JPS6053033B2 - 新制癌抗生物質マゼスラマイシン及びその製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はストレプトミセス属に属する微生物を培養して
その培養物から採取して得られる新規な制癌抗生物質マ
ゼスラマイシン（Ｍａｚｅｔｈｒａｍｙｃｉｎ）Ａ．．
Ｂ．．Ｃおよびアンヒドロマゼスラマイシン（以下では
、これら新規化合物を総称してマゼスラマイシン化合物
、若しくは単にマゼスラマイシンと言う）に関する。

また、本発明はこれらのマゼスラマイシン化合物の製造
方法に関するものである。本発明者らによれば、昭和４
師１０月、東京都新島の土壌より分離された放線菌であ
つて、ストレプトミセス・チオルテウスと同定されたｒ
！４Ｅ５６１一１４株を培養すると、培養物中にマゼス
ラマイシンが、産生、蓄積され、その培養物からマゼス
ラマイシンを採取することによつて、新規な制癌抗生物
質マゼスラマイシンＡ，．Ｂ．．Ｃおよび（又は）アン
ヒドロマゼスラマイシンを製造し得ることが知見された
。

本発明によるマゼスラマイシンＡ，．Ｂ．ｓＣおよびア
ンヒドロマゼスライシンは下記の化学構造式をもつ化合
物であると認められ、また適宜な溶媒にとかした溶液中
で、下記の反応式に示す如く溶媒化合物と反応し、これ
により相互間で容易に変換する化合物である。

すなわち、マゼスラマイシンＡは非極性溶媒中二で還流
させると脱水してアンヒドロマゼスラマイシンとなる。

また、アンヒドロマゼスラマイシンは含水溶媒中で水と
反応すると、容易にマゼスラマイシンＡに変換する。不
安定なマゼスラマイシンＡまたはアンヒドロマゼスラマ
イシンは、メタ５ノール含有溶液中で、メタノールと反
応すると、容易に安定なマゼスラマイシンＢになり、ま
たエタノール含有溶液中でエタノールと反応すると、安
定なマゼスラマイシンＣとなる。従つて、マゼスラマイ
シン化合物は水性の培養液中では大部分！がマゼスラマ
イシンＡとして存在することが考えられるが、マゼスラ
マイシン化合物の採取のために抽出又は精製する際にア
ルコール性溶媒を使用すると、安定なマゼスラマイシン
ＢまたはマゼスラマイシンＣとして採取することができ
、これが．好ましい。マゼスラマイシンＡｌＢ．．Ｃお
よびアンヒドロマゼスラマイシンは、いずれも細菌、か
び類に抗菌作用を示すと共に、特にマウス白血病Ｌ−１
２１Ｅ胞およびあるいは種の癌細胞の発育を強く抑制す
る制癌抗生物質であり、いずれも、それらの作用に本質
的差異は認められない。従つて、適宜なマゼスラマイシ
ン化合物はそれぞれ同様に制癌剤として用いることがで
きる。従つて、第１の本発明によれば、次の一般式〔式
中・・・Ａ・・・は基−、。

一エン又は基−Ｎ＝ＣＨ一表わす、但しＲは水素原子ま
たは低級アルキル基を示す〕で表わされる化合物である
制癌抗生物質マゼスラマイシン化合物が提供される。一
般式（１）の化合物において・・・Ａ・・・は基Ｋ，Ｌ
ＩＵ工ーであり且つＲが水素原子であるる楊合、この化
合物はマゼスラマイシンＡである。

一般式（１）の化合物において・・・Ａ・・・は基、，
，，上，， であり且つＲがメチル基である場また、一
般式（１）の化合物において・・・Ａ・・・は基−、，
ｊ冫であり且つＲがエチル基である場合、この化合物は
マゼスラマイシンＣである。さらに、一般式（１）の化
合物において・・・Ａ・・・が基−Ｎ＝ＣＨ−である場
合、これはアンヒドロ体であつて次式（■）で表わされ
るアンヒドロマゼスラマイシンである。

本発明に係る新制癌抗生物質マゼスラマイシンの生理化
学的性状は次に示す通りである。

（１）マゼスラマイシンＡは淡黄色粉末、融点１８１〜
１９．３スＣ（分解）、〔α〕邑１＋７３０１（ＣＯ．
Ｏ６２、ジメチルホルムアミド）、紫外部吸収スペクト
ル曲線は第１図に示す通りである。

λ認ξＣＮＴｒＬ，Ｐ（ε）：３２０（肩３４６００）
、３３５（３９４００）である。

臭化カリ錠で測定した赤外部級収スペクトル曲線は第２
図に示すとおりである。元素分析は実験値：Ｃ６２．３
５％、Ｈ５．７２％、Ｎｌ２．８２％、０１８．９９％
、理論値（Ｃｌ７Ｈｌ９Ｎ３Ｏ４）：Ｃ６ｌ．９９％、
Ｈ５．８２％、Ｎｌ２．７６％、０１９．４３％であつ
た。高分解能マススペクトルで分子ピークは認められず
、脱水ピークが認められた。重ジメチルスルホキサイド
溶液で測定した核磁気共鳴スペクトルは、次に述べるマ
ゼスラマイシンＢのそれと比べ、−０ＣＨ３のシグナル
（δ３．４４ｐｐｍ））の消失、δ５．０９ｐｐｍ（シ
ングレット）とδ４．８３ｐｐｍ（タブレット）に新た
なシグナル（１Ｈ）が観察された。

これは、マゼスラマイシンＢにおける−０ＣＨ３基が−
０Ｈ基に変換してエピマーの存在（約５０％）を示す。
（Ｉｉ）マゼスラマイシンＢは黄色針状晶で明確な点を
示さず２４５〜２７０ン付近で分解する。比旋光度は〔
α〕芭３＋９０００（ＣＯ．２、ジメチルホルムアミド
）の値を得た。元素分析は実験値：Ｃ６３．３８％、Ｈ
６．ｌ８％、Ｎｌ２．４Ｏ％、０１８．１９％、理論値
（Ｃｌ８Ｈ２ｌＮ３Ｏ４）：Ｃ６２．９６％、Ｈ６．ｌ
６％、Ｎｌ２．２４％、０１８．６４％である。

メタノール、エタノール、ブタノール、アセトン、酢酸
エチル、アセトニトリル、クロロホルムには溶解するが
、酢酸ブチル、ベンゼン、エチルエーテルには難溶であ
る。呈色反応は、ファストブルーＢ反応でレンガ色に呈
色する。エールリツヒ反応、坂口反応、ランドンースミ
ス反応は陰性である。シリカゲルの薄層上で、約１叫間
放置することにより褐色を呈してくる。シリカゲルの薄
層クロマトグラフィーでクロロホルム−メタノール（１
０：１）の展開系で展関するとＲｆは０．２１である。
紫外部吸収スペクトル曲線（５μＨｍＬ）は第３図に示
すとおりで、アルカリ溶液中では長い波長側へのシフト
が認められる。極大吸収は、１％メタノール溶液中で２
１５ｒｒＬ，μ（ε２５６００）、２３５ｍμ（ε２２
２００）および３３４７ＴＬμ（Ｅ４６ｌＯＯ）である
。０．１Ｎ水酸化ナトリウム含有１％メタノール溶液中
では、２５８７ｎμ（肩ε１７２００）および３５１Ｔ
ｒＬ，μ（ε４３４００）である。

臭化カリ錠で測定したマゼスラマイシンＢの赤外部吸収
スペクトル曲線は第４図に示すとおりであり、３３５０
、３１２０、２９５０、１６６０、１６３０１１６１へ
１５６５、１５１５ｓ１４６飄１４１０、１３７０、１
３４５、１３１５ｓ１２５０、１２２０、１１７へ１１
４５、１０７０、１０２５、９９０ｓ９５５．６９４へ
９１０、羽０、８５＼８２へ７６００一１に主な吸収帯
を有する。重ジメチルスルホキサイド溶液で測定した核
磁気共鳴スペクトルは第５図に示とおりである。マゼス
ラマイシンＢはその紫外部吸収スペクトル、赤外部吸収
スペクトルおよび核磁気共鳴スペクトルから、アンスラ
マイシン（ジャーナル●オブ●アメリカン・ケミカル・
ソサエテイ、８７巻、５７９１頁〜５７９５頁１９６詳
）ときわめて類似の化合物である。核磁気共鳴スペクト
ルにおける２重共鳴法よりアンスラマイシン●メチルエ
ーテルの側鎖であるアクリルアミド部分がＮ−メチル（
Ｅ２．６６ｐｐｍ）化された化合物であると推定される
。さらに、アンスラマイシン●メチルエーテルのマスス
ペクトルに特徴的に見られる脱メタノールピークはマゼ
スラマイシンＢの高分解能マススペクトルにも認められ
、さらにマゼスラマイシンＢの酸加水分解物（１規定塩
酸、加熱還流２時間て加水分解したもの）中に、ガスク
ロマトグラフィーによりメチルアミンが検出されること
から、マゼスラマイシンＡ，．ＢおよびＣはそれぞれ下
記の構造を有することを確認した。マゼスラマイシンＡ
：Ｒ＝Ｈ マゼスラマイシンＢ：Ｒ＝ＣＨ３ マゼスラマイシンＣ：Ｒ＝ーＣＨ２ＣＨ３ｌ（Ｉｉ）マ
ゼスラマイシンＣは淡黄色結晶性粉末で融点２１６〜２
２３マＣ（分解）、〔α〕芭１＋４５００（ＣＯ．Ｏ６
７、ジメチルホルムアミド）。

紫外部吸収スペクトル曲線は第６図に示す通りである。
λ？＾ＩＣＮｗｌ．μ（ ）Ｅ：２１７（２５７００）
、２３５２（肩１９３００）、３３３（４３６００）で
ある。臭化カリ錠で測定した赤外部吸収スペクトル曲線
は第７図に示すとおりである。元素分析は、実験値Ｃ６
３．２５％、Ｈ６．５３、１２．２５％、０１５．８３
％、理論値（Ｃｌ９Ｈ２３Ｎ３Ｏ４）：Ｃ６３．８５％
、Ｈ６．４８％、２Ｎ１１．７６％、０１７．９１％で
あつた。

重ジメチルスルホキサイド溶液で測定した核磁気共鳴ス
ペクトルは、マゼスラマイシンＢのそれと比べ、メチル
基のシグナル（−０ＣＨ２−、δ３．１〜３．６ｐｐｍ
：ーＣＨ３、δ１．１５ｐｐｍ）が観察され５た。（Ｉ
ｖ）アンヒドロマゼスラマイシンは、淡黄色結晶で、融
点２５２〜２６７Ｃ（分解）、〔α〕ｆ＋１９４０５（
ＣＯ．Ｏ５、ジメチルホルムアミド）。

紫外線部吸収スペクトル曲線は第８図に示す通りである
。λ岬ＦＮＷｌ，μ（ε）：２２９（１６１００）、２
３５（肩１５８００）、２９８（肩１９３００）、３１
５（２１８００）、３５２（２１１００）である。臭化
カリ錠で測定した赤外部吸収曲線は第９図に示すとおり
である。元素分析は実験値：Ｃ６５．Ｏ４％、Ｈ６．ｌ
Ｏ％、Ｎｌ３．Ｏ４％、０１６．３８％、理論値（Ｃｌ
７Ｈｌ７Ｎ３Ｏ３）：Ｃ６５．５８％、Ｈ５．５Ｏ％、
Ｎｌ３．５Ｏ％、０１５．４２％であつた。高分解能マ
ススペクトルで分子ピーク（実験値３１１．１２飄計算
値３１１．１２６）が観察された。

重ジメチルスルホキサイド溶液で測定した核磁気共鳴ス
ペクトルはマゼスラマイシンＢのそれと比べ、−０ＣＨ
３のシグナル（δ３．４４ｐｐｍ）が消失し、アゾメチ
ンのシグナル（δ８．１５ｐｐｍ）が観察された。アン
ヒドロマゼスラマイシンは前記の構造を有するマゼスラ
マイシンＡの脱水体であることを確認した。なお、アン
ヒドロマゼスラマイシンをメタノール、エタノール、プ
ロピルアルコール、ブタノール等の低級アルコール中に
溶解すると、紫外部吸収スペクトルの変化より、アルコ
ール付加物となつていることが確認された。

しかし、メタノール、エタノール付加物であるマゼスラ
マイシンＢおよびＣ以外のアルコール付加物は不安定で
、減圧下に加熱（約５０℃）して乾燥すると、アンヒド
ロマゼスラマイシンに戻ることが認められた。マゼスラ
マイシンＡ．．Ｂ．．Ｃならびにアンヒドロマゼスラマ
イシンの各々について、栄養寒天上での種々の供試菌に
対する最低阻止濃度は第１表に示すとおりである。

マゼスラマイシンＡ．．ＢおよびＣのマウスの白血病に
対する治療効果をみるため、マウスの腹腔に１ＣＰ個／
マウスの率でＬ−１２１０細胞を移植後、マゼスラマイ
シンＡ．．Ｂ．．Ｃの各々を腹腔内注射により第２表に
示す投与量で連続１０日間投与すると、第２表に示す様
な延命効果を示した。

但し延命率は次式によつて計算した。

マゼスラマイシンＡ，．ＢＮＣならびにアンヒドロマゼ
スラマイシンの各々の急性毒性は、１０％メタノール水
溶液としてマウス腹腔内に投与した場合に夫々にＬＩ）
５０値が０．８ｍ９１ｋ９である。

本発明によるマゼスラマイシンＡ，．Ｂ．．Ｃおよびア
ンヒドロマゼスラマイシンの間では、これらの生物学的
性質はそれぞれ本質的差異を示さないと認められる。第
２の本発明の要旨によれば、ストレプトミセス属に属す
るマゼスラマイシン化合物生産菌を、栄養源を含有する
培地中て好気的に培養して、その培養物中に次の一般式
（１）〔式中、・・・Ａ・・・は基 、，ｕ上。

又は基−Ｎ＝ＣＨ−を表わす、但しＲは水素原子また
は低級アルキル基を示す〕で表わされるマゼスラマイシ
ン化合物を生産せしめ、培養物からマゼスラマイシン化
合物を採取することを特徴とする、一般式（１）で表わ
される抗生物質マゼスラマイシン化合物の製造法が提供
される。第２の本発明で使用されるマゼスラマイシン化
合物生産菌の一例としては、ストレプトミセス・チオル
テウスＭＥ５６ｌ−１４株がある。

この；ＭＥ５６ｌ−１４株の菌学的性状は次に示すとお
りである。１形態 ＭＥ５６ｌ−１４株は、顕微鏡下で、分枝した基中菌系
より輪生枝をもつた気菌糸を伸長す−るが、螺旋形成は
みとめられない。

成熟した胞子鎖は１帽以上の胞子の連鎖をみとめ、胞子
の大きさは１．０〜１．２×０．４〜０．５ミクロン位
で、胞子の表面は平滑である。２各種培地における生育
状態 色の記載について〔 〕内に示す標準は、コンテイナー
●コーポレーション●オブ●アメリカのカラー●ハーモ
ニー●マニュアルを用いた。

（１）シユクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培．養）
無色の発育上に、白色の気菌糸を着生し、溶解性色素
はみとめられない。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（２ｒＣ培養
） 無色〜うす黄〜にぶ黄〔１卜Ｅ，．Ａｎｔｉｑｕｅ
ＧＯｌｄ〕の発育上に、白〜黄味灰〔１Ｃｂ１Ｐａｒｃ
ｈｍｅｎｔ−２ｃｂ．，Ｉｖ０ｒｙＴｉｎｔ〕の気菌糸
を着生，、溶解性色素はわずかに黄色味をおびる。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ一培
地５．２ｒＣ培養） うす黄〜うす黄茶〔３ｎｇ．．Ｙ
ｅ１１０ｗＭａｐＩｅ〕〜黄茶〔３ｐｉ，．Ｇ０Ｉｄｎ
Ｂｒ０ｗｎ〜４ｐｉ０ａｋＢｒ０ｗＴ１〕の発育上に、
白〜黄味灰〔１ｂａ１Ｙｅ１１０ｗＴｉｎｔ−加、Ｐｅ
ａｒりの気菌糸を着生し、溶解性色素は茶色味を呈する
。

（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ一培地４．２
ｒｃ培養）無色〜うす黄茶０ｍｇ、ＹｅｌｌＯｗＭａｐ
ｌｅ〕の発育上に、白〜黄味灰〔２ｃｂ，．Ｉｖ０ｒｙ
Ｔｉｎｔ〕の気菌糸を着生し、溶解性色素は培養後１５
日目位かられずかに黄色味をおびる。

（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ一培地７、２ｒＣ培養
） うす黄茶〜黄茶〔２ｐｉ−２ｒ１ｉ，．Ｍｕｓｔａ
ｒｄＢｒ０ｗｎ〕〜暗い黄茶〔３ｐｉ１ＤｅｅｐＢｒ０
ｗｎ〕の発育上に、白〜黄味灰〔１ｂａ，．Ｙｅ１１０
ｗＴｉｎｔ〜２ｂａ，．Ｐｅａｒ１）の気菌糸を着生し
、溶解性色素は黄色味〜茶色味を呈する。

（６）栄養寒天培地（２ＴＣ培養） うす黄〜うす黄茶〔３ｎｇ，．Ｙｅ１１０ｗＭａｐ１
ｅ〕の発育上に、白色の気菌糸を着生し、溶解性色素は
黄色味を呈する。

（７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ一培地２．２７
℃培養） うす黄茶〜黄茶〔３ｎｉ．．Ｃ１０ｖｅＢｒ
０ｗｎ〕の発育上に、白〜黄味灰〔１ｃｂ．ｓＰａｒｃ
ｈｍｅｔ〜２ｃｂ．．Ｉｖ０ｒｙＴｉｎｔ〕の気菌糸を
着生し、溶解性色素は、わずかに茶色味をおびる。

（８）オートミル寒天培地（ＩＳＰ一培地３．２ＴＣ培
養）うす黄〜うす黄茶の発育上に、白〜黄味灰〔２ｃｂ
．Ｉｖ０ｒｙＴｉｎｔ〕の気菌糸を着生し、溶解性色素
は黄色味を呈する。

（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２ｒｃ培養）無色
〜うす黄の発育上に、白〜黄味灰の気菌糸をうつすらと
着生し、溶解性色素はみとめられない。

［相］ スターチ寒天培養（２７℃培養）無色〜うす黄
茶〔３ｒ１ｇ．．Ｙｅ１１０ｗＭａｐ１ｅ〕の発育上に
、白〜黄味灰〔２ｃｂ，．Ｉｖ０ｒｙＴｉｎｔ〕の気菌
糸を着生し、溶解性色素は培養後１５日目位かられずか
に黄色味をおびる。

（１１）リンゴ酸石灰寒天培地（２ＴＣ培養） 無色の
発育上に、白〜黄味灰〔１ｂａ１Ｙｅ１１０ｗＴｉｎｔ
−如、Ｐｅａｒｌ）の気菌糸を着生し、溶解性色素はみ
とめられない。

（１２）単純ゼラチン穿刺培養（２０Ｃ培養）発育はう
す黄〜うす黄茶、気菌糸は培養後１４日頃から着生し、
黄味灰を呈する。

溶解性色素は培養後１４日目頃かられすかに黄色味をお
びる。（１３）グリコース・ペプトン・ゼラチン穿刺培
養（２ｒＣ培養） にぶ黄〜うす黄茶の発育上に、黄味
灰の気菌糸をうつすらと着生し、溶解性色素は黄色味お
びる。

（１０脱脂牛乳（３ｒＣ培養） うす黄〜にぶ黄の発育上に、白〜黄味灰の気菌糸を着
生し、溶解性色素は黄色味を呈する。

（１５）セルロース（２ｒｃ培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素もみとめ
られない。

３生理的性質 （１）生育温度範囲 スターチ・イースト寒天（可溶性澱粉１．０％、酵母
工キズ０．２％、紐寒天３．０％、ＰＨ７．Ｏ）を用い
て、２０℃、２４゜Ｃ１２７℃、３０℃、３ｒｃ１５０
℃の各温度で試験の結果、５０℃を除いて、そのいずれ
の温度でも生育するが、最適生育温度は２ｒＣ〜３０゜
Ｃ付近と思われる。

（２）ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン、２０′Ｃ
培養；グルコース、ペブトン、ゼラチン、２７℃培養）
単純ゼラチンの場合は、培養後５日目頃からゼラチン
の液化がみられるが、その作用は中等度〜弱い方である
。

グルコース・ペプトン・ゼラチン培地では、培養後３週
間を経過しても液化がみとめられなかつた。（３）スタ
ーチの加水分解（スターチ・無機塩寒天及びスターチ寒
天、何れも２ｒＣ培養） 培養後１０〜１４日目頃から
水解性がみとめられるが、その作用は極めて弱い方であ
る。

（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３７℃
培養）培養後３日目に凝固が完了し、後ペプトン化が始
まり、培養後１０日目にペプトン化がほぼ完了する。

凝固とペプトン化は共にその作用は強い方である。（５
）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・プロ
ス、ＩＳＰ一培地１；ペプトン・イースト・鉄・寒天・
ＩＳＰ一培地６；チロシン寒天、ＩＳＰ一培地７；何れ
も２ｒＣ培養） トリプトン・イースト・プロスではメ
ラニン様色素の生成は認められず、ペプトン・イースト
・鉄寒天の場合及びチロシン寒天の場合も、わすかに褐
色の溶解性色素を呈する程度であり、おそらく陰性と思
われる。

（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天、
ＩＳＰ一培地９、２ｒＣ培養） グルコース利用して発
育し、イノシトールはおそらく利用していると判定され
、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フラクトー
ス、シユクロース、Ｌ−ラムノース、ラフィノース、Ｄ
−マンニトールは利用しない。

（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天、２ｒＣ
培養） リンゴ酸石灰の溶解はみとめられない。

（８）硝酸塩の還元反応（１％硝酸ソーダ含有ペプトン
水、ＩＳＰ一培地８、２ｒＣ培養） 陰性である。

以上の性状を要約すると、ＭＥ５６ｌ−１４株はストレ
プトミセス属に属し、菌糸は輪生枝を有し、螺旋形成は
みとめられず、胞子の表面は平滑である。

種々の培地で発育はうす黄〜うす黄茶〜黄茶色、気菌糸
はおおむね黄味灰色を呈し、溶解性色素は無色〜黄色味
〜茶色味をおびる。メラニン様色素は陰性、蛋白分解力
は中等度〜強い方で、スターチの水解性は極めて弱い方
である。これらの性状及びこの菌株がオーレオスライシ
ンを生産する点より既知菌種を検索すると、ＭＥ５６ｌ
−１４株に最も近縁の種としてストレプトミセス チオ
ルテウス〔ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｔｈｉＯｌｕｔｅ
ｕｓ文献１１ｎｔｅｍａｔｉ０ｎａ１Ｊ０ｕｒ′Ｒｌａ
ｌＯｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉＯｌＯｇｙ
ｌ２２巻、３６２頁（１９７２）：及び文献２：′Ｎｌ
ｅＪａｐａｎｅｓｅＭｅｄｉｃａＩＪＯｕｒｎａｌ、１
巻、５１２頁、（１９４８）〕があげられる。次に実際
にストレプトミセス●チオルテウスＩＳＰ５Ｏ２堰を入
手して直接にＭＥ５６４−１４株と比較検討した。その
比較成績の大要を示すと次の第３表の如くである。上記
のごとくストレプトミセス●チオルテウスＩＳＰ５Ｏ２
准は気菌糸を着生せず、その形態学的性状が不明であつ
たが、文献によれば輪生枝を有する白あるいは黄味白の
気菌糸を形成するとあり、ＭＥ５６ｌ−１４株と同様で
ある。

一方、ＭＥ５６ｌ−１４株はストレプトミセス・チオル
テウスＩｓｐ５Ｏｎ株と比較し、グルコース・ペプトン
・ゼラチン、硝酸塩の還元反応の点で異なるが、その他
の点では大変良く一致している。

よつて、ＭＥ５６ｌ−１４株をストレプトミセス●チオ
ルテウス（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｔｈｉＯｌｕｔｅ
ｕｓ）ＭＥ５６ｌ−１４と同定した。

なお、このＭＥ５６ｌ−１４株は工業技術院微生物工業
技術研究所に昭和５１年１１月２７田こストレプトミセ
スＭＥ５６ｌ−１４の名称で保管委託申請して以来、微
工研菌寄第３８２５号として寄託されてある。

放線菌は人工的に、また自然界で変異をおこしやすいが
、本発明にいうストレプトミセス●チオルテウスＭＥ５
６ｌ−１４株はそれらの変異菌のすべてを包括する。

本発明にいうマゼスラマイシン化合物生産菌種はマゼス
ラマイシン化合物を出産して本菌株ＭＥ５６ｌ−１４株
およびその変異菌と明確に区別されない菌のすべてを包
含する。第２の本発明に係る方法を実施するに当つては
、マゼスラマイシン生産菌株の胞子または菌糸を栄養源
含有培地に接種して、好気的に発育させることによつて
、マゼスラマイシン化合物、特にマゼスラマイシンＡを
含む培養液を得る。培地の栄養源としては、放線菌の栄
養源として用いられる公知のものはすべて使用できる。
例えばグルコース、マルトース、デキストリン、澱粉、
ラクトース、サッカロース、ガラクトース、グリセリン
、大豆油等を炭素源として利用できる。その例を第４表
に示す。ペプトン０．７５％、肉工キズ０．７５％、Ｎ
ａＣｌＯ．３％、ＣａＣＯ３Ｏ．３２％、ＭｇＳＯ４・
７Ｈ２００．１％、ＣＵＳＯ４Ｉ５Ｈ２ＯＯ．ＯＯＯ５
６％、ＦｅｓＯ４●７Ｈ２００．００００８％、ＭｎＣ
ｌ２４Ｈ２ＯＯ．ＯＯＯ６４％、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０
０．０００１６％を含む培地を基礎培地として、これに
上記の炭素源を下記の第４表に示す濃度で添加した培地
１２５ｍ１を５００ｍ１容の坂ロフラスコに分注して、
１２０′Ｃで２０分間、加圧滅菌して冷却し、これに、
放線菌ＭＥ５６ｌ−１４株の培養物からの胞子および菌
糸を接種し、２ｒＣで好気的に振盪培養した時、培養３
日目または４日目のマゼスラマイシン化合物の生産量は
第４表に示す通りである。上記の様に、いずれの炭素源
もこれらの化合物の生産に利用できるが、特にグリセリ
ン、グリコールが好適な炭素源である。

窒素源としてはマゼスラマイシン化合物の生産のために
、放線菌の栄養源として用いられる公知っの窒素源はす
べて利用できる。

例えばペプトン、肉工キズ、酵母工キズ、大豆粉、大豆
粕、コーンステイープリカー、綿実粉、魚粉、カザミノ
酸、Ｎ−Ｚ−アミン等が利用できるが、その一例を第５
表に示す。上記の様にグルコース１％、澱粉１％ＮａＣ
ｌＯ．３％、ＣａＣＯ３Ｏ．３２％、ＭｇＳＯ，７Ｈ２
ＯＯ．ｌ、ＣＵＳＯ４・５Ｈ２００．０００５６％、Ｆ
ｅｓＯ４・７Ｈ２００．００００８％、ＭｎＣｌ２４Ｈ
２ＯＯ．ＯＯＯ６４％、ＺｎｓＯ４●７Ｈ２００．００
０１６％を含む培地を基礎培地として、これに、下記の
第５表に示す濃度になるように窒素源を添加して培地を
滅菌し、これに前記の液体培地に発育せしめた胞子また
は菌糸を接種して３日間または４日間振盪培養した時の
マゼスラマイシン化合物の生産量は第５表に示す通りで
ある。上記の様に、いずれの窒素源も利用できるが、特
に、肉工キズ、ペプトンが好適な窒素源である。

マゼスラマイシン化合物を生産せしめるために必要とす
るならば無機塩、金属塩、重金属塩の微量を加える。又
培養中に消泡を必要とする時はシリコン樹脂、大豆油、
アデカノール等の消泡剤を添加、使用てきる。マゼスラ
マイシン化合物の大量生産には液体培養が好ましく、培
養温度は生産菌が発育して、マゼスラマイシン化合物を
生産する温度の範囲で適用し得るが、殊に好ましいのは
２５〜３５℃である。

培養は普通マゼスラマイシン化合物が充分蓄積されるま
で継続される。例えばグリセリン１．５％、綿実粉１．
５％、ＮａＣｌＯ．３、Ｌ−アスパラギン０．２％の培
地をＰＨ７．４に調整し、これに放線菌ＭＥ５６ｌ一１
４株の斜面培養から胞子および菌糸を接種し、２ｒｃで
好気的に攪拌培養を行つたところ、培養２〜４日目に目
的の抗生物質マゼスラマイシンの最高の蓄積が見られる
。マゼスラマイシン化合物の定量は試験菌としてバチル
ス・ズブチリスＰＣＩ２ｌ９などを使用して、抗生物質
の定量に用いられる通常の円筒平板法によつて行ない、
本発明で得られた純粋なマゼスラマイシンＢを標準物質
に用いる。

培養液中に他の抗生物質例えばチオルチン、オーレオス
リシンなどが同時に生産される時は、その培養液を酢酸
エチルなどの溶媒に抽出し、残りの水層を上記の円筒平
板法によつて測定することにより、マゼスラマイシン化
合物を定量することができる。この場合、マゼスラマイ
シン化合物も酢酸エチルなどの溶媒に一部移行するので
、マゼスラマイシンを対照として同じように操作し、標
準曲線を作製し、これにより定量することができる。マ
ゼスラマイシン化合物の生産菌の培養液からこの抗生物
質を抽出するには、ブタノールなどの水非混和性有機溶
媒を使用する溶剤抽出法および活性炭又は多孔質樹脂な
どを吸着剤として使用する吸着法によつて行われる。

マゼスラマイシンＢのブタノ−ルー水における分配係数
は、ＰＨ６〜８の範囲で１０１）．上を示す。従つて、
このＰＨ範囲で培養物中よりマゼスラマイシン化合物を
抽出することができる。また、培養戸液中のマゼスラマ
イシン化合物を抽出するに当り、吸着剤として活性炭お
よび非イオン性多孔質の吸着樹脂などを用いることは、
有効である。特にジビニルベンゼンで架橋したポリスチ
レン樹脂、アンパーライトＸＡＤ−２（米国ローム・ア
ンド・ハース社製）を用いるカラムクロマトグラフィー
を行うことは好ましく、アンパーライトＸＡＤ−２に吸
着した抗生物質はメタノール水、アセトン水などで溶出
され、減圧蒸溜によつて濃縮される。菌体等固形分中の
マゼスラマイシン化合物は通常もちいられる有機溶剤例
えばメタノール、エタノール、アセトン、ブタノール等
に抽出され、減圧蒸溜によつて濃縮される。菌体を含む
培養液から菌体を除くことなくマゼスラマイシン化合物
がよく溶ける溶剤、例えばブタノールに液体部分および
菌体部分のマゼスラマイシン化合物を抽出することもで
きる。上記の様にして得た抽出乾固物はエチルエーテル
、ｎ−ヘキサン等で処理すると、マゼスラマイシン化合
物は不溶部に残る。さらにこの不溶部をメタノールで抽
出すると溶媒層にマゼスラマイシン化合物は抽出され、
残渣は不純物として除かれる。このようにしてマゼスラ
マイシン化合物を含有する粉末を採取し、次にこの粉末
をメタノール又はメタノール含有の混合溶媒で抽出する
と、マゼスラマイシンＢを主に含む抽出液を採取できる
。マゼスラマイシンはこれらの抽出法を適宜に組合せあ
るいは繰返すことによつて精製することができるが、更
にセフアデツクスＬＨ−２０（フアル．マシア社製）、
セルロースおよびシリカゲルなどを用いる通常のカラム
クロマトグラフィーによつて精製される。培養物中にし
ばしば共存する既知抗生物質チオルチンおよびオーレオ
スライシンは上述のエチルエーテル、ｎ−ヘキサン等に
よる処Ｉ理またはシリカゲルのカラムクロマトグラフィ
ーによつて容易にマゼスラマイシン化合物から分離でき
る。上記した抽出による精製処理は必要に応じて単独或
いは任意に組み合わせることにより、マゼスーラマイシ
ン化合物を精製することができる。

マゼスラマイシンＡ．．Ｂ，．Ｃを非極性有機溶媒中で
加熱還流して脱水又は脱アルコールすることによりアン
ヒドロマゼスラマイシンが生成される。これに用いられ
る非極性有機溶媒としては、例えば、アセトン、アセト
ニトリル、酢酸エチル、クロロホルム等がある。アンヒ
ドロマゼスラマイシンを水または含水の非アルコール性
有機溶媒に溶解すると、水が附加されてマゼスラマイシ
ンＡが得られる。マゼスラマイシンＡまたはアンヒドロ
マゼスラマイシンをメタノールに溶解するとメタノール
が反応して比較的安定なマゼスラマイシンＢに変換する
ことができる。同様に、マゼスラマイシンＡまたはアン
ヒドロマゼスラマイシンをエタノールに溶解すると、エ
タノールが反応して比較的安定なマゼスラマイシンＣが
得られる。従つて、第３の本発明の要旨とするところは
、マゼスラマイシンＡをメタノールまたはエタノールと
反応させることからなる、マゼスラマイシンＢまたはＣ
の製造法にある。

また、第４の本発明の要旨とするところは、マゼスラマ
イシンＡ１マゼスラマイシンＢまたはマゼスラマイシン
Ｃを非極性有機溶媒中で加熱して夫々に脱水、脱メタノ
ール又は脱エタノールさせることから成るアンヒドロマ
ゼスラマイシンの製造法にある。

さらに、第５の本発明の要旨とするところは、アンヒド
ロマゼスラマイシンを水、メタノールはエタノールと反
応させることから成るマゼスラマイシンＡ１マゼスラマ
イシンＢまたはマゼスラマイシンＣの製造法にある。

マゼスラマイシン生産菌の培養液からマゼスラマイシン
を採取するために、上記抽出精製法を有効に組合わせた
一例をあげると次の通りである。

培養枦液をＰＨ８に調整してから、ブタノールで抗生物
質を抽出し、水を加えて減圧下に４０℃以下で濃縮して
ブタノールを完全に除去し水溶液とする。これをＰＨ７
．５に調整しアンパーライトＸＡＤ一２の塔に通して吸
着させ、充分水洗後５０％アセトン水で溶出させる。こ
れを減圧下に４０゜Ｃ以下で濃縮乾固して粗粉末を得る
。これを少量のメタノールに溶かし、メタノールに不溶
の夾雑物は遠心分離または淵過により除き、シリカゲル
を加えて均一に混合した後乾燥したものを、シリカゲル
を展開溶剤で懸濁してつめたカラムの頂部に置き、次に
クロロホルム−メタノール（１０：５容量比）で展関す
る。溶出した活性分画を濃縮後、残留物をメタノールに
溶解し、冷蔵庫に放置すると、黄色針状晶としてマゼス
ラマイシンＢを得ることができる。夾雑物が多く結晶が
析出しにくい時は、シリカゲルの再クロマトグラフィー
を展開溶剤に酢酸エチルを用いて行い、溶出した活性分
画を濃縮後メタノールに溶解し、冷蔵庫に放置するとマ
ゼスラマイシンＢの結晶を得ることができる。

以下に、マゼスラマイシン化合物の製造法に関する実施
例を示すが、本発明により、マゼスラマイシンＡ，．Ｂ
，．Ｃおよびアンヒドロマゼスラマイシンの性状が明ら
かにされたのでこの性状に基いてマゼスラマイシン化合
物の製造法を種々考案することができる。

従つて、本発明は実施例に限定されるものではなく実施
例の修飾手段は勿論、本発明によつて明らかにされたマ
ゼスラマイシン化合物の性状に基いて公知の濃縮、抽出
、精製手段を施してマゼスラマイシンＡ．．Ｂ．．Ｃお
よびアンヒドロマゼスラマイシンを生産する方法をすべ
て包括する。

実施例１寒天斜面培地に培養した放線菌ＭＥ５６ｌ−１
４株（微工研菌寄第３８２５号）を、グリセリン１．５
％、綿実粉１．５％、Ｌ−アスパラギン０．２％、食塩
０．３％を含む液体培地に接種し、２７℃で梠時間振盪
培養して１次種培養を得た。

次に上記組成の液体培地５ｅを５００ｍ１容量の坂ロフ
ラスコに１２５ｍｔずつ分注したものに１次種培養液１
ｍ１ずつを接種し、２ｒｃで４日間振盪培養した。ＰＨ
７．６の培養ｐ液４７４０ｍ１を得た。枦液は４６μＹ
ｌｍｌ（全量２１６ｍ９）の量でマゼスラマイシン化合
物を含んでいた。枦過で分けられた菌体は２１５ｇで６
０ｍｇのマゼスラマィシン化合物を含んでいた。上記培
養液４７４０ｍ１を水酸化ナトリウムでＰＨ８．Ｏに調
整し、５０００ｍ１のブタノールを加えて攪拌抽出し、
減圧濃縮し、精製水１６００ｍ１に溶解した。マゼスラ
マイシン化合物の全量の８９％にあたる１９１ＴｆＬｇ
がブタノール抽出により得られ、その水溶液のＰＨは４
．５であつた。水酸化ナトリウムでＰＨ７に調整し、ア
ンパーライトＸＡＤ−２（４００ｍ１ミ３．２×５０ｃ
ｍ）のカラムを通過させた。カラムに精製水３０００ｍ
ｔを通過させることにより洗滌し、５０％アセトン水２
０００ｍｔにより、マゼスラマイシン化合物を溶出せし
め、減圧下で濃縮乾固し、１．４ｙの褐色粉末（マゼス
ラマイシンＡ粗粉末）を得た。１８４ｍ９のマゼスラマ
イシン化合物（マゼスラマイシンＡが主体）含有したこ
の褐色粉末を少量のメタノールに溶解し、シリカゲル（
ワコーゲルＣ−２００）４ｙを加え均一に混合した後、
減圧下で乾燥する。

これをクロロホルムでシリカゲル５０ｙを懸濁してつめ
たカラム（内径２０ｍ）の頂部に置く。次にクロロホル
ム・メタノール（５０：１容量比）２５０ｍｔを通過さ
せ、次にクロロフイルムーメタノール（２０：１容量比
）で展関し、１５ｙづつ分画採取する。分画３２〜４５
にマゼスラマイシンＢが溶出された。この分画を減圧濃
縮して、マゼスラマイシンＢ７ｌｍ９を含有する黄土色
粉末の１１８ｍ９を得た。収率は３３％であつた。実施
例２実施例１で得られた黄土色粉末の１１８Ｔｎ９を６
０℃で５０ｍ１のメタノールに溶解した後に冷却すると
、マゼスラマイシンＢの針状結晶４６ｍ９が得られた。

結晶化の収率は６５％であつた。実施例３ 実施例１と同様の方法で得た乾燥粉末１１５Ｔｎｇをメ
タノール１ｍ１に溶解し、シリカゲル１ｆを加え均一に
混合した後、減圧下で乾燥する。

これを酢酸エチルでシリカゲル１１ｙを懸濁してつめた
カラム（内径１４Ｗｒ！Ｒ）の頂部に置く。次に酢酸エ
チル６００ｍＬで展関し、７ｙづつ分画採取する。分画
２３〜３９にマゼスラマイシンＢが溶出された。この分
画を減圧濃縮して、６１ｍｇのマゼスラマイシンＢの純
粋な乾燥粉末を得た。これを、加温しながら６ｍ１のメ
タノールに溶解した後、冷却し、マゼスラマイシンＢの
結晶４０ｍｇを得た。ｊ実施例４寒天斜面培地に培養し
た放線菌ＭＥ５６ｌ−１４株（微工研菌寄第３８２５号
）を、グリセリン２．５％、牛肉工キズ０．５％、ポリ
ペプトン０．５％、酵母工キズ１．０％、食塩０．２％
、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００．０５門％、Ｋ２ＨＰＯ４Ｏ
．ＯＯ５％、沈降性炭酸カルシウム０．３２％を含む液
体培地５ｅを、５００ｍＬ容のワツフル付３角フラスコ
に１１０ｍ１づつ分注した培地中で２７℃、４日間回転
培養した。

ＰＨ５．６の培養洒液３５３０ｍｔおよび菌体１１６０
ｙを得た。菌体はメタノール７２５００ｒｆＬ１を加え
て攪拌抽出し、抽出液を減圧濃縮し、水５００ｍ１に溶
解し、培養ｐ液と合わせた。以下、実施例１と同様の方
法でブタノール抽出、アンパーライトＸ，ＡＤ−２吸着
、溶出処理を行い、２．２ｙの粗粉末を得た。この粗粉
末を実施例１の２倍のスケールでシリカゲルカラムクロ
マトグラフィーを行ない、マゼスラマイシンＢを含む分
画を集めて、減圧濃縮し、１５０ｍ９のマゼスラマイシ
ンＢの純粋な粉末を得た。これをジメチルホルムアミド
２ｍ１を加えて溶解し、メタノール３５ｍ１を加えて冷
却し、マゼスラマイシンＢの針状結晶６８ｍ９を得た。
実施例５ マゼスラマイシンＢの結晶１２４Ｔｎ９をアセトニトリ
ル１００ｍ１に溶解し、極微量のアンパーライトＣＧ一
５０を添加して、１時間還流した。

アンパーライトＣＧ−５０をグラスフィルターでろ過し
て除去し、アセトニトリルを減圧濃縮により除去してい
くと、針状結晶が析出した。これをアセトニトリルより
再結晶し、８０ｍｇのアンヒドロマゼスラマイシンの結
晶性粉末を得た。なお、マゼスラマイシンＣの結晶６０
ｍ９をアセトニトリル５０ｍ１に溶解して上記と同様に
処理すると、３８ｍｇのアンヒドロマゼスラマイシンの
結晶性粉末を得た。

実施例−６ 実施例５で得られたアンヒドロマゼスラマイシンの５０
ｍ９を５０％アセトン水５０ｍｔで溶解し、減圧下に濃
縮すると、マゼスラマイシンＡを得た。

実施例７実施例６で得られたマゼスラマイシンＡの５０
ｍｇを１５ｍ１のメタノールに溶解し、減圧下に濃縮し
てマゼスラマイシンＢの結晶４８ｍ９を得た。

実施例８マゼスラマイシンＡの５０ｍ９を１５ｍ１のエ
タノールに溶解し、減圧下濃縮してマゼスラマイシンＣ
の結晶４５Ｔｎ９を得た。

実施例９ 実施例５で得られたアンヒドロマゼスラマイシンの５０
ｍｇを１５ｍｔのメタノールに溶解し、減圧下濃縮して
、マゼスラマイシンＢの結晶３２７ｎ９を得た。

実施例１０実施例５で得られたアンヒドロマゼスラマイ
シンの２１ｍｇをエタノール３０ｍ１に溶し、減圧下濃
縮して、マゼスラマイシンＣの結晶性粉末２４ｍ９を得
た。

【図面の簡単な説明】

第１図はマゼスラマイシンＡの４．１４μＹｌｍｌのア
セトニトリル溶液中での紫外部吸収スペクトル曲線を示
す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次の一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）〔式中、・
   ・・Ａ・・・は基▲数式、化学式、表等があります▼又
   は基−Ｎ＝ＣＨ−を表わす、但しＲは水素原子または低
   級アルキル基を示す〕で表わされる化合物である制癌抗
   生物質マゼスラマイシン化合物。 ２ 一般式（ I ）の化合物において・・・Ａ・・・は
   基▲数式、化学式、表等があります▼であり且つＲが水
   素原子で表わされるマゼスラマイシンＡである特許請求
   の範囲第１項記載の化合物。 ３ 一般式（ I ）の化合物において・・・Ａ・・・は
   基▲数式、化学式、表等があります▼であり且つＲがメ
   チル基で表わされるマゼスラマイシンＢである特許請求
   の範囲第１項記載の化合物。 ４ 一般式（ I ）の化合物において・・・Ａ・・・は
   基▲数式、化学式、表等があります▼であり且つＲがエ
   チル基で表わされるマゼスラマイシンＣである特許請求
   の範囲第１項記載の化合物。 ５ 一般式（ I ）の化合物において・・・Ａ・・・が
   基−Ｎ＝ＣＨ−であるアンヒドロ体であつて次式（II）
   ▲数式、化学式、表等があります▼（II）で表わされる
   アンヒドロマゼスラマイシンである特許請求の範囲第１
   項記載の化合物。 ６ ストレプトミセス属に属するマゼスラマイシン化合
   物生産菌を、栄養源を含有する培地中で好気的に培養し
   て、その培養物中に次の一般式（ I ）▲数式、化学式
   、表等があります▼（ I ）〔式中、・・・Ａ・・・は
   基▲数式、化学式、表等があります▼又は基−Ｎ＝ＣＨ
   −を表わす、但しＲは水素原子または低級アルキル基を
   示す〕で表わされるマゼスラマイシン化合物を生産せし
   め、培養物からマゼスラマイシン化合物を採取すること
   を特徴とする、一般式（ I ）で表わされる抗生物質マ
   ゼスラマイシン化合物の製造法。 ７ ストレプトミセス・チオルテウスＭＥ５６１−１４
   株（微工研菌寄第３８２５号）を栄養源含有培地中で２
   ５〜３５℃の温度範囲で好気的に培養して、その培養物
   中に一般式（ I ）のマゼスラマイシン化合物を生産せ
   しめる特許請求の範囲第６項記載の方法。 ８ マゼスラマイシン化合物生産菌の培養物から水非混
   和性の有機溶剤で抽出によつて一般式（ I ）のマゼス
   ラマイシン化合物を採取する特許請求の範囲第６項記載
   の方法。 ９ マゼスラマイシン化合物生産菌の培養濾液から吸着
   剤に吸着せしめて一般式（ I ）のマゼスラマイシン化
   合物を採取する特許請求の範囲第６項記載の方法。 １０ マゼスラマイシンＡをメタノールまたはエタノー
   ルと反応させることから成るマゼスラマイシンＢまたは
   Ｃの製造法。 １１ マゼスラマイシンＡ、マゼスラマイシンＢまたは
   マゼスラマイシンＣを非極性有機溶媒中で加熱して夫々
   に脱水、脱メタノール又は脱エタノールさせることから
   成るアンヒドロマゼスラマイシンの製造法。 １２ アンヒドロマゼスラマイシンを水、メタノール又
   はエタノールと反応させることから成るマゼスラマイシ
   ンＡ、マゼスラマイシンＢまたはマゼスラマイシンＣの
   製造法。