KR102925710B1 - 림프구에서의 저해 경로의 중화 - Google Patents
림프구에서의 저해 경로의 중화Info
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Abstract
본 발명은 PD-1 중화제에 잘 반응하지 않는 암을 치료하기 위한 NKG2A-중화제의 용도뿐만 아니라 암 치료를 위한 NKG2A-중화제와 PD-1 중화제의 병용에 관한 것이다.
Description
본 발명은 PD-1 중화제에 잘 반응하지 않는 암을 치료하기 위한 NKG2A-중화제의 용도뿐만 아니라 암 치료를 위한 NKG2A-중화제 및 PD-1 중화제의 병용에 관한 것이다.
[관련 출원에 대한 교차 참조]
본 출원은 모든 도면을 포함하여, 그 전문이 본원에 참조로 포함되는, 2016년 1월 21일에 출원된 미국 가출원 제62/281,217호의 이익을 청구한다.
[서열 목록에 대한 참조]
본 출원은 전자 형식의 서열 목록과 함께 출원된다. 서열 목록은 38 KB 크기의, 2017년 1월 19일에 생성된 "NKG2A-PD1b_ST25" 표제의 파일로 제공된다. 서열 목록의 전자 형식의 정보는 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
NK 세포 활성은 활성화 및 저해 신호가 모두 관여되는 복잡한 기전에 의해 조절된다. NK 세포 매개 인식 및 HLA 클래스 I 결핍 표적 세포의 사멸에서 중요한 역할을 담당하는 몇몇 구별되는 NK-특이적 수용체가 확인되었다. 자연 세포독성 수용체(NCR)는 NK 세포에서 특이적으로 발현되는 활성화 수용체 단백질 클래스 및 이들을 발현하는 유전자를 나타낸다. NCR의 예에는 NKp30, NKp44 및 NKp46이 포함된다(예로, 그 전체 개시가 본원에 참조로 포함되는, 문헌[Lanier (2001) Nat Immunol 2:23-27, Pende et al. (1999) J Exp Med. 190:1505-1516, Cantoni et al. (1999) J Exp Med. 189:787-796, Sivori et al (1997) J. Exp. Med. 186:1129-1136, Pessino et al. (1998) J Exp Med. 188(5):953-60; Mandelboim et al. (2001) Nature 409:1055-1060] 참고). 이들 수용체는 Ig 수퍼패밀리의 구성원이며, 특정한 mAb에 의해 유도되는 이들의 가교는 강력한 NK 세포 활성화로 이어져서 세포내 Ca++ 수준 증가, 세포독성 유발 및 림포카인 방출, 그리고 여러 유형의 표적 세포에 대한 NK 세포독성의 활성화를 일으킨다.
CD94/NKG2A는 림프구의 하위세트에서 확인되는 저해 수용체이다. CD94/NKG2A는 CD94/NKG2A-리간드 HLA-E를 발현하는 세포에 대한 소정 림프구의 사이토카인 방출 및 세포독성 반응을 제한한다(예로, WO99/28748 참고). HLA-E는 또한 특정 종양 세포(Derre et al., J Immunol 2006;177:3100-7) 및 활성화된 내피 세포(Coupel et al., Blood 2007;109:2806-14)에 의해 가용성 형태로 분비되는 것으로 나타났다. CD94/NKG2A 신호전달을 저해하는 항체는 HLA-E 양성 표적 세포에 대한 림프구의 사이토카인 방출 및 세포용해 활성, 예컨대 HLA-E 발현 종양 세포 또는 바이러스 감염 세포에 대한 CD94/NKG2A-양성 NK 세포의 반응을 증가시킬 수 있다. 따라서, CD94/NKG2A를 저해하지만 CD94/NKG2A-발현 세포의 사멸을 유발하지 않는 치료 항체(즉, 비-고갈 항체)는 암 환자에서 종양-성장의 제어를 유도할 수 있다.
PD-1은 CD28, CTLA-4, ICOS 및 BTLA가 또한 포함되는 수용체 CD28 패밀리의 저해 구성원이다. PD-1은 활성화된 B 세포, T 세포, 및 골수구 세포 상에서 발현된다(Okazaki et al. (2002) Curr. Opin. Immunol. 14: 391779-82; Bennett et al. (2003) J Immunol 170:711-8). PD-1에 대한 2개 리간드, PD-L1 및 PD-L2가 동정되었으며, 이는 PD-1에 대한 결합 시 T 세포 활성화를 하향조절하는 것으로 나타났다(Freeman et al. (2000) J Exp Med 192:1027-34; Latchman et al. (2001) Nat Immunol 2:261-8; Carter et al. (2002) Eur J Immunol 32:634-43). PD-L1은 다양한 인간 암에서 풍부하다(Dong et al. (2002) Nat. Med. 8:787-9). PD-1 및 PD-L1 간 상호작용은 종양 침윤 림프구의 감소, T-세포 수용체 매개 증식의 감소, 및 암성 세포에 의한 면역 침입을 일으킨다. 면역 억제는 PD-1과 PD-L1의 국소 상호작용을 저해함으로써 역전될 수 있고, PD-1과 PD-L2의 상호작용이 또한 차단되는 경우 그 효과는 부가적이다.
PD-1 차단은 여러 임상 시험에서 인상적인 항-종양 반응을 일으켰다. 그러나 여러 암(예컨대, 폐암)에서, 모든 환자가 항-종양 반응을 가지며 치료에 반응하는 것은 아니며, 또한 일부 환자는 치료 후 재발하는 암을 갖는다. 결과적으로, PD-1 축의 저해제로 치료받는 환자에 있어서 개선된 이익에 대한 필요성이 당분야에 존재한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 PD1-중화제(예컨대 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체)를 사용하는 치료에 대해 불량한 반응체인 개체에서 항-종양 면역 반응의 개선된 유발 방법을 제공하며, 여기서 개체는 저해 수용체 NKG2A를 중화시키는 제제로 치료받는다. PD-1 불량 반응체에서 종양-침윤 림프구는 PD-1 중화 항체를 사용하는 치료 후 저해 수용체 NKG2A를 발현할 수 있다. PD-1 불량-반응체에서, TIL이 저해 NKG2A 수용체에 의해 제한되므로, PD-1 중화제를 이용한 치료에도 불구하고 종양이 진행되거나 면역감독을 탈출할 수 있다. PD-1 내성의 뮤린 림프종 모델은 NKG2A-중화제를 사용하는 치료가 대부분의 개체에서 완전 완화를 유도함을 나타낸다.
따라서, 하나의 구현예에서, PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 불량한 반응체이거나 잘 반응하지 않는 암을 갖는(예컨대, 불량한 반응체이거나 잘 반응하지 않는 것으로 관찰되는, 또는 불량한 반응체이거나 잘 반응하지 않을 것으로 예측되는) 개체에서 암의 치료 또는 예방 방법이 제공되며, 이 방법은 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 치료 활성량의 화합물을 개체에 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 구현예에서, 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 화합물은 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물과 병용으로 투여된다. 또 다른 구현예에서, 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 화합물은 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물과의 병용 치료 없이 투여된다. 하나의 구현예에서, 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 화합물은 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물을 사용하는 치료 과정 동안(병용되어) 또는 그 종료 후(후속해서) 투여되며, 선택적으로 추가로 개체는 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물을 사용하는 치료 동안 또는 치료 후(예컨대 치료의 첫 번째 과정 또는 사이클 후)(예컨대 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 화합물을 사용하는 치료의 부재 하에) 불완전 반응, 암 재발 또는 암 진행을 경험했고(또는 완전 반응을 경험하지 않았고), 선택적으로 개체는 검출 가능한 및/또는 상승된 NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포수 및/또는 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에 상승된 수준의 NKG2A를 갖는다(예컨대 갖는다고 결정된다). 하나의 구현예에서, 암은 혈액 종양, 선택적으로 림프종 또는 백혈병이다. 하나의 구현예에서, 암은 암종이다. 하나의 구현예에서, 개체는 검출 가능한 및/또는 상승된 NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포수 및/또는 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에 상승된 수준의 NKG2A를 갖는다.
하나의 구현예에서, 다음 단계를 포함하는, 개체에서 암의 치료 또는 예방 방법이 제공된다:
(a) 개체에 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 투여하는 단계(예컨대 제제를 이용한 치료법 사이클 또는 과정을 투여하는 단계); 및
(b) 단계 (a)에서 개체에서의 암이 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제에 잘 반응하지 않는다고 결정되는(예컨대 진행되고 있거나, 완전 반응하거나 퇴행되지 않았거나, 반응하지 않는) 경우, 개체에 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 치료 활성량의 화합물을(선택적으로 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제와 병용으로) 투여하는 단계.
하나의 구현예에서, 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 화합물은 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체이다. 하나의 구현예에서, 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물은 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항-PD-1 또는 항-PDL-1 항체이다. 개체는 인간으로 특정될 수 있다.
하나의 구현예에서, PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 잘 반응하지 않는(예컨대 진행되고 있거나, 완전 반응하거나 퇴행되지 않았거나, 반응하지 않는) 암을 갖는 개체에서 CD8+ 종양-침윤 T 세포의 활성화 방법이 제공되며, 이 방법은 개체에 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 치료 활성량의 화합물을 투여하는 단계를 포함한다.
본원에서 임의의 구현예의 하나의 양태에서, PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 잘 반응하지 않는 암을 갖는 개체는 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료 시(동안 또는 후) 불완전 반응, 치료 반응의 부재, 검출 가능한, 재발하는 또는 잔류하는 암 및/또는 진행성 질환을 경험하거나 경험할 가능성이 높은 것으로 예측되는(예컨대 하나 이상의 예후 인자에 기반하여) 개체이다. 하나의 구현예에서, 잘 반응하지 않는 암은 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료(예컨대 동안 또는 후)에도 불구하고 반응하지 않았거나, 완전 반응하지 않았거나, 검출 가능하게 또는 잔류되어 유지되거나, 재발했거나 진행된, 또는 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에도 불구하고 반응하지 않거나, 완전 반응하지 않거나, 검출 가능하게 또는 잔류되어 유지되거나, 재발하거나 진행될 가능성이 높은 것으로 예측되는(예컨대 하나 이상의 예후 인자에 기반하여) 암이다. 하나의 구현예에서, 불량한 반응체이거나 잘 반응하지 않는 암을 갖는 개체는 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료 시(동안 또는 후) 불완전 반응을 경험한(예컨대, 완전 반응(CR)을 경험하지 않은) 개체이다. 하나의 구현예에서, 불량한 반응체이거나 잘 반응하지 않는 암을 갖는 개체는 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료 시(동안 또는 후) 적어도 부분 반응(PR)을 경험했으나, 그 암이 검출 가능하게 유지되거나, 재발했거나, 진행된 개체이다.
하나의 구현예에서, 불량한 반응체이거나 잘 반응하지 않는 암을 갖는 개체는 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 대해(예컨대, NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료의 부재 하에; 단독치료법으로서) 불량한 질환 예후를 갖는 개체이다. 불량힌 질환 예후를 갖는 개체는, 예를 들어, 하나 이상의 예후 인자에 기반하여(예컨대 우수한 질환 예후를 갖는 개체에 비해) 높은 또는 더 높은 암 진행 위험을 갖는다고 결정될 수 있다. 하나의 구현예에서, 예후 인자(들)는 검출 가능한 및/또는 상승된 NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포수의 존재 및/또는 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에 상승가된 수준의 NKG2A를 포함한다. 하나의 구현예에서, 예후 인자(들)는 하나 이상의 유전자에서 돌연변이의 존재 또는 부재를 포함한다. 하나의 구현예에서, 돌연변이는 T 세포에 의해 인식되는 새로운-에피토프를 정의한다. 하나의 구현예에서, 예후 인자(들)는 종양 세포에서 하나 이상의 유전자 또는 단백질, 예컨대 PD-L1의 발현 수준(들), 종양 세포 상에서 감소되거나 상승된 수준의 PD-L1을 포함한다. 하나의 구현예에서, 예후 인자(들)는 순환에서 또는 종양 환경에서의 NK 및/또는 CD8 T 세포에서 하나 이상의 유전자 또는 단백질, 예컨대, PD-1의 발현 수준(들)을 포함한다. 하나의 구현예에서, 예후 인자(들)는 종양 세포에서 돌연변이 부하, 예컨대 엑솜(exome) 당 여러 비-동의 돌연변이를 포함한다.
하나의 구현예에서, 불량한 반응체이거나 잘 반응하지 않는 암을 갖는 개체는 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물을 사용하는 치료에 잘 반응하지 않는 것으로 알려진 암, 선택적으로 고형 종양, 선택적으로 혈액 종양, 선택적으로 두부 및 경부 편평상피세포 암종을 갖는 개체이다.
하나의 양태에서, 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물을 사용하는 치료에 잘 반응하지 않는(예컨대 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물을 사용하는 치료 후 진행되었거나 진행될 것으로 예측되는) 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 항체를 포함하는 조성물이 제공되며, 선택적으로 여기서 암은 고형 암종(예컨대 폐암)이고, 선택적으로 암은 편평상피세포 암종(예컨대, HNSCC)이고, 선택적으로 암은 혈액 종양(예컨대 림프종)이다.
하나의 양태에서, 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 잘 반응하지 않는 암의 치료를 위한, 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제와 병용하기 위한 인간 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 제제가 제공된다. 하나의 양태에서, 폐암, 흑색종 또는 편평상피세포 암종(예컨대, HNSCC)을 갖는 개체의 치료에서 인간 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 제제가 제공되며, 이 치료는 개체에 다음 각각의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다: (a) 인간 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 제제, 선택적으로 항체, 및 (b) 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제, 선택적으로 항체.
하나의 양태에서, 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물을 사용하는 치료를 수여받았거나 진행 중인 개체에서 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 항체를 포함하는 조성물이 제공되며, 여기서 개체는 종양 환경에서 검출 가능한, 증가된 및/또는 상승된 NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포수를 갖고/갖거나 종양 환경에서 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에서 증가된 발현 수준의 NKG2A를 갖는다. 하나의 구현예에서, 개체는 순환에서 또는 종양 환경에서 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물을 사용하는 치료 전에 관찰된 수에 비해 증가된 및/또는 참조 값(예컨대 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물에 대해 불량한 반응을 경험하는 환자에서 관찰되는 값에 대응하는 세포의 수)에 비해 상승된 NK 및/또는 CD8 T 세포수를 갖는다. 하나의 구현예에서, 개체는 종양 환경에서 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물을 사용하는 치료 전에 관찰된 수준에 비해 및/또는 참조 값(예컨대 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물에 대해 불량한 반응을 경험하는 환자에서 관찰되는 값에 대응하는 수준)에 비해 증가된 발현 수준의 NKG2A를 갖는다. 하나의 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 인간 환자에서(생체내) 인간 CD94/NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 양으로, 예컨대 인간 환자에서 CD8 T 세포 및 NK 세포 상에 인간 CD94/NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 양으로 개체에 투여된다. 하나의 구현예에서, 인간 환자에서 CD94/NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 양은 NKG2A+ 세포 표면 상의 NKG2A 수용체를 실질적으로 포화시키기 위해 요구되는 최소 농도(예컨대, 항체가 PBMC 상에서 적정되는 결합 검정에서)의 적어도 10-배(예컨대, 10 배 내지 20 배, 10 배 내지 50 배, 10 배 내지 100 배, 20 배 내지 50 배, 20 배 내지 100 배, 30 배 내지 100 배, 50 배 내지 100 배), 선택적으로 적어도 50-배, 60-배, 80-배 또는 100-배이다. 하나의 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 인간 NKG2A로의 결합에 대해 HLA-E와 경쟁한다.
하나의 양태에서, 항-NKGA 항체 및 항-PD-1 항체, 또는 항-NKG2A 항체 및 항-PD-L1 항체로의 병용 치료는 특히 암 치료에 유효한 것으로 본원에서 나타난다. 또한 항-PD1을 사용하는 치료는 NKG2A가 PD1 축을 차단하는 제제의 유효성을 제한할 수 있도록 종양 침윤 림프구 상의 NKG2A 수용체의 상향조절을 유도할 수 있는 것으로 본원에 나타난다. 이들 수용체는 모두 종양 침윤 림프구의 세포독성 활성을 제한할 수 있으므로, 항체에 의한 이들 두 수용체 모두의 저해 활성의 중화는 NKG2A+PD1+ 림프구가 암 세포를 효과적으로 제거할 수 있도록 한다. 하나의 구현예에서, NKG2A+PD1+ 림프구는 세포독성 림프구, 선택적으로 CD8+ T 세포 또는 NK 세포이다.
하나의 양태에서, 본 발명은, 예컨대 항체의 사용을 통해, 저해 수용체 NKG2A 및 PD-1의 조합 중화를 통한 항-종양 면역 반응의 개선된 증강 방법을 제공한다. 개체가 PD-1의 저해 활성 중화에 대해 불량한 반응체인지 여부와 무관하게, 이에 따라 예컨대 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 대해 우수한 반응체인 개체 및 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 대해 불량한 반응체인 개체를 포함하여, 병용 치료가 암(예컨대 PD-1을 중화시키는 제제에 잘 반응하지 않는 것으로 알려진 암, 비-소세포 폐암(NSCLC), 신장암, 위장관암, 췌장 또는 식도 샘암종, 유방암, 신장 세포 암종(RCC), 흑색종, 결장직장암 또는 난소암)을 갖는 개체를 치료하기 위해 사용될 수 있다.
따라서, 하나의 구현예에서, 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물을 사용하는 치료에 잘 반응하지 않는 암의 치료 또는 예방 방법이 제공되며, 이 방법은 암을 갖는 개체에 다음을 투여하는 단계를 포함한다: (a) 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 치료 활성량의 화합물, 및 (b) 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 치료 활성량의 화합물. 하나의 구현예에서, 암은 고형 종양, 선택적으로 침윤 NK 및/또는 CD8 T 세포를 포함하는 고형 종양이며, 선택적으로 NK 및/또는 CD8 T 세포는 NKG2A를 발현하고, 선택적으로 적어도 10%, 20%, 30%, 40% 또는 50%의 NK 세포는 이의 표면에 NKG2A를 발현한다. 하나의 구현예에서, 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 화합물은 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체이다. 하나의 구현예에서, 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물은 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항-PD-1 또는 항-PDL-1 항체이다. 개체는 인간으로 특정될 수 있다.
하나의 구현예에서, 개체에서 CD8+ 종양-침윤 T 세포 활성의 활성화 또는 강화 방법이 제공되며, 이 방법은 개체에 다음을 투여하는 단계를 포함한다: (a) 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 치료 활성량의 화합물, 및 (b) 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 치료 활성량의 화합물. 하나의 구현예에서, 개체에서 종양-침윤 NK 세포 활성의 활성화 또는 강화 방법이 제공되며, 이 방법은 개체에 다음을 투여하는 단계를 포함한다: (a) 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 치료 활성량의 화합물, 및 (b) 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 치료 활성량의 화합물. 하나의 구현예에서, 암은 고형 종양이다. 선택적으로, 임의의 구현예에서, 개체는 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물을 사용하는 치료에 잘 반응하지 않는 암을 갖는다.
하나의 양태에서, 본 발명은 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체, 및 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체의 조합을 투여하는 단계를 포함하는 치료를 제공한다. 본원에서 임의의 구현예의 하나의 양태에서, 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 항체 및 PDL1 또는 PD1에 결합하고 인간 PD-1 폴리펩타이드의 저해 활성을 중화시키는 항체를 포함하는 조성물이 제공된다. 하나의 양태에서, 조성물은 암의 치료 또는 예방에 사용된다.
하나의 양태에서, NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체 및 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체는 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물을 사용하는 치료에 잘 반응하지 않는 것으로 알려져 있는 암, 선택적으로 고형 종양, 선택적으로 혈액 종양의 치료 또는 예방에서 병용된다. 하나의 구현예에서, 잘 반응하지 않는 것으로 알려져 있는 암은 편평상피세포 암종, 선택적으로 두부 및 경부 편평상피세포 암종이다.
본원에서 임의의 구현예에서, 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 화합물 또는 제제는, 예컨대 PD-1 및 그 천연 리간드 PD-L1 간 상호작용을 차단함으로써(그리고 선택적으로 PD-1 및 PD-L2 간 상호작용을 추가로 차단함으로써, PD-L1-유도 PD-1 신호전달을 방지하는 폴리펩타이드(예컨대 항체, Fc 도메인에 융합된 폴리펩타이드, 이뮤노어드헤신(immunoadhesin) 등)를 포함한다. 하나의 양태에서, 폴리펩타이드는 PD-1에 결합하는 항체(항-PD-1 항체)이다; 이러한 항체는 PD-1 및 PD-L1 간 및/또는 PD-1 및 PD-L2 간 상호작용을 차단할 수 있다. 또 다른 양태에서, 폴리펩타이드는 PD-L1에 결합하고(항-PD-L1 항체) PD-1 및 PD-L1 간 상호작용을 차단하는 항체이다. 하나의 구현예에서, 인간 PD-1 폴리펩타이드를 중화시키는 항체는 인간 환자(생체내)에서 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 양, 예컨대 인간 환자에서 CD8 T 세포 및 NK 세포 상의 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 양으로 투여된다/투여되었다. 하나의 양태에서, 항체는 특정 임상 투여량 요법에 따라, 특히 특정 용량으로 및 특정한 투여 일정에 따라 투여된다(또는 투여하기 위한 것이다).
본원에서 임의의 구현예의 하나의 양태에서, 저해 수용체 NKG2A를 중화시키는 화합물 또는 제제는 항체이다. 하나의 양태에서, NKG2A를 중화시키는 항체는 비-고갈 항체, 예컨대 샘플 또는 대상체에 존재하는 NKG2A-발현 세포의 수에 부정적으로 영향을 미치기 위해 사멸시키거나, 제거하거나, 용해시키거나, 또는 이러한 사멸, 제거 또는 용해를 유도하지 않는 항체이다. 하나의 양태에서, NKG2A를 중화시키는 항체는 비-고갈 항체이다. 비-고갈 항체는, 예를 들어, Fc 도메인이 없거나, 하나 이상의 Fcγ 수용체(예컨대 CD16)에 대해 최소 결합하거나 결합하지 않는 Fc 도메인을 가질 수 있다. 예에는 인간 IgG4 이소형 항체로부터의 불변 영역을 갖는 항체, 하나 이상의 Fcγ 수용체(예컨대 CD16, CD32A, CD32B 및/또는 CD64)에 대한 결합을 감소시키거나 폐지하도록 변형된 불변 영역을 갖는 임의의 이소형(예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4)의 항체가 포함된다.
본원에서 임의의 구현예의 하나의 양태에서, 항-NKG2A 항체는 적어도 1회 투여 사이클 동안 투여되며, 투여 사이클은 항-NKG2A 항체의 적어도 제1 및 제2(및 선택적으로 제3, 제4, 제5, 제6, 제7 및/또는 제8 이상의) 투여를 포함하고, 항-NKG2A 항체는 제1 및 제2(그리고 선택적으로 그 이후) 투여 간에 적어도 10 ㎍/㎖(또는, 선택적으로 적어도 20 ㎍/㎖, 30 ㎍/㎖, 40 ㎍/㎖ 또는 50 ㎍/㎖)의 항-NKG2A 항체의 연속(최소) 혈중 농도를 달성하는 유효량으로 투여된다. 특정된 연속 혈중 농도의 달성 또는 유지는 혈중 농도가 특정된 시기(예컨대 항체의 2회 투여 간, 주 수) 동안 실질적으로 특정된 혈중 농도 미만으로 떨어지지 않음을 의미하며, 즉 혈중 농도가 특정된 시기 동안 변할 수 있지만, 특정된 혈중 농도는 최소 또는 "최저치" 농도를 나타낸다.
하나의 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 투여 시(예컨대 투여 1일 또는 2일 내), 약 또는 적어도 약 50 ㎍/㎖, 60 ㎍/㎖, 70 ㎍/㎖ 또는 80 ㎍/㎖, 선택적으로 적어도 약 100 ㎍/㎖의 피크 혈중 농도를 달성하는 유효량으로 투여된다.
하나의 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 항체 투여 후, 적어도 1주 또는 적어도 2주 동안, 약 또는 적어도 약 10 ㎍/㎖, 20 ㎍/㎖, 30 ㎍/㎖, 40 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖, 60 ㎍/㎖, 70 ㎍/㎖ 또는 80 ㎍/㎖, 선택적으로 적어도 약 100 ㎍/㎖의 항-NKG2A 항체의 연속(최소) 혈중 농도를 달성하는 유효량으로 투여된다.
하나의 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 2회 연속 투여 간에, 약 또는 적어도 약 50 ㎍/㎖, 60 ㎍/㎖, 70 ㎍/㎖ 또는 80 ㎍/㎖, 선택적으로 적어도 약 100 ㎍/㎖의 항-NKG2A 항체의 연속(최소) 혈중 농도를 달성하는 유효량으로 투여된다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 투여는 약 2주, 선택적으로 약 1주 만큼 시간 상 분리된다.
항-NKG2A 항체는 선택적으로 투여 사이클의 전체 기간 동안 특정되는 연속(최소) 혈중 농도를 달성하는 유효량으로 및 그러한 빈도에 따라 투여될 수 있다.
하나의 구현예에서, 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 항체는 항-NKG2A 항체의 적어도 2회 투여를 포함하는 투여 사이클에서, 인간 PD-1 폴리펩타이드를 중화시키는 항체를 사용하는 치료 과정 후(치료 과정은 완전히 완료되거나 완료 전에 중단될 수 있으며, 또는 치료 과정의 개시 후(예컨대, 불완전 반응, 종양 진행 등의 경우) 투여된다. 또 다른 구현예에서, 인간 NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 항체는 인간 PD-1 폴리펩타이드를 중화시키는 항체와 병용으로 투여 사이클에서 투여되며, 여기서 투여 사이클은 항-NKG2A 항체의 적어도 2회 투여를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 2회 연속 투여 간에 적어도 4 ㎍/㎖, 선택적으로 적어도 10 ㎍/㎖의 혈관외 조직에서의(예컨대 종양 환경에서의) 연속(최소) 농도를 달성하는 유효량으로 투여된다. 선택적으로, 항-NKG2A 항체는 투여 사이클의 전체 기간 동안 적어도 4 ㎍/㎖, 선택적으로 적어도 10 ㎍/㎖의 혈관외 조직에서의(예컨대 종양 환경에서의) 연속(최소) 농도를 달성하는 유효량으로 투여된다. 하나의 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 2회 연속 투여 간에 또는 투여 사이클 기간 동안, 적어도 40 ㎍/㎖, 선택적으로 적어도 100 ㎍/㎖의 항-NKG2A 항체의 연속(최소) 혈중 농도를 달성하는 유효량으로 투여된다.
하나의 구현예에서, 암은 혈액 암이다. 하나의 비제한적인 구현예에서, 암은 림프종 또는 백혈병이다. 하나의 구현예에서, 암은 진행된 및/또는 난치성 고형 종양이다. 하나의 비제한적인 구현예에서, 암(예컨대, 진행된 난치성 고형 종양)은 비-소세포 폐암(NSCLC), 신장암, 위장관암, 췌장 또는 식도 샘암종, 유방암, 신장 세포 암종(RCC), 흑색종, 결장직장암, 및 난소암으로 구성된 군으로부터 선택된다.
NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 화합물(항-NKG2A 제제)은 NKG2A-발현 NK 및/또는 T 세포가 HLA-E-발현 세포의 사멸을 유도하는 능력을 증가시키는 화합물이다. 선택적으로, NKG2A 폴리펩타이드를 저해하는 화합물은 NKG2A 폴리펩타이드에 결합하는 폴리펩타이드, 선택적으로 항체(예로 모노클로날 항체)이다.
하나의 구현예에서, 항-NKG2A 제제는 그 리간드, HLA-E의 결합을 차단하여 NKG2A의 저해 활성을 감소시킨다, 즉 항-NKG2A 제제는 HLA-E에 의한 NKG2A의 결합을 방해한다. SEQ ID NO: 4 내지 8 중 어느 것의 중쇄 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄를 갖는 항체가 이러한 항체의 하나의 예이다. 하나의 구현예에서, 항-NKG2A 제제는 그 리간드, HLA-E의 결합을 차단하지 않고 NKG2A의 저해 활성을 감소시킨다, 즉 항-NKG2A 제제는 비-경쟁적 길항제이고 HLA-E에 의한 NKG2A의 결합을 방해하지 않는다. SEQ ID NO: 10 및 11의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 각각 갖는 항체가 이러한 항체의 하나의 예이다.
하나의 구현예에서, 항-NKG2A 제제는 하나 이상의 활성화 NKG2 수용체에 비해 NKG2A에 대해 유의미하게 더 높은 친화도로 결합하는 항체이다. 예를 들어, 하나의 구현예에서, 제제는 NKG2C에 비해 NKG2A에 대해 유의미하게 더 높은 친화도로 결합하는 항체이다. 추가적인 또는 대안적인 구현예에서, 제제는 NKG2E에 비해 NKG2A에 대해 유의미하게 더 높은 친화도로 결합하는 항체이다. 추가적인 또는 대안적인 구현예에서, 제제는 NKG2H에 비해 NKG2A에 대해 유의미하게 더 높은 친화도로 결합하는 항체이다.
하나의 구현예에서, 항-NKG2A 제제는 CD94/NKG2A에 대한 결합에서 각각 SEQ ID NO: 4 내지 8 및 9의 중쇄 및 경쇄를 갖는 항체 또는 각각 SEQ ID NO: 10 및 11의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 갖는 항체와 경쟁한다. 제제는, 예로, 인간 또는 인간화 항-NKG2A 항체일 수 있다.
하나의 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 각각 SEQ ID NO: 4 내지 8 중 어느 것의 중쇄 중 어느 것의 중쇄 CDR 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄의 경쇄 CDR을 갖는 인간화 항체이다. 하나의 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 각각 SEQ ID NO: 4 내지 8 중 어느 것의 중쇄 중 어느 것의 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄의 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항체이다. 개선된 특성, 예컨대 더 낮은 면역원성, 개선된 항원-결합 또는 다른 기능적 특성 및/또는 개선된 물리화학적 특성, 예컨대 더 우수한 안정성을 갖는 이러한 인간화 항체의 예시적인 상보성-결정 영역(CDR) 잔기 또는 서열 및/또는 프레임워크 영역(FR) 내 아미노산 치환에 대한 부위가 제공된다.
소정의 선택적 양태에서, 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 대해 불량한 반응체인 암을 갖는 개체의 확인 방법이 제공되며, 이 방법은 다음 단계를 포함한다:
a) 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제로 치료받은(예컨대 제제의 적어도 1회 투여를 수여받은) 개체에서 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에서 NKG2A(및 선택적으로 추가적인 PD-1) 발현 수준 및/또는 NKG2A+(선택적으로 NKG2A+PD1+) NK 및/또는 CD8 T 세포의 수를 결정하는 단계; 및
b) 개체가 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에서(선택적으로 PD-1-발현 NK 또는 T 세포 상에서) 증가된 NKG2A 발현 수준 및/또는 증가된 NKG2A+(선택적으로 NKG2A+PD1+) NK 및/또는 CD8 T 세포수(예컨대 참조 값 대비, 참조 값 대비 증가된, 제제를 사용하는 치료 전에 관찰된 값 대비 증가된)를 가짐이 결정되는 경우, 개체를 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 불량한 반응체로서 확인하는 단계.
소정의 선택적 양태에서, NK 및/또는 CD8+ T 세포 상에서 NKG2A 발현의 종양 샘플(예컨대 종양 조직 및/또는 종양 인접 조직) 내 존재를 평가함으로써 환자가 항-NKG2A 제제를 사용하는 치료에 대해 확인될 수 있다. 본원에서 임의의 치료적 용도 또는 암 치료 또는 예방 방법의 하나의 구현예에서, 개체에서 암의 치료 또는 예방은 다음 단계를 포함한다:
a) PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제로 치료받은 또는 치료받고 있는 암을 갖는 개체에서 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에서 NKG2A 발현 수준 및/또는 NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포의 수를 결정하는 단계; 및
b) 개체가 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에서 증가된 NKG2A 발현 수준 및/또는 증가된 NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포수를 가짐이 결정되는 경우, 개체에 인간 NKG2A 폴리펩타이드의 저해 활성을 중화시키는 화합물을 투여하는 단계.
임의의 방법의 하나의 구현예에서, NKG2A+ NK 및/또는 CD8 T 세포 상의 NKG2A 발현 수준 및/또는 세포수의 결정은 NK 및/또는 CD8 T 세포 상의 NKG2A 핵산 또는 폴리펩타이드의 발현 수준 결정 및/또는 생물학적 샘플에서 NKG2A+ NK 및/또는 CD8 T 세포수 결정 및 그 수준과 참조 수준(예컨대 값, 약하거나 강한 세포 표면 염색 등)의 비교를 포함한다. 참조 수준은, 예를 들어, 건강한 개체, 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 제제를 사용하는 치료에 반응하거나 잘 반응하지 않는 개체, 항-NKG2A 항체를 사용하는 치료로부터의 임상적 이익을 유도하지 않는/낮게 유도하는 개체, 또는 항-NKG2A 항체(선택적으로 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 제제와 병용으로)를 사용하는 치료로부터 실질적인 임상적 이익을 유도하는 개체에 대응한다. 생물학적 샘플이 증가된(예컨대 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 제제를 사용하는 치료로부터 충분한 임상적 이익을 유도하지 않는 개체에 대응하는 수로, 항-NKG2A 항체를 사용하는 치료로부터 실질적인 임상적 이익을 유도하는 개체에 대응하는 수로) NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포수를 포함한다는 결정은 개체가, 예컨대 본원에 기재되는 치료 방법에 따라, 항-NKG2A 항체로 치료받을 수 있는 암을 가짐을 시사한다. 생물학적 샘플이 증가된(예컨대 높은 값, 강한 표면 염색, 인간 PD-1 폴리펩타이드를 저해하는 제제를 사용하는 치료로부터 충분한 임상적 이익을 유도하지 않는 개체에 대응하는 수준, 항-NKG2A 항체를 사용하는 치료로부터 실질적인 임상적 이익을 유도하는 개체에 대응하는 수준, 항-NKG2A 항체를 사용하는 치료로부터 임상적 이익을 유도하지 않는/낮게 유도하는 개체에 대응하는 것보다 높은 수준 등) 수준으로 NKG2A 핵산 또는 폴리펩타이드를 발현한다는 결정은 개체가, 예컨대 본원에 기재되는 치료 방법에 따라, 항-NKG2A 항체로 치료받을 수 있는 암을 가짐을 시사한다.
하나의 구현예에서, CD8 T 세포는 종양 침윤 CD8 T 세포이다. 하나의 구현예에서, NK 세포는 종양 침윤 NK 세포이다. 하나의 구현예에서, 적어도 15%, 20 25% 또는 30%의 NK 및/또는 CD8 T 세포는 PD1+NKG2A+이다.
하나의 구현예에서, 개체는 이의 표면에 HLA-E 폴리펩타이드를 발현하는 악성 세포를 포함하는 암을 갖는다. 하나의 구현예에서, 치료 방법은 암을 갖는 개체 내의 악성 세포(예컨대 종양 세포)의 HLA-E 폴리펩타이드 상태를 결정하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 악성 세포가 HLA-E 핵산 또는 폴리펩타이드를 발현한다는 결정은 개체가 NKG2A를 저해하는 제제로 치료받을 수 있는 암을 가짐을 시사한다.
다른 구현예에서, 약학 조성물 및 키트뿐만 아니라 이의 사용 방법이 제공된다. 하나의 구현예에서, 인간 NKG2A 폴리펩타이드의 저해 활성을 중화시키는 화합물을 포함하는 약학 조성물이 제공된다. 하나의 구현예에서, 인간 NKG2A 폴리펩타이드의 저해 활성을 중화시키는 화합물 및 NK 및/또는 CD8 T 세포 표면 상에서 NKG2A의 발현을 검출할 수 있는 제제(예컨대 검출 가능한 모이어티에 결합된 항체 또는 다른 NKG2A-결합 제제)를 포함하는 키트가 제공된다.
이러한 양태는 본원에 제공되는 본 발명의 설명에 보다 자세히 기재되며, 추가적인 양태, 특징 및 장점은 이로부터 자명할 것이다.
도 1a 및 도 1b는 PD-L1+ Qa-1+ RMA-S Qa-1 Qdm B2m 및 A20 종양 세포가 NKG2A를 발현하는 NK 세포 및 NKG2A 및/또는 PD-1을 발현하는 CD8 T 세포에 의해 침윤됨을 나타낸다. 종양 부피가 약 500 ㎣인 경우 RMA-S Qa-1 Qdm B2m(상부 열) 및 A20(하부 열) 종양 보유 마우스를 희생시켰다. 종양 세포(도 1a) 및 종양 침윤 림프구-TIL-(도 1b)을 종양 세포에 대해 Qa-1 및 PDL-1 그리고 TIL에 대해 NKG2A/C/E 및 PD-1의 발현에 대해 각각 유세포측정에 의해 분석하였다. MFI: 형광 세기의 중앙값.
도 2는 마우스에서 NK 및 T 세포 하위세트 상의 NKG2A 및 PD-1 분포를 나타낸다. 림프구를 비장, 종양 배액 림프절, 및 고형 종양 물질 내에서 취하였다. PD-1 발현은 비장 및 림프절로부터의 모든 세포 하위세트 중에서 드물거나 없었지만, 종양 침윤 림프구(TIL) 중에서는 모든 세포 하위세트가 상대적으로 높은 백분율의 PD-1 발현 세포를 가졌다. 반면 NKG2A는 비장 및 림프절에서의 NK 세포 상에서는 확인되었으나 T 세포 하위세트 상에서는 확인되지 않았고, 그러나 종양에서는 상당한 백분율의 TIL 상에서 학인되었고, NKG2A 및 PD-1에 대해 이중 양성인 평균 30% 초과 NK 세포 및 19% 초과 CD8 T 세포를 갖는다.
도 3a 및 도 3b는 종양 보유 마우스에서 NKG2A 및 PD-1 발현을 나타낸다. 이의 종양이 각각 500 ㎣, 2000 ㎣ 및 800 ㎣의 부피에 도달했을 때 RMA Rae1(상부 열), MC38(중간 열) 및 RMA(하부 열) 종양 보유 마우스를 희생시켰다. NK 세포(도 3a) 및 CD8 T 세포(도 3b)를 NKG2A/C/E 및 PD-1 발현에 대해 비장, 종양 배액 림프절(LN) 및 종양에서 유세포측정에 의해 분석하였다.
도 4는 항-PD-1 mAb를 이용한 마우스 치료가 MC38 종양에서 NKG2A 발현 TCD8 세포의 빈도를 증가시킴을 나타낸다. MC38 종양 보유 마우스를 세포 그래프트화 후 11일, 14일 및 17일차에 200 ㎍의 래트 IgG2a 이소형 대조군(IC) 또는 항-마우스 PD-1 항체로 치료하였다. 마우스를 31일차에 희생시키고 CD8 T 세포를 비장, 종양 배액 림프절(LN) 및 종양에서 유세포측정에 의해 특징규명하였다.
도 5는 11일, 14일 및 18일차에 이소형 대조군, 항-마우스 NKG2A mAb(200 ㎍, iv), 항-마우스 PD-L1 mAb(200 ㎍, ip) 또는 항-mNKG2A/mPDL-1 조합으로 치료받은 마우스에서 경시적인 중앙값 종양 부피를 나타낸다. 항-NKG2A는 이 모델에서 이소형 대조군에 비해 중등도 항-종양 효과만을 산출하였고 항-PD-L1은 상당한 항-종양 효과를 산출하였으나 28일차를 향해 갈수록 종양 부피가 증가한 반면, 항-NKG2A 및 항-PD-L1로의 병용 치료는 종양 성장을 완전 폐지하였으며, 28일차에 관찰된 종양 부피에서 유의미한 성장을 갖지 않았다.
도 6은 이소형 대조군 또는 중화 항-마우스 PD-L1 mAb 또는 항-마우스 PD-1로 치료받은 PD-1/-L1 내성 A20 림프종 보유 마우스에서 경시적인 중앙값 종양 부피를 나타낸다. 이소형 대조군, 항-PD1 또는 항-PD-L1 항체 중 어느 것도 종양 성장의 제어에서 효과적이지 않았다.
도 7은 중화 항-마우스 NKG2A와 병용으로 이소형 대조군 또는 중화 항-마우스 PD-1 mAb 또는 항-마우스 PD-1로 치료받은 A20 림프종 보유 마우스에서 경시적인 중앙값 종양 부피를 나타낸다. 이소형 대조군 또는 항-PD1 항체 중 어느 것도 종양 성장의 제어에서 효과적이지 않았으나, 항-NKG2A 항체 치료가 추가되는 경우, 대부분의 동물(7/10)에서 완전한 종양 퇴행이 관찰되었다.
도 8은 중화 항-마우스 NKG2A와 병용으로 이소형 대조군 또는 중화 항-마우스 PD-L1 mAb 또는 항-마우스 PD-L1로 치료받은 A20 림프종 보유 마우스에서 경시적인 중앙값 종양 부피를 나타낸다. 항-NKG2A 항체 치료가 항-PD-L1 치료에 추가되는 경우, 대부분의 동물(9/11)에서 완전한 종양 퇴행이 관찰되었다.
도 2는 마우스에서 NK 및 T 세포 하위세트 상의 NKG2A 및 PD-1 분포를 나타낸다. 림프구를 비장, 종양 배액 림프절, 및 고형 종양 물질 내에서 취하였다. PD-1 발현은 비장 및 림프절로부터의 모든 세포 하위세트 중에서 드물거나 없었지만, 종양 침윤 림프구(TIL) 중에서는 모든 세포 하위세트가 상대적으로 높은 백분율의 PD-1 발현 세포를 가졌다. 반면 NKG2A는 비장 및 림프절에서의 NK 세포 상에서는 확인되었으나 T 세포 하위세트 상에서는 확인되지 않았고, 그러나 종양에서는 상당한 백분율의 TIL 상에서 학인되었고, NKG2A 및 PD-1에 대해 이중 양성인 평균 30% 초과 NK 세포 및 19% 초과 CD8 T 세포를 갖는다.
도 3a 및 도 3b는 종양 보유 마우스에서 NKG2A 및 PD-1 발현을 나타낸다. 이의 종양이 각각 500 ㎣, 2000 ㎣ 및 800 ㎣의 부피에 도달했을 때 RMA Rae1(상부 열), MC38(중간 열) 및 RMA(하부 열) 종양 보유 마우스를 희생시켰다. NK 세포(도 3a) 및 CD8 T 세포(도 3b)를 NKG2A/C/E 및 PD-1 발현에 대해 비장, 종양 배액 림프절(LN) 및 종양에서 유세포측정에 의해 분석하였다.
도 4는 항-PD-1 mAb를 이용한 마우스 치료가 MC38 종양에서 NKG2A 발현 TCD8 세포의 빈도를 증가시킴을 나타낸다. MC38 종양 보유 마우스를 세포 그래프트화 후 11일, 14일 및 17일차에 200 ㎍의 래트 IgG2a 이소형 대조군(IC) 또는 항-마우스 PD-1 항체로 치료하였다. 마우스를 31일차에 희생시키고 CD8 T 세포를 비장, 종양 배액 림프절(LN) 및 종양에서 유세포측정에 의해 특징규명하였다.
도 5는 11일, 14일 및 18일차에 이소형 대조군, 항-마우스 NKG2A mAb(200 ㎍, iv), 항-마우스 PD-L1 mAb(200 ㎍, ip) 또는 항-mNKG2A/mPDL-1 조합으로 치료받은 마우스에서 경시적인 중앙값 종양 부피를 나타낸다. 항-NKG2A는 이 모델에서 이소형 대조군에 비해 중등도 항-종양 효과만을 산출하였고 항-PD-L1은 상당한 항-종양 효과를 산출하였으나 28일차를 향해 갈수록 종양 부피가 증가한 반면, 항-NKG2A 및 항-PD-L1로의 병용 치료는 종양 성장을 완전 폐지하였으며, 28일차에 관찰된 종양 부피에서 유의미한 성장을 갖지 않았다.
도 6은 이소형 대조군 또는 중화 항-마우스 PD-L1 mAb 또는 항-마우스 PD-1로 치료받은 PD-1/-L1 내성 A20 림프종 보유 마우스에서 경시적인 중앙값 종양 부피를 나타낸다. 이소형 대조군, 항-PD1 또는 항-PD-L1 항체 중 어느 것도 종양 성장의 제어에서 효과적이지 않았다.
도 7은 중화 항-마우스 NKG2A와 병용으로 이소형 대조군 또는 중화 항-마우스 PD-1 mAb 또는 항-마우스 PD-1로 치료받은 A20 림프종 보유 마우스에서 경시적인 중앙값 종양 부피를 나타낸다. 이소형 대조군 또는 항-PD1 항체 중 어느 것도 종양 성장의 제어에서 효과적이지 않았으나, 항-NKG2A 항체 치료가 추가되는 경우, 대부분의 동물(7/10)에서 완전한 종양 퇴행이 관찰되었다.
도 8은 중화 항-마우스 NKG2A와 병용으로 이소형 대조군 또는 중화 항-마우스 PD-L1 mAb 또는 항-마우스 PD-L1로 치료받은 A20 림프종 보유 마우스에서 경시적인 중앙값 종양 부피를 나타낸다. 항-NKG2A 항체 치료가 항-PD-L1 치료에 추가되는 경우, 대부분의 동물(9/11)에서 완전한 종양 퇴행이 관찰되었다.
[정의]
명세서에서 이용되는 단수는 하나 이상을 의미할 수 있다. 단어 "포함하는"과 함께 이용되는 경우, 청구범위(들)에서 이용되는 단수는 하나 또는 하나 초과를 의미할 수 있다. 본원에서 이용되는 "또 다른"은 적어도 제2의 또는 그 이상을 의미할 수 있다.
"포함하는"이 이용되는 경우, 이는 선택적으로 "로 본질적으로 구성되는" 또는 "로 구성되는"에 의해 대체될 수 있다.
NKG2A(OMIM 161555, 그 전체 개시가 본원에 참조로 포함됨)는 NKG2 전사체 그룹의 구성원이다(Houchins, et al. (1991) J. Exp. Med. 173:1017-1020). NKG2A는 25 kb에 걸쳐 7개 엑손에 의해 인코딩되며, 일부 차별적 스플라이싱을 나타낸다. CD94와 함께, NKG2A는 NK 세포, α/β T 세포, γ/δ T 세포 및 NKT 세포의 하위세트의 표면 상에서 확인되는, 이종이량체성 저해 수용체 CD94/NKG2A를 형성한다. 저해 KIR 수용체와 유사하게, 이는 그 세포질 도메인에 ITIM을 보유한다. 본원에서 이용되는 "NKG2A"는 NKG2A 유전자 또는 인코딩되는 단백질의 임의의 변이체, 유도체, 또는 이소형을 나타낸다. 인간 NKG2A는 3개 도메인에 233개 아미노산을 포함하며, 하기 서열에서 세포질 도메인이 잔기 1 내지 70을 포함하고, 막통과 영역이 잔기 71 내지 93을 포함하고, 세포외 영역이 잔기 94 내지 233을 포함한다:
NKG2C(OMIM 602891, 그 전체 개시가 본원에 참조로 포함됨) 및 NKG2E(OMIM 602892, 그 전체 개시가 본원에 참조로 포함됨)는 NKG2 전사체 그룹의 2가지 다른 구성원이다(Gilenke, et al. (1998) Immunogenetics 48:163-173). CD94/NKG2C 및 CD94/NKG2E 수용체는 림프구의 하위세트, 예컨대 NK 세포 및 T-세포의 표면 상에서 확인되는 활성화 수용체이다.
HLA-E(OMIM 143010, 그 전체 개시가 본원에 참조로 포함됨)는 세포 표면 상에서 발현되고 펩타이드, 예로, 다른 MHC 클래스 I 분자의 신호 서열로부터 유래되는 단편의 결합에 의해 조절되는 비전통적 MHC 분자이다. HLA-E의 가용성 버전도 동정되었다. 그 T-세포 수용체 결합 특성에 부가하여, HLA-E는 CD94/NKG2A, CD94/NKG2B 및 CD94/NKG2C에 특이적으로 결합함으로써, 자연 살해(NK) 세포, 자연 살해 T-세포(NKG) 및 T 세포(α/β 및 γ/δ)의 하위세트에 결합한다(예로, 그 전체 개시가 본원에 참조로 포함되는 Braud et al. (1998) Nature 391:795-799 참고). HLA-E의 표면 발현은 표적 세포를 CD94/NKG2A+ NK, T, 또는 NKT 세포 클론에 의한 용해로부터 보호한다. 본원에서 이용되는 "HLA-E"는 HLA-E 유전자 또는 인코딩되는 단백질의 임의의 변이체, 유도체, 또는 이소형을 나타낸다.
본 발명의 맥락에서, "NKG2A" 또는 "CD94/NKG2A 양성 림프구"는 세포 표면 상에서 CD94/NKG2A를 발현하는 림프구 계통 세포(예로 NK-세포, NKT-세포 및 T-세포)를 나타내며, 예로 CD94 및 NKG2A 상의 조합 에피토프 또는 및 NKG2A 단독 상의 에피토프를 특이적으로 인식하는 항체를 이용하는 유세포측정에 의해 검출될 수 있다. "NKG2A 양성 림프구"에는 또한 림프구 기원의 불멸 세포주(예로 NKL, NK-92)가 포함된다.
본 발명의 맥락에서, "NKG2A의 저해 활성을 감소시킨다", "NKG2A를 중화한다" 또는 "NKG2A의 저해 활성을 중화한다"는 CD94/NKG2A가 림프구 반응, 예컨대 사이토카인 방출 및 세포독성 반응으로 이어지는 세포내 공정에 부정적으로 영향을 미치는 그 능력이 저해되는 공정을 나타낸다. 이는, 예를 들어 NK- 세포 또는 T-세포 기반 세포독성 검정에서 측정될 수 있고, 여기서 CD94/NKG2A 양성 림프구에 의한 HLA-E 양성 세포의 사멸을 자극하는 치료 화합물의 능력이 측정된다. 하나의 구현예에서, 항체 조제물은 CD94/NKG2A-제한 림프구의 세포독성에서 적어도 10% 증대, 선택적으로 림프구 세포독성에서 적어도 40% 또는 50% 증대, 선택적으로 NK 세포독성에서 적어도 70% 증대를 유도하며, 기재된 세포독성 검정을 나타낸다. 항-NKG2A 항체가 HLA-E와의 CD94/NKG2A 상호작용을 감소시키거나 차단하는 경우, 이는 CD94/NKG2A-제한 림프구의 세포독성을 증가시킬 수 있다. 이는, 예를 들어, 예로 CD94/NKG2A를 발현하는 NK 세포 및 HLA-E를 발현하는 표적 세포를 이용하는 표준 4-시간 시험관내 세포독성 검정에서 평가될 수 있다. 이러한 NK 세포는 CD94/NKG2A가 HLA-E를 인식하기 때문에 HLA-E를 발현하는 표적을 효율적으로 사멸시키지 않아서, 림프구-매개 세포용해를 예방하는 저해 신호전달의 개시 및 전파로 이어진다. 이러한 시험관내 세포독성 검정은, 예를 들어 문헌[Coligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. 및 Wiley Interscience, N.Y.,(1992, 1993)]에 기재된 바와 같이, 당분야에 널리 공지된 표준 방법에 의해 수행될 수 있다. 항체가 림프구를 자극하여 표적 세포, 예컨대 P815, K562 세포, 또는 적절한 종양 세포를 사멸시키는 능력을 평가하기 위한 크롬 방출 및/또는 다른 파라미터가 또한 문헌[Sivori et al., J. Exp. Med. 1997;186:1129-1136; Vitale et al., J. Exp. Med. 1998; 187:2065-2072; Pessino et al. J. Exp. Med. 1998;188:953-960; Neri et al. Clin. Diag. Lab. Immun. 2001;8:1131-1135; Pende et al. J. Exp. Med. 1999;190:1505-1516]에 개시되며, 각각의 전체 개시가 본원에 참조로 포함된다. 표적 세포는 NK 세포의 첨가 전에 51Cr으로 표지된 후, 사멸 결과, 세포로부터 배지로의 51Cr 방출에 비례하는 것으로 사멸이 추산된다. CD94/NKG2A가 HLA-E에 결합하는 것을 방지하는 항체의 첨가는 CD94/NKG2A를 통해 저해 신호전달의 개시 및 전파를 방지한다. 따라서, 이러한 제제의 첨가는 표적 세포의 림프구-매개 사멸을 증가시킨다. 이에 따라 상기 단계로, 예로 리간드 결합의 차단에 의해 CD94/NKG2A-유도 음성 신호전달을 방지하는 제제가 확인된다. 특정한 51Cr-방출 세포독성 검정에서, CD94/NKG2A-발현 NK 효과기-세포는 HLA-E-음성 LCL 721.221 표적 세포를 사멸시킬 수 있지만 HLA-E-발현 LCL 721.221-Cw3 대조군 세포는 덜 사멸시킨다. 대조적으로, CD94/NKG2A가 없는 YTS 효과기-세포는 두 세포주를 모두 효율적으로 사멸시킨다. 따라서, NK 효과기 세포는 CD94/NKG2A를 통한 HLA-E-유도 저해 신호전달로 인해 HLA-E+ LCL 721.221-Cw3 세포를 덜 효율적으로 사멸시킨다. NK 세포가 이러한 51Cr-방출 세포독성 검정에서 본 발명에 따른 차단 항-CD94/NKG2A 항체와 사전-인큐베이션되면, HLA-E-발현 LCL 721.221-Cw3 세포는 항체-농도-의존적 양상으로 더 효율적으로 사멸된다. 항-NKG2A 항체의 저해 활성(즉, 세포독성 증강능)도 임의의 여러 다른 방식으로, 예로 그 개시가 본원에 참조로 포함되는 문헌[Sivori et al., J. Exp. Med. 1997;186:1129-1136]에 기재된 바와 같은 세포내 자유 칼슘에 대한 그 효과에 의해 평가될 수 있다. NK 세포 세포독성의 활성화는, 예를 들어 사이토카인 생산(예로 IFN-γ 생산) 또는 세포독성 마커(예로 CD107 또는 CD137 가동화)에서의 증가를 측정하여 평가될 수 있다. 예시적인 프로토콜에서, PBMC로부터의 IFN-y 생산은 세포 표면 및 세포질내 염색 및 배양 4일 후 유세포측정에 의한 분석에 의해 평가된다. 간략하게, 브레펠딘 A(Sigma Aldrich)가 배양 말기 4시간 동안 5 ㎍/ml의 최종 농도로 첨가된다. 이어서 세포가 항-CD3 및 항-CD56 mAb와 인큐베이션된 후 투과화(IntraPrep™; Beckman Coulter) 및 PE-항-IFN-y 또는 PE-IgG1(Pharmingen)로 염색된다. 폴리클로날 활성화 NK 세포로부터의 GM-CSF 및 IFN-y 생산이 ELISA(GM-CSF: DuoSet Elisa, R&D Systems, Minneapolis, MN, IFN-y: OptElA 세트, Pharmingen)를 이용하여 상청액 중에서 측정된다.
본원에서 사용되는 용어 "PD-1"은 또한 CD28, CTLA-4, ICOS 및 BTLA가 포함되는, 수용체의 CD28 패밀리의 저해 구성원인 단백질 Programmed Death 1(PD-1)(또한 "Programmed Cell Death 1"로 나타냄)을 나타낸다. 전체 인간 PD-1 서열은 다음과 같이 나타내는, GenBank 접근 번호 U64863 하에 확인될 수 있다:
"PD-1"에는 또한 PD-1 유전자 또는 인코딩된 단백질의 임의의 변이체, 유도체, 또는 이소형이 포함된다. PD-1은 활성화된 B 세포, T 세포 및 골수구 세포 상에서 발현된다 Okazaki et al. (2002) Curr. Opin. Immunol. 14: 391779-82; Bennett et al. (2003) J Immunol 170:711-8). 패밀리의 초기 구성원, CD28 및 ICOS는 모노클로날 항체의 첨가 후 T 세포 증식의 증대에 대한 기능적 효과에 의해 발견되었다(Hutloff et al. (1999) Nature 397:263-266; Hansen et al. (1980) Immunogenics 10:247-260). PD-1에 대해 2가지 리간드, PD-L1 및 PD-L2가 확인되었으며, 이는 PD-1에 대한 결합 시 T 세포 활성화를 하향조절하는 것으로 나타났다(Freeman et al. (2000) J Exp Med 192:1027-34; Latchman et al. (2001) Nat Immunol 2:261-8; Carter et al. (2002) Eur J Immunol 32:634-43). PD-L1 및 PD-L2는 둘 다 PD-1에 결합하지만, 다른 CD28 패밀리 구성원에 결합하지 않는 B7 상동체이다.
전체 인간 PD-L1 서열은 다음과 같이 나타내는, UniProtKB/Swiss-Prot, 식별자 Q9NZQ7-1 하에 확인될 수 있다:
PD-L1은 다양한 인간 암에서 풍부하다(Dong et al. (2002) Nat. Med. 8:787-9). PD-1 및 PD-L1 간 상호작용은 종양 침윤 림프구에서의 감소, T-세포 수용체 매개 증식에서의 감소 및 암성 세포에 의한 면역 침입을 일으킨다(Dong et al. (2003) J. Mol. Med. 81:281-7; Blank et al. (2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:5094-100). 면역 억제는 PD-1과 PD-L1의 국소 상호작용의 저해에 의해 역전될 수 있고, PD-1과 PD-L2의 상호작용이 또한 차단되는 경우 그 효과는 부가적이다.
본 발명의 맥락에서, "인간 PD-1의 저해 활성을 감소시킨다", "PD-1을 중화시킨다" 또는 "인간 PD-1의 저해 활성을 중화시킨다"는 PD-1이 PD-1과 하나 이상의 그 결합 파트너, 예컨대 PD-L1 또는 PD-L2 간 상호작용에서 생성되는 그 신호 전달능에서 저해되는 과정을 나타낸다. PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제는 PD-1과 하나 이상의 그 결합 파트너, 예컨대 PD-L1, PD-L2 간 상호작용에서 생성되는 신호 전달을 감소시키거나, 차단하거나, 저해하거나, 폐지하거나, 방해한다. 이에 의해 이러한 제제는 T-세포 효과기 기능, 예컨대 증식, 사이토카인 생산 및/또는 세포독성을 증강시키기 위해, T 림프구 상에서 발현되는 세포 표면 단백질에 의해 또는 이를 통해 매개되는 부정적 공동-자극 신호를 감소시킬 수 있다.
"암의 치료" 등이 항-NKG2A 결합 제제(예로 항체)에 대해 언급되는 경우, 본 출원이 출원되는 국가에서의 특허 허여에 허용 가능한 요지 대상에 따라, 다음이 포함된다: (a) 암의 치료 방법으로서, 암의 치료를 허용하는 용량(치료 유효량)으로, 선택적으로 본원에 명시된 용량(양)으로, 이러한 치료를 필요로 하는 개체, 포유류, 특히 인간에게 NKG2A 결합 제제(예컨대, 함께 또는 각각 별도로 약제학적으로 허용 가능한 담체 물질 중)를 (적어도 1회 치료를 위해) 투여하는 단계를 포함하는, 방법; (b) 암의 치료를 위한 항-NKG2A 결합 제제의 용도 또는 상기 치료에서(특히 인간에서)의 이용을 위한 항-NKG2A 결합 제제; (c) 암의 치료를 위한 약학 조제물의 제조를 위한 항-NKG2A 결합 제제의 용도, 항-NKG2A 결합 제제를 약제학적으로 허용 가능한 담체와 혼합하는 단계를 포함하는 암의 치료를 위한 약학 조제물의 제조를 위한 항-NKG2A 결합 제제의 이용 방법, 또는 암의 치료에 적절한 항-NKG2A 결합 제제의 유효 용량을 포함하는 약학 조제물; 또는 (d) a), b) 및 c)의 임의의 조합을 의미한다.
본원에서 이용되는 용어 "생검"은 진단을 확립하기 위한 것과 같은, 검사 목적을 위한 조직의 제거로서 정의된다. 생검 유형의 예에는 시린지에 부착된 바늘을 통한 것과 같이, 흡입의 적용에 의한 것, 조직 단편의 기구적 제거에 의한 것; 내시경을 통해 적절한 기구로의 제거에 의한 것; 전체 병소 등의 수술적 절제에 의한 것 등이 포함된다.
본원에서 이용되는 용어 "항체"는 폴리클로날 및 모노클로날 항체를 나타낸다. 중쇄 내 불변 도메인의 유형에 따라, 항체는 5가지 주요 클래스: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 중 하나에 할당된다. 이들 중 몇몇은 하위클래스 또는 이소형, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 등으로 추가 구분된다. 예시적인 면역글로불린(항체) 구조 단위는 사량체를 포함한다. 각각의 사량체는 2개의 동일한 쌍의 폴리펩타이드쇄로 이루어지며, 각각의 쌍은 1개의 "경쇄"(약 25 kDa) 및 1개의 "중쇄"(약 50 내지 70 kDa)를 갖는다. 각각의 쇄의 N-말단은 일차적으로 항원 인식에 관여하는 약 100개 내지 110개 이상 아미노산의 가변 영역을 정의한다. 용어 가변 경쇄(VL) 및 가변 중쇄(VH)는 이들 경쇄 및 중쇄를 각각 나타낸다. 상이한 면역글로불린 클래스에 대응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 "알파", "델타", "엡실론", "감마" 및 "뮤"로 명명된다. 상이한 면역글로불린 클래스의 서브유닛 구조 및 3차원 배치는 잘 알려져 있다. IgG는 이들이 생리적 상황에서 가장 일반적인 항체이므로, 그리고 이들이 실험실 환경에서 가장 쉽게 제조되므로, 본원에서 채용되는 예시적인 항체 클래스이다. 선택적으로 항체는 모노클로날 항체이다. 항체의 구체예에는 인간화, 키메라, 인간, 또는 달리-인간-적합 항체가 있다. "항체"에는 또한 임의의 본원에 기재되는 항체의 임의의 단편 또는 유도체가 포함된다.
용어 "~에 특이적으로 결합한다"란 항체가 단백질의 재조합 형태, 여부에서의 에피토프, 또는 단리된 표적 세포의 표면 상에 존재하는 원상태 단백질을 이용하여 평가되는 바와 같이, 경쟁적 결합 검정에서 결합 파트너, 예로 NKG2A, PD-1, PD-L1에 바람직하게 결합할 수 있음을 의미한다. 특이적 결합을 결정하기 위한 경쟁적 결합 검정 및 다른 방법은 당분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어 결합은 방사선 표지, 물리적 방법, 예컨대 질량 분광측정, 또는 예로 세포형광계측 분석(예로 FACScan)을 이용하여 검출되는 직접적 또는 간접적 형광 표지를 통해 검출될 수 있다. 대조군, 비특이적 제제를 이용해서 나타나는 양을 초과하는 결합은 제제가 표적에 결합함을 시사한다. NKG2A에 특이적으로 결합하는 제제는 NKG2A 단독에 또는 CD94와의 이량체로서의 NKG2A에 결합할 수 있다.
항체가 특정한 모노클로날 항체"와 경쟁한다"고 언급되는 경우, 이는 항체가 재조합 분자(예로, NKG2A, PD-1, PD-L1) 또는 표면 발현 분자(예로, NKG2A, PD-1, PD-L1)를 이용하는 결합 검정에서 모노클로날 항체와 경쟁함을 의미한다. 예를 들어, 평가 항체가 결합 검정에서 NKG2A 폴리펩타이드 또는 NKG2A-발현 세포에 대한 SEQ ID NO: 4 내지 8 중 어느 것의 중쇄 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄를 갖는 항체의 결합을 감소시키는 경우, 항체는 이러한 항체와 각각 "경쟁한다"고 언급된다.
본원에서 이용되는 용어 "친화도"란, 에피토프에 대한 항체의 결합 강도를 의미한다. 항체의 친화도는 [Ab] x [Ag] / [Ab-Ag]로 정의되는 해리 상수 Kd에 의해 주어지며, 여기서 [Ab-Ag]는 항체-항원 복합체의 몰 농도이고, [Ab]는 미결합 항체의 몰 농도이고, [Ag]는 미결합 항원의 몰 농도이다. 친화도 상수 Ka는 1/Kd로 정의된다. mAb의 친화도 결정 방법은 문헌[Harlow, et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988), Coligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y.,(1992, 1993) 및 Muller, Meth. Enzymol. 92:589-601(1983)]에서 확인될 수 있고, 상기 참고문헌은 전체가 본원에 참조로 포함된다. mAb의 친화도를 결정하기 위해 당분야에 널리 공지된 하나의 표준 방법은 표면 플라즈몬 공명(SPR) 스크리닝의 이용이다(예컨대 BIAcore™ SPR 분석 장치를 이용하는 분석에 의해).
본원의 맥락 내에서, "결정기"는 폴리펩타이드 상의 상호작용 또는 결합 부위를 지칭한다.
용어 "에피토프"란 항원성 결정기를 나타내며, 항체가 결합하는 항원 상 지역 또는 영역이다. 단백질 에피토프는 결합에 직접 관여되는 아미노산 잔기뿐만 아니라 특정한 항원 결합 항체 또는 펩타이드에 의해 효과적으로 차단되는 아미노산 잔기, 즉 항체의 "발자국(footprint)" 내의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 이는, 예로 항체 또는 수용체와 조합될 수 있는 복잡한 항원 분자 상의 가장 간단한 형태 또는 가장 작은 구조 영역이다. 에피토프는 선형 또는 입체형태/구조적일 수 있다. 용어 "선형 에피토프"는 아미노산의 선형 서열(일차 서열) 상에서 인접하는 아미노산 잔기로 이루어진 에피토프로서 정의된다. 용어 "입체형태 또는 구조적 에피토프"는 전혀 인접하지 않고 아미노산 잔기로 이루어진 에피토프로서 정의되며, 이에 따라 분자의 폴딩에 의해 서로 인접하게 되는 아미노산의 선형 서열의 분리된 부분(이차, 삼차 및/또는 사차 구조)을 나타낸다. 입체형태 에피토프는 3-차원 구조에 의존한다. 따라서 용어 '입체형태'란 종종 '구조적'과 상호교환적으로 이용된다.
용어 "제제"란 화학적 화합물, 화학적 화합물의 혼합물, 생물학적 거대분자, 또는 생물학적 물질로부터 제조된 추출물을 표시하기 위해 본원에서 이용된다. 용어 "치료제"는 생물학적 활성을 갖는 제제를 나타낸다.
본원에서의 목적을 위해, "인간화" 또는 "인간" 항체는 하나 이상의 인간 면역글로불린의 불변 및 가변 프레임워크 영역이 동물 면역글로불린의 결합 영역, 예로 CDR과 융합되는 항체를 나타낸다. 이러한 항체는 결합 영역이 유래되는 비-인간 항체의 결합 특이성을 유지하지만, 비-인간 항체에 대한 면역 반응을 회피하도록 설계된다. 이러한 항체는 항원성 유발접종에 반응하여 특이적 인간 항체를 생산하도록 "조작된" 트랜스제닉 마우스 또는 다른 동물로부터 수득될 수 있다(예로, 그 전체 교시가 본원에 참조로 포함되는, 문헌[Green et al. (1994) Nature Genet 7:13; Lonberg et al. (1994) Nature 368:856; Taylor et al. (1994) Int Immun 6:579] 참고). 완전 인간 항체는 모두 당분야에 널리 공지되어 있는, 유전적 또는 염색체 전달감염 방법뿐만 아니라 파지 디스플레이 기술에 의해서도 구축될 수 있다(예로, 문헌[McCafferty et al. (1990) Nature 348:552-553] 참고). 인간 항체는 또한 시험관내 활성화된 B 세포에 의해 생성될 수 있다(예로, 이들의 전문이 참조로 포함되는, 미국 특허 제5,567,610호 및 제5,229,275호 참고).
"키메라 항체"는 (a) 항원 결합 부위(가변 영역)가 상이하거나 변형된 클래스, 효과기 기능 및/또는 종의 불변 영역 또는 키메라 항체에 대해 새로운 특성을 부여하는 완전히 상이한 분자, 예로 효소, 독소, 호르몬, 성장 인자, 약물 등에 연결되도록 불변 영역, 또는 이들의 일부가 변형되거나, 대체되거나, 교환된; 또는 (b) 가변 영역 또는 이들의 일부가 상이하거나 변형된 항원 특이성을 갖는 가변 영역으로 변형되거나, 대체되거나, 교환된 항체 분자이다.
용어 "Fc 도메인", "Fc 부분" 및 "Fc 영역"은 항체 중쇄의 C-말단 단편, 예로 인간 γ(감마) 중쇄의 아미노산(aa) 약 230 내지 aa 약 450 또는 다른 유형의 항체 중쇄(예로, 인간 항체에 있어서 α, δ, ε 및 μ), 또는 이들의 천연 발생 동종이형에서의 그 대응부 서열을 나타낸다. 달리 명시되지 않는 한, 면역글로불린에 대해 일반적으로 허용되는 Kabat 아미노산 넘버링이 본 개시를 통해 이용된다(문헌[Kabat et al. (1991) Sequences of Protein of Immunological Interest, 5th ed., United States Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, MD] 참고).
용어 "단리된", "정제된" 또는 "생물학적으로 순수한"은 그 원상태 상태에서 확인되는 바와 같이 이들에 보통 수반되는 성분이 실질적으로 또는 본질적으로 없는 물질을 나타낸다. 순도 및 균질성은 전형적으로 분석 화학 기법, 예컨대 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동 또는 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 결정된다. 조제물에 존재하는 주요 종인 단백질은 실질적으로 정제된다.
용어 "폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 나타내기 위해 본원에서 상호 교환적으로 이용된다. 상기 용어는 하나 이상의 아미노산 잔기가 대응하는 천연 발생 아미노산의 인공적 화학 모사체인 아미노산 중합체뿐만 아니라 천연 발생 아미노산 중합체 및 비천연 발생 아미노산 중합체에 적용된다.
용어 "재조합"은, 예로 세포, 또는 핵산, 단백질, 또는 벡터에 대해 이용되는 경우, 세포, 핵산, 단백질 또는 벡터가 이종성 핵산 또는 단백질의 도입 또는 원상태 핵산 또는 단백질의 변형에 의해 개질되었음을, 또는 세포가 이렇게 개질된 세포로부터 유래됨을 시사한다. 따라서, 예를 들어, 재조합 세포는 세포의 원상태(비재조합) 형태 내에서 확인되지 않는 유전자를 발현하거나 다르게 비정상적으로 발현되거나 하향 발현되거나 전혀 발현되지 않는 원상태 유전자를 발현한다.
본원에서의 맥락 내에서, 폴리펩타이드 또는 에피토프에 "결합하는" 항체라는 용어는 상기 결정기에 특이성 및/또는 친화도를 가지고 결합하는 항체를 지칭한다.
용어 "동일성" 또는 "동일한"은 2개 이상의 폴리펩타이드의 서열 간 관계에서 이용되는 경우, 2개 이상의 아미노산 잔기 스트링 간 매치 수에 의해 결정되는, 폴리펩타이드 간 서열 관련성 정도를 나타낸다. "동일성"은 특정한 수학 모델 또는 컴퓨터 프로그램(즉, "알고리즘")에 의해 해결되는 갭 정렬(존재하는 경우)을 갖는 더 작은 2개 이상의 서열 간 동일한 매치 백분율을 측정한다. 관련 폴리펩타이드의 동일성은 공지된 방법에 의해 쉽게 계산될 수 있다. 이러한 방법에는, 비제한적으로 문헌[Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin, A. M., 및 Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M. Stockton Press, New York, 1991; 및 Carillo et al., SIAM J. Applied Math. 48, 1073 (1988)]에 기재된 것들이 포함된다.
동일성 결정 방법은 평가되는 서열 간에 가장 큰 매치를 제공하도록 설계된다. 동일성 결정 방법은 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 프로그램에서 설명된다. 두 서열 간 동일성을 결정하기 위한 컴퓨터 프로그램 방법에는 GAP을 포함하는 GCG 프로그램 패키지(Devereux et al., Nucl. Acid. Res. 12, 387(1984); Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis.), BLASTP, BLASTN 및 FASTA(Altschul et al., J. Mol. Biol. 215, 403-410(1990))가 포함된다. BLASTX 프로그램은 NCBI(National Center for Biotechnology Information) 및 다른 출처(BLAST Manual, Altschul et al. NCB/NLM/NIH Bethesda, Md. 20894; Altschul et al., 상기 문헌)에서 공개적으로 이용 가능하다. 널리 공지된 Smith Waterman 알고리즘도 동일성을 결정하기 위해 이용될 수 있다.
NKG2A-중화 치료제
항-NKG2A 제제는 인간 CD94/NKG2A 수용체의 세포외 부분에 결합하며 CD94/NKG2A 양성 림프구의 표면 상에서 발현되는 인간 CD94/NKG2A 수용체의 저해 활성을 감소시킨다. 하나의 구현예에서, 제제는 CD94/NKG2A에 대한 결합에서 HLA-E와 경쟁한다, 즉 제제는 CD94/NKG2A 및 그 리간드 HLA-E 간 상호작용을 차단한다. 또 다른 구현예에서, 제제는 CD94/NKG2A에 대한 결합에서 HLA-E와 경쟁하지 않는다; 즉 제제는 HLA-E와 동시에 CD94/NKG2A에 결합할 수 있다. 항체는 CD94 및 NKG2A 상의 조합 에피토프 또는 및 NKG2A 상의 단독 에피토프에 결합할 수 있다.
하나의 양태에서, 항-NKG2A 제제는 완전 인간 항체, 인간화 항체 및 키메라 항체로부터 선택된 항체이다. 하나의 양태에서, 제제는 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체로부터 유래되는 불변 도메인을 포함한다. 하나의 양태에서, 제제는 IgA, IgD, IgG, IgE 및 IgM 항체로부터 선택된 항체의 단편이다. 하나의 양태에서, 제제는 Fab 단편, Fab' 단편, Fab'-SH 단편, F(ab)2 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, 중쇄 Ig(라마 또는 낙타 Ig), VHH 단편, 단일 도메인 FV 및 단일쇄 항체 단편으로부터 선택된 항체 단편이다. 하나의 양태에서, 제제는 scFV, dsFV, 미니바디(minibody), 디아바디(diabody), 트리아바디(triabody), 카파바디(kappa body), IgNAR 및 다중특이적 항체로부터 선택된 합성 또는 반합성 항체-유래 분자이다.
선택적으로, 항-NKG2A 항체는 인간 Fcγ 수용체, 예컨대 CD16에 대한 실질적인 특이적 결합을 실증하지 않는다. 선택적으로, 항-NKG2A 항체는 하나 이상의 또는 모든 인간 CD16, CD32A, CD32B 또는 CD64에 대해 실질적인 특이적 결합이 없거나 낮거나 감소된 특이적 결합을 갖는다. 예시적인 항체는 Fcγ 수용체에 대해 결합하지 않는 것으로 알려져 있거나 이에 대해 낮은 결합을 갖는 다양한 중쇄의 불변 영역을 포함할 수 있다. 하나의 이러한 예는 인간 IgG4 불변 영역이다. 하나의 구현예에서, IgG4 항체는 생체내에서 절반 항체의 형성을 방지하기 위한 변형(fab 팔 교환)을 포함하며, 예컨대, 항체는 EU-지수에 따라 위치 228에 대응하는 잔기 241에 세린에서 프롤린으로의 돌연변이를 포함하는 IgG4 중쇄를 포함한다(Kabat et al., "Sequences of proteins of immunological interest", 5th ed., NIH, Bethesda, ML, 1991). 이러한 변형된 IgG4 항체는 생체내에서 온전하게 유지될 것이며, 이것이 결합 친화도를 변경할 수 있는 1가 방식으로 NKG2A에 결합하도록 생체내 fab 팔 교환을 거칠 원상태 IgG4와 대비되어, NKG2A에 대해 2가(고친화도) 결합을 유지할 것이다. 대안적으로 불변 영역, 예컨대 Fab 또는 F(ab')2 단편을 포함하지 않는 IgG4 항체 단편이 Fc 수용체 결합을 회피하기 위해 이용될 수 있다. Fc 수용체 결합은, 예를 들어 BIACORE 검정에서 Fc 수용체 단백질에 대한 항체의 결합 평가를 포함하는 당분야에 공지된 방법에 따라 평가될 수 있다. 또한, Fc 부분이 Fc 수용체에 대한 결합을 최소화하거나 제거하도록 개질된 임의의 인간 항체 유형(예로 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)이 이용될 수 있다(예로, 그 개시가 본원에 참조로 포함되는 WO03101485 참고). 검정, 예컨대 Fc 수용체 결합을 평가하기 위한 세포 기반 검정은 당분야에 널리 공지되어 있으며, 예로, WO03101485에 기재되어 있다.
따라서 본 발명은 NKG2A에 결합하는 항체 또는 다른 제제에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 항체는 인간 NKG2C 및/또는 NKG2E에 비해 적어도 100배 더 낮은 KD로 NKG2A에 결합한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 제제는, 예로 NKG2A에 의한 HLA-E의 결합을 방해하여, CD94/NKG2A 수용체에서의 입체형태 변화를 방지하거나 유도하여 및/또는 CD94/NKG2A 수용체의 이량체화 및/또는 클러스터링에 영향을 미침으로써 CD94/NKG2A 신호전달을 방해하여 CD94/NKG2A-발현 림프구의 CD94/NKG2A-매개 저해를 감소시킨다.
본 발명의 하나의 양태에서, 제제는 NKG2C에 비해 적어도 100배 더 낮은 KD로 NKG2A의 세포외 부분에 결합한다. 추가의 바람직한 양태에서, 제제는 NKG2C에 비해 적어도 150배, 200배, 300배, 400배, 또는 10,000배 더 낮은 KD로 NKG2A의 세포외 부분에 결합한다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 제제는 NKG2C, NKG2E 및/또는 NKG2H 분자에 비해 적어도 100배 더 낮은 KD로 NKG2A의 세포외 부분에 결합한다. 추가의 바람직한 양태에서, 제제는 NKG2C, NKG2C 및/또는 NKG2H 분자에 비해 적어도 150배, 200배, 300배, 400배, 또는 10,000배 더 낮은 KD로 NKG2A의 세포외 부분에 결합한다. 이는, 예를 들어 BiaCore 실험에서 측정될 수 있고, 여기서 고정화된 CD94/NKG2A(예로 CD94/NKG2 발현 세포로부터 정제되거나 바이오-시스템에서 생산됨)의 세포에 부분에 결합하는 제제의 능력이 측정되고 동일한 검정에서 유사하게 생산된 CD94/NKG2C 및/또는 다른 CD94/NKG2 변이체에 대한 제제의 결합과 비교된다. 대안적으로, CD94/NKG2A를 천연 발현하거나 과발현하는(예로 일시적 또는 안정한 전달감염 후) 세포에 대한 제제의 결합이 측정되고 CD94/NKG2C 및/또는 다른 CD94/NKG2 변이체를 발현하는 세포의 결합과 비교될 수 있다. 항-NKG2A 항체는 선택적으로 NKG2B에 결합할 수 있고, 이는 CD94와 함께 저해 수용체를 형성하는 NKG2A 스플라이스 변이체이다. 하나의 구현예에서, 친화도는 미국 특허 제8,206,709호에 개시된 방법을 이용하여, 예를 들어 그 개시가 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제8,206,709호의 실시예 8에 나타낸 바와 같이 Biacore에 의해 공유 고정화된 NKG2A-CD94-Fc 융합 단백질에 대한 결합을 평가하여 측정될 수 있다.
항-NKG2A 항체는, 예를 들어, 예로 VH1_18, VH5_a, VH5_51, VH1_f 및 VH1_46 및 JH6 J-절편으로부터 선택된 인간 수신체 서열로부터의 VH 인간 수신체 프레임워크, 또는 당분야에 공지된 다른 인간 생식계열 VH 프레임워크 서열을 포함하는, 인간화 항체일 수 있다. VL 영역 인간 수신체 서열은, 예로, VKI_O2/JK4일 수 있다.
하나의 구현예에서, 항체는 항체 Z270에 기반을 둔 인간화 항체이다. 상이한 인간화 Z270VH 쇄를 SEQ ID NO: 4 내지 8에 나타낸다(가변 영역 도메인의 아미노산은 밑줄 침). HumZ270VH6(SEQ ID NO: 4)은 VH5_51에 기반하며; HumZ270VH1(SEQ ID NO: 5)은 VH1_18에 기반하고; humZ270VH5(SEQ ID NO: 6)는 VH5_a에 기반하고; humZ270VH7(SEQ ID NO: 7)은 VH1_f에 기반하고; 및 humZ270VH8(SEQ ID NO: 8)은 VH1_46에 기반하고; 모두 JH6 J-절편을 갖는다. 각각의 이들 항체는 각각의 인간화 구축물의 Kabat CDR-H2의 6개 C-말단 아미노산 잔기가 인간 수신체 프레임워크와 동일하므로, 항체에 대한 숙주 면역 반응의 낮은 가능성을 가지며, NKG2A에 대해 높은 결합 친화도를 보유한다. 정렬 프로그램 VectorNTI를 이용하여, humZ270VH1 및 humZ270VH5, humZ270VH6, humZ270VH7 및 humZ270VH8 간에 하기 서열 동일성: 78,2%(VH1 대 VH5), 79,0%(VH1 대 VH6), 88,7%(VH1 대 VH7) 및 96,0%(VH1 대 VH8)이 수득되었다.
하나의 양태에서, 제제는 (i) SEQ ID NO: 4 내지 8 중 어느 것, 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 중쇄 가변 영역 및 (ii) SEQ ID NO: 9, 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 하나의 양태에서, 제제는 (i) SEQ ID NO: 4 내지 8 중 어느 것의 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (ii) SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. SEQ ID NO: 4 내지 8 중 어느 것의 중쇄 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄를 갖는 항체는 NKG2A의 저해 활성을 중화시키지만, 활성화 수용체 NKG2C, NKGE 또는 NKG2H에 실질적으로 결합하지 않는다. 상기 항체는 또한 세포의 표면 상에서 NKG2A로의 결합에 대해 HLA-E와 경쟁한다. 하나의 양태에서, 제제는 SEQ ID NO: 4 내지 8 중 어느 것의 아미노산 서열을 갖는 중쇄로부터 유도된 HCDR1, HCDR2 및/또는 HCDR3 서열을 포함한다. 본 발명의 하나의 양태에서, 제제는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄로부터 유도된 LCDR1, LCDR2 및/또는 LCDR3 서열을 포함한다.
중쇄
VH6:
VH1:
VH5:
VH7:
VH8:
경쇄
하나의 양태에서, 항-NKG2A 항체는 SEQ ID NO: 4 내지 8의 잔기 31 내지 35에 대응하는 CDR-H1, SEQ ID NO: 4 내지 8의 잔기 50 내지 60(인간 기원의 아미노산을 포함하는 경우 선택적으로 50 내지 66)에 대응하는 CDR-H2 및 SEQ ID NO: 4 내지 8의 잔기 99 내지 114(Kabat에 따른 95 내지 102)에 대응하는 CDR-H3을 포함하는 항체이다. 하나의 구현예에서, SEQ ID NO: 4 내지 8의 잔기 50 내지 66에 대응하는 CDR-H2. 선택적으로, CDR은 1개, 2개, 3개, 4개 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다.
하나의 양태에서, 항-NKG2A 항체는 SEQ ID NO: 9의 잔기 24 내지 34에 대응하는 CDR-L1, SEQ ID NO: 9의 잔기 50 내지 56에 대응하는 CDR-L2 및 SEQ ID NO: 9의 잔기 89 내지 97에 대응하는 CDR-L3을 포함하는 항체이다. 선택적으로, CDR은 1개, 2개, 3개, 4개 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다.
하나의 양태에서, 항-NKG2A 항체는 SEQ ID NO: 4 내지 8의 잔기 31 내지 35에 대응하는 CDR-H1, SEQ ID NO: 4 내지 8의 잔기 50 내지 60(선택적으로 50 내지 66)에 대응하는 CDR-H2 및 SEQ ID NO: 4 내지 8의 잔기 99 내지 114(Kabat에 따르면 95 내지 102)에 대응하는 CDR-H3, SEQ ID NO: 9의 잔기 24 내지 34에 대응하는 CDR-L1, SEQ ID NO: 9의 잔기 50 내지 56에 대응하는 CDR-L2 및 SEQ ID NO: 9의 잔기 89 내지 97에 대응하는 CDR-L3을 포함하는 항체이다.
하나의 양태에서, 제제는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 갖는 VH로부터 유래되는 HCDR1, HCDR2 및/또는 HCDR3 서열을 포함한다. 본 발명의 하나의 양태에서, 제제는 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 갖는 VL로부터 유래되는 LCDR1, LCDR2 및/또는 LCDR3 서열을 포함한다. 하나의 양태에서, 제제는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 갖는 VH로부터 유래되는 HCDR1, HCDR2 및/또는 HCDR3 서열 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 갖는 VL로부터 유래되는 LCDR1, LCDR2 및/또는 LCDR3 서열을 포함한다. SEQ ID NO: 10의 중쇄 및 SEQ ID NO: 11의 경쇄를 갖는 항체는 NKG2A의 저해 활성을 중화시키며, 또한 활성화 수용체 NKG2C, NKG2E 또는 NKG2H에 결합한다. 항체는 세포 표면 상에서 NKG2A로의 결합에 대해 HLA-E와 경쟁하지 않는다(즉, 이는 NKG2A의 비-경쟁적 길항제이다).
하나의 양태에서, 제제는 가변-중쇄(VH) 도메인(SEQ ID NO: 10)의 아미노산 잔기 31 내지 35, 50 내지 60, 62, 64, 66 및 99 내지 108 및 가변-경쇄(VL) 도메인(SEQ ID NO: 11)의 아미노산 잔기 24 내지 33, 49 내지 55 및 88 내지 96을, 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개 이상의 아미노산 치환과 함께 포함한다.
하나의 양태에서, 제제는 임의의 상기 언급된 항체가 결합하는 CD94/NKG2A 에피토프에 대해 유도된 완전 인간 항체이다.
상기 언급된 항체가 이용될 수 있지만, 항체가 NKG2A의 저해 활성의 중화를 유도하는 한, 다른 항체가 NKG2A 폴리펩타이드의 임의의 부분을 인식하고 이에 대해 유도될 수 있음이 이해될 것이다. 예를 들어, NKG2A, 바람직하게는 비배타적으로 인간 NKG2A의 임의의 단편, 또는 NKG2A 단편의 임의의 조합이 항체를 유도하기 위한 면역원으로서 이용될 수 있고, 항체는 이들이 본원에 기재된 바와 같이 NKG2A 발현 NK 세포 상에서 그렇게 할 수 있는 한, NKG2A 폴리펩타이드 내의 임의의 위치에서의 에피토프를 인식할 수 있다. 선택적으로, 에피토프는 SEQ ID NO: 4 내지 8의 중쇄 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄를 갖는 항체에 의해 특이적으로 인식되는 에피토프이다.
하나의 양태에서, 제제는 인간 CD94/NKG2A 수용체의 세포외 부분에 대한 결합에서 미국 특허 제8,206,709호(그 개시가 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 humZ270 항체와 경쟁한다. 경쟁적 결합은, 예를 들어 BiaCore 실험에서 측정될 수 있고, 여기서 humZ270으로 포화된 고정화된 CD94/NKG2A 수용체(예로 CD94/NKG2 발현 세포로부터 정제되거나 바이오-시스템에서 생산됨)의 세포외 부분의 결합에 대한 제제의 능력이 측정된다. 대안적으로, CD94/NKG2A 수용체를 천연 발현하거나 과발현하며(예로, 일시적 또는 안정적인 전달감염 후) 포화 용량의 Z270과 사전-인큐베이션된 세포에 대한 제제의 결합이 측정된다. 하나의 구현예에서, 경쟁적 결합은 미국 특허 제8,206,709호에 개시된 방법을 이용하여, 예를 들어 그 개시가 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제8,206,709호의 실시예 15에 기재된 바와 같이 유세포측정에 의해 Ba/F3-CD94-NKG2A 세포에 대한 결합을 평가하여 측정될 수 있다.
PD-1 중화 치료제
현재 시판되고 있거나 임상 평가 중인 PD-1/PD-L1 경로를 차단하는 적어도 6개의 제제가 존재한다. 하나의 제제는 BMS-936558(니볼루맙(Nivolumab)/ONO-4538, Bristol-Myers Squibb; 예전 MDX-1106)이다. 니볼루맙(상표명 Opdivo®)은 PD-1 및 CD80 둘 다에 대한 PD-L1 리간드의 결합을 저해하고 그 개시가 본원에 참조로 포함되는 WO 2006/121168에 항체 5C4로 기재되어 있는 FDA-승인된 완전 인간 IgG4 항-PD-L1 mAb이다. 흑색종 환자에 있어서, 가장 유의미한 OR은 3 ㎎/㎏ 용량에서 관찰되었으나, 다른 암 유형에 대해서는 10 ㎎/㎏에서 관찰되었다. 니볼루맙은 일반적으로 암 진행 전까지 3주마다 10 ㎎/㎏으로 투여된다.
람브롤리주맙 또는 펨브롤리주맙(상표명 Keytruda®)으로도 나타내는 MK-3475(인간 IgG4 항-PD1 mAb, Merck)는 흑색종의 치료를 위해 FDA에 의해 승인되었고 다른 암에서 평가되고 있다. 펨브롤리주맙을 질환 진행 전까지 2주 또는 3주마다 2 ㎎/㎏ 또는 10 ㎎/㎏으로 평가하였다. 인간화 항체 h409All의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 인코딩하는 DNA 구축물을 American Type Culture Collection Patent Depository(10801 University Blvd., Manassas, VA)에 기탁하였다. h409A-l 1의 중쇄를 인코딩하는 DNA를 함유하는 플라스미드를 2008년 6월 9일에 기탁하였고 081469_SPD-H로 확인되며 h409Al 1의 경쇄를 인코딩하는 DNA를 함유하는 플라스미드를 2008년 6월 9일에 기탁하였고 0801470_SPD-L-l 1로 확인되었다. Merck 3745 또는 SCH-900475로도 알려져 있는 Merck-3475가 또한 WO2009/114335에 기재되어 있다.
MPDL3280A/RG7446(항-PD-L1, Roche/Genentech)은 FcγR 결합 및 결과적인 항체-의존적 세포성 세포독성(ADCC)을 최소화함으로써 유효성 및 안전성을 최적화하도록 설계된 조작된 Fc 도메인을 함유하는 인간 항-PD-L1 mAb이다. 1 ㎎/㎏, 10 ㎎/㎏, 15 ㎎/㎏ 및 25 ㎎/㎏ 이하 용량의 MPDL3280A를 최대 1년 동안 3주마다 투여하였다. 3상 시험에서, MPDL3280A를 NSCLC에서 3주마다 정맥내 주입에 의해 1200 ㎎으로 투여한다.
AMP-224(앰플리뮨(Amplimmune) 및 GSK)는 Fc 도메인에 융합된 PD-L2 세포외 도메인을 포함하는 이뮤노어드헤신이다. PD-1을 중화시키는 제제의 다른 예에는 PD-L2에 결합하고(항-PD-L2 항체) PD-1 및 PD-L2 간 상호작용을 차단하는 항체가 포함될 수 있다.
피들리주맙(Pidlizumab, CT-011; CureTech)(인간화 IgG1 항-PD1 mAb, CureTech/Teva), 피들리주맙(CT-011; CureTech)(예컨대, WO2009/101611 참고) 리툭시맙-감수성 재발 FL을 갖는 30명의 환자를 CT-011의 최초 주입 2주 후 시작하여, 4주 동안 매주 375 ㎎/㎡로 투여되는 리툭시맙과 병용으로 4회 주입 동안 4주마다 3 ㎎/㎏의 정맥내 CT-011로 치료하였다.
추가 공지된 PD-1 항체 및 다른 PD-1 저해제에는 AMP-224(GSK에 라이센스된 B7-DC/IgG1 융합 단백질), WO2012/145493에 기재된 AMP-514, WO2011/066389 및 US2013/034559에 기재된 항체 MEDI-4736(AstraZeneca/Medimmune에서 개발된 항-PD-L1), WO2010/077634에 기재된 항체 YW243.55.S70(항-PD-L1), WO2007/005874에 기재된 Bristol-Myers Squibb에서 개발된 항-PD-L1 항체인, BMS-936559로도 알려져 있는 MDX-1105, 및 WO2006/121168, WO2009/014708, WO2009/114335 및 WO2013/019906에 기재된 항체 및 저해제가 포함되며, 그 개시가 본원에 참조로 포함된다. 항-PD1 항체의 추가 예는, 예를 들어 각각 SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 및/또는 SEQ ID NO: 8의 경쇄 가변 도메인 CDR1, 2 및 3, 및 각각 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 또는 SEQ ID NO: 5의 항체 중쇄 가변 도메인 CDR1, 2 및 3을 갖는 항체가 WO2015/085847(Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co. Ltd.)에 개시되어 있으며, 여기서 SEQ ID NO 참조번호는 WO2015/085847에 따른 넘버링이고, 그 개시가 본원에 참조로 포함된다. PD-1 또는 PD-L1로의 결합에 대해 임의의 이들 항체와 경쟁하는 항체가 또한 사용될 수 있다.
예시적인 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다(예컨대, 그 개시가 본원에 참조로 포함되는 WO 2009/114335 참고). 항-PD-1 항체는 081469_SPD-H로 ATCC에 기탁된 DNA에 의해 인코딩되는 중쇄 가변 영역 및 0801470_SPD-L-l 1로 ATCC에 기탁된 DNA에 의해 인코딩되는 경쇄 가변 영역을 포함하는, WO 2008/156712의 항체 h409Al 1일 수 있다. 다른 구현예에서, 항체는 펨브롤리주맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역을 포함한다. 따라서, 하나의 구현예에서, 항체는 081469_SPD-H로 ATCC에 기탁된 DNA에 의해 인코딩되는 펨브롤리주맙의 VH의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 0801470_SPD-L-l 1로 ATCC에 기탁된 DNA에 의해 인코딩되는 펨브롤리주맙의 VL의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, PD-1 중화제는 PD-L1의 PD-1로의 결합을 저해하는 항-PD-L1 mAb이다. 일부 구현예에서, PD-1 중화제는 PD-1의 PD-L1로의 결합을 저해하는 항-PD1 mAb이다. 일부 구현예에서, PD-1 중화제는 면역어드헤신(예컨대, 불변 영역(예컨대, 면역글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 PD-L1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합부를 포함하는 면역어드헤신이다.
또 다른 예시적인 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 12 및 13에 나타낸 각각의 서열 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 각각의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 니볼루맙, 또는 이의 항원 결합 단편 및 변이체이다. 다른 구현예에서, 항체는 니볼루맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역을 포함한다. 따라서, 하나의 구현예에서, 항체는 SEQ ID NO: 12에 나타낸 서열을 갖는 니볼루맙의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 SEQ ID NO: 13에 나타낸 서열을 갖는 니볼루맙의 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
예시적인 항-PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 14 및 15에 나타낸 각각의 서열 또는 각각 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을, 또는 이의 항원 결합 단편 및 변이체를 포함한다. 다른 구현예에서, 항체는 MPDL3280A의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역을 포함한다. 따라서, 하나의 구현예에서, 항체는 SEQ ID NO: 14에 나타낸 서열을 갖는 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 SEQ ID NO: 15에 나타낸 서열을 갖는 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다.
항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 완전 인간 항체, 인간화 항체, 및 키메라 항체로부터 선택될 수 있다. 본 발명의 하나의 양태에서, 제제는 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체로부터 유래된 불변 도메인을 포함한다. 본 발명의 하나의 양태에서, 제제는 IgA, IgD, IgG, IgE 및 IgM 항체로부터 선택되는 항체의 단편이다. 본 발명의 하나의 양태에서, 제제는 Fab 단편, Fab' 단편, Fab'-SH 단편, F(ab)2 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, 중쇄 Ig(라마 또는 카멜 Ig), VHH 단편, 단일 도메인 FV, 및 단일쇄 항체 단편으로부터 선택되는 항체 단편이다. 본 발명의 하나의 양태에서, 제제는 scFV, dsFV, 미니바디, 디아바디, 트리아바디, 카파 바디, IgNAR; 및 다중특이적 항체로부터 선택되는 합성 또는 반합성 항체-유래 분자이다.
항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체에는 Fcγ 수용체, 예컨대 CD16에 대한 실질적인 특이적 결합이 없을 수 있다. 이러한 항체는 Fc 수용체에 결합하지 않는 것으로 알려진 다양한 중쇄의 불변 영역을 포함할 수 있다. 하나의 이러한 예는 IgG4 불변 영역이다. IgG4, 대안적으로, 불변 영역을 포함하지 않는 항체 단편, 예컨대 Fab 또는 F(ab')2 단편이 Fc 수용체 결합을 배제하기 위해 사용될 수 있다. Fc 수용체 결합은, 예를 들어 BIACORE 검정에서 항체의 Fc 수용체 단백질에 대한 결합 평가를 포함하는, 당분야에 공지된 방법에 따라 평가될 수 있다. 또한, Fc 부분이 Fcγ 수용체에 대한 결합을 최소화하거나 제거하도록 변형되는 임의의 인간 항체 유형(예컨대 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)이 사용될 수 있다. 따라서, 항-PD-1 또는 항-PDL1 항체로서, 항체는 전형적으로 감소되거나 최소의 효과기 기능을 가질 것이다. 하나의 양태에서, 최소의 효과기 기능은 원핵생물 세포에서의 생산으로 야기된다. 하나의 양태에서, 최소의 효과기 기능은 "효과기가 더 적은 Fc 돌연변이" 또는 비글리코실화로 야기된다. 추가 구현예에서, 효과기가 더 적은 Fc 돌연변이는 불변 영역에서의 N297A 또는 D265A/N297A 치환이다.
항-NKG2A 또는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 제제, 예컨대 항체는 1 mg/ml 내지 500 mg/ml의 농도로 약학 제형물에 포함될 수 있고, 여기서 상기 제형물은 2.0 내지 10.0의 pH를 갖는다. 제형물은 완충 시스템, 보존제(들), 등장화제(들), 킬레이트화제(들), 안정화제 및 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 약학 제형물은 수성 제형물, 즉 물을 포함하는 제형물이다. 이러한 제형물은 전형적으로 용액 또는 현탁액이다. 추가 구현예에서, 약학 제형물은 수용액이다. 용어 "수성 제형물"은 적어도 50%w/w 물을 포함하는 제형물로 정의된다. 마찬가지로, 용어 "수용액"은 적어도 50%w/w 물을 포함하는 용액으로 정의되며, 용어 "수성 현탁액"은 적어도 50%w/w 물을 포함하는 현탁액으로 정의된다.
또 다른 구현예에서, 약학 제형물은 냉동 건조 제형물이며, 사용 전에 의사 또는 환자가 용매 및/또는 희석제를 여기에 첨가한다.
또 다른 구현예에서, 약학 제형물은 임의의 사전 용해 없이 바로 사용할 수 있는 건조 제형물(예로 냉동-건조되거나 분무-건조됨)이다.
추가 양태에서, 약학 제형물은 이러한 항체의 수용액 및 완충액을 포함하며, 여기서 항체는 1 mg/ml 이상의 농도로 존재하며, 상기 제형물은 약 2.0 내지 약 10.0의 pH를 갖는다.
또 다른 구현예에서, 제형물의 pH는 약 2.0 내지 약 10.0, 약 3.0 내지 약 9.0, 약 4.0 내지 약 8.5, 약 5.0 내지 약 8.0 및 약 5.5 내지 약 7.5로 구성된 목록으로부터 선택된 범위이다.
추가 구현예에서, 완충액은 아세트산 나트륨, 탄산 나트륨, 시트레이트, 글리실글리신, 히스티딘, 글리신, 라이신, 아르기닌, 인산 2수소 나트륨, 인산 수소 2나트륨, 인산 나트륨 및 트리스(하이드록시메틸)-아미노메탄, 바이신, 트리신, 말산, 숙시네이트, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 아스파르트산 또는 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된다. 이들 특정한 완충액 중 각각의 하나는 본 발명의 대안적 구현예를 구성한다.
추가 구현예에서, 제형물은 약제학적으로 허용 가능한 보존제를 추가로 포함한다. 추가 구현예에서, 제형물은 등장화제를 추가로 포함한다. 추가 구현예에서, 제형물은 또한 킬레이트화제를 포함한다. 본 발명의 추가 구현예에서, 제형물은 안정화제를 추가로 포함한다. 추가 구현예에서, 제형물은 계면활성제를 추가로 포함한다. 편의성을 위해, 문헌[Remington: The Science 및 Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995]을 참조한다.
다른 성분이 펩타이드 본 발명의 약학 제형물에 존재할 수 있음이 가능하다. 이러한 추가 성분에는 수화제, 유화제, 항산화제, 증량제, 등장성 개질제, 킬레이트화제, 금속 이온, 유성 비히클, 단백질(예로, 인간 혈청 알부민, 젤라틴 또는 단백질) 및 쯔비터이온(예로, 아미노산, 예컨대 베타인, 타우린, 아르기닌, 글리신, 라이신 및 히스티딘)이 포함될 수 있다. 이러한 추가 성분은, 당연히 본 발명의 약학 제형물의 전반적 안정성에 부정적 영향을 미치지 않아야 한다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 투여는, 몇몇 투여 경로, 예를 들어, 정맥내를 통할 수 있다. 적합한 항체 제형물은 또한 이미 개발된 다른 치료적 모노클로날 항체와의 경험을 조사하여 결정될 수 있다. 몇몇 모노클로날 항체는 임상적 상황에서 효율적인 것으로 나타났으며, 예컨대 리툭산(Rituxan)(리툭시맙(Rituximab), 허셉틴(Herceptin)(트라스투주맙(Trastuzumab)) 졸레어(Xolair)(오말리주맙(Omalizumab)), 벡사르(Bexxar)(토시투모맙(Tositumomab)), 캄파스(Campath)(알렘투주맙(Alemtuzumab)), 제바린(Zevalin), 온코림(Oncolym) 및 유사한 제형물이 본 발명의 항체와 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 모노클로날 항체는 9.0 mg/mL 염화 나트륨, 7.35 mg/mL 2수화 시트르산 나트륨, 0.7 mg/mL 폴리소르베이트 80 및 주사용 멸균수 중, IV 투여를 위해 제형화된 100 mg(10 mL) 또는 500 mg(50 mL) 단회-사용 바이알에서 10 mg/mL 농도로 공급될 수 있다. pH는 6.5로 조정된다. 또 다른 구현예에서, 항체는 약 20 mM Na-시트레이트, 약 150 mM NaCl, pH 약 6.0을 포함하는 제형물로 공급된다.
또한 이전 방법에서 사용하기 위해 채택되는 치료적 유효량으로, 항-NKG2A 항체, 및 선택적으로 추가로 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 함유하는 약학 조성물이 포함되는 키트가 제공된다. 키트에는 또한 선택적으로, 예컨대 실시자(예컨대, 의사, 간호사 또는 환자)가 암(예컨대, 고형 종양)을 갖는 환자에게 조성물을 투여하기 위해 내부에 함유된 조성물을 투여할 수 있도록 하기 위한 투여 일정을 포함하는, 지침이 포함될 수 있다. 키트에는 또한 시린지가 포함될 수 있다.
선택적으로, 키트에는 상기 제공되는 방법에 따른 단회 투여를 위한, 유효량의 항-NKG2A, 및 선택적으로 추가로 항-PD-1 또는 PD-L1 항체를 각각 함유하는 단회-용량 약학 조성물의 여러 패키지가 포함된다. 약학 조성물(들)을 투여하기 위해 필요한 기구 또는 장치가 또한 키트에 포함될 수 있다. 예를 들어, 키트는 일정량의 항-NKG2A, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체를 함유하는 하나 이상의 사전-충전 시린지를 제공할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본 발명은 인간 환자에서 항-PD-1/PD-L1 항체 내성 암을 치료하기 위한 키트를 제공하며, 이 키트는 다음을 포함한다:
(a) SEQ ID NO: 4 내지 8 중 어느 것에 나타낸 서열을 갖는 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 SEQ ID NO: 9에 나타낸 서열을 갖는 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하는 항-NKG2A 항체의 용량;
(b) 선택적으로, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 용량; 및
(c) 선택적으로, 임의의 본원에 기재된 방법에서의 항-NKG2A 항체(및 선택적으로 항-PD-1 또는 PD-L1 항체)의 사용 지침.
종양의 진단, 예후 및 치료
선택적으로 추가로 PD-1의 활성을 중화시키는 제제, 예컨대 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체와 병용으로, NKG2A의 활성을 중화시키는 제제로 개체에서 암의 진단, 예후, 모니터링, 치료 및 예방에 유용한 방법이 기재된다. 개체는 선택적으로 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 대해 불량한 반응체, 예를 들어 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료 시(동안 또는 후에) 불완전 반응, 치료 반응의 부재, 검출 가능하거나 잔류하는 암 및/또는 진행성 질환을 경험하거나 경험할 가능성이 높은 것으로 예측되는(예컨대 하나 이상의 예후 인자에 기반하여) 개체일 수 있다. 하나의 구현예에서, 개체의 암은 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료 시(동안 또는 후에) 완전 반응을 경험하지 않았거나 완전 반응을 경험하지 않을 가능성(예컨대 높은 가능성)을 갖는 것으로 예측된다. 하나의 구현예에서, 개체의 암은 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료 시(동안 또는 후에) 진행되었다(예컨대 진행성 질환). 하나의 구현예에서, 개체의 암은 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료 시(동안 또는 후에) 부분적으로 반응했거나 안정화되었지만(부분 반응 또는 안정한 질환) 진행될 가능성이 있는 것으로 예측된다.
하나의 예에서, 개체는 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에(예컨대 단독치료법에서) 잘 반응하지 않는 것으로 알려진 암을 갖는다. 하나의 예에서, 개체는 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료 시(예컨대 단독치료법에서) 종양 침윤 NKG2A-발현 CD8+ 또는 NK 세포를 특징으로 하는 것으로 알려진 암을 갖는다. 하나의 예에서, 개체는 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료 시(예컨대 단독치료법에서) 암 세포 상에서 HLA-E의 발현(또는 증가된 발현)을 특징으로 하는 것으로 알려진 암을 갖는다. 선택적으로 암은 두부 및 경부 편평상피세포 암종, 비-소세포 폐암(NSCLC), 신장암, 위장관암, 췌장 또는 식도 샘암종, 유방암, 신장 세포 암종(RCC), 흑색종, 결장직장암 또는 난소암이다. 이러한 개체는 유리하게는 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제와 병용으로 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 제제로 치료받을 수 있다.
예를 들어, 개체는 잘 반응하지 않는(또는 내성 또는 비-반응성) 암, 예를 들어 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에도 불구하고(예컨대 동안 또는 후에) 재발되었거나 진행된 암을 가질 수 있다. 하나의 구현예에서, 항-NKG2A 제제로 치료받은 개체는 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료 시(예컨대 단독치료법으로 또는 NKG2A를 중화시키는 제제 이외의 제제와의 병용 치료법으로)(동안 또는 후에) 불완전 반응을 경험했거나(완전 반응(CR)을 경험하지 않았거나) PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료 시(동안 또는 후에) 적어도 부분 반응(PR)을 경험했지만, 그 암이 재발되었거나 진행되었다. 본원에서의 임의의 구현예에서, 치료 반응은 널리 공지된 기준, 예컨대 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST), 예컨대 버전 1.1(문헌[Eisenhauer et al. (2009) Eur. J. Cancer 45:228-247] 참고), 또는 면역 관련 반응 기준(irRC)(문헌[Wolchock et al. (2009) Clinical Cancer Research 15:7412-7420] 참고)에 따라 정의되고/되거나 평가될 수 있다.
하나의 구현예에서, 불량한 반응체인(또는 잘 반응하지 않는 암을 갖는) 개체는 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 대해 불량힌 질환 예후를 갖는 개체이다. 불량힌 질환 예후를 갖는 개체는, 예를 들어, 하나 이상의 예후 인자에 기반하여 높거나 더 높은 암 진행 위험(예컨대 우수한 질환 예후를 갖는 개체에 비해)을 갖는다고 결정될 수 있다. 하나의 구현예에서, 예후 인자(들)는 상승된 NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포수의 존재를 포함하고/하거나 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에 상승된 수준의 NKG2A는 개체가 PD-1을 중화시키는 항체를 사용하는 치료에 대한 반응에 있어서 불량한 예후를 가짐을 시사할 수 있다. 하나의 구현예에서, 예후 인자(들)는 하나 이상의 유전자에서 돌연변이의 존재 또는 부재를 포함한다. 하나의 구현예에서, 돌연변이는 T 세포에 의해 인식되는 새로운-에피토프를 정의한다. 하나의 구현예에서, 예후 인자(들)는 종양 세포에서 하나 이상의 유전자 또는 단백질, 예컨대 PD-L1의 발현 수준(들), 종양 세포 상에서 감소되거나 상승된 수준의 PD-L1을 포함한다. 하나의 구현예에서, 예후 인자(들)는 순환에서 또는 종양 환경에서 NK 및/또는 CD8 T 세포에서의 하나 이상의 유전자 또는 단백질, 예컨대, PD-1의 발현 수준(들)을 포함한다. 하나의 구현예에서, 예후 인자(들)는 암 세포의 돌연변이 부하, 예컨대 엑솜 당 비-동일 돌연변이의 수를 포함한다.
본원에 기재되는 치료 요법 및 방법은 개체로부터 수득되는 생물학적 샘플(예컨대 암 세포, 암 조직 또는 암-인접 조직을 포함하는 생물학적 샘플)에서 세포 상의 발현 PD-L1을 검출하는 사전 단계와 함께 또는 이 단계 없이 사용될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 본 개시는 이를 필요로 하는 개체에서 암의 치료 또는 예방 방법을 제공하며, 이 방법은 다음 단계를 포함한다:
a) PD-L1을 발현하는 개체로부터의 샘플에서 세포(예컨대 종양 세포, 종양 침윤 면역 세포, 종양 침윤 대식구)를 검출하는 단계, 및
b) 선택적으로 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제에 잘 반응하지 않고/않거나 이로부터 실질적인 이익을 유도하지 않는 개체에 대응하는 참조 수준에서, PD-L1을 발현하는 세포가 샘플에 포함된다는 결정 시, 선택적으로 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제와 병용으로, NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 제제를 개체에 투여하는 단계. PD-L1 참조 수준은 임의의 적합한 통상적으로 사용되는 참조 수준을 특징으로 할 수 있다. 예를 들어, 1% 이하, 선택적으로 5% 이하, 선택적으로 10% 이하, 선택적으로 50% 이하의 종양 세포 또는 종양 조직 샘플로부터의 세포가 PD-L1을 발현하는 경우(예컨대 면역조직화학-기반 검정을 사용하여), 샘플은 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제에 잘 반응하지 않고/않거나 이로부터 실질적인 이익을 유도하지 않는 개체에 대응한다고 결정될 수 있다. 이러한 검정의 예에는 Dako Denmark A/S의 pharmDx로부터의 PD-L1 IHC 22C3 검정이 포함된다. 이 검정에서, PD-L1 발현 수준은 PD-L1에 대한 종양 세포 염색 백분율(0% 내지 100%)인 종양 비율 스코어(TPS)를 사용하여 측정된다. 선택적으로, 참조 수준은 비-고 PD-L1 발현에 대한 수준이며, 선택적으로 50% 미만의 종양 세포가 PD-L1을 발현한다(예컨대, 환자가 50% 미만의 TPS를 갖는다).
본원에 기재되는 치료 요법 및 방법은 고형 종양 및 혈액 암의 치료를 위해 유용할 수 있다. 본 발명의 방법 및 조성물은, 예를 들어 비제한적으로 다음을 포함하는 다양한 암 및 다른 증식성 질환의 치료에서 이용된다: 편평상피세포 암, 방광, 유방, 결장, 신장, 간, 폐, 난소, 두부 및 경부, 전립선, 췌장, 위, 자궁경부, 갑상샘 및 피부의 암종을 포함하는 암종; 백혈병, 급성 림프구 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 급성 림프모구 백혈병, B-세포 림프종, T-세포 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 털세포 림프종 및 버키트 림프종, 및 다발성 골수종을 포함하는 림프구 계통의 혈액 종양; 급성 및 만성 골수구 백혈병, 전골수구 백혈병 및 골수형성이상 증후군을 포함하는 골수구 계통의 혈액 종양; 섬유육종 및 횡문근육종을 포함하는 중간엽 기원 종양; 흑색종, 고환종, 기형-암종, 신경모세포종 및 교종을 포함하는 다른 종양; 별아교세포종, 신경모세포종, 교종 및 신경집종을 포함하는 중추 및 말초 신경계 종양; 섬유육종, 횡문근육종 및 골육종을 포함하는 중간엽 기원 종양; 및 흑색종, 색소성 피부건조증, 각질가시세포종, 고환종, 및 갑상샘 소포암을 포함하는 다른 종양.
하나의 구현예에서, 암은 두부 및 경부 편평상피세포 암종(HNSCC)이다. 하나의 구현예에서, HNSCC는 입인두 종양, 후두 종양, 구강 종양 또는 하인두 종양이다. 하나의 구현예에서, HNSCC는 구강 SCC(OCSCC)이다. OCSCC는 입술, 혀의 전방 2/3, 입안바닥, 볼 점막, 잇몸, 입 천장 및 어금니뒤삼각의 편평상피세포 암종을 포함한다. 하나의 구현예에서, HNSCC는 전이 암이다.
고형 종양을 갖는 개체를 치료하는 경우, 인간 NKG2A 폴리펩타이드의 저해 활성을 중화시키는 화합물(예컨대 항체)은 유리하게는 암 세포를 제거하기 위한 수술을 받지 않은 또는 현재 이러한 수술을 받는 기간에 있지 않은 암을 갖는 개체에 본원에 기재되는 치료 요법에 따라 투여될 수 있다. 그러나 화합물이 암 세포를 제거하기 위한 수술을 받은 또는 받고 있는 환자에게도 투여될 수 있음이 이해될 것이다. 항-NKG2A 화합물이 암 세포를 제거하기 위한(예컨대 HNSCC 세포를 제거하기 위한) 수술적 개입을 받지 않은 개체에 투여되는 경우, NKG2A-결합 화합물은 예를 들어 수술 전 대략 1주 내지 8주에 투여될 수 있다. 하나의 구현예에서, 항-NKG2A 화합물을 사용하는 치료의 적어도 1회(예컨대 1회, 2회, 3회 이상)의 완전 투여 사이클(들)이 수술 전에 투여된다. 하나의 구현예에서, 투여 사이클은 2주 내지 8주이다.
본원에 제공되는 PD-1/PD-L1에 잘 반응하지 않는 암의 치료를 위한 치료법에는 암(예컨대, 진행된 난치성 또는 진행성 고형 또는 혈액 종양)에 영향받는 대상체를 치료하기 위해, 선택적으로 PD-1-중화제, 예컨대 중화 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 부재 하에 또는 선택적으로 이와 병용으로, 중화 항-NKG2A 항체의 투여가 관여된다. 하나의 구현예에서, 본 발명은 고형 종양(예컨대, 고형 종양, 진행된 난치성 고형 종양)을 갖는 대상체 또는 혈액 종양을 갖는 대상체를 치료하기 위해, 항-NKG2A 항체, 및 선택적으로 추가로 병용되는 항-PD-1 항체를 제공한다. 특정 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 SEQ ID NO: 4 내지 8 중 어느 것의 중쇄 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, AMP-514, MEDI-4736, CT-011 및 MPDL3280A로 구성된 군으로부터 선택된다.
본원에서 사용되는 보조 또는 조합 투여(공동-투여)에는 동일하거나 상이한 투여량 형태인 화합물의 동시 투여, 또는 화합물의 개별 투여(예컨대, 순차적 투여)가 포함된다. 따라서, 항-NKG2A 및 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 단일 제형물로 동시에 투여될 수 있다. 대안적으로, 항-NKG2A 및 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 개별 투여를 위해 제형화될 수 있고, 동시적으로 또는 순차적으로 투여된다.
하나의 구현예에서, 본원에 개시되는 방법으로 치료받는 암은 이의 표면에 NKG2A를 발현하는 NK 세포 및/또는 CD8 T 세포의 침윤을 특징으로 하는 암이다. 하나의 구현예에서, 본원에 개시되는 방법으로 치료받는 암은 NK 세포의 침윤을 특징으로 하는 암이며, 여기서 적어도 20%, 30%, 40% 또는 50%의 NK 세포는 이의 표면에 NKG2A를 발현한다.
하나의 구현예에서, 본원에 개시되는 방법으로 치료받는 암은 고수준의 HLA-E를 특징으로 하는 암이다. 하나의 구현예에서, 암은 폐암(예컨대 비-소세포 폐암(NSCLC)), 신장 세포 암종(RCC), 흑색종, 두부 및 경부 편평상피세포 암종(HNSCC), 결장직장암, 및 난소암으로 구성된 군으로부터 선택된다. 암을 갖는 환자는 종양 세포의 표면 상에서 HLA-E의 발현을 평가하기 위한 사전 검출 단계와 함께 또는 이 단계 없이 항-NKG2A 제제로 치료받을 수 있음이 이해될 것이다. 유리하게는, 치료 방법은 개체로부터 종양의 생물학적 샘플에서(예컨대 종양 세포 상에) HLA-E 핵산 또는 폴리펩타이드를 검출하는 단계를 포함할 수 있다. 생물학적 샘플의 예에는 임의의 적합한 생물학적 유체(예를 들어 혈청, 림프, 혈액), 세포 샘플, 또는 조직 샘플이 포함된다. 예를 들어, 조직 샘플은 종양 조직 또는 종양-인접 조직의 샘플일 수 있다. 선택적으로, HLA-E 폴리펩타이드는 악성 세포의 표면 상에서 검출된다. 생물학적 샘플이 HLA-E를 발현한다(예컨대 뚜렷이 발현한다; 참조물에 비해, 항-HLA-E 항체로 고수준으로, 높은 염색 세기로 HLA-E를 발현한다)는 결정은 개체가 NKG2A를 저해하는 제제를 사용하는 치료로부터 강한 이익을 가질 수 있는 암을 가짐을 시사한다. 하나의 구현예에서, 이 방법은 생물학적 샘플에서 HLA-E 핵산 또는 폴리펩타이드의 발현 수준을 결정하는 단계 및 이 수준을 건강한 개체에 대응하는 참조 수준(예컨대, 값, 약한 세포 표면 염색 등)과 비교하는 단계를 포함한다. 생물학적 샘플이 참조 수준에 비해 증가된 수준으로 HLA-E 핵산 또는 폴리펩타이드를 발현한다는 결정은 개체가 NKG2A를 저해하는 제제로 치료받을 수 있는 암을 가짐을 시사할 수 있다.
하나의 구현예에서, HLA-E 핵산 또는 폴리펩타이드를 뚜렷이 발현한다는 결정은 개체가 NKG2A를 저해하는 제제로 치료받을 수 있는 암을 가짐을 시사한다. HLA-E 폴리펩타이드에 대해 언급되는 경우, "뚜렷이 발현된"이란 HLA-E 폴리펩타이드가 주어진 개체로부터 취해진 상당수의 종양 세포에서 발현됨을 의미한다. 용어 "뚜렷이 발현된"의 정의가 정확한 백분율 값에 의해 구애받지는 않지만, 일부 예에서 "뚜렷이 발현된" 것으로 언급되는 수용체는 환자로부터 취해지는 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 그 초과의 종양 세포 상에(샘플 중에) 존재할 것이다.
개체가 HLA-E 폴리펩타이드를 발현하는 암 세포를 갖는지 여부의 결정은, 예를 들어 암 세포를 포함하는 개체로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계(예로 생검을 수행함으로써), 상기 세포를 HLA-E 폴리펩타이드에 결합하는 항체와 접촉시키는 단계 및 세포가 이들의 표면 상에 HLA-E를 발현하는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 선택적으로, 개체가 HLA-E 폴리펩타이드를 발현하는 암 세포를 갖는지 여부의 결정은 면역조직화학 검정을 수행하는 단계를 포함한다. 선택적으로 개체가 HLA-E를 발현하는 암 세포를 갖는지 여부의 결정은 유세포측정 검정을 수행하는 단계를 포함한다.
치료 방법에서, 항-NKG2A 항체가 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체와 병용으로 투여되는 경우, 항-NKG2A 항체 및 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 별도로, 함께 또는 순차적으로, 또는 칵테일로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-NKG2A는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 투여 전에 투여된다. 예를 들어, 항-NKG2A 항체는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 투여 전 대략 0일 내지 30일에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 투여 전 약 30분 내지 약 2주, 약 30분 내지 약 1주, 약 1시간 내지 약 2시간, 약 2시간 내지 약 4시간, 약 4시간 내지 약 6시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 1일, 또는 약 1일 내지 5일에 투여된다. 일부 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 투여와 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 투여 후에 투여된다. 예를 들어, 항-NKG2A 항체는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 투여 후 대략 0일 내지 30일에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 투여 후 약 30분 내지 약 2주, 약 30분 내지 약 1주, 약 1시간 내지 약 2시간, 약 2시간 내지 약 4시간, 약 4시간 내지 약 6시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 1일 또는 약 1일 내지 5일에 투여된다.
항-NKG2A 항체로 인간을 치료하기 위한 예시적인 치료 프로토콜에는, 예를 들어, NKG2A를 저해하는 각각의 항체의 유효량을 환자에 투여하는 단계가 포함되며, 여기서 이 방법은 적어도 1개 용량의 항-NKG2A 항체가 1 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏의 용량으로 투여되는 적어도 1회 투여 사이클을 포함한다. 하나의 구현예에서, 투여 사이클은 2주 내지 8주이다.
항-NKG2A 항체로 인간을 치료하기 위한 예시적인 치료 프로토콜에는, 예를 들어, NKG2A를 저해하는 항체 및 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체 각각의 유효량을 환자에 투여하는 단계가 포함되며, 여기서 이 방법은 적어도 1개 용량의 항-NKG2A 항체가 1 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏의 용량으로 투여되고 적어도 1개 용량의 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체가 1 ㎎/체중㎏ 내지 20 ㎎/체중㎏의 용량으로 투여되는 적어도 1회 투여 사이클을 포함한다. 하나의 구현예에서, 투여 사이클은 2주 내지 8주이다.
하나의 구현예에서, 방법은 적어도 1회 투여 사이클을 포함하며, 여기서 사이클은 8주 이하의 기간이고, 각각의 적어도 1회 사이클 동안, 항-NKG2A 항체의 2개, 3개 또는 4개 용량이 1 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏의 용량으로 투여된다. 하나의 구현예에서, 각각의 사이클은 1 ㎎/체중㎏ 내지 20 ㎎/체중㎏의 용량으로 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 2개, 3개 또는 4개 용량의 투여를 추가로 포함한다.
항-NKG2A 항체는 유리하게는 실질적으로 완전한(예컨대, 90%, 95%) 수용체 포화(예컨대, NKG2A-발현 세포 상에서, 예를 들어 PBMC에서 항-NKG2A 항체의 적정에 의해 평가됨)를 위해 요구되는 농도보다 적어도 10배, 20배 또는 30배 더 높은 순환 중 농도를 달성하는 양으로 또는 선택적으로 실질적으로 완전한 수용체 포화(예컨대, NKG2A-발현 세포 상에서, 예를 들어 PBMC에서 항-NKG2A 항체의 적정에 의해 평가됨)를 위해 요구되는 농도보다 적어도 10배, 20배 또는 30배 더 높은 혈관외 조직(예컨대 종양 조직 또는 환경) 내 농도를 달성하는 양으로 투여될 수 있다.
NKG2A+ NK 세포 반응은 HLA-E 발현 표적 세포를 향한 NKG2A-발현 NK 세포의 세포독성 활성의 적합한 검정을 사용하여 평가될 수 있다. 예에는 NK 세포 활성화 마커, 예를 들어 CD107 또는 CD137 발현에 기반하는 검정이 포함된다. 본원에서 실시예에서 사용되는 차단 항-NKG2A 항체 humZ270(예컨대 SEQ ID NO: 4 내지 8 중 어느 것의 중쇄 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄를 가짐)의 NKG2A+ NK 세포 반응에 대한 EC50(예컨대, CD107 가동화 검정에서 평가됨)은 약 4 ㎍/㎖이고, EC100은 약 10 ㎍/㎖이다. 따라서 항-NKG2A 항체의 양은 적어도 4 ㎍/㎖의 연속(최소) 혈중 농도를 유지하도록 투여된다. 유리하게는 항-NKG2A 항체의 양은 적어도 10 ㎍/㎖의 연속(최소) 혈중 농도를 달성하고/하거나 유지하도록 투여될 수 있다. 예를 들어, 달성되고/되거나 유지될 혈중 농도는 10 ㎍/㎖ 내지 12 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖ 내지 15 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖ 내지 20 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖ 내지 30 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖ 내지 40 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖ 내지 50 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖ 내지 70 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖ 내지 100 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖ 내지 150 ㎍/㎖ 또는 10 ㎍/㎖ 내지 200 ㎍/㎖일 수 있다. 혈관계 외부 조직이 표적화되는 경우(예컨대 고형 종양의 치료에서), 항-NKG2A 항체의 양은 적어도 10 ㎍/㎖의 조직 농도를 달성하고/하거나 유지하도록 투여된다; 예를 들어, 적어도 100 ㎍/㎖의 혈중 농도를 달성하기 위한 양의 항-NKG2A 항체의 투여는 적어도 10 ㎍/㎖의 조직 농도를 달성할 것으로 예상된다. 예를 들어, 조직에서 10 ㎍/㎖을 달성/유지하기 위해 달성되고/되거나 유지되어야 하는 혈중 농도는 100 ㎍/㎖ 내지 110 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖ 내지 120 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖ 내지 130 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖ 내지 140 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖ 내지 150 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖ 내지 200 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖ 내지 250 ㎍/㎖ 또는 100 ㎍/㎖ 내지 300 ㎍/㎖일 수 있다.
일부 구현예에서, 항-NKG2A 항체의 양은 NKG2A+ 림프구 세포 반응(예컨대, NKG2A+ NK 세포 반응)에 대해 적어도 EC50, 선택적으로 약 또는 적어도 약 EC100에 대응하는 혈액(예컨대 혈액 혈청) 중 농도를 수득하도록 투여된다. NKG2A+ 세포 반응(예컨대 NK 세포 반응)에 대한 "EC50"(또는 "EC100")은 이러한 NKG2A+ 세포 반응(예컨대 NK 세포 반응)에 대해 그 최대 반응 또는 효과의 50%(또는 EC100을 나타내는 경우 100%)를 생성하는 항-NKG2A 항체의 효율적 농도를 나타낸다. 일부 구현예에서, 특히 고형 종양의 치료를 위해, 달성되는 농도는 NKG2A+ NK 세포 반응에 대해 적어도 EC50에 대응하는, 선택적으로 NKG2A+ NK 세포 반응에 대해 약 또는 적어도 약 EC100에 대응하는 조직내(혈관계 외부, 예컨대 종양 환경내) 농도를 야기하도록 설계된다.
항-NKG2A 항체, 예컨대 NKG2A+ NK 세포 반응에 대해 약 10 ㎍/㎖의 EC100을 갖는 본원의 실시예에서 사용되는 humZ270에 대한 예시적인 치료 프로토콜은 항-NKG2A 항체의 적어도 1개 용량이 2 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏, 선택적으로 4 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏, 선택적으로 6 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏, 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 6 ㎎/체중㎏, 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 8 ㎎/체중㎏, 또는 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 4 ㎎/체중㎏의 용량으로 투여되는 적어도 1회 투여 사이클을 포함한다. 선택적으로, 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개 용량의 항-NKG2A 항체가 투여된다. 하나의 구현예에서, 투여 사이클은 2주 내지 8주이다. 하나의 구현예에서, 투여 사이클은 8주이다. 하나의 구현예에서, 투여 사이클은 8주이며 2주마다 1개 용량의 항-NKG2A 항체의 투여(즉, 총 4개 용량)를 포함한다.
본원에서 임의의 구현예의 하나의 양태에서, 항-NKG2A 항체는 약 2주 1회 투여된다.
특히 혈액 종양의 치료를 위해, 항-NKG2A 항체와 사용하기 위한 예시적인 치료 프로토콜에는, 예를 들어 2 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏, 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 6 ㎎/체중㎏, 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 8 ㎎/체중㎏, 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 4 ㎎/체중㎏, 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 6 ㎎/체중㎏, 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 4 ㎎/체중㎏, 선택적으로 약 4 ㎎/체중㎏인, 항-NKG2A 항체의 적어도 2회 연속 투여 간에 항-NKG2A 항체의 적어도 10 ㎍/㎖의 연속 혈중 농도를 유지하는 유효량으로 월 2회 항-NKG2A 항체를 환자에 투여하는 단계가 포함된다. 이들 용량은 선택적으로 치료 사이클을 통해 항-NKG2A 항체의 적어도 10 ㎍/㎖의 연속 혈중 농도를 제공하기 위해 투여될 수 있다. 항-NKG2A 항체의 10 ㎍/㎖의 혈중 농도 달성은 인간화 Z270과 같은 항체에 대한 EC100에 대응한다.
특히 항-NKG2A 항체 EC50 농도가 혈관외 조직에서(예컨대, 종양 또는 종양 환경에서) 추구되는 고형 종양의 치료를 위해, 항-NKG2A 항체와 사용하기 위한 예시적인 치료 프로토콜에는, 예를 들어, 2 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏, 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 6 ㎎/체중㎏, 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 4 ㎎/체중㎏, 선택적으로 약 4 ㎎/체중㎏인, 항-NKG2A 항체의 적어도 2회 연속 투여 간에 항-NKG2A 항체의 적어도 40 ㎍/㎖의 연속 혈중 농도를 유지하는 유효량으로 월 2회 항-NKG2A 항체를 환자에 투여하는 단계가 포함된다. 이들 용량은 선택적으로 치료 사이클을 통해 항-NKG2A 항체의 적어도 40 ㎍/㎖의 연속 혈중 농도를 제공하기 위해 투여될 수 있다. 항-NKG2A 항체의 40 ㎍/㎖의 혈중 농도 달성은 다시 인간화 Z270과 같은 항체에 대한 EC50에 대응하는, 약 4 ㎍/㎖의 조직(예컨대, 혈관외 조직, 종양 환경) 농도를 제공할 것으로 예상된다.
특히 항-NKG2A 항체 EC50 농도가 혈관외 조직에서(예컨대, 종양 또는 종양 환경에서) 추구되는 고형 종양의 치료를 위해, 항-NKG2A 항체와 사용하기 위한 예시적인 치료 프로토콜에는, 예를 들어, 항-NKG2A 항체의 유효량를 환자에 투여하는 단계가 포함되며, 여기서 항체는 4 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏, 선택적으로 4 ㎎/체중㎏ 내지 6 ㎎/체중㎏, 선택적으로 4 ㎎/체중㎏ 내지 8 ㎎/체중㎏, 선택적으로 약 4 ㎎/체중㎏, 선택적으로 약 6 ㎎/체중㎏, 선택적으로 약 8 ㎎/체중㎏, 또는 선택적으로 약 10 ㎎/체중㎏인, 항-NKG2A 항체의 적어도 2회 연속 투여 간에 항-NKG2A 항체의 적어도 100 ㎍/㎖의 연속 혈중 농도를 유지하는 유효량으로 월 2회 항체가 투여된다. 이들 용량은 선택적으로 치료 사이클을 통해 항-NKG2A 항체의 적어도 100 ㎍/㎖의 연속 혈중 농도를 제공하기 위해 투여될 수 있다. 항-NKG2A 항체의 100 ㎍/㎖의 혈중 농도 달성은 다시 인간화 Z270과 같은 항체에 대한 EC100에 대응하는, 약 10 ㎍/㎖의 조직(예컨대, 혈관외 조직, 종양 환경) 농도를 제공할 것으로 예상된다.
항-NKG2A 항체와 사용하기 위한 추가의 예시적인 치료 프로토콜에는 더 높은 용량으로의 로딩 기간에 이어 유지 기간을 채택하는 요법이 포함된다. 예를 들어, 로딩 기간은 항-NKG2A 항체의 유효량을 환자에 투여하는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 항체는 유지 요법에서의 항-NKG2A 항체의 첫 번째 투여 전까지 항-NKG2A 항체의 적어도 100 ㎍/㎖의 연속 혈중 농도를 유지하는 유효량으로 1회 이상 투여된다. 예를 들어, 1회 투여되는 경우, 로딩 용량 10 ㎎/㎏의 항-NKG2A 항체가 투여될 수 있고, 여기서 유지 요법 내의 항-NKG2A 항체의 첫 번째 투여는 로딩 용량 후 약 2주(또는 이내)에 일어난다. 이어서 유지 요법은 유지 요법 내의 연속 투여 간에 항-NKG2A 항체의 적어도 100 ㎍/㎖의 연속 혈중 농도를 유지하기 위해 더 낮은 투여 용량 및/또는 더 낮은 투여 빈도를 채택할 수 있다. 예를 들어, 유지 요법은 2주마다 항-NKG2A 항체를 2 ㎎/㎏ 내지 10 ㎎/㎏, 선택적으로 4 ㎎/㎏ 내지 10 ㎎/㎏, 선택적으로 2 ㎎/㎏ 내지 4 ㎎/㎏, 선택적으로 4 ㎎/㎏ 내지 6 ㎎/㎏, 선택적으로 4 ㎎/㎏ 내지 8 ㎎/㎏, 선택적으로 약 4 ㎎/㎏, 선택적으로 약 6 ㎎/㎏, 선택적으로 약 8 ㎎/㎏의 용량으로 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
소정 구현예에서, 항-NKG2A 항체의 하나의 용량(예컨대 각각의 용량)은 4 ㎎/㎏, 6 ㎎/㎏, 8 ㎎/㎏ 또는 10 ㎎/㎏으로 투여된다. 소정 구현예에서, 항-PD-1 항체의 하나의 용량(예컨대 각각의 용량)은 1 ㎎/㎏ 내지 20 ㎎/㎏, 선택적으로 10 ㎎/㎏으로 투여된다. 소정 구현예에서, 항-PD-L1 항체의 하나의 용량(예컨대 각각의 용량)은 10 ㎎/㎏, 15 ㎎/㎏, 20 ㎎/㎏ 또는 25 ㎎/㎏, 선택적으로 1200 ㎎의 총 용량으로 투여된다. 소정 구현예에서, 병용 치료법은 항-PD-1 또는 PD-L1 항체가 더 낮은 용량으로 투여될 수 있도록 한다; 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체의 각각의 용량은 2 ㎎/㎏ 또는 3 ㎎/㎏으로 투여된다.
하나의 구현예에서, 항-NKG2A 항체 및 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 다음 용량으로 투여된다:
(a) 1 ㎎/㎏ 내지 10 ㎎/㎏ 항-NKG2A 항체 및 (i) 1 ㎎/㎏ 내지 10 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체 또는 (ii) 1 ㎎/㎏ 내지 20 ㎎/㎏의 항-PD-L1 항체;
(b) 4 ㎎/㎏, 6 ㎎/㎏, 8 ㎎/㎏ 또는 10 ㎎/㎏의 항-NKG2A 항체 및 10 ㎎/㎏의 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체;
(c) 4 ㎎/㎏, 6 ㎎/㎏, 8 ㎎/㎏ 또는 10 ㎎/㎏의 항-NKG2A 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체; 또는
(d) 4 ㎎/㎏, 6 ㎎/㎏, 8 ㎎/㎏ 또는 10 ㎎/㎏의 항-NKG2A 항체 및 2 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체.
본원에서 임의의 구현예의 하나의 양태에서, 항-NKG2A 항체는 약 2주 1회 투여된다. 본원에서 임의의 구현예의 하나의 양태에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 약 3주 1회 투여된다. 본원에서 임의의 구현예의 하나의 양태에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 약 2주 1회 투여된다. 본원에서 임의의 구현예의 하나의 양태에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 약 4주 1회 투여된다.
하나의 구현예에서 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 및/또는 항-NKG2A 항체는 i.v.로 투여된다. 하나의 구현예에서 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 및/또는 항-NKG2A 항체는 같은 날, 선택적으로 추가로 약 2주 1회, 선택적으로 추가로 i.v.로 투여된다.
다른 양태에서, NKG2A+PD1+ NK 세포 및/또는 T 세포의 확인 방법이 제공된다. NK 세포 및/또는 T 세포 상에서 NKG2A 및 PD-1의 공동-발현 평가가 진단 또는 예후 방법에 사용될 수 있다. 예를 들어, 생물학적 샘플이 개체로부터(예컨대 암 환자로부터 수득된 암 또는 암-인접 조직으로부터) 수득되어 NKG2A+PD1+ NK 및/또는 T 세포의 존재에 대해 분석될 수 있다. 이러한 세포 상에서 NKG2A 및 PD-1 둘 다의 발현은, 예를 들어, NKG2A 폴리펩타이드에 의해(그리고 선택적으로 추가로 PD1 폴리펩타이드에 의해) 저해되는 종양 침윤 NK 및/또는 T 세포를 갖는 개체를 확인하기 위해 사용될 수 있다. 이 방법은, 예를 들어, NKG2A를 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 대한 반응에 대한 예후로서, PD1을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 대한 반응에 대한 예후로서, 또는 NKG2A를 중화시키는 제제 및 PD1을 중화시키는 제제로의 병용 치료에 대한 반응에 대한 예후로서 유용할 수 있다.
하나의 구현예에서, 개체가 NKG2A를 저해하는 제제 및 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 적합한지 여부의 평가 방법이 제공되며, 이 방법은 개체로부터의 생물학적 샘플에서 NKG2A 핵산 또는 폴리펩타이드 및 PD-1 핵산 또는 폴리펩타이드를 모두 발현하는 림프구 집단(예컨대 CD8+ T 세포, NK 세포)을 검출하는 단계를 포함한다. 개체가 NKG2A 핵산 또는 폴리펩타이드 및 PD-1 핵산 또는 폴리펩타이드를 모두 발현하는 림프구 집단을 갖는다는 결정은 환자가 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제와 병용으로 NKG2A를 저해하는 제제로 치료받을 수 있는 암을 가짐을 시사한다.
다른 양태에서, NKG2A+PD1+ NK 세포 및/또는 T 세포의 확인 방법이 제공된다. 종양 침윤 효과기 림프구가 저해 수용체 NKG2A 및 PD-1을 모두 발현할 수 있다는 발견은 개선된 치료 방법뿐만 아니라 진단 및 예후에서 유용할 수 있는 이러한 이중-제한된/저해된 효과기 세포의 검출 방법을 제공한다.
예를 들어, 생물학적 샘플이 개체로부터(예컨대 암 환자로부터 수득되는 암 또는 암-인접 조직으로부터) 수득되고 NKG2A+PD1+ NK 및/또는 T 세포의 존재에 대해 분석될 수 있다. 이러한 세포 상에서 NKG2A 및 PD-1 둘 다의 발현은, 예를 들어, NKG2A 및 PD1 폴리펩타이드 모두에 의해 저해되는 종양 침윤 NK 및/또는 T 세포를 갖는 개체를 확인하기 위해 사용될 수 있다. 이 방법은, 예를 들어, NKG2A를 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 대한 반응에 대한 예후로서, PD1을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 대한 반응에 대한 예후로서, 또는 NKG2A를 중화시키는 제제 및 PD1을 중화시키는 제제로의 병용 치료에 대한 반응에 대한 예후로서 유용할 수 있다.
생물학적 샘플 내에서 NKG2A- 및 PD-1 제한된 NK 및/또는 CD8 T 세포의 검출은 보다 일반적으로, NK 및/또는 CD8 T 세포의 특징규명이 관심의 대상인 병리의 연구, 평가, 진단, 예후 및/또는 예측에 사용하기 위한 장점을 가질 수 있다. 예를 들어, 바람직한 또는 바람직하지 못한 암 예후는 종양 또는 종양 인접 조직이 NKG2A 및 PD-1을 모두 발현하는 침윤 NK 및/또는 CD8 T 세포를 특징으로 하는지 여부를 평가함으로써 수행될 수 있다.
예를 들어, 환자에서의 암은 이러한 NK 및/또는 CD8 T 세포가 종양 말초에(암 인접 조직에) 존재하는지 여부를 포함하여 종양-침윤 NK 및/또는 CD8 T 세포가 NKG2A+PD1+인지 여부를 평가하기 위해 항-NKG2A 및 항-PD1 항체를 사용하여 특징규명되거나 평가될 수 있다. 이 방법은 환자가 이러한 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에 직접적으로 작용하는(예컨대 NKG2A 및/또는 PD-1, 또는 이의 각각의 리간드 HLA-E 또는 PD-L1로의 결합에 의해) 또는 이러한 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에 간접적으로 작용하는(예컨대, NK 및/또는 CD8 T 세포의 활성을 조정할 수 있는 사이토카인 또는 다른 신호전달 분자를 생산함으로써) 치료제에 의해 조정받기 쉬울 수 있는 NK 및/또는 CD8 T 세포를 특징으로 하는 병리를 갖는지 여부를 결정하기 위해 유용할 수 있다. 선택적으로, 임의의 구현예에서, 환자는 PD-1을 중화시키는 제제로 치료받았다. 본원에 기재되는 방법은 선택적으로 추가로 개체가 종양 침윤 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에 작용하는 치료제에 의해 조정받기 쉬울 수 있는 병리를 갖는다고 결정되는 경우, 이러한 치료제를 개체에 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
하나의 양태에서 본 발명자들은 NKG2A+ PD-1+ 림프구, 선택적으로 NK 또는 CD8+ T 세포를 검출하기 위한 시험관내 방법을 제공하며, 이 방법은 종양 침윤 림프구를 포함하는 생물학적 샘플을 제공하는 단계 및 림프구가 NKG2A 및 PD-1을 발현하는지 여부를 결정하는 단계를 포함한다.
하나의 구현예에서, 개체가 NKG2A를 저해하는 제제로의(및 선택적으로 추가로 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제로의) 치료에 적합한지 여부의 평가 방법이 제공되며, 이 방법은 개체로부터의 생물학적 샘플에서 NKG2A 핵산 또는 폴리펩타이드 및 PD-1 핵산 또는 폴리펩타이드를 모두 발현하는 림프구 집단(예컨대 CD8+ T 세포)을 검출하는 단계를 포함한다. 개체가 NKG2A 핵산 또는 폴리펩타이드 및 PD-1 핵산 또는 폴리펩타이드를 모두 발현하는 림프구 집단을 갖는다는 결정은 환자가 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 제제와 병용으로 NKG2A를 저해하는 제제로 치료받을 수 있는 암을 가짐을 시사할 수 있다.
다른 양태에서, 암을 갖는 개체가 PD-1을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 불량한 반응체인지 여부의 평가 방법이 제공되며, 여기서 NKG2A+ 및/또는 NKG2A+PD1+ NK 세포 및/또는 T 세포의 존재 및/또는 수가 평가된다. NKG2A의 발현(및/또는 NKG2A 및 PD-1의 공동-발현) 평가에는, 예를 들어, 개체로부터(예컨대 암 환자로부터 수득되는 암 또는 암-인접 조직으로부터) 생물학적 샘플을 수득하는 단계 및 NKG2A+ NK 및/또는 CD8 T 세포의 존재에 대해 샘플을 분석하는 단계가 관여될 수 있다. 상승된 NKG2A(및 선택적으로 추가로 PD-1) 발현 및/또는 이러한 NKG2A+ 및/또는 NKG2A+PD-1+ 세포수로 NKG2A 및 PD1 폴리펩타이드 모두에 의해 저해되는 종양 침윤 NK 및/또는 T 세포를 갖는 개체를 확인할 수 있다. 선택적으로, NKG2A(및 선택적으로 추가로 PD-1)의 발현 및 이러한 NKG2A+ 및/또는 NKG2A+PD-1+ 세포수의 증가는 PD-1을 중화시키는 제제의 개체에 대한 투여 후(예컨대 참조 값 또는 PD-1을 중화시키는 제제를 사용하는 치료 전 값에 비해) 검출된다. 상승되거나 증가된 NKG2A(및 선택적으로 추가로 PD-1) 발현 및 이러한 NKG2A+ 및/또는 NKG2A+PD-1+ 세포수를 갖는 개체는 PD-1의 활성을 중화시키는 제제에 대해 불량한 반응체인 것으로 결정될 수 있다. 이 방법은, 예를 들어, NKG2A를 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 대한 반응에 대한 예후로서, PD1을 중화시키는 제제를 사용하는 치료에 대한 반응에 대한 예후로서, 또는 NKG2A를 중화시키는 제제 및 PD1을 중화시키는 제제로의 병용 치료에 대한 반응에 대한 예후로서 유용할 수 있다.
본원에서의 임의의 방법에서, T 및/또는 NK 세포 상에서 NKG2A 및/또는 PD1의 검출은 조직 침윤 인간 CD8 T 세포 및/또는 NK 세포 상의 NKG2A 및/또는 PD1 발현 검출을 포함할 수 있고, 상기 방법은 개체로부터 종양 샘플(예컨대 샘플 또는 종양 조직 또는 종양-인접 조직)을 제공하는 단계, 및 샘플에서 인간 NKG2A 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 및 인간 PD-1 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체를 사용하여 상기 샘플에서 조직 침윤 CD8 T 세포 및/또는 NK 세포를 검출하는 단계를 포함한다. 선택적으로, 임의의 구현예에서, 환자는 PD-1을 중화시키는 제제로 치료받았다. 하나의 구현예에서, 샘플은 종양 세포, 종양 조직 또는 종양 인접 조직을 포함한다. 하나의 구현예에서, CD8 T 세포 및/또는 NK 세포는 면역조직화학 방법을 사용하여 확인된다. 하나의 구현예에서, 샘플은 파라핀-포매 샘플이며; 선택적으로 파라핀-포매 샘플은 고정되고, 파라핀에 포매되고, 섹션처리되고, 탈파라핀화되고, 슬라이드로 옮겨진 후 모노클로날 항체와 접촉되었다. 하나의 구현예에서, CD8 T 세포 및/또는 NK 세포는 유세포측정 방법을 사용하여 확인된다.
실시예
실시예 1 - RMA-S 및 A20 종양 세포가 NKG2A를 발현하는 NK 세포 및 NKG2A 및/또는 PD-1을 발현하는 CD8 T 세포에 의해 침윤됨
림프구는 일반적으로 NKG2A 및 PD-1을 공동-발현하는 것으로 확인되지 않는다. 종양-침윤 림프구 상에서 이들 수용체의 발현을 조사하기 위해, NKG2A 및 PD-1의 분포를 마우스로부터의 종양에서 NK 및 T 세포 하위세트 상에서 연구하였다. 림프구를 비장으로부터, 종양 배액 림프절로부터뿐만 아니라 고형 종양 내로부터 취하였다.
C57/BL6 마우스에 PDL-1+ Qa-1+ RMA-S 세포(Qa-1, Qdm, B2m) 또는 A20 종양 세포를 그래프트화하였다(sc). 종양 부피가 약 500 ㎣였을 때 RMA-S Qa-1 Qdm B2m(상부 열) 및 A20(하부 열) 종양 보유 마우스를 희생시켰다.
결과를 도 1a 및 도 1b에 나타낸다. 종양 세포(도 1a) 및 종양 침윤 림프구-TIL-(도 1b)을 종양 세포에 있어서 Qa-1 및 PDL-1 그리고 TIL에 있어서 NKG2A 및 PD-1의 발현에 대해 각각 유세포측정에 의해 분석하였다. 3마리 중 1마리의 대표 마우스를 나타낸다. MFI: 형광 세기의 중앙값.
두 종양 유형 모두로부터 절반을 초과하는 침윤 NK 세포가 NKG2A를 발현하여, 종양-침윤 NK 세포가 NKG2A에 의해 저해됨을 제시하였다. NKG2A+ NK 세포는 일반적으로 유의미한 양의 PD-1을 발현하지 않았다. 그러나, NKG2A 및 PD-1 모두에 대해 양성인 CD8 T 세포가 확인되어, CD8 T 세포가 저해 수용체 NKG2A 및 PD-1 모두에 의해 제한될 수 있음을 제시하였다.
실시예 2 - rma-rae1 종양을 보유하는 마우스로부터의 NK 및 T 세포 하위세트가 NKG2A 및 PD-1을 공동-발현할 수 있음
수용체 NKG2A 및 PD-1의 발현을 추가 조사하기 위해, NKG2A 및 PD-1의 분포를 마우스에서 NK 및 T 세포 하위세트 상에서 연구하였다. 림프구를 비장으로부터, 종양 배액 림프절로부터뿐만 아니라 고형 종양 내로부터 취하였다.
C57/BL6 마우스에 RMA- Rae 클론 6(2백만 개 세포)을 그래프트화하였다(sc). 이들 종양 세포는 CD94/NKG2A 리간드, Qa-1을 발현한다. 마우스를 12일차에 희생시켰으며, 평균 종양 부피: 723 ㎣, SD: 161 ㎣, n=4였다. 비장, LN 및 종양으로부터의 세포 현탁액 제조 후, 세포를 다음과 같이 염색하였다: CD3e PerCP Cy5.5, NKP46 Alexa 647, NKG2A/C/E FITC, PD1 PE, CD8 Pacific Blue.
결과를 도 2 및 표 1 내지 3에 나타낸다.
NK 세포 하위세트에서, 배액 림프절 및 비장 모두에서 세포는 약 절반이 NKG2A-양성이고 절반이 NKG2A-음성이었으나, 어느 경우에도 PD1의 유의미한 발현은 없었다. 림프절로부터의 NK 세포는 NKG2A+ PD-1-(49.2%) 및 NKG2A- PD-1-(49.5%)였고, 1% 미만(평균)의 NK 세포가 NKG2A+ PD-1+였다. 비장으로부터의 NK 세포는 NKG2A+ PD-1-(44.1%) 및 NKG2A- PD-1-(55.7%)였고 평균 0.1%(평균)의 NK 세포가 NKG2A+ PD-1+였다.
T 세포 하위세트에서 대부분의 세포는 NKG2A-음성이었고(림프절에서 1.1% 및 비장에서 4.7%만 NKG2A+ 임), 유의미한 이중 양성 NKG2A PD-1 세포 없이, 소분율의 세포가 PD-1+였다(림프절에서 3.5% 및 비장에서 10%가 PD-1+ NKG2A-였음). 림프절에서 0.1%(평균)의 T 세포만 NKG2A+ PD-1+였고 비장에서 0.4%(평균)의 T 세포만 NKG2A+ PD-1+였다. 림프절로부터 95.1%의 T 세포가 이중 음성이었고 비장으로부터 85.6%의 T 세포가 이중 음성이었다.
CD8 T 세포 하위세트에서, 대부분의 세포가 다시 NKG2A-음성이었고(림프절에서 1.6% 및 비장에서 3.9%만 NKG2A+임), 유의미한 이중 양성 NKG2A PD-1 세포 없이, 소분율의 세포가 PD-1+였다(림프절에서 1.1% 및 비장에서 2.5%가 PD-1+ NKG2A-였음). 림프절에서 0.2%(평균)의 T 세포만 NKG2A+ PD-1+였고 비장에서 0.3%(평균)의 T 세포만 NKG2A+ PD-1+였다. 림프절로부터 97.3%의 T 세포가 이중 음성이었고 비장으로부터 93.6%의 T 세포가 이중 음성이었다.
그러나, 종양 침윤 림프구(TIL) 중에서, 모든 세포 하위세트는 PD-1을 발현하는 세포를 가졌다. 이전에 유의미한 백분율이 PD-1을 발현하는 것으로 확인되지 않은 NK 세포는 NKG2A+ 하위세트 내를 포함하여 종양에서 PD-1-양성으로 관찰되었고, 31.8%(평균)의 NK 세포가 NKG2A+PD-1+였다. 종양 외부의 거의 모든 CD8 T 세포가 NKG2A 발현을 갖지 않은 반면, PD-1을 발현하는 CD8 T 세포는 종종 종양에 있었다(종양 침윤 CD8 T 세포 하위세트는 평균 26.3% NKG2A+ 양성 세포를 가졌다). 또한, 상기 NKG2A-양성 CD8 T 세포 하위세트 내에서, 대부분의 세포는 NKG2A+ PD-1+였다(19.4%(평균). 그러나, CD8- T 세포 하위세트 중에서, TIL 및 비장 또는 림프절 세포 간에 관찰되는 NKG2A 발현에서는 거의 차이가 없었고, 종양에서 5.1%의 T 세포만 NKG2A를 발현하였고, 3.6%의 T 세포만 이중 양성 NKG2A PD-1이었다.
| NK 중 % | |||||
| NK NKG2A- PD1+ % | NK NKG2A+ PD1+ % | NK NKG2A+ PD1- % | NK NKG2A- PD1- % | NK NKG2A+ % | |
| 마우스1 비장 | 0.064 | 0.064 | 41.8 | 58.1 | 41.864 |
| 마우스2 비장 | 0.15 | 0.098 | 46.1 | 53.7 | 46.198 |
| 마우스4 비장 | 0.19 | 0.19 | 44.3 | 55.3 | 44.49 |
| 평균 | 0.1 | 0.1 | 44.1 | 55.7 | 44.2 |
| SD | 0.1 | 0.1 | 2.2 | 2.2 | 2.2 |
| T 림프구 중 % | |||||
| T NKG2A- PD1+ % | T NKG2A+ PD1+ % | T NKG2A+ PD1- % | T NKG2A- PD1- % | T NKG2A+ % | |
| 마우스1 비장 | 8.08 | 0.38 | 4.52 | 87 | 4.54 |
| 마우스2 비장 | 9.64 | 0.32 | 4.22 | 85.8 | 6.25 |
| 마우스4 비장 | 12.3 | 0.41 | 3.21 | 84.1 | 3.37 |
| 평균 | 10.0 | 0.4 | 4.0 | 85.6 | 4.7 |
| SD | 2.13 | 0.05 | 0.69 | 1.46 | 1.45 |
| CD8+ T 림프구 중 % | |||||
| TCD8+ NKG2A- PD1+ % | TCD8+ NKG2A+ PD1+ % | TCD8+ NKG2A+ PD1- % | TCD8+ NKG2A- PD1- % | T CD8+ NKG2A+ % | |
| 마우스1 비장 | 1.8 | 0.27 | 4.68 | 93.2 | 4.95 |
| 마우스2 비장 | 2.08 | 0.27 | 3.09 | 94.6 | 3.36 |
| 마우스4 비장 | 3.67 | 0.48 | 2.97 | 92.9 | 3.45 |
| 평균 | 2.5 | 0.3 | 3.6 | 93.6 | 3.9 |
| SD | 1.01 | 0.12 | 0.95 | 0.91 | 0.89 |
| NK 중 % | |||||||
| NK NKG2A- PD1+ % | NK NKG2A+ PD1+ % | NK NKG2A+ PD1- % | NK NKG2A- PD1- % | NK NKG2A+ % | |||
| 마우스1 LN | 0.68 | 0.85 | 45.10 | 53.40 | 45.95 | ||
| 마우스3 LN | 0.20 | 0.40 | 54.70 | 44.70 | 55.10 | ||
| 마우스4 LN | 0.61 | 1.21 | 47.90 | 50.30 | 49.11 | ||
| 평균 | 0.50 | 0.82 | 49.23 | 49.47 | 50.05 | ||
| SD | 0.26 | 0.41 | 4.94 | 4.41 | 4.65 | ||
| T 림프구 중 % | |||||||
| T NKG2A- PD1+ % | T NKG2A+ PD1+ % | T NKG2A+ PD1- % | T NKG2A- PD1- % | T NKG2A+ % | |||
| 마우스1 LN | 2.8 | 0.1 | 1.8 | 95.3 | 0.5 | ||
| 마우스3 LN | 6.6 | 0.4 | 2.4 | 90.6 | 0.7 | ||
| 마우스4 LN | 2.1 | 0.0 | 0.6 | 97.2 | 0.6 | ||
| 평균 | 3.5 | 0.1 | 1.3 | 95.1 | 1.1 | ||
| SD | 2.1 | 0.2 | 0.9 | 3.1 | 1.1 | ||
| CD8+ T 림프구 중 % | |||||||
| TCD8+ NKG2A- PD1+ % | TCD8+ NKG2A+ PD1+ % | TCD8+ NKG2A+ PD1- % | TCD8+ NKG2A- PD1- % | T CD8+ NKG2A+ % | |||
| 마우스1 LN | 1.0 | 0.2 | 2.0 | 96.8 | 2.1 | ||
| 마우스3 LN | 2.1 | 0.6 | 2.5 | 94.8 | 3.1 | ||
| 마우스4 LN | 0.6 | 0.1 | 0.7 | 98.6 | 0.8 | ||
| 평균 | 1.1 | 0.2 | 1.4 | 97.3 | 1.6 | ||
| SD | 0.7 | 0.3 | 1.0 | 1.9 | 1.3 | ||
| NK 중 % | |||||
| NK NKG2A- PD1+ % | NK NKG2A+ PD1+ % | NK NKG2A+ PD1- % | NK NKG2A- PD1- % | NK NKG2A+ % | |
| 마우스1 TIL | 18.8 | 25.6 | 26.6 | 28.9 | 52.2 |
| 마우스2 TIL | 22.8 | 31 | 13.5 | 32.7 | 44.5 |
| 마우스3 TIL | 26 | 38.2 | 13.8 | 22 | 52 |
| 마우스4 TIL | 24.4 | 32.5 | 22.5 | 20.7 | 55 |
| 평균 | 23 | 31.8 | 19.1 | 26.1 | 50.9 |
| SD | 3.1 | 5.2 | 6.5 | 5.7 | 4.5 |
| T 림프구 중 % | |||||
| T NKG2A- PD1+ % | T NKG2A+ PD1+ % | T NKG2A+ PD1- % | T NKG2A- PD1- % | T NKG2A+ % | |
| 마우스1 TIL | 51.7 | 4.85 | 7.8 | 35.6 | 2.89 |
| 마우스2 TIL | 86.5 | 1.47 | 1.42 | 10.7 | 8.22 |
| 마우스3 TIL | 75 | 4.93 | 3.29 | 16.8 | 9.3 |
| 마우스4 TIL | 66 | 3.1 | 6.2 | 24.7 | 0 |
| 평균 | 69.8 | 3.6 | 4.7 | 22.0 | 5.1 |
| SD | 14.7 | 1.6 | 2.9 | 10.8 | 4.4 |
| CD8+ T 림프구 중 % | |||||
| TCD8+ NKG2A- PD1+ % | TCD8+ NKG2A+ PD1+ % | TCD8+ NKG2A+ PD1- % | TCD8+ NKG2A- PD1- % | T CD8+ NKG2A+ % | |
| 마우스1 TIL | 49.5 | 16 | 10.8 | 23.7 | 26.8 |
| 마우스2 TIL | 52.2 | 21.7 | 4.35 | 21.7 | 26.05 |
| 마우스3 TIL | 44.3 | 28.6 | 5.71 | 21.4 | 34.31 |
| 마우스4 TIL | 52.8 | 11.3 | 6.6 | 29.2 | 17.9 |
| 평균 | 49.7 | 19.4 | 6.9 | 24.0 | 26.3 |
| SD | 3.9 | 7.5 | 2.8 | 3.6 | 6.7 |
실시예 3 - 종양 보유 마우스에서 NKG2A 및 PD-1 발현
종양-보유 마우스에서 NKG2A 및 PD-1 발현을 추가 조사하기 위해, C57/BL6 마우스에 RMA- Rae1, MC38 또는 RMA 세포주의 상이한 종양 세포를 그래프트화하였다(sc). 종양 부피의 영향을 평가하기 위해, 이의 종양이 각각 500 ㎣, 2000 ㎣ 및 800 ㎣ 부피에 도달했을 때 마우스를 희생시켰다.
결과를 RMA Rae1(상부 열), MC38(중간 열) 및 RMA(하부 열)로 도 3a 및 도 3b에 나타낸다. NK 세포(도 3a) 및 CD8 T 세포(도 3b)를 NKG2A 및 PD-1 발현에 대해 비장, 종양 배액 림프절(LN) 및 종양에서 유세포측정에 의해 분석하였다. 2마리 내지 4마리 중 한 마리의 대표 마우스를 나타낸다.
NK 세포 하위세트에서, 종양, 림프절 및 비장에서의 세포는 약 절반이 NKG2A-양성이고 절반이 NKG2A-음성이었다. 배액 림프절 또는 비장으로부터의 어느 NK 세포도(이의 NKG2A 발현과 무관하게) 유의미한 PD1의 발현을 나타내지 않았다. 그러나, RMA-Rae1 및 RMA로부터의 종양 침윤 NK 세포는 유의미한 수준의 NKG2A 및 PD1을 모두 발현하였다. 특히 큰 부피(2000 ㎣)를 가지며 희생시킨 종양 세포주 MC38로부터의 종양 침윤 NK 세포는 NKG2A를 발현하였으나(50%) PD1은 유의미하게 발현하지 않았다(3%).
약 절반의 집단에서 NKG2A를 발현하는 NK 세포와는 달리, 비장 및 림프절로부터의 CD8 T 세포는 일반적으로 NKG2A도 PD1도 발현하지 않았다. 그러나, 종양에서, 큰 비율의 CD8 T 세포가 NKG2A 및 PD1을 모두 발현하였다(RMA-Rae1에서 28%, MC38의 43% 및 RMA의 40%가 이중 양성이었음). 이 결과는 다시 종양 침윤 CD8 T 세포뿐만 아니라 NK 세포가 또한 상이한 종양 세포 유형에 걸쳐, 저해 수용체 NKG2A 및 PD1 모두에 의해 제한되고 있을 수 있음을 제시한다.
실시예 4 - PD-1 치료에 내성인 마우스에서 증가된 NKG2A 발현 종양 침윤 CD8 T 세포
CD8 T 세포 상에서 항-PD1 항체를 사용하는 치료 효과를 평가하기 위해, MC38 종양 보유 마우스를 세포 그래프트화 후 11일, 14일 및 17일차에 200 ㎍의 래트 IgG2a 이소형 대조군(IC) 또는 중화 항-마우스 PD-1 모노클로날 항체로 치료하였다. 마우스(n=3/군)를 31일차에 희생시키고 비장, 종양 배액 림프절(LN) 및 종양에서 유세포측정에 의해 CD8 T 세포를 특징규명하였다. CD8 T 세포 중 CD8 NKG2A+ 백분율의 평균 +/- SD(n=3)를 나타낸다. P<0.005(***), P<0.0005(****), 통계 분석은 투 웨이 ANOVA에 이어 Tukey 다중 비교 평가로 수행하였다.
결과를 도 4에 나타낸다. 다른 실험에서 관찰된 것과 유사하게, 림프절의 비장으로부터의 CD8 T 세포는 NKG2A를 유의미하게 발현하지 않았다. 항-PD1 항체의 투여는 비장 또는 림프절 T 세포에서 NKG2A 발현 수준에 임의의 변화를 유도하지 않았다. 그러나, 종양 침윤 CD8 T 세포 집단에서, 항-PD1 항체의 투여는 NKG2A-발현 CD8 T 세포에서 50% 초과 증가를 유도하였다. 이 결과는 비반응 마우스에서 이소형 대조군 mAb로 치료받은 마우스에 비해 NKG2A를 발현하는 CD8 T 세포의 유의미한 증가가 존재함을 제시한다. 따라서, NKG2A 수용체는 항-PD1에 대한 불량한 반응체에서 종양에 대한 CD8 T 세포 반응의 저해에 대해 증가된 기여를 가질 수 있다. 따라서 NKG2A의 중화는 PD-1 축을 중화시키는 제제, 예컨대 항-PD1 또는 PDL1 항체로 치료받는 개체에서 NKG2A 제한된 T 세포의 저해를 역전시키는 데 유용할 수 있다.
실시예 5 - 조합 항-NKG2A/항-PD1 차단이 종양 성장을 저해함
중화 항-PD1 항체 및 중화 항-NKG2A 항체로의 병용 치료의 효과를 평가하기 위해, C57BL/6 마우스에 RMA-S Qa-1 Qdm B2m 종양 세포를 그래프트화하고(sc) 중화 항-PD1 제제(중화 항-PD-L1 항체) 및 중화 항-NKG2A 항체로 치료하였다.
간략하게, C57BL/6 마우스를 RMA-S Qa-1 Qdm B2m 종양 부피가 약 85 ㎣였을 때인 11일차에 무작위화하고(n=8 마우스/군) 11일, 14일 및 18일차에 이소형 대조군, 항-마우스 NKG2A mAb(200 ㎍, iv), 항-마우스 PD-L1 mAb(200 ㎍, ip) 또는 항-mNKG2A/mPDL-1 조합으로 치료하였다. 종양 부피를 주 2회 측정하였다; 종양이 커지거나(부피 2000 ㎣ 초과), 궤양성이나 궤사성이 되었을 때, 마우스를 희생시키고, NK 및 CD8 T 세포를 유세포측정에 의해 특징규명하였다.
경시적인 중앙값 종양 부피의 변화를 도 5에 나타낸다. 항-NKG2A는 이 모델에서 이소형 대조군에 비해 온건한 항-종양 효과만을 생성하였고, 항-PD-L1은 상당한 항-종양 효과를 생성했으나 28일을 향해 갈수록 종양 부피가 증가한 반면, 항-NKG2A 및 항-PD-L1로의 병용 치료는 종양 성장을 완전히 폐지하였고, 28일차에 유의미한 종양 부피의 성장이 관찰되지 않았다.
실시예 6 - PD-1/-L1 내성 암의 생체내 모델
A20 세포주는 Qa-1b이 아니라 PD-L1을 발현하는 마우스 B 세포 림프종 세포주이다. Balb/c 마우스 내로의 피하 주사 시, A20은 PD-L1 발현이 유지되는 고형 종양을 형성하였고, 여기서 Qa-1b 발현이 유도되었다. A20 종양 성장은 NK 및 CD8 T 세포에 의해 제어되었다.
중화 항-PD1 항체 또는 중화 항-PDL1 항체와의 병용 치료의 효과를 평가하기 위해, Balb/c 마우스(암컷, 8주령 내지 10주령)에 A20 종양 세포(1x106개 세포)를 그래프트화하고(sc) 이소형 대조군(IC) 또는 중화 항-뮤린 PD-1 항체 또는 중화 항-뮤린 PD-L1 항체로 치료하였다(200 ㎍의 항-PD1 또는 항-PD-L1, ip, 13일, 17일 및 20일). 종양 부피를 주 2회 측정하였다; 종양이 커지거나(부피 2000 ㎣ 초과), 궤양성이나 궤사성이 되었을 때, 마우스를 희생시키고, NK 및 CD8 T 세포를 유세포측정에 의해 특징규명하였다.
경시적인 개체 종양 부피의 변화를 도 6에 나타낸다. 항-PD-L1 또는 항-PD-1 항체는 실질적인 항-종양 효과를 생성하지 않았다. 이소형 대조군(IC)으로 치료받은 9마리 마우스 중에서, 부분 퇴행, 일시적 완전 퇴행 또는 완전 퇴행은 관찰되지 않았다. 항-PD-1 항체 치료로 치료받은 9마리 마우스 중에서, 부분 퇴행 또는 일시적 완전 퇴행을 가진 마우스는 관찰되지 않았고, 2마리 마우스가 완전 퇴행을 가졌다. 항-PD-L1 항체로 치료받은 10마리 마우스 중에서, 부분 퇴행 또는 일시적 완전 퇴행은 관찰되지 않았고, 2마리 마우스가 완전 퇴행을 경험하였다.
여러 면역 침윤 세포 상에서 PD-1의 고발현 및 종양 세포 상에서 PD-L1의 고발현에도 불구하고, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 mAb로의 단독치료법은 종양 성장에서 온건한 감소만을 일으켰다. 흥미롭게도, 50%를 초과하는 A20 종양 침윤 NK 세포 및 약 10%의 CD8 T 세포가 CD94/NKG2A을 발현하였다. NKG2A+ CD8 T 세포 집단은 또한 PD-1을 공동-발현하였다. Qa-1b 발현은 종양 세포의 표면 상에서 뿐만 아니라 생체내 침윤 면역 세포 상에서도 유도되었다.
실시예 7 - 항-NKG2A 항체 및 항-PD1 항체가 PD-1/-L1 내성 A20 종양에서 완전 종양 퇴행을 야기함
A20 종양 세포가 PD-L1 및 Qa-1b을 모두 공동-발현했으므로, A20 종양을 보유하고 중화 항-PD-1 항체를 수여받은 마우스(실시예 6 참고)를 중화 항-NKG2A 항체로 추가 치료하였다.
Balb/c 마우스(암컷, 8주령 내지 10주령)에 A20 종양 세포(1x106개 세포)를 그래프트화(sc)하고 이소형 대조군(IC), 중화 항-뮤린 PD-1 항체, 또는 항-PD-1 및 중화 항-NKG2A 항체(200 ㎍, ip, 10일, 13일 및 17일)로 치료하였다. 종양 부피를 주 2회 캘리퍼로 측정하였다. 종양이 커지거나(부피 2000 ㎣ 초과), 궤양성이나 궤사성이 되었을 때, 마우스를 안락사시켰다. 데이터는 실험 별 개체 종양 부피를 나타낸다.
경시적인 개체 종양 부피의 변화를 도 7에 나타낸다. 실시예 6에서 관찰된 것과 유사하게, 종양은 항-PD-1 항체 또는 이소형 대조군(IC)에 내성이었다. 이소형 대조군(IC)으로 치료받은 10마리 마우스 중, 부분 퇴행은 관찰되지 않았고, 1마리의 일시적인 완전 퇴행 및 1마리의 완전 퇴행이 관찰되었으나, 항-NKG2A 단독으로는 1마리의 부분 퇴행이 관찰되었고, 일시적인 완전 퇴행은 관찰되지 않았으며, 1마리의 완전 퇴행이 관찰되었다. 항-PD-1 항체 치료로 치료받은 9마리 마우스 중에서, 어느 마우스도 부분 퇴행을 갖지 않았고, 1마리의 일시적인 완전 퇴행이 관찰되었으며, 3마리의 완전 퇴행이 관찰되었다. 그러나 항-NKG2A 항체가 첨가되는 경우(도 7에서 병용으로 표시됨), 항-NKG2A 항체 첨가로 치료받은 10마리 마우스 중, 7마리의 완전 퇴행이 관찰되었다(부분 퇴행 또는 일시적인 완전 퇴행 없음). 이에 따라 항-NKG2A 항체는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체를 사용하는 치료에 내성인 암 치료에서 유망한 치료 가능성을 갖는다.
실시예 8 - 항-NKG2A 항체 및 항-PD-L1 항체가 항-PD1/-L1-내성 A20 종양에서 완전 종양 퇴행을 야기함
Balb/c 마우스(암컷, 8주령, n=11/군)에 A20 종양 세포(5x106 개 세포)를 피하로 그래프트화하고 마우스를 11일차(종양 부피 약 50 ㎣)에 무작위화하여 이소형 대조군(IC), 중화 항-PD-L1 항체(50 ㎍, ip, 11일, 14일, 18일, 21일, 25일, 28일), 차단 항-NKG2A mAb(200 ㎍, iv, 11일, 14일 및 18일) 또는 두 mAb의 조합으로 치료하였다. 종양 부피를 주 2회 캘리퍼로 측정하였다. 종양 부피가 2000 ㎣ 초과이거나, 궤양성이나 궤사성이었을 때, 마우스를 안락사시켰다. 데이터는 개체 종양 곡선을 나타낸다. PR: 부분 퇴행, CR: 완전 퇴행
경시적인 개체 종양 부피의 변화를 도 8에 나타낸다. 실시예 6에서 관찰된 것과 유사하게, 종양은 항-PD-L1 항체 또는 이소형 대조군(IC)에 내성이다. 이소형 대조군(IC)으로 치료받은 11마리 마우스 중, 부분 퇴행은 관찰되지 않았고, 2마리의 완전 퇴행(18%)이 관찰되었으나, 항-NKG2A 단독으로는 4마리의 완전 퇴행이 관찰되었다. 항-PD-L1 항체 치료 단독으로 치료받은 11마리 마우스 중에서, 어느 마우스도 부분 퇴행을 갖지 않았고, 6마리의 완전 퇴행이 관찰되었다. 그러나 항-NKG2A 항체가 첨가되는 경우, 항-NKG2A 항체 첨가로 치료받은 11마리 마우스 중, 9마리의 완전 퇴행이 관찰되었다. 이에 따라 결과는 항-NKG2A 항체가 항-PD-L1 항체를 사용하는 치료에 내성인 암 치료에서 유망한 치료 가능성을 가짐을 예시한다.
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SEQUENCE LISTING
<110> INNATE PHARMA
<120> NEUTRALIZATION OF INHIBITORY PATHWAYS IN LYMPHOCYTES
<130> IP20254664FR
<150> US 62/281,217
<151> 2016-01-21
<160> 15
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 233
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Asp Asn Gln Gly Val Ile Tyr Ser Asp Leu Asn Leu Pro Pro Asn
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Pro Lys Arg Gln Gln Arg Lys Pro Lys Gly Asn Lys Ser Ser Ile Leu
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35 40 45
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50 55 60
Pro Ser Ala Pro Glu Lys Leu Ile Val Gly Ile Leu Gly Ile Ile Cys
65 70 75 80
Leu Ile Leu Met Ala Ser Val Val Thr Ile Val Val Ile Pro Ser Thr
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Leu Ile Gln Arg His Asn Asn Ser Ser Leu Asn Thr Arg Thr Gln Lys
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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<220>
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305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Gly Lys
450
<210> 6
<211> 452
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> chimeric human-mouse
<400> 6
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
130 135 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
195 200 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Gly Lys
450
<210> 7
<211> 452
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Chimeric human-mouse
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
130 135 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
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Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
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Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
195 200 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
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Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
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Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Gly Lys
450
<210> 8
<211> 452
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Chimeric human-mouse
<400> 8
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
130 135 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
195 200 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
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Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
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Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
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Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
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Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
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Ser Leu Gly Lys
450
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<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Chimeric human-mouse
<400> 9
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 10
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Chimeric human-mouse
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
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65 70 75 80
Leu Glu Ile Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
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Thr Arg His Gly Asp Tyr Pro Arg Phe Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 11
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Chimeric human-mouse
<400> 11
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
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Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Gly Asn Pro Tyr Thr
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<210> 12
<211> 432
<212> PRT
<213> homo sapiens
<400> 12
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Trp Gln Pro Gly Arg Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser Gly
20 25 30
Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
35 40 45
Val Arg Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Thr Tyr Thr
180 185 190
Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Arg Val Glu
195 200 205
Ser Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly
210 215 220
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
225 230 235 240
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Trp Val Asp Val Ser Gln Glu
245 250 255
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Tyr Asp Gly Val Glu Val His
260 265 270
Asn Ala Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
275 280 285
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
290 295 300
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
305 310 315 320
Thr Ile Ser Lys Ala Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
325 330 335
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
340 345 350
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
355 360 365
Asn Gly Gln Pro Glu Lys Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
370 375 380
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
385 390 395 400
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
405 410 415
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
420 425 430
<210> 13
<211> 207
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 13
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
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Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg Thr
85 90 95
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100 105 110
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Ser Gly Thr Ala Ser
115 120 125
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Val Gln Trp
130 135 140
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr
145 150 155 160
Glu Gln Asp Ser Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Leu Ser
165 170 175
Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
180 185 190
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
195 200 205
<210> 14
<211> 117
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 14
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 15
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 15
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
Claims (31)
- 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체를 사용하는 치료 동안 또는 치료 후에 진행성 질환을 갖는 인간 개체에서 암의 치료에 사용하기 위한, 인간 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체를 포함하는 약학 조성물로, 인간 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 상기 항체가 NKG2A에 결합하는 항체이고,
NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 상기 항체가 SEQ ID NO: 4 내지 8 중 어느 하나에 나타낸 서열을 갖는 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 SEQ ID NO: 9에 나타낸 서열을 갖는 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하고,
PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체가 PD-1 폴리펩타이드 또는 PD-L1 폴리펩타이드에 결합하는 항체인, 약학 조성물. - 제1항에 있어서, 개체가 상승된 NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포수를 갖는, 약학 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 개체가 NK 및/또는 CD8 T 세포에서 NKG2A 폴리펩타이드의 상승된 발현 수준을 갖는, 약학 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 인간 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체가 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체와 병용으로 투여되는, 약학 조성물.
- 제4항에 있어서, 인간 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체 및 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체가 개별 투여를 위해 제형화되고 동시적으로 또는 순차적으로 투여되는, 약학 조성물.
- 제4항에 있어서, 인간 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체 및 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체가 단일 제형물로 동시 투여를 위해 제형화되는, 약학 조성물.
- 제4항에 있어서, 인간 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체가, PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체의 적어도 1회 투여 후에 투여되거나, 또는 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체를 사용하는 적어도 1회 치료 사이클 후에 투여되는, 약학 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 개체가 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체의 적어도 1회 투여 후 상승된 NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포수를 갖는다고 결정되는, 약학 조성물.
- 제8항에 있어서, 개체가 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체를 사용하는 적어도 1회 치료 사이클 후 상승된 NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포수를 갖는다고 결정되는, 약학 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 암이 고형 종양인, 약학 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 암이 폐암, 신장 세포 암종(RCC), 흑색종, 결장직장암, 및 난소암으로 구성된 군으로부터 선택되는, 약학 조성물.
- 제11항에 있어서, 암이 두부 및 경부 편평상피세포 암종인, 약학 조성물.
- 제11항에 있어서, 암이 비-소세포 폐암인, 약학 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체가 SEQ ID NO: 5에 나타낸 서열로 이루어진 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 SEQ ID NO: 9에 나타낸 서열로 이루어진 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하는, 약학 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체가 SEQ ID NO: 5에 나타낸 서열로 이루어진 중쇄, 및 SEQ ID NO: 9에 나타낸 서열로 이루어진 경쇄를 포함하는, 약학 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체가 키메라, 인간 또는 인간화 항체인, 약학 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체가 비-고갈 항체인, 약학 조성물.
- 제4항에 있어서, PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체가 비-고갈 항체인, 약학 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체가 IgG4 항체인, 약학 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체가 Fc 도메인 결핍이거나 Fc 도메인 및 Fcγ 수용체 간 결합을 감소시키도록 변형된 Fc 도메인을 포함하는, 약학 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체가 항체 단편인, 약학 조성물.
- 제21항에 있어서, 상기 항체 단편이 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 디아바디(diabody), 단일쇄 항체 단편, 또는 여러 상이한 항체 단편을 포함하는 다중특이적 항체로부터 선택되는, 약학 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체가 NK 및/또는 CD8 T 세포 상의 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 유효량으로 개체에 투여되는, 약학 조성물.
- 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체를 사용하는 치료에 대해 불량한 반응체인 암을 갖는 개체를 확인하는 시험관내 방법으로서, PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체가 PD-1 폴리펩타이드 또는 PD-L1 폴리펩타이드에 결합하는 항체이고, 상기 방법이:
a) 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체로 치료받은 개체에서 획득된 시험관내 생물학적 샘플에서 NK 및/또는 CD8 T 세포 상의 NKG2A 발현 수준 및/또는 NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포수를 측정하는 단계; 및
b) 개체가 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에 증가된 NKG2A 발현 수준 및/또는 증가된 NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포수를 갖는다는 결정 시, 개체를 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체를 사용하는 치료에 불량한 반응체로서 확인하는 단계,
를 포함하는 방법. - PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체로 치료받고 있는 개체에서 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체를 포함하는 약학 조성물로,
NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 상기 항체가 SEQ ID NO: 4 내지 8 중 어느 하나에 나타낸 서열을 갖는 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 SEQ ID NO: 9에 나타낸 서열을 갖는 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하고,
PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체가 PD-1 폴리펩타이드 또는 PD-L1 폴리펩타이드에 결합하는 항체이고,
치료가
a) 개체에서 NK 및/또는 CD8 T 세포 상의 NKG2A 발현 수준 및/또는 NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포수를 결정하는 단계; 및
b) 개체가 NK 및/또는 CD8 T 세포 상에서 증가된 NKG2A 발현 수준 및/또는 증가된 NKG2A-발현 NK 및/또는 CD8 T 세포수를 갖는다는 결정 시, 개체에 인간 NKG2A 폴리펩타이드의 저해 활성을 중화시키는 항체를 투여하는 단계
를 포함하는, 약학 조성물. - 제4항에 있어서, PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체가 펨브롤리주맙, 니볼루맙, AMP-514, MEDI-4736, CT-011 및 MPDL3280A로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 약학 조성물.
- 제4항에 있어서, PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체가 MEDI-4736인, 약학 조성물.
- 제4항에 있어서, NKG2A의 저해 활성을 중화시키는 항체가 SEQ ID NO: 5에 나타낸 서열로 이루어진 중쇄, 및 SEQ ID NO: 9에 나타낸 서열로 이루어진 경쇄를 포함하고, PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체가 MEDI-4736이며, 암이 비-소세포 폐암인, 약학 조성물.
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