定することを意図するものではなく、添付の特許請求の範囲に関する多くの可能な実施形態のうちの一部を記載するにすぎない。当業者であれば、本明細書に例示および記載される実施形態および用途の例に従うことなく、かつ以下の特許請求の範囲の真の精神および範囲から逸脱することなく、行うことができる種々の改変および変更を容易に認識するであろう。本明細書において引用および／または論議されるすべての参考文献は、参照によってそれらの全体が、かつ、各参考文献が参照によって個々に組み入れているかのように同程度まで、本明細書に組み入れる。

本開示の技術を、次に、以下の例を用いて説明する。本明細書内のいずれでも、これらおよびその他の例の使用は、例示にすぎず、本発明または例示される任意の形態の範囲および趣旨をいかようにも限定するものではない。同様に、本発明は、本明細書に記載の特定の好ましい実施形態のいずれにも限定されるものではない。実際に、本発明の改変形態および変形形態は、本明細書を読み解くことで当業者であれば明白であるとしてよく、その精神および範囲から逸脱することなく行うことができる。本発明は、したがって、本特許請求の範囲が享有する均等物の全範囲とともに、本特許請求の範囲によってのみ限定されるものとする。また、使用される数（例えば、量、温度等）に関して正確さを確実にするために努力がなされてきたが、いくらかの実験誤差および偏差が考慮されるべきである。別段の指示がなければ、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、室温は約２５℃であり、圧力は大気圧または大気圧付近にある。

抗ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２融合タンパク質の生成
３種類の抗ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２融合タンパク質を、ＩＬ２部分のＮ末端に連結された抗ＰＤ－１抗体の重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド配列、および、抗ＰＤ－１抗体の軽鎖をコードする第２ポリヌクレオチド配列を宿主細胞で発現させることによって、生成した。ＩＬ２部分は、ＩＬ２ＲａのＣ末端に連結されたＩＬ２を含む。第１のポリヌクレオチド配列および第２のポリヌクレオチド配列は、同じ発現ベクターで運搬される場合がありまたは異なる発現ベクターで運搬される場合もある。米国特許出願第１７／８０６，５６６号を参照されたい。

表１に、３種類の抗ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２融合タンパク質のアミノ酸配列の識別子を記載する。

ＩＬ２部分（配列番号２７）は、ＩＬ２Ｒａ（配列番号２８）のＣ末端に連結されたＩＬ２（配列番号２９）を含む。ＩＬ２部分（配列番号２７）は、配列番号３０のアミノ酸配列を含むリンカーを介して抗ＰＤ－１抗体の重鎖定常領域（配列番号２６）のＣ末端に連結されている。

ＲＥＧＮ１０５９５の場合、重鎖（ＨＣ）（配列番号９）は、ＨＣＶＲ（配列番号１）と、リンカー（配列番号３０）を介してＩＬ２部分（配列番号２７）に連結された重鎖定常領域（配列番号２６）とのアミノ酸配列を含む。

ＲＥＧＮ１０４８６の場合、重鎖（ＨＣ）（配列番号１８）は、ＨＣＶＲ（配列番号１１）と、リンカー（配列番号３０）を介してＩＬ２部分（配列番号２７）に連結された重鎖定常領域（配列番号２６）とのアミノ酸配列を含む。

ＲＥＧＮ１０５９７の場合、重鎖（ＨＣ）（配列番号２４）は、ＨＣＶＲ（配列番号２０）と、リンカー（配列番号３０）を介してＩＬ２部分（配列番号２７）に連結された重鎖定常領域（配列番号２６）とのアミノ酸配列を含む。

表２に、３種類の抗ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２融合タンパク質のアミノ酸配列を記載する。

ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ細胞＋ＲＥＧＮ１０５９７の組合せ療法のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効能
ＴＣＲ－Ｔ細胞の生成：ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４_{２３０－２３９}（ＰＮ４５５４５）を標的指向化するヒトＴＣＲ（ＶｅｌｏｃｉＴマウスに由来する）（ＷＯ２０２０／２５７２８８）を、ＥＦ１ａプロモーターおよびＴ２Ａ：ｅＧＦＰ配列を備えるｐＬＶＸレンチウイルスベクターへとクローニングして、形質導入されたＴ細胞のトラッキングを容易にした。ＶＳＶシュードタイプ化レンチウイルスを一次ヒトＴ細胞の形質導入用に作製した（図１）。表３に、ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔレンチウイルス構築物の一例のアミノ酸配列を記載する。

ＣＤ３＋ Ｔ細胞をヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から分離し、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズ＋１００Ｕ／ｍｌ組換えヒトＩＬ－２で刺激した。刺激後３日目に、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９標的指向性を介して内因性ＴＣＲを欠失させ、これに続いてＭＯＩ＝５でレンチウイルスを形質導入した。形質導入細胞を、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズ＋１００Ｕ／ｍｌ組換えヒトＩＬ－２とともに１４日間増幅させ、その後に、ｉｎ ｖｉｖｏ実験まで凍結保存した。

異種腫瘍の移植および測定
－１０日目に、免疫不全ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに、５×１０^６個のＨＬＡ－Ａ２^＋ ＭＡＧＥＡ４^＋ Ａ３７５ヒト黒色腫腫瘍細胞を皮下注射した。質量分析法の技法を使用して、Ａ３７５黒色腫細胞はＭＡＧＥＡ４_{２３０－２３９}ペプチドの概４５０個の細胞表面コピーを発現することが決定された。０日目（腫瘍移植１０日後）に、マウスを無作為化し、これにＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔを以下の３つの用量レベルで静脈内に注射した：ＭＡＧＥ－Ａ４_{２３０－２３９}四量体陽性ＴＣＲ－Ｔ細胞 ４．０×１０^６個、２．０×１０^６個または１．０×１０^６個。対照群には、無関係の四量体陽性ＴＣＲ－Ｔ（対照ＴＣＲ－Ｔ）４．０×１０^６個を投与した。ＲＥＧＮ１０５９７（０．５ｍｇ／ｋｇ）を、Ｔ細胞投薬後７、１４および２１日目に腹腔内に投与した。非標的指向化の対照抗ＭＵＣ１６－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（ＲＥＧＮ９９０３）を、アイソタイプ対照として投与した。腫瘍の成長を、Ｔ細胞用量後４９日までにわたって評価した。腫瘍の直径が２０ｍｍを超えた場合、ＩＡＣＵＣプロトコルに従ってマウスを安楽死させた。

異種腫瘍の成長および阻害の算出
外部キャリパーにより腫瘍体積を決定するために、最大縦径（ｍｍ表示の長さ）と最大横径（ｍｍ表示の幅）を決定した。キャリパー測定値に基づいた腫瘍体積を式：体積（ｍｍ^３）＝（長さ×幅^２）／２により算出した。

Ａ３７５腫瘍は、未処置かまたは無関係の対照ＴＣＲ－Ｔを投与されているマウスにおいて進行性で成長した（図２、表４～１６）。ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ単独療法により、用量依存性の抗腫瘍活性が実証された（図２～４、表４～１６）。Ｔ細胞投薬の７日後に開始するＲＥＧＮ１０５９７ ０．５ｍｇ／ｋｇの追加により、各用量レベルで抗腫瘍活性が増大された（図２～１６、表４～１７）。４×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ単独では、一時的である初期の腫瘍退縮が誘発されたが、この場合、ほとんどの腫瘍が投薬の１か月以内に再発した（８匹のマウスのうち２匹が３１日目に腫瘍なし）（表１１）。ＲＥＧＮ１０５９７の追加により、腫瘍制御が有意に増強され、９匹のマウスのうち８匹は研究の残りの間、腫瘍なしのままであった。４×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲＴ＋ＲＥＧＮ１０５９７を投与されているマウス１匹を、体重減を理由に３４日目に安楽死させた；この死亡が処置関連であるという兆候はなかった。同様に、２×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ単独では、非常にわずかなかつ一時的な抗腫瘍活性が実証されたが、この活性はＲＥＧＮ１０５９７によって有意に増強された（２０日目に９匹のマウスのうち６匹が腫瘍なし）（表９）。腫瘍制御が増大したことは、ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ単独またはＲＥＧＮ９９０３を投与されている動物と比較して、２×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７を用いて処置されたマウスの生存に関し確率の有意な向上にも反映されている ｐ＝＜０．０００１（ログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定）。最後に、１×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ単独では対照処置の動物と比較して腫瘍成長に差を示さなかったが、ＲＥＧＮ１０５９７との１×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔの組合せによって、１×１０^６個のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ単独と比較して、腫瘍成長が有意に遅延し（ｐ＝０．０２３）、生存が有意に増強した ｐ＝０．００５１（ログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定）（図４、１３および１６）。無関係のＴＣＲ－Ｔ＋ＲＥＧＮ１０５９７も、ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ＋非標的指向化のＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２ ＲＥＧＮ９９０３もいずれも、抗腫瘍効能にさらなる効果をまったく媒介しなかった（図２）。

まとめると、これらのデータが示すこととは、ＲＥＧＮ１０５９７は、操作されたヒトＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を増大すること、である。したがって、この代表的な例によって裏付けられることとは、がんの対象に標的化免疫サイトカインとの組合せでＡＣＴを投与することにより、単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、抗腫瘍応答の効能および持続期間の向上がもたらされることになるという予想、である。

抗ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞＋抗ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（ＲＥＧＮ１０５９７）の組合せ療法の相乗的抗腫瘍効能
マウスＰＤ－１の代わりにヒトＰＤ－１を発現するＣ５７ＢＬ／６マウス（ＰＤ－１ヒト化マウス）の脾臓からＣＤ３＋ Ｔ細胞を分離し、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズ＋組換えヒトＩＬ－２で刺激し、その後に、その細胞に種々のＣＡＲ構築物を発現するレトロウイルスで形質導入した。次いで、細胞をＩＬ７およびＩＬ１５とともに培養し、さらに増幅させ、その後に凍結保存した。Ｔ細胞を、以下の３種類のＣＡＲのうちの１つを発現するように操作した：（１）ＣＤ３ｚおよび４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインを備える抗ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＤ２０／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ）；（２）ＣＤ３ｚおよびＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを備える抗ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＤ２０／２８ｚ ＣＡＲ－Ｔ）；ならびに（３）ＣＤ３ｚおよび４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインを備える対照ＣＡＲ－Ｔ（ＣＴＲＬ／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ）。これらのＣＡＲ構築物の概略図を図１７Ａ～１７Ｃに示す。

表１８に、ＣＡＲ構築物ＣＤ２０／ＢＢｚ ＣＡＲ－ＴおよびＣＴＲＬ／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔのアミノ酸配列を記載する。

ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞＋抗ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（ＲＥＧＮ１０５９７）の相乗的抗腫瘍効能を決定するために、同系腫瘍研究を実行した。－３日目に、ＰＤ－１ヒト化Ｃ５７ＢＬ／６マウスをシクロホスファミド２５０ｍｇ／ｋｇでリンパ球枯渇とし、続いて、マウスに、０日目に、ヒトＣＤ２０を発現するＭＣ３８マウス結腸癌細胞（ＭＣ３８／ｈＣＤ２０細胞）１×１０^６個を皮下注射した。腫瘍移植後４日目に、マウスに新鮮解凍ＣＡＲ－Ｔ細胞を静脈内注射した。マウスに、０．５×１０^６個の、ＣＤ２０／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＤ２０／２８ｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞、またはＣＴＲＬ／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞のいずれかを投与した。次いで、マウスを７、１１、１４および１８日目に０．２または０．５ｍｇ／ｋｇのいずれかで、抗ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（ＲＥＧＮ１０５９７）または非標的化のＣＴＲＬ－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（ＲＥＧＮ９９０３）のいずれかを用いて、腹腔内で処置した。腫瘍体積は、キャリパーを使用して週２回測定し、式：体積＝（長さ×幅^２）／２により算出した。腫瘍の直径が２０ｍｍを超えた場合、ＩＡＣＵＣプロトコルに従ってマウスを安楽死させた。

図１８～２７および表１９～２４に示すように、ＭＣ３８／ｈＣＤ２０腫瘍は、ＣＴＲＬ／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＣＴＲＬ－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（ＲＥＧＮ９９０３；０．２ｍｇ／ｋｇ）、ＣＤ２０／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＣＴＲＬ－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（０．２ｍｇ／ｋｇ）、またはＣＤ２０／２８ｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＣＴＲＬ－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（０．２ｍｇ／ｋｇ）を投与されているマウスにおいて進行性で成長した（図１８～１９）。ＣＴＲＬ／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（ＲＥＧＮ１０５９７；０．２ ｍｇ／ｋｇ）を投与されているマウスにおいては、腫瘍成長はわずかに低減するだけであった（図１８～１９）。しかし、ＣＤ２０／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ＋抗ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（０．２ｍｇ／ｋｇおよび０．５ｍｇ／ｋｇ）を投与されているマウスにおける腫瘍成長は、ＣＤ２０／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＣＴＲＬ－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（０．２ｍｇ／ｋｇ；ｐ＜０．０００１およびｐ＜０．００１、それぞれ２５日目にて、２元配置ＡＮＯＶＡ分析による）を投与されているマウスと比較して有意に抑制された（図１８～２７）。ＣＤ２０／２８ｚ ＣＡＲ－Ｔ＋抗ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（０．２ｍｇ／ｋｇおよび０．５ｍｇ／ｋｇ）を投与されているマウスにおける腫瘍成長も、ＣＤ２０／２８ｚ ＣＡＲ－Ｔ＋ＣＴＲＬ－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（０．２ｍｇ／ｋｇ；ｐ＜０．０００１およびｐ＜０．００１、それぞれ２５日目にて、２元配置ＡＮＯＶＡ分析による）を投与されているマウスと比較して有意に抑制された（表２４）。

これらのデータによって実証されることとは、抗ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（ＲＥＧＮ１０５９７）とＣＡＲ－Ｔ細胞療法を組み合わせると、ＣＡＲ－Ｔ細胞単独と比較して強力かつ永続性の腫瘍制御が誘導されること、である。したがって、この代表的な例によってさらに裏付けられることとは、がんの対象に標的化免疫サイトカインとの組合せでＡＣＴを投与することにより、単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、抗腫瘍応答の効能および持続期間の向上がもたらされることになるという予想、である。

標的細胞の優れたかつより永続性の枯渇を駆動する、ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２との組合せでの抗ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ細胞の相乗的効能
本実施例は、リンパ球枯渇の背景でならびにリンパ球枯渇なしで、ＣＡＲ Ｔ細胞単独と比較して、ＰＤ１に標的指向化されたＩＬ－２免疫サイトカイン（ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２）が、抗ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ細胞療法との組合せで、標的細胞の優れたかつより永続性の枯渇を駆動する能力を実証するために実行したｉｎ ｖｉｖｏ研究に関する。

化学療法剤の投与を介するリンパ球枯渇は、物理的空間を作り出すことによっておよび細胞シンクを取り除いて過剰の成長／生存因子（サイトカインのような）を利用可能にすることによって、導入された細胞の移植を容易にするために、ＣＡＲ Ｔ分野では一般に使用されている。しかし、リンパ球枯渇は、体調が良好ではない患者がＣＡＲ Ｔ療法に適格とすることを妨げる可能性がある副作用に関連する。その結果、リンパ球枯渇を必要とせずにＣＡＲ Ｔ細胞の効率的な移植／活性を可能にする療法が望ましい。したがって、本研究では、ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２が、ＣＡＲ Ｔ細胞との組合せでｉｎ ｖｉｖｏで、標的細胞の優れたかつより永続性の枯渇を駆動する能力について、リンパ球枯渇（シクロホスファミド処置を介する）の背景でならびにリンパ球枯渇なしの両方で試験した。

本研究は、ＣＤ２０発現向けにヒト化された免疫適格性のＣ５７ＢＬ／６マウスで実行したが、この場合、ＣＡＲ Ｔ細胞によって媒介されるＢ細胞枯渇を測定することができる。このモデルでは、ＣＡＲ Ｔによる内因性Ｂ細胞の枯渇は、ｈｕＣＤ２０^＋腫瘍細胞の枯渇のサロゲートとなる。こういった動物はマウスＰＤ１を発現するので、マウスＰＤ－１に結合するサロゲートＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２試薬（すなわち、ＲＥＧＮ９８９９、表２５）を使用した。マウスＰＤ１結合部分は、ラット抗ｍＰＤ－１クローンＲＭＰ１－１４に由来するものであるが、対応する非標的指向化のＮＴ－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２試薬（すなわち、ＲＥＧＮ９９０１、表２６）を使用した。

表２５にＲＥＧＮ９８９９の説明を記載する。

表２６に、ＲＥＧＮ９９０１の説明を記載する。

マウス抗ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ細胞を生成するために、ＣＤ３^＋ Ｔ細胞を、Ｕｎｔｏｕｃｈｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ｔ－ｃｅｌｌ分離キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１４１３Ｄ）を使用してｈｕＣＤ３／ｈｕＣＤ２０ノックインマウスの脾臓から分離し、その後、ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１１６１Ｄ）および組換えヒトＩＬ－２（２０Ｕ／ｍｌ；Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ ＃２００－０２）で活性化した。１６時間後、このＴ細胞に、マウスＣＤ３ｚ細胞内シグナル伝達ドメインおよびマウス４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインを含有する抗ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲをコードするレトロウイルスを、Ｒｅｔｒｏｎｅｃｔｉｎ（Ｔａｋａｒａ ＃Ｔ１００Ｂ）でコーティングしたプレート上でスピン感染を介して、形質導入した。無関係の抗原と結合するＣＡＲ Ｔ細胞を対照として使用した。ＣＡＲ Ｔ細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏで特定することができるように、ＧＦＰリポーター（Ｐ２Ａ切断部位を介して）を含んだ。本研究で使用したＣＡＲ Ｔ細胞は：ＣＤ３ｚおよび４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインを備える抗ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ（ＣＤ２０／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ、図１７Ａ；表１８）、および、ＣＤ３ｚおよび４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインを備える対照ＣＡＲ Ｔ（ＣＴＲＬ／ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ、図１７Ｃ、表１８）である。

ＣＤ２０ヒト化マウスを、－７日目に、シクロホスファミド（２５０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内用量でリンパ球枯渇とするかまたは未処置のままのいずれかとし、その後、０日目に、３×１０^６個のＣＡＲ^＋抗ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ細胞または対照ＣＡＲ Ｔ細胞を静脈内注射した。マウスに、１日目に、ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（すなわち、ＲＥＧＮ９８９９）または対照の非標的指向化のＮＴ－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（すなわち、ＲＥＧＮ９９０１）のいずれかの第１の用量を腹腔内に投与した（リンパ球枯渇群については０．４ｍｇ／ｋｇ、または非リンパ球枯渇群については１ｍｇ／ｋｇ）。次いで、マウスに、研究の過程全体をとおして、３～４日ごとに同じ用量のＲＥＧＮ９８９９またはＲＥＧＮ９９０１を引き続き投与した。マウスから採血して、フローサイトメトリー解析を用いる免疫蛍光染色を使用して、７日目および２１日目にＣＤ４５^＋Ｂ２２０^＋ Ｂ細胞とＣＤ４５^＋ＣＤ９０．２^＋ＧＦＰ^＋ ＣＡＲ Ｔ細胞の頻度および絶対数を評価した。

結果：７日目に、抗ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いる処置では、ＲＥＧＮ９８９９が投与されていたかに関係なく、ＣＴＲＬ ＣＡＲ Ｔと比較して、末梢血Ｂ２２０^＋ Ｂ細胞の頻度と絶対数の両方が効率的に枯渇していた（表２７および２８；図２８～３１）。Ｂ細胞枯渇も、マウスがリンパ球枯渇していたかに関係なく、効率的であった（表２７および２８；図２８および３０）。リンパ球枯渇マウスでは、末梢血ＣＡＲ Ｔ細胞の頻度および絶対数がＣＴＲＬ ＣＡＲ Ｔ細胞を投与されているマウスと比較して増加しており（表２７；図２９）、ＣＡＲ Ｔの抗原特異的認識および活性化／増幅が一貫していた。こういったリンパ球枯渇マウスでは、両側、対応のないＴ検定で評価して、末梢血ＣＡＲ Ｔ細胞の頻度（ｐ＝０．０００１）および絶対数（ｐ＝０．００１９）が、ＲＥＧＮ９９０１を投与されているマウスと比較してＲＥＧＮ９８９９を投与されているマウスにおいて、有意に増加しており、このことによって、ＲＥＧＮ９８９９を用いる処置が優れた末梢ＣＡＲ Ｔ細胞の増幅／持続を駆動することが実証された。非リンパ球枯渇マウスでは、末梢ＣＡＲ Ｔの増幅が劣ることが認められたが、両側、対応のないＴ検定で判定して、ＲＥＧＮ９８９９によると、ＲＥＥＧＮ９９０１処置マウスと比較してＣＡＲ Ｔ細胞の頻度の増加が駆動された（ｐ＝０．０３０５）。

７日目のまとめ：この初期の時点では、マウスがリンパ球枯渇であったかに関係なくおよびマウスがＲＥＧＮ９８９９を投与されたかに関係なく、血液中のｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ媒介性Ｂ細胞枯渇は効率的であった。しかし、ＲＥＧＮ９８９９との共処置によって、とりわけリンパ球枯渇の背景で、ＲＥＧＮ９９０１処置マウスと比較して末梢ＣＡＲ Ｔ細胞の増幅の増強が駆動された。

リンパ球枯渇を投与されたマウスでは２１日目に、ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ＋ＲＥＧＮ９８９９を投与されているマウスのＢ２２０＋ Ｂ細胞の頻度および絶対数が、ＣＴＲＬ ＣＡＲ Ｔを投与されているマウスと同等のレベルに戻っていた（表２７；図３２）。しかし、Ｂ２２０^＋ Ｂ細胞の頻度（ｐ＝０．０００５）および絶対数（ｐ＝０．０００３）は、ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０１を投与されているマウスと比較して、ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ＋ＲＥＧＮ９８９９を投与されているマウスでは有意に低下した（両側、対応のないＴ検定；表２７）。これらの結果によって実証されることとは、ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ細胞とのＲＥＧＮ９８９９組合せにより、リンパ球枯渇の背景でＢ細胞枯渇の延長が駆動されること、である。

リンパ球枯渇を投与されなかったマウスでは２１日目に、Ｂ２２０^＋ Ｂ細胞の頻度（ｐ＜０．０００１）および絶対数（ｐ＝０．００５６）はまた、ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０１を投与されているマウスと比較して、ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ＋ＲＥＧＮ９８９９を投与されているマウスでは有意に低下した（両側、対応のないＴ検定；表２８）。これらの結果によって実証されることとは、リンパ球枯渇が投与されていない場合でも、ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ細胞とのＲＥＧＮ９８９９の組合せによりＢ細胞枯渇の延長が駆動されること、である。

さらに、２１日目には、末梢血ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ細胞の頻度（ｐ＝０．０３８５）および絶対数（ｐ＝０．０６８５）は、ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０１を投与されているマウスと比較して、ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ＋ＲＥＧＮ９８９９を投与されている非リンパ球枯渇マウスでは、増加した（表２８）。したがって、リンパ球枯渇が投与されていない場合でも、ＲＥＧＮ９８９９との共処置により、ＲＥＧＮ９９０１処置マウスと比較して、末梢ＣＡＲ Ｔ細胞増幅の増強が駆動された。

２１日目のまとめ：この後期の時点では、マウスがリンパ球枯渇状態であったかに関係なく、ｈｕＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ媒介性Ｂ細胞枯渇は、対照ＲＥＧＮ９９０１を用いて共処置されたマウスと比較して、ＲＥＧＮ９８９９を用いて共処置されたマウスでは、優れていた。さらに、ＲＥＧＮ９８９９との共処置により、ＲＥＧＮ９９０１処置マウスと比較して、リンパ球枯渇ではないマウスでは末梢ＣＡＲ Ｔ細胞増幅の増強が駆動された。これらの結果によって実証されることとは、ＣＡＲ Ｔ細胞とのＲＥＧＮ９８９９の組合せにより、ＣＡＲ Ｔ単独と比較して、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＡＲ Ｔ細胞の機能活性（Ｂ細胞枯渇により測定した）および増幅／持続の延長が駆動されること、である。

表２７に、リンパ球枯渇マウスにおけるＣＴＲＬ ＧＦＰ^＋ ＣＡＲ Ｔと比較した末梢血Ｂ２２０^＋ Ｂ細胞の頻度および絶対数を記載する。

表２８に、非リンパ球枯渇マウスにおけるＣＴＲＬ ＧＦＰ＋ ＣＡＲ Ｔと比較した末梢血Ｂ２２０＋ Ｂ細胞の頻度および絶対数を記載する。

抗ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞療法との組合せでのＰＤ１に標的指向化されたＩＬ－２免疫サイトカイン（ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２）処置の相乗的抗腫瘍効能
本実施例は、抗ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞療法との組合せでのＰＤ１に標的指向化されたＩＬ－２免疫サイトカイン（ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２）の抗腫瘍効能を実証するために実行されたｉｎ ｖｉｖｏ研究に関する。

同系腫瘍研究を、ＭＵＣ１６発現向けにヒト化された免疫適格性のＣ５７ＢＬ／６マウスで実行した。こういった動物はマウスＰＤ１を発現するので、マウスＰＤ－１に結合するサロゲートＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２試薬（すなわち、ＲＥＧＮ９８９９、表２５）を使用した。マウスＰＤ１結合部分は、ラット抗ｍＰＤ－１クローンＲＭＰ１－１４に由来するものであるが、対応する非標的指向化のＮＴ－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２試薬（すなわち、ＲＥＧＮ９９０１、表２６）を使用した。

マウス抗ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞を生成するために、ＣＤ３^＋ Ｔ細胞を、Ｕｎｔｏｕｃｈｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ｔ－ｃｅｌｌ分離キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１４１３Ｄ）を使用してｈｕＣＤ３／ｈｕＭＵＣ１６ノックインマウスの脾臓から分離し、その後、ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１１６１Ｄ）および組換えヒトＩＬ－２（２０Ｕ／ｍｌ；Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ ＃２００－０２）で活性化した。１６時間後、このＴ細胞に、マウスＣＤ３ｚ細胞内シグナル伝達ドメインおよびヒト４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインを含有する抗ｈｕＣＤ１６ ＣＡＲをコードするレトロウイルスを、Ｒｅｔｒｏｎｅｃｔｉｎ（Ｔａｋａｒａ ＃Ｔ１００Ｂ）でコーティングしたプレート上でスピン感染を介して、形質導入した。無関係の抗原と結合するＣＡＲ Ｔ細胞を対照として使用した。

表２９に、本研究で使用した抗ｈｕＭＵＣ１６および無関係抗原対照ＣＡＲ構築物のアミノ酸配列を記載する。

ＭＵＣ１６ヒト化マウスを全身照射の亜致死線量（４００ｃＧｙ）でリンパ球枯渇化させ、１日後に、右脇腹に１０×１０^６個のＩＤ８／ＶＥＧＦ／ｈｕＭＵＣ１６腫瘍細胞を皮下移植した。腫瘍移植の１日後、マウスに４×１０^６個のＣＡＲ^＋抗ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞または対照ＣＡＲ Ｔ細胞を静脈内注射した。同日、マウスに、ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（ＲＥＧＮ９８９９、表２５）または対照の非標的指向化のＮＴ－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２（ＲＥＧＮ９９０１、表２６）のいずれかを１ｍｇ／ｋｇで腹腔内に投与した。ＣＡＲ Ｔ細胞注射の２日後、ＰＤ１に標的指向化されたまたは対照の免疫サイトカイン１回の追加用量をマウスに１ｍｇ／ｋｇで投与した。腫瘍の成長を、週２回のキャリパー測定を介して４３日間にわたって評価し、以下の式：（長さ×幅^２）／２により算出した。

結果：ＣＴＲＬ ＣＡＲ ＴおよびＲＥＧＮ９９０１またはＲＥＧＮ９８９９のいずれかを投与されている動物、ならびに、抗ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ ＴおよびＲＥＧＮ９９０１を投与された動物において、同様の腫瘍成長が認められた（表３０；図３６）。しかし、ＲＥＧＮ９８９９と組み合わせられた抗ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞を投与されているマウスでは腫瘍成長が有意に阻害された（表３０；図３６）。

抗ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ＋ＲＥＧＮ９８９９ 対 ＣＴＲＬ ＣＡＲ Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０１の２元配置ＡＮＯＶＡのＰ値は、以下のとおりである：１３日目：ｐ＝０．００３；２１日目：ｐ＜０．０００１；２４日目：ｐ＜０．０００１；２８日目：ｐ＜０．０００１。抗ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ＋ＲＥＧＮ９８９９ 対 ＣＴＲＬ ＣＡＲ Ｔ＋ＲＥＧＮ９９０１の２元配置ＡＮＯＶＡのＰ値は、以下のとおりである。２１日目：ｐ＝０．０３６８；２４日目：ｐ＝０．０００１；２８日目：ｐ＜０．０００１。注記：「抗ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ＋ＲＥＧＮ９８９９」群からの２匹のマウスが、研究または治療剤とは無関係の事情により、－７日目の測定後に死亡した。

表３０に、特定の日にての特定の抗体処置での腫瘍体積＋／－ＳＥＭおよび生存マウスの数を記載する。

抗ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞療法との組合せでのＰＤ１に標的指向化されたＩＬ－２免疫サイトカイン（ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２）処置の相乗的抗腫瘍効能
本実施例は、抗ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ Ｔ細胞療法との組合せでのＰＤ１に標的指向化されたＩＬ－２免疫サイトカイン（ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２）処置の相乗的抗腫瘍効能を実証するために実行されたｉｎ ｖｉｖｏ研究に関する。

一部の血液悪性腫瘍にとって効果的な療法であるにもかかわらず、ＣＡＲ－Ｔ細胞の治療活性は、一つにはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性および機能性が貧弱であることを理由に、ほとんどの固形腫瘍では限定的なものであった。固形腫瘍におけるＣＡＲ－Ｔ細胞のこれらの限界を克服するために、多くの組合せ戦略が探索状態にある（Ｙｏｕｎｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、１２：１６２５～１６３３頁（２０２２））；Ａｌ－Ｈａｉｄｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、２２：３６５頁（２０２２）。ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２が固形腫瘍におけるＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍活性を改善するかどうかを試験するために、同系ＩＤ８－ＶＥＧＦ／ｈｕＭＵＣ１６－デルタ腫瘍を制御する上で抗ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ－Ｔ細胞＋ｍＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２のコンビナトリアル効能に関する評価を行ったが、なぜなら、抗ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｈｕＭＵＣ１６を発現する標的細胞と共培養するとＰＤ－１発現をアップレギュレーションするからである（図３７Ａ）。ＣＤ３／ＭＵＣ１６二重ヒト化マウスをリンパ球枯渇とし、このマウスにＩＤ８－ＶＥＧＦ／ｈｕＭＵＣ１６－デルタ腫瘍細胞を移植し、このマウスを、ｍＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２または対照分子との組合せで抗ｈｕＭＵＣ１６または対照ＣＡＲ－Ｔ細胞のいずれかで、指示された日に処置した（図３７Ｂ）。対照ＣＡＲ－Ｔ細胞＋アイソタイプｍＡｂと比較して、ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ－Ｔ細胞＋アイソタイプｍＡｂ処置では、腫瘍の成長が中程度に遅延した。ｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ－Ｔ細胞のこういった単剤効能は、この細胞がＮＴ－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２または高用量抗ｍＰＤ１のいずれかと組み合わされた場合、さらに改善されることはなかった。対照的に、ｍＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２とのｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ－Ｔ細胞の組合せにより、抗腫瘍効能有意な増強がもたらされ、この場合、腫瘍退縮が本治療群のすべてのマウスで観察された。対照ＣＡＲ－Ｔ細胞を投与されたマウスではｍＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２の治療効果はまったくなかったが、このことにより、そういったリンパ球枯渇マウスではｍＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２の活性は導入されたｈｕＭＵＣ１６ ＣＡＲ－Ｔ細胞に依存していること、が示唆される（図３７Ｃおよび３７Ｄ）。まとめると、これらの結果によって実証されることとは、ＰＤ１－ＩＬ２Ｒａ－ＩＬ２によりＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性が増強されること、である。

本開示は、本明細書に記載された具体的な実施形態によって範囲が限定されるものではない。実際、本明細書に記載されたものに加えて、本開示のさまざまな改変形態が、前述の説明および添付の図から当業者であれば明らかになるであろう。このような改変形態は、添付の特許請求の範囲内に含まれるものとする。

Claims (42)

1. 養子細胞療法（ＡＣＴ）の効能を向上させるための方法であって：
   （ａ）がんの対象を選択すること；および
   （ｂ）治療有効量の標的化免疫サイトカインとの組合せで治療有効量のＡＣＴを対象に投与すること、
   を含み、
   前記組合せの投与により、単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、抗腫瘍応答の効能および持続期間の向上がもたらされる、
   方法。
2. がんを処置するための方法であって、
   それを必要とする対象に、治療有効量の標的化免疫サイトカインとの組合せで治療有効量の養子細胞療法（ＡＣＴ）を投与すること、
   を含み、
   前記組合せの投与により、単独療法としてＡＣＴを用いて処置された対象と比較して、抗腫瘍応答の効能および持続期間の向上がもたらされる、
   方法。
3. ＡＣＴは、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞から選択される免疫細胞を含む、
   請求項１または２に記載の方法。
4. 免疫細胞は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはＴＡＡに対するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、
   請求項３に記載の方法。
5. ＴＡＡは、ＡＦＰ、ＡＬＫ、ＢＡＧＥタンパク質、ＢＣＭＡ、ＢＩＲＣ５（サバイビン）、ＢＩＲＣ７、β－カテニン、ｂｒｃ－ａｂｌ、ＢＲＣＡ１、ＢＯＲＩＳ、ＣＡ９、炭酸脱水酵素ＩＸ、カスパーゼ－８、ＣＡＬＲ、ＣＣＲ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０（ＭＳ４Ａ１）、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＫ４、ＣＥＡ、ＣＴＬＡ４、サイクリン－Ｂ１、ＣＹＰ１Ｂ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｒｂＢ２／Ｈｅｒ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、Ｆｒａ－１、ＦＯＬＲ１、ＧＡＧＥタンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧｌｏｂｏＨ、グリピカン－３、ＧＭ３、ｇｐ１００、Ｈｅｒ２、ＨＬＡ／Ｂ－ｒａｆ、ＨＬＡ／ｋ－ｒａｓ、ＨＬＡ／ＭＡＧＥ－Ａ３、ｈＴＥＲＴ、ＬＭＰ２、ＭＡＧＥタンパク質（例えば、ＭＡＧＥ－１、－２、－３、－４、－６、および－１２）、ＭＡＲＴ－１、メゾテリン、ＭＬ－ＩＡＰ、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ２、Ｍｕｃ３、Ｍｕｃ４、Ｍｕｃ５、Ｍｕｃ１６（ＣＡ－１２５）、ＭＵＭ１、ＮＡ１７、ＮＹ－ＢＲ１、ＮＹ－ＢＲ６２、ＮＹ－ＢＲ８５、ＮＹ－ＥＳＯ１、ＯＸ４０、ｐ１５、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＣＴＡ－１、ＰＬＡＣ１、ＰＲＬＲ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ（ＦＯＬＨ１）、ＲＡＧＥタンパク質、Ｒａｓ、ＲＧＳ５、Ｒｈｏ、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－３、ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＴＡＧ－７２、ＴＧＦ－β、ＴＭＰＲＳＳ２、トンプソン－ヌーベル抗原（Ｔｎ）、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、チロシナーゼ、およびウロプラキン－３から選択される、
   請求項４に記載の方法。
6. 標的化免疫サイトカインは、（ａ）チェックポイント阻害剤の免疫グロブリン抗原結合ドメインおよび（ｂ）ＩＬ２部分を含む融合タンパク質である、
   請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
7. ＩＬ２部分は、（ｉ）ＩＬ２受容体アルファ（ＩＬ２Ｒａ）またはその断片；および（ｉｉ）ＩＬ２またはその断片を含む、
   請求項６に記載の方法。
8. チェックポイント阻害剤は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、Ｂ７Ｈ１、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＡＩＲ１、ＴＩＧＨＴ、ＶＩＳＴＡ、またはＶＴＣＮ１の阻害剤である、
   請求項６または７に記載の方法。
9. チェックポイント阻害剤はＰＤ－１の阻害剤である、
   請求項６～８のいずれか１項に記載の方法。
10. 前記抗原結合ドメインは、配列番号１、１１および２０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに、配列番号５および１５から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、
    請求項６～９のいずれか１項に記載の方法。
11. 前記抗原結合ドメインは、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）ならびに３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含み、
    ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は：
    （ａ）それぞれ、配列番号２、３、４、６、７および８；
    （ｂ）それぞれ、配列番号１２、１３、１４、１６、７および１７；ならびに
    （ｃ）それぞれ、配列番号２１、２２、２３、６、７および８、
    から選択されるアミノ酸配列を含む、
    請求項６～１０のいずれか１項に記載の方法。
12. 前記抗原結合ドメインは、配列番号１／５、１１／１５および２０／５から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列ペアを含む、
    請求項６～１１のいずれか１項に記載の方法。
13. 融合タンパク質は、ＩｇＧ１アイソタイプの重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および重鎖定常領域を含む重鎖を含む、
    請求項６～１２のいずれか１項に記載の方法。
14. 融合タンパク質は、ＩｇＧ４アイソタイプの重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および重鎖定常領域を含む重鎖を含む、
    請求項６～１２のいずれか１項に記載の方法。
15. 融合タンパク質は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、
    請求項６～１２のいずれか１項に記載の方法。
16. 融合タンパク質は、配列番号９、１８および２４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；ならびに、配列番号１０、１９および２５から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、
    請求項６～１５のいずれか１項に記載の方法。
17. 融合タンパク質は：
    （ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖；
    （ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    （ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖
    を含む、
    請求項６～１６のいずれか１項に記載の方法。
18. 前記抗原結合ドメインは、重鎖を含み、ＩＬ２部分は、配列番号３０または３１のアミノ酸配列を含むリンカーを介して重鎖のＣ末端に付着されている、
    請求項６～１７のいずれか１項に記載の方法。
19. ＩＬ２部分は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、
    請求項６～１８のいずれか１項に記載の方法。
20. Ｌ２部分は、野生型ＩＬ２を含む、
    請求項６～１９のいずれか１項に記載の方法。
21. 前記ＩＬ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、
    請求項２０に記載の方法。
22. ＩＬ２部分は、ＩＬ２Ｒａまたはその断片のＣ末端にリンカーを介して接続された前記ＩＬ２またはその断片を含む、
    請求項６～２１のいずれか１項に記載の方法。
23. ＩＬ２Ｒａまたはその断片は配列番号２８のアミノ酸配列を含む、
    請求項２２に記載の方法。
24. 融合タンパク質は、各単量体の重鎖定常領域をとおして二量体化している二量体融合タンパク質である、
    請求項６～２３のいずれか１項に記載の方法。
25. 標的化免疫サイトカインはＰＤ－１標的指向化部分およびＩＬ２部分を含む、
    請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
26. ＰＤ－１標的指向化部分は、ＰＤ－１に特異的に結合する免疫グロブリン抗原結合ドメインを含む、
    請求項２５に記載の方法。
27. 前記抗原結合ドメインは：
    （ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；
    （ｂ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；または
    （ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ
    を含む、
    請求項２６に記載の方法。
28. ＩＬ２部分は、（ｉ）ＩＬ２Ｒａまたはその断片；および（ｉｉ）ＩＬ２またはその断片を含む、
    請求項２５～２７のいずれか１項に記載の方法。
29. ＩＬ２部分は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、
    請求項２５～２８のいずれか１項に記載の方法。
30. 標的化免疫サイトカインは、ＲＥＧＮ１０５９７である、
    請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。
31. がんは、副腎腫瘍、胆管がん、膀胱がん、脳がん、乳がん、細胞腫、中枢または末梢神経系組織がん、子宮頸がん、結腸がん、内分泌または神経内分泌がんまたは造血器がん、食道がん、線維腫、消化管がん、神経膠腫、頭頸部がん、リー・フラウメニ腫瘍、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、髄膜腫、神経内分泌Ｉ型またはＩＩ型腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性疾患、上咽頭がん、口腔がん、口腔咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、膵島細胞がん、副甲状腺がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、呼吸器がん、肉腫、皮膚がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、気管がん、泌尿生殖器がんおよび子宮がんから選択される、
    請求項１～３０のいずれか１項に記載の方法。
32. 前記組合せの投与により、腫瘍成長の遅延、腫瘍細胞数の減少、腫瘍退縮、生存の延長、部分奏効、および完全奏効のうちの１つまたはそれ以上から選択される治療効果が生み出される、
    請求項１～３１のいずれか１項に記載の方法。
33. 治療有効量のＡＣＴは１×１０⁶個以上の免疫細胞を含む、
    請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。
34. 治療有効量の標的化免疫サイトカインは、０．００５ｍｇ／対象の体重１ｋｇ～１０ｍｇ／対象の体重１ｋｇである、
    請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。
35. 標的化免疫サイトカインは、血管内、皮下、腹腔内または腫瘍内に投与される、
    請求項１～３４のいずれか１項に記載の方法。
36. ＡＣＴは、静脈内注入を介して投与される、
    請求項１～３５のいずれか１項に記載の方法。
37. ＡＣＴは、標的化免疫サイトカインの投与前または投与後に投与される、
    請求項１～３６のいずれか１項に記載の方法。
38. ＡＣＴは、標的化免疫サイトカインの投与と同時に投与される、
    請求項１～３６のいずれか１項に記載の方法。
39. 標的化免疫サイトカインおよび／またはＡＣＴは、１つまたはそれ以上の用量で対象に投与される、
    請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
40. さらなる治療剤または療法を対象に投与することをさらに含む、
    請求項１～３９のいずれか１項に記載の方法。
41. さらなる治療剤または療法は、放射線、手術、化学療法剤、がんワクチン、Ｂ７－Ｈ３阻害剤、Ｂ７－Ｈ４阻害剤、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）阻害剤、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有３（ＴＩＭ３）阻害剤、ガレクチン９（ＧＡＬ９）阻害剤、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリン（Ｉｇ）含有抑制因子（ＶＩＳＴＡ）の阻害剤、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）阻害剤、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）阻害剤、ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを備えるＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、アンジオポエチン－２（Ａｎｇ２）阻害剤、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体、カルメット・ゲラン桿菌ワクチン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、細胞毒素、インターロイキン６受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害剤、インターロイキン４受容体（ＩＬ－４Ｒ）阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、抗体薬物複合体、抗炎症薬、ならびにそれらの組合せ、から選択される、
    請求項４０に記載の方法。
42. 標的化免疫サイトカインとの組合せで腫瘍の成長を処置しまたは阻害する方法において使用するための、腫瘍関連抗原に特異的に結合する改変Ｔ細胞受容体またはキメラ抗原受容体を含む免疫細胞であって、
    標的化免疫サイトカインは、（ｉ）ヒトＰＤ－１に特異的に結合する抗原結合部分および（ｉｉ）ＩＬ２部分を含み；
    方法は、それを必要とする対象に、治療有効量の免疫細胞および標的化免疫サイトカインを投与することを含む、
    免疫細胞。