KR20220063188A - B형 간염 바이러스 감염을 치료하기 위한 항체 조성물 및 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 B형 간염 바이러스(HBV)의 감염을 중화하는 항체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 HBV 감염의 치료에서의 약제학적 조성물의 용도에 관한 것이다.

Description

B형 간염 바이러스 감염을 치료하기 위한 항체 조성물 및 방법

서열 목록에 관한 설명

본 출원과 연관된 서열 목록은 종이 사본 대신에 텍스트 형식으로 제공되고, 본원에 의해 본 명세서로 참고로 포함된다. 　 서열 목록을 함유하는 텍스트 파일의 명칭은 930285_412WO_SEQUENCE_LISTING.txt이다. 　 텍스트 파일은 109 KB이고, 2020년 8월 25일에 작성되고, EFS-Web을 통해 전자로 제출된다.

본 발명은 B형 간염 바이러스 감염의 예방 및 치료를 위한 약제학적 항체 조성물 및 방법에 관한 것이다.

HBV는 (i) 3개의 관련된 표면 단백질(B형 간염 표면 항원, HBsAg) 및 지질을 함유하는 엔벨로프 및 (ii) 바이러스 DNA 게놈 및 DNA 중합효소를 둘러싸는 20면체 뉴클레오캡시드로 이루어진다. HBV 캡시드는 RNA 프리게놈 복제 복합체의 패키징 동안 감염된 세포의 세포기질에서 형성되고, 입자의 내강에서 프리게놈의 역전사에 의해 바이러스 DNA 게놈의 합성 동안 발아하는 능력을 얻는다. 3개의 HBV 외피 단백질인 S-HBsAg, M-HBsAg 및 L-HBsAg는 소포체에서 복잡한 막관통 폴드를 형성하고, 디설파이드 연결된 동종이합체 및 이종이합체를 형성한다. 세포내 막에서의 발아 동안, 세포기질 preS 영역에서의 짧은 선형 도메인은 캡시드 표면에서 결합 부위와 상호작용한다. 비리온은 후속하여 혈액으로 분비된다. 게다가, 표면 단백질은 캡시드의 부재 하에 발아할 수 있고, 비리온에 비해 3 내지 4 로그 초과로 또한 분비되는 준바이러스 입자(SVP: subviral particle)를 형성한다. 높은 수준의 HBsAg는 HBsAg 특이적 T 세포 반응을 고갈시킬 수 있고, 만성 B형 간염(CHB)을 갖는 환자에서 바이러스 면역관용에 대한 중요한 인자로서 제안된다(Chisari FV, Isogawa M, Wieland SF, Pathologie Biologie, 2010;58:258-66).

B형 간염 바이러스는 잠재적으로 삶을 위협하는 급성 및 만성 간 감염을 야기한다. 급성 B형 간염은 전격성 간염 발생의 위험으로 증상을 갖거나 증상이 없는 바이러스혈증을 특징으로 한다(Liang TJ, Block TM, McMahon BJ, Ghany MG, Urban S, Guo JT, Locarnini S, Zoulim F, Chang KM, Lok AS. Present and future therapies of hepatitis B: From discovery to cure. Hepatology. 2015 Aug 3. doi: 10.1002/hep.28025. [Epub ahead of print]). 1982년 이후로 이용 가능한 B형 간염에 대한 효과적인 백신에도 불구하고, WHO는 24000만명의 사람들이 B형 간염으로 만성적으로 감염되고, 780 000명 초과의 사람들이 B형 간염 합병증으로 인해 매년 죽는다고 보고한다. 만성 B형 간염(CHB) 환자의 대략 1/3은 매년 600,000건의 사망에 이르는 간경변, 간부전 및 간세포 암종을 발생시킨다(Liang TJ, Block TM, McMahon BJ, Ghany MG, Urban S, Guo JT, Locarnini S, Zoulim F, Chang KM, Lok AS. Present and future therapies of hepatitis B: From discovery to cure. Hepatology. 2015 Aug 3. doi: 10.1002/hep.28025. [Epub ahead of print]).

HBV로 감염된 환자에 대해, 중증 합병증은 HDV에 의한 동시감염 또는 슈퍼감염의 결과로서 발생할 수 있다. D형 간염은 WHO에 따라 세계적으로 약 1500만명의 사람들을 감염시킨다. HDV는 오직 HBV의 존재 하에 증식할 수 있으므로 준바이러스 위성인 것으로 여겨진다. HDV는 가장 작은 공지된 동물 바이러스(40 nm) 중 하나이고, 이에 의해 이의 게놈은 불과 1.6 kb이고, S 및 L HDAg을 암호화한다. RNA 중합효소를 포함하는 HDV의 게놈 복제에 필요한 모든 다른 단백질은 숙주 세포에 의해 제공되고, HDV 엔벨로프는 HBV에 의해 제공된다. HDV RNA 게놈은 허용적 세포로 도입될 때 리보뉴클레오단백질(RNP) 복합체를 조립하도록 HDV 암호화된 단백질의 다수의 카피를 복제하고 이것과 회합한다. RNP는 HBV 외피 단백질에 의해 세포로부터 배출되고, 이는 분비되기 전에 프리-골지 구획의 내강으로 발아하는 리포단백질 소포를 조립할 수 있다. 게다가, HBV 외피 단백질은 또한 HDV를 비감염된 세포에 표적화하기 위한 기전을 제공하여서 HDV의 확산을 보장한다.

HDV에 의해 야기된 합병증은 급성 감염에서 간부전을 경험할 더 큰 가능성 및 만성 감염에서 간암을 발생시킬 기회의 증가로 간경변으로의 신속한 진행을 포함한다. D형 간염은 B형 간염 바이러스와 조합되어 20%로 모든 간염 감염의 가장 높은 치명률을 갖는다(Fattovich G, Giustina G, Christensen E, Pantalena M, Zagni I, Realdi G, Schalm SW. Influence of hepatitis delta virus infection on morbidity and mortality in compensated cirrhosis type B. Gut. 2000 Mar;46(3):420-6). 만성 HDV 감염에 오직 허가된 치료는 인터페론-알파이다. 그러나, 인터페론-알파에 의한 HDV의 치료는 비교적 비효과적이고 잘 관용되지 않는다. 인터페론-알파에 의한 치료는 환자의 1/4에서 치료 후 6개월에 바이러스학적 반응을 지속시킨다. 또한, 뉴클레오사(타)이드 유사체(NA)는 델타 간염에서 광범위하게 시험되었지만 이들은 비효과적인 것으로 보인다. NA와 인터페론의 병용 치료는 또한 실망스러운 것으로 증명되었다(Zaigham Abbas, Minaam Abbas Management of hepatitis delta: Need for novel therapeutic Options. World J Gastroenterol 2015 August 28; 21(32): 9461-9465). 따라서, 새로운 치료 옵션이 필요하다.

본원에 제공된 도면은 본 발명에 포함된 대상을 더 자세히 예시하도록 의도된다. 도면은 어떠한 방식으로든 본 발명을 제한하도록 의도되지 않는다. 본 발명에 걸쳐, (MLNS 및 GAALIE와 같은 Fc 돌연변이를 갖거나 갖지 않는) 예시적인 항체 HBC34v35는 또한 HBC34-v35 및 HBC34-V35라 칭해진다. 따라서, HBC34v35, HBC34-v35 및 HBC34-V35가 동일한 의미를 갖는 것으로 이해될 것이다. 유사하게, 예시적인 항체 HBC34v34는 HBC34-v34 및 HBC34-V34라고도 칭해지고, 예시적인 항체 HBC34v7은 HBC34-v7 및 HBC34-V7이라고도 칭해진다. 추가로, "MLNS-GAALIE"가 "MLNS_GAALIE"(즉, Fc 모이어티에서 M428L + N434S + G236A + A330L + I332E 돌연변이(EU 넘버링))와 동일한 의미를 갖는 것으로 이해될 것이다.
도 1a 내지 도 1b는 직접적인 항원 기반 ELISA 검정에서 결정된 것과 같은 HBsAg adw(1a) 및 HBsAg adr(1b)에 대한 표시된 농도에서 HBC34-v7 및 본 발명의 2개의 조작된 항체("HBC34-v34"; "HBC34-v35")의 결합을 보여준다. 모든 항체는 IgG1(g1m17, 1 알로타이프)로서 제조되었다.
도 2a 내지 도 2k는 모든 공지된 HBsAg 유전자형(각각 (a) 내지 (j)) 및 모의 대조군(k)에 대한 HBC34-v7, HBC34-v34 및 HBC34-v35의 결합을 보여준다. PCT 공보 WO 제2017/060504호의 실시예 5에 도시된 것과 같은 HBsAg 항원 외부 루프를 나타내는 유전자형 대표적 서열을 사용하였다. FACS에 의해 염색을 수행하였다. 항체 농도는 그래프의 y축에 표시된 것과 같다.
도 3a 및 도 3b는 직접적인 항원 기반 ELISA 검정에서 HBsAg adw에 대한 야생형 또는 변이체 Fc 영역을 갖는 HBC34-v7 및 HBC34-v35의 결합을 보여준다(2개 실험; "실험 1"로부터의 데이터는 도 3a에 도시되어 있고, "실험 2"로부터의 데이터는 도 3b에 도시되어 있음). 항원 결합 곡선은 각각의 도면의 상부 패널에 도시되어 있다. (Graphpad prism을 사용하여 곡선을 적합화함으로써 결정된) EC50 값은 각각의 도면의 중간 패널에 도시되어 있다. 비코팅된 플레이트(대조군)에 대한 결합은 각각의 도면의 하부 패널에 도시되어 있다. Fc 영역: "HBC34v7" 및 "HBC34-v35" = 야생형; "HBC34-v35-MLNS" = M428L/N434S. "HBC34-v35-MLNS-GAALIE" = M428L/N434S/G236A/A330L/I332E. HBC34-v35의 3개의 로트를 시험하였다. HBC34-v35-MLNS의 2개의 로트 및 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 2개의 로트를 시험하였다. HBC34-v7의 1개의 로트를 사용하였다.
도 4 내지 도 7은 HBV 감염의 생체내 마우스 모델에서의 혈청 HBAg 수준에 대한 HBC34-v35의 효과를 보여준다. AAV/HBV 감염된 SCID 마우스는 실시예 5에 기재된 것처럼 1차 인간 간세포가 이식되고, 1, 5 또는 15 mg/kg에서의 HBC34-v35, 또는 PBS(대조군)가 투여되었다. 도 4는 치료 전 및 치료 후의 혈청 HBV DNA 농도를 보여준다. 도 5는 치료 전 및 치료 후의 혈청 HBsAg 농도를 보여준다. 도 6은 치료 전 및 치료 후의 혈청 HBeAg 농도를 보여준다. 도 7은 치료 전 및 치료 후의 혈청 HBcrAg 농도를 보여준다.
도 8a 내지 도 8e는 생물층 간섭측정(BLI: interferometry)에 의해 평가된 것과 같은 인간 FcγR에 대한 HBC34-v35-MLNS 및 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 결합을 보여준다. 6분 동안 항-펜타-His 센서에 2 ㎍/ml에서의 His 태그화된 인간 FcγR((a) FcγRIIa 대립유전자 H131; (b) FcγRIIa 대립유전자 R131; (c) FcγRIIIa 대립유전자 F158; (d) FcγRIIIa 대립유전자 V158; (e) FcγRIIb)을 포획하였다. 이후, FcγR 로딩된 센서는 (Fab 단편을 통해 인간 mAb를 가교결합시키기 위해) 1 ㎍/ml의 affiniPure F(ab')₂ 단편 염소 항-인간 IgG, F(ab')₂ 단편 특이적의 존재 하에 2 ㎍/ml의 각각의 mAb를 함유하는 동역학 완충액(pH 7.1)의 용액(선도의 왼쪽 파트)에 5분 동안 노출된 후, 추가 4분 동안 동일한 완충액 중의 해리 단계(선도의 오른쪽 파트)가 이어진다. Octet RED96(ForteBio)을 사용하여 회합 및 해리 프로파일은 간섭 패턴의 변화로서 실시간으로 측정되었다.
도 9는 Octet에 의해 측정된 것과 같은 인간 C1q에 대한 HBC34-v35-MLNS 및 HBC34-V35-MLNS-GAALIE의 결합을 보여준다. 항-인간 Fab(CH1) 센서는 Fab 단편을 통해 10분 동안 10 ㎍/ml에서 HBC34-v35-MLNS 및 HBC34-v35-MLNS-GAALIE mAb의 완전 IgG1을 포획하도록 사용되었다. 이후, IgG 로딩된 센서는 3 ㎍/ml의 정제된 인간 C1q를 함유하는 동역학 완충액(pH 7.1)의 용액(선도의 왼쪽 파트)에 4분 동안 노출된 후, 추가 4분 동안 동일한 완충액 중의 해리 단계(선도의 오른쪽 파트)가 이어진다. Octet RED96(ForteBio)을 사용하여 회합 및 해리 프로파일은 간섭 패턴의 변화로서 실시간으로 측정되었다.
도 10a 및 도 10b는 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT 매개된 루시퍼라제 리포터의 수용체 연결된 활성화를 사용한 인간 FcγRIIIa의 시험관내 활성화를 보여준다. 검증된 상업적으로 구입 가능한 바이오리포터 검정을 사용하여 FcγRIIIa 활성화를 시험하였고, 여기서 재조합 HBsAg(Engerix B)는 표적 항원으로서 사용된다. HBC34v35-MLNS 및 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 및 대조군(Ctr) mAb의 연속 희석액을 37℃에서 25분 동안 0.2 ㎍/ml의 HBsAg와 항온처리하였다. FcγRIIIa 저친화성 대립유전자 F158(a) 또는 FcγRIIIa 높은 친화성 대립유전자 V158(b) 중 어느 하나를 발현하는 Jurkat 효과기 세포(Promega)를 검정 완충액에 재현탁하고, 이후 검정 플레이트에 첨가하였다. 37℃에서 24시간 동안 항온처리 후, Bio-Glo-^TM Luciferase Assay Reagent(Promega)을 첨가하고, 루미노미터(Bio-Tek)를 사용하여 발광을 정량화하였다.
도 11a 및 도 11b는 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT 매개된 루시퍼라제 리포터의 수용체 연결된 활성화를 사용한 인간 FcγRIIa의 시험관내 활성화를 보여준다. 검증된 상업적으로 구입 가능한 바이오리포터 검정을 사용한 인간 FcγRIIa의 활성화, 여기서 재조합 HBsAg(Engerix B)는 표적 항원으로서 사용된다. HBC34-v35-MLNS 및 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 및 대조군 mAb(Ctr)의 연속 희석액을 37℃에서 25분 동안 2 ㎍/ml(a) 또는 0.2 ㎍/ml(b)의 HBsAg와 항온처리하였다. FcγRIIa 고친화성 대립유전자 H131을 발현하는 Jurkat 효과기 세포(Promega)를 검정 완충액에 재현탁하고, 이후 검정 플레이트에 첨가하였다. 37℃에서 23시간 동안 항온처리 후, Bio-Glo-^TM Luciferase Assay Reagent(Promega)을 첨가하고, 루미노미터(Bio-Tek)를 사용하여 발광을 정량화하였다.
도 12는 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT 매개된 루시퍼라제 리포터의 수용체 연결된 활성화를 사용한 인간 FcγRIIb의 시험관내 활성화를 보여준다. 검증된 상업적으로 구입 가능한 바이오리포터 검정을 사용하여 인간 FcγRIIb의 활성화를 시험하였고, 여기서 재조합 HBsAg(Engerix B)는 표적 항원으로서 사용된다. HBC34-v35-MLNS 및 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 및 대조군 mAb(Ctr)의 연속 희석액을 37℃에서 25분 동안 1 ㎍/ml의 HBsAg와 항온처리하였다. FcγRIIb를 발현하는 Jurkat 효과기 세포(Promega)를 검정 완충액에 재현탁하고, 이후 검정 플레이트에 첨가하였다. 37℃에서 20시간 동안 항온처리 후, Bio-Glo-^TM Luciferase Assay Reagent(Promega)을 첨가하고, 루미노미터(Bio-Tek)를 사용하여 발광을 정량화하였다.
도 13a 및 도 13b는 HBC34-v35-MLNS 및 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 존재 하에 인간 1차 NK 세포에 의한 PLC/PRF/5 인간 간종양 세포의 시험관내 사멸을 보여준다. (a) ADCC는 이형접합성 고친화성(V158) 및 저친화성(F158) FcγRIIIa(F/V)를 발현하기 위해 이전에 유전자형분석된 1명의 공여자로부터 새로 단리된 세포를 사용하여 시험되었다. HBC34-v35, HBC34-v35-MLNS, HBC34-v35-MLNS-GAALIE, 17.1.41 및 대조군 mAb의 연속 희석액을 HBsAg 분비 간종양 세포주 PLC/PRF/5(Alexander 세포라고도 칭함)에 첨가하였다. PLC/PRF/5 세포를 실온에서 10분 동안 항체와 함께 항온처리하였다. NK 세포를 검정 플레이트(10:1의 효과기 세포 대 표적 세포)에 첨가하고, 37℃에서 4시간 동안 항온처리하였다. 세포사는 락테이트 탈수소효소(LDH: lactate dehydrogenase) 방출을 측정함으로써 결정되었다. (b) 유세포분석법에 의해 평가된 것과 같은 HBC34v35 및 17.1.41 mAb에 의한 PLC/PRF/5 인간 간종양 세포의 염색. HBC34-v35 및 17.1.41 mAb의 상이한 농도로 염색하기 전에 세포를 광범위하게 세척하고 포름알데하이드(4%)로 고정하거나, (사포닌 0.5%) 고정하고 투과시켰다. 이들 인간 mAb의 결합은 Alexa Fluor® 647 AffiniPure F(ab')₂ 단편 염소 항-인간 IgG, Fcγ 단편 특이적 항체를 사용하여 유세포분석법에 의해 검출되었다.
도 14a 및 도 14b는 HBC34v35-MLNS 및 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 및 HBsAg의 존재 하에 1차 인간 NK 세포의 시험관내 활성화를 보여준다. NK 세포의 활성화는 (a) 동형접합성 고친화성(V158) 또는 (b) 저친화성(F158) FcγRIIIa를 발현하기 위해 이전에 유전자형분석된 2명의 공여자로부터 새로 단리된 세포를 사용하여 시험되었다. HBC34-V35, HBC34-v35-MLNS-GAALIE 및 HBC34-v35-LALA mAb의 연속 희석액을 4시간 동안 NK 세포와 항온처리하였다. NK 세포의 활성화는 NK 세포 활성의 확인을 위한 기능적 마커로서 항-CD107a mAb에 의해 NK 세포를 염색함으로써 유세포분석법에 의해 측정되었다. LAMP-1로도 공지된 CD107a는 NK 세포의 탈과립화에 대한 마커이다.
도 15a 내지 도 15c는 실시예 9에 기재된 것과 같은 항체 HBC34-v35-MLNS-GAALIE를 포함하는 예시적인 약제학적 조성물의 예시적인 단일 상승 용량(SAD: single ascending dose) 임상 연구에서 건강한 성인 대상체에 대한 평가 스케줄을 보여준다.
도 16a 내지 도 16e는 간경변을 갖지 않는 만성 HBV 감염을 갖는 대상체에 대한 그리고 실시예 9에 기재된 예시적인 임상 연구에서 뉴클레오사이드 역전사효소 억제제(NRTI)에 대한 평가 스케줄을 보여준다.
도 17a 내지 도 17c는 실시예 9에 기재된 예시적인 임상 연구에 따라 대상체의 약물동태학적 측정을 하기 위한 시점을 보여준다.
도 18은 실시예 9에 기재된 예시적인 임상 연구에 따른 투여 스케줄을 보여준다.
도 19는 실시예 9에 기재된 예시적인 임상 연구에 따른 임상 실험실 평가를 보여준다.
도 20은 실시예 10에 기재된 것과 같은 HBC34-v35-MLNS + HBsAg; 또는 HBC34-v35-MLNS-GAALIE + HBsAg의 면역 복합체를 통해 자극된 단핵구 유래된 수지 세포(moDC)에 대한 활성화 및 공자극 마커의 상향조절을 보여준다.
도 21은 실시예 10에 기재된 것과 같은 HBC34-v35-MLNS + HBsAg; 또는 HBC34-v35-MLNS-GAALIE + HBsAg의 면역 복합체를 통해 자극된 moDC에 의한 사이토카인의 분비를 보여준다.
도 22a 및 도 22b는 실시예 10에 기재된 것과 같은 HBC34-v35-MLNS 및 HBsAg; 또는 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 및 HBsAg와의 면역 복합체를 통해 자극된 전혈 배양물에서 IFN-γ의 방출을 보여준다. 실시예 10에 기재된 것과 같은, 정규화된, (a) IFN-γ 농도(log10); (b) IFN-γ-배수 변화(log10).
도 23a 및 도 23b는 실시예 10에 기재된 것과 같은 HBC34-v35-MLNS 및 HBsAg; 또는 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 및 HBsAg와의 면역 복합체를 통해 자극된 전혈 배양물에서 IL-2의 방출을 보여준다. 실시예 10에 기재된 것과 같은, 정규화된, (a) IL-2 농도(log10); (b) IL-2-배수 변화(log10).
도 24a 및 도 24b는 실시예 10에 기재된 것과 같은 HBC34-v35-MLNS 및 HBsAg; 또는 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 및 HBsAg와의 면역 복합체를 통해 자극된 전혈 배양물에서 IFN-γ 및 IL-2의 방출을 보여준다. (a) IFN-γ; 100 ㎍/ml mAb; (b). IL-2; IL-2 ㎍/ml mAb.

본 발명은 B형 간염 바이러스(HBV) 감염을 중화하는 항체를 포함하는 약제학적 조성물 및 이 조성물을 사용하는 방법을 제공한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 A, B, C, D, E, F, G, H, I 및 J로부터 선택된 유전자형의 HBsAg, 또는 임의의 이들의 조합에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 (예를 들어, 인간에서) 항체의 생체내 반감기를 연장하는 중쇄에서의 돌연변이 및 FcγR(예를 들어, 인간 FcγRIIa, 인간 FcγRIIIa 또는 둘 다)에 대한 결합 친화성을 증가시키는 중쇄에서의 돌연변이를 포함한다.

일부 실시형태에서, 항체 및 약제학적 조성물은 치료학적으로 효과적인 양으로 투여될 때 대상체에 의해 잘 관용된다. 일부 실시형태에서, 본원에 기재된 방법은 HBV에 의해 감염된 대상체에게 본 설명에 따른 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

HBV를 중화하는 항체, 이 항체를 포함하는 약제학적 조성물 및 이러한 약제학적 조성물을 사용하는 방법이 하기에 더 자세히 기재되어 있지만, 본원에 기재된 특정 방법론, 프로토콜 및 시약이 변활 수 있는 것처럼 본 발명이 이들에 제한되지 않는다고 이해되어야 한다. 본원에 사용된 방법론이 본 발명의 범위를 제한하도록 의도되지 않는다고 또한 이해되어야 한다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 용어 및 과학적 용어는 당해 분야의 당업자가 흔히 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.

하기에서, 본 발명의 양태가 기재되어 있다. 소정의 실시형태가 제공되지만, 본 발명의 실시형태가 추가 실시형태를 생성하기 위해 임의의 방식으로 그리고 임의의 수로 조합될 수 있다고 이해되어야 한다. 다양하게 기재된 실시예 및 실시형태는 본 발명을 오직 명확히 기재된 실시형태로 제한하도록 해석되지 않아야 한다. 이 설명은 명확히 기재된 실시형태를 임의의 개시된 대상과 조합하는 실시형태를 지지하고 포함하도록 이해되어야 한다. 더욱이, 본 출원에서의 모든 기재된 대상의 임의의 순열 및 조합이, 문맥이 달리 표시하지 않는 한, 본 출원의 설명에 의해 개시되는 것으로 여겨져야 한다.

본 발명에 걸쳐, 문맥이 달리 요하지 않는 한, "포함한다"라는 용어 및 "포함한" 및 "포함하는"과 같은 이의 변형어는 예를 들어 "갖는", "갖는다", "함유하는", "함유한다" 또는 기타와 동의어로 사용되고, 기재된 구성원, 비율, 정수(적용 가능한 경우, 이의 분율; 예를 들어 정수의 1/10 및 1/100을 포함), 농도 또는 단계의 포함을 암시하지만, 임의의 다른 기재되지 않은 구성원, 비율, 정수, 농도 또는 단계의 배제를 암시하지 않도록 이해될 것이다. "본질적으로 이루어지는"이라는 용어는 "포함하는"과 동등하지 않고, 청구항의 규정된 재료 또는 단계, 또는 청구된 대상의 기본 특징에 중요하게 영향을 미치지 않는 것을 지칭한다. 예를 들어, 도메인, 영역, 모듈 또는 단백질의 아미노산 서열이 조합으로 도메인, 영역, 모듈 또는 단백질의 길이의 최대 20%(예를 들어, 최대 15%, 10%, 8%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1%)에 기여하고, 도메인(들), 영역(들), 모듈(들) 또는 단백질(예를 들어, 결합 단백질의 표적 결합 친화성)의 활성에 실질적으로 영향을 미치지 않는(즉, 활성을 50% 초과, 예컨대 40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 또는 1% 이하만큼 감소시키지 않음) 연장, 결실, 돌연변이, 또는 이들의 조합(예를 들어, 아미노 말단 또는 카복시 말단에서의 아미노산 또는 도메인들 사이의 아미노산)을 포함할 때, 단백질 도메인, 영역 또는 모듈(예를 들어, 결합 도메인) 또는 단백질은 특정 아미노산 서열로 "본질적으로 이루어진다",

"이루어진"이라는 용어는 "포함하는"이라는 용어의 특정 실시형태이고, 여기서 임의의 다른 기재되지 않은 구성원, 정수 또는 단계가 배제된다. 본 발명의 맥락에서, "포함한다"라는 용어는 "로 이루어진다"라는 용어를 포함한다. 이와 같이 "포함하는"이라는 용어는 "포함하는"뿐만 아니라 "이루어지는"을 포함하고, 예를 들어 X를 "포함하는" 조성물은 배타적으로 X로 이루어질 수 있거나, 예를 들어, X + Y와 같은 추가의 어떤 것을 포함할 수 있다.

게다가, 본원에 기재된 구조 및 치환기의 다양한 조합으로부터 유래된 개별 화합물 또는 화합물의 군이, 각각의 화합물 또는 화합물의 군이 개별적으로 기재된 것과 동일한 정도로, 본 출원에 의해 개시되는 것으로 이해되어야 한다. 이와 같이, 특정 구조 또는 특정 치환기의 선택은 본 발명의 범위 내에 있다.

본 발명을 기술하는 맥락에서(청구항의 맥락에서를 포함) 사용된 "일" 및 "하나" 및 "이"라는 용어 및 유사한 언급은, 달리 본원에 표시되지 않는 한 또는 문맥에 의해 명확히 상충되지 않는 한, 단수 및 복수 둘 다를 포괄하는 것으로 해석되어야 한다. 대안(예를 들어, "또는")의 사용은 대안의 하나, 둘 다, 또는 임의의 조합을 의미하도록 이해되어야 한다. 본원에서 값의 범위의 언급은 범위 내에 해당하는 각각의 별개의 값을 개별적으로 지칭하는 약칭 방법으로 작용하도록 의도된다. 본원에 달리 표시되지 않는 한, 각각의 개별 값은, 이것이 개별적으로 본원에 인용된 것처럼, 본 발명으로 도입된다. 본 명세서에서의 언어는 본원에 개시된 대상의 실행에 필수적인 것으로서 임의의 청구되지 않은 요소를 나타내는 것으로 해석되지 않아야 한다.

"실질적으로"라는 단어는 "완전히"를 배제하지 않고; 예를 들어 Y가 "실질적으로 없는" 조성물은 Y가 완전히 없을 수 있다. 소정의 실시형태에서, "실질적으로"는 기준 조성물, 방법 또는 용도의 것과 비교하여 본 발명의 조성물, 방법 또는 용도의 주어진 양, 효과 또는 활성을 지칭하고, 기준 조성물, 방법 또는 용도의 양, 효과 또는 활성의 40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 또는 1% 이하, 또는 이것 미만과 같은 50% 이하의 양, 효과 또는 활성의 감소를 기술한다.

숫자 값 x와 관련하여 "약"이라는 용어는 x ± 10%, 예를 들어 x ± 5% 또는 x ± 7% 또는 x ± 10% 또는 x ± 12% 또는 x ± 15% 또는 x ± 20%를 의미한다. 예를 들어, 소정의 실시형태에서, "약"은 표시된 범위, 값 또는 구조의 ± 20%를 의미한다.

"선택적인" 또는 "선택적으로"는 후속하여 기재된 요소, 성분, 사건 또는 상황이 발생할 수 있거나 발생하지 않을 수 있다는 것, 및 그 설명이 그 요소, 성분, 사건 또는 상황이 발생하는 경우 및 그렇지 않은 경우를 포함한다는 것을 의미한다.

본원에 사용된 것과 같이 "질환"이라는 용어는 일반적으로 동의어인 것으로 의도되고, 모두가 인간 또는 동물 신체 또는 정상 기능을 손상시키는 이의 부분 중 하나의 비정상적인 상태를 반영한다는 점에서 (의학 병태에서처럼) "장애" 및 "병태"의 용어와 상호교환 가능하게 사용되고, 통상적으로 구별 가능한 징후 및 증상에 의해 나타나고, 이환된 인간 또는 동물이 지속기간 또는 삶의 질이 감소되게 한다.

본원에 사용된 것과 같이, "치료학적으로 효과적인"이라는 용어는 대상체에게 이익을 제공하기에 충분한 본원에 기재된 것과 같은 약제학적 조성물 또는 항체의 성질 또는 양을 지칭한다. 본 발명의 맥락에서, 대상체에 제공된 이익은 B형 간염 바이러스 감염의 치료이다. 본원에 사용된 것과 같이, 대상체 또는 환자의 "치료"의 언급은 예방, 예방책, 감쇠, 개선 및 치료를 포함하는 것으로 의도된다. 치료의 이익은 임상 결과 개선; 질환과 연관된 증상의 경감 또는 완화; 증상 발생 감소; 삶의 질 개선; 더 긴 무질환 상태; 질환의 정도의 감소; 질환 상태의 안정화; 질환 진행의 지연; 관해; 생존율; 생존기간 연장; 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다. "대상체" 또는 "환자"라는 용어는 HBV에 의한 감염에 감수성이거나 HBV에 의해 이미 감염된 인간을 의미하도록 본원에서 상호교환 가능하게 사용된다.

용량은 대개 체중(즉, 대상체의 체중)과 관련하여 표현된다. 이와 같이, "체중"이라는 용어가 명확히 언급되지 않더라도 [g, mg 또는 다른 단위]/kg(또는 g, mg 등)로 표현된 용량은 "kg(또는 g, mg 등) 체중당" [g, mg 또는 다른 단위]를 지칭할 수 있다.

본원에 사용된 것과 같이, "아미노산"은 자연 발생 아미노산 및 합성 아미노산뿐만 아니라 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 작용하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 지칭한다. 자연 발생 아미노산은 유전 코드에 의해 암호화된 것뿐만 아니라 나중에 변형된 아미노산, 예를 들어 하이드록시프롤린, γ-카복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. 아미노산 유사체는 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조, 즉 수소, 카복실 기, 아미노 기 및 R 기, 예를 들어 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭사이드, 메티오닌 메틸 설포늄에 결합된 α-탄소를 갖는 화합물을 지칭한다. 이러한 유사체는 변형된 R 기(예를 들어, 노르류신) 또는 변형된 펩타이드 골격을 갖지만, 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 보유한다. 아미노산 모방체는 아미노산의 일반 화학 구조와 다른 구조를 갖지만, 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 작용하는 화학 화합물을 지칭한다.

본원에 사용된 것과 같이, "펩타이드", "폴리펩타이드" 및 "단백질"과 같은 용어 및 이들 용어의 변형어는 (일반 또는 변형된) 펩타이드 결합에 의해 서로에 연결된 적어도 2개의 아미노산을 포함하는 분자를 지칭한다. 예를 들어, 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질은, 각각 적어도 펩타이드 결합에 의해 서로에 연결된, 유전 코드에 의해 정의된 20개의 아미노산으로부터 선택된 복수의 아미노산으로 이루어질 수 있다. 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질은 L-아미노산 및/또는 D-아미노산으로 이루어질 수 있다. "펩타이드", "폴리펩타이드", "단백질"이라는 용어는 비펩타이드 구조 요소를 함유하는 펩타이드 유사체로서 정의되고, 펩타이드가 천연 모 펩타이드의 생물학적 작용(들)을 모방하거나 길항시킬 수 있는 "펩티도미메틱"을 또한 포함한다. 소정의 실시형태에서, 펩티도미메틱은 효소적으로 절단되기 쉬운 펩타이드 결합과 같은 특징이 결여된다.

펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질은 이들 아미노산 이외의 유전 코드에 의해 정의된 20개의 아미노산이 아닌 아미노산을 포함할 수 있거나, 이들은 유전 코드에 의해 정의된 20개의 아미노산이 아닌 아미노산으로 이루어질 수 있다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 맥락에서 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질은 당업자에게 공지되고 본원에 기재된 것을 포함하는 천연 과정, 예컨대 번역후 성숙 과정, 또는 화학 공정(예를 들어, 합성 공정)에 의해 변형된 아미노산을 포함할 수 있다. 이러한 변형은 폴리펩타이드에서 어디에서든; 예를 들어 펩타이드 골격에서; 아미노산 사슬에서; 또는 카복시 말단 끝 또는 아미노 말단 끝에서 보일 수 있다. 펩타이드 또는 폴리펩타이드는 예컨대 유비퀴틴화 후에 분지될 수 있거나, 분지를 가지며 또는 분지 없이 환형일 수 있다. "펩타이드", "폴리펩타이드", "단백질"이라는 용어는 또한 변형된 펩타이드, 폴리펩타이드 및 단백질을 포함한다. 예를 들어, 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질 변형은 아세틸화, 아실화, ADP-리보실화, 아미드화, 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드 유도체의 공유 고정, 지질 또는 지질 유도체의 공유 고정, 포스파티딜이노시톨의 공유 고정, 공유 또는 비공유 가교결합, 고리화, 디설파이드 결합 형성, 탈메틸화, 페길화를 포함하는 글리코실화, 하이드록실화, 요오드화, 메틸화, 미리스토일화, 산화, 단백질분해 공정, 포스포릴화, 프레닐화, 라세미화, 셀레노일화, 황화, 아미노산 부가, 예컨대 아르기닐화 또는 유비퀴틴화를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 문헌(Proteins Structure and Molecular Properties (1993) 2nd Ed., T. E. Creighton, New York; Post-translational Covalent Modifications of Proteins (1983) B. C. Johnson, Ed., Academic Press, New York; Seifter et al. (1990) Analysis for protein modifications and nonprotein cofactors, Meth. Enzymol. 182: 626-646 and Rattan et al., (1992) Protein Synthesis: Post-translational Modifications and Aging, Ann NY Acad Sci, 663: 48-62 참조)에 기재되어 있다. 따라서, "펩타이드", "폴리펩타이드", "단백질"이라는 용어는 예를 들어 리포펩타이드, 리포단백질, 글리코펩타이드, 글리코단백질 등을 포함할 수 있다. 본 발명의 단백질, 펩타이드 및 폴리펩타이드의 변이체가 또한 고려된다. 소정의 실시형태에서, 변이체 단백질, 펩타이드 및 폴리펩타이드는 본원에 기재된 것과 같은 정의된 아미노산 서열 또는 기준 아미노산 서열의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진다.

본원에 사용된 것과 같이, "(폴리)펩타이드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체, 예컨대 펩타이드 결합에 의해 연결된 복수의 아미노산 단량체를 참조하여 상호교환 가능하게 사용될 수 있다.

"핵산 분자" 또는 "폴리뉴클레오타이드" 또는 "핵산"은 천연 아단위(예를 들어, 푸린 또는 피리미딘 염기) 또는 비천연 아단위(예를 들어, 모르폴린 고리)로 구성될 수 있는 공유 연결된 뉴클레오타이드를 포함하는 중합체 화합물을 지칭한다. 푸린 염기는 아데닌, 구아닌, 하이폭산틴 및 잔틴을 포함하고, 피리미딘 염기는 우라실, 티민 및 시토신을 포함한다. 핵산 단량체는 포스포디에스테르 결합 또는 이러한 연결의 유사체에 의해 연결될 수 있다. 포스포디에스테르 연결의 유사체는 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로셀레노에이트, 포스포로디셀레노에이트, 포스포로아닐로티오에이트, 포스포르아닐리데이트, 포스포르아미데이트, 또는 기타를 포함한다.

핵산 분자는 폴리리보핵산(RNA: polyribonucleic acid), cDNA, 게놈 DNA 및 합성 DNA를 포함하는 폴리데옥시리보핵산(DNA: polydeoxyribonucleic acid)을 포함하고, 이들 중 어느 것은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 핵산 분자가 단일 가닥이면 코딩 가닥 또는 비코딩(안티센스 가닥)일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드(올리고뉴클레오타이드를 포함) 및 이의 단편은 예를 들어 중합효소 연쇄 반응(PCR) 또는 시험관내 번역에 의해 생성되거나, 결찰, 절제, 엔도뉴클레아제 작용 또는 엑소뉴클레아제 작용 중 어느 하나에 의해 생성될 수 있다.

아미노산 서열을 암호화하는 핵산 분자는 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 모든 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 뉴클레오타이드 서열의 일부 버전은 또한 동시번역 또는 번역후 기전을 통해 인트론(들)이 제거될 수 있는 정도로 인트론(들)을 포함할 수 있다. 바꾸어 말하면, 상이한 뉴클레오타이드 서열은 유전 코드의 중복성 또는 축퇴성의 결과로서 또는 스플라이싱에 의해 또는 둘 다로 동일한 아미노산 서열을 암호화할 수 있다.

본 발명의 핵산 분자의 변이체가 또한 고려된다. 변이체 핵산 분자는 약 65℃ 내지 68℃에서 0.015 M 염화나트륨, 0.0015 M 염화시트르산 또는 약 42℃에서 0.015 M 염화나트륨, 0.0015 M 염화시트르산 및 50% 포름아미드의 엄격한 혼성화 조건 하에 폴리뉴클레오타이드에 혼성화하는 본원에 기재된 것과 같은 정의된 폴리뉴클레오타이드 또는 기준 폴리뉴클레오타이드의 핵산 분자와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일하다. 핵산 분자 변이체는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 것과 같은 본원에 기재된 작용기를 갖는 융합 단백질 또는 이의 결합 도메인을 암호화하는 역량을 보유한다.

본원에 사용된 것과 같이, "서열 변이체"라는 용어는 기준 서열과 비교하여 하나 이상의 변경을 갖는 임의의 서열을 지칭하고, 이로써 기준 서열은 임의의 공개된 서열 및/또는 "서열 및 서열번호의 표"(서열 목록)에 열거된 서열, 즉 서열번호 1 내지 서열번호 120이다. 이와 같이, "서열 변이체"라는 용어는 뉴클레오타이드 서열 변이체 및 아미노산 서열 변이체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 뉴클레오타이드 서열의 맥락에서의 서열 변이체에 대해 기준 서열은 또한 뉴클레오타이드 서열인 반면, 소정의 실시형태에서 아미노산 서열의 맥락에서 서열 변이체에 대해 기준 서열은 또한 아미노산 서열이다. 본원에 사용된 것과 같이 "서열 변이체"는 기준 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일할 수 있다.

"퍼센트 서열 동일성"은 서열을 비교하여 결정된 것과 같은 2개 이상의 서열 사이의 관계를 지칭한다. 서열 동일성을 결정하는 방법은 비교되는 서열 사이에 최고의 일치를 생성하도록 설계될 수 있다. 예를 들어, 서열은 최적 비교 목적을 위해 정렬될 수 있다(예를 들어, 갭은 최적 정렬을 위해 제1 아미노산 또는 핵산 서열 및 제2 아미노산 또는 핵산 서열의 하나 또는 둘 다에서 도입될 수 있음). 추가로, 비상동성 서열은 비교 목적을 위해 무시될 수 있다. 본원에 언급된 퍼센트 서열 동일성은, 달리 표시되지 않는 한, 기준 서열의 길이에 걸쳐 계산된다. 서열 동일성 및 유사성을 결정하는 방법은 공공에서 이용 가능한 컴퓨터 프로그램에서 발견될 수 있다. 서열 정렬 및 퍼센트 동일성 계산은 BLAST 프로그램(예를 들어, BLAST 2.0, BLASTP, BLASTN 또는 BLASTX)을 사용하여 수행될 수 있다. BLAST 프로그램에 사용된 수학 알고리즘은 문헌[Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997]에서 발견될 수 있다. 본 발명의 맥락 내에서, 분석에 서열 분석 소프트웨어가 사용되는 경우, 분석의 결과가 언급된 프로그램의 "디폴트 값"에 기초한다고 이해될 것이다. "디폴트 값"은 처음에 개시될 때 소프트웨어가 원래 로딩한 값 또는 매개변수의 임의의 세트를 의미한다.

핵산(뉴클레오타이드) 서열의 맥락에서 "서열 변이체"는 기준 서열에서의 뉴클레오타이드의 하나 이상이 결실되거나 치환된, 또는 하나 이상의 뉴클레오타이드가 기준 뉴클레오타이드 서열의 서열로 삽입된 변경된 서열을 갖는다. 뉴클레오타이드는 표준 1철자 지칭(A, C, G 또는 T)에 의해 본원에서 언급된다. 뉴클레오타이드 서열의 "서열 변이체"는 유전 코드의 축퇴성으로 인해 각각의 기준 아미노산 서열에서, 즉 아미노산 "서열 변이체"에서 변경을 야기하거나 그렇지 않을 수 있다. 소정의 실시형태에서, 뉴클레오타이드 서열 변이체는 아미노산 서열 변이체 (예를 들어, 침묵 돌연변이)를 생성시키지 않는다. 일부 실시형태에서, "비침묵" 돌연변이를 생성시키는 뉴클레오타이드 서열 변이체가 고려된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 뉴클레오타이드 서열 변이체는 기준 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85 %, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 암호화한다. 본원에 개시된 것과 같은 뉴클레오타이드 및 아미노 서열은 또한 기준 또는 야생형 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열의 코돈 최적화된 버전을 지칭한다. 본원에 기재된 임의의 실시형태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 숙주 세포에 코돈 최적화될 수 있다(예를 들어, 문헌[Scholten et al., Clin. Immunol. 119:135-145 (2006)] 참조).

아미노산 서열의 맥락에서 "서열 변이체"는 아미노산의 하나 이상이 기준 아미노산 서열과 비교하여 결실되거나 치환되거나 삽입된 변경된 서열을 갖는다. 이러한 서열 변이체는 변경의 결과로서 기준 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85 %, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 예를 들어, 기준 서열의 100개의 아미노산마다 10개 이하의 변경, 즉 결실, 삽입 또는 치환의 임의의 조합을 갖는 변이체 서열은 기준 서열과 "적어도 90% 동일하다.

"보존적 치환"은 특정 단백질의 결합 특징에 상당히 영향을 미치지 않거나 이를 변경하지 않는 아미노산 치환을 지칭한다. 일반적으로, 보존적 치환은 치환된 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 보존적 치환은 하기 그룹 중 하나에서 발견된 치환을 포함한다: 1 그룹: 알라닌(Ala 또는 A), 글리신(Gly 또는 G), 세린(Ser 또는 S), 트레오닌(Thr 또는 T); 2 그룹: 아스파르트산(Asp 또는 D), 글루탐산(Glu 또는 Z); 3 그룹: 아스파라긴(Asn 또는 N), 글루타민(Gln 또는 Q); 4 그룹: 아르기닌(Arg 또는 R), 리신(Lys 또는 K), 히스티딘(His 또는 H); 5 그룹: 이소류신 (Ile 또는 I), 류신(Leu 또는 L), 메티오닌(Met 또는 M), 발린(Val 또는 V); 및 6 그룹: 페닐알라닌 (Phe 또는 F), 티로신(Tyr 또는 Y), 트립토판(Trp 또는 W). 추가적으로 또는 대안적으로, 아미노산은 유사한 기능, 화학 구조 또는 조성(예를 들어, 산성, 염기성, 지방족, 방향족 또는 황 함유)에 의해 보존적 치환 그룹으로 분류될 수 있다. 예를 들어, 지방족 그룹화는 치환의 목적을 위해 Gly, Ala, Val, Leu 및 Ile를 포함할 수 있다. 다른 보존적 치환 기는 황 함유: Met 및 시스테인(Cys 또는 C); 산성: Asp, Glu, Asn 및 Gln; 작은 지방족, 비극성 또는 약간의 극성 잔기: Ala, Ser, Thr, Pro 및 Gly; 극성, 음으로 하전된 잔기 및 이들의 아미드: Asp, Asn, Glu 및 Gln; 극성, 양으로 하전된 잔기: His, Arg 및 Lys; 큰 지방족, 비극성 잔기: Met, Leu, Ile, Val 및 Cys; 및 큰 방향족 잔기: Phe, Tyr 및 Trp를 포함한다. 추가 정보는 문헌[Creighton (1984) Proteins, W.H. Freeman and Company]에서 발견될 수 있다.

아미노산 서열 삽입은 길이에서 1개의 잔기 내지 수백개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩타이드의 범위의 아미노 말단 및/또는 카복실 말단 융합뿐만 아니라 단일 또는 다수의 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함할 수 있다. 말단 삽입의 예는 리포터 분자 또는 효소에 대한 아미노산 서열의 N 말단 또는 C 말단에 대한 융합을 포함한다.

일반적으로, 서열 변이체의 변경은 각각의 기준 서열의 원하는 기능을 무효화하거나 유의미하게 감소시키지 않는다. 예를 들어, 본 발명의 변이체 서열이, 동일한 에피토프에 결합하도록 그리고/또는 기준 서열을 갖는(또는 이에 의해 암호화된) 항체 또는 항원 결합 단편과 비교하여 HBV 및 HDV의 감염을 충분히 중화하도록, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 서열의 기능을 유의미하게 감소시키거나 완전히 무효화하지 않는 것이 바람직하다. 각각 뉴클레오타이드 및 아미노산 잔기가 원하는 구조 또는 기능을 무효화하지 않으면서 치환되거나 삽입되거나 결실될 수 있는 지의 결정에서의 지침은 공지된 컴퓨터 프로그램을 사용하여 발견될 수 있다.

본원에 사용된 것과 같이, 지칭된 핵산, 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질"로부터 유래된" 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 핵산, 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질의 기원을 지칭한다. 특정 서열로부터 유래된 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 이것이 유래된 그 서열 또는 이의 일부와 본질적으로 동일한 아미노산 서열을 가질 수 있고, 이로써 "본질적으로 동일한"은 상기 정의된 것과 같은 서열 변이체를 포함한다. 특정 펩타이드 또는 단백질로부터 유래된 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 특정 펩타이드 또는 단백질에서 상응하는 도메인으로부터 유래될 수 있다. 이 맥락에서, "상응하는"은 관심 있는 동일한 기능 또는 특징의 보유를 지칭한다. 예를 들어, "세포외 도메인"은 (다른 단백질의) 다른 "세포외 도메인"에 상응하거나, "막관통 도메인"은 (다른 단백질의) 다른 "막관통 도메인"에 상응한다. 펩타이드, 단백질 및 핵산의 "상응하는" 부분은 이와 같이 당업자에게 용이하게 확인 가능하다. 마찬가지로, 다른 (예를 들어, "원천") 서열로부터 "유래된" 서열은 원천 서열에서 이의 기원을 갖는 것으로 당업자에 의해 확인될 수 있다.

다른 핵산, 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질로부터 유래된 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 (이것이 유래된) 출발 핵산, 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질과 동일할 수 있다. 그러나, 다른 핵산, 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질로부터 유래된 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 또한 (이것이 유래된) 출발 핵산, 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질에 비해 하나 이상의 돌연변이를 가질 수 있고, 특히 다른 핵산, 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질로부터 유래된 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 (이것이 유래된) 출발 핵산, 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질의 상기 기재된 것과 같은 기능적 서열 변이체일 수 있다. 예를 들어, 펩타이드/단백질에서, 하나 이상의 아미노산 잔기는 다른 아미노산 잔기에 의해 치환될 수 있거나, 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입 또는 결실이 발생할 수 있다.

본원에 사용된 것과 같이, "돌연변이"라는 용어는 기준 서열, 예를 들어 상응하는 게놈, 야생형 또는 기준 서열과 비교하여 핵산 서열 및/또는 아미노산 서열의 변경을 지칭한다. 예를 들어, 기준 게놈 서열과의 비교에서 돌연변이는 예를 들어 (자연 발생) 체세포 돌연변이, 자발적 돌연변이, 예를 들어 효소, 화학물질 또는 방사선에 의해 유도된 유도 돌연변이, 또는 부위 지정 돌연변이유발(핵산 서열 및/또는 아미노산 서열의 특이적 변경 및 의도적 변경을 만들기 위한 분자 생물학 방법)에 의해 얻은 돌연변이일 수 있다. 이와 같이, "돌연변이" 또는 "돌연변이하는"이라는 용어는 예를 들어 핵산 서열 또는 아미노산 서열에서 돌연변이를 물리적으로 만드는 것을 또한 포함하도록 이해되어야 한다. 돌연변이는 하나 이상의 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 치환, 결실 및 삽입뿐만 아니라 몇몇 연속적 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 역위를 포함한다. 아미노산 서열에서 돌연변이를 달성하기 위해, 돌연변이는 (재조합) 돌연변이된 폴리펩타이드를 발현하기 위해 상기 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열로 도입될 수 있다. 예를 들어, 상이한 아미노산을 암호화하거나, 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈을 제공하기 위해 하나의 아미노산을 암호화하는 핵산 분자의 코돈을 (예를 들어, 부위 지정 돌연변이유발에 의해) 변경함으로써(예를 들어, 이것 내의 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오타이드 염기를 교대함으로써), 또는 서열 변이체를 합성함으로써 돌연변이가 달성될 수 있다.

핵산 분자를 세포로 삽입하는 것의 맥락에서 "도입된"이라는 용어는 "형질주입" 또는 "형질전환" 또는 "형질도입"을 의미하고, 진핵 세포 또는 원핵 세포로의 핵산 분자의 혼입에 대한 언급을 포함하고, 여기서 핵산 분자는 세포의 게놈(예를 들어, 염색체, 플라스미드, 플라스티드 또는 미토콘드리아 DNA)으로 혼입되거나, 자율 복제로 전환되거나, 일시적으로 발현될 수 있다(예를 들어, 형질주입된 mRNA).

본원에 사용된 것과 같이 "재조합"(예를 들어, 재조합 항체, 재조합 단백질, 재조합 핵산 또는 기타)이라는 용어는 재조합 수단에 의해 제조되거나 발현되거나 생성되거나 단리되고 자연 발생이 아닌 임의의 분자(항체, 단백질, 핵산 또는 기타)를 지칭한다. "재조합"은 "조작된" 또는 "비천연"과 동의어로 사용될 수 있고, 적어도 하나의 유전 변경을 포함하거나 외인성 핵산 분자의 도입에 의해 변형되고, 이러한 변경 또는 변형이 유전 조작(즉, 인간 중재)에 의해 도입된, 유기체, 미생물, 세포, 핵산 분자, 또는 벡터를 지칭할 수 있다. 유전 변경은 예를 들어 단백질, 융합 단백질 또는 효소를 암호화하는 발현 가능한 핵산 분자를 도입하는 변형, 또는 다른 핵산 분자 부가, 결실, 치환 또는 세포의 유전 재료의 다른 기능적 파괴를 포함한다. 추가 변형은 예를 들어 변형이 폴리뉴클레오타이드, 유전자 또는 오페론의 발현을 변경하는 비코딩 조절 영역을 포함한다.

본원에 사용된 것과 같이, "이종성" 또는 "비내인성" 또는 "외인성"은 숙주 세포 또는 대상체에 대해 자연적이 아닌 임의의 유전자, 단백질, 화합물, 핵산 분자 또는 활성, 또는 변경된 숙주 세포 또는 대상체에 대해 자연적인 임의의 유전자, 단백질, 화합물, 핵산 분자 또는 활성을 지칭한다. 이종성, 비내인성 또는 외인성은 자연적 및 변경된 유전자, 단백질, 화합물 또는 핵산 분자 사이에 구조, 활성 또는 둘 다가 상이하도록 돌연변이되거나 또는 다르게 변경된 유전자, 단백질, 화합물 또는 핵산 분자를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 이종성, 비내인성 또는 외인성 유전자, 단백질 또는 핵산 분자(예를 들어, 수용체, 리간드 등)는 숙주 세포 또는 대상체에 대해 내인성이 아닐 수 있고, 대신에 이러한 유전자, 단백질 또는 핵산 분자를 암호화하는 핵산은 접합, 형질전환, 형질주입, 전기천공, 또는 기타에 의해 숙주 세포에 부가될 수 있고, 부가된 핵산 분자는 숙주 세포 게놈으로 통합될 수 있거나 염색체외 유전 재료로서(예를 들어, 플라스미드 또는 다른 자가 복제 벡터로서) 존재할 수 있다. "상동성" 또는 "동족체"라는 용어는 숙주 세포, 종 또는 균주에서 발견되거나 이로부터 유래된 유전자, 단백질, 화합물, 핵산 분자 또는 활성을 지칭한다. 예를 들어, 폴리펩타이드를 암호화하는 이종성 또는 외인성 폴리뉴클레오타이드 또는 유전자는 자연적 폴리뉴클레오타이드 또는 유전자에 상동성이고 상동성 폴리펩타이드 또는 활성을 암호화할 수 있지만, 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 변경된 구조, 서열, 발현 수준, 또는 임의의 이들의 조합을 가질 수 있다. 비내인성 폴리뉴클레오타이드 또는 유전자뿐만 아니라 암호화된 폴리펩타이드 또는 활성은 동일한 종, 상이한 종 또는 이들의 조합 유래일 수 있다.

본원에 사용된 것과 같이, "내인성" 또는 "자연적"이라는 용어는 숙주 세포 또는 대상체에 보통 존재하는 폴리뉴클레오타이드, 유전자, 단백질, 화합물, 분자 또는 활성을 지칭한다. 본원에 사용된 것과 같이, "세포", "세포주" 및 "세포 배양"이라는 용어는 상호교환 가능하게 사용되고, 모든 이러한 지칭은 자손을 포함한다. 이와 같이, "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"라는 단어는 운반의 수와 무관하게 1차 대상체 세포 및 이로부터 유래된 배양물을 포함한다. 모든 자손이 고의적 또는 의도치 않은 돌연변이로 인해 DNA 함량에서 정확히 동일하지 않을 수 있다고 또한 이해된다. 원래 형질전환된 세포에 대해 스크리닝된 것 같은 동일한 또는 실질적으로 동일한 기능, 표현형 또는 생물학적 활성을 갖는 변이체 자손이 포함된다. 명확한 지칭이 의도되는 경우, 이것은 맥락으로부터 명확할 것이다.

본 발명은 부분적으로 B형 간염 및 델타 간염 바이러스를 중화할 수 있는 항체 및 항원 결합 단편의 설계에 기초한다. 본 설명에 따른 항체 및 항원 결합 단편의 실시형태는 HBV 및 HDV를 예방하거나 치료하거나 약화시키는 방법에 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 본원에 기재된 항체 및 항원 결합 단편은 B형 간염 바이러스 표면 항원의 2개 이상의 상이한 유전자형 및 B형 간염 바이러스 표면 항원의 2개 이상의 상이한 감염성 돌연변이체에 결합한다. 구체적인 실시형태에서, 본원에 기재된 항체 및 항원 결합 단편은 B형 간염 바이러스 표면 항원의 현재 모든 공지된 유전자형 및 B형 간염 바이러스 표면 항원의 모든 현재 공지된 감염성 돌연변이체에 결합한다.

항체 및 이의 항원 결합 단편

일 양태에서, 본 발명은 HBsAg의 항원 루프 영역에 결합하고, B형 간염 바이러스 및 델타 간염 바이러스에 의한 감염을 중화하는 본원에 개시된 것과 같은 약제학적 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.

본원에 사용된 것과 같이, 그리고 문맥이 명확히 달리 표시하지 않는 한, "항체"는 (경쇄가 결여된 중쇄 항체가 "항체"라는 용어에 의해 여전히 포함되는 것으로 이해되지만) 디설파이드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 온전한 항체뿐만 아니라 예를 들어 scFv, Fab 또는 F(ab')2 단편과 같은 온전한 항체에 의해 인식된 항원 표적 분자에 결합하는 능력을 갖거나 보유하는 임의의 항원 결합 부분 또는 온전한 항체의 단편을 지칭한다. 이와 같이, 본원에서 "항체"라는 용어는 광의로 사용되고, 온전한 항체를 포함하는 다중클론 항체 및 단일클론 항체, 및 단편 항원 결합 (Fab) 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, Fv 단편, 재조합 IgG(rIgG) 단편, 단일 사슬 가변 단편(scFv)을 포함하는 단일 사슬 항체 단편, 및 단일 도메인 항체(예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디) 단편을 포함하는 이의 기능적(항원 결합) 항체 단편을 포함한다. 상기 용어는 면역글로불린, 예컨대 인트라바디, 펩티바디, 키메라 항체, 완전 인간 항체, 인간화된 항체, 및 이종접합체 항체, 다중특이적, 예를 들어 이중특이적, 항체, 디아바디, 트리아바디 및 테트라바디, 탠덤 디-scFv, 탠덤 트리-scFv의 유전 조작된 형태 및/또는 달리 변형된 형태를 포함한다. 달리 기술되지 않는 한, "항체"라는 용어는 이의 기능적 항체 단편을 포함하도록 이해되어야 한다. 상기 용어는 또한 IgG 및 이의 하위종류, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 종류 또는 이의 하위종류의 항체를 포함하는 온전한 항체 또는 전장 항체를 포함한다.

따라서, 본 발명의 항체는 임의의 아이소타입(예를 들어, 각각 α, γ 및 μ 중쇄라고도 칭하는 IgA, IgG, IgM)을 가질 수 있다. 예를 들어, 소정의 실시형태에서, 항체는 IgG 유형이다. 항체는 IgG 아이소타입 내에서 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 하위종류, 예를 들어 IgG1일 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 예를 들어 IgA 항체로부터의 아미노산 서열 및 IgG 항체로부터의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역을 포함하는 항체와 같은 2개의 상이한 아이소타입으로부터의 아미노산 서열(예를 들어, 불변 도메인 아미노산 서열의 교환)을 포함한다. 본 발명의 항체는 κ 또는 λ 경쇄를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 IgG1 유형이고, κ 경쇄를 포함한다.

본원에 사용된 것과 같이, "항원 결합 단편", "단편" 및 "항체 단편"이라는 용어는 항체의 항원 결합 활성을 보유하는 본 발명의 항체의 임의의 단편을 지칭하도록 상호교환 가능하게 사용된다. 항체 단편의 예는 단일 사슬 항체, Fab, Fab', F(ab')₂, Fv 또는 scFv를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 추가로, 본원에 사용된 것과 같이 "항체"라는 용어는 항체 및 이의 항원 결합 단편 둘 다를 포함한다. 항체 및 항원 결합 단편은 본원에 추가로 기술되어 있다.

인간 항체가 공지되어 있다(van Dijk, M. A., and van de Winkel, J. G., Curr. Opin. Chem. Biol. 5 (2001) 368-374). 인간 항체는 면역화 시 전체 레퍼토리의 생성 또는 내인성 면역글로불린 생성의 부재 하에 인간 항체의 선택을 할 수 있는 형질전환 동물(예를 들어, 마우스)에서 제조될 수 있다. 이러한 생식선 돌연변이체 마우스에서의 인간 생식선 면역글로불린 유전자 어레이의 전달은 항원 시험감염 시 인간 항체를 생성시킬 것이다(예를 들어, 문헌[Jakobovits, A., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 2551-2555; Jakobovits, A., et al., Nature 362 (1993) 255-258; Bruggemann, M., et al., Year Immunol. 7 (1993) 3340] 참조). 인간 항체는 또한 파지 디스플레이 라이브러리에서 생성될 수 있다(문헌[Hoogenboom, H. R., and Winter, G., J. Mol. Biol. 227 (1992) 381-388; Marks, J. D., et al., J. Mol. Biol. 222 (1991) 581-597]). Cole 등 및 Boerner 등의 기법은 또한 인간 단일클론 항체의 제조에 이용 가능하다(문헌[Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); 및 Boerner, P., et al., J. Immunol. 147 (1991) 86-95]). 인간 단일클론 항체는 문헌[Traggiai E, Becker S, Subbarao K, Kolesnikova L, Uematsu Y, Gismondo MR, Murphy BR, Rappuoli R, Lanzavecchia A. (2004): An efficient method to make human monoclonal antibodies from memory B cells: potent neutralization of SARS coronavirus. Nat Med. 10(8):871-5]에 기재된 것처럼 개선된 EBV-B 세포 불멸화를 사용함으로써 제조될 수 있다. 본원에 사용된 것과 같이 "인간 항체"라는 용어는 본 발명의 항체 및 항체 단편에 따른 특성을 생성하기 위해 예를 들어 가변 영역에서 변형된 이러한 항체를 또한 포함한다. 본원에 사용된 것과 같이, "가변 영역"(경쇄의 가변 영역(V_L), 중쇄의 가변 영역(V_H))이라는 용어는 항체를 항원에 결합시키는 데 직접 관여된 한 쌍의 경쇄 및 중쇄의 각각을 지칭한다.

본원에 사용된 것과 같이, "가변 영역"(예를 들어, 경쇄의 가변 영역(V_L), 중쇄의 가변 영역(V_H))이라는 용어는 항체를 항원에 결합시키는 데 직접 관여된 항체 경쇄 또는 항체 중쇄의 가변 영역을 지칭한다. 바꾸어 말하면, "V_L" 또는 "VL" 및 "V_H" 또는 "VH"라는 용어는 각각 항체 경쇄 및 항체 중쇄로부터의 가변 결합 영역을 지칭한다.

가변 결합 영역은 "상보성 결정 영역"(CDR: complementarity determining region) 및 "프레임워크 영역"(FR: framework region)으로 공지된 별개의 잘 한정된 하위영역으로 구성된다. "상보성 결정 영역" 및 "CDR"이라는 용어는 "고가변 영역" 또는 "HVR"과 동의어이고, 일반적으로 항원 특이성 및/또는 결합 친화성을 부여하는 항체 가변 영역 내의 아미노산의 비인접 서열을 지칭하는 것으로 당해 분야에 공지되어 있다. 일반적으로, 항체의 각각의 가변 영역에 3개의 CDR이 있고; VH 영역 및 VL 영역은 함께, 본원에서 각각 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3이라고도 칭하는, HCDR1, HCDR2, HCDR3; LCDR1, LCDR2, LCDR3의 6개의 CDR을 포함한다. 중쇄 및/또는 경쇄에서의 CDR은 프레임워크 영역에 의해 1차 아미노산 서열에서 분리될 수 있고, 이로써 프레임워크 영역(FR)은 CDR보다 덜 가변적인(즉, 하나의 항체로부터 다른 항체로(예를 들어, 하나의 항체로부터 동일한 대립유전자 또는 대립유전자들에 의해 암호화된 것으로)) 가변 도메인에서의 영역이다. 예를 들어, 사슬(또는 각각 각각의 사슬)은 3개의 CDR에 의해 분리된 4개의 프레임워크 영역으로 이루어질 수 있다. 소정의 실시형태에서, 항체 VH는 하기와 같이 배열된 4개의 FR 및 3개의 CDR을 포함하고: FR1-CDRH1-FR2-CDRH2-FR3-CDRH3-FR4; 항체 VL은 하기와 같이 배열된 4개의 FR 및 3개의 CDR을 포함한다: FR1-CDRL1-FR2-CDRL2-FR3-CDRL3-FR4. 일반적으로, 일부 경우에 결합 부위가 CDR의 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개에 의해 형성될 수 있거나 이를 포함하는 것으로 이해될 것이지만, VH 및 VL는 함께 이의 각각의 CDR을 통해 항원 결합 부위를 형성한다.

본원에 사용된 것과 같이, CDR의 "변이체"는 1개 내지 3개 이하의 아미노산 치환, 결실 또는 이들의 조합을 갖는 CDR 서열의 기능적 변이체를 지칭한다. 면역글로불린 서열은 넘버링 체계(예를 들어, Kabat, EU, International Immunogenetics Information System(IMGT) 및 Aho)에 따라 정렬될 수 있고, 이들은 동등한 잔기 위치가 주석화되게 하고, 상이한 분자가 항원 수용체 넘버링 및 수용체 분류(ANARCI: Antigen receptor Numbering And Receptor Classification) 소프트웨어 도구(2016, Bioinformatics 15:298-300)를 사용하여 비교되게 할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편이 중쇄(HC), 경쇄(LC) 또는 둘 다의 전부 또는 일부를 포함할 수 있는 것으로 이해될 것이다. 예를 들어, 전장 온전한 IgG 항체 단량체는 통상적으로 VH, CH1, CH2, CH3, VL 및 CL을 포함한다. Fc 성분은 본원에 추가로 기재되어 있다.

본 발명에서, CDR 아미노산의 위치는 IMGT 넘버링 시스템(IMGT: www.imgt.org/; cf. Lefranc, M.-P. et al. (2009) Nucleic Acids Res. 37, D1006-D1012)에 따라 정의된다.

표 1은 본 발명에 따른 소정의 예시적인 항체의 중쇄 가변 영역(VH), 경쇄 가변 영역(VL), CDR, 중쇄(HC) 및 경쇄(LC)의 아미노산 서열을 보여준다.

펩신 또는 파파인과 같은 효소에 의한 분해를 포함하는 방법에 의해, 그리고/또는 화학 환원에 의한 디설파이드 결합의 절단에 의해 항체로부터 본원에 기재된 항체의 단편을 얻을 수 있다. 대안적으로, 중쇄 또는 경쇄의 서열의 일부의 클로닝 및 발현에 의해 항체의 단편을 얻을 수 있다. 항체 "단편"은 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편을 포함한다. 본 발명은 또한 예를 들어 본 설명에 따른 항체로부터의 CDR을 포함하는 scFv, 중쇄 또는 경쇄 단량체 및 이합체, 단일 도메인 중쇄 항체, 단일 도메인 경쇄 항체뿐만 아니라 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인이 펩타이드 링커에 의해 연결된 단일 사슬 항체를 포함하는 본원에 기재된 것과 같은 항체의 중쇄 및 경쇄로부터 유래된 단일-사슬 Fv 단편(scFv)을 포함한다.

소정의 실시형태에서, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 정제된 항체, 단일 사슬 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 또는 scFv를 포함한다.

본 발명의 항체 및 항원 결합 단편은 실시형태에서 다중특이적(예를 들어, 이중특이적, 삼중특이적, 사중특이적 또는 기타)일 수 있고, 본원에 개시된 것과 같이 임의의 다중특이적 형식으로 제공될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 이중특이적 항체 또는 삼중특이적 항체와 같은 다중특이적 항체이다. 이중특이적 항체에 대한 형식은 예를 들어 이중특이적 형식 및 이를 제조하는 방법이 본원에 참고로 포함된 문헌[Spiess et al., Mol. Immunol. 67(2):95 (2015) 및 Brinkmann and Kontermann, mAbs 9(2):182-212 (2017)]에 개시되어 있고, 예를 들어 이중특이적 T 세포 인게이져(BiTE: Bispecific T cell Engager), DART, 구멍에 손잡이(KIH: Knobs-Into-Hole) 어셈블리, scFv-CH3-KIH 어셈블리, KIH 공통 경쇄 항체, TandAb, Triple Body, TriBi Minibody, Fab-scFv, scFv-CH-CL-scFv, F(ab')2-scFv2, 4가 HCab, Intrabody, CrossMab, Dual Action Fab(DAF)(투-인-원 또는 포-인-원), DutaMab, DT-IgG, Charge Pair, Fab-arm Exchange, SEEDbody, Triomab, LUZ-Y 어셈블리, Fcab, κλ-바디, 직각 Fab, DVD-IgG, IgG(H)-scFv, scFv-(H)IgG, IgG(L)-scFv, scFv-(L)IgG, IgG(L,H)-Fv, IgG(H)-V, V(H)-IgG, IgG(L)-V, V(L)-IgG, KIH IgG-scFab, 2scFv-IgG, IgG-2scFv, scFv4-Ig, Zybody 및 DVI-IgG(포-인-원)를 포함한다. 이중특이적 항체 또는 다중특이적 항체는 본 발명의 다른 HBV 특이적 결합 도메인 및/또는 HDV 특이적 결합 도메인과 조합되어, 또는 HBV 및/또는 HDV에 특이적으로 결합하는 상이한 결합 도메인과 조합되어(예를 들어, 동일한 또는 상이한 에피토프에서), 또는 상이한 항원에 특이적으로 결합하는 결합 도메인과 함께 본 발명의 HBV특이적 결합 도메인 및/또는 HDV 특이적 결합 도메인을 포함할 수 있다.

본 발명의 항체 단편은 1가 상호작용 또는 다가 상호작용을 부여할 수 있고, 상기 기재된 것과 같은 다양한 구조에서 함유될 수 있다. 예를 들면, scFv 분자는 3가 "트리아바디" 또는 4가 "테트라바디"를 생성하기 위해 합성될 수 있다. scFv 분자는 2가 미니바디를 생성시키는 Fc 영역의 도메인을 포함할 수 있다. 게다가, 본 발명의 서열은 본 발명의 서열이 본 발명의 에피토프를 표적화하고 분자의 다른 영역이 다른 표적에 결합하는 다중특이적 분자의 성분일 수 있다. 예시적인 분자는 이중특이적 Fab2, 삼중특이적 Fab3, 이중특이적 scFv 및 디아바디를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다(Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology 9: 1126-1136).

일부 실시형태에서, 항체는 다른 폴리펩타이드가 실질적으로 없는, 예를 들어 약제학적 조성물의 90%(중량 기준) 미만, 보통 60% 미만 및 보다 보통 50% 미만이 다른 폴리펩타이드로 구성된 약제학적 조성물에 존재할 수 있다.

본 발명에 따른 항체는 인간 및/또는 비인간(또는 이종성) 숙주; 예를 들어 마우스에서 면역원성일 수 있다. 예를 들어, 항체는 인간 숙주가 아니라 비인간 숙주에서 면역원성인 이디오타입을 가질 수 있다. 인간 사용을 위한 본 발명의 항체는 마우스, 염소, 토끼, 래트, 비영장류 포유동물 등과 같은 숙주로부터 통상적으로 단리되지 않고, 일부 경우에 인간화에 의해 또는 제노-마우스로부터 얻어지지 않은 것을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 발명에 따른 항체는 비면역원성이거나 인간에서 실질적으로 비면역원성이다.

공지된 또는 잠재적 면역원성 및/또는 다른 잠재적 책임을 감소시키도록 조작된 개시된 항체의 변이체 형태가 본원에서 또한 고려된다.

본원에 사용된 것과 같이, "중화 항체"는 숙주(예를 들어, 숙주 유기체 또는 숙주 세포)에서 감염을 개시하고/하거나 영속시키는 병원균의 능력을 중화하는, 즉 이를 방지하거나 억제하거나 감소시키거나 지연시키거나 이것과 상호작용하는 것이다. "중화 항체" 및 "중화하는 항체" 또는 "중화하는 항체들"이라는 용어는 본원에서 상호교환 가능하게 사용된다. 이들 항체는 능동 백신접종과 연관되어 적절한 제형화 시 예방제 또는 치료제로서 단독으로 또는 조합으로(예를 들어, 조합된 현재 개시된 항체의 2개 이상, 또는 HBV B 및/또는 D 감염을 중화할 수 있는 항체를 포함하는, 항체 물질일 수 있거나 아닐 수 있는, 다른 물질과 조합된 본 발명의 항체) 사용될 수 있다.

본원에 사용된 것과 같이, "특이적으로 결합한다" 또는 "에 특이적"은 샘플에서 임의의 다른 분자 또는 성분과 상당히 회합하거나 연합하지 않으면서 10⁵ M^-1 이상(이 회합 반응에 대해 결합속도[K_on] 대 분해속도[K_off]의 비와 동일)인 친화성 또는 Ka(즉, 1/M의 단위로 특정 결합 상호작용의 평형 회합 상수)로 표적 분자에 대한 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편) 또는 결합 도메인의 회합 또는 연합을 지칭한다. 항체 또는 결합 도메인은 "고친화성" 결합 단백질 또는 결합 도메인 또는 "저친화성" 결합 단백질 또는 결합 도메인으로 분류될 수 있다. "고친화성" 결합 단백질 또는 결합 도메인은 Ka가 적어도 10⁷ M^-1, 적어도 10⁸ M^-1, 적어도 10⁹ M^-1, 적어도 10¹⁰ M^-1, 적어도 10¹¹ M^-1, 적어도 10¹² M^-1, 또는 적어도 10¹³ M^-1인 결합 단백질 또는 결합 도메인을 지칭한다. "저친화성" 결합 단백질 또는 결합 도메인은 Ka가 10⁷ M^-1 이하, 10⁶ M^-1 이하, 또는 10⁵ M^-1 이하인 결합 단백질 또는 결합 도메인을 지칭한다. 대안적으로, 친화성은 M의 단위(예를 들어, 10^-5 M 내지 10^-13 M)로 특정 결합 상호작용의 평형 해리 상수(Kd)로 정의될 수 있다. "결합" 및 "특이적으로 결합하는"과 같은 용어 및 유사한 언급은 비특이적 점착을 포함하지 않는다.

소정의 실시형태에서, 본 발명에 따른 항체는 HBsAg의 항원 루프 영역에 결합할 수 있다. B형 간염 바이러스의 엔벨로프는 일반적으로 S 단백질(S-HBsAg라고도 칭하는 "소형"에 대해), M 단백질(M-HBsAg라고도 칭하는 "중형"에 대해) 및 L 단백질(L-HBsAg라고도 칭하는 "대형"에 대해)의 3개의 "HBV 외피 단백질"("HBsAg", "B형 간염 표면 항원"으로도 공지됨)을 함유한다. S-HBsAg, M-HBsAg 및 L-HBsAg는 S 단백질(S-HBsAg)에 상응하고 바이러스 어셈블리 및 감염성에 중요한 동일한 C 말단 극단("S 도메인"이라고도 칭함, 226개 아미노산)을 공유한다. S-HBsAg, M-HBsAg 및 L-HBsAg는 소포체(ER)에서 합성되고, 어셈블링되고, 골지체를 통해 입자로서 분비된다. S 도메인은 4개의 예측된 막관통(TM) 도메인을 포함하고, 이로써 S 도메인의 N 말단뿐만 아니라 C 말단 둘 다는 내강에 노출된다. 막관통 도메인 TM1 및 TM2는 둘 다 ER 막으로 동시번역 단백질 통합에 필요하도록 여겨지고, 막관통 도메인 TM3 및 TM4는 S 도메인의 C 말단에 위치한다. HBsAg의 "항원 루프 영역"은 HBsAg의 S 도메인의 예측된 TM3 및 TM4 막관통 도메인 사이에 위치하고, 이로써 항원 루프 영역은 총 226개의 아미노산을 함유하는 S 도메인의 101번 내지 172번 아미노산을 포함한다(Salisse J. and Sureau C., 2009, Journal of Virology 83: 9321-9328). 감염성의 결정인자는 HBV 외피 단백질의 항원 루프 영역에 있다. 특히, HBsAg의 119번과 125번 사이의 잔기는 HBV 및 HDV의 감염성에 대해 중요한 것으로 여겨지는 CXXC 모티프를 함유한다(Jaoude GA, Sureau C, Journal of Virology, 2005;79:10460-6).

HbsAg의 S 도메인의 아미노산 서열에서의 위치가 본원에 칭해질 때, 이러한 위치는 서열번호 3에 기재된 것과 같은 아미노산 서열(하기 기재됨) 또는 이의 자연 서열 변이체 또는 인공 서열 변이체를 참조하여 이루어진다.

예를 들어, "S 도메인의 101번 내지 172번 아미노산"이라는 표현은 서열번호 3에 따른 폴리펩타이드의 101번 내지 172번 위치로부터의 아미노산 잔기를 지칭한다. 그러나, 당업자는 돌연변이 또는 변이(비제한적인 예로서 치환, 결실 및/또는 부가, 예를 들어 본원에 기재된 것과 같은 상이한 유전자형 또는 상이한 HBsAg 돌연변이체의 HBsAg)가 HBsAg의 S 도메인의 아미노산 서열에서 자연 발생하지 않거나 이의 생물학적 특성에 영향을 미치지 않으면서 HBsAg의 S 도메인의 아미노산 서열로 인공적으로 도입될 수 있다는 것을 이해한다. 따라서, 본원에 사용된 것과 같이, "HBsAg의 S 도메인"이라는 용어는 예를 들어 서열번호 3에 따른 폴리펩타이드를 포함하는 모든 이러한 폴리펩타이드 및 이의 자연 돌연변이체 또는 인공 돌연변이체를 포함한다. 게다가, HBsAg의 S 도메인의 서열 단편(예를 들어 HBsAg의 S 도메인의 101번 내지 172번 아미노산 또는 120번 내지 130번 아미노산)이 본원에 기재될 때, 이들은 서열번호 3의 상응하는 서열 단편뿐만 아니라 이의 자연 돌연변이체 또는 인공 돌연변이체의 상응하는 서열 단편을 포함한다. 예를 들어, "HBsAg의 S 도메인의 101번 내지 172번 위치로부터의 아미노산 잔기"와 같은 구절은 서열번호 3의 101번 내지 172번 위치로부터의 아미노산 잔기 및 이의 돌연변이체(자연 돌연변이체 또는 인공 돌연변이체)의 상응하는 단편을 포함한다. 본원에 사용된 것과 같이, "상응하는 서열 단편" 및 "상응하는 단편"이라는 구절은 서열이 최적화된 정렬로 처리될 때, 즉 서열이 가장 높은 동일성 백분율을 얻도록 정렬될 때 서열의 동일한 위치에 위치한 단편을 지칭한다.

M 단백질(M-HBsAg)은 "pre-S2"라 칭하는 55개의 아미노산의 N 말단 도메인에 의해 연장된 S 단백질에 상응한다. L 단백질(L-HBsAg)은 "pre-S1"(유전자형 D)이라 칭하는 108개의 아미노산의 N 말단 도메인에 의해 연장된 M 단백질에 상응한다. L 단백질의 pre-S1 및 pre-S2 도메인은 바이러스 입자의 내부 면에서(ER의 세포질 측에서) 존재할 수 있고, 표적 세포와의 상호작용에 이용 가능하고 바이러스 감염성에 중요한 바이러스 어셈블리에서 또는 외부 면에서(ER의 내강 측에서) 중요한 역할을 하는 것으로 여겨진다. 게다가, HBV 표면 단백질(HBsAg)은 비리온 엔벨로프에 혼입될 뿐만 아니라 분비에 의해 세포로부터 방출된 빈 "준바이러스 입자"(SVP)를 형성하도록 ER-골지 중간 구획 막으로부터 자발적으로 버딩할 수 있다.

일부 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HBsAg의 항원 루프 영역에 결합하고, S-HBsAg, M-HBsAg 및 L-HBsAg의 모두에 결합할 수 있다.

일부 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 B형 간염 바이러스 및 델타 간염 바이러스에 의한 감염을 중화한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 B형 간염 바이러스 및 델타 간염 바이러스의 바이러스 감염성을 감소시킨다.

실험실에서 바이러스 감염성(또는 "중화")을 연구하고 정량화하기 위해, 표준 "중화 검정"이 사용될 수 있다. 중화 검정을 위해, 동물 바이러스는 통상적으로 세포 및/또는 세포주에서 증식된다. 배양된 세포가 시험되는 항체(또는 항원 결합 단편)의 존재(또는 부재) 하에 HBV 또는 HDV의 고정된 양과 항온처리되는 중화 검정이 사용될 수 있다. 이러한 검정에서, 세포 배양 상청액으로 분비된 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 또는 B형 간염 e 항원 (HBeAg)의 수준이 사용될 수 있고/있거나, HBcAg 염색은 판독치를 제공하도록 평가될 수 있다. HDV에 대해, 예를 들어 델타 항원 면역형광 염색이 평가될 수 있다.

HBV 중화 검정의 특정 실시형태에서, 배양된 세포, 예를 들어 HepaRG 세포, 예컨대 분화된 HepaRG 세포는 시험되는 항체의 존재 또는 부재 하에 HBV의 고정된 양과 항온처리된다. 이러한 실시형태에서, 항온처리는 예를 들어 37℃에서 16시간 동안 수행될 수 있다. 그 항온처리는 (예를 들어, 4% PEG 8000이 보충된) 배지에서 수행될 수 있다. 세포는 항온처리 후 해동되고 추가로 배양될 수 있다. 바이러스 감염성을 측정하기 위해, 예를 들어 감염 후 7일 내지 11일에 배양 상청액으로 분비된 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 및 B형 간염 e 항원 (HBeAg)의 수준은 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA: enzyme-linked immunosorbent assay)에 의해 결정될 수 있다. 추가적으로, HBcAg 염색은 면역형광 검정에서 평가될 수 있다. HDV 중화 검정의 실시형태에서, 본질적으로 HBV에서와 동일한 검정은 HDV 보균자로부터의 혈청이 (HBV 대신에) 분화된 HepaRg 세포에서 HDV 감염 접종원으로서 사용될 수 있다는 차이로 사용될 수 있다. 검출을 위해, 판독치로서 델타 항원 면역형광 염색이 사용될 수 있다.

본 발명의 항체의 실시형태는 높은 중화 역량(예를 들어, 시험관내)을 갖는다. 예를 들어, 소정의 실시형태에서, B형 간염 바이러스(HBV) 및 델타 간염 바이러스(HDV)의 50% 중화에 필요한 본원에 기재된 것과 같은 항체의 농도는 예를 들어 약 10 ㎍/ml 이하이다. 다른 실시형태에서, HBV 및 HDV의 50% 중화에 필요한 항체의 농도는 약 5 ㎍/ml이다. 다른 실시형태에서, HBV 및 HDV의 50% 중화에 필요한 본원에 기재된 것과 같은 항체의 농도는 약 1 ㎍/ml이다. 또 다른 실시형태에서, HBV 및 HDV의 50% 중화에 필요한 항체의 농도는 약 750 ㎍/ml이다. 다른 추가의 실시형태에서, HBV 및 HDV의 50% 중화에 필요한 본원에 기재된 것과 같은 항체의 농도( 예를 들어, 시험관내 )는 500 ng/ml 이하이다. 이러한 실시형태에서, HBV 및 HDV의 50% 중화에 필요한 본원에 기재된 것과 같은 항체의 농도는 450 ng/ml 이하, 400 ng/ml 이하, 350 ng/ml 이하, 300 ng/ml 이하, 250 ng/ml 이하, 200 ng/ml 이하, 175 ng/ml 이하, 150 ng/ml 이하, 125 ng/ml 이하, 100 ng/ml 이하, 90 ng/ml 이하, 80 ng/ml 이하, 70 ng/ml 이하, 60 ng/ml 이하 또는 50 ng/ml 이하로부터 선택될 수 있다.

HBV 및 HDV 둘 다를 중화할 수 있는 본 발명에 따른 항체 또는 항원 결합 단편은 B형 간염 및 D형 간염의 예방 및 치료에 유용하다. HDV에 의한 감염은 통상적으로 HBV에 의한 감염과 동시에 또는 이에 후속하여 발생하고(예를 들어, HDV가 그 자체의 복제에 HBV의 지원을 요하므로 HBV의 부재 하의 HDV에 의한 접종은 D형 간염을 야기하지 않음), 통상적으로 만성 HBV 보균자에서 D형 간염이 관찰된다.

개시된 항체의 실시형태는 HBsAg 및 HBV의 제거를 촉진한다. 특정 실시형태에서, 항체는 HBV 및 B형 간염 바이러스의 준바이러스 입자(SVP) 둘 다의 제거를 촉진한다. HBsAg 또는 준바이러스 입자의 제거는 예를 들어 B형 간염 환자로부터의 예를 들어 혈액 샘플에서 HBsAg의 수준을 측정함으로써 평가될 수 있다. 유사하게, HBV의 제거는 예를 들어 B형 간염 환자로부터의 예를 들어 혈액 샘플에서 HBV의 수준을 측정함으로써 평가될 수 있다.

감염성 입자(HBV) 이외에 HBV에 의해 감염된 환자의 혈청에서, 비교적 더 작은 구 및 가변 길이의 필라멘트의 형태로 오로지 HBV 외피 단백질(HBsAg)로 이루어진 통상적으로 과량(통상적으로 1,000배 내지 100,000배)의 빈 준바이러스 입자(SVP)가 있다. 준바이러스 입자는 HBV의 세포내 바이러스 복제 및 유전자 발현을 강하게 향상시키는 것으로 나타났다(Bruns M. et al. 1998 J Virol 72(2): 1462-1468). 이는 또한 HBV를 함유하는 혈청의 감염성의 맥락에서 관련되는데, 왜냐하면 감염성은 바이러스의 구성원뿐만 아니라 SVP의 수에 따라 달라지기 때문이다(Bruns M. et al. 1998 J Virol 72(2): 1462-1468). 게다가, 과량의 준바이러스 입자는 중화 항체를 흡수함으로써 디코이로서 작용하고 따라서 감염의 제거를 지연시킬 수 있다. B형 간염 표면 항원(HBsAg) 소실의 달성은 일부 경우에 만성 B형 간염(CHB)을 치유하기 위한 치료의 평가변수 및 가장 가까운 결과인 것으로 여겨진다.

본 발명의 항체의 실시형태는 HbsAg의 제거를 촉진할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 항체는 B형 간염 바이러스의 준바이러스 입자의 제거를 촉진한다. 일부 실시형태에서, 항체(예를 들어, 현재 개시된 약제학적 조성물에서의 항체)는 만성 B형 간염을 치료하기 위해 사용될 수 있다.

임의의 현재 개시된 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HBsAg 유전자형 A, B, C, D, E, F, G, H, I 및 J으로부터 선택된 유전자형의 HBsAg, 또는 임의의 이들의 조합에 결합한다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 HBsAg 유전자형 A, B, C, D, E, F, G, H, I 및 J의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개에 결합한다. 상이한 HBsAg 유전자형의 예는 GenBank 수탁 번호 J02203(HBV-D, ayw3); GenBank 수탁 번호 FJ899792.1(HBV-D, adw2); GenBank 수탁 번호 AM282986(HBV-A); GenBank 수탁 번호 D23678(HBV-B1 일본); GenBank 수탁 번호 AB117758(HBV-C1 캄보디아); GenBank 수탁 번호 AB205192(HBV-E 가나); GenBank 수탁 번호 X69798(HBV-F4 브라질); GenBank 수탁 번호 AF160501(HBV-G 미국); GenBank 수탁 번호 AY090454(HBV-H 니카라과); GenBank 수탁 번호 AF241409(HBV-I 베트남); 및 GenBank 수탁 번호 AB486012(HBV-J 보르네오)를 포함한다. 상이한 유전자형의 HBsAg의 S 도메인의 항원 루프 영역의 예시적인 아미노산 서열이 본원에 기재되어 있다(예를 들어, 서열번호 5 내지 서열번호 15).

일부 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 10개의 HBsAg 유전자형 A, B, C, D, E, F, G, H, I 및 J 중 적어도 6개에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 10개의 HBsAg 유전자형 A, B, C, D, E, F, G, H, I 및 J 중 적어도 8개에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 10개의 HBsAg 유전자형 A, B, C, D, E, F, G, H, I 및 J의 모든 10개에 결합한다. HBV는 게놈 서열에 따라 몇몇 유전자형으로 구별된다. 현재까지, HBV 게놈의 8개의 잘 공지된 유전자형(A-H)이 정의되어 있다. 게다가, I 및 J인 2개의 다른 유전자형이 또한 확인되었다(Sunbul M., 2014, World J Gastroenterol 20(18): 5427-5434). 유전자형은 질환의 진행에 영향을 미치는 것으로 공지되어 있고, 항바이러스 치료에 반응하여 유전자형 사이의 차이가 결정되었다.

일부 실시형태에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항원 결합 단편은 항원 루프 영역에서 돌연변이를 갖는 HBsAg 돌연변이체의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개 또는 18개에 결합하고, 이러한 돌연변이체(들)는 HBsAg Y100C/P120T, HBsAg P120T, HBsAg P120T/S143L, HBsAg C121S, HBsAg R122D, HBsAg R122I, HBsAg T123N, HBsAg Q129H, HBsAg Q129L, HBsAg M133H, HBsAg M133L, HBsAg M133T, HBsAg K141E, HBsAg P142S, HBsAg S143K, HBsAg D144A, HBsAg G145R 및 HBsAg N146A 중 하나 이상으로부터 선택된다. 이들 돌연변이체는 HBsAg 유전자형 D의 S 도메인에 기초한 자연 발생 돌연변이체, Genbank 수탁 번호 FJ899792(서열번호 4)이다. 본원에 기재된 각각의 돌연변이체에서의 돌연변이된 아미노산 잔기(들)는 명칭으로 표시된다.

상이한 돌연변이체의 HBsAg의 S 도메인의 항원 루프 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16 내지 서열번호 33에 기재되어 있다.

소정의 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HBsAg Y100C/P120T, HBsAg P120T, HBsAg P120T/S143L, HBsAg C121S, HBsAg R122D, HBsAg R122I, HBsAg T123N, HBsAg Q129H, HBsAg Q129L, HBsAg M133H, HBsAg M133L, HBsAg M133T, HBsAg K141E, HBsAg P142S, HBsAg S143K, HBsAg D144A, HBsAg G145R 및 HBsAg N146A로부터 선택된 적어도 12개의 감염성 HBsAg 돌연변이체에 결합한다. 일부 이러한 실시형태에서, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 HBsAg Y100C/P120T, HBsAg P120T, HBsAg P120T/S143L, HBsAg C121S, HBsAg R122D, HBsAg R122I, HBsAg T123N, HBsAg Q129H, HBsAg Q129L, HBsAg M133H, HBsAg M133L, HBsAg M133T, HBsAg K141E, HBsAg P142S, HBsAg S143K, HBsAg D144A, HBsAg G145R 및 HBsAg N146A로부터 선택된 적어도 15개의 감염성 HBsAg 돌연변이체에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HBsAg Y100C/P120T; HBsAg P120T; HBsAg P120T/S143L; HBsAg C121S; HBsAg R122D; HBsAg R122I; HBsAg T123N; HBsAg Q129H; HBsAg Q129L; HBsAg M133H; HBsAg M133L; HBsAg M133T; HBsAg K141E; HBsAg P142S; HBsAg S143K; HBsAg D144A; HBsAg G145R; 및 HBsAg N146A의 감염성 HBsAg 돌연변이체의 각각에 결합한다.

소정의 실시형태에서, 항체 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물은 HBV 감염을 갖는 포유동물에서 HBV DNA의 혈청 농도를 감소시킨다. 소정의 실시형태에서, 항체 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물은 HBV 감염을 갖는 포유동물에서 HBsAg의 혈청 농도를 감소시킨다. 소정의 실시형태에서, 항체 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물은 HBV 감염을 갖는 포유동물에서 HBeAg의 혈청 농도를 감소시킨다. 소정의 실시형태에서, 항체 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물은 HBV 감염을 갖는 포유동물에서 HBcrAg의 혈청 농도를 감소시킨다.

"에피토프" 또는 "항원 에피토프"라는 용어는 동족 결합 분자, 예컨대 면역글로불린, 키메라 항원 수용체, 또는 다른 결합 분자, 도메인 또는 단백질에 의해 인식되고 특이적으로 결합된 결정된 임의의 분자, 구조, 아미노산 서열 또는 단백질 결정인자를 포함한다. 에피토프 결정인자는 일반적으로 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적으로 활성인 표면 그룹화를 함유하고, 특정 3차원 구조 특징뿐만 아니라 특정 전하 특징을 가질 수 있다.

일부 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HbsAg의 항원 루프 영역의 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개 또는 적어도 4개의 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HbsAg의 S 도메인의 115번 내지 133번 아미노산, HbsAg의 S 도메인의 120번 내지 133번 아미노산, 또는 HbsAg의 S 도메인의 120번 내지 130번 아미노산으로부터 선택된 적어도 2개의 아미노산에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HbsAg의 S 도메인의 115번 내지 133번 아미노산, HbsAg의 S 도메인의 120번 내지 133번 아미노산, 또는 HbsAg의 S 도메인의 120번 내지 130번 아미노산으로부터 선택된 적어도 3개의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HbsAg의 S 도메인의 115번 내지 133번 아미노산, HbsAg의 S 도메인의 120번 내지 133번 아미노산, 또는 HbsAg의 S 도메인의 120번 내지 130번 아미노산으로부터 선택된 적어도 4개의 아미노산에 결합한다. 본원에 사용된 것과 같이, 아미노산의 위치(예를 들어 115번 내지 133번, 120번 내지 133번, 120번 내지 130번)는 상기 기재된 것과 같은 HBsAg의 S 도메인을 지칭하고, 이는 모든 3개의 HBV 외피 단백질 S-HBsAg, M-HBsAg, 및 L-HBsAg에 존재하고, 이로써 S-HBsAg는 통상적으로 HBsAg의 S 도메인에 상응한다.

에피토프의 맥락에서 본원에 사용된 것과 같이 "에 의해 형성된"이라는 용어는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 결합하는 에피토프가 선형(연속) 또는 입체형태(불연속)일 수 있다는 것을 의미한다. 선형 또는 순차적 에피토프는 아미노산의 이의 선형 서열 또는 1차 구조에 따라 항체에 의해 인식된 에피토프이다. 입체형태 에피토프는 3차원 형상 및 단백질 구조에 따라 인식될 수 있다. 따라서, 에피토프가 선형 에피토프이고, HBsAg의 S 도메인의 115번 내지 133번 아미노산 위치 또는 120번 내지 133번 아미노산 위치로부터 선택된 위치에 위치한 하나 초과의 아미노산을 포함하면, 에피토프에 의해 포함된 아미노산은 1차 구조의 인접한 위치에 위치할 수 있다(예를 들어, 아미노산 서열에서 연속적 아미노산임). 입체형태 에피토프(3D 구조)의 경우에, 아미노산 서열은 통상적으로 에피토프로서 3D 구조를 형성하고, 이와 같이, 에피토프를 형성하는 아미노산은 1차 구조의 인접한 위치에서 위치할 수 있거나 위치하지 않을 수 있다(즉, 아미노산 서열에서 연속적 아미노산을 일 수 있거나 아닐 수 있음).

소정의 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편이 입체형태 에피토프에 결합하는 에피토프. 일부 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HBsAg의 항원 루프 영역의 적어도 2개의 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합하고, 적어도 2개의 아미노산은 HbsAg의 S 도메인의 120번 내지 133번 아미노산 또는 120번 내지 130번 아미노산으로부터 선택되고, 적어도 2개의 아미노산은 (1차 구조의) 인접한 위치에 위치하지 않는다. 소정의 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HBsAg의 항원 루프 영역의 적어도 3개의 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합하고, 적어도 3개의 아미노산은 HbsAg의 S 도메인의 120번 내지 133번 아미노산 또는 120번 내지 130번 아미노산으로부터 선택되고, 3개의 아미노산의 적어도 2개는 (1차 구조의) 인접한 위치에 위치하지 않는다. 일부 실시형태에서, 결합 단백질은 HBsAg의 항원 루프 영역의 적어도 4개의 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합하고, 적어도 4개의 아미노산은 HbsAg의 S 도메인의 120번 내지 133번 아미노산 또는 120번 내지 130번 아미노산으로부터 선택되고, 4개의 아미노산의 적어도 2개는 (1차 구조의) 인접한 위치에 위치하지 않는다.

1차 구조의 인접한 위치에 위치하지 않는 현재 개시된 항체 또는 항원 결합 단편이 결합하는 아미노산(즉, 에피토프를 형성하는 아미노산)은 일부 경우에 항체 또는 항원 결합 단편이 결합하지 않는 하나 이상의 아미노산에 의해 멀리 떨여져 있다. 일부 실시형태에서, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개 또는 적어도 5개의 아미노산은 에피토프에 의해 포함된 인접한 위치에 위치하지 않은 아미노산의 2개 사이에 위치할 수 있다.

소정의 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HBsAg의 S 도메인의 적어도 아미노산 P120, C121, R122 및 C124를 포함하는 에피토프에 결합한다. 다른 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기 서열번호 88에 따른 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 결합한다:

PCRXC

여기서, X는 임의의 아미노산이거나 아미노산이 아니거나; X는 임의의 아미노산이거나; X는 T, Y, R, S 또는 F이거나; X는 T, Y 또는 R이거나; X는 T 또는 R이다.

다른 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 80: TGPCRTC에 따른 아미노산 서열, 또는 서열번호 80과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%의 서열 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 결합한다.

다른 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 85: STTSTGPCRTC에 따른 아미노산 서열, 또는 서열번호 85와 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%의 서열 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 결합한다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 HBsAg의 S 도메인의 적어도 145번 내지 151번 아미노산: GNCTCIP(서열번호 81)를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 결합한다.

또 다른 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 80에 따른 아미노산 서열 및 서열번호 81에 따른 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 결합한다.

다른 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 85에 따른 아미노산 서열 및/또는 서열번호 87에 따른 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 결합한다.

상기 기재된 것과 같이, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편이 결합하는 에피토프는 선형(연속) 또는 입체형태(불연속)일 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 입체형태 에피토프에 결합하고, 소정의 이러한 실시형태에서, 입체형태 에피토프는 비환원 조건 하에 오직 존재한다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 선형 에피토프에 결합한다. 소정의 이러한 실시형태에서, 선형 에피토프는 비환원 조건 및 환원 조건 둘 다 하에 존재한다.

특정 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 서열번호 1에 따른 아미노산 서열에 의해 형성된 HBsAg의 항원 루프에서 에피토프에 결합한다:

X₁ X₂ X₃ TC X₄ X₅ X₆A X₇G

여기서 X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₆ 및 X₇은 임의의 아미노산(서열번호 1)일 수 있다.

일부 실시형태에서, X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₆ 및 X₇은 서열번호 3의 120번 내지 130번 아미노산과 비교하여 보존적으로 치환된 아미노산이다. 일부 실시형태에서, X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₆ 및 X₇은 서열번호 5 내지 서열번호 33의 20번 내지 30번 아미노산과 비교하여 보존적으로 치환된 아미노산이다.

구체적인 실시형태에서, 서열번호 1 X₁의 X₁은 작은 아미노산이다. 본원에 사용된 것과 같이 "작은" 아미노산은 알라닌, 아스파르트산, 아스파라긴, 시스테인, 글리신, 프롤린, 세린, 트레오닌 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산을 지칭한다. 소정의 이러한 실시형태에서, X₁은 프롤린, 세린 또는 트레오닌이다.

소정의 실시형태에서, 서열번호 1 X₂의 X₂는 작은 아미노산이다. 소정의 실시형태에서, X₂는 시스테인 또는 트레오닌으로부터 선택될 수 있다.

일부 실시형태에서, 서열번호 1의 X₃은 하전된 아미노산 또는 지방족 아미노산이다. 본원에 사용된 것과 같이 "하전된" 아미노산은 아르기닌, 리신, 아스파르트산, 글루탐산 및 히스티딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산을 지칭한다. 본원에 사용된 것과 같이 "지방족" 아미노산은 알라닌, 글리신, 이소류신, 류신 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산을 지칭한다. 소정의 실시형태에서, X₃은 아르기닌, 리신, 아스파르트산 또는 이소류신으로부터 선택된다.

일부 실시형태에서, 서열번호 1의 X₄는 작은 아미노산 및/또는 소수성 아미노산이다. 본원에 사용된 것과 같이 "소수성" 아미노산은 알라닌, 이소류신, 류신, 페닐알라닌, 발린, 트립토판, 티로신, 메티오닌, 프롤린 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산을 지칭한다. 소정의 실시형태에서, X₄는 메티오닌 또는 트레오닌으로부터 선택된다.

일부 실시형태에서, 서열번호 1 X₅의 X₅는 작은 아미노산 및/또는 소수성 아미노산이다. 소정의 실시형태에서, X₅는 트레오닌, 알라닌 또는 이소류신으로부터 선택된다.

일부 실시형태에서, 서열번호 1 X₆의 X₆은 작은 아미노산 및/또는 소수성 아미노산이다. 소정의 실시형태에서, X₆은 트레오닌, 프롤린 또는 류신으로부터 선택된다.

일부 실시형태에서, 서열번호 1의 X₇은 극성 아미노산 또는 지방족 아미노산이다. 본원에 사용된 것과 같이 "극성" 아미노산은 아스파르트산, 아스파라긴, 아르기닌, 글루탐산, 히스티딘, 리신, 글루타민, 트립토판, 티로신, 세린 및 트레오닌으로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산을 지칭한다. 소정의 이러한 실시형태에서, X₇은 글루타민, 히스티딘 또는 류신이다.

일부 실시형태에서, 본 발명에 따른 비결합 단백질은 서열번호 2에 따른 아미노산 서열에 의해 형성된 HBsAg의 항원 루프에서 에피토프에 결합한다:

X₁ X₂ X₃ TC X₄ X₅ X₆A X₇G

상기 식 중, X₁은 P, T 또는 S이고,

X₂는 C 또는 S이고,

X₃은 R, K, D 또는 I이고,

X₄는 M 또는 T이고,

X₅는 T, A 또는 I이고,

X₆은 T, P 또는 L이고,

X₇은 Q, H 또는 L임

(서열번호 2).

서열번호 1 또는 서열번호 2에 따른 아미노산 서열에 의해 형성된 에피토프와 관련하여, 본원에 사용된 것과 같이 "형성된"이라는 용어가 개시된 결합 단백질이 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산의 각각 및 모두에 반드시 결합한다는 것을 암시하도록 의도되지 않는다는 것에 유의한다. 특히, 결합 단백질은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산의 일부에 오직 결합할 수 있고, 이로써 다른 아미노산 잔기는 "스페이서"로서 작용할 수 있다.

특정 실시형태에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 표 3에 기재된 서열번호 5 내지 서열번호 33으로부터 선택된 아미노산 서열의 1개 이상, 2개 이상, 3개 이상 또는 4개 이상의 아미노산에 의해 형성된 HBsAg의 항원 루프에서 에피토프에 결합한다.

일부 실시형태에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 표 3에 기재된 서열번호 5 내지 서열번호 33의 임의의 하나 이상에 따른 아미노산 서열을 갖는 HBsAg의 항원 루프 영역, 또는 이의 서열 변이체에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 표 3에 기재된 임의의 서열번호 5 내지 서열번호 33에 따른 아미노산 서열을 갖는 HBsAg의 항원 루프 변이체의 모두에 결합한다.

표 3: (HBsAg의 S 도메인의 101번 내지 172번 잔기 - 관련 돌연변이를 포함하기 위해 HBsAg의 S 도메인의 100번 내지 172번 잔기를 지칭하는 서열번호 16을 제외하고) 본원에 사용된 것과 같은 상이한 유전자형 및 돌연변이체의 HBsAg의 S 도메인의 항원 루프 영역의 예시적인 아미노산 서열

따라서, 소정의 양태에서, 본 발명은 (i) 서열번호 41 또는 서열번호 67에 따른 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역(V_H); 및 (ii) 서열번호 42; 서열번호 59; 서열번호 65; 서열번호 89, 서열번호 90 또는 서열번호 110 내지 서열번호 120 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역(V_L)을 포함하는, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하고, 단 IMGT 넘버링에 따른 VL의 40번 위치에서의 아미노산은 시스테인이 아니고, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 HBsAg의 항원 루프 영역에 결합하고, B형 간염 바이러스 및 델타 간염 바이러스에 의한 감염을 중화한다.

추가의 실시형태에서, (i) V_H는 서열번호 41 또는 서열번호 67에 따른 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 포함하고/하거나; (ii) V_L은 서열번호 42, 서열번호 59, 서열번호 65, 서열번호 89, 서열번호 90 또는 서열번호 110 내지 서열번호 120 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 포함한다.

소정의 실시형태에서, V_L의 40번 위치에서의 아미노산은 알라닌이다. 다른 실시형태에서, V_L의 40번 위치에서의 아미노산은 세린이다. 또 다른 실시형태에서, V_L의 40번 위치에서의 아미노산은 글리신이다.

본원에 개시된 임의의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 (i) 각각 34 내지 36, 37, 38 및 40; (ii) 각각 34, 66, 36, 37, 38 및 40; (iii) 각각 34 내지 36, 37, 39 및 40; (iv) 각각 34, 66, 36, 37, 39 및 40; (v) 각각 34 내지 36, 37, 38 및 58; (vi) 각각 34, 66, 36, 37, 38 및 58; (vii) 각각 34 내지 36, 37, 39 및 58; 또는 (vii) 각각 34, 66, 36, 37, 39 및 58에 따른 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 서열을 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 항원 결합 단편의 V_L은 서열번호 89에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 항원 결합 단편의 V_L은 서열번호 90에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 다른 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 항원 결합 단편의 V_L은 서열번호 109 내지 서열번호 120 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 소정의 실시형태에서, V_H는 서열번호 41에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 다른 실시형태에서, V_H는 서열번호 67에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다.

특정 실시형태에서, V_H는 서열번호 41에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고; V_L은 서열번호 89에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 다른 실시형태에서, V_H는 서열번호 41에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고; V_L은 서열번호 90에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 소정의 실시형태에서, V_H는 서열번호 41에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, V_L은 서열번호 109 내지 서열번호 120 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 다른 실시형태에서, V_H는 서열번호 67에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, V_L은 서열번호 109 내지 서열번호 120 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다.

다른 양태에서, 본 발명은 (i) 서열번호 95에 따른 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역(V_H); 및 (ii) 서열번호 96에 따른 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역(V_L)을 포함하는, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하고, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 HBsAg의 항원 루프 영역에 결합하고, B형 간염 바이러스 및 델타 간염 바이러스에 의한 감염을 중화한다.

추가의 실시형태에서, (i) VH는 서열번호 95에 따른 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 포함하고/하거나; (ii) VL은 서열번호 96에 따른 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열번호 97 내지 서열번호 102에 따른 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 서열을 포함한다.

특정 실시형태에서, VH는 서열번호 95에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고; VL은 서열번호 96에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다.

Fc 모이어티

일부 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Fc 모이어티를 포함한다. 소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 인간 기원, 예를 들어 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및/또는 IgG4로부터 유래될 수 있다. 구체적인 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 IgG1로부터 유래된 Fc 모이어티를 포함할 수 있다.

본원에 사용된 것과 같이, "Fc 모이어티"라는 용어는 파파인 절단 부위의 바로 상류에 힌지 영역(예를 들어, 114개인 중쇄 불변 영역의 제1 잔기를 취하여 자연적 IgG에서의 216번 잔기)에서 시작하고 면역글로불린 중쇄의 C 말단에서 끝나는 면역글로불린 중쇄의 부분을 포함하거나 이로부터 유래된 서열을 지칭한다. 따라서, Fc 모이어티는 완전한 Fc 모이어티 또는 이의 부분(예를 들어, 도메인)일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 완전한 Fc 모이어티는 힌지 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인(예를 들어, 216번 내지 446번 EU 아미노산 위치)을 포함한다. 추가 리신 잔기(K)는 때때로 Fc 모이어티의 극단 C 말단에 존재하지만, 성숙 항체로부터 대개 절단된다.

본원에서 Fc 모이어티 내의 아미노산 위치는 Kabat의 EU 넘버링 시스템(예를 들어, Kabat et al., "Sequences of Proteins of Immunological Interest", U.S. Dept. Health and Human Services, 1983 and 1987 참조)에 따라 넘버링된다. Fc 모이어티의 아미노산 위치는 또한 IMGT 넘버링 시스템(C-도메인에 대한 고유한 넘버링 및 엑손 넘버링을 포함) 및 Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 수 있다.

일부 실시형태에서, Fc 모이어티는 힌지(예를 들어, 상부, 중간 및/또는 하부 힌지 영역) 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인 중 적어도 하나, 또는 이들의 변이체, 일부 또는 단편을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 모이어티는 적어도 힌지 도메인, CH2 도메인 또는 CH3 도메인을 포함한다. 추가의 실시형태에서, Fc 모이어티는 완전한 Fc 모이어티이다. 인간 IgG1 아이소타입의 예시적인 Fc 모이어티의 아미노산 서열은 서열번호 137에서 제공된다. Fc 모이어티는 또한 자연 발생 Fc 모이어티에 비해 하나 이상의 아미노산 삽입, 결실 또는 치환을 포함할 수 있다. 예를 들어, 힌지 도메인, CH2 도메인 또는 CH3 도메인 중 적어도 하나, 또는 이의 일부가 결실될 수 있다. 예를 들어, Fc 모이어티는 (i) CH2 도메인(또는 이의 일부)에 융합된 힌지 도메인(또는 이의 일부), (ii) CH3 도메인(또는 이의 일부)에 융합된 힌지 도메인(또는 이의 일부), (iii) CH3 도메인(또는 이의 일부)에 융합된 CH2 도메인(또는 이의 일부), (iv) 힌지 도메인(또는 이의 일부), (v) CH2 도메인(또는 이의 일부), 또는 (vi) CH3 도메인 또는 이의 일부를 포함하거나 이들로 이루어질 수 있다.

본 발명의 Fc 모이어티는 자연 발생 Fc 모이어티에 의해 부여된 적어도 하나의 바람직한 기능을 보유하거나 향상시키면서 자연 발생 면역글로불린 분자의 완전한 Fc 모이어티로부터 아미노산 서열이 변하도록 변형될 수 있다. 이러한 기능은 예를 들어 Fc 수용체 (FcR) 결합, 항체 반감기 조절(예를 들어, FcRn에 대한 결합에 의해), ADCC 기능, 단백질 A 결합, 단백질 G 결합 및 보체 결합을 포함한다. 이러한 기능에 관여된 자연 발생 Fc 모이어티의 일부는 당해 분야에 기재되어 있다.

예를 들어, 보체 캐스케이드를 활성화하기 위해, C1q 단백질 복합체는 면역글로불린 분자(들)가 항원 표적에 부착될 때 IgG1의 적어도 2개의 분자 또는 IgM의 1개의 분자에 결합할 수 있다(Ward, E. S., and Ghetie, V., Ther. Immunol. 2 (1995) 77-94). Burton, D. R.은 318번 내지 337번 아미노산 잔기를 포함하는 중쇄 영역이 보체 고정에 관여된다는 것을 기재하였다(Mol. Immunol. 22 (1985) 161-206). 부위 지정 돌연변이유발을 사용하여 Duncan, A. R., and Winter, G. (Nature 332 (1988) 738-740)는 Glu318, Lys320 및 Lys322가 C1q에 대한 결합 부위를 형성한다는 것을 보고하였다. C1q의 결합에서의 Glu318, Lys320 및 Lys 322 잔기의 역할은 보체 매개 용해를 억제하는 이들 잔기를 함유하는 짧은 합성 펩타이드의 능력에 의해 확인되었다.

예를 들어, FcR 결합은 (항체의) Fc 모이어티와 Fc 수용체(FcR)의 상호작용에 의해 매개될 수 있고, 이는 조혈 세포를 포함하는 세포에서 특수 세포 표면 수용체이다. Fc 수용체는 면역글로불린 슈퍼패밀리에 속하고, 항체 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC; Van de Winkel, J. G., and Anderson, C. L., J. Leukoc. Biol. 49 (1991) 511-524)을 통해 면역 복합체의 식세포작용에 의한 항체 코팅된 병원균의 제거 및 상응하는 항체로 코팅된 적혈구 및 다양한 다른 세포 표적(예를 들어, 종양 세포)의 용해 둘 다를 매개하는 것으로 나타났다. FcR은 면역글로불린 종류에 대해 이의 특이성에 의해 정의되고; IgG 항체에 대한 Fc 수용체는 FcγR이라 칭해지고, IgE에 대해 FcεR이라 칭해지고, IgA에 대해 FcαR이라 칭해지고, 기타 등등이고, 신생 Fc 수용체는 FcRn이라 칭해진다. Fc 수용체 결합은 예를 들어 문헌[Ravetch, J. V., and Kinet, J. P., Annu. Rev. Immunol. 9 (1991) 457-492; Capel, P. J., et al., Immunomethods 4 (1994) 25-34; de Haas, M., et al., J Lab. Clin. Med. 126 (1995) 330-341; 및 Gessner, J. E., et al., Ann. Hematol. 76 (1998) 231-248]에 기재되어 있다.

자연적 IgG 항체의 Fc 도메인(FcγR)에 의한 수용체의 가교결합은 식세포작용, 항체 의존적 세포 세포독성 및 염증성 매개자의 방출뿐만 아니라, 면역 복합 제거 및 항체 생성의 제조를 포함하는 매우 다양한 효과기 기능을 촉발한다. 수용체의 가교결합을 제공하는 Fc 모이어티(예를 들어, FcγR)가 본원에 고려된다. 인간에서, 현재까지 FcγR의 3개의 종류가 규명되었는데, 이는 (i) 고친화성으로 단량체성 IgG에 결합하고, 대식세포, 단핵구, 호중구 및 호산구에서 발현된 FcγRI(CD64); (ii) 중친화성 내지 저친화성으로 복합체화된 IgG에 결합하고, 특히 백혈구에서 널리 발현되고, 항체 매개 면역에서 중요한 역할을 하는 것으로 여겨지고, FcγRIIA, FcγRIIB 및 FcγRIIC로 나눠질 수 있고, 면역계에서 상이한 기능을 수행하지만, IgG-Fc에 유사한 저친화성으로 결합하고, 이들 수용체의 엑토도메인이 고도로 상동성인 FcγRII(CD32); 및 (iii) 중친화성 내지 저친화성으로 IgG에 결합하고, NK 세포, 대식세포, 호산구, 및 일부 단핵구 및 T 세포에서 발견되고 ADCC를 매개하는 것으로 여겨지는 FcγRIIIA; 및 호중구에서 고도로 발현된 FcγRIIIB의 2개의 형태로 발견되는 FcγRIII(CD16)이다.

FcγRIIA는 사멸에 관여된 많은 세포(예를 들어 대식세포, 단핵구, 호중구)에서 발견되고, 사멸 과정을 활성화할 수 있는 것으로 보인다. FcγRIIB는 억제 과정에서 역할을 하는 것으로 보이고, B 세포, 대식세포 및 비만 세포 및 호산구에서 발견된다. 중요하게는, 모든 FcγRIIB의 75%가 간에서 발견된다고 나타났다(Ganesan, L. P. et al., 2012: "FcγRIIb on liver sinusoidal endothelium clears small immune complexes," Journal of Immunology 189: 4981-4988). FcγRIIB는 LSEC라 칭하는 간 시누소이드 내피세포(Liver Sinusoidal Endothelium)에서 풍부하게 발현되고, 간에서의 Kupffer 세포 및 LSEC는 작은 면역 복합체 제거의 주요 부위이다(Ganesan, L. P. et al., 2012: FcγRIIb on liver sinusoidal endothelium clears small immune complexes. Journal of Immunology 189: 4981-4988).

일부 실시형태에서, 본원에 개시된 항체 및 이의 항원 결합 단편은 FcγRIIb에 결합하기 위한 Fc 모이어티, 특히 예를 들어 IgG-유형 항체와 같은 Fc 영역을 포함한다. 게다가, 문헌[Chu, S. Y. et al., 2008: Inhibition of B cell receptor-mediated activation of primary human B cells by coengagement of CD19 and FcgammaRIIb with Fc-engineered antibodies. Molecular Immunology 45, 3926-3933]에 의해 기재된 것처럼 돌연변이 S267E 및 L328F를 도입함으로써 FcγRIIB 결합을 향상시키기 위해 Fc 모이어티를 조작하는 것이 가능하다. 이로써, 면역 복합체의 제거가 향상될 수 있다(Chu, S., et al., 2014: Accelerated Clearance of IgE In Chimpanzees Is Mediated By Xmab7195, An Fc-Engineered Antibody With Enhanced Affinity For Inhibitory Receptor FcγRIIb. Am J Respir Crit, American Thoracic Society International Conference Abstracts). 일부 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 특히 문헌[Chu, S. Y. et al., 2008: Inhibition of B cell receptor-mediated activation of primary human B cells by coengagement of CD19 and FcgammaRIIb with Fc-engineered antibodies. Molecular Immunology 45, 3926-3933]에 의해 기재된 것처럼 돌연변이 S267E 및 L328F를 갖는 조작된 Fc 모이어티를 포함한다.

B 세포에서, FcγRIIB는 추가의 면역글로불린 생성 및 예를 들어 IgE 종류로의 아이소타입 스위칭을 억제하도록 작용하는 것으로 보인다. 대식세포에서, FcγRIIB는 FcγRIIA를 통해 매개된 것처럼 식세포작용을 억제하는 것으로 생각된다. 호산구 및 비만 세포에서, b 형태는 이의 별개의 수용체에 대한 IgE 결합을 통해 이들 세포의 활성화를 억제하는 것을 도울 수 있다.

FcγRI 결합과 관련하여, E233-G236, P238, D265, N297, A327 및 P329 중 적어도 하나의 자연적 IgG에서의 변형은 FcγRI에 대한 결합을 감소시킨다. 상응하는 위치 IgG1 및 IgG4로 치환된 233번 내지 236번 위치에서의 IgG2 잔기는 FcγRI에 대한 IgG1 및 IgG4의 결합을 10³배만큼 감소시키고, 인간 단핵구 반응을 항체 감작화된 적혈구로 제거하였다(Armour, K. L., et al. Eur. J. Immunol. 29 (1999) 2613-2624).

FcγRII 결합과 관련하여, FcγRIIA에 대한 감소된 결합은 예를 들어 E233-G236, P238, D265, N297, A327, P329, D270, Q295, A327, R292 및 K414 중 적어도 하나의 IgG 돌연변이에 대해 발견된다.

인간 FcγRIIA의 2개의 대립유전자 형태는 고친화성으로 IgG1 Fc에 결합하는 "H131" 변이체 및 저친화성으로 IgG1 Fc에 결합하는 "R131" 변이체이다. 예를 들어, 문헌[Bruhns et al., Blood 113:3716-3725 (2009)]을 참조한다.

FcγRIII 결합과 관련하여, FcγRIIIA에 대한 감소된 결합은 예를 들어 E233-G236, P238, D265, N297, A327, P329, D270, Q295, A327, S239, E269, E293, Y296, V303, A327, K338 및 D376 중 적어도 하나의 돌연변이에 대해 발견된다. Fc 수용체에 대한 인간 IgG1에서의 결합 부위의 맵핑, 상기 언급된 돌연변이 부위 및 FcγRI 및 FcγRIIA에 대한 결합을 측정하는 방법은 문헌[Shields, R. L., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604]에 기재되어 있다.

인간 FcγRIIIA의 2개의 대립유전자 형태는 저친화성으로 IgG1 Fc에 결합하는 "F158" 변이체 및 고친화성으로 IgG1 Fc에 결합하는 "V158" 변이체이다. 예를 들어, 문헌[Bruhns et al., Blood 113:3716-3725 (2009)]을 참조한다.

FcγRII에 대한 결합과 관련하여, 자연적 IgG Fc의 2개의 영역, 즉 (i) IgG Fc의 하부 힌지 부위, 특히 아미노산 잔기 L, L, G, G(234번 내지 237번, EU 넘버링) 및 (ii) IgG Fc의 CH2 도메인의 인접한 영역, 특히 하부 힌지 영역에 인접한 상부 CH2 도메인에서의, 예를 들어 P331의 영역에서의 루프 및 가닥(Wines, B.D., et al., J. Immunol. 2000; 164: 5313 - 5318)은 FcγRII와 IgG 사이의 상호작용에 관여되는 것으로 보인다. 게다가, FcγRI는 IgG Fc에서의 동일한 부위에 결합하는 것으로 보이는 반면에, FcRn 및 단백질 A는 CH2-CH3 계면에 있는 것으로 보이는 IgG Fc에서의 상이한 부위에 결합한다(Wines, B.D., et al., J. Immunol. 2000; 164: 5313 - 5318).

일부 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 (예를 들어, 돌연변이(들)를 포함하지 않는 기준 Fc 모이어티 또는 이를 포함하는 항체와 비교하여) (즉, 하나 이상의) Fcγ 수용체에 대한 Fc 모이어티의 결합 친화성을 증가시키는 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티, 예컨대 인간 FcγRIIa, 인간 FcγRIIIa 또는 둘 다를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Delillo and Ravetch, Cell 161(5):1035-1045 (2015) 및 Ahmed et al., J. Struc. Biol. 194(1):78 (2016)]을 참조하고, Fc 돌연변이 및 이의 기법은 본원에 참고로 포함된다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 G236A; S239D; A330L; 및 I332E; 또는 이를 포함하는 조합; 예를 들어 S239D/I332E; S239D/A330L/I332E; G236A/S239D/I332E; G236A/A330L/I332E(본원에서 "GAALIE"라고도 칭함); 또는 G236A/S239D/A330L/I332E로부터 선택된 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함한다.

소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 FcRn(예를 들어, 인간 FcRn)에 대한 결합에 관여된 Fc 모이어티의 적어도 일부를 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다. 소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 (예를 들어, 변형(들)을 포함하지 않는 기준 Fc 모이어티 또는 항체와 비교하여) FcRn에 대한 결합 친화성을 개선하고, 일부 실시형태에서, 이로써 Fc 모이어티를 포함하는 분자의 생체내 반감기를 연장하는 하나 이상의 아미노산 변형을 포함한다. 소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 IgG Fc를 포함하거나 이로부터 유래되고, 반감기 연장 돌연변이는 M428L; N434S; N434H; N434A; N434S; M252Y; S254T; T256E; T250Q; P257I Q311I; D376V; T307A; E380A(EU 넘버링) 중 임의의 하나 이상을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 반감기 연장 돌연변이는 M428L/N434S(본원에서 "MLNS"라고도 칭함)를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 반감기 연장 돌연변이는 M252Y/S254T/T256E를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 반감기 연장 돌연변이는 T250Q/M428L을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 반감기 연장 돌연변이는 P257I/Q311I를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 반감기 연장 돌연변이는 P257I/N434H를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 반감기 연장 돌연변이는 D376V/N434H를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 반감기 연장 돌연변이는 T307A/E380A/N434A를 포함한다.

일부 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 치환 돌연변이 M428L/N434S를 포함하는 Fc 모이어티를 포함한다. 일부 실시형태에서, 결합 단백질은 치환 돌연변이 G236A/A330L/I332E를 포함하는 Fc 모이어티를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 G236A 돌연변이, A330L 돌연변이 및 I332E 돌연변이(GAALIE)를 포함하고, S239D 돌연변이를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 모이어티는 239번 위치에서 Ser을 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 M428L/N434S 및 G236A/A330L/I332E의 치환 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 M428L/N434S 및 G236A/S239D/A330L/I332E의 치환 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함한다. 소정의 추가의 실시형태에서, Fc 모이어티는 M428L/N434S 및 G236A/S239D/A330L/I332E를 제외하고는 임의의 치환 돌연변이를 포함하지 않는다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 본원 및/또는 PCT 공보 WO 제2017/060504호에 개시된 예시적인 항-HBV 항체(항체 HBC34, HBC34v7, HBC34v23, HBC34v31, HBC34v32, HBC34v33, HBC34v34, HBC34v35를 포함)(경쇄에서의 40번 위치에서의 치환 돌연변이(예를 들어, 알라닌, 세린 또는 기타에 의한 자연적 시스테인의 치환)를 포함하는 HBC 항체의 본원에 개시된 변이체를 포함) 중 어느 하나에 따른 CDR 및/또는 가변 도메인 및/또는 중쇄 및/또는 경쇄; 및 G236A 돌연변이, A330L 돌연변이 및 I332E (GAALIE) 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, Fc 모이어티는 선택적으로 M428L/N434S (MLNS) 돌연변이를 추가로 포함한다. 소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 S239D를 포함하지 않는다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 34에 따른 CDRH1 아미노산 서열, 서열번호 35 또는 서열번호 66에 따른 CDRH2 아미노산 서열, 서열번호 36에 따른 CDRH3 아미노산 서열, 서열번호 37에 따른 CDRL1 산 서열, 서열번호 38 또는 서열번호 39에 따른 CDRL2 산 서열, 및 서열번호 58 또는 서열번호 40에 따른 CDRL3 아미노산 서열; 및 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함한다. 소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 MLNS 돌연변이를 추가로 포함한다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 41 또는 서열번호 67 중 어느 하나에 따른 중쇄 가변 도메인(VH) 아미노산 서열 및 서열번호 42, 서열번호 59, 서열번호 65, 서열번호 89, 서열번호 90 및 서열번호 111 내지 서열번호 120 중 어느 하나에 따른 경쇄 가변 도메인(VL) 아미노산 서열; 및 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함한다. 소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 MLNS 돌연변이를 추가로 포함한다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 138 또는 서열번호 91에 따른 중쇄 아미노산 서열을 포함한다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 97에 따른 CDRH1 아미노산 서열, 서열번호 98에 따른 CDRH2 아미노산 서열, 서열번호 99에 따른 CDRH3 아미노산 서열, 서열번호 100에 따른 CDRL1 산 서열, 서열번호 100에 따른 CDRL2 산 서열 및 서열번호 102에 따른 CDRL3 아미노산 서열; 및 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함한다. 소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 MLNS 돌연변이를 추가로 포함한다.

임의의 현재 개시된 실시형태에서, 본 발명의 결합 단백질은 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, 기준 폴리펩타이드(즉, GAALIE 돌연변이를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함하는 결합 단백질일 수 있는 폴리펩타이드)와 비교하여 인간 FcγRIIa 및/또는 인간 FcγRIIIa에 대한 향상된 결합을 갖는다.

소정의 실시형태에서, 기준 폴리펩타이드는 야생형 Fc 모이어티이거나 하나 이상의 치환 돌연변이(또는 삽입 또는 결실)를 포함하는 Fc 모이어티인 Fc 모이어티를 포함하고, 단 치환 돌연변이는 GAALIE가 아니다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GAALIE 및 MLNS 돌연변이를 갖는 HBC34v35 항체를 포함하고, 기준 폴리펩타이드는 (본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 Fc 모이어티와 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 모이어티를 포함하는) HBC34v35이다. 소정의 실시형태에서, 기준 폴리펩타이드는 인간 FcγRIIa 및/또는 인간 FcγRIIIa에 대한 결합에 영향을 미치는 것으로 공지되거나 여겨지는 치환 돌연변이를 포함하지 않는다.

폴리펩타이드들 사이의 결합, 예컨대 Fc 모이어티(또는 이를 포함하는 결합 단백질)와 인간 Fcγ 수용체, 예컨대 인간 FcγRIIA, 인간 FcγRIIIA 또는 인간 Fc FcγRIIB, 또는 보체 단백질, 예컨대 C1q 사이의 결합은 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 결정되거나 검출될 수 있다. 예를 들어, 생물층 간섭측정(BLI) 검정은 센서 기질에 포획된 관심 있는 제1 폴리펩타이드(예를 들어, GAALIE 돌연변이를 포함하는 HBC34v35)와 관심 있는 제2 폴리펩타이드(예를 들어, FcγRIIA(H131), FcγRIIA(R131), FcγRIIIA(F158), FcγRIIIA(V158) 또는 FcγRIIb) 사이의 실시간 회합 및 해리를 결정하기 위해 제조사의 지시에 따라 Octet® RED96(ForteBio, 미국 캘리포니아주 프레몬트) 기계를 사용하여 수행될 수 있다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, GAALIE 돌연변이를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함하는 기준 폴리펩타이드와 비교하여 인간 FcγRIIA(H131), 인간 FcγRIIA(R131), 인간 FcγRIIIA(F158), 인간 FcγRIIIA(V158), 또는 임의의 이들의 조합에 향상된 결합을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 향상된 결합은 BLI 검정에서 기준 결합 단백질에 대한 신호 이동의 증가(예를 들어, 더 높은 피크 신호; 더 높은 회합 속도; 더 느린 해리 속도; 또는 더 큰 곡선 하 면적 중 하나 이상)에 의해 결정된다. 소정의 실시형태에서, BLI 검정은 Octet(R) RED96(ForteBio, 미국 캘리포니아주 프리몬트) 기계의 사용을 포함한다. 추가의 실시형태에서, BLI 검정은 항-펜타-태그 센서에 포획되고 결합 단백질에 노출된 태그화된 인간 FcγR을 포함한다. 일부 실시형태에서, 결합 단백질은 IgG Fab를 포함하고, BLI 검정은 Fab 단편을 통해 결합 단백질을 가교결합하기 위해 항-IgG Fab 결합 단편의 존재 하에 포획된 인간 FcγR을 항체 또는 항원 결합 단편에 노출시키는 것을 추가로 포함한다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, 기준 폴리펩타이드와 비교하여 인간 FcγRIIA(H131), 인간 FcγRIIA(R131), 인간 FcγRIIIA(F158) 및/또는 인간 FcγRIIIA(V158)에 대한 향상된 결합을 갖고, 향상된 결합은 기준 항체를 사용하여 관찰된 신호 이동보다 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 또는 이것 초과의 BLI 검정에서의 신호 이동(나노미터)을 포함한다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, 기준 폴리펩타이드와 비교하여 인간 FcγRIIA(H131), 인간 FcγRIIA(R131), 인간 FcγRIIIA(F158) 및 인간 FcγRIIIA(V158)에 대한 향상된 결합을 갖는다.

임의의 현재 개시된 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, 기준 폴리펩타이드와 비교하여 인간 FcγRIIB에 대한 감소된 결합을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, 예를 들어 BLI 검정에서의 기준선에 대해 통계적으로 유의미한 신호 이동의 부재에 의해 결정되는 것처럼 인간 FcγRIIB에 결합하지 않는다.

임의의 현재 개시된 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, 기준 폴리펩타이드와 비교하여 인간 C1q(보체 단백질)에 대한 감소된 결합을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 결합 단백질은 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, BLI 검정에서의 기준선에 대해 통계적으로 유의미한 신호 이동의 부재에 의해 결정되는 것처럼 인간 C1q에 결합하지 않는다.

임의의 현재 개시된 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, 기준 폴리펩타이드(즉, GAALIE 돌연변이를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있는 폴리펩타이드)가 활성화하는 것보다 높은 정도로 인간 FcγRIIA, 인간 FcγRIIIa 또는 둘 다를 활성화한다. 소정의 실시형태에서, 기준 폴리펩타이드는 야생형 Fc 모이어티이거나 하나 이상의 치환 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, 단 치환 돌연변이는 GAALIE가 아니다. 소정의 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GAALIE 돌연변이(및 선택적으로 예를 들어 MLNS와 같은 다른 치환 돌연변이)를 갖는 HBC34v35 항체를 포함하고, 기준 폴리펩타이드는 야생형 Fc 모이어티를 갖는 HBC34v35이다.

당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 인간 FcγR의 활성화를 결정하거나 검출할 수 있다. 예를 들어, 잘 검증된, 상업적으로 구입 가능한 바이오리포터 검정은 HBsAg 특이적 결합 단백질을 NFAT 반응 요소의 제어 하에 (i) 관심 있는 FcγR 및 (ii) 반딧불이 루시퍼라제 리포터를 안정하게 발현하는 Jurkat 효과기 세포(Promega; 카탈로그 G9798호)의 존재 하에 재조합 HBsAg(Engerix B, GlaxoSmithKline)와 항온처리하는 것을 수반한다. 세포 표면 발현된 FcγR에 대한 Fc의 결합은 루시퍼라제 리포터 유전자의 NFAT 매개된 발현을 유도한다.이후, 제조사의 지시에 따라 Bio-Glo-^TM Luciferase Assay Reagent(Promega)을 사용하여 루미노미터(예를 들어, Bio-Tek)에 의해 발광을 측정한다. 활성화는 하기 식을 적용함으로써 배경에 대한 상대 발광 단위(RLU)의 평균으로서 표현된다: (결합 단백질(예를 들어, mAb)의 농도 [x]에서의 RLU - 배경의 RLU).

소정의 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, 기준 폴리펩타이드가 활성화하는 것보다 높은 정도로 인간 FcγRIIA(H131), 인간 FcγRIIIA(F158) 및/또는 인간 FcγRIIIA(V158)를 활성화한다. 소정의 실시형태에서, 더 높은 활성화 정도는 본원에 기재된 것과 같은 발광 바이오리포터 검정을 사용하여 결정된 것과 같이 더 높은 피크 발광 및/또는 더 높은 곡선 하 발광 면적을 지칭한다. 소정의 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, 기준 폴리펩타이드가 활성화하는 것보다 높은 정도로 인간 FcγRIIA(H131), 인간 FcγRIIA(R131) 및 인간 FcγRIIIA(F158)를 활성화하고, 더 높은 활성화 정도는 기준 폴리펩타이드를 사용하여 관찰된 피크 RLU보다 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 또는 이것 초과로 더 높은 피크 RLU에 의해 표시될 수 있다.

임의의 현재 개시된 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, 상기 기재된 것과 같은 발광 바이오리포터 검정에서 통계적으로 유의미하고/하거나 측정 가능한 RLU의 부재 하에 결정된 것처럼 인간 FcγRIIB를 활성화하지 않는다.

임의의 현재 개시된 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하고, 기준 폴리펩타이드가 활성화하는 것보다 높은 정도로 HBsAg의 존재 하에 인간 자연 살해(NK) 세포를 활성화한다. 소정의 실시형태에서, NK 세포의 활성화는 CD107a 발현(예를 들어, 유세포분석법)에 의해 결정된다. 소정의 실시형태에서, NK 세포는 V158/V158 동형접합성, F158/F158 동형접합성 또는 V158/F158 이형접합성 FcγRIIIa 유전자형을 포함하는 세포를 포함한다.

본 발명에 따른 GAALIE 돌연변이를 포함하는 Fc 모이어티를 포함하는 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 예를 들어 기준 폴리펩타이드와 비교하여 인간 FcγRIIA 및/또는 인간 FcγRIIIA에 대한 향상된 결합; 기준 폴리펩타이드와 비교하여 인간 FcγRIIB에 대한 감소된 결합(및/또는 인간 FcγRIIB에 대한 결합 무); 기준 폴리펩타이드와 비교하여 인간 C1q에 대한 감소된 결합(및/또는 인간 C1q에 대한 결합 무); 기준 폴리펩타이드가 활성화하는 것보다 높은 정도로 FcγRIIA, 인간 FcγRIIIa 또는 둘 다를 활성화함; 인간 FcγRIIB를 활성화하지 않음; 그리고/또는 기준 폴리펩타이드(예를 들어, HBsAg에 특이적이고 GAALIE 돌연변이를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함하는 항체)가 활성화하는 것보다 높은 정도로 HBsAg의 존재 하에 인간 자연 살해(NK) 세포를 활성화함의 본원에 기재된 특징 중 임의의 하나 이상을 수행하거나 보유할 수 있다고 이해될 것이다.

대안적으로 또는 추가적으로, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 Fc 모이어티는 단백질 A 결합에 필요한 것으로 당해 분야에 공지된 적어도 일부를 포함하고/하거나; 본 발명의 항체의 Fc 모이어티는 단백질 G 결합에 필요한 것으로 당해 분야에 공지된 Fc 분자의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 보유된 기능은 HBsAg 및 HBVg의 제거를 포함한다. 따라서, 소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 FcγR 결합에 필요한 것으로 당해 분야에 공지된 적어도 일부를 포함한다. 상기 개괄된 것처럼, Fc 모이어티는 이와 같이 적어도 (i) 자연적 IgG Fc의 하부 힌지 부위, 특히 아미노산 잔기 L, L, G, G(234번 내지 237번, EU 넘버링), 및 (ii) 자연적 IgG Fc의 CH2 도메인의 인접한 영역, 특히 하부 힌지 영역에 인접한 상부 CH2 도메인에서의, 예를 들어 P331의 영역에서의 루프 및 가닥, 예를 들어 자연적 IgG Fc의 320번 및 340번 아미노산(EU 넘버링) 사이에, 예를 들어 P331 주위의 자연적 IgG Fc의 상부 CH2 도메인에서의 적어도 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 연속적 아미노산의 영역을 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Fc 영역을 포함한다. 본원에 사용된 것과 같이, "Fc 영역"이라는 용어는 항체 중쇄의 2개 이상의 Fc 모이어티에 의해 형성된 면역글로불린의 부분을 지칭한다. 예를 들어, Fc 영역은 단량체성 또는 "단일-사슬" Fc 영역(즉, scFc 영역)일 수 있다. 단일 사슬 Fc 영역은 단일 폴리펩타이드 사슬(예를 들어, 단일 인접한 핵산 서열에 암호화된) 내에 연결된 Fc 모이어티로 이루어진다. 예시적인 scFc 영역은 WO 제2008/143954호 A2에 개시되어 있고, 본원에 참고로 포함된다. Fc 영역은 이합체성 Fc 영역일 수 있거나 이를 포함할 수 있다. "이합체성 Fc 영역" 또는 "dcFc"는 2개의 별개의 면역글로불린 중쇄의 Fc 모이어티에 의해 형성된 이합체를 지칭한다. 이합체성 Fc 영역은 2개의 동일한 Fc 모이어티(예를 들어, 자연 발생 면역글로불린의 Fc 영역)의 동종이합체 또는 2개의 비동일한 Fc 모이어티의 이종이합체일 수 있다(예를 들어, 이합체성 Fc 영역의 1개의 Fc 단량체는 다른 Fc 단량체에 존재하지 않는 적어도 1개의 아미노산 변형(예를 들어, 치환, 결실, 삽입 또는 화학 변형)을 포함하거나, 1개의 Fc 단량체는 다른 것과 비교하여 절두될 수 있음).

특정 실시형태는 서열번호 91 또는 서열번호 92에 따른 중쇄(예를 들어, VH-힌지-CH1-CH2-CH3)를 갖는 항체 및 항원 결합 단편, 및 서열번호 93 또는 서열번호 94에 따른 경쇄(즉, VL-CL)를 갖는 것을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 91에 따른 중쇄 및 서열번호 93에 따른 경쇄를 포함한다. 다른 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 92에 따른 중쇄 및 서열번호 94에 따른 경쇄를 포함한다. 다른 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 91에 따른 중쇄 및 서열번호 94에 따른 경쇄를 포함한다. 다른 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 92에 따른 중쇄 및 서열번호 93에 따른 경쇄를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 129에 따른 중쇄를 포함하거나 이것으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 138에 따른 중쇄를 포함하거나 이것으로 이루어진다. 이들 서열은 서열 목록에 제공된다.

현재 개시된 Fc 모이어티는 Fc 서열 또는 동일한 또는 상이한 종류 및/또는 하위종류의 영역을 포함할 수 있다. 예를 들어, Fc 모이어티는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 하위종류의 면역글로불린(예를 들어, 인간 면역글로불린), 또는 임의의 이들의 조합으로부터 유래될 수 있다. 소정의 실시형태에서, Fc 영역의 Fc 모이어티는 동일한 종류 및 하위종류이다. 그러나, Fc 영역(또는 Fc 영역의 하나 이상의 Fc 모이어티)은 또한 키메라성일 수 있고, 이로써 키메라 Fc 영역은 상이한 면역글로불린 종류 및/또는 하위종류로부터 유래된 Fc 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들어, 이합체성 또는 단일-사슬 Fc 영역의 Fc 모이어티 중 적어도 2개는 상이한 면역글로불린 종류 및/또는 하위종류 유래일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 이합체성 Fc 영역은 2개 이상의 상이한 아이소타입 또는 하위종류로부터의 서열; 예를 들어 SEEDbody("가닥 교환 조작된 도메인")를 포함할 수 있고, 문헌[Davis et al., Protein Eng. Des. Sel. 23(4):195 (2010)]을 참조한다.

추가적으로 또는 대안적으로, 키메라 Fc 영역은 하나 이상의 키메라 Fc 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들어, 키메라 Fc 영역 또는 모이어티는 제1 하위종류의 면역글로불린(예를 들어, IgG1, IgG2 또는 IgG3 하위종류)으로부터 유래된 하나 이상의 부분을 포함할 수 있지만, Fc 영역 또는 모이어티의 나머지는 상이한 하위종류이다. 예를 들어, Fc 폴리펩타이드의 Fc 영역 또는 모이어티는 제1 하위종류(예를 들어, IgG1, IgG2 또는 IgG4 하위종류)의 면역글로불린으로부터 유래된 CH2 및/또는 CH3 도메인 및 제2 하위종류(예를 들어, IgG3 하위종류)의 면역글로불린으로부터의 힌지 영역을 포함할 수 있다. 예를 들어, Fc 영역 또는 모이어티는 힌지 및/또는 제1 하위종류(예를 들어, IgG4 하위종류)의 면역글로불린으로부터 유래된 CH2 도메인 및 제2 하위종류(예를 들어, IgG1, IgG2 또는 IgG3 하위종류)의 면역글로불린으로부터의 CH3 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들어, 키메라 Fc 영역은 제1 하위종류(예를 들어, IgG4 하위종류)에 대한 면역글로불린으로부터의 Fc 모이어티(예를 들어, 완전한 Fc 모이어티) 및 제2 하위종류(예를 들어, IgG1, IgG2 또는 IgG3 하위종류)의 면역글로불린으로부터의 Fc 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들어, Fc 영역 또는 모이어티는 IgG4 면역글로불린으로부터의 CH2 도메인 및 IgG1 면역글로불린으로부터의 CH3 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들어, Fc 영역 또는 모이어티는 IgG4 분자로부터의 CH1 도메인 및 CH2 도메인 및 IgG1 분자로부터의 CH3 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들어, Fc 영역 또는 모이어티는 항체의 특정 하위종류로부터의 CH2 도메인의 부분, 예를 들어 CH2 도메인의 EU 292번 내지 340번 위치를 포함할 수 있다. 예를 들어, Fc 영역 또는 모이어티는 IgG4 모이어티로부터 유래된 CH2의 292번 내지 340번 위치 아미노산 및 IgG1 모이어티로부터 유래된 CH2의 나머지를 포함할 수 있다(대안적으로, CH2의 292번 내지 340번은 IgG1 모이어티 및 IgG4 모이어티로부터 유래된 CH2의 나머지로부터 유래될 수 있음).

본 발명의 임의의 항체, 항원 결합 단편, 또는 Fc 영역 또는 모이어티가 임의의 알로타이프 및/또는 일배체형일 수 있다고 또한 이해될 것이다. 예를 들어, 인간 면역글로불린 G 알로타이프는 문헌[Jefferis and LeFranc, mAbs 1(4):1-7 (2009)]에 개시된 것을 포함하고, 알로타이프(G1m (1(a); 2(x); 3(f); 및 17(z)); G2m (23(n)); G3m (21(g1); 28(g5); 11(b0); 5(b2); 13(b3); 14(b4); 10(b5); 15(s); 16(t); 6(c3); 24(c5); 26(u); 및 27(v)); A2m (1 및 2); 및 Km (1; 2; 및 3)을 포함) 및 일배체형, 및 생성된 아미노산 서열, 및 이들의 조합은 본원에 참고로 포함된다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 항체, 항원 결합 단편, 또는 Fc 영역 또는 모이어티는 IgG1 알로타이프 g1m17, k1을 포함한다.

게다가, Fc 영역 또는 모이어티는 (추가적으로 또는 대안적으로) 예를 들어 키메라 힌지 영역을 포함할 수 있다. 예를 들어, 키메라 힌지는 예를 들어 부분적으로 IgG1, IgG2 또는 IgG4 분자(예를 들어, 상부 및 하부 중간 힌지 서열) 및 부분적으로 IgG3 분자(예를 들어, 중간 힌지 서열)로부터 유래될 수 있다. 다른 예에서, Fc 영역 또는 모이어티는 부분적으로 IgG1 분자 및 부분적으로 IgG4 분자로부터 유래된 키메라 힌지를 포함할 수 있다. 다른 예에서, 키메라 힌지는 IgG4 분자로부터의 상부 힌지 도메인 및 하부 힌지 도메인 및 IgG1 분자로부터의 중간 힌지 도메인을 포함할 수 있다. IgG4 힌지 영역의 중간 힌지 도메인에서 EU 228번 위치에서 예를 들어 프롤린 치환(Ser228Pro)을 도입함으로써 이러한 키메라 힌지가 제조될 수 있다. 다른 실시형태에서, 키메라 힌지는 IgG2 항체로부터의 EU 233번 내지 236번 위치에서의 아미노산 및/또는 Ser228Pro 돌연변이을 포함할 수 있고, 힌지의 남은 아미노산은 IgG4 항체(예를 들어, 서열 ESKYGPPCPPCPAPPVAGP의 키메라 힌지) 유래이다. 본 발명에 따른 항체의 Fc 모이어티에 사용될 수 있는 추가의 키메라 힌지는 US 제2005/0163783호 A1에 기재되어 있다.

본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 일부 실시형태에서, Fc 모이어티 또는 Fc 영역은 인간 면역글로불린 서열로부터(예를 들어, 인간 IgG 분자로부터의 Fc 영역 또는 Fc 모이어티로부터) 유래된 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 그러나, 폴리펩타이드는 다른 포유동물 종으로부터의 하나 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들어, 영장류 Fc 모이어티 또는 영장류 결합 부위는 해당 폴리펩타이드에 포함될 수 있다. 대안적으로, 하나 이상의 쥣과 아미노산은 Fc 모이어티 또는 Fc 영역에 존재할 수 있다.

핵산 분자

다른 양태에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 분자를 제공하다.

표 4는 본 발명에 따른 예시적인 VH, VL, CH, CL, HC 및 LC 암호화 뉴클레오타이드 서열을 보여준다:

유전 코드의 중복으로 인해, 본 발명은 또한 이 핵산 서열의 서열 변이체 및 특히 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 이러한 서열 변이체를 포함한다.

소정의 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산 분자는 서열번호 103 내지 서열번호 110 및 서열번호 130 내지 서열번호 136 중 어느 하나에 따른 뉴클레오타이드 서열과 적어도 80%의 동일성을 공유하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 뉴클레오타이드 서열은 숙주 세포에 의한 발현에 코돈 최적화된다.

특정 실시형태에서, 본 발명에 따른 핵산 분자는 서열번호 103 내지 서열번호 110 및 서열번호 130 내지 서열번호 136 중 어느 하나에 따른 핵산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다.

소정의 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 103에 따른 V_H 암호화 뉴클레오타이드 서열 및 서열번호 105에 따른 V_L 암호화 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 다른 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 103에 따른 V_H 암호화 뉴클레오타이드 서열 및 서열번호 104에 따른 V_L 암호화 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 다른 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 108에 따른 V_H 암호화 뉴클레오타이드 서열 및 서열번호 109에 따른 V_L 암호화 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

본원에는 또한 항체 또는 항원 결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 제공되고, 여기서 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 103에 따른 V_H 암호화 뉴클레오타이드 서열 및 서열번호 110에 따른 V_L 암호화 뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 이들로 이루어지고, 암호화된 항체 또는 항원 결합 단편은 HBsAg의 항원 루프 영역에 결합하고, B형 간염 바이러스 및 델타 간염 바이러스에 의한 감염을 중화한다.

임의의 현재 개시된 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 130에 따른 CH1-힌지-CH2-CH3 암호화 뉴클레오타이드 서열을 포함하고/하거나 서열번호 131에 따른 HC (VH-CH1-힌지-CH3-CH3) 암호화 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 132에 따른 CL 암호화 뉴클레오타이드 서열을 포함하고/하거나, 서열번호 133에 따른 LC (VL-CL) 암호화 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 다른 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 134에 따른 CL 암호화 뉴클레오타이드 서열을 포함하고/하거나 서열번호 135 또는 서열번호 136에 따른 LC (VL-CL)-암호화 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

벡터

본 발명에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터, 예를 들어 발현 벡터가 본 발명의 범위 내에 추가로 포함된다.

"벡터"라는 용어는 핵산 분자를 포함하는 작제물을 지칭한다. 본 발명의 맥락에서 벡터는 원하는 핵산 서열을 혼입하거나 보유하기에 적합하다. 이러한 벡터는 저장 벡터, 발현 벡터, 클로닝 벡터, 운반 벡터 등일 수 있다. 저장 벡터는 핵산 분자의 편리한 저장이 가능하게 하는 벡터이다. 이와 같이, 벡터는 예를 들어 본 설명에 따른 원하는 항체 또는 이의 항체 단편에 상응하는 서열을 포함할 수 있다.

본원에 사용된 것과 같이, "발현 벡터"는 적합한 숙주에서 핵산 분자의 발현을 가져올 수 있는 적합한 제어 서열에 작동 가능하게 연결된 핵산 분자를 함유하는 DNA 작제물을 지칭한다. 이러한 제어 서열은 전사를 가져오기 위한 프로모터(예를 들어, 이종성 프로모터), 이러한 전사를 제어하기 위한 선택적인 오퍼레이터 서열, 적합한 mRNA 리보솜 결합 부위를 암호화하는 서열 및 전사 및 번역의 종결을 제어하는 서열을 포함한다. 관심 있는 핵산 분자의 전사에 기여하는 발현 벡터의 임의의 요소는 벡터에 이종성일 수 있다. 벡터는 플라스미드, 파지 입자, 바이러스, 또는 단순히 가능한 게놈 인서트일 수 있다. 벡터는 적합한 숙주로 형질전환되면 숙주 게놈과 독립적으로 복제하고 기능할 수 있거나, 일부 경우에 게놈 자체로 통합할 수 있다. 본 명세서에서, "플라스미드", "발현 플라스미드", "바이러스" 및 "벡터"는 대개 상호교환 가능하게 사용된다.

클로닝 벡터는 통상적으로 벡터로 핵산 서열을 혼입하도록 사용될 수 있는 클로닝 부위를 함유하는 벡터이다. 클로닝 벡터는 예를 들어 플라스미드 벡터 또는 박테리오파지 벡터일 수 있다.

운반 벡터는 핵산 분자를 세포 또는 유기체, 예를 들어 바이러스 벡터로 운반하기에 적합한 벡터일 수 있다. 본 발명의 맥락에서 벡터는 예를 들어 RNA 벡터 또는 DNA 벡터일 수 있다. 벡터는 DNA 분자일 수 있다. 예를 들어, 본 출원의 의미에서 벡터는 클로닝 부위, 선택 마커, 예컨대 항생제 내성 인자, 및 벡터의 다중화에 적합한 서열, 예컨대 복제 기원을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 출원의 맥락에서 벡터는 플라스미드 벡터이다. 소정의 이러한 실시형태에서, 벡터는 렌티바이러스 벡터 또는 레트로바이러스 벡터를 포함한다.

세포

추가의 양태에서, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체, 항원 결합 단편 또는 융합 단백질을 발현하거나; 본 발명에 따른 벡터 또는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 세포("숙주 세포"라고도 칭함)를 제공한다.

이러한 세포의 예는 진핵 세포, 예를 들어 효모 세포, 동물 세포, 곤충 세포, 식물 세포; 및 이 콜라이를 포함하는 원핵 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 일부 실시형태에서, 세포는 포유동물 세포이다. 소정의 이러한 실시형태에서, 세포는 포유동물 세포주, 예컨대 CHO 세포(예를 들어, DHFR- CHO 세포(Urlaub et al., PNAS 77:4216 (1980)), 인간 배아 신장 세포(예를 들어, HEK293T 세포), PER.C6 세포, Y0 세포, Sp2/0 세포이다. NS0 세포, 인간 간 세포, 예를 들어 Hepa RG 세포, 골수종 세포 또는 하이브리도마 세포. 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 마우스 세르톨리 세포(예를 들어, TM4 세포); SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 계통(COS-7); 베이비 햄스터 신장 세포(BHK: baby hamster kidney cell); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76); 원숭이 신장 세포(CV1: monkey kidney cell); 인간 자궁경부 암종 세포(HELA); 인간 폐 세포(W138); 인간 간 세포(Hep G2); 개과 신장 세포(MDCK; 버팔로 래트 간 세포(BRL 3A); 마우스 유방 종양(MMT 060562); TRI 세포;　MRC　5 세포; 및 FS4 세포를 포함한다. 항체 제조에 적합한 포유동물 숙주 세포주는 또한 예를 들어 문헌[Yazaki and Wu,　Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J.), pp. 255-268 (2003)]에 기재된 것을 포함한다.

소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 이. 콜라이와 같은 원핵 세포이다. 이. 콜라이와 같은 원핵 세포에서의 펩타이드의 발현은 잘 확립되어 있다(예를 들어, 문헌[Pluckthun, A. Bio/Technology 9:545-551 (1991)] 참조). 예를 들어, 특히 글리코실화 및 Fc 효과기 기능이 필요하지 않을 때 박테리아에서 항체가 제조될 수 있다. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩타이드의 발현을 위해, 예를 들어 미국 특허 제5,648,237호; 제5,789,199호; 및 제5,840,523호를 참조한다.

본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현하는 유용한 곤충 세포는 당해 분야에 공지되어 있고, 예를 들어 스포돕테라 프루기페라(Spodoptera frugipera) Sf9 세포, 트리초플루시아 니(Trichoplusia ni) BTI-TN5B1-4 세포 및 스포돕테라 프루기페라 SfSWT01 "Mimic^TM" 세포를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Palmberger et al., J. Biotechnol. 153(3-4):160-166 (2011)]을 참조한다. 특히 스포돕테라 프루지페르다 세포의 형질주입을 위해 곤충 세포와 함께 사용될 수 있는 많은 바큘로바이러스 균주가 확인되었다.

진핵 미생물, 예컨대 사상성 진균 또는 효모는 또한 단백질 암호화 벡터를 클로닝 또는 발현하기에 적합한 숙주이고, "인간화된" 글리코실화 경로를 갖는 진균 및 효묘 균주를 포함하여서, 부분적으로 또는 완전히 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체를 생성시킨다. 문헌[Gerngross,　Nat. Biotech.　22:1409-1414 (2004); Li et al.,　Nat. Biotech.　24:210-215 (2006)]을 참조한다.

식물 세포는 또한 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현하기 위한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들어, (예를 들어 미국 특허 제5,959,177호; 제6,040,498호; 제6,420,548호; 제7,125,978호; 및 제6,417,429호에 기재된) PLANTIBODIES™ 기술은 항체를 제조하기 위해 형질전환 식물을 사용한다.

본 발명에 적합한 임의의 단백질 발현 시스템은 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하기 위해 사용될 수 있다. 적합한 발현 시스템은 문헌[Gene Expression Systems, Academic Press, eds. Fernandez et al., 1999]에 기재된 형질전환 동물을 포함한다.

특정 실시형태에서, 세포는 발현 벡터에 의해 본 설명에 따른 벡터에 의해 형질주입될 수 있다. "형질주입"이라는 용어는 진핵 세포와 같은 세포로의 핵산 분자, 예컨대 DNA 또는 RNA(예를 들어 mRNA) 분자의 도입을 지칭한다. 본 설명의 맥락에서, "형질주입"이라는 용어는 세포, 예컨대 포유동물 세포를 포함하는 진핵 세포로 핵산 분자를 도입하기 위해 당업자에게 공지된 임의의 방법을 포함한다. 이러한 방법은 예를 들어 전기천공, 예를 들어 양이온성 지질 및/또는 리포솜에 기초한 리포펙션, 인산칼슘 침전, 나노입자 기반 형질주입, 바이러스 기반 형질주입, 또는 양이온성 중합체, 예컨대 DEAE-덱스트란 또는 폴리에틸렌이민 등에 기초한 형질주입을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 도입은 비바이러스성이다.

게다가, 본 발명의 세포는 본 설명에 따라 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현하기 위한 본 설명에 따른 벡터로 안정하게 또는 일시적으로 형질주입될 수 있다. 이러한 실시형태에서, 세포는 결합 단백질을 암호화하는 본원에 기재된 것과 같은 벡터에 의해 안정하게 형질주입된다. 대안적으로, 세포는 본 설명에 따라 결합 단백질을 암호화하는 본 발명에 따른 벡터에 의해 일시적으로 형질주입될 수 있다. 임의의 현재 개시된 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드는 숙주 세포에 이종성일 수 있다.

관련 양태에서, 본 발명은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하기에 충분한 조건 하에 그리고 그러한 시간 동안 본 발명의 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함한다.

따라서, 본 발명은 또한 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 이종성으로 발현하는 재조합 숙주 세포를 제공한다. 예를 들어, 세포는 완전히 또는 부분적으로 항체가 얻어지는 종에 상이한 종일 수 있다(예를 들어, 인간 항체 또는 조작된 인간 항체를 발현하는 CHO 세포). 일부 실시형태에서, 숙주 세포의 세포 유형은 자연에서 항체 또는 항원 결합 단편을 발현하지 않는다. 게다가, 숙주 세포는 항체 또는 항원 결합 단편의 자연적 상태로(또는 항체 또는 항원 결합 단편이 조작되거나 유래된 모 항체의 자연적 상태로) 존재하지 않는 항체 또는 항원 결합 단편에서 번역후 변형(PTM; 예를 들어 글리코실화 또는 푸코실화)을 부여할 수 있다. 이러한 PTM은 기능적 차이(예를 들어, 감소된 면역원성)를 야기할 수 있다. 따라서, 본원에 개시된 것과 같은 숙주 세포에 의해 제조된 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 이의 자연적 상태에서 항체(또는 모 항체)와 구별되는 하나 이상의 번역후 변형을 포함할 수 있고, 예를 들어 CHO 세포에 의해 제조된 인간 항체는 인간으로부터 단리되고/되거나 자연적 인간 B 세포 또는 혈장 세포에 의해 제조될 때 항체와 구별되는 더 많은 번역후 변형을 포함할 수 있다.

항체 또는 항원 결합 단편의 선택적인 추가 특징

본 발명의 항체 및 항원 결합 단편은 예를 들어 치료 부위에 전달하기 위한 약물에 커플링되거나 관심 있는 세포를 포함하는 부위의 영상화를 용이하게 하기 위한 검출 가능한 라벨에 커플링될 수 있다.약물 및 검출 가능한 라벨에 항체를 커플링하기 위한 방법은 검출 가능한 라벨을 사용하여 영상화하는 방법에서와 같이 당해 분야에 널리 널리 공지되어 있다. 표지된 항체는 매우 다양한 라벨을 사용하여 매우 다양한 검정에 사용될 수 있다. HBsAg, 특히 HBsAg의 항원 루프 영역에 본 발명의 항체(또는 항원 결합 단편 또는 융합 단백질)와 관심 있는 에피토프 사이의 항체-항원 복합체의 형성의 검출은 검출 가능한 물질을 항체에 부착함으로써 용이해질 수 있다. 적합한 검출 수단은 라벨, 예컨대 방사성핵종, 효소, 조효소, 형광물질, 화학발광물질, 색소원, 효소 기질 또는 보인자, 효소 억제제, 보결분자단 복합체, 유리 라디칼, 입자, 염료 등의 사용을 포함한다. 적합한 효소의 예는 겨자무과산화효소, 알칼리 포스파타제, β-갈락토시다아제 또는 아세틸콜린에스터라제를 포함하고; 적합한 보결분자단 복합체의 예는 스트렙타비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴을 포함하고; 적합한 형광 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린을 포함하고; 발광 물질의 예는 루미놀이고; 생물발광 물질의 예는 루시퍼라제, 루시페린 및 에쿠오린을 포함하고; 적합한 방사성 재료의 예는 125I, 131I, 35S 또는 3H를 포함한다. 이러한 표지된 시약은 다양한 잘 공지된 검정, 예컨대 방사면역검정, 효소 면역검정, 예를 들어 ELISA, 형광 면역검정 등에 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 표지된 항체 및 항원 결합 단편은 이와 같이 예를 들어 US 제3,766,162호; US 제3,791,932호; US 제3,817,837호; 및 US 제4,233,402호에 기재된 것과 같은 검정에서 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 세포독소, 치료제, 또는 방사성 금속 이온 또는 방사성동위원소와 같은 치료학적 모이어티에 접합될 수 있다. 방사성동위원소의 예는 I-131, I-123, I-125, Y-90, Re-188, Re-186, At-211, Cu-67, Bi-212, Bi-213, Pd-109, Tc-99, In-111 등을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 이러한 항체 접합체는 주어진 생물학적 반응을 변형시키기 위해 사용될 수 있고; 약물 모이어티는 전통적인 화학 치료제로 제한되는 것으로 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 약물 모이어티는 원하는 생물학적 활성을 보유하는 단백질 또는 폴리펩타이드일 수 있다. 이러한 단백질은 예를 들어 독소, 예컨대 아브린, 리신 A, 슈도모나스 외독소 또는 디프테리아 독소를 포함할 수 있다.

이러한 치료학적 모이어티를 항체에 접합하기 위한 기술은 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, ed. Reisfeld et al. (Alan R. Liss, Inc.), pp. 243-256에서 Arnon et al. (1985) "Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy"; Controlled Drug Delivery, ed. Robinson et al. (2d ed; Marcel Dekker, Inc.), pp. 623-653에서 ed. Hellstrom et al. (1987) "Antibodies for Drug Delivery"; Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications, ed. Pinchera et al. pp. 475-506 (Editrice Kurtis, Milano, Italy, 1985)에서 Thorpe (1985) "Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review"; Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, ed. Baldwin et al. (Academic Press, New York, 1985), pp. 303-316에서 "Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy"; 및 Thorpe et al. (1982) Immunol. Rev. 62:119-158]을 참조한다.

대안적으로, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 US 제4,676,980호에 기재된 것과 같은 이종접합체를 형성하기 위해 제2 항체, 또는 이의 항체 단편(또는 제2 융합 단백질)에 접합될 수 있다. 게다가, 링커는 예를 들어 US 제4,831,175호에 기재된 것과 같은 설명의 라벨과 항체 사이에 사용될 수 있다. 항체, 항원 결합 단편 및 융합 단백질은 예를 들어 US 제5,595,721호에 기재된 것과 같이 당해 분야에 공지된 방사성 요오드, 인듐, 이트륨 또는 다른 방사성 입자에 의해 직접 표지될 수 있다. 치료는 예를 들어 WO 제00/52031호; WO 제00/52473호에 기재된 것과 같이 동시에 또는 순차적으로 투여된 접합된 및 비접합된 항체 및/또는 항원 결합 단편에 의한 치료의 조합으로 이루어질 수 있다.

본원에 기재된 것과 같은 항체 및 항원 결합 단편은 또한 고체 지지체에 부착될 수 있다. 추가적으로, 본 발명의 항체 또는 이의 기능적 항체 단편은 예를 들어 이의 순환 반감기를 증가시키기 위해 중합체에 대한 공유 접합에 의해 화학적으로 변형될 수 있다. 중합체 및 이것을 펩타이드에 부착하는 방법의 예는 US 제4,766,106호; US 제4,179,337호; US 제4,495,285호 및 US 제4,609,546호에 기재되어 있다. 일부 실시형태에서, 중합체는 폴리옥시에틸화 폴리올 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG)로부터 선택될 수 있다. PEG는 실온에서 물에 가용성이고, 일반 식: R(O-CH₂-CH₂)_nO-R(여기서 R은 수소, 또는 보호 기, 예컨대 알킬 또는 알칸올 기일 수 있음)을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 보호기는 1개 내지 8개의 탄소를 가질 수 있다. 예를 들어, 보호기는 메틸일 수 있다. 기호 n은 양의 정수이다. 일 실시형태에서, n은 1 내지 1,000이다. 다른 실시형태에서, n은 2 내지 500이다. 일부 실시형태에서, PEG는 1,000 내지 40,000, 2,000 내지 20,000, 및 3,000 내지 12,000으로부터 선택된 평균 분자량을 갖는다. 더욱이, PEG는 적어도 하나의 하이드록시 기를 가질 수 있고, 예를 들어 PEG는 말단 하이드록시 기를 가질 수 있다. 예를 들어, 이것은 억제제에서 유리 아미노 기와 반응하도록 활성화된 말단 하이드록시 기이다. 그러나, 본 설명의 공유로 접합된 PEG/항체를 달성하기 위해 반응성 기의 유형 및 양이 변할 수 있는 것으로 이해될 것이다.

수용성 폴리옥시에틸화 폴리올은 또한 본원에 기재된 항체 및 항원 결합 단편의 맥락에서 사용될 수 있다. 이것은 폴리옥시에틸화 소르비톨, 폴리옥시에틸화 글루코스, 폴리옥시에틸화 글리세롤(POG) 및 기타를 포함한다. 일 실시형태에서, POG가 사용된다. 임의의 이론에 의해 구속되지 않으면서, 폴리옥시에틸화 글리세롤의 글리세롤 골격이 모노글리세라이드, 디글리세라이드, 트리글리세라이드에서 예를 들어 동물 및 인간에서 자연 발생하는 동일한 골격이므로, 이 분지는 신체에서 외래 물질로서 반드시 보이지는 않을 것이다. POG는 PEG와 동일한 범위에서의 분자량을 가질 수 있다. 순환 반감기를 증가시키기 위해 사용될 수 있는 다른 약물 전달 시스템은 리포솜이다. 리포솜 전달 시스템을 제조하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 다른 약물 전달 시스템은 당해 분야에 공지되어 있고 기재되어 있고, 예를 들어 문헌[Poznansky et al. (1980) and Poznansky　(1984)]에 참조된다.

통상적으로, 항체 또는 항원 결합 단편은 다른 폴리펩타이드가 실질적으로 없는 조성물에 존재할 것이고, 예를 들어 조성물의 90%(중량 기준) 미만, 보통 60% 미만 및 더 보통 50% 미만이 다른 폴리펩타이드로 이루어진다.

본 발명의 항체, 또는 항원 결합 단편은 비인간(또는 이종성) 숙주, 예를 들어 마우스에서 면역원성일 수 있다. 특히, 항체, 항원 결합 단편 또는 융합 단백질은 인간 숙주에서가 아니라 비인간 숙주에서 면역원성인 이디오토프를 가질 수 있다. 특히, 인간 사용을 위한 본 발명의 이러한 분자는 마우스, 염소, 토끼, 래트, 비영장류 포유동물 등과 같은 숙주로부터 쉽게 단리될 수 없고 일반적으로 인간화에 의해 또는 제노-마우스로부터 얻어질 수 없는 것을 포함한다.

항체, 항원 결합 단편 및 융합 단백질의 제조

본 발명에 따른 항체 및 항원 결합 단편은 당해 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 하이브리도마 기술을 사용하여 단일클론 항체를 제조하기 위한 일반 방법론이 잘 공지되어 있다(Kohler, G. and Milstein, C., 1975; Kozbar et al. 1983). 일 실시형태에서, WO 제2004/076677호에 기재된 대안적인 EBV 불활화 방법이 사용된다.

일 실시형태에서, 항체는 WO 제2004/076677호에 기재된 방법을 사용하여 제조된다. 이러한 방법에서, 항체를 생성하는 B 세포는 EBV 및 다중클론 B 세포 활성자에 의해 형질전환된다. 세포 성장 및 분화의 추가 자극제는 선택적으로 효율을 추가로 향상시키기 위해 형질전환 단계 동안 첨가될 수 있다. 이 자극제는 IL-2 및 IL-15와 같은 사이토카인일 수 있다. 일 양태에서, IL-2는 불활화의 효율을 추가로 개선하기 위해 불활화 단계 동안 첨가되지만 이의 사용은 필수적이 아니다. 이후, 이들 방법을 사용하여 제조된 불활화된 B 세포는 당해 분야에 공지된 방법 및 이로부터 단리된 항체를 사용하여 배양될 수 있다.

항체를 제조하기 위한 다른 방법은 WO 제2010/046775호에 기재되어 있다. 이러한 방법에서, 혈장 세포는 제한된 수로, 또는 마이크로웰 배양 플레이트에서 단일 혈장 세포로서 배양된다. 항체는 혈장 세포 배양물로부터 단리될 수 있다. 추가로, 혈장 세포 배양물로부터, RNA는 추출될 수 있고, PCR은 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 항체의 VH 영역 및 VL 영역은 RT-PCR(역전사효소 PCR)에 의해 증폭되고, 시퀀싱되고, 발현 벡터로 클로닝될 수 있고, 이것은 이후 HEK293T 세포 또는 다른 숙주 세포로 형질주입된다. 발현 벡터에서의 핵산의 클로닝, 숙주 세포의 형질주입, 형질주입된 숙주 세포의 배양 및 제조된 항체의 단리는 당업자에게 공지된 임의의 방법을 사용하여 수행될 수 있다.

항체는, 원하면, 여과, 원심분리 및 다양한 크로마토그래피 방법, 예컨대 HPLC 또는 친화성 크로마토그래피를 사용하여 추가로 정제될 수 있다. 약제학적 등급 항체를 제조하기 위한 기법을 포함하는 항체, 예를 들어 단일클론 항체의 정제를 위한 기법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다.

분자 생물학의 표준 기법은 본 설명의 항체, 항체 단편 또는 융합 단백질을 암호화하는 DNA 서열을 제조하기 위해 사용될 수 있다. 원하는 DNA 서열은 완전히 또는 부분적으로 올리고뉴클레오타이드 합성 기법을 사용하여 합성될 수 있다. 부위 지정 돌연변이유발 및 중합효소 연쇄 반응(PCR) 기법은 적절한 바대로 사용될 수 있다.

임의의 적합한 숙주 세포/벡터 시스템은 본 발명의 항체 또는 융합 단백질 분자 또는 이의 단편을 암호화하는 DNA 서열의 발현에 사용될 수 있다. 박테리아, 예를 들어 이. 콜라이 및 다른 미생물 시스템은 부분적으로 항체 단편, 예컨대 Fab 및 F(ab')2 단편, 및 특히 Fv 단편 및 단일 사슬 항체 단편, 예를 들어 단일 사슬 Fv의 발현에 사용될 수 있다. 진핵, 예를 들어 포유동물, 숙주 세포 발현 시스템은 완전한 항체 분자를 포함하는 더 큰 항체 분자의 제조에 사용될 수 있다. 적합한 포유동물 숙주 세포는 CHO, HEK293T, PER.C6, NS0, 골수종 또는 하이브리도마 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.

본 발명은 또한 본 설명의 항체 분자를 암호화하는 DNA로부터의 단백질의 발현에 적합한 조건 하에 본 발명의 핵산을 암호화하는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계 및 항체 분자를 단리하는 단계를 포함하는 본 발명에 따른 항체 또는 항원 결합 단편을 제조하기 위한 공정을 제공한다.

항체 분자 또는 항체 단편은 오직 중쇄 또는 경쇄 폴리펩타이드를 포함할 수 있고, 이 경우에 오직 중쇄 또는 경쇄 폴리펩타이드 코딩 서열은 숙주 세포를 형질주입하도록 사용될 필요가 있다.중쇄 및 경쇄 둘 다를 포함하는 산물의 제조를 위해, 세포주는 경쇄 폴리펩타이드를 암호화하는 제1 벡터 및 중쇄 폴리펩타이드를 암호화하는 제2 벡터인 2개의 벡터에 의해 형질주입될 수 있다. 대안적으로, 단일 벡터가 사용될 수 있고, 벡터는 경쇄 폴리펩타이드 및 중쇄 폴리펩타이드를 암호화하는 서열을 포함한다.

대안적으로, 본 발명에 따른 항체 및 항원 결합 단편은 (i) 예를 들어 본 설명에 따른 벡터의 사용에 의해 숙주 세포에서 본 발명에 따른 핵산 서열을 발현하는 것, 및 (ii) 발현된 원하는 산물을 단리하는 것에 의해 제조될 수 있다. 추가적으로, 상기 방법은 (iii) 단리된 항체 또는 항원 결합 단편을 정제하는 것을 포함할 수 있다. 형질전환된 B 세포 및 배양된 혈장 세포는 원하는 특이성 또는 기능의 항체 및 항원 결합 단편을 제조하는 것에 대해 스크리닝될 수 있다.

스크리닝은 임의의 면역검정, 예를 들어 ELISA에 의해, 조직 또는 세포(형질주입된 세포를 포함)의 염색에 의해, 중화 검정에 의해 또는 원하는 특이성 또는 기능을 확인하기 위해 당해 분야에 공지된 다수의 다른 방법 중 하나에 의해 수행될 수 있다. 검정은 하나 이상의 항원의 단순한 인식에 기초하여 선택할 수 있거나, 예를 들어 단지 항원 결합 항체보다 중화 항체를 선택하기 위해, 표적화된 세포의 특징, 예컨대 이의 신호전달 캐스케이드, 이의 형상, 이의 성장 속도, 다른 세포에 영향을 미치는 이의 능력, 다른 세포에 의한 또는 다른 시약에 의한 또는 조건, 이의 분화 상태 또는 기타의 변화에 의한 영향에 대한 이의 반응을 변경할 수 있는 항체를 선택하기 위해 원하는 기능의 추가 기준에 대해 선택할 수 있다.

이후, 개별 형질전환된 B 세포 클론은 양성 형질전환된 B 세포 배양물로부터 제조될 수 있다. 양성 세포의 혼합물로부터 개별 클론을 분리하기 위한 클로닝 단계는 제한 희석, 마이크로조작, 세포 분류에 의한 단일 세포 침착 또는 당해 분야에 공지된 다른 방법을 사용하여 수행될 수 있다.

배양된 혈장 세포로부터의 핵산은 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 단리되고, 클로닝되고 HEK293T 세포 또는 다른 공지된 숙주 세포에서 발현될 수 있다.

본원에 기재된 불활화된 B 세포 클론 또는 형질주입된 숙주 세포는 예를 들어 단일클론 항체의 원천으로서, 조사를 위해 관심 단일클론 항체를 암호화하는 핵산(DNA 또는 mRNA)의 원천 등으로서 다양한 방식으로 사용될 수 있다.

약제학적 조성물

본 발명은 B형 간염 바이러스를 중화하는 항체 및 약제학적으로 허용 가능한, 수성 비히클을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 비히클은 통상적으로 화합물, 예컨대 약제학적으로 활성 화합물, 특히 본 발명에 따른 항체를 저장, 수송하고/하거나 제형화하고/하거나 투여하기에 적합한 재료인 것으로 이해된다. 예를 들어, 비히클은 약제학적 활성 화합물, 특히 본 발명에 따른 항체를 저장하고/하거나 수송하고/하거나 투여하기에 적합한 생리학적으로 허용 가능한 액체일 수 있다.

본원에 기재된 약제학적 조성물은 환자에 대한 주사 또는 점적에 준비된다. 일부 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내("IV" 또는 "i.v."), 동맥내 또는 심실내 점적에 준비될 수 있다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내, 동맥내, 심실내, 골수내, 복강내, 척추강내, 심실내 또는 주사에 준비될 수 있다. 특정 실시형태에서, 상기 조성물은 피하("SC" 또는 "s.c.") 주사에 준비된다. 구체적인 실시형태에서, 본원에 기재된 조성물은 인간 대상체에 대한 투여를 위해 적합한 pH, 등장성 및 안정성을 나타내는 약제학적으로 허용 가능한, 멸균 수성 용액이다. 본원에 기재된 조성물의 제형에 적합한 수성 비히클은 물(예를 들어, 멸균수, 주사를 위한 USP 물)뿐만 아니라 등장성 비히클, 예컨대 염화나트륨 주사, 링거 주사, 젖산 링거 주사를 포함한다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 본 설명에 따른 HBV 중화 항체로부터 선택된 항체를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 본 설명에 따른 약제학적 조성물은 (i) 서열번호 41에 따른 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 (ii) 서열번호 59, 서열번호 89 또는 서열번호 90 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 (단리된) 항체를 포함하고, 단 IMGT 넘버링에 따른 VL의 40번 위치에서의 아미노산은 시스테인이 아니고, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 HBsAg의 항원 루프 영역에 결합하고, B형 간염 바이러스 및 델타 간염 바이러스에 의한 감염을 중화한다.

소정의 실시형태에서: (i) VH는 서열번호 41에 따른 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 포함하고/하거나; (ii) VL은 서열번호 59, 서열번호 89 또는 서열번호 90 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 포함한다.

소정의 실시형태에서, VL의 40번 위치에서의 아미노산은 알라닌이다. 소정의 실시형태에서, VL의 40번 위치에서의 아미노산은 세린이다. 소정의 실시형태에서, VL의 40번 위치에서의 아미노산은 글리신이다.

소정의 실시형태에서, 항체는 (i) 각각 서열번호 34 내지 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 및 서열번호 40; (ii) 각각 서열번호 34, 서열번호 66, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 및 서열번호 40; (iii) 각각 서열번호 34 내지 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 39 및 서열번호 40; (iv) 각각 서열번호 34, 서열번호 66, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 39 및 서열번호 40; (v) 각각 서열번호 34 내지 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 및 서열번호 58; (vi) 각각 서열번호 34, 서열번호 66, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 및 서열번호 58; (vii) 각각 서열번호 34 내지 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 39 및 서열번호 58; 또는 (viii) 각각 서열번호 34, 서열번호 66, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 39 및 서열번호 58에 따른 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 서열을 포함한다.

소정의 실시형태에서, VL은 서열번호 89에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다.

소정의 실시형태에서, VL은 서열번호 90에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다.

소정의 실시형태에서, VH는 서열번호 41에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다.

소정의 실시형태에서, VH는 서열번호 41에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, VL은 서열번호 89에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다.

소정의 실시형태에서, VH는 서열번호 41에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, VL은 서열번호 90에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다.

소정의 실시형태에서, 항체는 인간 항체 및/또는 단일클론 항체를 포함한다.

소정의 실시형태에서, 항체는 다중특이적 항체이다. 소정의 실시형태에서, 항체는 이중특이적 항체이다.

소정의 실시형태에서, 항체는 Fc 모이어티를 포함한다.

소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 돌연변이를 포함하지 않는 기준 Fc 모이어티와 비교하여 (예를 들어, 인간) FcRn에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이를 포함한다.

소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 돌연변이를 포함하지 않는 기준 Fc 모이어티와 비교하여 (예를 들어, 인간) FcγR(예를 들어, 예컨대 FcγRIIa, FcγRIIIa 또는 둘 다)에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이를 포함한다.

소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 IgG 아이소타입이거나 IgG 아이소타입으로부터 유래된다.

소정의 실시형태에서, FcRn에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 M428L; N434S; N434H; N434A; N434S; M252Y; S254T; T256E; T250Q; P257I; Q311I; D376V; T307A; E380A; 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다.

소정의 실시형태에서, FcRn에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 (i) M428L/N434S; (ii) M252Y/S254T/T256E; (iii) T250Q/M428L; (iv) P257I/Q311I; (v) P257I/N434H; (vi) D376V/N434H; (vii) T307A/E380A/N434A; 또는 (viii) (i) 내지 (vii)의 임의의 조합을 포함한다.

소정의 실시형태에서, FcRn에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 M428L/N434S를 포함한다.

소정의 실시형태에서, FcγR에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 S239D; I332E; A330L; G236A; 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다.

소정의 실시형태에서, FcγR에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 (i) S239D/I332E; (ii) S239D/A330L/I332E; (iii) G236A/S239D/I332E; 또는 (iv) G236A/A330L/I332E를 포함한다.

소정의 실시형태에서, FcγR에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 G236A/A330L/I332E를 포함하거나 이것으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, FcγR에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 S239D를 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, Fc 모이어티는 239번 위치에서 자연적 Ser(S)을 포함한다.

소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 M428L; N434S; G236A; A330L; 및 I332E의 아미노산 치환 돌연변이를 포함한다. 소정의 추가의 실시형태에서, Fc 모이어티는 추가의 돌연변이를 포함하지 않는다.

소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 91에 따른 중쇄(HC) 아미노산 서열을 포함한다.

소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 92에 따른 중쇄(HC) 아미노산 서열을 포함한다.

소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 93에 따른 경쇄(LC) 아미노산 서열을 포함한다.

소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 94에 따른 경쇄(LC) 아미노산 서열을 포함한다.

소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 91에 따른 HC 아미노산 서열 및 서열번호 93에 따른 LC 아미노산 서열을 포함한다.

소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 92에 따른 HC 아미노산 서열 및 서열번호 94에 따른 LC 아미노산 서열을 포함한다.

소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 91에 따른 HC 아미노산 서열 및 서열번호 94에 따른 LC 아미노산 서열을 포함한다.

소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 92에 따른 HC 아미노산 서열 및 서열번호 93에 따른 LC 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시형태에서, 본 설명에 따른 약제학적 조성물은 (i) 서열번호 91에 따른 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC); 및 (ii) 서열번호 93에 따른 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC)를 포함하는 (단리된) 항체를 포함하고, 항체는 HBsAg의 항원 루프 영역에 결합하고, B형 간염 바이러스 및 델타 간염 바이러스에 의한 감염을 중화한다.

일부 실시형태에서, 항체는 HBsAg 유전자형 A, B, C, D, E, F, G, H, I 및 J로부터 선택된 유전자형의 HBsAg, 또는 임의의 이들의 조합에 결합한다.

일부 실시형태에서, 항체 또는 약제학적 조성물은 HBV 감염을 갖는 포유동물에서 HBV DNA의 혈청 농도를 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 약제학적 조성물은 HBV 감염을 갖는 포유동물에서 HBsAg의 혈청 농도를 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 약제학적 조성물은 HBV 감염을 갖는 포유동물에서 HBeAg의 혈청 농도를 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 약제학적 조성물은 HBV 감염을 갖는 포유동물에서 HBcrAg의 혈청 농도를 감소시킨다.

일부 실시형태에서, 본 설명에 따른 약제학적 조성물은 서열번호 34에 따른 CDRH1 아미노산 서열, 서열번호 35 또는 서열번호 66에 따른 CDRH2 아미노산 서열, 서열번호 36에 따른 CDRH3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영(V_H); 및 서열번호 37에 따른 CDRL1 산 서열, 서열번호 38 또는 서열번호 39에 따른 CDRL2 산 서열, 및 서열번호 58 또는 40에 따른 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(V_L); 및 Fc 모이어티(여기서, Fc 모이어티는 G236A/A330L/I332E를 포함함)를 포함하는 항체를 포함한다.

소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 S239D를 포함하지 않는다. 소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 239번 위치에서 Ser(S)을 포함한다.

소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 M428L/N434S를 추가로 포함한다.

소정의 실시형태에서, V_H는 서열번호 41 또는 서열번호 67 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, V_L은 서열번호 42, 서열번호 59, 서열번호 65, 서열번호 89, 서열번호 90 및 서열번호 111 내지 서열번호 120 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다.

다른 실시형태에서, (i) 서열번호 97에 따른 CDRH1 아미노산 서열, 서열번호 98에 따른 CDRH2 아미노산 서열, 서열번호 99에 따른 CDRH3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(V_H); (ii) 서열번호 100에 따른 CDRL1 산 서열, 서열번호 100에 따른 CDRL2 산 서열 및 서열번호 102에 따른 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(V_L) ; 및 (iii) Fc 모이어티를 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물이 제공되고, Fc 모이어티는 G236A/A330L/I332E를 포함한다.

약제학적 조성물의 항체의 특정한 이러한 실시형태에서, V_H는 서열번호 95에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, V_L은 서열번호 96에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다.

소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 S239D를 포함하지 않는다. 소정의 실시형태에서, Fc 모이어티는 M428L/N434S를 추가로 포함한다.

일부 실시형태에서, 약제학적 조성물의 항체는 G236A/A330L/I332E를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함하는 기준 폴리펩타이드와 비교하여 인간 FcγRIIA, 인간 FcγRIIIa 또는 둘 다에 대한 향상된 결합을 갖고/갖거나(여기서, 인간 FcγRIIA는 선택적으로 H131 또는 R131이고/이거나, 인간 FcγRIIIA는 선택적으로 F158 또는 V158임); G236A/A330L/I332E를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함하는 기준 폴리펩타이드와 비교하여 인간 FcγRIIB에 대한 감소된 결합을 갖고/갖거나; 인간 FcγRIIB에 결합하지 않고/않거나; G236A/A330L/I332E를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함하는 기준 폴리펩타이드와 비교하여 인간 C1q에 대한 감소된 결합을 갖고/갖거나; 인간 C1q에 결합하지 않고/않거나; G236A/A330L/I332E를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함하는 기준 폴리펩타이드가 활성화하는 것보다 높은 정도로 FcγRIIA, 인간 FcγRIIIa 또는 둘 다를 활성화하고/하거나(여기서, 인간 FcγRIIA는 선택적으로 H131 또는 R131이고/이거나, 인간 FcγRIIIA는 선택적으로 F158 또는 V158임); 인간 FcγRIIB를 활성화하지 않고/않거나; G236A/A330L/I332E를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함하는 기준 폴리펩타이드가 활성화하는 것보다 높은 정도로 HBsAg의 존재 하에 인간 자연 살해(NK) 세포를 활성화한다.

약제학적 조성물은 환자에 대한 항체의 치료학적 유효량의 투여를 용이하게 하는 충분한 항체 재료를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 100 mg/mL, 110 mg/mL, 120 mg/mL, 130 mg/mL, 140 mg/mL, 150 mg/mL, 160 mg/mL, 170 mg/mL, 180 mg/mL, 190 mg/mL, 및 200 mg/mL로부터 선택된 농도로 포함된다. 다른 실시형태에서, 항체는 50 mg/mL 초과, 75 mg/mL 초과, 100 mg/mL 초과, 125 mg/mL 초과, 150 mg/mL 초과, 175 mg/mL 초과, 200 mg/mL 초과, 225 mg/mL 초과 및 250 mg/mL 초과로부터 선택된 농도로 조성물에 포함된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 50 mg/mL 내지 200 mg/mL의 범위, 75 mg/mL 내지 225 mg/mL의 범위 및 100 mg/mL 내지 200 mg/mL의 범위로부터 선택된 농도로 항체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 조성물은 125 mg/ml 내지 150 mg/ml의 범위의 농도로 항체를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 150 mg/mL의 농도로 항체를 포함한다.

본 설명에 따른 조성물은 완충액, 계면활성제 또는 삼중블록 공중합체, 염(예를 들어, 염화나트륨) 및 안정화제(예컨대, 당 알코올, 디사카라이드 또는 폴리사카라이드 안정화제, 및/또는 안정화 아미노산(예를 들어, 아르기닌 및/또는 글리신)) 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 게다가, 필요하거나 원해지는 경우, 본원에 기재된 조성물은 하나 이상의 항산화제(예를 들어, 아스코르브산, 메티오닌, 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA))를 추가적으로 포함하도록 제형화될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 주사 또는 점적에 또한 적합하면서 항체의 생존능력을 지속시키는 pH를 나타내거나 유지시킨다. 본원에 기재된 조성물은 일반적으로 약 5.5 내지 약 8.5의 범위의 pH를 갖는다. 소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약 5.5 내지 약 6.5의 범위, 예컨대 5.5 내지 6.5의 범위의 pH를 갖는다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 5.8 내지 6.2의 범위, 예를 들어 약 6.0의 pH를 갖는다. 소정의 실시형태에서, pH는 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4 또는 6.5일 수 있다. 일부 실시형태에서, 상기 조성물은 6 내지 8의 범위, 예를 들어 약 7의 pH를 갖는다. 소정의 이러한 실시형태에서, pH는 예를 들어 6과 같은 약 6일 수 있다.

상기 조성물은 원하는 pH를 달성하고 유지시키는 완충제를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 조성물에 사용하기에 적합한 완충액은 예를 들어 아세테이트, 시트레이트, 히스티딘, 숙시네이트, 포스페이트 및 하이드록시메틸아미노메탄(Tris) 완충액을 포함한다. 특정 실시형태에서, 상기 조성물은 히스티딘 완충액 및 포스페이트 완충액으로부터 선택된 완충액을 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 6의 pH를 나타내고, 히스티딘 완충액을 포함한다. 이러한 실시형태에서, 히스티딘은 10mM 내지 40mM(예를 들어, 10 mM, 15 mM, 20 mM, 25 mM, 30 mM, 35 mM 또는 40 mM)의 범위의 농도로 상기 조성물에 포함될 수 있다. 예를 들어, 구체적인 실시형태에서, 본 발명에 따른 조성물은 6의 pH를 나타내고, 10 mM, 15 mM, 20 mM, 25 mM, 30 mM, 35 mM 및 40 mM으로부터 선택된 농도에서의 히스티딘을 포함한다.

본원에 기재된 약제학적 조성물은 또한 계면활성제 또는 삼중블록 공중합체를 포함할 수 있다. 때때로 "세제"라고 칭하는 계면활성제는 하나 이상의 기능을 제공할 수 있다. 예를 들면, 수성 항체 용액에서, 계면활성제는 항체 기능을 보존하고/하거나, 항체 또는 다른 부형제의 용해를 돕고/돕거나, 미생물 성장을 제어하도록 일하도록 작용한다. 본원에 기재된 조성물에 사용될 수 있는 계면활성제는 예를 들어 폴리소르베이트 80(Tween 80), 폴리소르베이트 20(Tween 20)을 포함한다. 추가적으로 또는 대안적으로, 폴록사머 188과 같은 삼중블록 공중합체가 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 상기 조성물은 0.01% 내지 0.05% (w/v)의 범위의 농도에서의 계면활성제를 포함한다. 이러한 실시형태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 80(Tween 80), 폴리소르베이트 20(Tween 20) 및 폴록사머 188로부터 선택될 수 있다. 구체적인 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 0.01% 내지 0.05% (w/v)의 범위의 농도에서의 폴리소르베이트 80(Tween 80)을 포함한다. 다른 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 농도 0.02% (w/v)에서의 폴리소르베이트 80(Tween 80)을 포함한다.

본 발명에 따른 조성물이 당 알코올, 디사카라이드 또는 폴리사카라이드 안정화제를 포함하는 경우에, 안정화제는 예를 들어 만니톨, 소르비톨, 수크로스, 트레할로스 및 덱스트란 40으로부터 선택될 수 있다. 특정 실시형태에서, 안정화제는 디사카라이드이다. 소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 4.0% 내지 10% (w/v)로부터 선택된 농도에서의 디사카라이드를 포함한다. 소정의 이러한 실시형태에서, 디사카라이드는 수크로스이다. 다른 실시형태에서, 약제학적 조성물은 4.0%, 4.1%, 4.2%, 4.3%, 4.4%, 4.5%, 4.6%, 4.7%, 4.8%, 4.9%, 5.0%, 5.1%, 5.2%, 5.3%, 5.4%, 5.5%, 5.6%, 5.7%, 5.8%, 5.9%, 6.0%, 6.1%, 6.2%, 6.3%, 6.4%, 6.5%, 6.6%, 6.7%, 6.8%, 6.9%, 7.0%, 7.1%, 7.2%, 7.3%, 7.4%, 7.5%, 7.6%, 7.7%, 7.8%, 7.9%, 8.0%, 8.1%, 8.2%, 8.3%, 8.4%, 8.5%, 8.6%, 8.7%, 8.8%, 8.9%, 9.0%, 9.1%, 9.2%, 9.3%, 9.4%, 9.5%, 9.6%, 9.7%, 9.8%, 9.9% 또는 10.0% (w/v)로부터 선택된 농도에서의 수크로스를 포함하거나, 이들 값의 임의의 2개에 의해 결합되고 이를 포함하는 범위 내이다. 또 다른 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약 7%, 예컨대 7% (w/v)의 농도에서의 수크로스를 포함한다.

일부 실시형태에서, 상기 조성물은 포유동물, 예를 들어 인간 대상체에 대한 투여에 적응된다. 이러한 실시형태에서, 상기 조성물은 멸균이고, 발열원 비함유이도록 특별히 준비될 수 있다. 게다가, 상기 조성물은 인간과 관련하여 등장성일 수 있다.

본원에 기재된 조성물은 대상체에 대한 직접 투여(즉, 재구성 또는 혼합 단계 없이)를 위해 준비될 수 있거나, 이것은 환자에게 주사 또는 점적 전에 수성 비히클 중에 재구성되도록 동결건조된 재료로서 준비될 수 있다. 대상체에 대한 직접 투여를 위해, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 예를 들어 프리필드 주사기에서 또는 바이알, 예컨대 유리 바이알에서 제공될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 기밀 밀봉 용기에 공급된다. 일부 실시형태에서, 상기 조성물은 조합된 조성물이 대상체에 대한 투여 바로 전에 재구성되도록 설계된 키트 형태로 있을 수 있다. 예를 들어, 동결건조된 항체는 멸균수 또는 멸균 완충액을 갖는 키트 형태로 제공될 수 있다.

본 발명에 따른 방법 및 용도에서의 본 발명에 따른 약제학적 조성물의 투여는 단독으로 또는 B형 간염 바이러스 감염을 예방하고/하거나 치료하기 위해 유용할 수 있는 동시작용제(본원에서 추가 활성 성분"이라고도 칭함)와 조합되어 수행될 수 있다.

본 발명은 본 발명에 따른 약제학적 조성물의 투여를 포함하고, 여기서 이것은 B형 간염 바이러스 감염을 치료하고/하거나 예방하는 데 유용한 동시작용제 또는 다른 치료 섭생 전에, 동시에 또는 후에 대상체에게 투여된다. 상기 동시작용제와 병용되어 투여되는 상기 약제학적 조성물은 동일한 또는 상이한 조성물(들)에서 및 동일한 또는 상이한 투여 경로(들)에 의해 투여될 수 있다. 본원에 사용된 것과 같이, "병용 치료", "병용된 투여", "병용으로 투여된" 및 기타와 같은 표현은 병용된 약물 작용("병용으로" 투여되는)을 지칭한다. 이를 위해, 병용된 약물은 보통 동시에 및/또는 중첩 시간 윈도우 내에 작용 부위에 존재한다. 약물 둘 다의 효과가 상호작용할 수 있도록 약물의 하나로부터 생긴 효과가 여전히 진행 중이지만(약물 자체가 더 이상 검출 가능하게 존재할 수 없더라도), 다른 약물이 투여되는 것이 또한 가능할 수 있다. 그러나, 다른 약물 전에 길게 투여된 약물(예를 들어, 1개월 초과, 2개, 3개월 또는 초과의 개월 또는 1년)이 다른 약물이 투여될 때 검출 가능한 수준으로 더 이상 존재하지 않도록(또는 이의 효과는 진행 중이 아님) 이것은 통상적으로 "병용"으로 투여되는 것으로 여겨지지 않는다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 PD-1 억제제, 예를 들어 PD-1 특이적 항체 또는 이의 결합 단편, 예컨대 피딜리주맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, MEDI0680(이전에 AMP-514), AMP-224, BMS-936558, 또는 임의의 이들의 조합과 병용으로 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 PD-L1 특이적 항체 또는 이의 결합 단편, 예컨대 BMS-936559, 더발루맙(MEDI4736), 아테졸리주맙(RG7446), 아벨루맙(MSB0010718C), MPDL3280A, 또는 임의의 이들의 조합과 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 LAG3 억제제, 예컨대 LAG525, IMP321, IMP701, 9H12, BMS-986016, 또는 임의의 이들의 조합과 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 CTLA4의 억제제와 병용되어 사용된다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 CTLA4 특이적 항체 또는 이의 결합 단편, 예컨대 이필리무맙, 트레멜리무맙, CTLA4-Ig 융합 단백질(예를 들어, 아바타셉트, 벨라타셉트), 또는 임의의 이들의 조합과 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 B7-H3 특이적 항체 또는 이의 결합 단편, 예컨대 에노블리투주맙 (MGA271), 376.96, 또는 둘 다와 병용되어 투여된다. B7-H3 항체 결합 단편은 예를 들어 문헌[Dangaj et al., Cancer Res. 73:4820, 2013]에 기재된 것과 같은 scFv 또는 이의 융합 단백질뿐만 아니라 미국 특허 제9,574,000호 및 PCT 특허 공보 WO 제/201640724호 A1 및 WO 제2013/025779호 A1에 기재된 것일 수 있다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 CD244의 억제제와 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 BLTA, HVEM, CD160의 억제제, 또는 임의의 이들의 조합과 병용되어 사용된다. 항 CD-160 항체는 예를 들어 PCT 공보 WO 제2010/084158호에 기재되어 있다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 TIM3의 억제제와 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 Gal9의 억제제와 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 아데노신 신호전달의 억제제, 예컨대 디코이 아데노신 수용체와 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 A2aR의 억제제와 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 KIR의 억제제, 예컨대 리릴루맙(BMS-986015)과 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 억제 사이토카인(통상적으로, TGFβ 이외의 사이토카인) 또는 Treg 발생 또는 활성의 억제제와 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 IDO 억제제, 예컨대 레보-1-메틸 트립토판, 에파카도스타트(INCB024360; Liu et al., Blood 115:3520-30, 2010), 엡셀렌(Terentis et al. , Biochem. 49:591-600, 2010), 인독시모드, NLG919(Mautino et al., American Association for Cancer Research 104th Annual Meeting 2013; Apr 6-10, 2013), 1-메틸-트립토판(1-MT)-티라-파자민, 또는 임의의 이들의 조합과 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 아르기나제 억제제, 예컨대 N(오메가)-Nitro-L-아르기닌 메틸 에스테르(L-NAME), N-오메가-하이드록시-노르-l-아르기닌(노르-NOHA), L-NOHA, 2(S)-아미노-6-보로노헥산산(ABH), S-(2-보로노에틸)-L-시스테인(BEC), 또는 임의의 이들의 조합과 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 VISTA의 억제제, 예컨대 CA-170(Curis, 매사추세츠주 렉싱턴)와 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 예를 들어 COM902와 같은 TIGIT의 억제제(Compugen, 캐나다 온타리오주 토론토), 예를 들어 COM701(Compugen)과 같은 CD155의 억제제, 또는 둘 다와 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 PVRIG, PVRL2의 억제제, 또는 둘 다와 병용되어 사용된다. 항-PVRIG 항체는 예를 들어 PCT 공보 WO 제2016/134333호에 기재되어 있다. 항-PVRL2 항체는 예를 들어 PCT 공보 WO 제2017/021526호에 기재되어 있다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 조성물은 LAIR1 억제제와 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서 본 발명의 약제학적 조성물은 CEACAM-1, CEACAM-3, CEACAM-5의 억제제, 또는 임의의 이들의 조합과 병용되어 사용된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 자극 면역 관문 분자의 활성을 증가시키는 물질(즉, 효능제임)과 병용되어 사용된다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 CD137(4-1BB) 효능제(예컨대, 예를 들어 우렐루맙), CD134(OX-40) 효능제(예컨대, 예를 들어 MEDI6469, MEDI6383 또는 MEDI0562), 레날리도마이드, 포말리도마이드, CD27 효능제(예컨대, 예를 들어 CDX-1127), CD28 효능제(예컨대, 예를 들어 TGN1412, CD80 또는 CD86), CD40 효능제(예컨대, 예를 들어 CP-870,893, rhuCD40L, 또는 SGN-40), CD122 효능제(예컨대, 예를 들어 IL-2), GITR의 효능제(예컨대, 예를 들어 PCT 특허 공보 WO 제2016/054638호에 기재된 인간화된 단일클론 항체), ICOS의 효능제(CD278)(예컨대, 예를 들어 GSK3359609, mAb 88.2, JTX-2011, Icos 145-1, Icos 314-8, 또는 임의의 이들의 조합)와 병용되어 사용될 수 있다. 본원에 개시된 임의의 실시형태에서, 방법은 단독으로 또는 임의의 조합으로 상기의 어느 것을 포함하는 자극 면역 관문 분자의 하나 이상의 효능제와 함께 본 발명의 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 뉴클레오사(타)이드 역전사효소 억제제(NRTI), 인터페론(예를 들어, IFNα, IFNβ, 또는 둘 다), 또는 임의의 이들의 조합과 병용되어 사용된다. 일부 실시형태에서, NRTI는 테노포비어; 테노포비어 디소프록실(예를 들어, 테노포비어 디스프록실 푸마레이트); 테노포비어 알라페나마이드; 엔테카비르; 라미부딘; 아데포비어; 및 아데포비어 디피복실 중 하나 이상을 포함한다.

의학 치료 및 용도

추가의 양태에서, 본 발명은 B형 간염 바이러스에 의한 감염의 치료에서의 본 발명에 따른 약제학적 조성물의 용도를 제공한다. 특정 실시형태에서, 본 발명은 B형 간염 바이러스에 의한 감염의 치료 방법을 제공하고, 상기 방법은 본 발명에 따른 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

치료학적 환경에서, 대상체는 B형 간염 바이러스 감염에 의해 감염되고/되거나 B형 간염 바이러스 감염에 의해 진단되고/되거나, B형 간염 바이러스 감염의 증상을 나타낸다. 특히, B형 간염 바이러스 감염의 "치료" 및 "치료법"/"치료학적"이라는 용어는 B형 간염 바이러스 감염 및/또는 관련된 증상의 (완전한) 치유뿐만 아니라 약화/감소(예를 들어, 감염 및/또는 증상의 중증도, 증상의 수, 감염 및/또는 증상의 기간, 또는 임의의 이들의 조합의 약화/감소)를 포함한다.

소정의 실시형태에서, 대상체는 성인이다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 18세 내지 65세의 범위이다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 체중이 40 kg 내지 125 kg이다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물이 투여된 대상체는 예를 들어 적어도 6개월 떨어진 2차례의 양성 혈청 HBsAg, HBV DNA 및/또는 HBeAg에 의해 정의된 만성 HBV 감염을 갖는다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물이 투여된 대상체는 간경변을 갖지 않는다. 간경변의 부재는 파이브로스캔 평가(예를 들어, 약제학적 조성물의 단일 용량을 투여하기 전 6개월 내); 또는 간 생검(예를 들어, 약제학적 조성물의 단일 용량을 투여하기 전 12개월 내)에 의해 결정되고, 여기서 바람직하게는 간경변의 부재는 Metavir F3 섬유증의 부재 또는 F4 간경변의 부재에 의해 결정된다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물이 투여된 대상체는 투여되는 약제학적 조성물의 단일 용량 전에 선택적으로 120일 내에, 추가로 선택적으로 60일 내에 뉴클레오사(타)이드 역전사효소 억제제(NRTI)를 받았다. 바꾸어 말하면, 대상체는 약제학적 조성물의 투여의 예컨대 120일 내에 또는 60일 내에 NRTI를 과거에 받았다.

소정의 실시형태에서, NRTI는 테노포비어; 테노포비어 디소프록실(예를 들어, 테노포비어 디스프록실 푸마레이트); 테노포비어 알라페나마이드; 엔테카비르; 라미부딘; 아데포비어; 및 아데포비어 디피복실 중 하나 이상을 포함한다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물이 투여된 대상체는 단일 용량을 투여받기 전 28일 이내에 100 IU/mL 미만(예를 들어, 99, 98, 97, 96, 95, 90, 80, 70, 60, 또는 기타)의 혈청 HBV DNA 농도를 갖는다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물이 투여된 대상체는 단일 용량을 투여받기 전 1,000 IU/mL 미만의 혈청 HBsAg 농도를 갖는다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물이 투여된 대상체는 단일 용량을 투여받기 전 28일 이내에 1,000 IU/mL 이상의 혈청 HB 표면 항원(HBsAg) 농도를 갖는다. HBsAg 농도는 예를 들어 Abbott ARCHITECT 검정을 사용하여 결정될 수 있다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물이 투여된 대상체는 단일 용량을 투여받기 전 28일 이내에 HB e-항원 (HBeAg) 음성이었다.

소정의 실시형태에서, 대상체는 단일 용량을 투여받기 전 28일 이내에 항-HB 항체에 음성이었다.

소정의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물이 투여된 대상체는 (i) 섬유증을 갖지 않고/않거나, 간경변을 갖지 않고/않거나; (ii) (혈청) 알라닌 아미노전이효소(ALT) < 2 x 정상 상한(ULN)을 갖는다.

소정의 실시형태에서, 방법은 본 발명의 약제학적 조성물의 단일 용량을 투여하는 단계를 포함한다.

일부 실시형태에서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 2 내지 18 mg/kg (대상체 체중); 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 또는 18 mg/kg의 범위의 항체를 포함한다.

소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 6 mg 이하, 18 mg 이하, 75 mg 이하, 90 mg 이하, 300 mg 이하, 900 mg 이하 또는 3000 mg 이하의 항체를 포함한다. 특정 실시형태에서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 약 10, 약 25, 약 50, 약 75, 약 90, 약 100, 약 125, 약 150, 약 175, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450, 약 500, 약 550, 약 600, 약 650, 약 700, 약 750, 약 800, 약 850, 약 900, 약 950, 약 1000, 약 1250, 약 1500, 약 1750, 약 2000, 약 2250, 약 2500, 약 2750, 또는 약 3000 mg의 항체를 포함한다.

특정 실시형태에서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 약 75 mg의 항체를 포함한다. 다른 실시형태에서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 약 90 mg의 항체를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 약 300 mg 이하의 항체를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 약 900 mg 이하의 항체를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 약 3,000 mg 이하의 항체를 포함한다.

소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 100 mg/mL, 110 mg/mL, 120 mg/mL, 130 mg/mL, 140 mg/mL, 150 mg/mL, 160 mg/mL, 170 mg/mL, 180 mg/mL, 190 mg/mL, or 200 mg/mL, 바람직하게는 150 mg/mL와 같은 100 mg/mL 내지 200 mg/mL의 범위에서의 농도의 항체를 포함한다.

본원에 기재된 B형 간염 바이러스에 의한 감염의 치료를 위한 임의의 방법에서, 약제학적 조성물은 주사 또는 점적을 통해 투여될 수 있다. 약제학적 조성물은 점적에 의해 투여될 때 예를 들어 정맥내, 동맥내 또는 심실내 점적에 의해 투여될 수 있다. 약제학적 조성물은 주사에 의해 투여될 때 예를 들어 정맥내, 동맥내, 심실내, 골수내, 복강내, 척추강내, 심실내 또는 피하 주사에 의해 투여될 수 있다. 본원에 기재된 방법의 구체적인 실시형태에서, 약제학적 조성물은 피하 ("SC") 주사를 통해 또는 정맥내 ("IV") 주사를 통해 투여된다.

한정 용량을 투여하기 위해 다수의 주사 또는 점적이 필요한 경우에도, 용량은 "단일 용량"으로 지칭되고, 투여는 "단일 투여"인 것으로 간주된다. 일반적으로, 단일 한정 용량을 투여하기 위해 다수의 주사 또는 점적이 필요하면, 다수의 주사 또는 점적은 약 5분 이하, 약 15분 이하, 약 30분 이하, 약 1시간 이하, 약 2시간 이하, 약 4시간 이하, 약 6시간 이하, 약 1일 이하, 약 1주 이하, 또는 약 1개월 이하의 기간에 걸쳐 투여된다.

소정의 실시형태에서, 단일 용량의 투여 후 약 56일에, 대상체는 단일 용량의 투여 전 0일 내지 28일에서의 대상체의 혈청 HBsAg와 비교하여 혈청 HBsAg(예를 들어, 혈청 중의 HBsAg의 농도, 예를 들어 Abbott ARCHITECT 검정을 사용하여 결정된 것과 같은)의 2배 초과의 감소를 갖는다.

소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물의 단일 용량의 투여 후에(예를 들어, 단일 용량의 투여 후 56일에), 대상체는 (i) 위약을 받거나 HBV에 대한 치료를 받지 않는 동일한 시간 기간에 걸쳐 기준 대상체(예를 들어, 약제학적 조성물을 받는 대상체와 유사한 중증도 및 동일한 성별, 연령, 체중 및/또는 일반 건강의 HBV 감염을 갖는 대상체)와 비교하여 HBV의 감소되거나 덜 심각한 간내 확산을 갖고/갖거나; (ii) 예를 들어 HBV에 특이적인 T 세포 반응을 포함하는 HBV에 대한 적응 면역 반응을 포함한다.

본 발명은 또한 하기 예시적인 실시형태를 포함한다.

실시형태 1. 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, (i) 서열번호 41에 따른 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역(V_H); 및 (ii) 서열번호 59, 서열번호 89 또는 서열번호 90 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역(V_L)을 포함하고, 단 IMGT 넘버링에 따른 V_L의 40번 위치에서의 아미노산은 시스테인이 아니고, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 HBsAg의 항원 루프 영역에 결합하고, B형 간염 바이러스 및 델타 간염 바이러스에 의한 감염을 중화하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.

실시형태 2. 실시형태 1에 있어서, (i) V_H는 서열번호 41에 따른 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 포함하고/하거나; (ii) V_L은 서열번호 59, 서열번호 89 또는 서열번호 90 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.

실시형태 3. 실시형태 1 또는 실시형태 2에 있어서, V_L의 40번 위치에서의 아미노산은 알라닌인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.

실시형태 4. 실시형태 1 또는 실시형태 2에 있어서, V_L의 40번 위치에서의 아미노산은 세린인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.

실시형태 5. 실시형태 1 또는 실시형태 2에 있어서, V_L의 40번 위치에서의 아미노산은 글리신인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.

실시형태 6. 실시형태 1 내지 실시형태 5 중 어느 하나에 있어서, (i) 각각 서열번호 34 내지 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 및 서열번호 40; (ii) 각각 서열번호 34, 서열번호 66, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 및 서열번호 40; (iii) 각각 서열번호 34 내지 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 39 및 서열번호 40; (iv) 각각 서열번호 34, 서열번호 66, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 39 및 서열번호 40; (v) 각각 서열번호 34 내지 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 및 서열번호 58; (vi) 각각 서열번호 34, 서열번호 66, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 및 서열번호 58; (vii) 각각 서열번호 34 내지 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 39 및 서열번호 58; 또는 (viii) 각각 서열번호 34, 서열번호 66, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 39 및 서열번호 58에 따른 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.

실시형태 7. 실시형태 1 내지 실시형태 3 또는 실시형태 6 중 어느 하나에 있어서, V_L은 서열번호 89에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.

실시형태 8. 실시형태 1, 실시형태 2, 실시형태 4 또는 실시형태 6 중 어느 하나에 있어서, V_L은 서열번호 90에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.

실시형태 9. 실시형태 1 내지 실시형태 8 중 어느 하나에 있어서, V_H는 서열번호 41에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지는, 단리된 항체.

실시형태 10. 실시형태 1 내지 실시형태 3, 실시형태 6, 실시형태 7 또는 실시형태 9 중 어느 하나에 있어서, V_H는 서열번호 41에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, V_L은 서열번호 89에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지는, 단리된 항체.

실시형태 11. 실시형태 1, 실시형태 2, 실시형태 4, 실시형태 6, 실시형태 8 또는 실시형태 9 중 어느 하나에 있어서, V_H는 서열번호 41에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, V_L은 서열번호 90에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지는, 단리된 항체.

실시형태 12. 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서,

(i) 서열번호 95에 따른 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역(V_H); 및

(ii) 서열번호 96에 따른 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역(V_L)을 포함하고,

항체 또는 이의 항원 결합 단편은 HBsAg의 항원 루프 영역에 결합하고, B형 간염 바이러스 및 델타 간염 바이러스에 의한 감염을 중화하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.

실시형태 13. 실시형태 12에 있어서,

(i) V_H는 서열번호 95에 따른 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 포함하고/하거나;

(ii) V_L은 서열번호 96에 따른 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 14. 실시형태 12 또는 실시형태 13에 있어서, 각각 서열번호 97 내지 서열번호 102에 따른 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 서열을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 15. 실시형태 1 내지 실시형태 14 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 항체, 단일클론 항체, 정제된 항체, 단일 사슬 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 또는 scFv를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 16. 실시형태 1 내지 실시형태 15 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 다중특이적 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 17. 실시형태 16에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 이중특이적 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 18. 실시형태 1 내지 실시형태 17 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 Fc 모이어티를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 19. 실시형태 18에 있어서, Fc 모이어티는 돌연변이를 포함하지 않는 기준 Fc 모이어티와 비교하여 (예를 들어, 인간) FcRn에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 20. 실시형태 18 또는 실시형태 19에 있어서, Fc 모이어티는 돌연변이를 포함하지 않는 기준 Fc 모이어티와 비교하여 (예를 들어, 인간) FcγR에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 21. 실시형태 18 내지 실시형태 20 중 어느 하나에 있어서, Fc 모이어티는 IgG 아이소타입이거나, IgG 아이소타입으로부터 유래된, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 22. 실시형태 21에 있어서, FcRn에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 M428L; N434S; N434H; N434A; N434S; M252Y; S254T; T256E; T250Q; P257I; Q311I; D376V; T307A; E380A; 또는 임의의 이들의 조합을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 23. 실시형태 21 또는 실시형태 22에 있어서, FcRn에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 (i) M428L/N434S; (ii) M252Y/S254T/T256E; (iii) T250Q/M428L; (iv) P257I/Q311I; (v) P257I/N434H; (vi) D376V/N434H; (vii) T307A/E380A/N434A; 또는 (viii) (i) 내지 (vii)의 임의의 조합을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 24. 실시형태 23에 있어서, FcRn에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 M428L/N434S를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 25. 실시형태 20 내지 실시형태 24 중 어느 하나에 있어서, FcγR에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 S239D; I332E; A330L; G236A; 또는 임의의 이들의 조합을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 26. 실시형태 25에 있어서, FcγR에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 (i) S239D/I332E; (ii) S239D/A330L/I332E; (iii) G236A/S239D/I332E; 또는 (iv) G236A/A330L/I332E를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 27. 실시형태 25 또는 실시형태 26에 있어서, FcγR에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 G236A/A330L/I332E를 포함하거나 이것으로 이루어지는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 28. 실시형태 18 내지 실시형태 27 중 어느 하나에 있어서, Fc 모이어티는 M428L; N434S; G236A; A330L; 및 I332E의 아미노산 치환 돌연변이를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 29. 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서,

(i) 서열번호 41에 따른 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(V_H); 및

(ii) 서열번호 89에 따른 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(V_L)을 포함하고,

항체 또는 이의 항원 결합 단편은 HBsAg의 항원 루프 영역에 결합하고, B형 간염 바이러스 및 델타 간염 바이러스에 의한 감염을 중화하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.

실시형태 30. 실시형태 29에 있어서, Fc 모이어티를 추가로 포함하는, 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 31. 실시형태 30에 있어서, Fc 모이어티는 IgG 아이소타입으로부터 유래되고, M428L 및 N434S 치환 돌연변이를 포함하는, 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 32. 실시형태 30 또는 실시형태 31에 있어서, Fc 모이어티는 IgG 아이소타입으로부터 유래되고, G236A, A330L 및 I332E 치환 돌연변이를 포함하는, 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 33. 실시형태 32에 있어서, Fc 모이어티는 M428L, N434S, G236A, A330L 및 I332E 치환 돌연변이를 포함하는, 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 34. 실시형태 1 내지 실시형태 10 및 실시형태 15 내지 실시형태 33 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 91에 따른 중쇄(HC) 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 35. 실시형태 1 내지 실시형태 10 및 실시형태 15 내지 실시형태 32 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 92에 따른 중쇄(HC) 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 36. 실시형태 1 내지 실시형태 3, 실시형태 6, 실시형태 7, 실시형태 9, 실시형태 10 및 실시형태 15 내지 실시형태 35 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 93에 따른 경쇄(LC) 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 37. 실시형태 1, 실시형태 2, 실시형태 4, 실시형태 6, 실시형태 8, 실시형태 11 및 실시형태 15 내지 실시형태 28 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 94에 따른 경쇄(LC) 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 38. 실시형태 34 또는 실시형태 36에 있어서, 서열번호 91에 따른 HC 아미노산 서열 및 서열번호 93에 따른 LC 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 39. 실시형태 35 또는 실시형태 37에 있어서, 서열번호 92에 따른 HC 아미노산 서열 및 서열번호 94에 따른 LC 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 40. 실시형태 34 또는 실시형태 37에 있어서, 서열번호 91에 따른 HC 아미노산 서열 및 서열번호 94에 따른 LC 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 41. 실시형태 35 또는 실시형태 36에 있어서, 서열번호 92에 따른 HC 아미노산 서열 및 서열번호 93에 따른 LC 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 42. 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서,

(i) 서열번호 91에 따른 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC); 및

(ii) 서열번호 93에 따른 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC)를 포함하고,

항체 또는 이의 항원 결합 단편은 HBsAg의 항원 루프 영역에 결합하고, B형 간염 바이러스 및 델타 간염 바이러스에 의한 감염을 중화하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.

실시형태 43. 실시형태 1 내지 실시형태 42 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HBsAg 유전자형 A, B, C, D, E, F, G, H, I 및 J로부터 선택된 유전자형의 HBsAg, 또는 임의의 이들의 조합에 결합하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 44. 실시형태 1 내지 실시형태 43 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HBV 감염을 갖는 포유동물에서 HBV DNA의 혈청 농도를 감소시키는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 45. 실시형태 1 내지 실시형태 44 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HBV 감염을 갖는 포유동물에서 HBsAg의 혈청 농도를 감소시키는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 46. 실시형태 1 내지 실시형태 45 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HBV 감염을 갖는 포유동물에서 HBeAg의 혈청 농도를 감소시키는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 47. 실시형태 1 내지 실시형태 46 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HBV 감염을 갖는 포유동물에서 HBcrAg의 혈청 농도를 감소시키는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 48. 키트로서,

(i) 실시형태 1 내지 실시형태 47 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편; 및

(ii) B형 간염 감염 및/또는 D형 간염 감염을 예방하고/하거나 치료하고/하거나 약화시키고/시키거나 진단하기 위해 성분을 사용하기 위한 설명서를 포함하는, 키트.

실시형태 49. 실시형태 48에 있어서,

(i) 중합효소 억제제(여기서, 중합효소 억제제는 라미부딘, 아데포비어, 엔테카비르, 텔비부딘, 테노포비어, 또는 임의의 이들의 조합을 선택적으로 포함함);

(ii) 인터페론(여기서, 인터페론은 선택적으로 IFN베타 및/또는 IFN알파를 포함함);

(iii) 관문 억제제(관문 억제제는 선택적으로 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및/또는 항-CTLA4 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함함);

(iv) 자극 면역 관문 분자의 효능제; 또는

(v) (viii) 내지 (xii)의 임의의 조합을 추가로 포함하는, 키트.

실시형태 50. 실시형태 49에 있어서, 중합효소 억제제는 라미부딘을 포함하는, 키트.

실시형태 51. 대상체에서 B형 간염 감염 및/또는 D형 간염 감염을 예방하고/하거나 치료하고/하거나 약화시키고/시키거나 진단하기 위한 약제의 제조에서의, 실시형태 1 내지 실시형태 47 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편의 용도.

실시형태 52. 대상체에서 B형 간염 및/또는 D형 간염 감염을 예방하고/하거나 치료하고/하거나 약화시키는 방법으로서, (i) 실시형태 1 내지 실시형태 47 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

실시형태 53. 실시형태 52에 있어서, 중합효소 억제제(여기서, 중합효소 억제제는 선택적으로 라미부딘, 아데포비어, 엔테카비르, 텔비부딘, 테노포비어, 또는 임의의 이들의 조합을 포함함); 인터페론(여기서, 인터페론은 선택적으로 IFN베타 및/또는 IFN알파를 포함함); 관문 억제제(여기서, 관문 억제제는 선택적으로 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및/또는 항-CTLA4 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함함); 자극 면역 관문 분자의 효능제; 또는 임의의 이들의 조합 중 하나 이상을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.

실시형태 54. 실시형태 52 또는 실시형태 53에 있어서, B형 간염 감염은 만성 B형 간염 감염인, 방법.

실시형태 55. 실시형태 52 내지 실시형태 54 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 간 이식을 받은, 방법.

실시형태 56. 실시형태 52 내지 실시형태 55 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 B형 간염에 대해 비면역화된, 방법.

실시형태 57. 실시형태 52 내지 실시형태 56 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 신생아인, 방법.

실시형태 58. 실시형태 52 내지 실시형태 57 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 혈액투석을 받고 있거나 받았던, 방법.

실시형태 59. 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서,

서열번호 34에 따른 CDRH1 아미노산 서열, 서열번호 35 또는 서열번호 66에 따른 CDRH2 아미노산 서열, 서열번호 36에 따른 CDRH3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(V_H);

서열번호 37에 따른 CDRL1 산 서열, 서열번호 38 또는 서열번호 39에 따른 CDRL2 산 서열 및 서열번호 58 또는 서열번호 40에 따른 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(V_L); 및

Fc 모이어티(여기서, Fc 모이어티는 G236A/A330L/I332E를 포함함)를 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.

실시형태 60. 실시형태 59에 있어서, Fc 모이어티는 S239D를 포함하지 않는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 61. 실시형태 59 또는 실시형태 60에 있어서, Fc 모이어티는 M428L/N434S를 추가로 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 62. 실시형태 59 내지 실시형태 61 중 어느 하나에 있어서, V_H는 서열번호 41 또는 서열번호 67 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, V_L은 서열번호 42, 서열번호 59, 서열번호 65, 서열번호 89, 서열번호 90 및 서열번호 111 내지 서열번호 120 중 어느 하나에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 63. 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서,

(i) 서열번호 97에 따른 CDRH1 아미노산 서열, 서열번호 98에 따른 CDRH2 아미노산 서열, 서열번호 99에 따른 CDRH3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(V_H);

(ii) 서열번호 100에 따른 CDRL1 산 서열, 서열번호 100에 따른 CDRL2 산 서열 및 서열번호 102에 따른 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(V_L); 및

(iii) Fc 모이어티(여기서, Fc 모이어티는 G236A/A330L/I332E를 포함함)를 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.

실시형태 64. 실시형태 63에 있어서, Fc 모이어티는 S239D를 포함하지 않는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 65. 실시형태 63 또는 64에 있어서, Fc 모이어티는 M428L/N434S를 추가로 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 66. 실시형태 63 내지 실시형태 65 중 어느 하나에 있어서, V_H는 서열번호 95에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, V_L은 서열번호 96에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 67. 실시형태 63 내지 실시형태 66 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 (i) G236A/A330L/I332E를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함하는 기준 폴리펩타이드와 비교하여 인간 FcγRIIA, 인간 FcγRIIIa 또는 둘 다에 대한 향상된 결합을 갖고, 여기서 인간 FcγRIIA는 선택적으로 H131 또는 R131이고/이거나, 인간 FcγRIIIA는 선택적으로 F158 또는 V158이고; (ii) G236A/A330L/I332E를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함하는 기준 폴리펩타이드와 비교하여 인간 FcγRIIB에 대한 감소된 결합을 갖고; (iii) 인간 FcγRIIB에 결합하지 않고; G236A/A330L/I332E를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함하는 기준 폴리펩타이드와 비교하여 인간 C1q에 대한 감소된 결합을 갖고; 인간 C1q에 결합하지 않고; G236A/A330L/I332E를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함하는 기준 폴리펩타이드가 활성화하는 것보다 높은 정도로 FcγRIIA, 인간 FcγRIIIa 또는 둘 다를 활성화하고, 여기서 인간 FcγRIIA는 선택적으로 H131 또는 R131이고/이거나, 인간 FcγRIIIA는 선택적으로 F158 또는 V158이고; 인간 FcγRIIB를 활성화하지 않고/않거나; G236A/A330L/I332E를 포함하지 않는 Fc 모이어티를 포함하는 기준 폴리펩타이드가 활성화하는 것보다 높은 정도로 HBsAg의 존재 하에 인간 자연 살해(NK) 세포를 활성화하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 68. 대상체에서 B형 간염 바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 항체 또는 항원 결합 단편의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 mg/kg, 또는 초과에서의, 또는 항체 또는 항원 결합 단편의 75 mg 이하(즉, 75 mg 이하의 임의의 정수 용량 또는 비정수 용량을 포함), 300 mg 이하 또는 900 mg 이하의 용량에서의, 실시형태 1 내지 실시형태 47 또는 실시형태 59 내지 실시형태 67 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 조성물의 단일 용량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

실시형태 69. 실시형태 68에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 91에 따른 중쇄(HC) 아미노산 서열을 포함하고, 서열번호 93에 따른 경쇄(LC) 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.

실시형태 70. 실시형태 68 또는 실시형태 69에 있어서, 투여 전에, 상기 조성물은 선택적으로 멸균수 중에 150 mg/mL의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하고, pH 6에서 20 mM 히스티딘, 7% 수크로스 및 0.02% PS80을 추가로 포함하는, 방법.

실시형태 71. 실시형태 68 내지 실시형태 70 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 (i) 18세 내지 65세이거나, 이보다 나이가 많거나; (ii) 체중이 ≥ 40 kg 내지 ≤ 125 kg이거나; (iii) 만성 HBV 감염을 갖거나(여기서, 만성 HBV 감염은 과거의 또는 현재의 실험실 기록문서에 기초하여 적어도 6개월 떨어진 2차례의 양성 혈청 HBsAg, HBV DNA 또는 HBeAg에 의해 정의됨)(또는 적어도 6개월 떨어져 수행된 이들 시험의 임의의 조합에 기초하여 양성 결과); (iv) 간경변을 갖지 않거나; (v) 단일 용량을 투여받기 전 적어도 4개월(120일) 동안 뉴클레오사이드 역전사효소 억제제(NTRI) 치료를 받거나(여기서, NTRI 치료는 선택적으로 테노포비어 디소프록실/테노포비어 알라페나마이드, 엔테카비르, 라미부딘, 또는 아데포비어/아데포비어 디피복실을 포함함); (vi) 단일 용량을 투여받기 전 4주(28일) 이하에 100 IU/mL 미만의 HBV DNA를 갖거나; (vii) 단일 용량을 투여받기 전 4주(28일) 이하에 HBsAg > 검출 하한을 갖거나; (viii) 단일 용량을 투여받기 전 4주(28일) 이하에 1000 IU/mL 미만에서의 HBsAg를 갖거나; (ix) 단일 용량을 투여받기 전 4주(28일) 이하에 1000 IU/mL 이상의 HBsAg를 갖거나; (x) 단일 용량을 투여받기 전 4주(28일) 이하에 HBeAg 음성이거나; (xi) 단일 용량을 투여받기 전 4주(28일) 이하에 B형 항-간염 항체에 음성이거나; (xii) 알라닌 아미노전이효소 < 2 × ULN을 갖거나; 또는 (xiii) (i) 내지 (xii)의 임의의 조합인, 방법.

실시형태 72. 실시형태 68 내지 실시형태 71 중 어느 하나에 있어서, 투여는 피하 주사를 포함하는, 방법.

실시형태 73. 실시형태 68 내지 실시형태 72 중 어느 하나에 있어서, 단일 용량의 투여 후 8주에, 대상체는 투여 전의 0일 내지 4주(28일)와 비교하여 HBsAg의 2배 초과의 감소를 갖는, 방법.

실시형태 74. 대상체에서 B형 간염 바이러스(HBV) 감염을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 실시형태 1 내지 실시형태 47 및 실시형태 59 내지 실시형태 67 중 어느 하나에 따른 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 단일 용량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 선택적으로 항체는 서열번호 91의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 93의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 방법.

실시형태 75. 실시형태 74에 있어서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 2 내지 18 mg/kg(대상체 체중)의 범위의 항체를 포함하는, 방법.

실시형태 76. 실시형태 74 또는 실시형태 75에 있어서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 6 mg 이하, 18 mg 이하, 75 mg 이하, 90 mg 이하, 300 mg 이하, 900 mg 이하 또는 3000 mg 이하의 항체를 포함하는, 방법.

실시형태 77. 실시형태 74 내지 실시형태 76 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 100 mg/mL, 110 mg/mL, 120 mg/mL, 130 mg/mL, 140 mg/mL, 150 mg/mL, 160 mg/mL, 170 mg/mL, 180 mg/mL, 190 mg/mL 또는 200 mg/mL, 바람직하게는 150 mg/mL와 같은 100 mg/mL 내지 200 mg/mL의 범위의 농도에서의 항체를 포함하는, 방법.

실시형태 78. 실시형태 74 내지 실시형태 77 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 약 75 mg의 항체를 포함하는, 방법.

실시형태 79. 실시형태 74 내지 실시형태 78 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 약 90 mg의 항체를 포함하는, 방법.

실시형태 80. 실시형태 74 내지 실시형태 78 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 300 mg 이하의 항체를 포함하는, 방법.

실시형태 81. 실시형태 74 내지 실시형태 78 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 900 mg 이하의 항체를 포함하는, 방법.

실시형태 82. 실시형태 74 내지 실시형태 78 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 3,000 mg 이하의 항체를 포함하는, 방법.

실시형태 83. 실시형태 74 내지 실시형태 82 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 피하 주사에 의해 단일 용량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

실시형태 84. 실시형태 74 내지 실시형태 83 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 정맥내 주사에 의해 단일 용량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

실시형태 85. 실시형태 74 내지 실시형태 84 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물은 물, 선택적으로 USP 물을 추가로 포함하는, 방법.

실시형태 86. 실시형태 74 내지 실시형태 85 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물은 약제학적 조성물에서 선택적으로 10 mM 내지 40 mM의 범위, 예컨대 20 mM의 농도의 히스티딘을 추가로 포함하는, 방법.

실시형태 87. 실시형태 74 내지 실시형태 86 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물은 수크로스와 같은 디사카라이드를 선택적으로 5%, 6%, 7%, 8% 또는 9%, 바람직하게는 약 7% (w/v)로 추가로 포함하는, 방법.

실시형태 88. 실시형태 74 내지 실시형태 87 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물은 계면활성제 또는 삼중블록 공중합체, 선택적으로 폴리소르베이트 또는 폴록사머-188, 바람직하게는 폴리소르베이트 80 (PS80)을 추가로 포함하고, 선택적으로, 폴리소르베이트 또는 폴록사머-188은 0.01% 내지 0.05% (w/v)의 범위, 바람직하게는 0.02% (w/v)로 존재하는, 방법.

실시형태 89. 실시형태 74 내지 실시형태 88 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물은 5.8 내지 6.2의 범위, 5.9 내지 6.1의 범위, 또는 5.8, 5.9, 6.0, 6.1 또는 6.2의 pH를 갖는, 방법.

실시형태 90. 실시형태 89에 있어서, 약제학적 조성물은

(i) 150 mg/mL에서의 항체;

(ii) USP 물;

(iii) 20 mM 히스티딘;

(iv) 7% 수크로스; 및

(v) 0.02% PS80을 포함하고,

약제학적 조성물은 6의 pH를 포함하는, 방법.

실시형태 91. 실시형태 74 내지 실시형태 90 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 성인인, 방법.

실시형태 92. 실시형태 74 내지 실시형태 91 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 18세 내지 65세의 범위인, 방법.

실시형태 93. 실시형태 74 내지 실시형태 92 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 체중이 40 kg 내지 125 kg인, 방법.

실시형태 94. 실시형태 74 내지 실시형태 93 중 어느 하나에 있어서, 대상체는, 예를 들어 2차례의 양성 혈청 HBsAg, HBV DNA 및/또는 HBeAg에 의해 정의된 만성 HBV 감염을 갖고, 상기 2차례의 기간이 적어도 6개월 떨어진, 방법

실시형태 95. 실시형태 74 내지 실시형태 94 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 간경변을 갖지 않는, 방법.

실시형태 96. 실시형태 95에 있어서, 간경변의 부재는 파이브로스캔 평가(예를 들어, 약제학적 조성물의 단일 용량을 투여하기 전 6개월 내); 또는 간 생검(예를 들어, 약제학적 조성물의 단일 용량을 투여하기 전 12개월 내)에 의해 결정되고, 바람직하게는 간경변의 부재는 Metavir F3 섬유증의 부재 또는 F4 간경변의 부재에 의해 결정되는, 방법.

실시형태 97. 실시형태 74 내지 실시형태 96 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 단일 용량을 투여받기 전 선택적으로 120일 내에, 추가로 선택적으로 60일 내에 뉴클레오사(타)이드 역전사효소 억제제(NRTI)를 받은, 방법.

실시형태 98. 실시형태 97에 있어서, NRTI는 테노포비어; 테노포비어 디소프록실(예를 들어, 테노포비어 디스프록실 푸마레이트); 테노포비어 알라페나마이드; 엔테카비르; 라미부딘; 아데포비어; 및 아데포비어 디피복실 중 하나 이상을 포함하는, 방법.

실시형태 99. 실시형태 74 내지 실시형태 98 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 단일 용량을 투여받기 전 28일 이내에 100 IU/mL 미만의 혈청 HBV DNA 농도를 갖는, 방법.

실시형태 100. 실시형태 74 내지 실시형태 99 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 단일 용량을 투여받기 전 1,000 IU/mL 미만의 혈청 HBsAg 농도를 갖는, 방법.

실시형태 101. 실시형태 74 내지 실시형태 99 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 단일 용량을 투여받기 전 28일 이내에 1,000 IU/mL 이상의 혈청 HBsAg 농도를 갖는, 방법.

실시형태 102. 실시형태 74 내지 실시형태 101 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 단일 용량을 투여받기 전 28일 이내에 HB e-항원 (HBeAg) 음성인, 방법.

실시형태 103. 실시형태 74 내지 실시형태 102 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 단일 용량을 투여받기 전 28일 이내에 항-HB 항체에 음성인, 방법.

실시형태 105. 실시형태 74 내지 실시형태 103 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 단일 용량의 투여 전에 (i) 섬유증을 갖지 않고/않거나, 간경변을 갖지 않고/않거나; (ii) 알라닌 아미노전이효소(ALT) < 2 x 정상 상한(ULN)을 갖는, 방법.

실시형태 106. 실시형태 74 내지 실시형태 105 중 어느 하나에 있어서, 단일 용량의 투여 후 약 56일에, 대상체는 단일 용량의 투여 전 0일 내지 28일에서의 대상체의 혈청 HBsAg와 비교하여 혈청 HBsAg(예를 들어, Abbott ARCHITECT 검정을 사용하여 결정된 것과 같은 예를 들어 혈청 중의 HBsAg의 농도)의 2배 초과의 감소를 갖는, 방법.

실시형태 107. 실시형태 74 내지 실시형태 106 중 어느 하나에 있어서, 단일 용량의 투여 후에(예를 들어, 단일 용량의 투여 후 56일에), 대상체는 (i) 기준 대상체와 비교하여 HBV의 감소되거나 덜 심각한 간내 확산을 갖고/갖거나; (ii) HBV에 대한 적응 면역 반응을 포함하는, 방법.

실시형태 108. 실시형태 74 내지 실시형태 107 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 남성인, 방법.

실시형태 109. 실시형태 74 내지 실시형태 107 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 여성인, 방법.

실시형태 110. 항체를 포함하는 약제학적 조성물로서, 항체는 서열번호 91의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 93의 경쇄 아미노산 서열을 포함하고, 약제학적 조성물은 100 mg/mL, 110 mg/mL, 120 mg/mL, 130 mg/mL, 140 mg/mL, 150 mg/mL, 160 mg/mL, 170 mg/mL, 180 mg/mL, 190 mg/mL 또는 200 mg/mL, 바람직하게는 150 mg/mL와 같은 100 mg/mL 내지 200 mg/mL의 범위의 농도에서의 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.

실시형태 111. 실시형태 1110에 있어서, 약제학적 조성물은 6 mg 이하, 18 mg 이하, 75 mg 이하, 90 mg 이하, 300 mg 이하, 900 mg 이하 또는 3000 mg 이하의 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.

실시형태 112. 실시형태 110 또는 실시형태 111에 있어서, 약제학적 조성물은 약 75 mg의 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.

실시형태 113. 실시형태 110 또는 실시형태 111에 있어서, 약제학적 조성물은 약 90 mg의 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.

실시형태 114. 실시형태 110 또는 실시형태 111에 있어서, 약제학적 조성물은 약 300 mg의 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.

실시형태 115. 실시형태 110 또는 실시형태 111에 있어서, 약제학적 조성물은 약 900 mg의 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.

실시형태 116. 실시형태 110 또는 실시형태 111에 있어서, 약제학적 조성물은 약 3,000 mg의 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.

실시형태 117. 실시형태 110 내지 실시형태 116 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물은 물, 선택적으로 USP 물을 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.

실시형태 118. 실시형태 110 내지 실시형태 117 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물은 약제학적 조성물에서 선택적으로 10 mM 내지 40 mM, 예컨대 20 mM의 농도의 히스티딘을 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.

실시형태 119. 실시형태 110 내지 실시형태 118 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물은 수크로스와 같은 디사카라이드를 선택적으로 5%, 6%, 7%, 8% 또는 9%, 바람직하게는 약 7% (w/v)로 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.

실시형태 120. 실시형태 110 내지 실시형태 119 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물은 계면활성제, 선택적으로 폴리소르베이트, 바람직하게는 폴리소르베이트 80 (PS80)을 추가로 포함하고, 선택적으로, 폴리소르베이트는 0.01% 내지 0.05% (w/v)의 범위, 바람직하게는 0.02% (w/v)로 존재하는, 약제학적 조성물.

실시형태 121. 실시형태 110 내지 실시형태 120 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물은 5.8 내지 6.2의 범위, 5.9 내지 6.1의 범위, 또는 5.8, 5.9, 6.0, 6.1 또는 6.2의 pH를 갖는, 약제학적 조성물.

실시형태 122. 실시형태 110 내지 실시형태 121 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물은

(i) 150 mg/mL에서의 항체;

(ii) USP 물;

(iii) 20 mM 히스티딘;

(iv) 7% 수크로스; 및

(v) 0.02% PS80을 포함하고,

약제학적 조성물은 6의 pH를 포함하는, 약제학적 조성물.

실시예

하기에서, 본 발명의 실시형태 및 양태를 예시하는 특정 실시예가 제시된다. 그러나, 본 발명은 본원에 기재된 특정 실시형태에 의해 범위에서 제한되지 않아야 한다. 하기 제법 및 실시예는 당업자가 본 발명을 보다 명확히 이해하고 실행하게 하도록 주어진다. 그러나, 본 발명은 예시된 실시형태에 의해 범위에서 제한되지 않는다. 대신에, 본원에 기재된 것 이외에 본 발명의 다양한 변형은 상기 설명, 하기 동반된 도면 및 실시예로부터 당업자에게 용이하게 자명할 것이다. 모든 이러한 변형은 첨부된 청구항 내에 해당한다.

실시예 1: 조작된 항체의 생성 및 시험

PCT 공보 WO 제2017/060504호로부터의 일부 HBC34 항체 변이체의 분석은 독립적이고 잠재적인 책임을 나타내는 경쇄 가변 영역에서 40번 위치에서의 시스테인 아미노산(IMGT 넘버링)을 밝혀냈다. 이론에 의해 결합되고자 바라지 않으면서, 독립 시스테인 잔기는 잠재적으로 반응성이고, 분자내 스크램블 또는 분자간 디설파이드 형성을 통해 잠재적으로 응집을 촉진할 수 있다. 40번 위치에서의 시스테인 아미노산이 세린(이로써 "HBC34-V34"를 생성) 또는 알라닌(이로써 "HBC34-V35"를 생성)으로 치환된 HBC34-V7(WO 제2017/060504호)의 변이체가 조작되었다. 이들 추가 변이체 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 코돈 최적화되고, 항체는 ExpiCHO^TM 세포(ThermoFisher)에서 IgG1(g1m17, 1 알로타이프)로서 발현되었다. HBC34-V35의 VH 도메인 및 VL 도메인을 암호화하는 코돈 최적화된 뉴클레오타이드 서열은 각각 서열번호 103 및 서열번호 104에 제공된다.

직접 항원 결합 ELISA를 사용하여 항원에 결합하는 HBC34-V34 및 HBC34-V35의 능력이 조사되었다. 비교자로서 HBC34-V7을 사용하였다. 도 1에 도시된 것처럼, 2개의 재조합 HBsAg 항원에 효과적으로 결합된 HBC34-V34 및 HBC34-V35("adw", 상부 패널; "adr", 하부 패널) 둘 다, 및 HBC34-V35는 모 HBC34-V7과 매우 유사한 결합을 가졌다.

모든 공지된 HBsAg 유전자형((A) 내지 (J))에 대한 결합에 대해 변이체 항체가 조사되었다. 간단하게, 인간 상피 세포(Hep2 세포)를 10개의 HBV 유전자형 A, B, C, D, E, F, G, H, I 및 J의 HBsAg의 각각을 발현하는 플라스미드에 의해 형질주입하였다. 일시적으로 형질주입된 투과된 세포의 염색을 위해 다수의 농도에서 모든 항체를 시험하였다. 형질주입 후 2일에, Hep2 세포를 수집하고, 고정하고, HBC34 및 5개의 선택된 변이체에 의한 면역염색을 위해 사포닌으로 투과시켰다. 비교자로서 HBC34-V7이 포함되었다. FlowJo 소프트웨어(TreeStar)에 의해 Becton Dickinson FACSCanto2(BD Biosciences)를 사용하여 형질주입된 세포에 대한 항체의 결합을 분석하였다. 도 2a 내지 도 2j에 도시된 것처럼, HBC34-V34 및 HBC34-V35는 모든 10개의 HBV HBsAg 유전자형을 인식하였다. HBC34-V35는 HBC34-V34보다 다소 더 강한 염색을 보여주었다.

이 데이터는 항체 변이체 HBC34-V34 및 HBC34-V35가 HBC34-V7에 필적하는 수준으로 HBsAG를 광범위하게 인식하고 이에 결합한다는 것을 보여준다.

실시예 2: 변형된 Fc 영역을 갖는 HBC 항체는 항원에 효율적으로 결합한다

Fc 영역에서의 변형은 치료학적 항체에 이점을 제공할 수 있다. HBC34-V35는 야생형 Fc, 또는 "MLNS" 돌연변이(M428L/N434S)를 함유하는 Fc 또는 "GAALIE" (G239A/A330L/I332E)와 조합된 MLNS를 갖는 IgG1로서 발현되었다. 2개의 별개의 항원 결합 ELISA 실험에서 재조합 HBsAg(adw)에 대한 결합에 대해 각각의 작제물을 시험하였다. HBC34-v35(야생형 Fc)의 세(3)개의 로트를 시험하였다. HBC34-V35-MLNS의 두(2)개의 로트 및 HBC34-V35-MLNS-GAALIE의 두(2)개의 로트를 시험하였다. HBC34v7(1개의 로트)을 비교자로서 시험하였다.

도 3a 및 도 3b에 도시된 것처럼, 도입된 Fc 돌연변이는 HBC34-V35의 항원 결합 활성에 영향을 미치지 않았다. EC50 값은 다양한 작제물 사이에 다소 변했고, 그러나 2개의 실험은 일반적으로 낮았다.

실시예 3: 추가 기능적 연구

HBC34-V35, HBC34-V35-MLNS 및 HBC34-V35-MLNS-GAALIE를 사용하여 시험관내 및 생체내 중화 연구를 수행한다. 일 연구에서, HBV 감염된 마우스 PXB 세포를 사용하여 중화 활성에 대해 항체를 시험한다. 다른 연구에서, C 유전자형의 HBV에 의해 감염된 인간 간세포 세포를 사용하여 항체를 시험한다.

연구 둘 다에 대해, 헵스불린(인간 B형 간염 면역글로불린)은 양성 대조군으로서 사용된다. 하기 데이터는 다수의 시점에 포착된다: HBV DNA 정량화; HBsAg 정량화; HBeAg 정량화; 및 hAlb 정량화.

실시예 4: 인간 단일클론 항체 HBC24의 확인 및 규명

인간 환자로부터 문헌[Traggiai E. et al., 2004, Nat Med 10(8): 871-5]에 기재된 것과 유사한 방식으로 인간 단일클론 항체를 단리하였다. 항체는 내부의 이의 가변 영역 및 상보성 결정 영역(CDR)의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열 및 명명된 "HBC24"를 결정함으로써 규명되었다. 따라서, HBC24는 상기 표 3에 기재된 것과 같은 CDR, V_H 및 V_L 서열을 갖는 IgG1 유형 완전 인간 단일클론 항체이다. HBC24의 VH 및 VL을 암호화하는 예시적인 뉴클레오타이드 서열은 표 4에 제공된다.

실시예 5: 마우스 모델에서의 HB 항원의 제거 및 바이러스 진입 억제

HBsAg를 제거하는 데 있어서 본 발명의 항-HBV 항체의 유효성을 시험하기 위해 이식된 인간 간세포를 갖는 면역 결핍 마우스를 사용하였다. 간단하게, 1차 인간 간세포는 SCID 마우스로 이식되었고, 이를 위해 마우스 간세포는 효소적으로 이전에 파괴되었다. 마우스는 T 세포 및 B 세포 결핍이었다. 이 모델은 진입, 확산, cccDNA 조절, 간세포-내재 면역 반응, 및 숙주 게놈으로의 바이러스 통합을 포함하여 HBV 감염을 연구하기에 유용하다.

-28일에 마우스당 1.0 × 10⁷ 바이러스 게놈에서 rAAV8-1.3HBV 균주 ayw, D형에 의한 꼬리 정맥 주사를 통해 마우스를 접종하였다. 0일에서의 치료. AAV/HBV 감염된 마우스(치료 그룹당 n=4)는 PBS(대조군) 또는 HBC34-v35(1, 5 또는 15 mg/kg i.p., 2x/주)가 투여되었다. 항원 결합 Fab 영역을 제외하고 항체를 쥣과화하였다.

혈장 및 혈청 샘플을 연구에 걸쳐 주기적으로 수집하고, 바이러스 로드, HBV DNA(PCR에 의해) 및 HB Ag(HBsAg, HBeAg, HBcrAg). 6주에 마우스를 희생시켰다. 도 4 내지 도 7에 도시된 것처럼, HBC34-v35의 가장 높은 용량에 의한 치료는 바이러스 로드 및 간세포로의 바이러스 진입을 감소시켰다.

실시예 6: HBC24의 생식선 변이체의 생성 및 기능적 시험

생식선 서열에 대한 가변 영역에서의 체세포 돌연변이의 존재에 대해 HBC24를 분석한다. 확인된 체세포 돌연변이는 HBC24 변이체를 제조하도록 생식선 서열로 복귀된다. 실시예 1 및 실시예 3에 기재된 것과 같은 검정을 사용하여 HBV 및 HBD 혈청형의 결합(시험관내) 및 중화(시험관내; 생체내)에 대해 HBC24 및 변이체를 시험하였다.

실시예 7: HBC24 및 변이체로의 Fc 변형의 도입

Fc 단량체 둘 다에서 MLNS 및 GAALIE 돌연변이를 함유하는 추가의 HBC24 변이체가 제조된다. 선택된 변이체의 HC 아미노산 서열은 서열번호 120 및 서열번호 121에 제공된다. 실시예 1 및 실시예 3에 기재된 것과 같은 검정을 사용하여 HBV 혈청형의 (1) 항원에 대한 시험관내 결합; (2) 시험관내 중화에 대해 변이체를 조사한다.

실시예 8: 시험관내 효과기 기능 연구

(1) 인간 FcγR 및 보체에 결합하는; (2) FcγRIIa, FcγRIIb 및 FcγRIIIa를 활성화하는; 그리고 (3) ADCC를 촉진하고 인간 자연 살해(NK) 세포를 활성화하는 변형된 Fc를 갖는 HBC34 항체의 능력을 조사하도록 시험관내 연구를 수행하였다. 사용된 시험 물품, 세포주 및 시약은 하기 표 5 내지 표 7에 기재된 것과 같았다. 하기 약어가 이 실시예에 사용된다: GLP = 우수 실험실 운영기준; ADCC = 항체 의존적 세포 세포독성; ADCP =항체 의존적 세포 식세포작용; Fc = 결정화 가능한 단편; HBsAg = B형 간염 표면 항원; mAb = 단일클론 항체; PBS = 포스페이트 완충 식염수; UHPL-SEC = 고초성능 액체 크기 배제 크로마토그래피; ATCC = 미국 균주 협회; FcγR = Fc 감마 수용체(들); CHO 세포 = 중국 햄스터 난소 세포; RLU = 상대 발광 단위; BLI = 생물층 간섭측정.

실험 절차

인간 Fcγ-수용체에 대한 결합의 측정

Octet 기계(BLI, 생물층 간섭측정)에서 인간 FcγR에 대한 HBC34v35-MLNS 및 HBC34-V35-MLNS-GAALIE의 결합을 측정하였다. 간단하게, 2 ㎍/ml에서의 His 태그화된 인간 FcγR(FcγRIIa 대립유전자 H131, FcγRIIa 대립유전자 R131, FcγRIIAa 대립유전자 F158, FcγRIIIa 대립유전자 V158 및 FcγRIIb)을 6분 동안 항-펜타-His 센서에 포획하였다. 이후, FcγR 로딩된 센서는 (Fab 단편을 통해 인간 mAb를 가교결합시키기 위해) 1 ㎍/ml의 affiniPure F(ab')₂ 단편 염소 항-인간 IgG, F(ab')₂ 단편 특이적의 존재 하에 2 ㎍/ml의 각각의 mAb를 함유하는 동역학 완충액(pH 7.1)의 용액에 4분 동안 노출된 후, 추가 4분 동안 동일한 완충액 중의 해리 단계(선도의 오른쪽 파트)가 이어진다. 회합 및 해리 프로파일은 Octet RED96(ForteBio)을 사용하여 간섭 패턴의 변화로서 실시간으로 측정되었다.

인간 보체 단백질 C1q에 대한 결합의 측정

Octet 기계(BLI, 생물층 간섭측정)에서 인간 보체에 대한 HBC34v35-MLNS 및 HBC34-V35-MLNS-GAALIE의 결합을 측정하였다. 간단하게, 항-인간 Fab(CH1 특이적) 센서는 Fab 단편을 통해 10분 동안 10 ㎍/ml에서 HBC34v35 MLNS 및 HBC34-V35-MLNS-GAALIE mAb의 완전 IgG1을 포획하도록 사용되었다. 이후, IgG 로딩된 센서는 3 ㎍/ml의 정제된 인간 C1q(선도의 왼쪽 파트)를 함유하는 동역학 완충액(pH 7.1)의 용액에 4분 동안 노출된 후, 추가 4분 동안 동일한 완충액 중의 해리 단계(선도의 오른쪽 파트)가 이어진다. 회합 및 해리 프로파일은 Octet RED96(ForteBio)을 사용하여 간섭 패턴의 변화로서 실시간으로 측정되었다.

전혈로부터의 인간 NK 세포의 제조

제조사의 지시에 따라 MACSxpress® NK 단리 키트를 사용하여 전체 EDTA 혈액으로부터 NK 세포를 새로 단리하였다. 간단하게, 항응고된 혈액을 15 ml의 NK 단리 칵테일을 갖는 50 ml 관에서 혼합하고, 분당 대략 12회차로 회전자를 사용하여 실온에서 5분 동안 항온처리하였다. 이후, 15분 동안 MACSxpress® Separator의 자기장에 관을 배치하였다. 자기 표지된 세포는 관의 벽에 부착하지만, 응집된 적혈구는 바닥에 침전한다. 이후, 관이 여전히 MACSxpress® Separator 내에 있으면서 표적 NK 세포를 상청액으로부터 수집하였다. NK 세포를 원심분리하고, 증류수로 처리하여 잔류 적혈구를 제거하고, 다시 원심분리하고, 마지막으로 AIM-V 배지에 재현탁하였다.

항체 의존적 NK 세포사의 결정

MAb는 100 ㎍/ml 내지 0.001 ㎍/ml의 AIM-V 배지에서 10배 연속 희석되었다. 표적 세포(PLC/PRF/5; MacNab, et al., British Journal of Cancer, 34(5), 1976)를 환저 384웰 플레이트에서 23 ㎕ 중에 7.5 x 10³개의 세포/웰로 첨가하고, 이후 연속 희석된 항체를 각각의 웰(웰당 23 ㎕)에 첨가하고, 항체/세포 혼합물을 실온에서 10분 동안 항온처리하였다. 항온처리 후에, 10:1의 효과기 대 표적 비를 생성하도록 인간 NK 세포를 23 ㎕에서 7.5 x 10⁴/웰의 세포 밀도로 첨가하였다. 최대 용해(23 ㎕의 3% Triton x-100을 갖는 표적 세포를 함유) 및 자발적 용해(항체가 없는 표적 세포 및 효과기 세포를 함유)를 측정하기 위해 사용된 대조군 웰이 또한 포함되었다. 플레이트를 5% CO₂로 37℃에서 4시간 동안 항온처리하였다. 제조사의 지시에 따라 LDH 검출 키트를 사용하여 락테이트 탈수소효소(LDH) 방출을 측정함으로써 세포사를 결정하였다. 간단하게, 플레이트를 400 x g에서 4분 동안 원심분리하고, 35 ㎕의 상청액을 편평한 384웰 플레이트로 옮겼다. LDH 시약이 준비되고, 35 ㎕를 각각의 웰에 첨가하였다. 역동학적 프로토콜을 사용하여, 8분 동안 2분마다 1회 490 nm 및 650 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 하기 식을 적용함으로써 퍼센트 특이성 용해를 결정하였다: (특이적 방출 - 자발적 방출) / (최대 방출 - 자발적 방출) x 100.

항체 의존적 NK 세포 활성화의 결정

1차 NK 세포의 활성화는 동형접합성 고(V158 대립유전자) 또는 저(F158 대립유전자) 친화성 FcγRIIIa를 발현하기 위해 이전에 유전자형분석된 2명의 공여자로부터 새로 단리된 세포를 사용하여 시험되었다. (100 ㎍/ml 내지 0.0001 ㎍/ml의 AIM-V 배지에서 10배 연속 희석된) mAb의 연속 희석액을 4시간 동안 NK 세포와 항온처리하였다. NK 세포 활성에 대한 기능적 마커로서 항-CD107a mAb(항-CD107 PE, BioLegend, 사용된 희석된 1/35)에 의해 NK 세포를 염색함으로써 유세포분석법에 의해 NK 세포의 활성화를 측정하였다.

인간 FcγRIIIa의 항체 의존적 활성화의 결정

HBC34v35-MLNS 및 HBC34-V35-MLNS-GAALIE를 5 ㎍/ml 내지 0.076 ㎍/ml의 ADCC 검정 완충액에 4배 연속 희석하였다. 표적 항원(Engerix B로부터의 HBsAg, Glaxo SmithKline)을 25 ㎕에서 0.6 ㎍/ml에서 흰색 평평 바닥 96웰 플레이트에 첨가하고, 이후 연속 희석된 항체를 각각의 웰(웰당 25 ㎕)에 첨가하고, 항체/세포 혼합물을 실온에서 10분 동안 항온처리하였다. ADCC Bioassay에 대한 효과기 세포를 해동하고, 25 ㎕에서 7.5 x 10⁴/웰의 세포 밀도로 첨가하였다(최종 HBsAg 농도는 0.2 ㎍/ml였다). 플레이트(오직 ADCC 검정 완충액을 함유하는 웰)의 항체 독립적 활성화(항체를 함유하지 않지만 HBsAg 및 효과기 세포를 함유) 및 자발적 발광을 측정하기 위해 사용된 대조군 웰이 또한 포함되었다. 플레이트를 5% CO₂로 37℃에서 24시간 동안 항온처리하였다. 이 생물검정에서의 인간 FcγRIIIa(V158 또는 F158 변이체)의 활성화는 루시퍼라제 리포터 유전자의 NFAT 매개된 발현을 생성시킨다. 제조사의 지시에 따라 Bio-Glo-^TM 루시퍼라제 검정 시약을 사용하여 루미노미터에 의해 발광을 측정하였다. 데이터(즉, 특이적 FcγRIIIa 활성화)는 하기 식을 적용함으로써 배경에 대한 상대 발광 단위(RLU)의 평균으로서 표현된다: (mAb의 농도 x에서의 RLU - 배경의 RLU).

인간 FcγRIIa의 항체 의존적 활성화의 결정

HBC34v35-MLNS 및 HBC34-V35-MLNS-GAALIE를 50 ㎍/ml 내지 0.00013 ㎍/ml의 ADCP 검정 완충액에 5배 연속 희석하였다. 표적 항원(Engerix B로부터의 HBsAg)을 25 ㎕에서 0.6 또는 6 ㎍/ml에서 흰색 평평 바닥 96웰 플레이트에 첨가하고, 이후 연속 희석된 항체를 각각의 웰(웰당 25 ㎕)에 첨가하고, 항원/항체를 실온에서 25분 동안 항온처리하였다. FcγRIIa 활성화 생물검정에 대한 효과기 세포를 해동하고, 25 ㎕에서 50.0 x 10⁴/웰의 세포 밀도로 첨가하였다(최종 HBsAg 농도는 각각 0.2 0.2 또는 2 ㎍/ml였다). 플레이트(오직 ADCP 검정 완충액을 함유하는 웰)의 항체 독립적 활성화(항체를 함유하지 않지만 HBsAg 및 효과기 세포를 함유) 및 자발적 발광을 측정하기 위해 사용된 대조군 웰이 또한 포함되었다. 플레이트를 5% CO₂로 37℃에서 23시간 동안 항온처리하였다. 이 생물검정에서의 인간 FcγRIIa(H131 변이체)의 활성화는 루시퍼라제 리포터 유전자의 NFAT 매개된 발현을 생성시킨다. 제조사의 지시에 따라 Bio-Glo-^TM 루시퍼라제 검정 시약을 사용하여 루미노미터에 의해 발광을 측정하였다. 데이터(즉, 특이적 FcγRIIa 활성화)는 하기 식을 적용함으로써 배경에 대한 상대 발광 단위(RLU)의 평균으로서 표현된다: (mAb의 농도 [x]에서의 RLU - 배경의 RLU).

인간 FcγRIIb의 항체 의존적 활성화의 결정

HBC34v35-MLNS 및 HBC34-V35-MLNS-GAALIE를 100 ㎍/ml 내지 0.00026 ㎍/ml의 ADCP 검정 완충액에 5배 연속 희석되었다. 표적 항원(Engerix B로부터의 HBsAg)을 25 ㎕에서 3 ㎍/ml에서 흰색 평평 바닥 96웰 플레이트에 첨가하고, 이후 연속 희석된 항체를 각각의 웰(웰당 25 ㎕)에 첨가하고, 항원/항체를 실온에서 15분 동안 항온처리하였다. FcγRIIb 활성화 생물검정에 대한 효과기 세포를 해동하고, 25 ㎕에서 75.0 x 10⁴/웰의 세포 밀도로 첨가하였다(최종 HBsAg 농도는 1 ㎍/ml였다). 플레이트(오직 ADCP 검정 완충액을 함유하는 웰)의 항체 독립적 활성화(항체를 함유하지 않지만 HBsAg 및 효과기 세포를 함유) 및 자발적 발광을 측정하기 위해 사용된 대조군 웰이 또한 포함되었다. 플레이트를 5% CO₂로 37℃에서 20시간 동안 항온처리하였다. 이 생물검정에서의 인간 FcγRIIb의 활성화는 루시퍼라제 리포터 유전자의 NFAT 매개된 발현을 생성시킨다. 제조사의 지시에 따라 Bio-Glo-^TM 루시퍼라제 검정 시약을 사용하여 루미노미터에 의해 발광을 측정하였다. 데이터(즉, 특이적 FcγRIIb 활성화)는 하기 식을 적용함으로써 배경에 대한 상대 발광 단위(RLU)의 평균으로서 표현된다: (mAb의 농도 [x]에서의 RLU - 배경의 RLU).

인간 간종양 세포주 PLC/PRF/5에 대한 항체 결합의 결정

PLC/PRF/5 세포를 37℃에서 5분 동안 트립신화하고, 7 ml의 성장 배지에서 옮기고, 400 x g, 4분, 4℃에서 원심분리하고, PBS 중에 4℃에서 광범위하게 세척하였다. 일부 세포를 4% 파라포름알데하이드(4℃에서 20분)로 고정하고; 다른 것을 고정하고, 이후 투과 완충액(4℃에서 20분)으로 투과시켰다. 세포 펠릿을 2.64 ml의 세척 완충액(고정된 세포) 또는 투과 완충액(고정 및 투과 세포)에 재현탁하고(표 7), 96웰 환저 플레이트(100'000개의 세포/웰에 상응)로 200 ㎕/웰로 분배하였다. 플레이트를 400g, 4분, 4℃에서 원심분리하였다. 10 ㎍/ml의 최종 농도에서 시작하는 시험 항체의 연속 1:5의 5점 희석액을 세포 함유 웰에 첨가하고, 얼음에서 30분 항온처리하였다. 세척 완충액(고정 세포) 또는 투과 완충액(고정 및 투과 세포)에서 4℃, 400 x g, 4분에서 2회 세척 후, Alexa Fluor® 647 표지된 2차 항체(표 7)의 50 ㎕/웰을 세포에 첨가하고, 얼음에서 20분 동안 항온처리하였다. 세포를 세척 완충액(고정 세포) 또는 투과 완충액(고정 및 투과 세포)으로 2회 초과 세척하고, 세척 완충액(고정 세포) 또는 투과 완충액(고정 및 투과 세포)의 200 ㎕/웰에 재현탁하고, 신호(MFI, 평균 형광 강도)는 사이토플루오리미터(BD FACSCanto II)에 의해 정량화되었다.

결과

직접적인 항바이러스 기전은 생체내 HBV를 중화하는 데 중요하다. 면역 세포에서 Fc 영역과 Fc 감마 수용체(FcγRs)의 상호작용에 의해 매개된 작용의 간적적인 Fc 의존적 기전은 또한 생체내 효능에 그리고 내인성 면역 반응을 매개하는 데 중요한 기여를 가질 수 있다. FcγR에 대한 결합을 측정함으로써 시험관내에서뿐만 아니라 인간 FcγR의 항체 의존적 활성화에서 FcγR 의존적 기전이 평가될 수 있다(Hsieh, Y.-T., et al., Journal of Immunological Methods, 441(C), 56-66. doi.org/10.1016/j.jim.2016.12.002).

이 연구에서, HBC34v35-MLNS 및 HBC34-V35-MLNS-GAALIE는 생물층 간섭측정(BLI Octet System, ForteBio)을 사용하여 인간 FcγR의 완전 세트(FcγRIIIa V158 및 F158 대립유전자, FcγRIIa H131 및 R131 대립유전자 및 FcγRIIb)에 결합하는 이의 능력에 대해 나란히 비교되었다. 도 8a 내지 도 8e에 도시된 것처럼, MLNS-GAALIE 돌연변이를 보유하는 Fc는 FcγR과의 변경된 상호작용을 갖고; 구체적으로는, 이들 돌연변이를 보유하는 Fc는 FcγRIIIa 및 FcγRIIa에 대한 향상된 결합, 및 FcγRIIb에 대한 감소된 결합을 갖는다. 중요하게는, 생물층 간섭측정에 의해 C1q에 대한 HBC34-V35-MLNS-GAALIE의 결합은 무효화되었다(도 9).

HBC34-V35-MLNS 및 HBC34-V35-MLNS-GAALIE는 또한 세포 기반 리포터 바이오검정을 사용하여 인간 FcγRIIIa 및 FcγRIIa를 활성화하는 이의 능력에 대해 시험되었다. 이 검정은 인간 FcγR의 활성화를 반영하도록 NFAT 매개된 루시퍼라제 리포터에 의해 조작된 Jurkat 세포를 이용한다. HBC34v35-MLNS가 HBsAg의 존재 하에 인간 FcγRIIIa 및 FcγRIIa를 저조하게 활성화하거나 활성화하지 않지만, HBC34-V35-MLNS-GAALIE는 모든 시험된 FcγR의 용량 의존적 활성화를 나타냈다(도 10a 도 10b, 도 11a 및 도 11b). 그에 반해서, HBC34-V35-MLNS-GAALIE는 100 ㎍/ml에서 시험될 때에도 FcγRIIb를 활성화하지 않았다(도 12).

이형접합성 고(V158) 및 저(F158) 친화성 FcγRIIIa(F/V)를 발현하기 위해 이전에 유전자형분석된 1명의 공여자의 인간 말초 혈액 단핵 세포로부터 단리된 자연 살해 세포(NK)를 사용하여 ADCC 활성을 또한 측정하였다. 단리된 NK 세포는 HBC34v35; HBC34v35-MLNS; HBC34-V35-MLNS-GAALIE; 또는 다른 mAb(17.1.41, HBsAg의 항원 루프에서 다른 에피토프를 표적화; 문헌[Eren, R., et al., Hepatology, doi.org/10.1053/jhep.2000.9632; Galun, E., et al., Hepatology, doi.org/10.1053/jhep.2002.31867] 참조)에 대한 노출 시 간종양 세포주 PLC/PR/5의 사멸을 측정하도록 사용되었다. HBsAg 특이적 mAb HBC34v35, HBC34v35-MLNS, HBC34-V35-MLNS-GAALIE 및 17.1.41의 존재 하의 사멸이 관찰되지 않았다(도 13a). PLC/PR/5 세포의 항체 의존적 사멸의 관찰된 결여는 이들 세포의 표면에서 HBsAg의 저조한 발현과 관련되고(도 13b), 이는 이론에 의해 구속되고자 바라지 않으면서 NK 세포에 의한 사멸을 촉발하기에 충분하지 않을 수 있다. 그에 반해서, HBsAg의 높은 수준은 PLC/PR/5 세포가 고정되고 투과될 때 HBC34v35 및 17.1.41에 의해 검출되어서, HBsAg의 대부분이 세포내 또는 분비된 형태로(즉, 준바이러스 입자)로 발견된다는 것을 나타낸다(도 13b).

항-CD107a mAb를 사용하여 HBC34v35-MLNS 또는 HBC34-V35-MLNS-GAALIE 및 HBsAg의 존재 하의 1차 인간 NK 세포(V/F)의 활성화를 또한 조사하였다. 데이터는 도 14a 및 도 14b에 도시되어 있다.

이들 시험관내 데이터는 GAALIE Fc 돌연변이를 보유하는 본 발명의 HBV 특이적 결합 단백질이 비-GAALIE Fc 모 항체보다 더 효과적으로 저친화성 활성화 FcγRIIa 및 FcγRIIIa에 결합하고 이를 활성화한다는 것을 보여준다. GAALIE 보유 결합 단백질은 또한 저친화성 억제 FcγRIIb에 결합하지 않고 이를 활성화하지 않는다. GAALIE 보유 결합 단백질은 또한 C1q에 결합하지 않는다. 더욱이, GAALIE 보유 결합 단백질은 간종양 세포에서 ADCC를 촉진하지 않고, 가용성 HBsAg의 존재 하에 인간 NK 세포를 활성화한다.

실시예 9: HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 1상 임상 연구

다중센터 1상, 무작위화된, 위약 제어된 연구는 HBC34-v35-MLNS-GAALIE(서열번호 91에 기재된 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 93에 기재된 경쇄 아미노산 서열을 포함)의 안전성, 내약성, 약물동태학 및 항바이러스 활성을 평가하도록 수행된다. 연구 장소는 하기와 같다: A 파트(단일-센터) 및 B/C 파트(다중-센터).

A 파트(40명 이하의 대상체)에서, 1차 목적은 건강한 성인 대상체에서 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 안전성 및 내약성을 평가하는 것이다. 2차 목적은 건강한 성인 대상체에서 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 혈청 약물동태학(PK)을 규명하고, 건강한 성인 대상체에서 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 면역원성(항-약물 항체[ADA]의 유도)을 평가하는 것이다.

B 파트(56명 이하의 대상체) 및 C 파트(24명 이하의 대상체)에서, 1차 목적은 간경변이 없는 만성 HBV 감염을 갖는 성인 대상체에서 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 안전성 및 내약성을 평가하는 것이다. 2차 목적은 간경변이 없는 만성 HBV 감염을 갖는 성인 대상체에서 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 혈청 PK를 규명하는 것; 간경변이 없는 만성 HBV 감염을 갖는 성인 대상체에서 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 항바이러스 활성을 평가하는 것; 및 간경변이 없는 만성 HBV 감염을 갖는 성인 대상체에서 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 면역원성(ADA의 유도)을 평가하는 것이다. 탐색적 목적은 추가 바이러스 매개변수에 대한 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 효과를 평가하는 것; 간경변이 없는 만성 HBV 감염을 갖는 성인 대상체에서 면역 반응(또는 탐색적 바이오마커)에 대한 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 효과를 평가하는 것; 및 간경변이 없는 만성 HBV 감염을 갖는 성인 대상체에서 HBC34-v35-MLNS-GAALIE에 대한 반응에 대한 숙주 다형(또는 탐색적 바이오마커)의 영향을 평가하는 것을 포함한다.

평가를 위한 기준의 상세내용

A 파트에 대해, 이 연구의 1차 평가변수는 하기와 같다:

치료 응급 이상 사례(TEAE)의 발생

비제한적인 예로서 실험실 시험 결과를 포함하는 임상 평가

이 연구의 2차 평가변수는 하기와 같다:

HBC34-v35-MLNS-GAALIE 무혈청 PK 매개변수, 예를 들어 C_max, Clast, T_max, T_last, AUC_inf, AUC_last, %AUC_exp, t_1/2, λ_z, V_z(IV 단독), CL(IV 단독), V_z/F(SC 단독) 및 CL/F(SC 단독)

HBC34v-35-MLNS-GAALIE에 대한 ADA의 발생 및 (적용 가능한 경우) 역가

B/C 파트에 대해, 이 연구의 1차 평가변수는 하기와 같다:

TEAE의 발생

비제한적인 예로서 실험실 시험 결과를 포함하는 임상 평가

이 연구의 2차 평가변수는 하기와 같다:

HBC34-v35-MLNS-GAALIE 무혈청 및 총 PK 매개변수, 예를 들어 C_max, C_last, T_max, T_last, AUC_inf, AUC_last, %AUC_exp, t_1/2, λz, V_z/F 및 CL/F.

HBC34-v35-MLNS-GAALIE에 대한 ADA의 발생 및 (적용 가능한 경우) 역가

기준선으로부터의 혈청 HBsAg의 최대 감소(1일 예비용량)

이 연구의 탐색적 평가변수는 하기를 포함할 수 있다:

추가 바이러스 매개변수(예를 들어: HBV RNA 및 HBcrAg)의 평가

숙주 면역 반응의 분석

RNA-시퀀싱에 의해 결정된 것과 같은 숙주 인자의 분석

유전자형분석에 의해 결정된 것과 같은 Fc 감마 수용체(FcγR) 다형

유전자형분석에 의해 결정된 것과 같은 IgG 알로타이프

계획된 대상체의 수

A 파트: 40명 이하의 건강한 성인 대상체.

B 파트: HBeAg 음성이고 1000 IU/mL 미만의 HBsAg를 갖는 뉴클레오사(타)이드 역전사효소 억제제(NRTI) 치료에서 간경변을 갖지 않는 만성 HBV 감염을 갖는 56명 이하의 성인 대상체.

C 파트: 1000 IU/mL 이상의 HBsAg를 갖는 NRTI 치료에 대한 간경변을 갖지 않는 만성 HBV 감염을 갖는 24명 이하의 성인 대상체.

진단 및 주요 선정 기준

A 파트 선정 기준은 하기를 포함한다:

체중이 ≥ 40 kg 내지 ≤ 125 kg인 18세(또는 법적 동의 연령, 어느 것이든 많은 것) 내지 55세의 건강한 성인 대상체. 환자는 의학 병력(예를 들어, 고혈압, 고지질혈증, 위식도 역류 질환, 천식, 불안 및 우울증과 같은 만성 병태는 잘 제어되어야 함), 및 신체 검사, 12-리드 ECG, 활력 징후 및 실험실 값으로부터 임상적으로 유의미한 소견 없음으로부터 결정된 양호한 건강에 있다. 여성 대상체는 음성 임신 시험 또는 폐경 후 상태의 확인을 가져야 한다. 폐경 후 상태는 대안적인 의학 원인 없이 월경이 없는 12개월로 정의된다. 임신 가능성의 여성(WOCBP)은 스크리닝 시 음성 혈액 임신 시험 및 1일에 음성 소변 임신 시험을 가져야 하고, 모유 수유할 수 없고, 연구 약물 투여 전 14일 내지 연구 약물 투여 후 40일에 본원에 개시된 것과 같이 고도로 효과적인 피임 방법을 사용하려 해야 한다.

임신 가능성의 여성 파트너를 갖는 남성 대상체는 연구 약물 투여의 시간으로부터 연구 약물의 투여 후 40주까지 하기 피임 요건 중 1개를 충족할 것에 동의해야 한다: 무정자증의 문서기록을 갖는 정관절제술, 또는 남성 콘돔 사용과 함께 종종 고도로 효과적인 피임의 파트너 사용. 남성 대상체는 또한 연구 약물 투여의 시간으로부터 연구 약물 투여 후 40주에 걸쳐 정자를 제공하지 않을 것에 동의해야 한다. 환자는 연구의 기간 동안 혈액을 제공하는 것에 동의하지 않는다.

환자는 연구 요건을 준수하려고 하고, 서면 동의서를 제공할 수 있다.

B/C 파트 선정 기준은 하기를 포함한다:

1. 18세(또는 법적 동의 연령, 어느 것이든 많은 것) 내지 65세.

2. 만성 HBV 감염을 가지며 체중 ≥ 40 kg 내지 ≤ 125 kg(과거의 또는 현재의 실험실 문서기록에 기초하여 적어도 6개월 떨어진 2차례의 양성 혈청 HBsAg, HBV DNA 또는 HBeAg에 의해 정의됨(6개월 떨어져 수행된 이들 시험의 임의의 조합이 허용 가능함)).

3. 간경변 무.

4. 스크리닝 시에 적어도 2개월 동안 NRTI 치료 중이고, HBeAg 음성이다. NRTI 치료의 예는 테노포비어 디소프록실/테노포비어 알라페나마이드; 엔테카비르; 라미부딘; 아데포비어/아데포비어 디피복실을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.

5. 스크리닝 시 100 IU/mL 미만의 HBV DNA.

6. HBsAg > 검출 하한.

7. 스크리닝 시 1000 IU/mL 미만의 HBsAg (B 파트 단독).

8. 스크리닝 시 1000 IU/mL 이상의 HBsAg (C 파트 단독).

9. 스크리닝 시 HBeAg 음성 (B 파트 단독).

10. 스크리닝 시 음성 항-HB.

11. HBV에 의한 만성 감염 이외에, 의학 병력(예를 들어, 고혈압, 고지질혈증, 위식도 역류 질환, 천식, 불안 및 우울증과 같은 만성 병태는 잘 제어되어야 함), 및 신체 검사, 12-리드 ECG, 활력 징후 및 실험실 값으로부터 임상적으로 유의미한 소견 없음으로부터 결정된 양호한 건강에 있어야 한다.

12. 여성 대상체는 음성 임신 시험 또는 폐경 후 상태의 확인을 가져야 한다. 폐경 후 상태는 대안적인 의학 원인 없이 월경이 없는 12개월로 정의된다. 임신 가능성의 여성은 스크리닝 시 음성 혈액 임신 시험 및 1일에 음성 소변 임신 시험을 가져야 하고, 모유 수유할 수 없고, 연구 약물 투여 전 14일 내지 연구 약물 투여 후 40일에 고도로 효과적인 피임 방법을 사용하려 해야 한다.

13. 임신 가능성의 여성 파트너를 갖는 남성 대상체는 연구 약물 투여의 시간으로부터 연구 약물의 투여 후 40주에 걸쳐 하기 피임 요건 중 1개를 충족할 것에 동의해야 한다: 무정자증의 문서기록을 갖는 정관절제술, 또는 남성 콘돔 사용과 함께 WOCBP에 대해 피임에 대해 열거된 피임 옵션 중 1개의 파트너 사용(본원 참조). 남성 대상체는 또한 제1 연구 약물 투여의 시간으로부터 연구 약물의 투여 후 40일에 걸쳐 정자를 제공할 것에 동의해야 한다.

14. 연구 요건을 준수하려고 하고, 서면 동의서를 제공할 수 있음.

고도로 효과적인 것으로 여겨지는 산아 제한 방법은 하기를 포함한다:

배란 억제와 연관된 피임의 조합된 (에스트로겐 및 프로게스토겐 함유) 경구, 질내 또는 경피 호르몬 방법의 확립된 사용, 또는 배란 억제와 연관된 피임의 프로게스토겐 단독 경구, 주사용 또는 이식형 호르몬 방법의 확립된 사용. HBC34-v35-MLNS_GAALIE가 호르몬 피임 방법의 유효성에 영향을 줄지에 대해 현재 공지되지 않았고; 따라서, 연구에 걸쳐 및 연구 약물 투여 후 40주 동안 피임의 추가 형태(즉, 장벽 방법)를 사용할 것이 권고된다.

자궁내 장치의 배치.

자궁내 호르몬 방출 시스템의 배치.

남성 파트너의 수술 불임(사정액에서의 정자의 부재의 적절한 정관절제술후 문서기록을 가짐; 연구에서 여성 대상체에 대해, 정관절제된 남성 파트너는 그 대상체에 대한 유일한 파트너여야 함).

대상체의 바람직한 및 보통의 생활양식과 일치할 때 이성 접촉으로부터 진정한 성적 금욕. 주기적 금욕(예를 들어, 달력, 배란, 증상체온, 배란 후 방법) 및 중단은 허용 가능한 피임 방법이 아님. 금욕 대상체는 연구 동안 및 연구 약물 투여 후 40주 이하 동안, 또는 대상체가 연구를 따라가는 한(어떤 것이든 긴 것) 성 관계를 시작하면 상기 언급된 피임 방법 중 1개를 사용할 것에 동의해야 한다.

상기 기재된 것과 같은 호르몬 피임약과 조합된 장벽 방법.

폐경 후 상태는 대안적인 의학 원인 없이 월경이 없는 12개월로 정의된다.

임신 가능성의 여성 파트너를 갖는 남성 대상체는 연구 치료 투여의 시간으로부터 연구 약물 투여 후 40주까지 하기 피임 요건 중 1개를 충족할 것에 동의해야 한다.

무정자증의 문서기록을 갖는 정관절제술.

남성 콘돔과 함께 WOCBP(호르몬 피임제, 자궁내 장치)에 대한 피임을 위해 상기 열거된 피임 옵션 중 1개의 파트너 사용.

남성 대상체는 또한 마지막 연구 약물 투여 후 40주 동안 정자를 제공하지 않도록 동의해야 한다.

연구 참여의 기간

A 파트: 연구 약물 치료의 기간은 단일 용량이다. 각각의 대상체에 대한 스크리닝 및 추적관찰을 포함하는 연구에 대한 추정된 총 시간은 28주 이하이다.

B/C 파트: 연구 약물 치료의 기간은 단일 용량이다. 각각의 대상체에 대한 스크리닝 및 추적관찰을 포함하는 연구에 대한 추정된 총 시간은 44주 이하이다.

추적관찰의 기간

A 파트: 모든 대상체는 연구 약물 투여 후 24주 동안 따랐다.

B/C 파트: 모든 대상체는 연구 약물 투여 후 8주 동안 따랐다. 8주에 2배 초과의 HBsAg 감소를 갖는 대상체는 총 40주 이하 동안 또는 HBsAg의 감소가 2의 연속 수집에서 기준선에 비해 2배 미만일 때까지(어느 것이 처음에 발생하든) 연장된 추적관찰을 겪는다. 연장된 추적관찰은 생긴 데이터에 기초하여 중단될 수 있다.

연구 설계

안전성 검토 위원회(SRC: Safety Review Committee)는 연구에 걸쳐 수집된 이용 가능한 데이터에 기초하여 규정된 시점에 안전성, 내약성 및 항바이러스 활성 데이터(B 파트 및 C 파트 단독)의 계속되는 검토를 수행한다. 용량 상승 및 선택적 코호트의 등록에 대해 SRC에 의해 검토되는 1차 데이터가 프로토콜에 걸쳐 열거되어 있지만, 다른 코호트로부터의 추가 관련 데이터는 결정을 알리기 위해 표시된 것처럼 SRC에 의해 또한 검토된다.

3개의 파트에서 연구가 수행된다:

A 파트: 건강한 성인 대상체에 대한 피하(SC) 주사 또는 정맥내(IV) 점적을 통해 투여된 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 무작위화된, 이중 맹검, 위약 제어된, 단일 상승 용량(SAD) 연구.

B 파트: NRTI 치료 중인 간경변을 갖지 않는 만성 HBV 감염을 갖는 성인 대상체에 대한 SC 주사를 통해 투여된 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 무작위화된, 이중 맹검, 위약 제어된, SAD 연구는 HBeAg 음성이고, 1000 IU/mL 미만의 HBsAg를 갖는다.

C 파트: NRTI 치료 중이고 1000 IU/mL 이상의 HBsAg를 갖지 않는 간경변을 갖지 않는 만성 HBV 감염을 갖는 성인 대상체에 대한 SC 주사를 통해 투여된 HBC34v35-MLNS-GAALIE의 선택적, 무작위화된, 이중 맹검, 위약 제어된, SAD 연구.

전체 위험/이익 평가

건강한 성인 대상체에 대한 잠재적 위험은 치료제의 mAb 종류에 의해 관찰되고 HBC34-v35-MLNS-GAALIE에 특이적이지 않은 일반 안전성 위험: 아나필락시스 및 다른 중증 알레르기 반응 및 주사/점적 관련된 반응에 기초한다. 특이적으로 HBC34v35-MLNS-GAALIE에 의한 투약 후 이러한 병태를 발생시킬 위험은 공지되어 있지 않다.

연구의 A 파트는 HBC34v35-MLNS-GAALIE의 안전성 및 내약성에 대한 정보뿐만 아니라 PK 프로파일 및 항-약물 항체(ADA)의 생성에 대한 관련 데이터를 수집한다. HBC34-v35-MLNS-GAALIE는 이 연구의 A 파트에 등록된 건강한 대상체에 이익을 제공하는 것으로 예상되지 않는다. 대상체는 중요한 잠재적 위험에 대해 모니터링될 것이고, 일상적 면역감시 및 위험 최소화 활동이 수행될 것이다.

현재의 표준 치료에 걸쳐 만성 HBV 감염을 갖는 대상체에서 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 잠재적 이익은 하기와 같다:

혈청 HBsAg의 감소, HBV의 간내 확산의 억제, 감염된 간세포의 제거 및 HBV에 대한 적응 면역 반응의 자극.

잘 관용되고 유한 기간 동안 SC가 투여된 HBV 감염에 대한 범유전자형분석 치료(pangenotypic therapy).

아나필락시스, 다른 심각한 알레르기 반응 및 주사/점적 관련 반응 이외에, 만성 HBV 감염을 갖는 대상체에 대한 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 투여와 연관된 잠재적 위험은 면역 복합 질환 및 ADCC/ADCP를 통한 감염된 간세포 및/또는 백신 효과를 통해 유도된 세포독성 T 세포의 제거로 인한 간독성을 포함한다. B/C 파트의 연구 설계는 이들 위험을 완화하는 몇몇 요소를 포함한다:

B 파트는 면역 복합 질환 및 간독성에 대한 위험을 완화하도록 1000 IU/mL 미만의 혈청 HBsAg를 갖는 대상체를 등록한다. 추가적으로, B 파트 안전성 데이터는 연구의 선택적 C 파트에서 잠재적으로 더 높은 기준선 HBsAg 값을 갖는 대상체를 등록하기 전에 SRC에 의해 검토된다.

B 파트 및 C 파트는 NRTI 중에 있고, 스크리닝 시 100 IU/mL 미만의 HBV DNA를 갖고, 하기 속성에 의해 결정된 것처럼 기준선에서 양호한 간 예비력 및 낮은 수준의 간 염증을 갖는 대상체를 등록한다. ALT 또는 AST ≤ 2 × ULN, 간 대상부전의 무 병력 및 유의미한 섬유증 및 간경변의 결여.

2명의 선별 대상체는 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 또는 위약으로 1:1 무작위화되고 투여된다. 이들 선별 대상체는 투여 후 적어도 72시간에 걸쳐 모니터링되고, 조사자(들)가 안전성 우려를 갖지 않으면, 동일한 코호트에서의 남은 6명의 대상체가 투여된다(5개의 활성제 및 1개의 위약).

잠재적 면역 복합 질환 및 ADCC/ADCP를 통한 감염된 간세포 및/또는 백신 효과를 통해 유도된 세포독성 T 세포의 제거로 인한 간독성의 기대된 시기를 설명하도록 용량 투여 후 4주까지 이용 가능한 안전성 데이터의 SRC 검토 후 용량 상승이 발생한다.

간 기능 시험, 소변검사, 신장 기능, 활력 징후 및 신체 검사 소견을 포함하는 안전성 모니터링은 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 연관된 면역 이상 사례의 증거를 검출하도록 설계된다.

A 파트

A 파트에 대한 이 순차적인 코호트는 SC 주사에 의해 투여된 90 mg, 300 mg 이하 및 900 mg 이하를 평가한다. SRC는 용량 상승 전의 코호트 내의 모든 이용 가능한 대상체에 대해 투여 후 2주까지 이용 가능한 임상 및 실험실 안전성 데이터를 검토한다. A 파트에서의 2개의 선택적 코호트는 IV 점적에 의해 투여된 900 mg 및 3000 mg 이하를 평가하여 추가될 수 있다. 코호트 3a(900 mg 이하의 SC)에서 모든 이용 가능한 대상체로부터의 이용 가능한 2주 데이터의 SRC 검토 후 이들 선택적 코호트의 등록이 발생할 수 있다.

A 파트에서의 모든 SC 코호트(코호트 1a, 2a, 및 3a)가 순차적으로 등록되지만, 추가 코호트(들)가 A 파트에서 이전의 코호트에서 허용 가능한 안전성 및 내약성 프로파일을 갖는 것으로 과거에 발견된 용량 수준이거나 이보다 낮은 용량 수준을 조사하면 코호트가 병렬로 등록될 수 있다.

각각의 코호트에서, 2명의 선별 대상체는 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 또는 위약을 받도록 1:1 무작위화된다. 이들 대상체는 입원환자 환경에서 적어도 24시간 동안 투여되고 모니터링되고; 조사자가 안전성 우려를 갖지 않으면, 동일한 코호트에서의 대상체의 나머지가 투약된다. 남은 대상체는 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 또는 위약을 받도록 5:1 무작위화된다.

A 파트에서의 최대 용량 상승 인자는 5배를 초과하지 않는다.

B 파트

B 파트에서의 제1 코호트(코호트 1b)는 코호트 1a(90 mg SC)에서의 모든 이용 가능한 대상체로부터의 이용 가능한 2주 데이터의 SRC 검토 후 등록된다.

5개의 코호트는 SC 주사에 의해 투여된 6 mg(코호트 1b), 18 mg(코호트 2b), 75 mg 이하(코호트 3b), 300 mg 이하(코호트 4b) 및 900 mg 이하(코호트 5b)를 평가하는 B 파트에 대해 계획된다. SRC는 용량 상승 전의 이전의 코호트 내의 모든 이용 가능한 대상체에 대해 투여 후 4주까지 이용 가능한 임상 및 실험실 안전성 데이터 및 항바이러스 활성 데이터를 검토한다.

B 파트에서의 2개의 선택적 코호트는 동일한 투약 스케줄 후에 추가될 수 있다. 선택적 코호트는 계획된 B 파트 코호트에서 탐구된 용량 수준에 비해 더 낮은, 동등한 또는 중간 용량 수준에서, 또는 900 mg을 초과하지 않는 용량 수준에서 코호트 5b 후에 투여될 수 있다. B 파트에서의 선택적 코호트에 대한 최대 용량 수준은 A 파트에서 허용 가능한 안전성 및 내약성 프로파일을 갖는 것으로 발견된 가장 높은 단일 용량을 초과하지 않는다. 선택적 코호트는 SRC의 허가에 기초하여 B 파트 계획된 코호트 내에 임의의 시간에 등록된다.

B 파트에서의 모든 코호트가 순차적으로 등록되지만, 추가 코호트(들)가 A 파트 및 B 파트에서 이전의 코호트에서 허용 가능한 안전성 및 내약성 프로파일을 갖는 것으로 과거에 발견된 용량 수준이거나 이보다 낮은 용량 수준을 조사하면 코호트가 병렬로 등록될 수 있다.

각각의 코호트에서, 2명의 선별 대상체는 SC 주사에 의해 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 또는 위약을 받도록 1:1 무작위화된다. 이들 대상체는 투여 후 적어도 72시간에 걸쳐 투여되고 모니터링되고(적어도 처음 24시간에 걸쳐 모니터링하는 입원환자를 포함); 조사자(들)가 안전성 우려를 갖지 않으면, 동일한 코호트에서의 대상체의 나머지가 투약된다. 남은 대상체는 SC 주사에 의해 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 또는 위약을 받도록 5:1 무작위화된다.

B 파트에서의 최대 용량 상승 인자는 5배를 초과하지 않는다.

C 파트

C 파트는 선택적이고, B 파트에서 1000 IU/mL 미만의 HBsAg 수준을 갖는 HBeAg 음성 대상체에서 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 허용 가능한 안전성 및 내약성 프로파일에 기초하여 수행될 수 있다. C 파트에서의 제1 코호트는 C 파트에서 제안된 출발 용량 수준과 일치하는 또는 이에 비해 더 높은 용량을 받는 B 파트에서의 대상체의 코호트에 대해 4주 방문에 걸쳐 A 파트 및 B 파트에서의 모든 대상체에 대한 이용 가능한 데이터의 SRC 검토 후 등록된다.

3개의 선택적 코호트는 C 파트에서 등록될 수 있다. 각각의 코호트는 SC 주사에 의해 투여된 900 mg 이하를 평가할 수 있고, C 파트 코호트에서 사용된 용량은 SRC에 의해 허용 가능한 안전성 및 내약성 프로파일을 갖는 것으로 발견된 B 파트에서의 가장 높은 용량 수준을 초과하지 않는다. 코호트는 병렬로 등록될 수 있다.

각각의 코호트에서, 2명의 선별 대상체는 SC 주사에 의해 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 또는 위약을 받도록 1:1 무작위화된다. 이들 대상체는 투여 후 적어도 72시간에 걸쳐 투여되고 모니터링되고(적어도 처음 24시간에 걸쳐 모니터링하는 입원환자를 포함); 조사자(들)가 안전성 우려를 갖지 않으면, 동일한 코호트에서의 대상체의 나머지가 투약된다. 남은 대상체는 SC 주사에 의해 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 또는 위약을 받도록 5:1 무작위화된다.

연구 절차

A 파트

스크리닝

건강한 성인 대상체는 A 파트에서 5개의 코호트(3개 계획된, 2개 선택적) 중 1개에 등록될 것이다. 스크리닝은 1일 방문 전 4주 이하에 수행되고, 서면 동의서, 적격성의 결정, 인구학 및 의학 병력의 수집, 신체 검사, 활력 징후, 실험실 시험, 12-리드 심전도(ECG) 및 평가 스케줄(SoA)에 따른 다른 평가를 포함한다.

적격인 대상체는 -1일 또는 1일에 임상 조사 장소에 허가된다. 1일에, 활력 징후, 임신 시험, 남용 약물, 헌혈, 임의의 임상적으로 유의미한 급성 병태의 존재 및 처방의 사용, OTC, 약초 또는 조사 물질과 관련된 적격성 기준은 연구에 대한 계속 중인 적격성을 보장하도록 평가된다. 어떠한 의학 병력 변경이 또한 평가되고 기록된다. 각각의 코호트에서 적격인 대상체는 연구 약물 투여 전에 48시간 내에 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 또는 위약을 받도록 무작위화된다. 대상체는 1일에 연구 약물(HBC34-v35-MLNS-GAALIE 또는 위약)의 단일 용량을 받는다.

스크리닝 활동과 관련된 이상 사례(AE)은 동의 시부터 앞으로 수집되고; 스크리닝 기간 동안 발생한 임의의 다른 사건은 의학 병력으로 기록된다. 동의 시부터 앞으로의 모든 심각한 이상 사례(SAE)이 수집된다.

스크리닝 바이러스 혈청학 매개변수는 하기와 같다: HIV, HCV 및 HBV에 의한 활동 감염

투약일(1일)

적격인 대상체는 1일에 연구 약물 투여 전에 48시간 내에 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 또는 위약을 받도록 무작위화된다.

적격인 대상체는 연구 약물의 단일 용량을 받고, 이용 가능한 평가는 1일에 수행된다.

각각의 코호트의 시작 시, 2명의 선별 대상체는 HBC34v-35-MLNS-GAALIE 또는 위약으로 1:1 무작위화된다. 이들 대상체는 입원환자 환경에서 적어도 24시간 동안 투여되고 모니터링된다. 활력 징후, ECG, 증상 지정 신체 검사(들) 및 AE는 조사자에 의해 검토되고; 조사자가 안전성 우려를 갖지 않으면, 동일한 코호트에서의 대상체의 나머지가 투약된다. 코호트에서의 남은 대상체는 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 또는 위약의 단일 용량을 받도록 5:1 무작위화된다. 모든 대상체는 용량 투여 후 면밀히 모니터링된다.

추적관찰 기간

2일에 모든 연구 평가가 수행된 후 대상체는 퇴거한다. 모든 후속 연구 방문은 외래환자이다.

대상체는 비제한적인 예로서 신체 검사, 활력 징후, 실험실 시험, PK 평가 및 AE의 검토 및 24주에 걸친 동반 약제를 포함하는 SoA에 따른 직접 평가를 위해 임상 조사 장소로 돌아간다.

B/C 파트

스크리닝

스크리닝은 1일 방문 전 4주 이하에 수행되고, 서면 동의서, 적격성의 결정, 인구학 및 의학 병력의 수집, 신체 검사, 활력 징후, 실험실 시험, 12-리드 ECG 및 SoA에 따른 다른 평가를 포함한다. 스크리닝 활동과 관련된 이상 사례는 동의 시부터 앞으로 수집되고; 스크리닝 기간 동안 발생한 임의의 다른 사건은 의학 병력으로 기록된다. 동의 시부터 앞으로의 모든 SAE가 수집된다.

2개월 초과 동안 NRTI 치료 중인 간경변을 갖지 않고 1000 IU/mL 미만의 HBsAg를 갖는 HBeAg 음성 만성 HBV 감염을 갖는 성인 대상체는 B 파트에서 7개의 코호트(5개 계획된, 2개 선택적) 중 1개에 등록된다. 1일 방문 전에 4주 이하에 대상체 스크리닝이 발생한다. 대상체는 -1일 또는 1일에 임상 조사 장소에 허가된다. 1일에, NRTI 고수, 활력 징후, 임신 시험, 임의의 임상적으로 유의미한 급성 병태의 존재, 간 대상부전 및 처방의 사용, OTC, 약초 또는 조사 물질과 관련된 적격성 기준은 계속 중인 적격성을 보장하도록 평가된다. 어떠한 의학 병력 변경이 또한 평가되고 기록된다. 각각의 코호트에서 적격인 대상체는 1일에 연구 약물 투여 전에 48시간 내에 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 또는 위약을 받도록 무작위화된다.

간경변의 존재를 배제하기 위해, B 파트 및 C 파트에서의 대상체는 파이브로스캔 평가를 갖는다. 이는 대상체가 스크리닝 전 6개월에 파이브로스캔 또는 Metavir F3 섬유증 또는 F4 간경변의 부재를 확인한 스크리닝 전년도에 간 생검을 갖는지에 대해 수행될 필요가 없다.

스크리닝 바이러스 혈청학 매개변수는 하기와 같다: HIV, HCV 및 델타 간염 바이러스에 의한 활동 감염. 양성 HCV 혈청학 결과를 갖는 대상체는 적격성을 결정하기 위한 HCV-RT PCR 반사 시험을 가질 수 있다.

만성 HBV 감염은 스크리닝 시 결정될 것이고, 하기와 같이 정의된다: 과거의 또는 현재의 실험실 문서기록에 기초하여 적어도 6개월 떨어진 2차례의 양성 혈청 HBsAg, HBV DNA 또는 HBeAg에 의해 정의됨(6개월 떨어져 수행된 이들 시험의 임의의 조합이 허용 가능함).

투약일(1일)

적격인 대상체는 1일에 연구 약물 투여 전에 48시간 내에 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 또는 위약을 받도록 무작위화된다.

대상체는 1일에 임상 조사 장소에 허가된다.

적격인 대상체는 연구 약물의 단일 용량을 받고, 이용 가능한 평가는 1일에 수행될 것이다.

각각의 코호트의 시작 시, 2명의 선별 대상체는 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 또는 위약으로 1:1 무작위화된다. 이들 대상체는 투여 후 적어도 72시간에 걸쳐 투여되고 모니터링되고(적어도 처음 24시간에 걸쳐 모니터링하는 입원환자를 포함); 조사자(들)가 안전성 우려를 갖지 않으면, 동일한 코호트에서의 대상체의 나머지가 투약된다. 활력 징후, 증상 지정 신체 검사(들) 및 AE는 임의의 추가 대상체에 대한 투여 전에 조사자에 의해 검토된다. 코호트에서의 남은 대상체는 항체 조성물 또는 위약의 단일 용량을 받도록 5:1 무작위화된다. 모든 대상체는 용량 투여 후 면밀히 모니터링된다.

추적관찰 기간

2일에 모든 연구 평가가 수행된 후 대상체는 퇴거한다. 모든 후속 연구 방문은 외래환자이다.

대상체는 비제한적인 예로서 신체 검사, 활력 징후, 실험실 시험, PK 평가, 효능 평가 및 AE의 검토 및 8주에 걸친 동반 약제를 포함하는 SoA에 따른 평가를 위해 임상 조사 장소로 돌아간다.

연장된 추적관찰 기간

8주에 2배 초과의 HBsAg 감소를 갖는 대상체는 40주에 걸쳐 또는 HBsAg의 감소가 2의 연속 수집에서 기준선에 비해 2배 미만일 때까지(어느 것이 처음에 발생하든) SoA에 따른 직접 평가를 위해 임상 조사 장소로 돌아간다. 연장된 추적관찰은 생긴 데이터에 기초하여 중단될 수 있다.

산물, 투여량 및 투여 방식

HBC34v35-MLNS-GAALIE는 150 mg/mL의 농도로 주사용 멸균수(USP)로 재구성되고 SC 주사 또는 IV 점적으로서 투여되는 동결건조 고체로서 제공된다. 단위 용량은 부피 및 투여 방법에 기초한다. 주사용 멸균수, USP에 의한 150 mg/mL로의 재구성 시, 투여된 것과 같은 약물 산물은 pH 6에서 20 mM 히스티딘, 7% 수크로스, 0.02% PS80을 함유한다. 위약은 IV 점적 또는 SC 주사를 위한 멸균의 보존제무 노르말 식염수 0.9% 용액이다.

코호트 1a: HBC34v35-MLNS-GAALIE, SC 주사에 의해 투여된 90 mg의 단일 용량

코호트 2a: HBC34v35-MLNS-GAALIE, SC 주사에 의해 투여된 300 mg 이하의 단일 용량

코호트 3a: HBC34v35-MLNS-GAALIE, SC 주사에 의해 투여된 900 mg 이하의 단일 용량

코호트 4a(선택적): HBC34v35-MLNS-GAALIE, IV 주입에 의해 투여된 900 mg 이하의 단일 용량

코호트 5a(선택적): HBC34v35-MLNS-GAALIE, IV 주입에 의해 투여된 3000 mg 이하의 단일 용량

코호트 1b: HBC34v35-MLNS-GAALIE, SC 주사에 의해 투여된 6 mg의 단일 용량

코호트 2b: HBC34v35-MLNS-GAALIE, SC 주사에 의해 투여된 18 mg의 단일 용량

코호트 3b: HBC34v35-MLNS-GAALIE, SC 주사에 의해 투여된 75 mg 이하의 단일 용량

코호트 4b: HBC34v35-MLNS-GAALIE, SC 주사에 의해 투여된 300 mg 이하의 단일 용량

코호트 5b: HBC34v35-MLNS-GAALIE, SC 주사에 의해 투여된 900 mg 이하의 단일 용량

코호트 6b(선택적): HBC34v35-MLNS-GAALIE, SC 주사에 의해 투여된 900 mg 이하의 단일 용량

코호트 7b(선택적): HBC34v35-MLNS-GAALIE, SC 주사에 의해 투여된 900 mg 이하의 단일 용량

코호트 1c(선택적): HBC34v35-MLNS-GAALIE, SC 주사에 의해 투여된 900 mg 이하의 단일 용량

코호트 2c(선택적): HBC34v35-MLNS-GAALIE, SC 주사에 의해 투여된 900 mg 이하의 단일 용량

코호트 3c(선택적): HBC34v35-MLNS-GAALIE, SC 주사에 의해 투여된 900 mg 이하의 단일 용량

B 파트: 만성 HBV 감염을 갖는 대상체에서의 단일 상승 용량 연구

B 파트에서, 만성 HBV 감염을 갖는 대상체는 연구 약물의 단일 용량을 받는다. 만성 HBV 감염을 갖는 대상체에서 HBsAg인 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 치료학적 표적의 존재는 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 투여의 잠재적 위험을 변경한다. 잠재적 위험은 항원-항체 복합체의 형성으로 인한 면역 복합 질환 및 ADCC/ADCP를 통한 감염된 간세포의 제거 및/또는 "백신 효과"로 인한 간독성을 포함한다. 대상체에 대한 위험을 최소화하기 위해, B 파트는 NRTI 중에 있고, 스크리닝 시 100 IU/mL 미만의 HBV DNA를 갖고, 섬유증/간경변의 결여 및 ALT < 2 × ULN에 의해 결정된 것과 같은 낮은 수준의 간 염증 및 양호한 간 예비력을 갖는 대상체에서 수행될 것이다.

B 파트에 대해 5개의 용량 수준 코호트가 사용된다. 용량은 단계별로 대략 3배 내지 4배의 인자만큼 SC 주사에 의해 투여된 900 mg의 최대 계획 용량으로 증가한다:

2개의 선택적 코호트는 SC 주사에 의해 투여된 900 mg의 최대 용량까지 등록된다. 코호트 7b는 비제한적인 예로서 이용 가능한 시간 및 이용 가능한 장소에서 선택 부위에서 면역 반응 샘플 및 간 미세 침 흡입액 샘플의 수집 및 평가의 목적을 위해 등록될 수 있다. 이 용량 수준은 전임상 동물 모델 및 번역 PK/PD 모델링에 기초하는데, 이는 2 내지 15 mg/kg의 범위의 용량에 대한 상당한 HBsAg 감소를 예측한다. B 파트에 대한 용량 상승 계획에 대한 상세내용은 표 9에서 발견될 수 있다.

선택적 C 파트: 만성 HBV 감염을 갖는 대상체에서의 단일 상승 용량 연구

1000 IU/mL 이상의 기준선 HBsAg 수준을 갖는 대상체에서 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 안전성, 내약성 및 항-바이러스 활성을 평가하기 위해, HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 안전성, 내약성 및 항바이러스 활성이 B 파트에서 1000 IU/mL 미만의 HBsAg를 갖는 HBeAg 음성 대상체에서 확립된 후 선택적 C 파트를 수행한다. C 파트는 3개의 선택적 용량 수준 코호트로 이루어지는데, 각각은 SC 주사에 의해 투여된 900 mg 이하의 용량을 평가한다. 표 10. C 파트에서의 선택적 코호트의 하나 이상은 비제한적인 예로서 이용 가능한 시간 및 이용 가능한 장소에서 선택 부위에서 면역 반응 샘플 및 간 미세 침 흡입액 샘플의 수집 및 평가의 목적을 위해 등록될 수 있다.

기준 치료, 투여량 및 투여 방식:

위약으로 무작위화된 대상체는 SC 주사(A 파트, B 및 C) 또는 IV 점적(A 파트 단독)에 의해 멸균의 보존제무 노르말 식염수 0.9% 용액이 투여된다.

국소 내약성

모든 연구 파트에 대해, 국소 내약성 평가는 평가 스케줄에 따라 수행된다(SC 주사에 의해 연구 약물을 받는 대상체에 대한 도면). 주사 부위(들)는 차후의 관찰을 위해 마킹되고 맵핑될 것이고, 문서기록되어야 한다. 주사 부위(들)는 통증/압통, 종창, 발적, 타박상 및 소양감에 대해 모니터링되어야 한다.

A 파트에 대한 국소 내약성 평가의 시기는 도 15a 내지 도 15c에 도시되어 있다. B/C 파트에 대한 국소 내약성 평가의 시기는 도 16a 내지 도 16e에 도시되어 있다.

조사자의 판단으로, 비예정된 방문은 임의의 해소되지 않은 국소 내약성 증상의 추적관찰에 대해 필요한 대로 허용된다.

남용 약물에 대한 스크리닝

연구의 A 파트, B 파트 및 C 파트에 대해, 남용 스크리닝의 약물에 대해 뇨를 수집한다. 패널은 페타민, 코카인, 메타돈 및 오피에이트를 포함한다.

약물동태학적 평가

HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 농도를 평가하도록 혈액 샘플이 수집될 것이다. 연구의 A 파트에 대한 HBC34-v35-MLNS-GAALIE PK 분석에 대한 샘플의 수집을 위한 시점이 본원에 제공된다. 연구의 B 파트 및 C 파트에 대한 HBC34-v35-MLNS-GAALIE PK 분석에 대한 샘플의 수집을 위한 시점이 본원에 제공된다.

약물동태학적 분석

A 파트

표준 비구획 방법을 사용하여 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 유리 PK 매개변수가 산출된다. 매개변수는 혈청: C_max, C_last, T_max, T_last, AUC_inf, AUC_last, %AUC_exp, _t1/2, λ_z, V_z(IV 단독), CL(IV 단독), V_z/F(SC 단독) 및 CL/F(SC 단독)를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 필요한 바대로 다른 매개변수가 계산된다.

B/C 파트

표준 비구획 방법을 사용하여 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 유리 및 총 PK 매개변수가 산출된다. 매개변수는 혈청: C_max, C_last, T_max, T_last, AUC_inf, AUC_last, %AUC_exp, t_1/2, λz, V_z/F, and CL/F를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 필요한 바대로 다른 매개변수가 계산된다.

PK 매개변수와 선택된 항바이러스 변수 사이의 노출-반응 관계를 탐구하도록 PK/약물동태학적 분석이 수행된다.

항바이러스 활성 분석

B 파트 및 C 파트에 대해, HBC34-v35-MLNS-GAALIE, 예컨대 HBsAg, 항-HBs, HBeAg, 항-HBe, HBV RNA, HBcrAg 및 HBV DNA 수준의 항바이러스 활성과 관련된 선택된 데이터가 기준선으로부터의 상응하는 변경과 함께 코호트 및 연구 방문에 의해 요약되어 있다(n, 평균, SD, 중앙치, Q1, Q3, 최소 및 최대). HBsAg 소실(2개의 별개의, 연속 세션에서 측정된 검출 불가능한 HBsAg로서 정의됨, 적어도 2주 떨어짐)의 요약(대상체의 수 및 백분율)은 코호트 및 연구 방문에 의해 제공된다.

면역원성

평가 스케줄에 정의된 시점에 따라 적용 가능한 경우 항-약물 항체(ADA)의 존재/부재 및 역가를 결정하기 위해 면역원성 반응의 분석을 위해 혈액 샘플이 수집된다(도 15a 내지 도 16e). 적절한 바대로 HBC34-v35-MLNS-GAALIE(NAb)의 중화 가능성에 대해 샘플을 규명한다.

스크리닝 바이러스 매개변수, 항바이러스 활성 및 내성 관리의 평가

B 파트 및 C 파트 동안, 스크리닝 바이러스 매개변수의 평가는 HBsAg, 항-HBs, HBeAg(정성적) 및 HBV DNA를 포함한다.

스크리닝 후 수행된 항바이러스 활성의 평가는 HBsAg, 항-HBs, HBeAg(정성적; 스크리닝 시 HBeAg 정성적 양성인 C 파트 대상체에 대해 오직 수집되어야 함), HBeAg(정량적; 스크리닝 시 HBeAg 정성적 양성인 C 파트 대상체에 대해 오직 수집되어야 함), 항-HBe, HBV RNA, B형 간염 코어 관련 항원(HBcrAg) 및 HBV DNA를 포함한다.

연구 약물을 받은 모든 대상체에 대해 NRTI 또는 HBC34-v35-MLNS-GAALIE에 대한 내성의 잠재적 발생을 모니터링하기 위한 내성 관리가 수행된다. 2의 연속 연구 방문에서 측정된 500 IU/mL 이상의 HBV DNA에 의해 정의된 것과 같은 확인된 HBV DNA 돌파를 갖는 대상체, 또는 500 IU/mL 이상의 HBV DNA를 갖는 연구에서 일찍 중단한 대상체에서 HBV 게놈 시퀀싱이 시도된다. 방문 시 공지되지 않는 것처럼, 대상체가 바이러스학적 돌파를 가지면, SOA에 기재된 모든 연구 방문에서 내성 관리를 위한 샘플이 수집된다. 내성 관리에 수집된 샘플은 바이러스 시퀀싱을 포함하는 추가 바이러스 분석을 수행하도록 사용될 수 있다.

면역 반응의 평가

감염의 숙주 면역 반응 및 가능한 바이오마커를 조사하기 위해, 대상체는 선택적 하위연구에 동의할 수 있고, 여기서 (미세 침 흡입을 통해) 간 면역 샘플을 갖거나 갖지 않는 말초 면역 샘플은 도 15a 내지 도 16e에 개괄된 시점에 수집될 것이다. 이 선택적 하위연구 및 연관된 평가는 이용 가능한 시간 및 이용 가능한 장소에서 선택 부위에서 수행된다.

Fc 감마 수용체(FcγR) 유전자형분석 및 면역글로불린 알로타이핑

FcγR 유전자형분석 및 면역글로불린 알로타이핑에 대한 혈액 샘플은 Fc-감마 수용체 다형 또는 면역글로불린 알로타이프와 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 항바이러스 활성 사이의 가능한 연관을 평가하도록 B 파트 및 C 파트에서 모든 대상체에 대한 기준선으로서 수집된다.

통계 방법

통계 분석은 주로 서술적이다. 모든 연구 데이터는 본 데이터 목록에 의해 제시된다. 모든 연구 파트에 대해, 요약 표는 HBC34-v35-MLNS-GAALIE 및 위약에 대해 코호트에 의한 결과를 제시하고, 여기서 위약 대상체는 각각의 파트에 대한 투여의 경로에 의해 용량 코호트에 걸쳐 조합된다.

이 연구는 헬싱키 선언에서 이의 기원을 갖고, 우수 임상 운영기준(GCP) 및 필수 문서의 파일보관을 포함하는 허용 가능한 규제 요건에 일치하는 윤리 원칙에 따라 수행된다.

이 실시예에서의 용어의 약어 및 정의의 목록

ADA 항-약물 항체

AE 이상 사례

ALT 알라닌 아미노전이효소

ANC 절대 호중구 수

AP 알칼리 포스파타제

AST 아스파르테이트 아미노전이효소

AUC 곡선 하 면적

BLQ 정량 하한

BMI 체질량지수

BUN 혈액 요소 질소

CLcr 크레아티닌 청소율

CRF 증례 보고 양식

CTCAE 이상 사례에 대한 일반 용어 기준

DNA 데옥시리보핵산

ECG 심전도

eCRF 전자 증례 보고 양식

EF 추적관찰 종료

ET 치료 종료

FDA 식품의약청

GCP 우수 임상 운영기준

GGT 감마 글루타밀 전환효소

GLP 우수 실험실 운영기준

GNA 글리콜 핵산

HBcrAg B형 간염 코어 관련 항원

HBeAg B형 간염 e-항원

HBIG B형 간염 면역 글로불린

HBsAg B형 간염 표면 항원

HBV B형 간염 바이러스

HCC 간세포 암종

HED 인간 동등 용량

Hgb 헤모글로빈

ICF 피험자 동의서

ICH 국제 조화 회의

IgG 면역글로불린 G

IgM 면역글로불린 M

IEC 독립 윤리 의원회

INR 국제 표준화 비율

IRB 기관 감시 위원회

IV 정맥내

IWRS 양방향 웹 응답 시스템

LDH 락테이트 탈수소효소

LLN 정상 하한

LLOQ 정량화 하한

LLT 최하위 요건

mAb 단일클론 항체

MedDRA 조절 활동에 대한 의학 사전

Nab 중화 항체

NOAEL 관찰되지 않은 불리한 영양 수준

OTC 일반의약품

PK 약물동태학

PT 바람직한 요건

Q1 제1 사분위수

Q3 제3 사분위수

RBC 적혈구(계수치)

RNA 리보핵산

SAD 단일 상승 용량

SAE 심각한 이상 사례

SC 피하

SD 표준 편차

SoA 평가 스케줄

SOC 시스템 장기 종류

SRC 안전성 검토 위원회

SUSAR 의심된 예상치 못한 심각한 불리한 반응

TCR 조직 교차 반응성

TEAE 치료 응급 이상 사례

US 미국

ULN 정상 상한

WBC 백혈구(계수치)

WHO 세계 보건 기구

WOCBP 임신 가능성의 여성

실시예 10: HBsAg:HBC34-v35 항체 면역 복합체에 의한 수지상 세포의 활성화

HBV+ 환자(공급자: BioIVT)의 혈청에서 HBC34-V35-MLNS_GAALIE(HC 서열번호 91, LC 서열번호 93) 또는 HBC34-V35_MLNS(HC 서열번호 92, LC 서열번호 93) 및 HBsAg에 의해 형성된 면역 복합체(IC)의 존재 하의 단핵구 유래된 (mo) DC의 활성화를 시험하였다. 재료 및 방법:

CD14+ 단핵구를 건강한 공여자(n=2)로부터의 인간 PBMC로부터 단리하였고, 6일 동안 RPMI 1640, 10% FBS(Hyclone), 1% 비필수 아미노산, 1% 글루타민, 1% Pen/Strep, 1% 피부르산나트륨, 50 μM β-머캅토에탄올, 50 ng/mL의 GM-CSF(Miltenyi) 및 1000U/mL의 IL-4(R&D)에서 배양하였다. 이후 구별된 미성숙 단핵구 유래된 DC(moDC)를 HBsAg 단독(1890 및 4460 IU/ml에서의 2명의 환자 혈청의 최종 250 IU/ml로 희석됨), HBsAg 및 HBC34-v35-MLNS 또는 HBC34-v35-MLNS_GAALIE의 IC(20 내지 100 ㎍/ml에서의 mAb) 또는 mAb 단독에 의해 22시간 동안 자극하였다. 시약은 내독소가 없도록 시험되었다. 유세포분석법을 통해 CD83 및 CD86인 공자극 마커 및 HLA-DR의 표면 발현을 측정하였다. Meso Scale Diagnostics(MSD) V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Human Kit를 사용하여 열개(10)의 인간 전염증성 사이토카인(IFNγ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13 및 TNFα)의 수준을 측정하였다. 음성 대조군으로서 배양 배지를 사용하였다. LPS(Sigma, 100 ng/ml)는 양성 대조군으로서 작용하였다.

데이터는 도 20 내지 도 24b에 도시되어 있다. HBsAg와 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 면역 복합체(IC)는 moDC의 표면에 대한 CD83 및 CD86인 공자극 마커뿐만 아니라 HLA-DR의 상향조절을 유도하였다. 게다가, HBsAg와 HBC34-v35-MLNS-GAALIE의 IC는 moDC가 사이토카인 TNFα, IL-6 및 IL-10을 분비하도록 유도하였다.

본 명세서에 또는 첨부된 출원 데이터 시트에 언급된 미국 특허, 미국 특허 출원 공보, 미국 특허 출원, 외국 특허, 외국 특허 출원 및 비특허 공보의 모두는 본 출원과 불일치하지 않는 정도로 이의 전체가 본원에 참고로 포함된다.

2019년 8월 29일에 출원된 미국 가출원 제62/893,742호는 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.

상기로부터, 본 발명의 구체적인 실시형태가 예시의 목적을 위해 본원에 기재되어 있지만, 본 발명의 정신 및 사상으로부터 벗어나지 않으면서 다양한 변형이 이루어질 수 있다는 것이 자명해질 것이다. 따라서, 본 발명은 첨부된 청구항에 의해서를 제외하고는 제한되지 않는다.

<110> Vir Biotechnology, Inc. Pang, Phillip S. Mogalian, Erik Connolly, Lynne E. 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Lys Tyr Arg Pro 1 5 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34 CDRL3 <400> 40 Gln Thr Trp Asp Ser Thr Thr Val Val 1 5 <210> 41 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34, HBC34-V7, HBC34-V34, HBC34-V35 VH <400> 41 Glu Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Trp Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Gln Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ile Phe Arg Ser Phe 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Leu Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Trp Ser Gly Asn Ser Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Ser Val Ser Ser 115 <210> 42 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34 VL <400> 42 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Ser Ile Pro Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asn Lys Asn Val 20 25 30 Cys Trp Phe Gln His Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Glu Val Lys Tyr Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Ala Tyr Phe Cys Gln Thr Trp Asp Ser Thr Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 43 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34 CDRH1 <400> 43 ggacgcatct ttagaagttt ttac 24 <210> 44 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34 CDRH2 <400> 44 ataaaccaag atggaagtga gaaa 24 <210> 45 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34 CDRH3 <400> 45 gcggcttgga gcggcaatag tgggggtatg gacgtc 36 <210> 46 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34 CDRL1 <400> 46 aaattgggga ataaaaat 18 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sequence HBC34 VL <400> 51 tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtccc caggacagac agtcagcatc 60 ccctgctctg gagataaatt ggggaataaa aatgtttgct ggtttcagca taagccaggc 120 cagtcccctg tgttggtcat ctatgaggtt aaataccgcc cctcggggat tcctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctatg 240 gatgaggctg cctatttctg tcagacgtgg gacagcacca ctgtggtgtt cggcggaggg 300 accaggctga ccgtccta 318 <210> 52 <211> 33 <212> PRT <213> Hepatitis B Virus <220> <221> VARIANT <222> (1)...(33) <223> Xaa = Any Amino Acid <400> 52 Xaa Gly Ser Ser Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Met Thr 1 5 10 15 Xaa Pro Ser Asp Gly Asn Ala Thr Ala Ile Pro Ile Pro Ser Ser Trp 20 25 30 Xaa <210> 53 <211> 15 <212> PRT <213> Hepatitis B Virus <400> 53 Thr Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Met Thr Thr Ala Gln Gly 1 5 10 15 <210> 54 <211> 26 <212> PRT <213> Hepatitis B Virus <400> 54 Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu Ile Pro Gly Ser Ser Thr Thr Ser 1 5 10 15 Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Met Thr Thr 20 25 <210> 55 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Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Thr Phe Asp Ser Thr Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 66 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34wt CDRH2 <400> 66 Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys 1 5 <210> 67 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34-V31, HBC34-V32 and HBC34-V33 VH <400> 67 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ile Phe Arg Ser Phe 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Leu Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Trp Ser Gly Asn Ser Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 68 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34-V31, HBC34-V32 and HBC34-V33 VH <400> 68 gaggtgcagc tggtggaatc cggcggggga ctggtgcagc ctggcggctc actgagactg 60 agctgtgcag cttctggaag aatcttcaga tctttttaca tgagttgggt gagacaggct 120 cctgggaagg gactggagtg ggtcgcaaac atcaatcagg acggatcaga aaagctgtat 180 gtggatagcg tcaaaggcag gttcactatt tcccgcgaca acgccaaaaa ttctctgttt 240 ctgcagatga acaatctgcg ggtggaggat accgctgtct actattgtgc agcctggtct 300 ggcaacagtg gaggcatgga cgtgtgggga cagggaacca cagtgacagt cagctcc 357 <210> 69 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34v23 VL <400> 69 tcttacgagc tgacacagcc ccctagcgtg tccgtctctc caggccagac agcatccatc 60 acttgctctg gcgacaagct ggggaacaaa aatgcctgtt ggtatcagca gaagccaggg 120 cagagtcccg tgctggtcat ctacgaggtg aaatatcggc cttcaggaat tccagaaaga 180 ttcagtggat caaacagcgg caatactgct accctgacaa ttagcgggac ccaggccatg 240 gacgaagctg attactattg ccagacattc gattccacca cagtggtctt tggcggggga 300 actaagctga ccgtgctg 318 <210> 70 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34 wt VH codon optimized <400> 70 gaactgcagc tggtcgaatc aggaggaggg tgggtccagc ccggagggag ccagagactg 60 tcttgtgccg catcagggag gatcttcagg agcttctaca tgtcctgggt gcgccaggca 120 ccaggcaagg gactggagtg ggtcgccacc atcaaccagg acggatctga aaagctgtat 180 gtggatagtg tcaaaggccg gttcacaatt agcagagaca acgctaaaaa ttctctgttt 240 ctgcagatga acaatctgcg agtggaggat accgccgtct actattgcgc cgcttggtct 300 ggcaacagcg gcgggatgga tgtctggggg cagggcacaa cagtgagcgt ctcttcc 357 <210> 71 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34 wt VL codon optimized <400> 71 tcatacgaac tgactcagcc tccctccgtc tccgtctcac ctggacagac cgtctcaatc 60 ccctgctccg gcgataaact gggcaacaag aacgtgtgct ggttccagca caaacccgga 120 cagagtcctg tgctggtcat ctacgaggtc aagtatcggc caagcggcat tcccgaaaga 180 ttcagcggct ccaactctgg gaataccgca acactgacta tctctggaac ccaggcaatg 240 gacgaggcag cttacttttg ccagacttgg gattcaacta ctgtcgtgtt cggcggcgga 300 actagactga ctgtcctg 318 <210> 72 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34 wt CDRH1 codon optimized <400> 72 gggaggatct tcaggagctt ctac 24 <210> 73 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34 wt CDRH2 codon optimized <400> 73 atcaaccagg acggatctga aaag 24 <210> 74 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34 wt CDRH3 codon optimized <400> 74 gccgcttggt ctggcaacag cggcgggatg gatgtc 36 <210> 75 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34 wt CDRL1 codon optimized <400> 75 aaactgggca acaagaac 18 <210> 76 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34 wt CDRL2 codon optimized <400> 76 gaggtcaag 9 <210> 77 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence 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<400> 83 Cys Gly Asn Cys Thr Cys Ile Pro Ile Pro Ser Ser Trp Ala Phe Cys 1 5 10 15 Ser Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Cys 20 25 <210> 84 <211> 17 <212> PRT <213> Hepatitis B Virus <220> <223> looped epitope mimic <221> VARIANT <222> 13, 16 <223> cys is coupled to acetamidomethyl <400> 84 Cys Gly Gly Gly Cys Ser Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys 1 5 10 15 Cys <210> 85 <211> 11 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <400> 85 Ser Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys 1 5 10 <210> 86 <211> 15 <212> PRT <213> Hepatitis B Virus <400> 86 Gly Asn Cys Thr Cys Ile Pro Ile Pro Ser Ser Trp Ala Phe Cys 1 5 10 15 <210> 87 <211> 14 <212> PRT <213> Hepatitis B Virus <400> 87 Gly Asn Cys Thr Cys Ile Pro Ile Pro Ser Ser Trp Ala Phe 1 5 10 <210> 88 <211> 5 <212> PRT <213> Hepatitis B Virus <220> <221> VARIANT <222> (1)...(5) <223> Xaa = Any Amino Acid <400> 88 Pro Cys Arg Xaa Cys 1 5 <210> 89 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34-V35 VL <400> 89 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acccaagcct aaggataccc tgatgatctc cagaaccccc 420 gaggtgacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggatc ctgaggtgaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgct aagaccaagc ccagggagga gcagtacaac 540 tctacctatc gggtggtgtc cgtgctgaca gtgctgcacc aggattggct gaacggcaag 600 gagtataagt gcaaggtgtc taataaggcc ctgcccgctc ctatcgagaa gaccatctcc 660 aaggccaagg gccagcctag agagccacag gtgtacacac tgcctccatc tcgcgatgag 720 ctgaccaaga accaggtgtc cctgacatgt ctggtgaagg gcttctatcc ttccgacatc 780 gctgtggagt gggagagcaa tggccagcca gagaacaatt acaagaccac accccctgtg 840 ctggacagcg atggctcttt ctttctgtat agcaagctga ccgtggacaa gtctcgctgg 900 cagcagggca acgtgtttag ctgttctgtg atgcatgagg ccctgcacaa tcattataca 960 cagaagtccc tgagcctgtc tcctggcaag 990 <210> 131 <211> 1417 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34-V7, HBC34-V34, HBC34-V35 VH-CH1-hinge-CH2-CH3 (codon-optimized) <400> 131 gagctgcagc tggtggagtc cggcggcggc tgggtgcagc ctggcggctc ccagaggctg 60 agctgtgccg cttctggcag gatcttccgg tccttttaca tgtcttgggt gcggcaggct 120 ccaggcaagg gcctggagtg ggtggctacc atcaaccagg acggctccga gaagctgtat 180 gtggatagcg tgaagggcag attcacaatc tctcgcgaca acgccaagaa ctccctgttt 240 ctgcagatga acaatctgag ggtggaggat accgccgtgt actattgcgc cgcttggtct 300 ggcaatagcg gcggcatgga cgtgtgggga cagggcacca ccgtgtccgt gtccagcgcc 360 tccacaaagg gcccaagcgt gtttccactg gctccctctt ccaagtctac ctccggcggc 420 acagccgctc tgggatgtct ggtgaaggat tacttcccag agcccgtgac cgtgtcttgg 480 aactccggcg ccctgaccag cggagtgcat acatttccag ctgtgctgca gagctctggc 540 ctgtactctc tgtccagcgt ggtgaccgtg ccctcttcca gcctgggcac ccagacatat 600 atctgcaacg tgaatcacaa gccaagcaat acaaaggtgg acaagaaggt ggagcccaag 660 tcttgtgata agacccatac atgccctcca tgtccagctc cagagctgct gggcggccca 720 agcgtgttcc tgtttccacc caagcctaag gataccctga tgatctccag aacccccgag 780 gtgacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaggatcctg aggtgaagtt caactggtac 840 gtggacggcg tggaggtgca taatgctaag accaagccca gggaggagca gtacaactct 900 acctatcggg tggtgtccgt gctgacagtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag 960 tataagtgca aggtgtctaa taaggccctg cccgctccta tcgagaagac catctccaag 1020 gccaagggcc agcctagaga gccacaggtg tacacactgc ctccatctcg cgatgagctg 1080 accaagaacc aggtgtccct gacatgtctg gtgaagggct tctatccttc cgacatcgct 1140 gtggagtggg agagcaatgg ccagccagag aacaattaca agaccacacc ccctgtgctg 1200 gacagcgatg gctctttctt tctgtatagc aagctgaccg tggacaagtc tcgctggcag 1260 cagggcaacg tgtttagctg ttctgtgatg catgaggccc tgcacaatca ttatacacag 1320 aagtccctga gcctgtctcc tggcaagtga tgaggtaccg tgcgacggcc ggcaagcccc 1380 cgctccccgg gctctcgcgg tcgtacgagg aaagctt 1417 <210> 132 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34-V7 CL (codon-optimized) <400> 132 ggacagccaa aggctgctcc atctgtgacc ctgtttccac cctcttccga ggagctgcag 60 gccaacaagg ccaccctggt gtgcctgatc tctgacttct accctggagc tgtgacagtg 120 gcttggaagg ctgatagctc tcccgtgaag gctggcgtgg agacaacaac ccctagcaag 180 cagtctaaca ataagtacgc cgcttccagc tatctgtctc tgacaccaga gcagtggaag 240 tcccaccgct cttattcctg ccaggtgacc catgagggca gcaccgtgga gaagacagtg 300 gcccccaccg agtgttct 318 <210> 133 <211> 636 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34-V7 LC (VL-CL) (codon-optimized) <400> 133 agctacgagc tgacacagcc cccttccgtg tccgtgtccc ctggacagac cgtgtccatc 60 ccatgcagcg gcgacaagct gggcaacaag aacgtgtgct ggtttcagca taagcctggc 120 cagtcccccg tgctggtcat ctacgaggtg aagtataggc ccagcggcat ccctgagcgg 180 ttctctggct ccaacagcgg caatacagcc accctgacaa tctctggcac acaggctatg 240 gacgaggccg cttatttctg ccagaccttt gattccacca cagtggtgtt cggcggcggc 300 accagactga cagtgctggg acagccaaag gctgctccat ctgtgaccct gtttccaccc 360 tcttccgagg agctgcaggc caacaaggcc accctggtgt gcctgatctc tgacttctac 420 cctggagctg tgacagtggc ttggaaggct gatagctctc ccgtgaaggc tggcgtggag 480 acaacaaccc ctagcaagca gtctaacaat aagtacgccg cttccagcta tctgtctctg 540 acaccagagc agtggaagtc ccaccgctct tattcctgcc aggtgaccca tgagggcagc 600 accgtggaga agacagtggc ccccaccgag tgttct 636 <210> 134 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34-V34, HBC34-V35 CL (codon-optimized) <400> 134 ggacagccaa aggctgctcc atctgtgacc ctgtttccac cctcttccga ggagctgcag 60 gccaacaagg ccaccctggt gtgcctgatc tctgacttct accctggagc tgtgacagtg 120 gcttggaagg ctgatagctc tcccgtgaag gctggcgtgg agacaacaac ccctagcaag 180 cagtctaaca ataagtacgc cgcttccagc tatctgtctc tgacaccaga gcagtggaag 240 tcccaccgct cttattcctg ccaggtgacc catgagggca gcaccgtgga gaagacagtg 300 gcccccaccg agtgttct 318 <210> 135 <211> 636 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34-V34 LC (VL-CL) (codon-optimized) <400> 135 agctacgagc tgacacagcc cccttccgtg tccgtgtccc ctggacagac cgtgtccatc 60 ccatgcagcg gcgacaagct gggcaacaag aacgtgtcct ggtttcagca taagcctggc 120 cagtcccccg tgctggtcat ctacgaggtg aagtataggc ccagcggcat ccctgagcgg 180 ttctctggct ccaacagcgg caatacagcc accctgacaa tctctggcac acaggctatg 240 gacgaggccg cttatttctg ccagaccttt gattccacca cagtggtgtt cggcggcggc 300 accagactga cagtgctggg acagccaaag gctgctccat ctgtgaccct gtttccaccc 360 tcttccgagg agctgcaggc caacaaggcc accctggtgt gcctgatctc tgacttctac 420 cctggagctg tgacagtggc ttggaaggct gatagctctc ccgtgaaggc tggcgtggag 480 acaacaaccc ctagcaagca gtctaacaat aagtacgccg cttccagcta tctgtctctg 540 acaccagagc agtggaagtc ccaccgctct tattcctgcc aggtgaccca tgagggcagc 600 accgtggaga agacagtggc ccccaccgag tgttct 636 <210> 136 <211> 636 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34-V35 LC (VL-CL) (codon-optimized) <400> 136 agctacgagc tgacacagcc cccttccgtg tccgtgtccc ctggacagac cgtgtccatc 60 ccatgcagcg gcgacaagct gggcaacaag aacgtggcct ggtttcagca taagcctggc 120 cagtcccccg tgctggtcat ctacgaggtg aagtataggc ccagcggcat ccctgagcgg 180 ttctctggct ccaacagcgg caatacagcc accctgacaa tctctggcac acaggctatg 240 gacgaggccg cttatttctg ccagaccttt gattccacca cagtggtgtt cggcggcggc 300 accagactga cagtgctggg acagccaaag gctgctccat ctgtgaccct gtttccaccc 360 tcttccgagg agctgcaggc caacaaggcc accctggtgt gcctgatctc tgacttctac 420 cctggagctg tgacagtggc ttggaaggct gatagctctc ccgtgaaggc tggcgtggag 480 acaacaaccc ctagcaagca gtctaacaat aagtacgccg cttccagcta tctgtctctg 540 acaccagagc agtggaagtc ccaccgctct tattcctgcc aggtgaccca tgagggcagc 600 accgtggaga agacagtggc ccccaccgag tgttct 636 <210> 137 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens IgG1 <220> <223> WT hIgG1 Fc <400> 137 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 210 215 <210> 138 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic sequence HBC34, HBC34v7, HBC34v23, HBC34v34, HBC34v35, HBC34_C40S, HBC34_C40A, HBC34v23_C40S, HBC34v23_C40A HC with GAALIE mutation in hIgG1 Fc <400> 138 Glu Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Trp Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Gln Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ile Phe Arg Ser Phe 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Leu Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Trp Ser Gly Asn Ser Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Ser Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Ala Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Leu Pro Glu Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 139 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Chimeric hinge sequence <400> 139 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly Pro

Claims (48)

1. 대상체에서 B형 간염 바이러스 (HBV) 감염을 치료하는 방법으로서, 상기 방법이 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 단일 용량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 항체가 서열번호 91의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 93의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
2. 제1항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 단일 용량이 2 내지 18 mg/kg (대상체 체중)의 범위의 항체를 포함하는, 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 단일 용량이 6 mg 이하, 18 mg 이하, 75 mg 이하, 90 mg 이하, 300 mg 이하, 900 mg 이하 또는 3000 mg 이하의 항체를 포함하는, 방법.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 단일 용량이 100 mg/mL 내지 200 mg/mL의 범위, 예컨대 100 mg/mL, 110 mg/mL, 120 mg/mL, 130 mg/mL, 140 mg/mL, 150 mg/mL, 160 mg/mL, 170 mg/mL, 180 mg/mL, 190 mg/mL 또는 200 mg/mL, 바람직하게는 150 mg/mL 농도의 항체를 포함하는, 방법.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 단일 용량이 약 75 mg의 항체를 포함하는, 방법.
6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 단일 용량이 약 90 mg의 항체를 포함하는, 방법.
7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 단일 용량이 300 mg 이하의 항체를 포함하는, 방법.
8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 단일 용량이 900 mg 이하의 항체를 포함하는, 방법.
9. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 단일 용량이 3,000 mg 이하의 항체를 포함하는, 방법.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 피하 주사에 의해 단일 용량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 정맥내 주사에 의해 단일 용량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 물, 선택적으로 USP 물을 추가로 포함하는, 방법.
13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 해당 약제학적 조성물에 선택적으로 10 mM 내지 40 mM의 범위, 예컨대 20 mM 농도의 히스티딘을 추가로 포함하는, 방법.
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 디사카라이드, 예컨대 수크로스를 선택적으로 5%, 6%, 7%, 8% 또는 9%, 바람직하게는 약 7% (w/v)로 추가로 포함하는, 방법.
15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 계면활성제 또는 삼중블록 공중합체, 선택적으로 폴리소르베이트 또는 폴록사머-188, 바람직하게는 폴리소르베이트 80 (PS80)을 추가로 포함하고, 선택적으로, 상기 폴리소르베이트 또는 폴록사머-188이 0.01% 내지 0.05% (w/v)의 범위, 바람직하게는 0.02% (w/v)로 존재하는, 방법.
16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 5.8 내지 6.2의 범위, 5.9 내지 6.1의 범위, 또는 5.8, 5.9, 6.0, 6.1 또는 6.2인, 방법.
17. 제16항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이
    (i) 150 mg/mL의 항체;
    (ii) USP 물;
    (iii) 20 mM 히스티딘;
    (iv) 7% 수크로스; 및
    (v) 0.02% PS80을 포함하고,
    약제학적 조성물의 pH가 6인, 방법.
18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 성인인, 방법.
19. 제18항에 있어서, 상기 대상체가 18세 내지 65세의 범위인, 방법.
20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체의 체중이 40 kg 내지 125 kg인, 방법.
21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가, 예를 들어 2차례의 양성 혈청 HBsAg, HBV DNA 및/또는 HBeAg로 정의된 만성 HBV에 감염되었고, 상기 2차례의 기간이 적어도 6개월 떨어진, 방법.
22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 간경변이 없는, 방법.
23. 제22항에 있어서, 간경변의 부재가
    파이브로스캔 (Fibroscan) 평가(예를 들어, 약제학적 조성물의 단일 용량을 투여하기 전 6개월 내); 또는
    간 생검(예를 들어, 약제학적 조성물의 단일 용량을 투여하기 전 12개월 내)에 의해 결정되고,
    바람직하게는 간경변의 부재가 Metavir F3 섬유증의 부재 또는 F4 간경변의 부재에 의해 결정되는, 방법.
24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 단일 용량을 투여받기 전에 선택적으로 120일 내에, 추가로 선택적으로 60일 내에 뉴클레오사(타)이드 역전사효소 억제제 (NRTI)를 받은, 방법.
25. 제24항에 있어서, 상기 NRTI가 테노포비어; 테노포비어 디소프록실 (예를 들어, 테노포비어 디스프록실 푸마레이트); 테노포비어 알라페나마이드; 엔테카비르; 라미부딘; 아데포비어; 및 아데포비어 디피복실 중 하나 이상을 포함하는, 방법.
26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 단일 용량을 투여받기 전 28일 이내에 100 IU/mL 미만의 혈청 HBV DNA 농도를 갖는, 방법.
27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 단일 용량을 투여받기 전 1,000 IU/mL 미만의 혈청 HBsAg 농도를 갖는, 방법.
28. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 단일 용량을 투여받기 전 28일 이내에 1,000 IU/mL 이상의 혈청 HBsAg 농도를 갖는, 방법.
29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 단일 용량을 투여받기 전 28일 이내에 HB e-항원 (HBeAg) 음성인, 방법.
30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 단일 용량을 투여받기 전 28일 이내에 항-HB 항체에 음성인, 방법.
31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 단일 용량을 투여받기 전에
    (i) 섬유증이 없고/없거나, 간경변이 없고/없거나;
    (ii) 알라닌 아미노전이효소 (ALT)가 < 2 x 정상 상한 (ULN)인, 방법.
32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 용량의 투여 후 약 56일째에, 상기 대상체가, 단일 용량의 투여 전 0일 내지 28일째의 해당 대상체의 혈청 HBsAg와 비교하여 혈청 HBsAg (예를 들어, Abbott ARCHITECT 검정을 사용하여 측정된, 예를 들어 혈청 중 HBsAg의 농도)가 2배 초과 감소된, 방법.
33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 용량의 투여 후에(예를 들어, 단일 용량의 투여 후 56일째에), 상기 대상체가
    (i) 기준 대상체와 비교하여 HBV의 간내 확산이 감소되거나 덜 심각하고/하거나;
    (ii) HBV에 대한 적응 면역 반응을 포함하는, 방법.
34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 남성인, 방법.
35. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 여성인, 방법.
36. 항체를 포함하는 약제학적 조성물로서, 상기 항체가 서열번호 91의 중쇄 아미노산 서열과 서열번호 93의 경쇄 아미노산 서열을 포함하고, 상기 약제학적 조성물이 100 mg/mL 내지 200 mg/mL의 범위, 예컨대 100 mg/mL, 110 mg/mL, 120 mg/mL, 130 mg/mL, 140 mg/mL, 150 mg/mL, 160 mg/mL, 170 mg/mL, 180 mg/mL, 190 mg/mL 또는 200 mg/mL, 바람직하게는 150 mg/mL 농도의 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.
37. 제36항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 6 mg 이하, 18 mg 이하, 75 mg 이하, 90 mg 이하, 300 mg 이하, 900 mg 이하, 또는 3000 mg 이하의 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.
38. 제36항 또는 제37항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 75 mg의 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.
39. 제36항 또는 제37항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 90 mg의 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.
40. 제36항 또는 제37항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 300 mg의 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.
41. 제36항 또는 제37항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 900 mg의 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.
42. 제36항 또는 제37항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 3,000 mg의 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.
43. 제36항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 물, 선택적으로 USP 물을 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
44. 제36항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 해당 약제학적 조성물에 선택적으로 10 mM 내지 40 mM, 예컨대 20 mM 농도의 히스티딘을 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
45. 제36항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 디사카라이드, 예컨대 수크로스를 선택적으로 5%, 6%, 7%, 8% 또는 9%, 바람직하게는 약 7% (w/v)로 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
46. 제36항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 계면활성제, 선택적으로 폴리소르베이트, 바람직하게는 폴리소르베이트 80 (PS80)을 추가로 포함하고, 선택적으로, 상기 폴리소르베이트가 0.01% 내지 0.05% (w/v)의 범위, 바람직하게는 0.02% (w/v)로 존재하는, 약제학적 조성물.
47. 제36항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 5.8 내지 6.2의 범위, 5.9 내지 6.1의 범위, 또는 5.8, 5.9, 6.0, 6.1 또는 6.2인, 약제학적 조성물.
48. 제36항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이
    (i) 150 mg/mL의 항체;
    (ii) USP 물;
    (iii) 20 mM 히스티딘;
    (iv) 7% 수크로스; 및
    (v) 0.02% PS80을 포함하고,
    약제학적 조성물의 pH가 6인, 약제학적 조성물.

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