KR101628872B1 - 자가-희생 기를 포함하는 화합물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 자가-희생 기(self-immolative group)를 포함하는 화합물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물은 목적하는 표적에 대한 기질 특이성을 갖는 단백질(예: 올리고펩티드, 폴리펩티드, 항체 등) 및 특이적 기능 또는 활성을 갖는 활성제(예: 약물, 독소, 리간드, 검출용 탐침 등)를 포함할 수 있다.

Description

자가-희생 기를 포함하는 화합물{COMPOUNDS COMPRISING SELF-IMMOLATIVE GROUP}
본 발명은 자가-희생 기(self-immolative group)를 포함하는 화합물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물은 목적하는 표적에 대한 기질 특이성을 갖는 단백질(예: 올리고펩티드, 폴리펩티드, 항체 등) 및 특이적 기능 또는 활성을 갖는 활성제(예: 약물, 독소, 리간드, 검출용 탐침 등)를 포함할 수 있다.
항체-약물 복합체(ADC, antibody-drug conjugates)는 항원과 결합하는 항체에 독소(Toxin)를 결합한 후 세포의 내부에서 독성물질을 방출하면서 암세포를 사멸에 이르게 하는 표적지향성 신기술이다. 건강한 세포에서는 최소한으로 영향을 주면서 약물을 타깃 암세포에 정확하게 전달하고, 특정한 조건하에서만 방출되도록 해주기 때문에 항체 치료제 자체보다 효능이 우수하고 기존의 항암제들에 비해 부작용의 위험성을 크게 낮출 수 있는 기술이다.
이러한 항체-약물 복합체의 기본 구조는“항체-링커-저분자 약물(독소)”로 구성되어있다. 여기서 링커는 단순히 항체와 약물을 연결시켜주는 기능적인 역할뿐 아니라, 체내순환시 안정하게 타깃 세포까지 도달 후 약물이 세포내로 들어가 항체-약물간 해리현상(예, enzyme에 의한 가수분해에 의한 결과)에 의해 약물이 잘 떨어지면서 타깃 암세포에 약효를 나타내도록 해야 한다. 즉 링커의 안정성에 따라 항체-약물 복합체의 효능 및 전신독성(systemic toxicity) 등의 안전성면에서 링커는 매우 중요한 역할을 한다 (Discovery Medicine 2010, 10(53): 329-39).
지금까지 개발된 항체-약물 복합체의 링커는 크게 비절단성(non-cleavable)과 절단성(cleavable) 타입(type)으로 분류된다.
비절단성 링커(non-cleavable linker)로는 주로 티오에테르(thioether)를 사용하고, 세포 내에서 링커가 분리되어 약물이 해리되는 것이 아닌, 링커를 포함하여 항체로부터 유래한 아미노산 한 개를 포함한 형태로 해리된다. 주로 사용되는 티올-말레이미드(thiol-maleimide) 결합 방법은, pH 6~7 정도에서 쉽게 반응이 이루어지나 화학적으로 그 역반응도 쉬워 안정성에 문제가 있다.
절단성 링커(Cleavable linker)로는 크게 화학적인 방법에 의해 분리되거나, 효소반응에 의해 가수분해 되는 링커를 주로 사용한다. 화학적으로 분리되는 메커니즘을 갖는 링커로는 다이설파이드 결합으로 이루어진 링커가 대표적이다. 더불어 히드라존 또는 옥심 링커들이 사용되기도 한다.
다이설파이드 링커는 티올 교환(thiol exchange)반응을 이용하여 약물이 해리되는 현상을 이용하는 것으로, 혈액보다는 세포 내 티올(특히, 글루타사이온) 농도가 높은 점을 이용한다. 그러나 혈액속에서도 다양한 형태의 티올(예, 알부민, 글로타사이온)이 존재하므로 체내순환 중 약물이 떨어져 나올 가능성이 있다. 히드라존링커의 경우 혈액 내에서는 비교적 안정하나 산성도가 높은 세포내, 엔도좀, 혹은 리소좀에서는 불안정하여 보다 빠른 속도로 가수분해되는 것으로 알려져 있다 (Bioconjugate Chem. 2008, 19, 759-765; Bioconjugate Chem. 2010, 21, 5-13).
이러한 문제를 해결하기 위해 효소반응에 의해 세포 내에서 가수분해 되는 링커가 개발되었고 펩타이드 링커(예, valine-citrulline)와 베타-글루쿠로나이드 링커(β-glucuronide)가 이에 속한다. 발린-시트룰린이나 베타-글루쿠로나이드는 약물과 직접 연결된 것이 아닌 자가-희생 기(self-immolative group)와결합되어 효소반응에 의해 가수분해 후 1,6-제거(1,6-elimination)혹은 고리화(cyclization) 등의 메커니즘을 통해 약물이 해리되어 효능을 보인다 (Clinical Cancer Res. 2005, 11, 843-852).
발린-시트룰린 펩타이드 링커는 카뎁신 B(cathepsin B)와 같은 리소좀 단백질 분해효소에 의해 선택적으로 분해되고, 화학적으로 분해되는 히드라존 링커와 비교시 혈액 내에서의 안정성을 증가시키고 그에 따라 항암효과도 증가하는 결과가 보고 되었다 (Bioconjugate Chem. 2008, 19, 1960-1963; J.Org.Chem, 2002, 67, 1866-1872). 그러나 펩타이드 링커는 소수성(hydrophobicity)을 띠는 문제를 지니고 있어 제조된 항체-약물 복합체의 응집(aggregation)이 형성되는 단점이 있다.
베타-글루쿠로니데이즈(β-glucuronidase)에 의해 인식되어 가수분해 되는 베타-글루쿠로나이드는 펩타이드 링커와는 달리 친수성(hydrophilicity)이 커서 소수성의 성질이 높은 약물과 결합시 항체-약물 복합체의 용해도를 증가시킬수 있는 장점을 지닌다. 베타-글루쿠로나이드 링커를 이용하여 다양한 약물(예, monomethylauristatin F, monomethylauristatin E, doxorubicinpropyloxazoline(DPO))과 결합시켜 항체-약물 복합체를 제조한 예가 보고 되었다 (Conjugation Chem. 2006, 17, 831-840; US2012/0107332). 그들이 보고한 바에 따르면, 글루쿠로나이드 링커로 제조된 항체-약물 복합체는 랫드 혈장 내에서 상당히 안정하나 마우스 혈장 내에서의 안정성은 보고되지 않았다.
따라서 본 발명에서는 혈장 내에서 보다 안정하고 체내순환시에도 안정적이며 약물이 암세포 내에서 쉽게 방출되어 약효를 나타낼 수 있는 효과적인 자가-희생 기(self-immolative group)를 포함한 링커를 개발하고자 하였다.
US2012/0107332
Discovery Medicine 2010, 10(53): 329-39 Bioconjugate Chem. 2008, 19, 759-765 Bioconjugate Chem. 2010, 21, 5-13 Clinical Cancer Res. 2005, 11, 843-852 Bioconjugate Chem. 2008, 19, 1960-1963 J.Org.Chem, 2002, 67, 1866-1872 Conjugation Chem. 2006, 17, 831-840
본 발명은 자가-희생 기(self-immolative group)를 포함하는 화합물을 제공하는데 목적이 있다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 자가-희생 기(self-immolative group)를 포함하는 화합물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure 112015050377967-pat00001
G는 글루쿠로나이드(glucuronide) 기 또는 이의 유도체이고;
A는 C1-C20 하이드로카빌, 바이오물질(biomaterial) 또는 개량된 바이오물질(modified biomaterial)이고;
B는 C1-C100 하이드로카빌이고;
W는 전자받개 그룹(Electron withdrawing group)이고;
Z는 수소, C1-C8알킬, 할로겐, 시아노 또는 나이트로이고;
n은 1 내지 3의 정수이고, n이 2 이상의 정수인 경우 각각의 Z는 서로 동일하거나 상이할 수 있고;
L은 A와 자가-희생 기(self-immolative group)의 W를 공유결합에 의해 연결하여 주는 링커(linker)이고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, C1-C8알킬 또는 C3-C8사이클로알킬이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 G은
Figure 112015050377967-pat00002
이고, R3는 수소 또는 카르복실 보호기이고, R4는 각각 독립적으로 수소 또는 하이드록시 보호기이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -SO2NR'-, -P(O)R''NR'-, -SONR'- 또는 -PO2NR'-이고, 상기 R' 및 R''는 각각 독립적으로 수소, C1-C8 알킬, C3-C8사이클로알킬, C1-C8 알콕시, C1-C8 알킬티오, 모노- 또는 다이- C1-C8 알킬아미노, C3-C20헤테로아릴 또는 C6-C20 아릴이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 링커(L)은 탄소수1 내지 50의 알킬렌으로, 하기 (i) 내지 (iv) 중 적어도 하나를 만족한다:
(i) 상기 알킬렌은 적어도 하나의 불포화 결합을 포함하고,
(ii) 상기 알킬렌은 적어도 하나의 헤테로아릴렌을 포함하고,
(iii) 상기 알킬렌의 탄소원자는 질소(N), 산소(O) 및 황(S)으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자로 치환되고,
(iv) 상기 알킬렌은 하나 이상의 탄소수 1 내지 20의 알킬로 더 치환된다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 링커(L)는 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 하기 화학식 A의 이소프레닐 유도체 유닛을 적어도 하나 이상 포함한다.
[화학식 A]
Figure 112015050377967-pat00003
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 링커(L)는 1,3-양극성고리 첨가반응(1,3-dipolar cycloaddition reactions), 헤테로-디엘스 반응(hetero-diels reactions), 친핵성 치환 반응(nucloephilic substitution reactions), 논-알돌 형 카보닐 반응(non-aldol type carbonyl reactions), 탄소-탄소 다중 결합에 대한 첨가(additions to carbon-carbon multiple bonds), 산화 반응(oxidation reactions) 또는 클릭 반응(click rection)에 의하여 형성된 결합 유닛을 더 포함한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 결합 유닛은 아세틸렌과 아지드와의 반응, 또는 알데히드 또는 케톤 그룹과 하이드라진 또는 하이드록실아민과의 반응으로 형성된다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 결합 유닛은 하기 화학식 B, C, D 또는 E로 표시된다:
[화학식 B]
Figure 112015050377967-pat00004
[화학식 C]
Figure 112015050377967-pat00005
[화학식 D]
Figure 112015050377967-pat00006
[화학식 E]
Figure 112015050377967-pat00007
상기 L1은 단일결합 또는 탄소수 1 내지 30의 알킬렌이고;
R11은 수소 또는 탄소수 1 내지 10의 알킬이고;
L2는 탄소수 1 내지 30의 알킬렌이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 링커(L)는 화학식 F 또는 G로 표시되는 연결 유닛을 더 포함한다:
[화학식 F]
-(CH2)r(V(CH2)p)q-
[화학식G]
-(CH2CH2X)w-
상기 V는 단일결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-이고;
X는 -O-, C1-C8알킬렌 또는 -NR21-이고;
R21 내지 R25는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알킬, C1-C6알킬C6-C20아릴 또는 C1-C6알킬C3-C20헤테로아릴이고;
r은 1 내지 10의 정수이고;
p는 0 내지 10의 정수이고;
q는 1 내지 10의 정수이고; 및
w는 1 내지 10의 정수이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 A가 탄소수 1 내지 20의 하이드로카빌인 경우 L은
Figure 112015050377967-pat00008
,
Figure 112015050377967-pat00009
또는
Figure 112015050377967-pat00010
이고, V는 단일결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-이고, R21 내지 R25는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알킬, C1-C6알킬C6-C20아릴 또는 C1-C6알킬C3-C20헤테로아릴이고, r은 1 내지 10의 정수이고, p는 0 내지 10의 정수이고, q는 1 내지 10의 정수이고, L1은 단일결합이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 바이오물질은 단백질이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 단백질은 올리고펩티드, 폴리펩티드, 항체, 항원성 폴리펩티드의 단편 또는 인공항체(Repebody)이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 단백질은 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 아미노산 모티프를 갖는다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 단백질과 아미노산 모티프 사이에 아미노산, 올리고펩타이드 또는 폴리펩타이드로 구성된 스페이서 유닛을 더 포함한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 단백질은 아미노산 모티프를 통하여 링커(L)에 공유결합된다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 아미노산 모티프는 단백질의 C-말단에 공유결합되거나, 단백질의 C-말단에 공유결합되는 적어도 하나의 스페이서 유닛에 공유결합된다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 단백질의 C-말단은 항체의 경쇄 또는 중쇄의 것이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 이소프레노이드 트랜스퍼라제는 FTase(farnesyl protein transferase) 또는 GGTase(geranylgeranyl transferase)이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 항체는 원형 다클론 항체(intact polyclonal antibody), 원형 단일클론 항체(intact monoclonal antibody), 항체 단편(antibody fragment), 단쇄 Fv (scFv) 돌연변이(single chain Fv(scFv) mutant), 다중특이 항체(multispecific antibody), 이중특이 항체(bispecific antibody), 키메라 항체(chimeric antibody), 인간화 항체(humanized antibody), 인간 항체(human antibody), 항체의 항원 결정 부분을 포함하는 융합 단백질(fusion protein comprising an antigen determination portion of an antibody), 및 항원 인식 부위를 포함하는 기타 변형된 면역글로불린 분자(modified immunoglobulin molecule comprising an antigen recognition site)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 항체는 뮤로모나브-CD3 아브식시마브(Muromonab-CD3 Abciximab), 리툭시마브(Rituximab), 다클리주마브(Daclizumab), 팔리비주마브(Palivizumab), 인플릭시마브(Infliximab), 트라스투주마브(Trastuzumab, '허셉틴'이라고도 함), 에타너셉트(Etanercept), 바실릭시마브(Basiliximab), 겜투주마브 오조가마이신(Gemtuzumab ozogamicin), 알렘투주마브(Alemtuzumab), 이브리투모마브 티욱세탄(Ibritumomab tiuxetan), 아달리무마브(Adalimumab), 알레파셉트(Alefacept), 오말리주마브(Omalizumab), 에팔리주마브(Efalizumab), 토시투모모브-I131(Tositumomob-I131), 세툭시마브(Cetuximab), 베박시주마브(Bevacizumab), 나탈리주마브(Natalizumab), 라니비주마브(Ranibizumab), 파니투무마브(Panitumumab), 에콜리주마브(Eculizumab), 리로나셉트(Rilonacept), 서톨리주마브 페골(Certolizumab pegol), 로미플로스팀(Romiplostim), AMG-531, CNTO-148, CNTO-1275, ABT-874, LEA-29Y, 벨리무마브(Belimumab), TACI-Ig, 2세대 항-CD20(Second generation anti-CD20), ACZ-885, 토실리주마브(Tocilizumab), 아틀리주마브(Atlizumab), 메폴리주마브(Mepolizumab), 퍼투주마브(Pertuzumab), 휴막스 CD20(Humax CD20), 트레멜리무마브(Tremelimumab,CP-675 206), 티실리무마브(Ticilimumab), MDX-010, IDEC-114, 이노투주마브 오조가마이신(Inotuzumab ozogamycin), 휴막스 EGFR(HuMax EGFR), 알리버셉트(Aflibercept), VEGF Trap-Eye, 휴막스-CD4(HuMax-CD4), Ala-Ala, ChAglyCD3, TRX4, 카투막소마브(Catumaxomab), IGN101, MT-201, 프레고보마브(Pregovomab), CH-14.18, WX-G250, AMG-162, AAB-001, 모타비주마브(Motavizumab), MEDI-524, 에푸마구마브(efumgumab), 아우로그라브®(Aurograb®), 락시바쿠마브(Raxibacumab), 3세대 항-CD20(Third generation anti-CD20), LY2469298, 및 벨투주마브(Veltuzumab)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 단백질은 단일클론 항체이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 아미노산 모티프가 CYYX, XXCC, XCXC 또는 CXX이고, C가 시스테인이고, Y가 지방족 아미노산이고, X가 이소프레노이드 트랜스퍼라제의 기질 특이성을 결정하는 아미노산이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 B는 활성제이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 활성제는 약물, 독소, 친화성 리간드, 검출용 탐침 또는 이들의 조합이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 활성제는 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항박테리아제, 항진균제, 구충제 또는 이들의 조합이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 아미노산 모티프를 갖는 단백질은 A-HC-(G)zCVIM, A-HC-(G)zCVLL, A-LC-(G)zCVIM 및 A-LC-(G)zCVLL로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 A는 항체를 나타내고, HC 는 중쇄를 나타내고, LC 는 경쇄를 나타내고, G는 글리신 유닛을 나타내고, z는 0 내지 20의 정수이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 화합물은 하기 구조에서 선택된다:
Figure 112015050377967-pat00011
상기 구조에서,
Z는 수소, C1-C8알킬, 할로겐, 시아노 또는 나이트로이고;
X는 -O-, C1-C8알킬렌 또는 -NR21-이고;
R21은 수소, C1-C6알킬, C1-C6알킬C6-C20아릴 또는 C1-C6알킬C3-C20헤테로아릴이고;
n은 1 내지 3의 정수이고, n이 2 이상의 정수인 경우 각각의 Z는 서로 동일하거나 상이할 수 있고;
r은 1 내지 10의 정수이고;
q는 1 내지 10의 정수이고;
w는 1 내지 10의 정수이고;
x는 0 내지 10의 정수이고;
g는 1 내지 10의 정수이고;
-S-mAb는 A-HC-(G)zCVIM-, A-HC-(G)zCVLL-, A-LC-(G)zCVIM- 또는 A-LC-(G)zCVLL-이고, A는 항체를 나타내고, HC 는 중쇄를 나타내고, LC 는 경쇄를 나타내고, G는 글리신 유닛을 나타내고, z는 0 내지 20의 정수이고;
B는 하기 구조로부터 선택되는 약물이고;
Figure 112015050377967-pat00012
Figure 112015050377967-pat00013
Figure 112015050377967-pat00014
Figure 112015050377967-pat00015
Figure 112015050377967-pat00016
Figure 112015050377967-pat00017
Figure 112015050377967-pat00018
Figure 112015050377967-pat00019
Figure 112015050377967-pat00020
Figure 112015050377967-pat00021
y는 1 내지 10의 정수이다.
본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물은 목적하는 표적에 대한 기질 특이성을 갖는 단백질(예: 올리고펩티드, 폴리펩티드, 항체 등) 및 특이적 기능 또는 활성을 갖는 활성제(예: 약물, 독소, 리간드, 검출용 탐침 등)를 포함하여 질환을 유발하는 세포에 과발현되는 단백질에 특이적으로 결합함과 동시에 자가-희생기가 혈액 및 혈장 등에서 기존에 알려진 링커보다 안정하고 타깃 암세포 내에서 탈리하면서 질환을 유발하는 세포에 특정적으로 활성제가 작용하여 질환의 치료에 사용될 수 있는 장점이 있다.
도 1 - β-글루쿠로나이드계 링커로부터 활성 약물의 방출 메카니즘
도 2 - 시험예 1의 β-글루쿠로니데이즈(β-glucuronidase)에 의한 가수분해율 결과
도 3 - 시험예 2의 플라즈마 안정성 결과
도 4 - 실시예 5에서 제조된 LCB14-0648의 플라즈마 안정성 결과
도 5 - 실시예 6에서 제조된 LCB14-0663의 플라즈마 안정성 결과
도 6 - 실시예 7에서 제조된 LCB14-0664의 플라즈마 안정성 결과
도 7 - 실시예 9의 반응개략도
도 8 - 실시예 8에서 제조된 ADC (LCB14-0109)의 마우스 플라즈마 안정성 결과
도 9 - 실시예 9에서 제조된 ADC (LCB14-0110)의 다양한 플라즈마 안정성 결과
도 10 - 실험예 6에서 QW 복용량에 따른 종양 부피를 관찰한 그래프 (비히클(Vehicle), 허셉틴(Herceptin) (5mg/kg)과 ADC109 (0.1, 1, 5mg/kg))
도 11 - 실험예 6에서 반복 투여에 따른 약효를 관찰한 그래프 (비히클(Vehicle), 허셉틴(Herceptin) (5mg/kg), ADC109 (5mg/kg), ADC110 (5mg/kg))
도 12 - 실험예 6에서 단회 투여에 따른 약효를 관찰한 그래프 (비히클(Vehicle), 허셉틴(Herceptin) (5mg/kg), ADC109 (5mg/kg), ADC110 (5mg/kg))
도 13 - 실험예 7에서 평가된 ADC 110(실시예 10)의 생체 외(in vitro) 플라즈마 안정성 결과
도 14 - 실험예 7에서 평가된 ADC 113(실시예 11)의 생체 외(in vitro) 플라즈마 안정성 결과
도 15 - 실험예 7에서 평가된 Kadcyla의 생체 외(in vitro) 플라즈마 안정성 결과
도 16 - 실험예 8에서 마우스 생체 내 PK 프로파일을 관찰한 그래프
도 17 - 실험예 8에서 평가된 ADC 110(실시예 10)의 랫(rat) 생체 내 PK 프로파일을 관찰한 그래프
도 18 - 실험예 8에서 평가된 ADC 110(실시예 10)의 랫(rat) 생체 내(in vivo) DAR(Drug-amtibody ratio)을 관찰한 그래프
도 19 - 실험예 8에서 평가된 ADC 110(실시예 10)의 랫(rat) 생체 내(in vivo) 자유 적재 (Free payload) 농도를 관찰한 그래프
도 20 - 실험예 8에서 평가된 ADC 110(실시예 10)의 원숭이(monkey) 생체 내(in vivo) PK 프로파일을 관찰한 그래프
도 21 - 실험예 8에서 평가된 ADC 110(실시예 10)의 원숭이(monkey) 생체 내(in vivo) DAR(Drug-amtibody ratio)을 관찰한 그래프
도 22 - 실험예 8에서 평가된 ADC 110(실시예 10)의 원숭이(monkey) 생체 내(in vivo) 자유 적재 (Free payload) 농도를 관찰한 그래프
본 발명은 자가-희생 기(self-immolative group)를 포함하는 화합물에 관한 것으로, 구체적으로 본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물은 하기 화학식 1로 표시되며, 목적하는 표적에 대한 기질 특이성을 갖는 단백질(예: 올리고펩티드, 폴리펩티드, 항체 등) 및 특이적 기능 또는 활성을 갖는 활성제(예: 약물, 독소, 리간드, 검출용 탐침 등)를 포함할 수 있다.
[화학식 1]
Figure 112015050377967-pat00022
G는 글루쿠로나이드(glucuronide) 기 또는 이의 유도체이고;
A는 C1-C20 하이드로카빌, 바이오물질(biomaterial) 또는 개량된 바이오물질(modified biomaterial)이고;
B는 C1-C100 하이드로카빌이고;
W는 전자받개 그룹(Electron withdrawing group)이고;
Z는 수소, C1-C8알킬, 할로겐, 시아노 또는 나이트로이고;
n은 1 내지 3의 정수이고, n이 2 이상의 정수인 경우 각각의 Z는 서로 동일하거나 상이할 수 있고;
L은 A와 자가-희생 기(self-immolative group)의 W를 공유결합에 의해 연결하여 주는 링커(linker)이고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, C1-C8알킬 또는 C3-C8사이클로알킬이다.
본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물에 있어서, 상기 자기-희생 기는 β-글루쿠로니데이즈(β-glucuronidase)에 의하여 탈리될 수 있는 글루쿠로나이드에 결합될 수 있으며, 상기 G은 β-글루쿠로니데이즈(β-glucuronidase)에 의하여 탈리될 수 있는 글루쿠로나이드 기 또는 이의 유도체로, 하기 구조로 표시된다:
Figure 112015050377967-pat00023
(상기 R3는 수소 또는 카르복실 보호기이고, R4는 각각 독립적으로 수소 또는 하이드록시 보호기이다.)
상기 카르복실 보호기는 유기 합성에서 사용될 수 있는 통상의 보호기로 제한되지는 않지만, 보다 바람직하게는 메틸, 메톡시메틸, 메틸사이오메틸, 테트라히드로피라닐, 벤질옥시메틸, 펜아실, N-프탈이미도메틸, 2,2,2-트리클로로에틸, 2-할로에틸, 2-(p-톨루엔설포닐)에틸, t-부틸, 시나밀, 벤질, 트리페닐 메틸, 비스(o-니트로페닐)메틸, 9-안트라메틸, 2-(9,10-디옥소)안트릴메틸, 피페로닐, 트리메틸실릴, t-부틸다이메틸실릴 또는 S-t-부틸, 2-알킬-1,3-옥사졸린일 수 있다. 또한, 상기 하이드록시 보호기는 유기 합성에서 사용될 수 있는 통상의 보호기로 제한되지는 않지만, 보다 바람직하게는 아세틸, 메틸, 에톡시에틸, 벤조일, 벤질, 4-메톡시벤질, 3,4-디메톡시벤질, THP(Tetrahydropyranyl), THF(Tetrahydrofuran), TBDMS(tert-butyldimethylsilyl), TMS(trimethylsilyl), TES(triethylsilyl), TIP(triisopropylsilyl), TBDPS(tert-Butyldiphenylsilyl), TOM(tri-iso-propylsilyloxymethyl), MEM(β-Methoxyethoxymethyl), MOM(Methoxymethyl), 알릴 또는 트리틸일 수 있다.
본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물에 있어서, 상기 W는 전자받개 그룹(Electron withdrawing group)으로 제한되지는 않지만, 보다 바람직하게 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -SO2NR'-, -P(O)R''NR'-, -SONR'- 또는 -PO2NR'-이고, 상기 R' 및 R''는 각각 독립적으로 수소, C1-C8알킬, C3-C8사이클로알킬, C1-C8알콕시, C1-C8알킬티오, 모노- 또는 다이- C1-C8알킬아미노, C3-C20헤테로아릴 또는 C6-C20아릴일 수 있다.
본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물에 있어서, 상기 링커(L)은 탄소수1 내지 50의 알킬렌으로, 하기 (i) 내지 (iv) 중 적어도 하나, 바람직하게는 적어도 둘을 만족한다:
(i) 상기 알킬렌은 적어도 하나의 불포화 결합을 포함하고,
(ii) 상기 알킬렌은 적어도 하나의 헤테로아릴렌을 포함하고,
(iii) 상기 알킬렌의 탄소원자는 질소(N), 산소(O) 및 황(S)으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자로 치환되고,
(iv) 상기 알킬렌은 하나 이상의 탄소수 1 내지 20의 알킬로 더 치환된다.
본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물에 있어서, 바람직하게 상기 링커(L)는 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 하기 화학식 A의 이소프레닐 유도체 유닛을 적어도 하나 이상 포함할 수 있다.
[화학식 A]
Figure 112015050377967-pat00024
또한, 상기 링커(L)는 1,3-양극성고리 첨가반응(1,3-dipolar cycloaddition reactions), 헤테로-디엘스 반응(hetero-diels reactions), 친핵성 치환 반응(nucloephilic substitution reactions), 논-알돌 형 카보닐 반응(non-aldol type carbonyl reactions), 탄소-탄소 다중 결합에 대한 첨가(additions to carbon-carbon multiple bonds), 산화 반응(oxidation reactions) 또는 클릭 반응(click rection)에 의하여 형성된 결합 유닛을 더 포함할 수 있다. 상기 결합 유닛은 아세틸렌과 아지드와의 반응, 또는 알데히드 또는 케톤 그룹과 하이드라진 또는 하이드록실아민과의 반응으로 형성되는 것으로, 바람직하게는 하기 화학식 B, C, D 또는 E로 표시될 수 있다:
[화학식 B]
Figure 112015050377967-pat00025
[화학식 C]
Figure 112015050377967-pat00026
[화학식 D]
Figure 112015050377967-pat00027
[화학식 E]
Figure 112015050377967-pat00028
상기 L1은 단일결합 또는 탄소수 1 내지 30의 알킬렌이고;
R11은 수소 또는 탄소수 1 내지 10의 알킬이고;
L2는 탄소수 1 내지 30의 알킬렌이다.
클릭 화학 반응은 온화한 조건에서 수행하여, 단백질을 용이하게 취급하는 것을 가능하게 한다. 클릭 화학 반응은 매우 높은 반응 특이성을 나타낸다. 따라서, 단백질이 다른 관능 그룹을 갖는 경우에도(예: 측쇄 잔기 또는 C-말단 또는 N-말단에서), 당해 관능 그룹은 클릭 화학 반응에 의하여 영향받지 않는다. 예를 들면, 단백질의 아지드 그룹과 아세틸렌 그룹 사이의 클릭 화학 반응은, 단백질의 다른 관능 그룹이 클릭 화학 반응에 의하여 영향받지 않는 동안, 발생할 수 있다. 또한, 클릭 화학 반응은 수반된 리간드 종류에 의하여 영향받지 않고 특이적으로 발생할 수 있다. 일부 경우, 리간드는 전체 반응 효율성을 개선시키도록 선택될 수 있다. 예를 들면, 아지드-아세틸렌 클릭 화학은 트리아졸을 고 수율로 생성할 수 있다(참조: Rhiannon K. Hia et al, Chem. Rev. 2009, 109, 5620; Morten Meldal and Christian Wenzel Tornoe, Chem Rev., 2008, 108, 2952; Hartmuth C. Kolb et al, Angew. Chemie Int. Ed. Engl., 2001, 40, 2004, 이들 모두는 본원에서 참조로 인용됨.).
아지드 및 아세틸렌 그룹은 천연 단백질의 아미노산 서열에 존재하지 않는 관능 그룹이다. 당해 관능 그룹을 사용하여 접합 반응이 발생하는 경우, 측쇄 잔기 중 어느 것도 그리고 N-말단 또는 C-말단 관능 그룹 중 어느 것도 클릭 화학 반응에 의하여 영향받지 않는다.
또한, 상기 링커(L)는 화학식 F 또는 G로 표시되는 연결 유닛을 더 포함할 수 있다:
[화학식 F]
-(CH2)r(V(CH2)p)q-
[화학식G]
-(CH2CH2X)w-
상기 V는 단일결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-이고;
X는 -O-, C1-C8알킬렌 또는 -NR21-이고;
R21 내지 R25는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알킬, C1-C6알킬C6-C20아릴 또는 C1-C6알킬C3-C20 헤테로아릴이고;
r은 1 내지 10의 정수이고;
p는 0 내지 10의 정수이고;
q는 1 내지 10의 정수이고; 및
w는 1 내지 10의 정수이다.
보다 바람직하게 상기 링커(L)은 적어도 하나 이상의 화학식 A의 이소프레닐 유도체 유닛, 화학식 B, C, D 또는 E로 표시되는 결합 유닛 및 화학식 F 또는 G로 표시되는 연결 유닛을 모두 포함할 수 있다.
보다 더 바람직하게, 상기 링커(L)은 하기 구조로 표시될 수 있다.
Figure 112015050377967-pat00029
본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물에 있어서, 상기 A가 탄소수 1 내지 20의 하이드로카빌인 경우 L은
Figure 112015050377967-pat00030
,
Figure 112015050377967-pat00031
또는
Figure 112015050377967-pat00032
이고, V는 단일결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-이고, R21 내지 R25는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알킬, C1-C6알킬C6-C20아릴 또는 C1-C6알킬C3-C20헤테로아릴이고, r은 1 내지 10의 정수이고, p는 0 내지 10의 정수이고, q는 1 내지 10의 정수이고, L1은 단일결합일 수 있다.
본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물에 있어서, 상기 바이오물질은 단백질로, 상기 단백질은 올리고펩티드, 폴리펩티드, 항체, 항원성 폴리펩티드의 단편 및 인공항체(Repebody)를 포함한다.
상기 단백질은 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 아미노산 모티프를 갖는다. 즉, 단백질의 C-말단(단편, 이의 유사체 또는 유도체)은 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 아미노산 모티프에 결합될 수 있다. 또한, 상기 단백질과 아미노산 모티프 사이에 아미노산, 올리고펩타이드 또는 폴리펩타이드로 구성된 스페이서 유닛을 더 포함할 수 있다. 상기 단백질은 단백질의 카복시 말단에서 결실(deletion)을 갖거나, 단백질의 카복시(C) 말단에 스페이서 유닛의 공유결합을 통한 부가를 갖는다. 단백질은 아미노산 모티프와 바로 공유결합되거나 스페이서 유닛과 공유결합되어 아미노산 모티프와 연결될 수 있다. 상기 아미노산 스페이서 유닛은 1 내지 20개의 아미노산으로 구성되며, 그 중에서 글리신(Glycin) 유닛이 바람직하다.
상기 단백질은 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 아미노산 모티프를 갖는다. 즉, 단백질의 C-말단(단편, 이의 유사체 또는 유도체)은 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 아미노산 모티프에 결합될 수 있다. 또한, 상기 단백질과 아미노산 모티프 사이에 아미노산, 올리고펩타이드 또는 폴리펩타이드로 구성된 스페이서 유닛을 더 포함할 수 있다. 상기 단백질은 단백질의 카복시 말단에서 결실(deletion)을 갖거나, 단백질의 카복시(C) 말단에 스페이서 유닛의 공유결합을 통한 부가를 갖는다. 단백질은 아미노산 모티프와 바로 공유결합되거나 스페이서 유닛과 공유결합되어 아미노산 모티프와 연결될 수 있다. 상기 아미노산 스페이서 유닛은 1 내지 20개의 아미노산으로 구성되며, 그 중에서 글리신(Glycin) 유닛이 바람직하다.
상기 이소프레노이드 트랜스퍼라제의 예는파네실트랜스퍼라제(FTase, farnesyl protein transferase) 또는 게라닐게라닐트랜스퍼라제(GGTase, geranylgeranyl transferase)를 포함하고, 이들은 각각 파네실 또는 게라닐-게라닐 잔기의 표적 단백질의 C-말단 시스테인(들)로의 전이를 수반한다. GGTase는 GGTase I 및 GGTase II로 분류될 수 있다. FTase 및 GGTase I은 CAAX 모티프를 인식할 수 있고, GGTase II는 XXCC, XCXC 또는 CXX 모티프(여기서 C는 시스테인이고, A는 지방족 아미노산이고, X는 이소프레노이드 트랜스퍼라제의 기질 특이성을 결정하는 아미노산이다)를 인식할 수 있다(참조: Nature Rev. Cancer 2005, 5(5), pp. 405-12; Nature Chemical Biology, 2010, 17, pp. 498-506; Lane KT, Bees LS, Structural Biology of Protein of Farnesyltransferase and Geranylgeranyltransferase Type I, Journal of Lipid Research, 47, pp. 681-699 (2006); Patrick J. Kasey, Miguel C. Seabra; Protein Prenyltransferases, The Journal of Biological Chemistry, Vol. 271, No. 10, Issue of March 8, pp. 5289-5292 (1996), 이의 내용은 이로써 전체적으로 참조로 인용됨).
본 발명에서, 다양한 공급원, 예를 들면, 사람, 동물, 식물, 박테리아, 바이러스 등으로부터의 이소프레노이드 트랜스퍼라제가 사용될 수 있다. 일부 양태에서는, 천연 이소프레노이드 트랜스퍼라제가 사용될 수 있다. 일부 기타 양태에서는, 천연 또는 인공 변형된 이소프레노이드 트랜스퍼라제가 사용될 수 있다. 예를 들면, 자연 변화된 하나 이상의 아미노산 서열을 갖는 이소프레노이드 트랜스퍼라제(후해독 변형 포함), 천연 이소프레노이드 트랜스퍼라제의 천연 또는 인공적으로 절단된 형태, (His)-태그, GST, GFP, MBP, CBP, 이오스펩태그(Iospeptag), BCCP, Myc-태그, Calmodulin-태그, FLAG-태그, HA-태그, 말토스 결합 단백질-태그, Nus-태그, 글루타티온-S-트랜스퍼라제-태그, 녹색 형광 단백질-태그, 티오레독신(Thioredoxin)-태그, S-태그, 소프태그(Softag) 1, 소프태그 3, 스트렙(Strep)-태그, SBP-태그, Ty 태그 등 중의 하나 이상에 의하여 변형된 이소프레노이드 트랜스퍼라제가 있다.
이소프레노이드 트랜스퍼라제는 이소기질(isosubstrate)뿐만 아니라 기질을 인식할 수 있다. 이소기질은 기질에 변형을 갖는 기질 유사체를 말한다. 이소프레노이드 트랜스퍼라제는 단백질의 C-말단에서 특정 아미노산 모티프(예: CAAX 모티프)를 알킬화시킨다(참조: Benjamin P. Duckworth et al, ChemBioChem 2007, 8, 98; Uyen T. T. Nguyen et al, ChemBioChem 2007, 8, 408; Guillermo R. Labadie et al, J. Org. Chem. 2007, 72(24), 9291; James W. Wollack et al, ChemBioChem 2009, 10, 2934, 이의 내용은 본원에서 참조로 인용됨). 관능화 단백질은 C-말단 시스테인(들)에서 알킬화를 통하여 이소프레노이드 트랜스퍼라제 및 이소기질을 사용하여 생성할 수 있다.
예를 들면, C-말단 CAAX 모티프의 시스테인 잔기는 이소프레노이드 트랜스퍼라제를 사용하여 이소기질과 반응시킬 수 있다. 특정 경우, AAX는 이어서 프로테아제에 의하여 제거할 수 있다. 수득한 시스테인은 이어서 효소에 의하여 카복시 말단에서 메틸화시킬 수 있다(참조: Iran M. Bell, J. Med. Chem. 2004, 47(8), 1869, 이는 본원에서 참조로 인용됨).
본 발명의 단백질은 당해 기술분야에 익히 공지된 어떠한 분자 생물 또는 세포 생물법을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들면, 일시적 트랜스펙션법이 사용될 수 있다. 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 특정 아미노산 모티프를 인코딩하는 유전적 서열은 이의 C-말단에 특정 아미노산 모티프를 갖는 단백질(단편 또는 이의 유사체)을 발현하도록 표준 PCR 기술을 사용하여 공지된 프라스미드 벡터로 삽입할 수 있다. 이와 같이, 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 하나 이상의 아미노산 모티프를 갖는 단백질이 발현될 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "단백질"은 공유 결합(예: 펩티드 결합)에 의하여 접합된 2개 이상의 독립적으로 선택된 천연 또는 비-천연 아미노산으로서 이해한다. 펩티드는 펩티드 결합에 의해 접합된 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 또는 그 이상의 천연 또는 비-천연 아미노산을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드는 전장 단백질(예: 전 가공된 단백질)뿐만 아니라 보다 짧은 아미노산 서열(예: 천연 단백질의 단편 또는 합성 폴리펩티드 단편)을 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "단백질"은 또한 항체, 항원성 폴리펩티드의 단편, 또는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다. 용어 "항체"는 면역글로불린 분자의 가변부 내의 하나 이상의 항원 인식 부위를 통하여 표적, 예를 들면, 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질 또는 이들의 조합을 인식하고 이에 특이적으로 결합하는 면역글로불린 분자를 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는, 항체가 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 원형 다클론 항체(intact polyclonal antibody), 원형 단일클론 항체(intact monoclonal antibody), 항체 단편(antibody fragment) (예: Fab, Fab', F(ab')2, Fd 및 Fv 단편), 단쇄 Fv (scFv) 돌연변이(single chain Fv(scFv) mutant), 다중특이 항체(multispecific antibody), 예를 들면, 2개 이상의 원형 항체로부터 발생된 이중특이 항체(bispecific antibody), 키메라 항체(chimeric antibody), 인간화 항체(humanized antibody), 인간 항체(human antibody), 항체의 항원 결정 부분을 포함하는 융합 단백질(fusion protein comprising an antigen determination portion of an antibody), 및 항원 인식 부위를 포함하는 기타 변형된 면역글로불린 분자(modified immunoglobulin molecule comprising an antigen recognition site)를 포함한다. 항체는 면역글로불린의 어떠한 5가지 주요 분류라도 가질 수 있다: 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤라고 나타내는 이의 중쇄 지속적 도메인의 동일성을 기준으로 하여, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM, 또는 이들의 하위분류(동종형)(예: IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl and IgA2). 상이한 분류의 면역글로불린은 상이하고 익히 공지된 아단위(subunit) 구조 및 3차원 형태를 갖는다.
용어 "항체 단편"은 원형 항체의 부분을 나타내고, 원형 항체의 항원 결정 가변부를 나타낸다. 항체 단편의 예는, 이들로 제한되지는 않지만, Fab, Fab', F(ab')2, Fd 및 Fv 단편, 선형 항체, 단쇄 항체 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체를 포함한다.
"단일클론 항체"는 단일 항원 결정자 또는 에피토프의 매우 특이적 인식 및 결합에 수반되는 동종 항체 개체수를 말한다. 이는 통상적으로 상이한 항원 결정자를 향한 상이한 항체를 포함하는 다클론 항체와 대조적이다. 용어 "단일클론 항체"는 원형 및 전장 단일클론 항체 둘 다뿐만 아니라, 항체 단편(예: Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv), 단쇄(scFv) 돌연변이, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질 및 항체 인식 부위를 포함하는 어떠한 기타 변형된 면역글로불린 분자라도 포함한다. 추가로, "단일클론 항체"는 이들로 제한되지는 않지만, 하이브리도마, 파지 선택, 재조합 발현 및 형질전환 동물을 포함하는 어떠한 수의 방식으로도 제조된 이러한 항체를 말한다.
용어 "인간화 항체"는 특이성 면역글로불린 쇄, 키메라 면역글로불린 또는 최소의 비-인간(예: 뮤라인) 서열을 함유하는 이의 단편인 비-인간(예: 뮤라인) 항체의 형태를 말한다. 통상적으로, 인간화 항체는 상보적 결정부(CDR)로부터의 잔기가 목적하는 특이성, 친화도 및 가능성을 갖는 비-인간 종(예: 마우스, 랫드, 래빗, 햄스터)의 CDR로부터의 잔기에 의하여 대체된 인간 면역글로불린이다(참조: Jones et al., 1986, Nature, 321:522-525; Riechmann et al., 1988, Nature, 332:323-327; Verhoeyen et al., 1988, Science, 239:1534-1536). 일부 예에서, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 부위(FR) 잔기는 목적하는 특이성, 친화도 및 가능성을 갖는 비-인간 종으로부터의 항체내 상응하는 잔기로 대체된다. 인간화 항체는 Fv 프레임워크 부위에서의 및/또는 대체된 비-인간 잔기 내의 추가의 잔기의 치환에 의하여 추가로 변형되어 항체 특이성, 친화도 및/또는 가능성을 개량하고 최적화시킬 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 실질적으로 비-인간 면역글로불린에 상응하는 CDR 부위 전체 또는 실질적으로 전체를 함유하는 하나 이상, 통상적으로 2 또는 3개의 가변성 도메인 전체를 포함하는 반면, FR 부위 전체 또는 실질적으로 전체는 인간 면역글로불린 일치 서열을 갖는 것이다. 인간화 항체는 면역글로불린 일정 부위 또는 도메인(Fc), 통상적으로 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 포함할 수도 있다. 인간화 항체를 발생시키는 데 사용되는 방법의 예는 미국 특허 제5,225,539호에 기재되어 있다.
용어 "인간 항체"는 사람에 의하여 생성된 항체 또는 당해 기술분야에 공지된 어떠한 기술이라도 사용하여 제조된 사람에 의하여 생성된 항체에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체를 의미한다. 인간 항체의 이러한 정의는 원형 또는 전장 항체, 이의 단편 및/또는 예를 들면, 뮤라인 경쇄 및 인간 중쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체와 같은, 하나 이상의 인간 중쇄 및/또는 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체를 포함한다.
용어 "키메라 항체"는 면역글로불린 분자의 아미노산 서열이 2개 이상의 종으로부터 유도된 항체를 말한다. 통상적으로, 경쇄 및 중쇄 둘 다의 가변부는 목적하는 특이성, 친화도 및 가능성을 갖는 포유동물의 한 종(예: 마우스, 랫드, 래빗 등)으로부터 유도된 항체의 가변부에 상응하는 한편, 일정 부위는 서로(통상적으로 사람)로부터 유도된 상체내 서열에 상동성이어서 상기 종의 면역 반응을 유도하는 것을 피한다.
용어 "에피토프" 또는 "항원 결정자"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 특정 항체에 의하여 인식되고 특이적으로 결합될 수 있는 항원의 부분을 말한다. 항원이 폴리펩티드인 경우, 에피토프는 단백질의 3차 폴딩에 의하여 병렬된 비인접 아미노산과 인접 아미노산 둘 다로부터 형성될 수 있다. 인접 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 통상적으로 단백질 변성 시 보유되는 반면, 3차 폴딩에 의하여 형성된 에피토프는 통상적으로 단백질 변성 시 손실된다. 에피토프는 통상적으로 독특한 공간 형태에 3개 이상, 5개 이상, 또는 8 내지 10개 이상의 아미노산을 포함한다.
항체가 에피토프 또는 항원 분자에 "특이 결합함"은 항체가 비관련 단백질을 포함한, 대체 물질보다 에피토프 또는 항원 분자에 보다 빈번하게, 보다 신속하게, 보다 장기간 동안, 보다 큰 친화도로, 또는 위의 일부 조합으로 반응하거나 결합됨을 의미한다. 특정 양태에서, "특이 결합함"은, 예를 들면, 항체가 약 1.0mM 이하, 보다 통상적으로는 약 1μM 미만의 KD를 갖는 단백질에 결합함을 의미한다. 특정 양태에서, "특이 결합함"은 항체가 때로는 적어도 약 0.1μM 이하, 다른 경우 적어도 약 0.01μM 이하의 KD를 갖는 단백질에 결합함을 의미한다. 상이한 화학종의 동종 단백질 사이의 서열 동일성 때문에, 특이 결합은 한 종 초과의 특정 단백질을 인식하는 항체를 포함할 수 있다. 제1 표적에 특이 결합하는 항체 또는 결합 잔기는 제2 표적에 특이적으로 결합하거나 결합하지 않을 수 있음을 이해한다. 이와 같이, "특이 결합"은 반드시 독점적인 결합, 즉, 단일 표적으로의 결합을 (포함할 수는 있지만) 필요로 하지 않는다. 일반적으로, 반드시 그렇지는 않지만, 결합에 대한 언급은 특이 결합을 의미한다.
이의 단편/유도체 및 단일클론 항체를 포함하는 항체는 당해 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 수득할 수 있다(참조: McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); Clackson et al., Nature 352:624-628; Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991); Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992); Waterhouse et al., Nucleic. Acids Res. 21:2265-2266 (1993); Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992); Brennan et al., Science 229:81(1985); Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992); Kohler et al., Nature 256:495 (1975); U.S. Pat. No. 4,816,567); Kilpatrick et al., Hybridoma 16(4):381-389 (1997); Wring et al., J. Pharm. Biomed. Anal. 19(5):695-707 (1999); Bynum et al., Hybridoma 18(5):407-411 (1999), Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immuno. 7:33 (1993); Barbas et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al., Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al., J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et. al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992), U.S. Pat. Nos. 5514548, 5545806, 5569825, 5591669, 5545807; WO 97/17852, 이들 모두는 본원에서 전체적으로 참조로 인용된다).
상기 항체는 제한되지는 않지만, 뮤로모나브-CD3 아브식시마브(Muromonab-CD3 Abciximab), 리툭시마브(Rituximab), 다클리주마브(Daclizumab), 팔리비주마브(Palivizumab), 인플릭시마브(Infliximab), 트라스투주마브(Trastuzumab, '허셉틴'이라고도 함), 에타너셉트(Etanercept), 바실릭시마브(Basiliximab), 겜투주마브 오조가마이신(Gemtuzumab ozogamicin), 알렘투주마브(Alemtuzumab), 이브리투모마브 티욱세탄(Ibritumomab tiuxetan), 아달리무마브(Adalimumab), 알레파셉트(Alefacept), 오말리주마브(Omalizumab), 에팔리주마브(Efalizumab), 토시투모모브-I131(Tositumomob-I131), 세툭시마브(Cetuximab), 베박시주마브(Bevacizumab), 나탈리주마브(Natalizumab), 라니비주마브(Ranibizumab), 파니투무마브(Panitumumab), 에콜리주마브(Eculizumab), 리로나셉트(Rilonacept), 서톨리주마브 페골(Certolizumab pegol), 로미플로스팀(Romiplostim), AMG-531, CNTO-148, CNTO-1275, ABT-874, LEA-29Y, 벨리무마브(Belimumab), TACI-Ig, 2세대 항-CD20(Second generation anti-CD20), ACZ-885, 토실리주마브(Tocilizumab), 아틀리주마브(Atlizumab), 메폴리주마브(Mepolizumab), 퍼투주마브(Pertuzumab), 휴막스 CD20(Humax CD20), 트레멜리무마브(Tremelimumab,CP-675 206), 티실리무마브(Ticilimumab), MDX-010, IDEC-114, 이노투주마브 오조가마이신(Inotuzumab ozogamycin), 휴막스 EGFR(HuMax EGFR), 알리버셉트(Aflibercept), VEGF Trap-Eye, 휴막스-CD4(HuMax-CD4), Ala-Ala, ChAglyCD3, TRX4, 카투막소마브(Catumaxomab), IGN101, MT-201, 프레고보마브(Pregovomab), CH-14.18, WX-G250, AMG-162, AAB-001, 모타비주마브(Motavizumab), MEDI-524, 에푸마구마브(efumgumab), 아우로그라브®(Aurograb®), 락시바쿠마브(Raxibacumab), 3세대 항-CD20(Third generation anti-CD20), LY2469298, 및 벨투주마브(Veltuzumab)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.
본원에서 사용된 용어 "단백질"은 또한 LRR 단백질 구조를 갖는 인터날린의 N-말단과 상기 VLR의 구조의 유사성을 바탕으로 융합하여 컨센서스 디자인으로 최적화시킨 폴리 폴리펩타이드인 인공항체(Repebody)를 포함한다. 상기 인공항체는 반복 모듈을 갖는 LRR 패밀리에 속하는 모든 단백질을 상기 방법으로 수용성 발현 및 단백질의 생물리학적 성질을 향상 시킨 모든 융합 LRR 패밀리 단백질을 모두 포함할 수 있다.
상기 단백질이 단일클론 항체인 경우, 단일클론 항체의 하나 이상의 경쇄, 단일클론 항체의 하나 이상의 중쇄 또는 둘 다는 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 아미노산 모티프를 갖는 아미노산 부위를 포함할 수 있다.
당업자는 관심 있는 표적을 선택적으로 결합시키는 단백질(예: 피검체의 표적 세포)을 즉시 선택할 수 있다. 상기 예시된 단백질로 제한되지는 않지만, 관심 있는 표적에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원의 단편을 포함한다.
본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물에 있어서, 상기 아미노산 모티프는 CYYX, XXCC, XCXC 또는 CXX (여기서, C가 시스테인이고, Y가 지방족 아미노산이고, X가 이소프레노이드 트랜스퍼라제의 기질 특이성을 결정하는 아미노산이다)로, 상기 아미노산 모티프가 CYYX인 것이 보다 바람직하다.
본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물에 있어서, 상기 단백질은 항체 또는 인공항체(Repebody)인 것이 보다 바람직하다.
본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물에 있어서, 상기 B는 활성제로, 하나 이상의 링커를 통하여 단백질의 카복시 말단에 존재하는 아미노산 모티프에 공유결합될 수 있다.
상기 활성제는 약물, 독소, 친화성 리간드, 검출용 탐침 또는 이들의 조합을 포함한다.
상기 약물은 어로티니브(erlotinib, TARCEVA; Genentech/OSI Pharm.); 보어테조미브(bortezomib, VELCADE; MilleniumPharm.); 풀베스트란트(fulvestrant, FASLODEX; AstraZeneca); 수텐트(sutent, SU11248; Pfizer); 레트로졸(letrozole, FEMARA; Novartis); 이마티니브 메실레이트(imatinib mesylate, GLEEVEC; Novartis); PTK787/ZK 222584(Novartis); 옥살리플라틴(oxaliplatin, Eloxatin; Sanofi); 5-플루오로우라실(5-fluorouracil, 5-FU); 류코보린(leucovorin); 라파마이신(rapamycin, Sirolimus, RAPAMUNE; Wyeth); 라파티니브(lapatinib, TYKERB, GSK572016; GlaxoSmithKline); 로나파니브(lonafarnib, SCH 66336); 소라페니브(sorafenib, BAY43-9006; Bayer Labs.); 게피티니브(gefitinib, IRESSA; Astrazeneca); AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen); 알킬화제(alkylating agent) (예: 티오테파(thiotepa) 또는 CYTOXAN® 사이클로포스파미드(cyclophosphamide)); 알킬 설포네이트(alkyl sulfonate) (예:부설판(busulfan), 임프로설판(improsulfan)또는 피포설판(piposulfan)); 아지리딘(aziridine) (예:벤조도파(benzodopa), 카보쿠온(carboquone), 메투레도파(meturedopa) 또는 우레도파(uredopa)); 에틸렌이민(ethylenimine), 메틸멜라민(methylmelamine), 알트레타민(altretamine), 트리에틸렌멜라민(triethylenemelamine), 트리에틸렌포스포라미드(triethylenephosphoramide), 트리에틸렌티오포스포라미드(triethylenethiophosphoramide), 트리메틸올멜라민(trimethylolmelamine); 아세토게닌스(acetogenins) (예: 불라탁신(bullatacin) 또는 불라탁시논(bullatacinone)); 합성 유사체 토포테칸(synthetic analogue topotecan)을포함하는 캄프토테신(camptothecin); 브리오스타틴(bryostatin); 칼리스타틴(callystatin); CC-1065 (이의 아도젤레신(adozelesin), 카젤레신(carzelesin) 또는 비젤레신(bizelesin) 합성 유사체(synthetic analogues)를 포함);크립토파이신(cryptophycins) (예: 크립토파이신 1(cryptophycin 1) 또는 크립토파이신 8(cryptophycin 8)); 돌라스타틴(dolastatin); 두오카마이신(duocarmycin) (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1를 포함); 엘레우테로빈(eleutherobin); 판크라티스타틴(pancratistatin); 사코딕틴(sarcodictyin); 스폰기스타틴(spongistatin); 질소 머스타드(nitrogen mustard) (예: 클로람부실(chlorambucil), 클로르나파진(chlornaphazine), 클로로포스파미드(cholophosphamide), 에스트라무스틴(estramustine), 이포스파미드(ifosfamide), 메클로레타민(mechlorethamine), 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드(mechlorethamine oxide hydrochloride), 멜팔란(melphalan), 노벰비킨(novembichin), 페네스터린(phenesterine), 프레드니무스틴(prednimustine), 트로포스파미드(trofosfamide) 또는 우라실 머스타드(uracil mustard)); 아질산우레아(nitrousurea) (예: 카무스틴(carmustine), 클로로조톡신(chlorozotocin), 포테무스틴(fotemustine), 로무스틴(lomustine), 니무스틴(nimustine) 또는 라님누스틴(ranimnustine)); 항생 물질(antibiotics) (예: 에네디인 항생 물질(enediyne antibiotics)로, 칼리케아마이신 감마 1 I(calicheamycin gamma1 I) 및 칼리케아마이신 오메가 I 1(calicheamycin omegaI1)로부터 선택되는 칼리케아마이신(calicheamycin) 또는 다이네미신 A(dynemicin A)를 포함하는다이네미신(dynemicin)); 비스포스포네이트(bisphosphonate) (예: 클로드로네이트(clodronate)); 에스페라미신(esperamicin), 니오카지노스타틴 발색단(neocarzinostatin chromophore) 또는 관련 크로모단백질 에넨디인 항생 발색단(related chromoprotein enediyne antibiotic chromophores), 아클라시노마이신(aclacinomysins), 악티노마이신(actinomycin), 안트라마이신(antrmycin), 아자세린(azaserine), 블레오마이신(bleomycins), 칵티노마이신(cactinomycin), 카라비신(carabicin), 카니노마이신(carninomycin), 카지노필린(carzinophilin), 크로모마이신(chromomycins), 닥티노마이신(dactinomycin), 다우노루비신(daunorubicin), 데토루부신(detorubucin), 6-디아조-5-옥소-L-노르류신(6-diazo-5-oxo-L-norleucine), ADRLIMYCIN® 독소루비신(ADRLIMYCIN® doxorubicin) (예: 모르폴리노-독소루비신(morpholino-doxorubicin), 시아노모르폴리노-독소루비신(cyanomorpholino-doxorubicin), 2-피롤리노-독소루비신(2-pyrrolino-doxorubucin), 리포솜 독소루비신(liposomal doxorubicin) 또는 데옥시독소루비신(deoxydoxorubicin)), 에피루비신(epirubicin), 에소루비신(esorubicin), 마셀로마이신(marcellomycin), 미토마이신(mitomycins) (예: 미토마이신 C(mitomycin C), 마이코페놀산(mycophenolic acid), 노갈라마이신(nogalamycin), 올리보마이신(olivomycins), 페플로마이신(peplomycin), 포트피로마이신(potfiromycin), 푸로마이신(puromycin), 쿠엘라마이신(quelamycin), 로두루비신(rodorubicin), 스트렙토미그린(streptomigrin), 스트렙토조신(streptozocin), 투베르시딘(tubercidin), 우베니멕스(ubenimex), 지노스타틴(zinostatin) 또는 조루비신(zorubicin)); 항-대사산물(anti-metabolites) (예: 5-플루오로우라실(5-fluorouracil, 5-FU)); 폴산 유사체(folic acid analogues) (예: 데노프테린(denopterin), 메토트렉세이트(methotrexate), 프테로프테린(pteropterin) 또는트리메트렉세이트(trimetrexate)); 푸린 유사체(purine analogs) (예: 플루다라빈(fludarabine), 6-머캅토푸린(6-mercaptopurine), 티아미프린(thiamiprine) 또는 티구아닌(thiguanine)); 피리미딘 유사체(pyrimidine analogs) (예: 아시타빈(ancitabine), 아자시티딘(azacitidine), 6-아자우리딘(6-azauridine), 카모푸르(carmofur), 사이타라빈(cytarabine), 디데옥시우리딘(dideoxyuridine), 독시플루리딘(doxifluridine), 에노시타빈(enocitabine) 또는 플록수리딘(floxuridine)); 안드로겐(androgens)(예: 칼루스테론(calusterone), 드로모스타놀론 프로피오네이트(dromostanolone propionate), 에피티오스타놀(epitiostanol), 메피티오스탄(mepitiostane) 또는 테스토락톤(testolactone)); 항-아드레날(anti-adrenals) (예: 아미노글루테티미드(aminoglutethimide), 미토탄(mitotane) 또는 트리로스탄(trilostane)); 폴산 보충제(folic acid replenisher) (예: 폴린산(folinic acid)); 아세글라톤(aceglatone); 알도포스파미드 글리코사이드(aldophosphamide glycoside); 아미노레불린산(aminolevulinic acid); 에닐우라실(eniluracil); 암사크린(amsacrine); 베스트라부실(bestrabucil); 비산트렌(bisantrene); 에다트락세이트(edatraxate); 데포파민(defofamine); 데메콜신(demecolcine); 디아지쿠온(diaziquone); 엘포르니틴(elfornithine); 엘립티늄 아세테이트(elliptinium acetate); 에포틸론(epothilone); 에토글루시드(etoglucid); 갈륨 니트레이트(gallium nitrate); 하이드록시우레아(hydroxyurea); 렌티난(lentinan); 로니다이닌(lonidainine); 마이탄시노이드(maytansinoids) (예: 마이탄신(maytansine)또는 안사미톡신(ansamitocins); 트리코테센은 T-2 독소(T-2 toxin), 베라쿠린 A(verracurin A), 로리딘 A(roridin A) 또는 안구이딘(anguidine)); 미토구아존(mitoguazone); 미톡산트론(mitoxantrone); 모피단몰(mopidanmol); 니트라에린(nitraerine); 펜토스타틴(pentostatin); 페나메트(phenamet); 피라루비신(pirarubicin); 로속사트론(losoxantrone); 2-에틸하이드라지드(2-ethylhydrazide); 프로카바진(procarbazine); PSK® 다당류 착체(polysaccharide); 라족산(razoxane); 리족신(rhizoxin); 시조피란(sizofiran); 스피로게르마늄(spirogermanium); 테누아존산(tenuazonic acid); 트리아지쿠온(triaziquone); 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민(2,2',2"-trichlorotriethylamine); 트리코테센(trichothecenes)(특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄(urethane); 빈데신(vindesine); 다카바진(dacarbazine); 만노무스틴(mannomustine); 미토브로니톨(mitobronitol); 미토락톨(mitolactol); 피포브로만(pipobroman); 가시토신(gacytosine); 아라비노시드(arabinoside, 'Ara-C'); 사이클로포스파미드(cyclophosphamide); 티오테파(thiotepa); 탁소이드(taxoids) (예: TAXOL® 파클리탁셀(TAXOL®paclitaxel) (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N. J.), ABRAXANETM크레모포 부재(ABRAXANETM cremophor-free), 파클리탁셀의 알부민 가공 나노입자 제형(albumin-engineered nanoparticle formulation of paclitaxel, American Pharmaceutical Partners, Schaumber, I11.) 또는 TAXOTERE®독세탁셀(TAXOTERE® doxetaxel)( (Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France))); 클로란부실(chloranbucil); 겜시타빈(gemcitabine); 6-티오구아닌(6-thioguanine); 머캅토푸린(mercaptopurine); 백금 유사체(platinum analog)(예: 시스플라틴(cisplatin) 또는카보플라틴(carboplatin)); 빈블라스틴(vinblastine); 백금(platinum); 에토포시드(etoposide), 이포스파미드(ifosfamide); 미톡산트론(mitoxantrone); 빈크리스틴(vincristine); NAVELBINE®비노렐빈(NAVELBINE® vinorelbine); 노반트론(novantrone); 테니포시드(teniposide); 에다트렉세이트(edatrexate); 다우노마이신(daunomycin); 아미노프테린(aminopterin); 젤로다(xeloda); 이반드로네이트(ibandronate); CPT-11; 토포이소머라제 억제제(topoisomerase inhibitor) RFS 2000; 디플루오로메틸로르니틴(difluorometlhylornithine, DFMO); 레티노이드(retinoid) (예: 레틴산(retinoic acid)); 카페시타빈(capecitabine); 및 약제학적으로 허용되는 이의 염, 용매화물, 산 또는 이들의 유도체로 이루어진 군으로부터 선택되나, 반드시 이들로 제한되는 것은 아니다.
추가의 약물은 이들로 제한되지는 않지만, (i) 예를 들면, 타목시펜(NOLVADEX® 타목시펜 포함), 라록시펜, 드로록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 FAREATON® 토레미펜을 포함하는, 항-에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERM)와 같은 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항-호르몬제; (ii) 부신내 에스트로겐 생성을 조절하는, 아로마타제 효소를 억제하는 아로마타제 억제제, 예를 들면, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, MEGASE® 메게스트롤 아세테이트, AROMASIN® 엑세메스탄, FEMARA® 레트로졸 및 ARIMIDEX® 아나스트로졸; (iii) 항-안드로겐, 예를 들면, 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 레우프롤리드 및 고세렐린; 뿐만 아니라 트록사시타빈(1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); (iv) 아로마타제 억제제; (v) 단백질 키나제 억제제; (vi) 지질 키나제 억제제; (vii) 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 부착 세포에 연관된 시그널링 통로 내 유전자 발현을 억제하는 것, 예를 들면, PKC-알파, Raf, H-Ras; (viii) 리보자임, 예를 들면, VEGF 억제제, 예를 들면, ANGIOZYME 리보자임 및 HER2 발현 억제제; (ix) 백신, 예를 들면, 유전자 치료 백신; ALLOVECTIN® 백신, LEUVECTIN 백신 및 VAXID 백신; PROLEUKIN®rlL-2; LURTOTECAN® 토포이소머라제 1 억제제; ABARELIX® rmRH; (x) 항-맥관발생제, 예를 들면, 베박시주마브(AVASTIN, Genentech); 및 (xi) 약제학적으로 허용되는 이의 염, 용매화물, 산 또는 유도체를 포함한다.
또한, 상기 약물로서 시토카인(cytokine)을 사용할 수 있다. 시토카인은 다수의 세포에 의하여 분비되는 소세포-시그널링 단백질 분자이고, 세포 내 정보교환에 광범위하게 사용되는 시그널링 분자의 범주이다. 이는 모노카인(monokine), 림포카인(lympokine), 전통적인 폴리펩티드 호르몬(traditional polypeptidehormone) 등을 포함한다. 시토카인의 예는, 이들로 제한되지는 않지만, 성장 호르몬(growth hormone) (예: 사람 성장 호르몬(human growth hormone), N-메티오닐 사람 성장 호르몬(N-methionyl humangrowth hormone) 또는 보바인 성장 호르몬(bovinegrowth hormone)); 부갑상선 호르몬(parathyroid hormone); 티록신(thyroxine); 인슐린(insulin); 프로인슐린(proinsulin); 레락신(relaxin); 프로레락신(prorelaxin); 당단백질 호르몬(glycoprotein hormone) (예: 소포 자극 호르몬(folliclestimulating hormone, FSH), 갑상선 자극 호르몬(thyroid stimulatinghormone, TSH) 또는 황체형성 호르몬(luteinizinghormone, LH)); 간 성장 인자(hepatic growth factor); 섬유아세포 성장 인자(fibroblast growth factor); 프로락틴(prolactin); 태반 락토겐(placental lactogen); 종양 괴사 인자-α(tumornecrosis factor-α), 종양 괴사 인자-β(tumornecrosis factor-β); 뮬러-억제 물질(mullerian-inhibitingsubstance); 마우스 고나도트로핀 결합 펩티드(mousegonadotropin-associated peptide); 인히빈(inhibin); 악티빈(activin); 혈관 내피 성장 인자(vascularendothelialgrowth factor); 인테그린(integrin), 트롬보포이에틴(thrombopoietin, TPO); 신경 성장 인자(nervegrowth factor) (예: NGF-β); 혈소판-성장 인자(platelet-growth factor); 변환 성장 인자(transforming growth factor, TGF) (예: TGF-α 또는TGF-β); 인슐린 유사 성장 인자-I(insulin-likegrowth factor-I), 인슐린 유사 성장 인자-II(insulin-like growth factor-II);에리트로포이에틴(erythropoietin, EPO);골유도 인자(osteoinductive factor);인터페론(interferon) (예: 인터페론-α(interferon-α), 인터페론-β(interferon-β) 또는 인터페론-γ(interferon-γ)); 집락 자극 인자(colony stimulating factor, CSF) (예: 대식 세포-CSF(macrophage-CSF, M-CSF), 과립구-대식 세포-CSF(granulocyte-macrophage-CSF, GM-CSF) 또는 과립구-CSF(granulocyte-CSF, G-CSF)); 인터류킨(interleukin, IL) (예: IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11 또는 IL-12); 종양 괴사 인자(tumor necrosis factor) (예: TNF-α 또는 TNF-β); 및 폴리펩티드 인자(polypeptide factor) (예: LIF 또는키트 리간드(kit ligand, KL))를 포함한다. 또한 용어 시토카인은 천연 공급원으로부터 또는 기본 서열 시토카인의 재조합 세포 배양물 및 생물학적 활성 동등물(biologically active equivalents of a cytokine)을 포함한다.
용어 "독소"는 살아 있는 세포 또는 유기체 내에서 생성되는 독성 물질을 말한다. 독소는 생물학적 거대분자, 예를 들면, 효소 또는 세포 수용체와 상호 작용하는 체조직과 접촉 또는 이에 의하여 흡수 시 질환을 유발할 수 있는 소분자, 펩티드 또는 단백질일 수 있다. 또한, 독소는 식물 독소 및 동물 독소를 포함한다. 동물 독소의 예는, 이들로 제한되지는 않지만, 디프테리아 항독소(diphtheria toxin), 보툴리움 독소(botulium toxin), 파상풍 항독소(tetanus toxin), 이질 독소(dysentery toxin), 콜레라 독소(cholera toxin), 테트로도톡신(tetrodotoxin), 브레베톡신(brevetoxin), 시구아톡신(ciguatoxin)을 포함한다. 식물 독소의 예는, 이들로 제한되지는 않지만, 리신(ricin) 및 AM-독소(AM-toxin)를 포함한다.
소분자 독소의 예는, 이들로 제한되지는 않지만, 아우리스타틴(auristatin), 툴부리신(tubulysin), 겔다나마이신(geldanamycin)(Kerr et al., 1997, Bioconjugate Chem. 8(6):781-784), 마이타시노이드(maytansinoid)(EP 1391213, ACR 2008, 41, 98-107), 칼리케아마이신(calicheamycin)(US 2009105461, Cancer Res. 1993, 53, 3336-3342), 다우노마이신(daunomycin), 독소루비신(doxorubicin), 메토트렉세이트(methotrexate), 빈데신(vindesine), SG2285(Cancer Res. 2010, 70(17), 6849-6858), 돌라스타틴(dolastatin), 돌라스타틴 유사체의 아우리스타틴(dolastatin analog's auristatin)(US563548603), 크립토파이신(cryptophycin), 캄프토테신(camptothecin), 리족신 유도체(rhizoxin derivative), CC-1065 유사체 또는 유도체(CC-1065 analogue or derivative), 두오카마이신(duocarmycin), 엔디인 항생 물질(enediyne antibiotic), 에스페라미신(esperamicin), 에포틸론(epothilone), PBD(pyrrolobenzodiazepine) 유도체, α-아마니틴(α-amanitin) 및 톡소이드(toxoid)를 포함한다. 독소는 튜불린 결합, DNA 결합, 토포이소머라제 억제 등에 의하여 세포독성 및 세포 성장 억제 활성을 나타낼 수 있다.
용어 "리간드"는 표적 생체분자와 착체를 형성할 수 있는 분자를 말한다. 리간드의 예는 표적 단백질의 소정 위치에 결합하여 신호를 전송하는 분자이다. 이는 기질, 억제제, 자극제, 신경전달 물질 또는 방사성 동위원소일 수 있다.
"검출 가능한 잔기(detection moiety)" 또는 "표지"는 분광, 광화학, 생화학, 면역화학, 방사성 또는 화학적 수단에 의하여 검출 가능한 조성물을 말한다. 예를 들면, 유용한 표지는 32P, 35S, 형광성 염료(fluorescent dyes), 전자-밀집 시약(electron-dense reagents), 효소(enzymes)(예: ELISA에 통상적으로 사용되는 것), 비오틴-스트렙타비딘(biotin-streptavidin), 디옥시게닌(dioxigenin), 합텐(haptens), 및 항혈청 또는 단일클론 항체가 사용 가능한 단백질(proteins for which antisera or monoclonal antibodies are available), 또는 표적에 상보적인 서열을 갖는 핵산 분자(nucleic acid molecules with a sequence complementary to a target)를 포함한다. 검출 가능한 잔기는 종종 샘플내 결합된 검출 가능한 잔기의 양을 정량하는 데 사용될 수 있는, 측정 가능한 신호, 예를 들면, 방사성, 발색성 또는 형광 신호를 발생시킨다. 신호의 정량은 예를 들면, 신틸레이션 카운팅, 밀도계, 유동 세포분석, ELISA 또는 원형 또는 후속적으로 다이제스트된 펩티드의 질량 분광법에 의한 직접 분석(하나 이상의 펩티드가 검정될 수 있다)에 의하여 달성된다. 당업자는 관심 있는 표지 화합물에 대한 기술 및 검출 수단에 친숙하다. 이러한 기술 및 방법은 통상적이고 당해 기술분야에 익히 공지되어 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "탐침"은 (i) 검출 가능한 신호를 제공하거나, (ii) 제1 탐침 또는 제2 탐침을 상호 반응시켜 형광 공명 에너지 전달(FRET)과 같은, 제1 또는 제2 탐침에 의하여 제공된 검출 가능한 신호를 변경시키거나, (iii) 항원 또는 리간드와의 상호 작용을 안정화시키거나 결합 친화도를 증가시키거나, (iv) 전하, 소수성 등과 같은 물리적 파라미터에 의하여 전기 이동도 또는 세포-침입 작용에 영향을 미치거나, (v) 리간드 친화도, 항원-항체 결합 또는 이온 착체 형성을 조절할 수 있는 물질을 말한다.
상기 활성제는 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항박테리아제, 항진균제, 구충제 또는 이들의 조합을 포함한다.
상기 면역조절 화합물은 아미노카프론산(aminocaproic acid), 아자티오프린(azathioprine), 브로모크립틴(bromocriptine), 클로로퀸(chloroquine), 클로로람부실(chlorambucil), 사이클로스포린(cyclosporine), 사이클로스포린A(cyclosporine A), 다나졸(danazol), DHEA(dehydroepiandrosterone), 덱사메타손(dexamethasone), 에타너셉트(etanercept), 하이드록시클로로퀸(hydroxychloroquine), 하이드로코르티손(hydrocortisone), 인플릭시맙(infliximab), 멜록시캄(meloxicam), 메토트렉세이트(methotrexate), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 미코페놀산모페틸(mycophenylate mofetil), 프리드니손(prednisone), 시롤리무스(sirolimus) 및 타크로리무스(tacrolimus)로 이루어진 군으로부터 선택가능하다. 상기 항암제는 메토트렉세이트(methotrexate), 탁솔(taxol), L-아스파라기나제(L-asparaginase), 머캡토퓨린(mercaptopurine), 티오구아닌(thioguanine), 하이드록시우레아(hydroxyurea), 시타라빈(cytarabine), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 이포스파미드(ifosfamide), 니트로소우레아(nitrosourea), 시스플라틴(cisplatin), 카보플라틴(carboplatin), 미토마이신(mitomycin), 다카바진(dacarbazine), 프로카바진(procarbazine), 토포테칸(topotecan), 질소 머스터드(nitrogen mustard), 사이톡산(cytoxan), 에토포시드(etoposide),5-플루오로우라실(5-fluorouracil), BCNU(bis-chloroethylnitrosourea), 이리노테칸(irinotecan), 캄포토테신(camptothecin), 블레오마이신(bleomycin), 독소루비신(doxorubicin), 이다루비신(idarubicin), 다우노루비신(daunorubicin), 닥티노마이신(dactinomycin), 플리카마이신(plicamycin), 미톡산트론(mitoxantrone), 아스파라기나제(asparaginase), 빈블라스틴(vinblastine), 빈크리스틴(vincristine), 비노렐빈(vinorelbine), 파클리탁셀(paclitaxel), 도세탁셀(docetaxel), 클로로람부실(chlorambucil), 멜파란(melphalan), 카르무스틴(carmustine), 로무스틴(lomustine), 부설판(busulfan), 트레오설판(treosulfan), 데카바진(decarbazine), 에토포시드(etoposide), 테니포시드(teniposide), 토포테칸(topotecan), 9-아미노캠프토테신(9-aminocamptothecin), 크리스나톨(crisnatol), 미토마이신 C(mitomycin C), 트리메트렉세이트(trimetrexate), 마이코페놀산(mycophenolic acid), 티아조퓨린(tiazofurin), 리바비린(ribavirin), EICAR(5-ethynyl-1-beta-D-ribofuranosylimidazole-4-carboxamide), 하이드록시우레아(hydroxyurea), 데프록사민(deferoxamine), 플룩수리딘(floxuridine), 독시플루리딘(doxifluridine), 랄티트렉세드(raltitrexed),시타라빈(cytarabine(ara C)), 시토신 아라비노시드(cytosine arabinoside), 플루다라빈(fludarabine), 타목시펜(tamoxifen), 라록시펜(raloxifene), 메게스트롤(megestrol), 고세렐린(goserelin), 류프롤리드 아세테이트(leuprolide acetate), 플루타미드(flutamide), 바이칼루타마이드(bicalutamide), EB1089, CB1093, KH1060, 베르테포르핀(verteporfin), 프탈로시아닌(phthalocyanine), 광감작제 Pe4(photosensitizer Pe4), 데메톡시-하이포크레린 A(demethoxy-hypocrellin A), 인터페론-α(Interferon-α), 인터페론-γ(Interferon-γ), 종양 괴사 인자(tumor necrosis factor), 겜사이타빈(Gemcitabine), 벨케이드(velcade), 레발미드(revamid), 탈라미드(thalamid), 로바스타틴(lovastatin), 1-메틸-4-페닐피리디늄 이온(1-methyl-4-phenylpyridinium ion), 스타우로스포린(staurosporine), 악티노마이신 D(actinomycin D), 닥티노마이신(dactinomycin), 블레오마이신 A2(bleomycin A2), 블레오마이신 B2(bleomycin B2), 페플로마이신(peplomycin), 에피루비신(epirubicin), 피라루비신(pirarubicin), 조루비신(zorubicin), 마이토산트론(mitoxantrone), 베라파밀(verapamil) 및 탑시가르긴(thapsigargin)으로 이루어진 군으로부터 선택가능하다. 상기 바이러스제는 펜시시클로버(pencicyclovir), 발라시클로버(valacyclovir), 간시시클로버(gancicyclovir), 포스카르네트(foscarnet), 리바비린(rivavirin), 이독수리딘(idoxuridine), 비다라빈(vidarabine), 트리플루리딘(trifluridine), 아시클로버(acyclovir), 팜시시클로버(famcicyclovir), 아만타딘(amantadine), 리만타딘(rimantadine), 시도포비어(cidofovir), 안티센스 올리고뉴클레오티드(antisense oligonucleotide), 면역글로불린(immunoglobulin) 및 인터페론(interferon)으로 이루어진 군으로부터 선택가능하다. 상기 항박테리아제는클로람페니콜(chloramphenicol), 반코마이신(vancomycin), 메트로니아졸(metronidazole), 트리메소프린(trimethoprin), 설파메타졸(sulfamethazole), 퀴누프리스틴(quinupristin), 달도프리스틴(dalfopristin), 리팜핀(rifampin), 스펙티노마이신(spectinomycin) 및니트로퓨란토인(nitrofurantoin)으로 이루어진 군으로부터 선택가능하다. 상기 항진균제는 암포테리신 B(amphotericin B), 캔디사이딘(Candicidin), 필리핀(filipin), 하마이신(hamycin), 나타마이신(natamycin), 니스타틴(nystatin), 리모시딘(rimocidin), 비포나졸(Bifonazole), 부토코나졸(Butoconazole), 클로트리마졸(Clotrimazole), 에코나졸(Econazole), 펜티코나졸(Fenticonazole), 이소코나졸(Isoconazole), 케토코나졸(Ketoconazole), 룰리코나졸(Luliconazole), 미코나졸(Miconazole), 오모코나졸(Omoconazole), 옥시코나졸(Oxiconazole), 세르타코나졸(Sertaconazole), 설코나졸(Sulconazole), 티오코나졸(Tioconazole), 알바코나졸(Albaconazole), 플루코나졸(Fluconazole), 이사부코나졸(Isavuconazole), 이트라코나졸(Itraconazole), 포사코나졸(Posaconazole), 라부코나졸(Ravuconazole), 테르코나졸(Terconazole), 보리코나졸(Voriconazole), 아바펀진(Abafungin), 아모롤핀(Amorolfin), 부테나핀(Butenafine), 나프티핀(Naftifine), 터비나핀(Terbinafine), 아니둘라펀진(Anidulafungin), 카스포펀진(Caspofungin), 미카펀진(Micafungin), 벤조산(benzoic acid), 시클로피록스(ciclopirox), 플루사이토신(flucytosine), 그리세오풀빈(griseofulvin), 할로프로긴(haloprogin), 톨나프테이트(tolnaftate), 운데실렌산(undecylenic acid), 크리스탈 바이올렛(crystal violet), 페루 발삼(balsam of peru), 서클로피록솔라민(Ciclopirox olamine), 피록톤올아민(Piroctone olamine), 징크 피리치온(Zinc pyrithione) 및 셀레늄 설파이드(Selenium sulfide)로 이루어진 군으로부터 선택가능하다. 상기 구충제는 메벤다졸(mebendazole), 피란텔 파모에이트(pyrantel pamoate), 티아벤다졸(thiabendazole), 디에틸카바마진(diethylcarbamazine), 이버멕틴(ivermectin), 니클로사마이드(niclosamide), 프라지콴텔(praziquantel), 알벤다졸(albendazole), 리팜핀(rifampin), 암포테리신 B(amphotericin B), 멜라소프롤(melarsoprol), 에플로니틴(eflornithine), 메트로니다졸(metronidazole), 티니다졸(tinidazole) 및 밀테포신(miltefosine)으로 이루어진 군으로부터 선택가능하다.
본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물에 있어서, 상기 아미노산 모티프를 갖는 단백질은 A-HC-(G)zCVIM, A-HC-(G)zCVLL, A-LC-(G)zCVIM 및 A-LC-(G)zCVLL로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 A는 항체를 나타내고, HC 는 중쇄를 나타내고, LC 는 경쇄를 나타내고, G는 글리신 유닛을 나타내고, z는 0 내지 20의 정수이다.
본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물은 보다 바람직하게 하기 구조에서 선택될 수 있다.
Figure 112015050377967-pat00033
상기 구조에서,
Z는 수소, C1-C8알킬, 할로겐, 시아노 또는 나이트로이고;
X는 -O-, C1-C8알킬렌 또는 -NR21-이고;
R21은 수소, C1-C6알킬, C1-C6알킬C6-C20아릴 또는 C1-C6알킬C3-C20헤테로아릴이고;
n은 1 내지 3의 정수이고, n이 2 이상의 정수인 경우 각각의 Z는 서로 동일하거나 상이할 수 있고;
r은 1 내지 10의 정수이고;
q는 1 내지 10의 정수이고;
w는 1 내지 10의 정수이고;
x는 0 내지 10의 정수이고;
g는 1 내지 10의 정수이고;
-S-mAb는 A-HC-(G)zCVIM-, A-HC-(G)zCVLL-, A-LC-(G)zCVIM- 또는 A-LC-(G)zCVLL-이고, A는 항체를 나타내고, HC는 중쇄를 나타내고, LC는 경쇄를 나타내고, G는 글리신 유닛을 나타내고, z는 0 내지 20의 정수이고;
B는 하기 구조로부터 선택되는 약물이고;
Figure 112015050377967-pat00034
Figure 112015050377967-pat00035
Figure 112015050377967-pat00036
Figure 112015050377967-pat00037
Figure 112015050377967-pat00038
Figure 112015050377967-pat00039
Figure 112015050377967-pat00040
Figure 112015050377967-pat00041
Figure 112015050377967-pat00042
Figure 112015050377967-pat00043
y는 1 내지 10의 정수이다.
본 발명에 따른 화학식 1의 자가-희생 기를 포함하는 화합물에서 A가 단백질이고 B가 활성제인 경우 당업자에게 공지된 조성물의 제조법을 이용하여 활성제를 피검체의 표적 세포에 전달하여 피검체를 치료하는데 사용할 수 있다.
조성물은 액체 용액으로서 또는 현탁액으로서 주사 가능한 형태로 제조한다. 주사에 적합한 고체 형태는 또한 에멀젼으로서 또는 리포솜에 캡슐화된 폴리펩티드와 제조할 수도 있다. 상기 자가-희생 기를 포함하는 화합물은 담체를 수용하는 피검체에 해로운 항체의 생성을 유도하지 않는 어떠한 담체라도 포함하는, 약제학적으로 허용되는 담체와 배합할 수 있다. 적합한 담체는 통상적으로 서서히 대사되는 큰 거대분자, 예를 들면, 단백질, 다당류, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 중합체성 아미노산, 아미노산 공중합체, 지질 응집물 등을 포함한다. 이러한 담체는 당업자에게 익히 공지되어 있다.
상기의 조성물은 또한 희석제, 예를 들면, 물, 염수, 글리세롤, 에탄올을 함유할 수 있다. 보조 물질, 예를 들면, 습윤제 또는 유화제, pH 완충 물질 등이 또한 존재할 수 있다. 단백질은 중성 또는 염 형태로서 백신으로 제형화시킬 수 있다. 조성물은 주사에 의하여 비경구 투여할 수 있으며; 이러한 주사는 피하 또는 근육 내일 수 있다. 추가의 제형은 예를 들면, 좌제에 의하여 또는 경구와 같은, 기타 투여 형태에 적합하다. 경구용 조성물은 용제, 현탁제, 정제, 환제, 캡슐 또는 서방성 제형으로서 투여할 수 있다.
상기의 조성물은 용량 제형과 혼화성인 방식으로 투여한다. 조성물은 치료학적 유효량의 자가-희생 기를 포함하는 화합물을 포함한다. 치료학적 유효량이란, 질환 또는 장애의 치료 또는 예방에 유효한, 단일 용량, 또는 다중 용량 스케쥴로 투여되는 조성물을 의미한다. 투여 용량은 치료되는 피검체, 피검체의 건강 및 신체 상태, 목적하는 보호도 및 기타 관련 인자에 따라 변화한다. 활성 성분의 정확한 필요량은 의사의 판단에 따른다.
예를 들면, 치료학적 유효량의 자가-희생 기를 포함하는 화합물 또는 이를 포함하는 조성물은 암 또는 종양으로 고통받는 환자에게 투여하여 암 또는 종양을 치료할 수 있다.
치료학적 유효량의 자가-희생 기를 포함하는 화합물 또는 이를 포함하는 조성물은 환자에게 투여하여 병원체(예: 바이러스, 박테리아, 진균, 기생충 등)에 의한 감염을 치료 또는 예방할 수 있다. 이러한 방법은 질환 또는 장애가 예방되거나 치료되도록 하는 조건하에, 포유동물에게 질환 또는 장애 또는 이의 증상을 치료하기에 충분한 치료학적 또는 예방적 양의 자가-희생 기를 포함하는 화합물을 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물 또는 이를 포함하는 조성물은 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 용매화물의 형태로 투여할 수 있다. 일부 양태에서, 이는 약제학적으로 허용되는 담체, 약제학적으로 허용되는 부형제 및/또는 약제학적으로 허용되는 첨가제와 투여할 수 있다. 약제학적 유효량 및 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물, 부형제 및 첨가제의 유형은 표준 방법(참조: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18th edition, 1990)을 사용하여 측정할 수 있다.
암 또는 종양에 관한 용어 "치료학적 유효량"은 암 세포 수를 감소시키거나; 암 세포 크기를 감소시키거나; 암 세포가 주변 계통으로 침입하는 것을 억제하거나 침입을 감소시키거나; 암 세포가 다른 계통으로 확산되는 것을 억제하거나 확산을 감소시키거나; 암 세포가 성장하는 것을 억제하거나; 암과 관련된 하나 이상의 증상을 개선시킬 수 있는 양을 의미한다. 암의 치료에서, 약물의 유효성은 종양 대 종양 진행(TTP) 및/또는 응답(반응) 속도(RR)에 의하여 검정할 수 있다.
병원체에 의한 감염에 관한 용어 "치료학적 유효량"은 감염과 관련된 증상을 예방, 치료 또는 감소시킬 수 있는 양을 의미한다.
본원에서 사용된 용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 유기 염 및 무기 염을 포함한다. 이의 예는, 이들로 제한되지는 않지만, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로요오다이드, 설페이트, 시트레이트, 아세테이트, 옥살레이트, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 니트레이트, 비설페이트, 포스페이트, 산 포스페이트, 이소니코티네이트, 락테이트, 살리실레이트, 산 시트레이트, 타르트레이트, 올레에이트, 탄네이트, 판토네이트, 비타르트레이트, 아스코르베이트, 석시네이트, 말레에이트, 겐티시네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루코로네이트, 사카레이트, 포르메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄 설포네이트, 에탄 설포네이트, 벤젠 설포네이트, p-톨루엔 설포네이트 및 파모에이트(즉, 1,1'-메틸렌비스-(2-하이드록시-3-나프토에이트))를 포함한다. 약제학적으로 허용되는 염은 또 다른 분자(예: 아세테이트 이온, 석시네이트 이온 및 기타 대이온 등)를 포함할 수 있다. 이는 또한 하나 이상의 하전된 원자를 포함할 수도 있다. 이는 또한 하나 이상의 대이온(counter ion)을 포함할 수도 있다.
본 발명에 따른 자가-희생 기를 포함하는 화합물의 약제학적으로 허용되는 용매화물에 사용될 수 있는 예시적인 용매화물은 이들로 제한되지는 않지만, 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸아세테이트, 아세트산 및 에탄올 아민을 포함한다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명의 구성을 보다 구체적으로 설명하지만, 하기의 실시예들은 본 발명에 대한 이해를 돕기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 여기에 국한된 것은 아니다.
[실시예 1] 화합물 1k의 제조
Figure 112015050377967-pat00044
Figure 112015050377967-pat00045
화합물 A 의 제조
질소 대기 하 상온에서 D-글루쿠로노-6,3-락톤 (19g, 107.88mmol)을 메탄올 (250mL)에 용해시킨 후 메탄올 (100mL)에 용해시킨 NaOH (100mg) 용액을 천천히 첨가하고 2시간동안 교반한 후 상기 혼합물에 메탄올 (15mL)에 용해시킨 NaOH (200mL) 용액을 첨가 후 3시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후 상기 혼합물의 메탄올 용매를 감압하에 제거하고 10℃ 이하에서 피리딘 (50mL)와 아세트산 무수물 (54mL)를 첨가하고 상온에서 4시간동안 교반하였다. 반응을 완료한 후 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 A를 수득하였다(20g, 50%).
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 5.77 (d, J= 7.8Hz, 1H), 5.31 (t, J= 9.6Hz, 1H), 5.24 (t, J= 9.6Hz, 1H), 5.14 (m, 1H), 4.17 (d, J= 9Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.04 (m, 9H)
화합물 B 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 A (5g, 13.28mmol)를 33% HBr in AcOH (20mL)에 용해시킨 후 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후 톨루엔 (50L)을 첨가 후 감암 농축시킨 후 에틸아세테이트 (100mL)와 NaHCO3 solution (100mL)를 첨가한 후 추출하여 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 B를 수득하였다(5.27g, 100%).
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 6.64 (d, J= 3.6Hz, 1H), 5.61 (t, J= 3.6Hz, 1H), 5.24 (t, J= 3.6Hz, 1H), 4.85 (m, 1H), 4.58 (d, d, J= 10.2Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.05 (s, 3H)
화합물 1a (US6414148, 2002)의 제조
질소 대기 하 0℃에서 3-아미노-1-프로판올 (3.0g, 66.569mmol)을 디클로로메탄 (150mL)에 용해시킨 후 다이터트-부틸다이카보네이트 (16g, 73.226mmol)를 첨가하였다. 수득한 혼합물을 상온에서 12시간동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 1a을 수득하였다(6.4g, 92%).
1H NMR (400Hz, CDCl3) δ 4.78 (s, 1H), 3.65 (m, 2H), 3.30 (m, 2H), 2.90 (s, 1H), 1.68 (m, 2H), 1.48 (s, 9H); EI-MS m/z: 176(M+)
화합물 1b (WO2008/157726)의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 1a (6.04g, 34.469mmol)와 TEA (14.4mL, 103.407mmol)을 테트라하이드로푸란에 용해시킨 후 메탄설폰산 무수물 (7.21g, 41.363mmol)로 서서히 처리하였다. 수득한 혼합물을 질소 대기 하에 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 1b을 수득하였다(9.01g, 98%).
1H NMR (400Hz, CDCl3) δ 4.73 (s, 1H), 4.30 (t, J = 5.9MHz, 2H), 3.31-3.24 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 1.94 (t, J= 6.1MHz, 2H), 1.44 (s, 9H). EI-MS m/z: 254(M+)
화합물 1c (WO2013/166319)의 제조
질소 대기 하 상온에서 화합물 1b (3.0g, 11.842mol)을 디메틸포름아미드 (40mL)에 용해 시킨 후 나트륨 아지드 (924mg, 14.211mmol)로 처리하고, 수득한 혼합물을 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (50mL), 증류수 (50mL) 및 1N HCl (5mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 1c를 수득하였다(2.3g, 99%).
1H NMR (600Hz, CDCl3) δ 4.63 (s, 1H), 3.36 (t, J = 6.6MHz, 2H), 3.24-3.18 (m, 2H), 1.80-1.75 (m, 2H), 1.45 (s, 9H). EI-MS m/z: 201(M+)
화합물 1d 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 1c (3.8g, 18.977mmol)을 디클로로메탄 (10mL)에 용해시킨 후 4M-HCl in dioxane (10mL)을 서서히 첨가하였다. 수득한 혼합물을 12시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 감압하에 농축시켜 화합물 1d를 수득하였다(2.5g, 99%).
1H NMR (600Hz, DMSO-d6) δ 8.06 (s, 3H), 3.47 (t, J = 6.6MHz, 2H), 2.82 (t, J = 7.2MHz, 2H), 1.84-1.79 (m, 2H). EI-MS m/z: 101(M+)
화합물 1e 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 1d (58mg, 0.420mmol)와 5-포밀살리실산 (100mg, 0.601mmol)을 DMF (2mL)에 용해 시킨 후 DIPEA (0.2mL, 1.202mmol) 및 PyBop (375mg, 0.721mmol)을 용액에 첨가하였다. 수득한 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (30mL) 및 증류수 (10mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 1e를 수득하였다(82mg, 79%).
1H NMR (400Hz, CDCl3) δ 13.39 (s, 1H), 9.87 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 1.6, 7.2MHz. 1H), 7.60 (s, 1H), 7.10 (d, J = 8.8MHz), 3.63-3.57 (m, 2H), 3.48 (t, J = 6.4MHz, 2H), 1.99-1.92 (m, 2H). EI-MS m/z: 249(M+)
화합물 1f 의 제조
질소 대기 하 상온에서 화합물 1e (78mg, 0.314mmol)와 화합물 B (125mg, 0.314mmol)을 아세토니트릴 (3mL)에 용해시킨 후 산화은 (291mg, 1.256mmol) 및 분자체 (molecular sieve, 125mg)을 첨가하였다. 수득한 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 상기 혼합물을 셀라이트 필터하고, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 1f 를 수득하였다(160mg, 90%).
1H NMR (400Hz, CDCl3) δ 10.00 (s, 1H), 8.66 (d, J= 2.4MHz, 1H), 8.02 (dd, J= 2.0, 6.4MHz, 1H), 7.46 (t, J = 6.4MHz, 1H), 7.14 (d, J = 8.4MHz, 1H), 5.48-5.33 (m, 4H), 4.28 (d, J = 8.8MHz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.73-3.64 (m, 1H), 3.50-3.42 (m, 3H), 2.09-2.07 (m, 9H), 2.00-1.92(m, 2H). EI-MS m/z: 565(M+)
화합물 1g 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 1f (160mg, 1.510mmol)을 2-프로판올 (0.4mL) 및 클로로폼 (2mL)에 용해시킨 후 실리카겔 (2g) 및소듐 보로하이드라이드 (27mg, 0.708mmol)을 첨가하였다. 수득한 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반 한 후 반응물을 셀라이트 필터하고, 여액을 감압 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 1g를 수득하였다(115mg, 71%).
1H NMR (600Hz, CDCl3) δ 8.06 (d, J= 2.4MHz, 1H), 7.50-7.44 (m, 2H), 7.01 (d, J = 90MHz, 1H), 5.45-5.31 (m, 4H), 4.38 (s, 2H), 4.22 (d, J = 9.0MHz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.67-3.61 (m, 1H), 3.46-3.41 (m, 3H), 2.07-2.04 (m, 9H), 1.97-1.91 (m, 2H). EI-MS m/z: 567(M+)
화합물 1h 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 1g (100mg, 0.177mmol)을 DMF (1mL)에 용해시킨 후 비스(4-니트로페닐)카보네이트 (110mg, 0.353mmol) 및 DIPEA (50ul, 0.265mmol)을 첨가하였다. 수득한 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (30mL) 및 증류수 (10mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 1h 를 수득하였다(75mg, 58%).
1H NMR (600Hz, CDCl3) δ 8.29-8.27 (m, 2H), 8.23 (d, J= 2.4MHz, 1H), 7.54 (dd, J = 2.4, 6.6MHz, 1H), 7.49 (t, J = 6.4MHz, 1H), 7.39-7.37 (m, 2H), 7.04 (d, J= 8.4MHz, 1H), 5.45-5.29 (m, 4H), 5.28 (s, 2H), 4.23 (d, J = 9.0MHz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.68-3.64 (m, 1H), 3.46-3.42 (m, 3H), 2.08-2.05 (m, 9H), 1.98-1.93 (m, 2H). EI-MS m/z: 732(M+)
화합물 1i 의 제조
질소 대기 하 상온에서 화합물 1h (50mg, 0.068mmol)을 DMF (0.8mL)에 용해시킨 후 MMAF-OMe (51mg, 0.068mmol)을 첨가한 다음, 이어서 HOBT (2mg, 0.013mmol), 피리딘 (0.24mL) 및 DIPEA (12ul, 0.068mmol)로 처리하였다. 수득한 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (20mL) 및 증류수 (10mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 1i 를 수득하였다(71mg, 78%).
EI-MS m/z: 1339(M+)
화합물 1j 의 제조
질소 대기 하 상온에서 화합물 1i (30mg, 0.022mmol) 및 페닐아세틸렌 (3.7ul, 0.033mmol)을 에탄올 (0.2mL) 및 물 (30ul)에 용해시킨 후 0.1M CuSO4 수용액 (30ul) 및 1.0M 소듐 아스코베이트 수용액 (30ul)을 첨가한 다음, 이어서 HOBT (2mg, 0.013mmol), 피리딘 (0.24mL) 및 DIPEA (12ul, 0.068mmol)로 처리하였다. 수득한 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (20mL) 및 증류수 (5mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 1j 를 수득하였다(26mg, 81%).
EI-MS m/z: 1441(M+)
화합물 1k 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 1j (20mg, 0.013mmol)을 메탄올 (0.2mL)에 용해시킨 후 물 (0.2mL) 중의 LiOH·H2O (6mg, 0.138mmol)을 첨가하였다. 수득한 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 클로로폼 (10mL), 메탄올 (1mL), 증류수 (10mL) 및 0.5N HCl (1mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 1k 를 수득하였다(17mg, 87%).
EI-MS m/z: 1286(M+)
[실시예 2 내지 3] 화합물 2i 및 3i의 제조
Figure 112015050377967-pat00046
Figure 112015050377967-pat00047
Figure 112015050377967-pat00048
화합물 2a 의 제조
질소 대기 하0℃에서 5-포밀살리실산 (2g, 12.038mmol)을 DMF에 용해시킨 후 2-(트리메틸실릴)에탄올 (1.72mL, 12.038mmol)과 DMAP (147mg, 1.204mmol)와 DCC (2.5g, 12.038mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 상온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (100mL) 및 증류수 (100mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 2a 를 수득하였다(1.6g, 50%).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 11.38 (s, 1H), 9.77 (s, 1H), 7.48 (d, , J= 8.4MHz, 1H), 6.61 (dd, J= 8.4, 2.0MHz, 1H), 6.53 (d, , J= 2.0MHz, 1H), 5.36~5.25 (m, 4H), 4.23 (m, 1H), 3.73 (s, 1H), 2.06 (s, 9H)
화합물 2b 의 제조
질소 대기 하 상온에서 화합물 2a (60mg, 0.225mmol)을 아세토나이트릴 (2mL)에 용해시킨 후 화합물 C (90mg, 0.225mmol), 산화은 (209mg, 0.900mmol) 및 분자체 (90mg)를 첨가시켰다. 상기 혼합물을 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (50mL) 및 증류수 (30mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 2b 를 수득하였다(103mg, 79%).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 9.93 (s, 1H), 8.22 (d, J= 2.0MHz, 1H), 7.97 (dd, J= 6.4, 2.0MHz, 1H), 7.26 (d, J= 9.2MHz, 1H), 5.42-5.27 (m, 4H), 4.42-4.30 (m, 2H), 4.24 (d, J = 9.2MHz, 1H), 3.70 (s, 3H), 2.06-2.04 (m, 9H), 1.14-1.08 (m, 2H), 0.07 (s, 9H)
화합물 2c 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 2b (100mg, 0.171mmol)을 2-프로판올 (0.3mL) 및 클로로폼 (1.5mL)에 용해시킨 후 실리카겔 (720mg) 및 소듐 보로하이드라이드 (16mg, 0.427mmol)를 첨가시켰다. 상기 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (50mL) 및 증류수 (20mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 2c 를 수득하였다(94mg, 94%).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.71 (d, J= 2.0MHz, 1H), 7.45 (dd, J= 6.4, 2.0MHz, 1H), 7.17 (d, J= 8.4MHz, 1H), 5.40-5.30 (m, 3H), 5.16-5.14 (m, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.40-4.29 (m, 2H), 4.18 (d, J = 8.8MHz, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.08-2.04 (m, 9H), 1.14-1.09 (m, 2H), 0.08 (s, 9H)
화합물 2d 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 2c (90mg, 0.154mmol)을 DMF (1.0mL)에 용해 시킨 후 비스(4-나이트로페닐)카보네이트 (94mg, 0.308mmol) 및 DIPEA (40uL, 0.231mmol)를 첨가시켰다. 상기 혼합물을 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (50mL) 및 증류수 (20mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 2d 를 수득하였다(104mg, 90%).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.28 (m, 2H), 7.80 (d, J = 2.4MHz, 1H), 7.53 (dd, J= 6.4, 2.0MHz, 1H), 7.37 (m, 2H), 7.20 (d, J= 8.8MHz, 1H), 5.41-5.33 (m, 3H), 5.25 (s, 2H), 5.20-5.18(m, 1H), 4.41-4.30 (m, 2H), 4.20 (d, J = 8.8MHz, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.08-2.05 (m, 9H), 1.18-1.06 (m, 2H), 0.08 (s, 9H)
화합물 2e 의 제조
질소 대기 하 상온에서 화합물 2d (1.5g, 2.00mmol)을 DMF (8mL)에 용해시킨 후 MMAF-OMe (1.34g, 1.80mmol)을 첨가한 다음, 이어서 HOBT (54mg, 0.4mmol), 피리딘 (5.4mL) 및 DIPEA (0.383mL, 2.2mmol)로 처리하였다. 상기 혼합물을 상온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (200mL) 및 증류수 (300mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 2e 를 수득하였다(1.7g, 70%).
EI-MS m/z: 1357(M+)
화합물 2f 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 2e (1.7g, 1.253mmol)을 THF (15mL)에 용해시킨 후 테트라부틸암모늄플루오라이드 (1M in THF) (2.5mL, 2.506mmol)를 첨가하고, 상온에서 4시간동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (200mL) 및 증류수 (300mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 2f 를 수득하였다(1.34g, 85%).
EI-MS m/z: 1257(M+)
화합물 2k 의 제조
질소 대기 하 상온에서 화합물 2j (10g, 59.3mmol)를 DMF (90mL)에 용해시킨 후 소듐 아자이드 (5.78g, 88.9mmol)를 첨가하고 상기 혼합물을 100℃에서 13시간동안 교반하였다. 반응을 완료한 후 클로로폼 (200mL)과 증류수 (300mL)를 첨가한 후 추출하여 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 2k 를 수득하였다(10.3g, 99%).
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 3.75-3.73 (m, 2H), 3.70-3.68 (m, 6H), 3.63-3.61 (m, 2H), 3.40 (t, J = 5.4MHz, 2H), 2.20 (t, J = 6.0MHz, 1H)
화합물 2l 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 CBr4 (21.4g, 64.6mmol)를 MC (100mL)에 용해시킨 후 MC(100ml)에 용해시킨 트리페닐포스핀 (16.9g, 64.6mmol)과 화합물2 k (10.3g, 58.7mmol)을 첨가하고, 상기 혼합물을 상온에서 13시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후 MC (300mL)와 증류수 (300mL) 를 첨가한 후 추출하여 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 2l 를 수득하였다(12g, 85%).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 3.83 (t, J = 6.4MHz, 2H), 3.72-3.67 (m, 6H), 3.48 (t, J = 6.0MHz, 2H), 3.40 (t, J = 4.8MHz, 2H)
화합물 2m 의 제조
질소 대기 하 상온에서 화합물 2l (1g, 4.20mmol)를 아세토나이트릴에 용해시킨 후 N-Boc-하이드록시아민 (643mg, 4.82mmol)과 DBU (0.659mL, 4.41mmol )를 첨가하고 상기 혼합물을 60℃에서 13시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후 MC (300mL)와 증류수 (300mL)를 첨가한 후 추출하여 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 2m을 수득하였다(748mg, 70%).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.55 (s, 1H), 4.05-4.03 (m, 2H), 3.76-3.74 (m, 2H), 3.74-3.69 (m, 6H), 3.42 (t, J = 4.8MHz, 2H), 1.49 (s, 9H). EI-MS m/z: 291(M+)
화합물 2n 의 제조
화합물 2m (200mg, 0.688mmol)을 메탄올 (5mL)에 용해시킨 후 Pd/C(10%) (70mg)를 첨가하여 수소 대기 하에 3시간 교반하였다. 반응을 완료한 후 상기 혼합물을 셀라이트필터하여 감압 하에 농축시켜 화합물 2n을 수득하였다(180mg, 98%).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 4.04-4.01 (m, 2H), 3.74-3.62 (m, 7H), 3.55 (t, J = 5.2MHz, 1H), 2.88 (t, J = 5.2MHz, 1H), 2.81 (t, J = 5.2MHz, 1H), 1.64 (s, 2H), 1.48 (s, 9H). EI-MS m/z: 265(M+)
화합물 2g 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 2f (1.34g, 1.066mmol) 및 화합물 2n (384mg, 1.28mmol)을 DMF (10mL)에 용해시킨 후 DIPEA (464㎕, 2.665mmol) 및 PyBOP (832mg, 1.599mmol)을 첨가한 다음, 상온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (200mL) 및 증류수 (300mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 2g 를 수득하였다(1.2g, 75%).
EI-MS m/z: 1503(M+)
화합물 2h 의 제조
질소 대기 하 -10℃에서 화합물 2g (530mg, 0.352mmol)을 메탄올 (10mL)에 용해시킨 후 물 (8mL)에 용해된 LiOH (147mg, 7.98mmol)를 서서히 첨가하고, 1시간동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 클로로폼 (200mL) 및 증류수 (30mL, pH2)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 2h 를 수득하였다(260mg, 45%).
EI-MS m/z: 1349(M+)
화합물 2i 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 2h (260mg, 0.192mmol)을 메틸렌클로라이드 (4mL) 및 물 (2mL)에 용해시킨 후 4M-HCl (in dioxane, 4mL)를 첨가하고, 0℃에서 1시간동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 감압 하에 농축시켜 화합물 2i 를 수득하였다(210mg, 85%).
EI-MS m/z: 1249(M+)
화합물 3k 의 제조
질소 대기 하 상온에서 2-브로모에탄올 (1.92mL, 27.037mmol)를 아세토나이트릴 (15mL)에 용해시킨 후 Boc-하이드록시아민 (3.0g, 22.531mmol)과 DBU (3.7mL, 24.8mmol)를 첨가하고 상기 혼합물을 40℃에서 24시간동안 교반하였다. 반응을 완료한 후 에틸아세테이트 (100mL)과 증류수 (100mL)를 첨가한 후 추출하여 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 3k를 수득하였다(2.75g, 69%).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.28 (s, 1H), 3.93-3.91 (m, 2H), 3.76-3.74 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).
화합물 3l 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 3k (2.75g, 15.697mmol)를 THF (30mL)에 용해시킨 후 TEA (3.3mL, 23.518mmol)와 Ms2O (3.28g, 18.814mmol)를 첨가하고 상기 혼합물을 상온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후 에틸아세테이트 (200mL)와 증류수 (100mL)를 첨가한 후 추출하여 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 감압하에 농축시켜 화합물 3l를 수득하였다(3.83g, 96%).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.37 (s, 1H), 4.48-4.46 (m, 2H), 4.13-4.09 (m, 2H), 3.11 (s, 3H), 1.50(s, 9H).
화합물 3m 의 제조
질소 대기 하 상온에서 화합물 3l (3.83g, 15.00mmol)를 DMF (20mL)에 용해시킨 후 NaN3 (1.95g, 30.00mmol)를 첨가하고 상기 혼합물을 60℃에서 13시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후 에틸아세테이트 (300mL)와 증류수 (300mL)를 첨가한 후 추출하여 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 3m을 수득하였다(2.02g, 67%).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.22-7.20 (m, 1H), 4.05-4.02 (m, 2H), 3.51-3.48 (m, 2H), 1.50(s, 9H).
화합물 3n 의 제조
화합물 3m (2.02g, 9.98mmol)을 메탄올 (30mL)에 용해시킨 후 Pd/C(10%) (1.0g)과 4M HCl in dioxane (2.5mL)를 첨가하여 수소 대기 하에 3시간 교반하였다. 반응을 완료한 후 상기 혼합물을 셀라이트필터하여 감압 하에 농축시켜 화합물 3n을 수득하였다(1.98g, 93%).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 10.26 (s, 1H), 8.05 (s, 3H), 3.91-3.88 (m, 2H), 3.1-2.98 (m, 2H), 1.44(s, 9H).
화합물 3g 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 2f (280mg, 0.222mmol) 및 화합물 3n (56mg, 0.266mmol)을 DMF (5mL)에 용해시킨 후 DIPEA (58㎕, 0.334mmol) 및 PyBOP (174mg, 0.334mmol)을 첨가한 다음, 상온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (100mL) 및 증류수 (150mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 3g를 수득하였다(221mg, 69%).
EI-MS m/z: 1415(M+)
화합물 3h 의 제조
질소 대기 하 -10℃에서 화합물 3g (150mg, 0.106mmol)을 메탄올 (2mL)에 용해시킨 후 물 (2mL)에 용해된 LiOH (40mg, 0.954mmol)를 서서히 첨가하고, 1시간동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 클로로폼 (150mL) 및 증류수 (30mL,pH2)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 3h 를 수득하였다(94mg, 71%).
EI-MS m/z: 1261(M+)
화합물 3i 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 3h (90mg, 0.071mmol)을 메틸렌클로라이드 (1mL)에 용해 시킨 후 TFA (0.2mL)를 첨가하고, 0℃에서 3시간동안 교반하였다. 반응을 완료한 후 Prep HPLC를 사용하여 정제하여 화합물 3i을 수득하였다(47mg, 52%).
EI-MS m/z: 1161(M+)
[실시예 4] 화합물 4i의 제조
Figure 112015050377967-pat00049
3- 브로모 -5- 포밀살리실산 (화합물 4a )의 제조
질소 대기 하 0℃에서 5-포밀살리실산 (1g, 6.019mmol)을 DMF에 용해시킨 후N-브로모숙신이미드 (1.07g, 6.109mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 70℃에서 3시간동안 교반시켰다. 반응을 완료한 후, 에틸아세테이트 (100mL), 2N-HCl 수용액 (2mL) 및 증류수 (100mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 4a를 수득하였다(1.2g, 84%).
1H NMR (400Hz, DMSO-d6) δ 9.64 (s, 1H), 8.19 (d, J= 2.4MHz, 1H), 8.00 (d, J= 2.0MHz, 1H), 3.16 (s, 1H)
제조된 3-브로모-5-포밀살리실산 (화합물 4a)를 이용하여 화합물 4i를 실시예 2 내지 3 의 화합물 2i 및 3i의 제조 과정과 유사한 방법으로 제조하였다.
EI-MS m/z: 1328(M+)
[실시예 5 내지 7] LCB14 -0648, LCB14 -0664 및 LCB14 -0663의 제조
Figure 112015050377967-pat00050
화합물 C는 한국공개특허 제10-2014-0035393호에 기재된 방법으로 제조하였다.
LCB14 -0648의 제조( 실시예 5)
질소 대기 하 상온에서 화합물 2i (20mg, 0.014mmol)을 에탄올 (0.7mL)에 용해시킨 후 화합물 C (3.7mg, 0.017mmol)을 첨가하고 상기 혼합물을 45℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후 Prep HPLC를 이용하여 LCB14-0648을 수득하였다(10.2mg, 49%).
EI-MS m/z: 1441(M+)
LCB14-0663(실시예 6)와 LCB14-0664(실시예 7)은 실시예 5의 LCB14-0648과 유사한 방법으로 제조하였다.
LCB14-0663의 EI-MS m/z: 1520(M+)
LCB14-0664의 EI-MS m/z: 1353(M+)
[비교예 1] 화합물 5k의 제조
Figure 112015050377967-pat00051
화합물 5a 의 제조
질소 대기 하 상온에서 에틸4-브로모부타노에이트 (5.0mL, 34.604mmol)를 MeOH (75mL)에 용해시킨 후 물 (25mL)에 용해된 나트륨 아지드 (4.5g, 69.209mmol)를 첨가하고, 85℃에서 8시간동안 교반시켰다. 반응을 완료한 후, 용매를 감압 하에서 농축시키고, 클로로폼 (300mL) 및 증류수 (200mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 5a를 수득하였다(5.1g, 94%).
1H NMR (600Hz, CDCl3) δ 4.15 (q, J = 7.2MHz, 2H), 3.36 (t, J = 7.2MHz, 2H), 2.41 (t, J = 7.2MHz, 2H), 1.94-1.89 (m, 2H), 1.28 (t, J = 8.4MHz, 3H).
화합물 5b 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 5a (2.0g, 12.725mmol)을 MeOH (32mL)에 용해시킨 후 물 (26mL)에 용해된 KOH (3.56g, 63.625mmol)를 첨가하고, 상온에서 6시간동안 교반시켰다. 반응을 완료한 후, 용매를 감압 하에서 농축시키고, 클로로폼 (300mL), 1N HCl (100mL) 및 증류수 (100mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 5b를 수득하였다(1.28g, 78%).
1H NMR (600Hz, CDCl3) δ 3.38 (t, J = 7.2MHz, 2H), 2.48 (t, J = 7.2MHz, 2H), 1.95-1.90 (m, 2H).
화합물 5c 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 5b (850mg, 6.580mmol)을 MeOH (10mL)에 용해시킨 후 옥사릴 클로라이드 (1.1mL, 13.160mmol) 및 DMF (1drop)를 첨가하고, 상온에서 6시간동안 교반시켰다. 반응을 완료한 후, 용매를 감압 하에서 농축시켜 조 생성물인 화합물 5c (965mg, Qu)를 정제 없이 다음 반응에 이용하였다.
화합물 5d 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 4-하이드록시-3-나이트로벤조산 (5g, 27.304mmol)을 THF (120mL)에 용해시킨 후 1M BH3-THF 착체 (54.6mL, 54.6mmol)를 첨가하고, 상온에서 20시간동안 교반시켰다. 반응을 완료한 후, 에틸아세테이트 (200mL), 0.5N HCl (20mL) 및 증류수 (100mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 5d 를 수득하였다(4.20g, 91%).
1H NMR (600Hz, CD3OD) δ 8.06 (d, J = 1.2MHz, 1H), 7.59 (dd, J= 1.2, 7.8MHz, 1H), 7.12 (d, J= 8.4MHz, 1H), 4.83 (s, 2H).
화합물 5e 의 제조
질소 대기 하 상온에서 화합물 5d (937mg, 5.539mmol)을 아세토나이트릴 (15mL)에 용해시킨 후 화합물 5c (2.0g, 5.035mmol), 산화은 (4.66g, 20.108mmol) 및 분자체 (2.0g)를 첨가하고, 상온에서 14시간동안 교반시켰다. 반응을 완료한 후, 상기 혼합물을 셀라이트 필터하고, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 5e 를 수득하였다(1.0g, 40%).
1H NMR (600Hz, CDCl3) δ 7.81 (d, J = 1.8MHz, 1H), 7.54 (dd, J= 1.8, 6.6MHz, 1H), 7.37 (d, J= 8.4MHz, 1H), 5.37-5.27 (m, 3H), 5.20 (d, J= 6.6MHz, 1H), 4.72 (d, J = 6.0MHz, 2H), 4.21 (d, J = 9.0MHz, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.04-2.02 (m, 1H).
화합물 5f 의 제조
화합물 5e (900mg, 6.35 mmol)를 에틸아세테이트 (100mL)에 용해시킨 다음, 백금(IV) 산화물 (84.2mg, 0.370mmol)을 첨가하고, 수소 대기 하 상온에서 3시간동안 교반시켰다. 반응을 완료한 후, 상기 혼합물을 셀라이트 필터하고, 여액을 감압 하에 농축시켜 조 생성물인 화합물 5f (700mg, 83%)를 정제 없이 다음 반응에 이용하였다.
화합물 5g 의 제조
질소 대기 하 0℃ 화합물 5f (350mg, 0.768mmol)을 MC (10mL)에 용해시킨 후 화합물 5c (136mg, 0.921mmol) 및 DIPEA (268ul, 1.536mmol)를 첨가하고, 상온에서 20분동안 교반시켰다. 반응을 완료한 후, 에틸아세테이트 (50mL) 및 증류수 (50mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 5g를 수득하였다(280mg, 65%).
1H NMR (600Hz, CDCl3) δ 8.37 (d, J = 1.2MHz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.07 (dd, J= 1.8, 6.6MHz, 1H), 6.93 (d, J= 8.4MHz, 1H), 5.43-5.28 (m, 3H), 5.06 (d, J= 7.8MHz, 1H), 4.63 (s, 2H), 4.19 (d, J = 9.6MHz, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.44-3.41 (m, 2H), 2.56 (t, J = 7.8MHz, 2H), 2.17-2.00 (m, 12H). EI-MS m/z: 567(M+)
화합물 5h 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 5g (250mg, 0.441mmol)을 DMF (4mL)에 용해시킨 후 비스(4-나이트로페닐)카보네이트 (270mg, 0.882mmol) 및 DIPEA (115ul, 0.661mmol)를 첨가하고, 상온에서 1시간동안 교반시켰다. 반응을 완료한 후, 에틸아세테이트 (50mL) 및 증류수 (50mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 5h를 수득하였다(290mg, 90%).
1H NMR (600Hz, CDCl3) δ 8.54 (d, J = 1.8MHz, 1H), 8.28-8.25 (m, 2H), 8.02 (s, 1H), 7.40-7.36 (m, 2H), 7.11 (dd, J= 1.8, 6.6MHz, 1H), 6.96 (d, J= 8.4MHz, 1H), 5.44-5.29 (m, 3H), 5.23 (s, 2H), 5.10 (d, J= 7.8MHz, 1H), 4.21 (d, J = 9.6MHz, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.45-3.42 (m, 2H), 2.58 (t, J = 7.2MHz, 2H), 2.11-2.00 (m, 12H). EI-MS m/z: 732(M+)
화합물 5i 의 제조
질소 대기 하 상온에서 화합물 5h (250mg, 0.341mmol)을 DMF (4mL)에 용해시킨 후 MMAF-OMe (255mg, 0.341mmol)을 첨가한 다음, 이어서 HOBT (9mg, 0.068mmol), 피리딘 (1.2mL) 및 DIPEA (60ul, 0.341mmol)로 처리하였다. 수득한 혼합물을 상온에서 2일 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (50mL), 2N HCl (5mL) 및 증류수 (50mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 5i를 수득하였다(340mg, 74%).
EI-MS m/z: 1339(M+)
화합물 5j 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 5i (210mg, 0.156mmol)을 메탄올 (2mL)에 용해시킨 후 물 (2mL)에 용해된 LiOH·H2O (66mg, 1.560mmol)을 첨가하였다. 수득한 혼합물을 상온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 클로로폼 (50mL), 메탄올 (5mL), 증류수 (50mL) 및 0.5N HCl (5mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 5j 를 수득하였다(107mg, 57%).
EI-MS m/z: 1184(M+)
화합물 5k 의 제조
질소 대기 하 상온에서 화합물 5j (10mg, 0.008mmol) 및 페닐아세틸렌 (0.92ul, 0.008mmol)을 에탄올 (150ul) 및 물 (10ul)에 용해시킨 후 0.1M CuSO4 수용액 (10ul) 및 1.0M 소듐 아스코베이트 수용액 (10ul)을 첨가하였다. 수득한 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (10mL) 및 증류수 (5mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 5k 를 수득하였다(5mg, 46%).
EI-MS m/z: 1286(M+)
[실시예 8] 화합물 6e의 제조
Figure 112015050377967-pat00052
화합물 6a 의 제조
질소 대기 하 상온에서 화합물 2d (229mg, 0.30mmol)을 DMF (2mL)에 용해시킨 후 MMAE (1.34g, 1.80mmol)을 첨가한 다음, 이어서 HOBt (8.2mg, 0.06mmol), 피리딘 (0.8mL) 및 DIPEA (56㎕, 0.29mmol)로 처리하였다. 상기 혼합물을 상온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (100mL) 및 증류수 (100mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 6a 를 수득하였다(239mg, 65%).
EI-MS m/z: 1328(M+)
화합물 6b 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 6a (239mg, 0.18mmol)을 THF (5mL)에 용해시킨 후 테트라부틸암모늄플루오라이드 (1M in THF) (540㎕, 2.50.58mol)를 첨가하고, 상온에서 3시간동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 메틸렌클로라이드 (100mL) 및 증류수 (100mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 6b 를 수득하였다(212mg, 95%).
EI-MS m/z: 1228(M+)
화합물 6c 의 제조
질소 대기 하 0℃에서 화합물 6b (200mg, 0.16mmol) 및 화합물 2n (51mg, 0.19mmol)을 DMF (4mL)에 용해시킨 후 DIPEA (42㎕, 0.32mmol) 및 PyBOP (126mg, 0.24mmol)을 첨가한 다음, 상온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 에틸 아세테이트 (100mL) 및 증류수 (100mL)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 6c 를 수득하였다(142mg, 60%).
EI-MS m/z: 1474(M+)
화합물 6d 의 제조
질소 대기 하 -20℃에서 화합물 6c (142mg, 0.09mmol)을 메탄올 (2mL)에 용해시킨 후 물 (2mL)에 용해된 LiOH (36mg, 0.86mmol)를 서서히 첨가하고, 1시간동안 0℃에서 교반하였다. 반응을 완료한 후, 클로로폼 (100mL) 및 증류수(50mL) 및 2N-HCl 수용액(2ml)를 가하였다. 이렇게 수득한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 추가 정제없이 다음 반응에 사용하였다 (6d, 128mg, 99%).
EI-MS m/z: 1334(M+)
화합물 6e 의 제조
질소 대기 하 -20℃에서 화합물 6d (105mg, 0.08mmol)를 메틸렌클로라이드 (3mL)에 용해시킨 후 4M-HCl (in dioxane, 1mL)를 첨가하고, 0℃에서 1시간동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 preparative HPLC를 이용해 정제하여 화합물 6e를 수득하였다 (47mg, 46%).
EI-MS m/z: 1234(M+)
[실험예 1] β- 글루쿠로니데이즈(β-glucuronidase) 반응성 비교 시험
실시예 1의 화합물 1k와 비교예 1의 화합물 5k의 β-글루쿠로니데이즈(β-glucuronidase)에 대한 반응성을 비교하기 위하여 하기와 같이 비교 시험을 실시하였다.
실시예 1의 화합 물1k 및 비교예 1의 화합물 5k은 각각 500μM 및 50μM DMSO 스탁(stock) 용액으로 제조한 후 사용하였다. PBS(Phosphate buffer saline) 완충용액 880 μL와 화합물 1k 및 화합물 5k 스탁 용액 100 μL를 각각 혼합한 반응액(최종농도는 각각 50, 5 μM)을 제조하였다. 상기 반응액에 1mg/ml의 E. coli β-glucuronidase 효소(Sigma: E.C.3.2.1.31 Type IX-A; 1mg/mL in PBS; 3.6μg, 13μmol)를 20 μL 첨가한후 37℃ 항온수조에서 반응을 개시하였다. 0min, 25min, 60min, 90min에 각각 100 μL씩 분주하여 아세토나이트릴 200 μL를 첨가하였다. 상기 혼합물시료를 원심분리(4℃, 15분, 14000 rpm)하여 얻은 상등액은 LC-MS/MS로 유리된 MMAF 를 정량 분석하였다 (US2012-0107332와 유사한 방법으로 실험을 진행하였다).
상기 시험결과를 도 2에 도시하였으며, 도 2로부터 실시예 1의 화합물 1k와 비교예 1의 화합물 5k 각각으로부터 β-글루쿠로니다아제에 의한 효소(enzyme)반응 후 1,6-제거반응을 통하여 MMAF가 상당히 빠른 속도로 방출됨을 확인할 수 있었다. (ref. US2012-0107332)
[실험예 2] 플라즈마 안정성 (Plasma Stability) 비교 시험
실시예 1의 화합물 1k와 비교예 1의 화합물 5k의 마우스 내 플라즈마 안정성을 비교하기 위하여 하기와 같이 비교 시험을 실시하였다.
DMSO에 5mM이 되게 녹인 화합물 1k와 화합물 5k 용액 10 μL와 공혈장 990 μL 를 각각 혼합하여 50μM 농도의 혈장내 안정성 확인시료를 제조하였다. 상기 화합물을 섞은 혈장액은 37℃ 에서 6일간 반응시켰다. 6일간 반응시키는 동안 각시간대별 (0, 1, 2, 3, 6일차)로 100 μL씩 소분하여 반응 종료 혈장단백질 침전을 위해 내부표준물질을 포함하고 있는 아세토나이트릴 200 μL와 혼합하였다. 상기 혼합물시료를 원심분리(4℃, 15분, 14000 rpm)하여 얻은 상등액은 LC-MS/MS로 정량 분석하였다(Journal of Chromatography B, 780 (2002) 451-457와 유사한 방법으로 실험을 진행하였다).
LC-Ms/Ms를 이용하여 각각 실시예 1의 화합물 1k와 비교예 1의 화합물 5k의 함량을 확인한 결과를 도 3 및 표 1에 도시 및 기재하였으며, 이로부터 비교예 1의 화합물 5k는 1일차에 14%, 실시예 1의 화합물 1k는 80%로, 실시예 1의 화합물 1k는 비교예 1의 화합물 5k 보다 마우스 플라즈마(mouse plasma) 내에서의 안정성이 매우 우수한 것으로 나타났다.
실시예 1의 화합물 1k 비교예 1의 화합물 5k
링커 글루쿠로나이드 글루쿠로나이드
플라즈마 안정성
(in mouse)		 80% 안정성
(@7days)		 14% 안정성
(@1day)
결과 안정 불안정
[실험예 3] 플라즈마 안정성 (Plasma Stability) 시험
실시예 5 내지 7에서 제조된 화합물 LCB14-0648 (실시예 5), LCB14-0664 (실시예 6) 및 LCB14-0663 (실시예 7)을 이용하여 여러 다양한 플라즈마 내에서의 안정성을 알아보기 위해 상기 실험예 2와 동일한 방법으로 플라즈마 안정성 테트스를 실시하여 그 결과를 도 4 내지 6에 도시하였다.
실시예 5 내지 7에서 제조된 화합물 LCB14-0648 (실시예 5), LCB14-0664 (실시예 6) 및 LCB14-0663 (실시예 7) 모두 마우스(mouse), 랫드(rat), 개(dog) 및 인간(human) 플라즈마에서 7일차까지 안정함을 확인하였다.
실시예 9 및 실시예 11 :항체 -약물 접합체(Antibody-drug conjugate, ADC )의 제조
[실시예 9] Herceptin(LC)-glucuronide linker-MMAF (이하, 'LCB14-0109' 또는 'ADC109'라 함)의 제조
Figure 112016026393565-pat00099
LCB14-0109는 US2012/0308584에서 기재된 방법을 이용하여 LCB14-0105와 유사한 방법으로 제조되었다.
[실시예 10] Herceptin(LC)-glucuronide linker-MMAF (이하, 'LCB14-0110' 또는 'ADC110' 이라 함)의 제조[도 7]
Figure 112016026393565-pat00100
LCB14-0606은 한국공개특허 제10-2014-0035393호에 기재된 방법으로 제조하였다.
Step 1 ( prenylated antibody, D) US2012/0308584에 기재된 substrate(D) 제조
항체의 프레닐레이션 반응 혼합물을 제조하여 30℃ 에서 12시간 반응하였다. 반응혼합물은 24 μM 항체, 200nM FTase (Calbiochem #344145)와 1mM LCB14-0606(in house, US2012/0308584)을 포함하는 완충용액 (50 mM Tris-HCl (pH7.4), 5 mM MgCl2, 10 μM ZnCl2, 5 mM DTT)으로 구성하였다. 반응종료후 프레닐레이션된 항체는 PBS 완충용액으로 평형화된 G25 Sepharose 컬럼 AKTA purifier, GE healthcare)으로 제염시켰다. 프레닐레이션된 항체 (최종농도 12 μM)는 1mM CuSO4를 처리하여 30℃에서 3시간 반응하여 재산화(reoxidation)시켰다. 반응종료후 2mM(최종농도) EDTA를 가하여 30℃에서 약하게 교반하며 30분 방치하였다. 반응에 사용된 과량의 small molecule을 제거하기 위해 FPLC로 제염하였다.
Step 2 ( LCB14 -0110 제조방법)
프레닐레이션된 항체(A)와 톡신(3l)간의 옥심본드 생성반응 혼합물은 100mM Na-acetate buffer pH 4.5,10% DMSO, 12μM 항체와 360μM LCB14-0645 (in house)을 섞어 제조하였으며 30℃ 에서 약하게 교반하였다. 24시간 반응후에 사용된 과량의 small molecule을 제거하기 위해 FPLC(AKTA purifier, GE healthcare) 과정을 거쳐 사용된 과량의 small molecule을 제거하였으며 단백질 분획은 수집하여 농축하였다.
[실시예 11] Herceptin(LC)-glucuronide linker-MMAE (이하, 'LCB14-0113' 또는 'ADC113' 이라 함)의 제조
Figure 112015050377967-pat00055
제조된 화합물 6e를 이용하여 LCB14-0113 (ADC113)을 실시예 10의 제조 과정과 유사한 방법으로 제조하였다.
[실험예 4] ADC의 플라즈마 안정성 (Plasma Stability) 시험
상기 실험예 2에서의 실시예 1의 화합물 1k와 비교예 1의 화합물 5k를 이용한 모델 스터디를 통하여 LCB-SI(실시예 1의 화합물 1k)가 SG-SI(비교예 1의 화합물 5k) 보다 플라즈마 내에서 안정하다는 결과를 토대로 항체와 약물을 결합시킨 ADC(실시예 9에서 제조된 LCB14-0109(ADC109), 실시예 10에서 제조된 LCB14-0110(ADC110))에서의 안정성 결과를 비교하고자 하였다.
이렇게 제조된 ADC(실시예 9에서 제조된 LCB14-0109(ADC109), 실시예 10에서 제조된 LCB14-0110(ADC110))는 아래와 같은 방법으로 플라즈마 안정성을 평가하였으며, 그 결과를 도 8및 도 9에 도시하였다.
(ADC 플라즈마 안정성 실험 방법)
ADC를 blank plasma에 0.5mg/ml 농도 (MMAF 농도: 6.8μM)로 조제하고 37℃에서 incubation하였다. 시료는 0, 1, 2 및 7일차에 50μl씩 aliquot하고, 분석 전까지 -70℃에 보관하였다. 시료에서 released toxin (free MMAF)의 양을 측정하여 ADC plasma stability를 평가하였다.
(LC-MS/MS에 의한 안정성 분석)
MMAF 원액은 20mM 농도로 DMSO에 조제하고, 0.02, 0.04, 0.2, 0.4, 2, 4, 20, 40, 80μM 농도의 MMAF 표준용액은 아세토나이트릴로 희석하여 조제하였다. 각각의 MMAF 표준용액은 blank plasma로 20배 희석하여 검량선 시료로 사용하였다.
검량선 및 stability 시료 50μl에 internal standard (0.2μM MMAE)를 포함한 아세토나이트릴 100μl를 첨가 및 혼합한 후 원심분리하였다. 상층 80μl를 취해 이동상 A 80μl로 혼합하고 LC-MS/MS로 분석하였다. LC-MS/MS는 1200 HPLC (Agilent Technologies), API4000 (AB SCIEX)과 Analyst software (Version 1.6.1)를 사용하였다. 시료 5μl를 ODP2 HP-2D (2 ⅹ 150mm, 5μm, Shodex) 컬럼에 주입하고, 1mM Ammonium formate (이동상 A, 40%)와 90% Acetonitrile in 0.1% formic acid (이동상 B, 60%)의 조성으로 분리하였다. MMAF는 ESI + mode에서 m/z 732.6/170.1 (parent/daughter ion)로 측정하였다.
본 발명의 실시예 9에서 제조된 ADC, LCB14-0109(ADC109)는 7일차에서도 0.5% 미만으로 매우 안정적인 실험 결과를 보였다. 또한, 본 발명의 실시예 10에서 제조된 ADC, LCB14-0110(ADC110)의 반감기(Half-life)는 7일 이상 (mouse, rat, dog, human plasma)으로 매우 안정적임을 알 수 있었다.
[실험예 5] ADC의 항증식 분석(Anti-proliferation assay)
하기 표 2에 기재된 항체, 약물 및 ADC의 암세포주에 대한 세포증식억제 활성을 측정하였다.
암세포주로 시판 중인 사람 유방암 세포주 MCF-7(HER2 음성 내지 정상) 및 SK-Br3(HER2 양성) 및 시판중인 사람 난소암 세포주 SK-OV3(HER2 양성)을 사용하였다. 약물로서, MMAF를 사용하였다. 항체로서, 시판 중인 허셉틴-G7-CVIM(LC) 및 허셉틴-G7-CVIM(HC)를 사용하였다. ADC로서, 실시예 8의 LCB14-0109 (ADC109) 및 실시예 9의 LCB14-0110 (ADC110)를 사용하였다.
96-웰 플레이트에 각 암세포주를 웰(well)당 10,000개씩 파종(seeding)하여 24시간동안 배양한 뒤에 항체와 ADC는 0.01563~2μg/ml(2배 연속 희석), 약물은 4~500nM(2배 연속 희석) 농도로 처리하였다. 72시간 뒤에 살아있는 세포수를 SRB(Sulforhodamine B)염료를 사용하여 정량하였다.
IC 50 ( μg /ml )
유방암세포주
MCF -7 		난소암세포주
SK-OV3 		유방암세포주
SK- Br3
약물 MMAF (nM ) 142.4 227.0 135.7
항체 Herceptin-G7-CVIM(LC) 1.54 >2 1.98
Herceptin-G7-CVIM(HC) >2 >2 1.53
ADC 실시예 9의 LCB14-0109 (ADC109) >2 >2 0.078
실시예 10의 LCB14-0110 (ADC110) >2 0.315 0.14
항체-약물 복합체인 LCB14-0109(ADC109)와 LCB14-0110(ADC110)의 경우 SK-Br3에서 항체 대비 10배 이상 좋은 효능을 보이고 있어 항체 자체보다 그 효능이 우수함을 확인할 수 있었다.
[실험예 6] 생체 내 효능 평가(in vivo efficacy)
LCB14 -0109( ADC109 ) 및 LCB14 -0110( ADC110 )의 생체 내 항종양 효능 평가( in vivo anti-tumor efficacy)
동소이식 모델(Orthotopic model)을 이용하여 약물을 단회 혹은 반복 투여에 의한 약효평가를 위해 실시하였다.
BT-474 인간 유방암 세포주(human breast carcinoma cell line)은 한국 세포주 은행으로부터 구입하였으며, RPMI 1640 (10% FBS, 1% penicillin/streptomycin)를 사용하여 일정한 온도와 습도가 유지되는 37°C, 5% CO2인큐베이터에서 배양하였다. 실험동물은 Japan SLC로부터 구입한 6주령 암컷 Balb/c-nu mice를 사용하였으며, 1주일간의 순화기간을 거친 후 17b-에스트라디올(estradiol) 펠렛 (1.72mg/pellet, Innovative Research of America, Sarasota, FL)을 피하에 투여하였다. 6일 후 BT474 cell (5x106 cells in 100 μL)을 50% PBS/50% phenol red-free Matrigel (Becton Dickinson Bioscience)에 잘 혼합하여 second mammary fat pad에 injection하여 동소이식 모델(orthotopic model)을 만들었다. 종양 크기(Tumor size)는 일주일에 2회씩 측정하였고, 부피(volume)은 12 [길이(mm)] x [너비(mm)]2로 계산하여 산출하였으며, 세포 주입(cell injection) 3주 후 그룹당 종양 부피(Tumor volume)의 평균 100 mm3 정도 되도록 grouping하여 실험에 사용하였다. Herceptin은 Roche 제품을 구입하여 사용하였고, 다양한 ADC는 자체 생산하여 실험동물에 일주일에 한번 혹은 단회로 꼬리 미정맥에 주사하였다.
1) BT474 유방암 동소이식 모델- QW 복용량(BT474 breast tumor orthotopic model-QW dose, QW= once a week)에 따른 종양 부피 관찰
동물군은 총 5군으로 비히클(Vehicle), 허셉틴(Herceptin) (5mg/kg)과 ADC109 (0.1, 1, 5mg/kg)이며 각 그룹당 11마리씩 사용하였다. 약물의 투여 간격은 일주일에 한번씩 총 3회 꼬리정맥을 통해 투여한 결과, 허셉틴 5mg/kg투여 군은 실험 종료 시점까지 종양 성장(tumor growth)에 대한 부분적 억제(partial inhibition)를 보였고 이 결과는 ADC109 1mg/kg 투여군과 유사하였다. 반면, ADC109 5mg/kg 투여군은 첫 투여 4일 후부터 종양 성장 억제(tumor growth inhibition)에 대한 반응을 시작하여 2주의 실험기간 내에 종양 퇴행(tumor regression)을 시켰다[도 10].
2) BT474 유방암 동소이식 모델에서 ADC109 투여량에 따른 체중 변화 관찰(Body weight change of LCB14 -0109 in BT474 orthotopic model)
상기 1)과 동일한 방법으로 약물을 투여하여 ADC109 투여량에 따른 체중변화를 관찰하였으며, 모든 실험기간 동안 관찰된 체중 변화가 관찰되지 않았으며 그 결과를 하기 표 3에 도시하였다.
체중(Body weight) 변화
실험 기간
1일차 4일차 7일차 10일차 14일차 17일차 21일차
비히클(Vehicle) 20.8 21.7 22.2 21.9 21.7 21.3 22.0
허셉틴(Herceptin) (5mg/kg) 20.7 22.1 22.1 21.9 21.1 21.4 22.5
ADC109 (0.1mg/kg) 20.9 22.3 22.8 22.4 22.8 21.0 23.1
ADC109 (1mg/kg) 20.8 21.3 21.9 22.1 21.9 22.9 21.8
ADC109 (5mg/kg) 20.6 21.2 21.9 21.8 21.5 22.2 21.5
3) 반복 투여(multi-dose administration)에 따른 약효 평가
허셉틴(Herceptin), ADC109 및 ADC110을 Her2(Human Epidermal growth factor Receptor 2)-양성 인간 유방암 동소이식 모델(positive human breast cancer orthotopic model)에서 반복투여에 의한 약효 평가를 하기 위해 다음과 같이 실시하였다. 동물군은 총 4군으로 비히클(Vehicle), 허셉틴(Herceptin) (5mg/kg), ADC109 (5mg/kg), ADC110 (5mg/kg)이며 각 그룹당 11마리의 BT474 동소이식 마우스(orthotopic mice)를 사용하였으며, 약물의 투여 간격은 일주일에 한번씩 총 4회 꼬리정맥을 통해 투여하였다. 허셉틴(Herceptin) 5mg/kg 투여 군은 실험 종료 시점까지 종양 성장(tumor growth)에 대한 부분적 억제(partial inhibition)를 보인 반면, ADC109와 ADC110은 동일한 양상으로 첫 투여 4일 후부터 약물 반응성을 시작하여 10일 후부터는 완벽하게 종양(tumor)을 퇴행시켰으며 시험종료시점까지 재성장(regrowth)없이 유지 됨을 관찰하였다[도 11]. 모든 실험기간 동안 관찰된 체중 변화 및 사망동물은 본 투여 약물들과는 무관한 변화로 관찰되었다.
4) 단회투여 (single-dose administration)에 따른 약효 평가
허셉틴(Herceptin), ADC0109 및 ADC0110을 Her2-양성 인간 유방암 동소이식 모델에서 단회투여에 의한 약효 평가를 하기 위해 다음과 같이 실시하였다 동물군은 반복투여 모델과 동일하며 각 그룹당 4마리의 BT474 동소이식 마우스를 사용하였으며, 약물의 투여는 실험시작시점에 단회로 꼬리정맥에 투여하였고 총 5주간의 시험기간 동안 추가 약물 투여는 없이 관찰만 수행하였다. ADC109와 ADC110 약물간 종양 성장에 대한 반응은 반복투여 실험결과와 유사하며, 허셉틴(Hercetpin) 투여군의 경우 단회 투여 후 10일 후부터 종양의 재성장현상이 관찰된 반면, ADC109와 ADC110투여군은 시험종료 시점까지 종양 퇴행이 유지되었다[도 12]. 모든 실험기간 동안 관찰된 체중 변화 및 사망동물은 본 투여 약물들과는 무관한 변화로 관찰되었다.
[실험예 7] ADC의 플라즈마 안정성 (Plasma Stability) 시험
실시예 10의 ADC110, 실시예 11의 ADC113 및 Kadcyla에 대하여 아래와 같은 방법으로 플라즈마 안정성을 평가하였으며, 그 결과를 도 13 내지 도 15에 각각 도시하였다.
(ADC의 생체 외(in vitro) 플라즈마 안정성 실험 방법)
PBS를 이용하여 ADC를 1mg/ml 농도로 희석하고, 최종 0.16mg/ml이 되도록 플라즈마와 혼합한다. 37℃에서 배양하고, 정해진 시간(1일, 3일, 5일, 7일)에 시료를 취하여 protein A 마그네틱 비드를 사용하여 혈장 시료에서 항체만을 회수하였다. 30% 아세토나이트릴과 1% 포름산이 포함된 용액으로 마그네틱 비드를 세척하여 얻어진 상등액으로부터 시험 물질을 LC-MS로 분석하고 DAR(Drug-antibody ratio)의 변화를 관찰하였다. 대조 물질인 Kadcyla(T-DM1)은 PBS에서의 안정성 만을 관찰하였다. 그 결과 본 발명의 실시예 10의 ADC110, 실시예 11의 ADC113은 대조 물질인 Kadcyla(T-DM-1)이 PBS상태에서도 불안정한 결과를 보인 것과 달리 매우 안정함을 알 수 있었다.
[실험예 8] 생체 약물동태 (PK) 평가
1) 마우스 생체 내 PK 프로파일 (in vivo mouse PK profile)
허셉틴(Herceptin), ADC109 및 ADC110을 ICR 마우스에 단회 정맥 내 투여 하였을 때 전체 항체(total antibody)의 약물동태학적 거동을 알아보기 위하여 다음과 같이 실시하였다. 시험물질 허셉틴 (G1), ADC109 (G2)와 ADC110 (G3)을 수컷 ICR 마우스에 각각 2.5 mg/kg 용량으로 정맥내 투여하였다. 채혈은 안와정맥에서 헤파린 나트륨(sodium-heparin)으로 코팅된 모세관을 이용하여 정해진 시간(투여후 15분, 1시간, 2시간, 4시간, 6 시간, 1일, 2일, 3일, 7일, 10일, 14일)에 혈액 50 uL 채혈하였다. 채혈한 혈액은 1.5 ml PE 튜브 (Denvil, USA)에 옮긴 후 아이스 배스에 보관후 1시간 이내에 14,000 rpm 으로 5 분간 원심분리하여 얻은 혈장을 취해서 -70 ℃로 설정되어 있는 급속 냉동 저장고(Deep freezer)에 분석 시까지 보관하였다. 마우스 혈장 중 시험물질의 측정은 ELISA 분석법을 이용 내부에서 수행하였다. 약물동태 분석은 Phoenix™ WinNonlin® (ver. 6.3, Pharsight)을 사용하여, 비-구획 분석(non-compartment analysis)에 의해 수행하였고, 도 16의 혈장농도-시간곡선하 면적(AUC), 최고 혈중농도 (Cmax), 반감기(t1/2), 소실률(CL) 및 분포용적(Vss)을 산출하였다.
시험물질 투여 후 마우스 혈장 중 분석물질은 모든 시험군에서 14일까지 검출되었다. 모든 시험군에서 약물동태 파라미터는 군간에 큰 차이 (2배 이상)는 없었다. 다만, 동일 용량을 투여 했지만 ADC109와 ADC110은 허셉틴(Herceptin) 대비 낮은 노출을 보였다. 이러한 결과는 허셉틴(Herceptin)과 달리 ADC109와 ADC110은 항체-약물 콘쥬게이트(antibody-drug conjugates;ADC)이기에 ELISA 분석에 사용한 항-인간(anti-human) IgG (Fab specific 또는 Fc specific) 항체(antibody)와의 결합 친화력의 차이로 기인된다.
시험군 G1 (Herceptin)의 AUCINF은 356.00 day*μg/ml이고, C0 값은 39.20 μg/ml, CL는 7.04 mL/day/Kg, Vss는 186.00 mL/Kg, T1/2 는 18.40 day로 문헌 상의 PK 프로파일(profile)과 유사한 경향을 보였다. 또한 시험군 G2 (ADC109)는 AUCINF, C0, CL, Vss 및 T1/2 값은 각각 235.55 day*μg/ml, 31.56 μg/ml, 11.25 mL/day/Kg, 239.28 mL/Kg 및 15.04 day로, 시험군 G3 (ADC110)의 AUCINF, C0, CL, Vss 및 T1/2 값인 373.60 day*μg/ml, 35.11 μg/ml, 7.49 mL/day/Kg, 326.68 mL/Kg 및 35.72 day 와 함께 시험군 G1 (Herceptin)와 유사하지만 다소 낮은 노출을 보이고 있다.
2) 랫드 (Rat) 생체 내 에서의 약물동태(PK) 시험
허셉틴(Herceptin)과 ADC110을 랫드(Rat)에 단회 정맥 내 투여 하였을 때 시험물질의 약물동태학적 거동을 알아보기 위하여 다음과 같이 실시하였다. 시험물질 허셉틴과 ADC110을 암컷 랫드에 각각 3.0 mg/kg 용량으로 정맥내 투여하였다. 채혈은 경정맥에서 정해진 시간(투여 후3분, 1시간, 3시간, 6 시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 7일, 9일, 14일, 17일, 21일, 28일)에 헤파린(85 IU/mL, 35 uL)이 처리된 1mL(25Gauge) 주사기로 0.4mL의 혈액을 채취하여 micro tube에 넣어 수분 동안 roll mixer 한다음, 14,000rpm으로 5 분간 원심 분리하여 혈장을 분리한다. 분리된 혈장은 micro tube 에 넣어서 분석시까지 초저온 냉동고에 보관한다. 혈장 중 시험물질의 측정은 LC-MS를 이용하였다. 약물동태 분석은 Phoenix™ WinNonlin® (ver. 6.3, Pharsight)을 사용하여, compartment model 2에 의해 수행하였고, 항체와 약물의 비율은 protein A bead를 이용하여 ADC110을 분리 한 다음 LC-MS/MS로 정량하였다. 그 결과를 도 17 내지 도 19에 각각 도시하였다. 또한 표 4의 혈장농도-시간 곡선하 면적(AUC), 최고 혈중농도 (Cmax), 반감기(t1/2), 소실률(CL), 분포 반감기(Alph HL), 배설 반감기(Beta HL), 분포용적(V1) 및 분포용적(Vss)을 산출하였다.
ADC110의 AUC는 684.83 μg*day/mL이고, CL은 4.38 mL/day/Kg, Cmax 값은 92.18 μg/ml, Vss는 43.83 mL/Kg, T1/2는 8.55 day였으며, 허셉틴은 622.87 μg*day/mL이고, CL은 4.87 mL/day/Kg, Cmax 값은 81.70 μg/ml, Vss는 56.53mL/Kg, T1/2는 10.10 day의 결과를 보였다. 허셉틴과 ADC110은 약물동태학적으로 유사한 프로파일을 보임으로써 항체에 약물을 결합한 것이 랫에서의 약물동태에 미치는 영향이 거의 없음을 확인하였다.
랫드(Rat)에서의 ADC110과 허셉틴(Herceptin)의 약물동태
ADC110 Herceptin
AUC (μg*day/mL) 684.83±20.38 622.87±26.45
CL (mL/day/kg) 4.38±0.13 4.87±0.21
Alpha HL (day) 2.45±0.60 2.16±0.50
Beta HL (day) 8.55±1.38 10.10±1.81
Cmax (μg/mL) 92.18±2.13 81.70±2.41
V1 (mL/kg) 32.55±0.75 36.72±1.08
Vss (mL/kg) 43.83±2.6 56.53±4.72
3) 원숭이(Monkey) 생체 내 에서의 약물동태 (PK) 시험
허셉틴(Herceptin)과 ADC110을 원숭이에 단회 정맥 내 투여하였을 때 시험물질의 약물동태학적 거동을 알아보기 위하여 다음과 같이 실시하였다. 시험물질 허셉틴과 ADC110을 암컷 원숭이에 각각 3.0 mg/kg 용량으로 정맥 내 투여하였다. 채혈은 요측피정맥 또는 대퇴정맥에서 정해진 시간(투여 후 30분, 3시간, 7시간, 12 시간, 24시간(2일), 3일, 4일, 5일, 6일, 11일, 15일, 22일, 29일, 36일)에 수행하여 항응고제(EDTA-K2)가 담긴 튜브에 약 1.5mL의 혈액을 채취하여 wet-ice/Kryorack에 보관 후 냉장상태에서 3,000rpm으로 10 분간 원심 분리하여 혈장을 분리한다. 분리된 혈장은 micro tube 에 분주하여 분석시까지 초저온 냉동고에 보관한다. 혈장 중 시험물질의 측정은 LC-MS를 이용하였다. 약물동태 분석은 Phoenix™ WinNonlin® (ver. 6.3, Pharsight)을 사용하여, compartment model 2에 의해 수행하였고, 항체와 약물의 비율은 protein A bead를 이용하여 ADC110을 분리 한 다음 beta glucuronidase를 처리하여 free MMAF를 LC-MS/MS를 사용하여 정량하였다. 각각의 결과는 도 20 내지 도 22에 각각 도시하였다. 표 5의 혈장농도-시간 곡선하 면적(AUC), 최고 혈중농도 (Cmax), 반감기(t1/2), 소실률(CL), 분포 반감기(Alph HL), 배설 반감기(Beta HL), 분포용적(V1) 및 분포용적(Vss)을 산출하였다.
ADC110의 AUC는 965.54 day*μg/mL이고, CL은 3.11 mL/day/Kg, Cmax 값은 117.56 μg/mL, Vss는 55.65 mL/Kg, T1/2 는 12.79 day였으며, 허셉틴은 689.30 day*μg/mL이고, CL은 4.35 mL/day/Kg, Cmax 값은 83.14 μg/mL, Vss는 80.92 mL/Kg, T1/2 는 13.44 day의 결과를 보였다. ADC110이 다소 AUC가 높은 것처럼 나오기는 하였으나 전체적으로 허셉틴과 ADC110은 약물동태학적으로 유사한 프로파일을 보임으로써 항체에 약물을 결합한 것이 원숭이에서의 약물동태에 미치는 영향이 거의 없음을 확인하였다.
원숭이(monkey)에서의 ADC110과 허셉틴(Herceptin)의 약물동태
ADC110 Herceptin
AUC (μg*day/mL) 965.54±33.49 689.30±21.90
CL (mL/day/kg) 3.11±0.11 0.30±0.04
Alpha HL (day) 0.30±0.04 0.41±0.04
Beta HL (day) 12.79±0.68 13.44±0.67
Cmax (μg/mL) 117.56±2.58 83.14±1.43
V1 (mL/kg) 25.52±0.56 36.08±0.62
Vss (mL/kg) 55.65±1.57 80.92±2.17
아래 표 6에 정리된 반감기를 비교시 Kadcyla는 약물이 항체에 결합한 결과, 원래 항체인 허셉틴 대비하여 반감기가 유의미한 수준으로 상당히 감소한 반면, 본 발명의 실시예 10에서 제조된 ADC110은 원래 항체와의 반감기가 동등한 수준으로, 본 발명에 따른 ADC는 원래 항체의 반감기에 미치는 영향이 적음을 나타낸다.
ADC110, 허셉틴 및 Kadcyla의 반감기 비교
반감기(Terminal half-life)(day)
허셉틴(Herceptin) Kadcyla ADC110
랫(rat) 13.4 (3 mpk) 4.9~5.4
(0.3~20 mpk)		 12.8 (3 mpk)
원숭이(monkey) 6 (0.5 mpk)
10.1 (3 mpk)		 1 (0.3 mpk)
5.3 (30 mpk)		 8.6 (3 mpk)
인간(human) 5.8 (4 → 2 mpk) 4 (3.6 mpk) -
도 18과 도 21에 도시된 것처럼 ADC110은 생체의 혈중에서 매우 안정적으로 항체와 MMAF 약물이 잘 붙어 있음을 확인하였는데, 이것은 ADC110이 Kadcyla 대비하여 생체내 효능 평가에서 높은 활성을 나타낸 근보적인 이유라고 할 수 있다. 이러한 안정성은 환자에서의 효과에서도 대조약인 kadcyla보다 좋은 효능을 보일 확률이 높이는데 기여할 것으로 판단된다. 항체에서 떨어져 나온 약물이 검량선 이상으로 검출되지 않음을 확인하였는데(도 19과 도 22), 이 결과는 안전성에 있어서도 대조약물인 Kadcyla 대비하여 우월할 수 있음을 의미한다고 볼 수 있다.

Claims (27)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 자가-희생 기(self-immolative group)를 포함하는 화합물:
    [화학식 1]
    Figure 112016026393565-pat00101

    G는
    Figure 112016026393565-pat00102
    이고, R3는 수소 또는 카르복실 보호기이고, R4는 각각 독립적으로 수소 또는 하이드록시 보호기이고;
    A는 C1-C20 하이드로카빌이거나, 올리고펩티드, 폴리펩티드, 항체, 항원성 폴리펩티드의 단편 및 인공항체(Repebody)로부터 선택되는 단백질이고;
    B는 약물, 독소, 친화성 리간드, 검출용 탐침 또는 이들의 조합이고;
    R'는 수소, C1-C8알킬, C3-C8사이클로알킬, C1-C8알콕시, C1-C8알킬티오, 모노- 또는 다이- C1-C8알킬아미노, C3-C20헤테로아릴 또는 C6-C20아릴이고;
    Z는 수소, C1-C8알킬, 할로겐, 시아노 또는 나이트로이고;
    n은 1 내지 3의 정수이고, n이 2 이상의 정수인 경우 각각의 Z는 서로 동일하거나 상이할 수 있고;
    L은 링커(linker)로 하기 (i) 내지 (iv) 중 적어도 하나를 만족하는 탄소수 1 내지 50의 알킬렌이고;
    (i) 상기 알킬렌은 적어도 하나의 불포화 결합을 포함하고,
    (ii) 상기 알킬렌은 적어도 하나의 헤테로아릴렌을 포함하고,
    (iii) 상기 알킬렌의 탄소원자는 질소(N), 산소(O) 및 황(S)으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자로 치환되고,
    (iv) 상기 알킬렌은 하나 이상의 탄소수 1 내지 20의 알킬로 더 치환된다.
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, C1-C8알킬 또는 C3-C8사이클로알킬이다.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 링커(L)는 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 하기 화학식 A의 이소프레닐 유도체 유닛을 적어도 하나 이상 포함하는 것인 화합물.
    [화학식 A]
    Figure 112015050377967-pat00058
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 제 1항에 있어서,
    상기 링커(L)는 하기 화학식 B, C, D 또는 E로 표시되는 결합 유닛을 포함하는 것인 화합물:
    [화학식 B]
    Figure 112016026393565-pat00059

    [화학식 C]
    Figure 112016026393565-pat00060

    [화학식 D]
    Figure 112016026393565-pat00061

    [화학식 E]
    Figure 112016026393565-pat00062

    상기 L1은 단일결합 또는 탄소수 1 내지 30의 알킬렌이고;
    R11은 수소 또는 탄소수 1 내지 10의 알킬이고;
    L2는 탄소수 1 내지 30의 알킬렌이다.
  9. 제 1항에 있어서,
    상기 링커(L)는 화학식 F 또는 G로 표시되는 연결 유닛을 포함하는 것인 화합물:
    [화학식 F]
    -(CH2)r(V(CH2)p)q-
    [화학식G]
    -(CH2CH2X)w-
    상기 V는 단일결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-이고;
    X는 -O-, C1-C8알킬렌 또는 -NR21-이고;
    R21 내지 R25는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알킬, C1-C6알킬C6-C20아릴 또는 C1-C6알킬C3-C20헤테로아릴이고;
    r은 1 내지 10의 정수이고;
    p는 0 내지 10의 정수이고;
    q는 1 내지 10의 정수이고; 및
    w는 1 내지 10의 정수이다.
  10. 제 1항에 있어서,
    상기 A가 탄소수 1 내지 20의 하이드로카빌인 경우 L은
    Figure 112015050377967-pat00063
    ,
    Figure 112015050377967-pat00064
    또는
    Figure 112015050377967-pat00065
    이고, V는 단일결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-이고, R21 내지 R25는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알킬, C1-C6알킬C6-C20아릴 또는 C1-C6알킬C3-C20헤테로아릴이고, r은 1 내지 10의 정수이고, p는 0 내지 10의 정수이고, q는 1 내지 10의 정수이고, L1은 단일결합인 화합물.
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 제 1항에 있어서,
    상기 단백질은 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 아미노산 모티프를 갖으며, 상기 아미노산 모티프는 CYYX, XXCC, XCXC 또는 CXX이고, C가 시스테인이고, Y가 지방족 아미노산이고, X가 이소프레노이드 트랜스퍼라제의 기질 특이성을 결정하는 아미노산인 화합물.
  14. 제 13항에 있어서,
    상기 단백질과 아미노산 모티프 사이에 아미노산, 올리고펩타이드 또는 폴리펩타이드로 구성된 스페이서 유닛을 더 포함하는 화합물.
  15. 제 13항 또는 제 14항에 있어서,
    상기 단백질은 아미노산 모티프를 통하여 링커(L)에 공유결합되는 것인 화합물.
  16. 제 15항에 있어서,
    상기 아미노산 모티프는 단백질의 C-말단에 공유결합되거나, 단백질의 C-말단에 공유결합되는 적어도 하나의 스페이서 유닛에 공유결합되는 것인 화합물.
  17. 제 16항에 있어서,
    상기 단백질의 C-말단은 항체의 경쇄 또는 중쇄의 것인 화합물.
  18. 제 13항에 있어서,
    상기 이소프레노이드 트랜스퍼라제는 FTase(farnesyl protein transferase) 또는 GGTase(geranylgeranyl transferase)인 화합물.
  19. 제 1항에 있어서,
    상기 항체는 원형 다클론 항체(intact polyclonal antibody), 원형 단일클론 항체(intact monoclonal antibody), 항체 단편(antibody fragment), 단쇄 Fv (scFv) 돌연변이(single chain Fv(scFv) mutant), 다중특이 항체(multispecific antibody), 이중특이 항체(bispecific antibody), 키메라 항체(chimeric antibody), 인간화 항체(humanized antibody), 인간 항체(human antibody), 항체의 항원 결정 부분을 포함하는 융합 단백질(fusion protein comprising an antigen determination portion of an antibody), 및 항원 인식 부위를 포함하는 기타 변형된 면역글로불린 분자(modified immunoglobulin molecule comprising an antigen recognition site)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
  20. 제 19항에 있어서,
    상기 항체는 뮤로모나브-CD3 아브식시마브(Muromonab-CD3 Abciximab), 리툭시마브(Rituximab), 다클리주마브(Daclizumab), 팔리비주마브(Palivizumab), 인플릭시마브(Infliximab), 트라스투주마브(Trastuzumab, herceptin), 에타너셉트(Etanercept), 바실릭시마브(Basiliximab), 겜투주마브(Gemtuzumab), 알렘투주마브(Alemtuzumab), 이브리투모마브(Ibritumomab), 아달리무마브(Adalimumab), 알레파셉트(Alefacept), 오말리주마브(Omalizumab), 에팔리주마브(Efalizumab), 토시투모모브-I131(Tositumomob-I131), 세툭시마브(Cetuximab), 베박시주마브(Bevacizumab), 나탈리주마브(Natalizumab), 라니비주마브(Ranibizumab), 파니투무마브(Panitumumab), 에콜리주마브(Eculizumab), 리로나셉트(Rilonacept), 서톨리주마브 페골(Certolizumab pegol), 로미플로스팀(Romiplostim), AMG-531(Romiplostim), CNTO-148(Golimumab), CNTO-1275(Ustekinumab), ABT-874(Briakinumab), LEA-29Y(Belatacept), 벨리무마브(Belimumab), TACI-Ig(Transmembrane activator and calcium modulator and cyclophilin ligand interactor-immunoglobulin), 2세대 항-CD20(Second generation anti-CD20), ACZ-885(Canakinumab), 토실리주마브(Tocilizumab), 아틀리주마브(Atlizumab), 메폴리주마브(Mepolizumab), 퍼투주마브(Pertuzumab), 휴막스 CD20(Humax CD20; Ofatumumab), 트레멜리무마브(Tremelimumab,CP-675 206), 티실리무마브(Ticilimumab), MDX-010(Ipilimumab), IDEC-114(Galiximab), 이노투주마브(Inotuzumab), 휴막스 EGFR(HuMax EGFR; Zalutumumab), 알리버셉트(Aflibercept; VEGF Trap-Eye), 휴막스-CD4(HuMax-CD4; Zanolimumab), Ala-Ala(hOKT3gamma1), 오테릭시주맙(Otelixizumab; ChAglyCD3; TRX4), 카투막소마브(Catumaxomab), MT-201(Adecatumumab), 프레고보마브(Pregovomab), CH-14.18(Dinutuximab), WX-G250(Girentuximab), AMG-162(Denosumab), AAB-001(Bapineuzumab), 모타비주마브(Motavizumab), MEDI-524(Motavizumab), 에푸마구마브(Efumgumab), 아우로그라브®(Aurograb®), 락시바쿠마브(Raxibacumab), 3세대 항-CD20(Third generation anti-CD20), LY2469298(Ocaratuzumab), 및 벨투주마브(Veltuzumab)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
  21. 제 19항에 있어서,
    상기 항체는 단일클론 항체인 화합물.
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 제 1항에 있어서,
    상기 약물은 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항박테리아제, 항진균제, 구충제 또는 이들의 조합인 화합물.
  26. 제 13항 또는 제 14항에 있어서,
    상기 아미노산 모티프를 갖는 단백질은 A-HC-(G)zCVIM, A-HC-(G)zCVLL, A-LC-(G)zCVIM 및 A-LC-(G)zCVLL로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 A는 항체를 나타내고, HC 는 중쇄를 나타내고, LC 는 경쇄를 나타내고, G는 글리신 유닛을 나타내고, z는 0 내지 20의 정수인 화합물.
  27. 제 26항에 있어서,
    상기 화합물은 하기 구조에서 선택되는 것인 화합물.
    Figure 112015050377967-pat00066

    상기 구조에서,
    Z는 수소, C1-C8알킬, 할로겐, 시아노 또는 나이트로이고;
    X는 -O-, C1-C8알킬렌 또는 -NR21-이고;
    R21은 수소, C1-C6알킬, C1-C6알킬C6-C20아릴 또는 C1-C6알킬C3-C20헤테로아릴이고;
    n은 1 내지 3의 정수이고, n이 2 이상의 정수인 경우 각각의 Z는 서로 동일하거나 상이할 수 있고;
    r은 1 내지 10의 정수이고;
    q는 1 내지 10의 정수이고;
    w는 1 내지 10의 정수이고;
    x는 0 내지 10의 정수이고;
    g는 1 내지 10의 정수이고;
    -S-mAb는 A-HC-(G)zCVIM-, A-HC-(G)zCVLL-, A-LC-(G)zCVIM- 또는 A-LC-(G)zCVLL-이고, A는 항체를 나타내고, HC는 중쇄를 나타내고, LC는 경쇄를 나타내고, G는 글리신 유닛을 나타내고, z는 0 내지 20의 정수이고;
    B는 하기 구조로부터 선택되는 약물이고;
    Figure 112015050377967-pat00067

    Figure 112015050377967-pat00068

    Figure 112015050377967-pat00069

    Figure 112015050377967-pat00070

    Figure 112015050377967-pat00071

    Figure 112015050377967-pat00072

    Figure 112015050377967-pat00073

    Figure 112015050377967-pat00074

    Figure 112015050377967-pat00075

    Figure 112015050377967-pat00076

    y는 1 내지 10의 정수이다.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX393973B (es) * 2011-05-08 2025-03-24 Legochem Biosciences Inc Conjugados de proteína-agente activo y método para su preparación.
KR101628872B1 (ko) 2014-05-28 2016-06-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 자가-희생 기를 포함하는 화합물
WO2017051249A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-cd19 antibody drug conjugates
WO2017051254A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-egfr antibody drug conjugates
KR102847348B1 (ko) 2015-11-25 2025-08-19 주식회사 리가켐바이오사이언스 펩타이드 그룹을 포함하는 접합체 및 이와 관련된 제조방법
AU2016359230B2 (en) 2015-11-25 2020-04-23 Ligachem Biosciences Inc. Conjugates comprising self-immolative groups and methods related thereto
AU2016359235B2 (en) 2015-11-25 2022-09-15 Ligachem Biosciences Inc. Antibody-drug conjugates comprising branched linkers and methods related thereto
PE20231050A1 (es) * 2016-03-02 2023-07-11 Eisai Randd Man Co Ltd Conjugados de anticuerpo y farmaco basados en eribulina y metodos para su uso
KR102085798B1 (ko) 2016-12-28 2020-03-06 주식회사 인투셀 베타-갈락토사이드가 도입된 자가-희생 기를 포함하는 화합물
WO2018124758A2 (ko) * 2016-12-28 2018-07-05 주식회사 인투셀 베타-갈락토사이드가 도입된 자가-희생 기를 포함하는 화합물
KR102127421B1 (ko) 2017-03-21 2020-06-26 주식회사 펩트론 Muc1에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
WO2018174544A2 (ko) 2017-03-21 2018-09-27 주식회사 펩트론 Muc1에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
CA3058360A1 (en) * 2017-03-29 2018-10-04 Legochem Biosciences, Inc. Pyrrolobenzodiazepine dimer prodrug and ligand-linker conjugate compound of the same
WO2018182341A1 (ko) * 2017-03-29 2018-10-04 주식회사 레고켐 바이오사이언스 피롤로벤조디아제핀 이량체 전구체 및 이의 리간드-링커 접합체 화합물
CN120682290A (zh) 2017-07-04 2025-09-23 尹图赛利有限公司 包含可裂解接头的化合物及其用途
WO2019035649A1 (ko) * 2017-08-14 2019-02-21 주식회사 레고켐 바이오사이언스 EGFRvIII에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체
KR102275930B1 (ko) 2018-03-14 2021-07-12 (주)알테오젠 Folr1에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
WO2019212253A1 (ko) 2018-05-02 2019-11-07 사회복지법인 삼성생명공익재단 C-met에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
CN112601555A (zh) * 2018-05-09 2021-04-02 乐高化学生物科学股份有限公司 与抗cd19抗体药物结合物相关的组合物和方法
MX2020012674A (es) 2018-05-29 2021-02-09 Bristol Myers Squibb Co Porciones autoinmolantes modificadas para usarse en profarmacos y conjugados y metodos de uso y fabricacion.
KR20210099658A (ko) * 2019-01-03 2021-08-12 주식회사 인투셀 절단가능 링커를 포함하는 화합물 및 이의 용도
WO2020141459A1 (en) * 2019-01-03 2020-07-09 Intocell, Inc. Compounds comprising cleavable linker and uses thereof
WO2020232247A1 (en) 2019-05-14 2020-11-19 Provention Bio, Inc. Methods and compositions for preventing type 1 diabetes
EP3886946A1 (en) 2019-06-05 2021-10-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Devices and methods for precision dose delivery
KR20210028544A (ko) 2019-09-04 2021-03-12 주식회사 레고켐 바이오사이언스 인간 ror1에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도
JP6704083B1 (ja) 2019-11-22 2020-06-03 東邦チタニウム株式会社 銅粉体とその製造方法
IL298999A (en) 2020-06-11 2023-02-01 Provention Bio Inc Methods and compositions for the prevention of type 1 diabetes
KR20220082775A (ko) 2020-12-10 2022-06-17 주식회사 유틸렉스 항-pd-1 항체 및 이의 용도
CN114716548B (zh) 2021-01-05 2024-11-05 (株)爱恩德生物 抗-fgfr3抗体及其用途
EP4301782A1 (en) 2021-03-05 2024-01-10 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-cd44 antibodies and their uses
JP2024520444A (ja) 2021-05-24 2024-05-24 プロヴェンション・バイオ・インコーポレイテッド １型糖尿病を治療するための方法
US20250101126A1 (en) 2021-08-05 2025-03-27 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-muc4 antibodies and their uses
JP7763948B2 (ja) 2021-11-05 2025-11-04 ソウル ナショナル ユニバーシティ ホスピタル レジスチン特異的抗体及びその用途
GB202203070D0 (en) 2022-03-04 2022-04-20 Iksuda Therapeutics Ltd Anti-canag antibody conjugate
KR102911201B1 (ko) * 2022-03-30 2026-01-13 기초과학연구원 M1 대식세포 표지용 형광 프로브 및 이를 이용한 m1 대식세포 모니터링 시스템
JP2025525296A (ja) 2022-06-27 2025-08-05 トライオール インコーポレイテッド 自壊性基を含む化合物及びそれを含むリガンド－薬物コンジュゲート
KR20240016216A (ko) 2022-07-26 2024-02-06 (주)에임드바이오 항-ror1 항체 및 이의 용도
USD1120314S1 (en) 2022-11-30 2026-03-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Dose delivery device
KR20250169306A (ko) 2023-04-18 2025-12-02 아스트라제네카 아베 절단가능한 링커를 포함하는 접합체
EP4737482A1 (en) 2023-06-27 2026-05-06 Atheon Bio, Inc. Humanized anti-myct1 antibody and use thereof
TW202525344A (zh) 2023-08-15 2025-07-01 瑞典商阿斯特捷利康公司 包含可切割連接子的軛合物
GB202313214D0 (en) 2023-08-30 2023-10-11 Iksuda Therapeutics Ltd Co-administration of antibody-drug conjugate
CN121752572A (zh) 2023-08-31 2026-03-27 匹诺生物股份有限公司 新型喜树碱衍生物及包含其的抗体-药物偶联物
AU2024201132A1 (en) 2023-09-20 2025-04-10 Uci Therapeutics Inc. Anti-mesothelin antibodies and uses thereof
WO2025233682A1 (en) * 2024-05-08 2025-11-13 Ligachem Biosciences Inc. Antibody drug conjugates comprising sting agonists and uses thereof
WO2026078165A1 (en) 2024-10-10 2026-04-16 Astrazeneca Ab Conjugates comprising cleavable linkers
WO2026078620A1 (en) 2024-10-11 2026-04-16 Medimmune Llc Cd22 antibody and drug conjugates and uses thereof

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1011896A (en) 1911-05-10 1911-12-19 Western Electric Co Fuse.
US5112739A (en) 1988-08-02 1992-05-12 Polaroid Corporation Enzyme controlled release system
EP0795334B1 (de) * 1996-03-12 2006-02-01 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Neuartige Prodrugs für die Therapie von Tumoren und entzündlichen Erkrankungen
KR100192328B1 (ko) 1996-04-03 1999-06-15 구본준 양방향 수평전하 전송소자
US6218519B1 (en) 1996-04-12 2001-04-17 Pro-Neuron, Inc. Compounds and methods for the selective treatment of cancer and bacterial infections
JP2001505194A (ja) 1996-11-05 2001-04-17 ブリストル―マイヤーズ・スクイブ・カンパニー 分枝ペプチド・リンカー
US6759509B1 (en) 1996-11-05 2004-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
JP2006510626A (ja) 2002-12-05 2006-03-30 シエーリング アクチエンゲゼルシャフト 増殖疾患の処理における部位特異的供給のためのエポチロン類似体
EP2478912B1 (en) * 2003-11-06 2016-08-31 Seattle Genetics, Inc. Auristatin conjugates with anti-HER2 or anti-CD22 antibodies and their use in therapy
SV2007002227A (es) 2004-09-10 2007-03-20 Wyeth Corp Anticuerpos anti-5t4 humanizados y conjugados anticuerpo anti-5t4/calicheamicina ref. 040000-0317637
DK3248613T3 (da) * 2005-07-18 2022-03-14 Seagen Inc Beta-glucuronid-lægemiddel-linkerkonjugater
BRPI0716808A2 (pt) 2006-09-15 2013-11-05 Enzon Pharmaceuticals Inc Ligantes poliméricos baseados em lisina
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
WO2011066418A1 (en) * 2009-11-25 2011-06-03 Academia Sinica The tumor-selective anti-cancer prodrug bqc-g
FR2960153B1 (fr) 2010-05-20 2012-08-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux bras autoreactifs et prodrogues les comprenant
US9591882B2 (en) * 2010-08-05 2017-03-14 Robert LaGrand Duffin Absorbent sleeve
CN103502990A (zh) 2011-04-29 2014-01-08 惠普发展公司，有限责任合伙企业 用于事件的内存中处理的系统和方法
MX393973B (es) 2011-05-08 2025-03-24 Legochem Biosciences Inc Conjugados de proteína-agente activo y método para su preparación.
CA2850373C (en) * 2011-10-14 2019-07-16 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
EP2800586A1 (en) 2012-01-03 2014-11-12 Invictus Oncology Pvt. Ltd. Ligand-targeted molecules and methods thereof
MX2015012549A (es) 2013-03-15 2016-06-21 Abbvie Deutschland Formulaciones de conjugado anticuerpo anti-egfr-farmaco.
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
NZ758049A (en) 2013-10-15 2024-03-22 Seagen Inc Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
KR102442906B1 (ko) 2013-12-19 2022-09-14 씨젠 인크. 표적화된-약물 컨쥬게이트와 함께 사용되는 메틸렌 카바메이트 링커
EP2913064A1 (en) 2014-02-26 2015-09-02 celares GmbH Branched drug-linker conjugates for the coupling to biological targeting molecules
KR101628872B1 (ko) * 2014-05-28 2016-06-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 자가-희생 기를 포함하는 화합물
TWI751102B (zh) 2014-08-28 2022-01-01 美商奇諾治療有限公司 對ｃｄ１９具專一性之抗體及嵌合抗原受體
FI3900742T3 (fi) 2014-09-11 2024-08-16 Seagen Inc Tertiääristä amiinia sisältävien lääkeaineiden kohdennettu antaminen
CN107207553A (zh) * 2014-12-09 2017-09-26 艾伯维公司 Bcl‑xl抑制性化合物和包括其的抗体药物缀合物
KR20160080832A (ko) 2014-12-29 2016-07-08 주식회사 레고켐 바이오사이언스 리피바디 유도체-약물 복합체, 그 제조방법 및 용도
PT3250237T (pt) 2015-01-30 2021-06-30 Sutro Biopharma Inc Derivados de hemiasterlina para conjugação e terapêutica
WO2017051254A1 (en) * 2015-09-25 2017-03-30 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-egfr antibody drug conjugates
WO2017051249A1 (en) * 2015-09-25 2017-03-30 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-cd19 antibody drug conjugates
MY196631A (en) 2015-10-13 2023-04-24 Eureka Therapeutics Inc Antibody Agents Specific for Human Cd19 and uses Thereof
AU2016359230B2 (en) * 2015-11-25 2020-04-23 Ligachem Biosciences Inc. Conjugates comprising self-immolative groups and methods related thereto
AU2016359235B2 (en) * 2015-11-25 2022-09-15 Ligachem Biosciences Inc. Antibody-drug conjugates comprising branched linkers and methods related thereto
KR102847348B1 (ko) 2015-11-25 2025-08-19 주식회사 리가켐바이오사이언스 펩타이드 그룹을 포함하는 접합체 및 이와 관련된 제조방법
WO2018083535A1 (en) 2016-11-04 2018-05-11 Novimmune Sa Anti-cd19 antibodies and methods of use thereof
CN112601555A (zh) * 2018-05-09 2021-04-02 乐高化学生物科学股份有限公司 与抗cd19抗体药物结合物相关的组合物和方法
EP3936150A4 (en) * 2019-03-06 2023-03-29 LegoChem Biosciences, Inc. ANTIBODY-DRUG CONJUGATES COMPRISING ANTIBODY AGAINST HUMAN DLK1 AND USE THEREOF

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ACS Med. Chem. Lett. 2010. Vol. 1, pp. 277-280.*

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020141923A2 (ko) 2019-01-03 2020-07-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 안전성이 향상된 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물 및 이의 용도
WO2020180121A1 (ko) 2019-03-06 2020-09-10 주식회사 레고켐 바이오사이언스 인간 dlk1에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도
WO2022211508A1 (ko) 2021-03-30 2022-10-06 주식회사 레고켐바이오사이언스 인간 cldn18.2에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도

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