JP2025533527A

JP2025533527A - ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ抗原の送達のための組成物及び関連方法

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Publication number: JP2025533527A
Application number: JP2025517300A
Authority: JP
Inventors: シャヒン，ウール; ポラン，アサフ; エイブラムローセンバーグ，ダニエル; エルバー，シュテファニー; フォ－ゲル，アンネッテ; サントス，メイレレスパトリシアドス; スルージ，ジョン; ドキッチ，アーニャ; クランプ，トアステン; ジェニソン，チャールズ
Original assignee: Biontech SE
Current assignee: Biontech SE
Priority date: 2022-09-23
Filing date: 2023-09-22
Publication date: 2025-10-07
Also published as: WO2024064934A1; CN120152736A; AU2023347390A1; IL319410A; EP4590331A1

Abstract

本開示は、マラリアタンパク質抗原の送達のための組成物（例えば、医薬組成物）及び関連技術（例えば、その構成要素及び／またはそれに関連する方法）を提供する。数ある中でも特に、本開示は、マラリアタンパク質抗原をコードするポリリボヌクレオチドを提供する。
【選択図】なし

Description

マラリアは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ属の寄生原虫によって引き起こされる蚊媒介性感染症である。世界保健機関によると、９２カ国で推定３４億人がＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫に感染し、疾患を発症するリスクにある。

本開示は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ抗原（本明細書では「マラリア抗原（ｍａｌａｒｉａａｎｔｉｇｅｎｓ）」または「マラリア抗原（ｍａｌａｒｉａｌａｎｔｉｇｅｎｓ）」とも称される）を送達するための技術（例えば、組成物、方法など）を提供する。一態様では、本明細書に提供されるのは、ポリペプチドをコードするポリリボヌクレオチドであり、ポリペプチドは、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分の各々は、配列番号１によるアミノ酸配列の２５以上の連続したアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドの「断片」は、ポリペプチドの「部分」である。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、ＮＡＮＰＮＶＤＰ（配列番号１０２）のアミノ酸配列の１つ以上の反復を含み、ポリペプチドは、ＮＰＮＡ（配列番号１４１）のアミノ酸配列を含まない。いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の５つ以上反復を含む。

本明細書に提供される一態様は、ポリペプチドをコードするポリリボヌクレオチドに関し、ポリペプチドは、（ｉ）異種分泌シグナル及び（ｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む。

本明細書に提供される一態様は、ポリペプチドをコードするポリリボヌクレオチドに関し、ポリペプチドは、（ｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分、及び（ｉｉ）異種膜貫通領域を含む。

いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の１つ以上の反復を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の２つ以上の反復を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の２つ～１２の反復を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の正確に３つの反復を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の４つ～１２の反復を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、（ｉ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の正確に８つの反復、または（ｉｉ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の正確に９つの反復を含む。いくつかの実施形態では、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の反復は、全て互いに連続している。いくつかの実施形態では、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の反復は、全て互いに連続しているわけではない。

いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチドの４つの部分を含み、各部分は、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の２つの連続した反復を含む。

いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、正確に１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域を含み、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域は、配列番号１によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の２つ以上の部分を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の１つ以上の部分を含み、１つ以上の部分の各々は、（ｉ）配列番号１１１によるアミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号１１４によるアミノ酸配列、（ｉｉｉ）配列番号１１７によるアミノ酸配列、（ｉｖ）配列番号１２０によるアミノ酸配列、もしくは（ｖ）それらの組み合わせを含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の１つの部分を含み、部分は、（ｉ）配列番号１１１によるアミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号１１４によるアミノ酸配列、（ｉｉｉ）配列番号１１７によるアミノ酸配列、（ｉｖ）配列番号１２０によるアミノ酸配列、もしくは（ｖ）それらの組み合わせを含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の１つ以上の部分を含み、１つ以上の部分は、まとめて、（ｉ）配列番号１１１によるアミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号１１４によるアミノ酸配列、（ｉｉｉ）配列番号１１７によるアミノ酸配列、及び（ｉｖ）配列番号１２０によるアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリンを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列を含む。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域は、配列番号１２６によるアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域を含む。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の２つ以上の部分は、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、Ｑ９６、及びＰ９７のうちの１つ以上の欠失を含み、アミノ酸番号付けは、配列番号１に対応する。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の２つ以上の部分は、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、及びＱ９６の欠失を含み、アミノ酸番号付けは、配列番号１に対応する。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の２つ以上の部分は、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、Ｑ９６、及びＰ９７の欠失を含み、アミノ酸番号付けは、配列番号１に対応する。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、正確に１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域を含む。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域は、配列番号１２６によるアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の１つ以上の部分を含む。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の１つ以上の部分は、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、Ｑ９６、及びＰ９７のうちの１つ以上の欠失を含み、アミノ酸番号付けは、配列番号１に対応する。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の１つ以上の部分は、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、及び、Ｑ９６の欠失を含み、アミノ酸番号付けは、配列番号１に対応する。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の１つ以上の部分は、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、Ｑ９６、及びＰ９７の欠失を含み、アミノ酸番号付けは、配列番号１に対応する。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の各部分は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の各部分は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の各部分は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアントは、１つ以上の置換変異を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換変異は、Ｋ９３Ａ変異、Ｌ９４Ａ変異、またはその両方を含み、アミノ酸番号付けは、配列番号１に対応する。いくつかの実施形態では、各ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアントは、ＡＡＫＱのアミノ酸配列（配列番号４２６）を含む。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、各ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域は、配列番号１３５によるアミノ酸配列からなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその任意の部分を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、各ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域は、配列番号１３８によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその任意の部分を含まない。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分は、アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＡ（配列番号１５３）またはＮＰＮＡＮＰ（配列番号１５０）を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、正確に１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分を含み、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分は、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の合計少なくとも２つかつ最大で３５の反復を含む。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分は、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の反復の２つの連続したストレッチを含み、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の反復の２つの連続したストレッチは、ＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１４４）に隣接する。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域は、Ｎ末端からＣ末端の順で、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の１７の反復、ＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１４４）、及びアミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の１８の反復を含む。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域の部分は、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の最大で１８の連続した反復からなる。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域の部分は、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の２つの連続した反復からなる。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域は、配列番号１５６によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはアミノ酸配列ＮＰＮＡ（配列番号１４１）を含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域の部分を含まない。

いくつかの実施形態では、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分は、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチド中に存在する場合、以下のＮ末端からＣ末端の順で：（ｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、（ｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、（ｉｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント、（ｉｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の１つ以上の反復、（ｖ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分、及び（ｖｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分、である。

いくつかの実施形態では、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分は、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチド中に存在する場合、以下のＮ末端からＣ末端の順で：（ｉ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、（ｉｉ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、（ｉｉｉ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント、（ｉｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の１つ以上の反復、（ｖ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分、及び（ｖｉ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分、である。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、１つ以上のヘルパー抗原を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のヘルパー抗原は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ抗原を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のヘルパー抗原は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸ヒドロリラーゼ抗原、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期抗原１（ａ）、（ＬＳＡ－１（ａ））、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期抗原１（ｂ）（ＬＳＡ－１（ｂ））、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍトロンボスポンジン関連匿名タンパク質（ＴＲＡＰ）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期関連タンパク質１（ＬＳＡＰ１）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期関連タンパク質２（ＬＳＡＰ２）、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＵＩＳ３、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＵＩＳ４、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＥＴＲＡＭＰ１０．３、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝特異的タンパク質１（ＬＩＳＰ－１）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝特異的タンパク質２（ＬＩＳＰ－２）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期抗原３（ＬＳＡ－３）、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＥＸＰ１、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＥ１４０、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ網状赤血球結合タンパク質ホモログ５（Ｒｈ５）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍグルタミン酸リッチタンパク質（ＧＡＲＰ）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫感染赤血球表面タンパク質２（ＰＩＥＳＰ２）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍシステインリッチ防御抗原（ＣｙＲＰＡ）、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＲｉｐｒ、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＰ１１３、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、１つ以上のヘルパー抗原は、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸ヒドロリラーゼ抗原を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸ヒドロリラーゼ抗原は、配列番号２４０によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、１つ以上のヘルパー抗原は、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ肝病期抗原３を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ肝病期抗原３は、配列番号２４３によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、１つ以上のヘルパー抗原は、Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ抗原を含む。いくつかの実施形態では、ヘルパー抗原は、ＡｎｏｐｈｅｌｅｓｇａｍｂｉａｅＴＲＩＯを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡｎｏｐｈｅｌｅｓｇａｍｂｉａｅＴＲＩＯは、配列番号２４６によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、分泌シグナルを含み、ヘルパー抗原は、分泌シグナルの直後である。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、ポリペプチドのＣ末端にヘルパー抗原を含む。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、多量体化領域を含む。いくつかの実施形態では、多量体化領域は、三量体化領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、三量体化領域は、フィブリチン領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、フィブリチン領域は、配列番号２５５によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に多量体化領域を含む。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、分泌シグナルを含む。いくつかの実施形態では、分泌シグナルは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ分泌シグナルを含むか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ分泌シグナルは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ分泌シグナルは、配列番号１７４によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、分泌シグナルは、異種分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、異種分泌シグナルは、非ヒト分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、異種分泌シグナルは、ウイルス分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ウイルス分泌シグナルは、ＨＳＶ分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ分泌シグナルは、ＨＳＶ－１もしくはＨＳＶ－２分泌シグナルを含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ分泌シグナルは、ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＳＶｇＤ分泌シグナルは、配列番号１５９に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＳＶｇＤ分泌シグナルは、配列番号１６５によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、分泌シグナルは、Ｅｂｏｌａウイルス分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｅｂｏｌａウイルス分泌シグナルは、Ｅｂｏｌａウイルススパイク糖タンパク質（ＳＧＰ）分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＥｂｏｌａウイルスＳＧＰ分泌シグナルは、配列番号１７７によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチド内に存在する分泌シグナルは、ポリペプチドのＮ末端に位置する。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、膜貫通領域を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ膜貫通領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ膜貫通領域は、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＧＰＩアンカー領域は、配列番号２３１によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドに存在する膜貫通領域は、異種膜貫通領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、異種膜貫通領域は、ヘマグルチン膜貫通領域を含まない。いくつかの実施形態では、異種膜貫通領域は、非ヒト膜貫通領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、異種膜貫通領域は、ウイルス膜貫通領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、異種膜貫通領域は、ＨＳＶ膜貫通領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ膜貫通領域は、ＨＳＶ－１もしくはＨＳＶ－２膜貫通領域を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ膜貫通領域は、ＨＳＶｇＤ膜貫通領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＳＶｇＤ膜貫通領域は、配列番号２３４によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドに存在する膜貫通領域は、ヒト膜貫通領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒト膜貫通領域は、ヒト崩壊促進因子グリコシルホスファチジルイノシトール（ｈＤＡＦ－ＧＰＩ）アンカー領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ｈＤＡＦ－ＧＰＩアンカー領域は、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、分泌シグナルを含まない。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、膜貫通領域を含まない。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のリンカーは、配列番号２５８によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、１つ以上のリンカーは、配列番号２７９によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、１つ以上のリンカーは、配列番号２７０によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、１つ以上のリンカーは、配列番号２８２によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

膜貫通が存在するいくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、Ｃ末端領域またはその部分と膜貫通領域との間にリンカーを含む。

提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドがＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）を含むいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の後にリンカーを含む。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２の１つ以上の反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列（配列番号１４１）、及び（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分を含む（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、１つ以上のヘルパー抗原（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含む。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の９つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉ）５つの抗原反復領域を含み、各抗原反復領域は、（Ａ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（Ｂ）ヘルパー抗原（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＮＰＮＡ（配列番号１４１）のアミノ酸配列、（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び（ｃ）膜貫通領域のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３６によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ヘルパー抗原（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の９つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｘ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｘ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列（配列番号１４１）及び（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３９によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の部分（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の３つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列（配列番号１４１）のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号５７によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の部分（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の９つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列（配列番号１４１）のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６０によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の３つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列（配列番号１４１）のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６３によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の９つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列（配列番号１４１）のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６６によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアント（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の３つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列（配列番号１４１）のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６９によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアント（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の９つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列（配列番号１４１）のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７２によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の部分（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の３つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列（配列番号１４１）のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７５によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の部分（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の９つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列（配列番号１４１）のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７８によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の９つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び（ｂ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列（配列番号１４１）のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８１によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアント（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の９つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び（ｂ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列（配列番号１４１）のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８４によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の９つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び（ｂ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列（配列番号１４１）のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９６によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の９つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び（ｂ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列（配列番号１４１）のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９９によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ中和領域反復であって、各ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ中和領域反復が、（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｃ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の２つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｄ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含むか、またはそれらからなる、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ中和領域反復、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域の部分（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、を含み、ポリペプチドは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、正確に４つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ中和領域反復を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８７によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の３つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３０によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の部分（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の３つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、膜貫通領域を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２７によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の３つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、膜貫通領域を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の３つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、膜貫通領域を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２４によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の３つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、膜貫通領域を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９３によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の３つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｖｉｉｉ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、膜貫通領域を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３３によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の３つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｘ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｘ）多量体化領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、膜貫通領域を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４２によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の３つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｘ）リンカー（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｘ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含み、ポリペプチドは、膜貫通領域を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４８によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の３つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｘ）リンカー（例えば、本明細書の特定の実施形態による）、（ｘ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９０によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、（ｉ）分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｉｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰ）のアミノ酸配列（配列番号１０２）の３つの反復（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、（ｖｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）、及び（ｉｘ）膜貫通領域（例えば、本明細書に記載の特定の実施形態による）を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２１によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、存在する場合、特徴（ｉ）～（ｘ）（上述のように）は、Ｃ末端からＮ末端まで数順であるポリペプチドである。

いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍである。いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドのポリペプチド中に存在する１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分は、１つ以上のＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分である。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７である。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドは、単離されたポリリボヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドは、操作されたポリリボヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドは、コドン最適化ポリリボヌクレオチドである。

一態様では、本明細書に提供されるのは、本明細書に記載のポリリボヌクレオチドを含むＲＮＡ構築物である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ構築物は、５’から３’の順で、（ｉ）修飾ヒトアルファ－グロビン５’－ＵＴＲを含むかもしくはそれからなる５’ＵＴＲ、（ｉｉ）本明細書に記載されるようなポリリボヌクレオチド、（ｉｉｉ）スプリットのアミノ末端エンハンサー（ＡＥＳ）メッセンジャーＲＮＡからの第１の配列及びミトコンドリアでコードされた１２ＳリボソームＲＮＡからの第２の配列を含む３’ＵＴＲ、及び（ｉｖ）ポリＡ尾部配列、を含む。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、配列番号４１５によるリボ核酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、３’ＵＴＲは、配列番号４１６によるリボ核酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部配列は、スプリットポリＡ尾部配列である。いくつかの実施形態では、スプリットポリＡ尾部配列は、配列番号４１７によるリボ核酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、提供されるＲＮＡ構築物は、５’キャップをさらに含む。いくつかの実施形態では、提供されるＲＮＡ構築物は、ポリリボヌクレオチドの＋１、＋２、＋３、＋４、及び＋５位を含むキャップ近位の配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、５’キャップは、ｍ７（３’ＯＭｅＧ）（５’）ｐｐｐ（５’）（２’ＯＭｅＡ_１）ｐＧ_２を含むＣａｐ１構造を含むか、またはそれからなり、Ａ_１は、ポリリボヌクレオチドの＋１位であり、Ｇ_２は、ポリリボヌクレオチドの＋２位である。いくつかの実施形態では、キャップ近位の配列は、Ｃａｐ１構造のＡ_１及びＧ_２、ならびにポリリボヌクレオチドの＋３、＋４、及び＋５位にそれぞれＡ_３Ａ_４Ｕ_５（配列番号４２４）を含む配列を含む。

いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドは、全てのウリジンの代わりに修飾ウリジンを含む。いくつかの実施形態では、修飾ウリジンは、各々、Ｎ１－メチル－プソイドウリジンである。

提供されるポリヌクレオチドまたは提供されるＲＮＡ構築物を含む組成物もまた、本開示の範囲内である。いくつかの実施形態では、そのような組成物は、脂質ナノ粒子、ポリプレックス（ＰＬＸ）、脂質化ポリプレックス（ＬＰＬＸ）、またはリポソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリリボヌクレオチドまたは１つ以上のＲＮＡ構築物は、脂質ナノ粒子、ポリプレックス（ＰＬＸ）、脂質化ポリプレックス（ＬＰＬＸ）、またはリポソーム内に完全にもしくは部分的にカプセル化されている。いくつかの実施形態では、組成物は、脂質ナノ粒子をさらに含み、１つ以上のポリリボヌクレオチドまたは１つ以上のＲＮＡ構築物は、脂質ナノ粒子内に完全にもしくは部分的にカプセル化されている。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、肝細胞を標的とする。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、二次リンパ器官細胞を標的とする。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、陽イオン性脂質ナノ粒子である。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、各々、（ａ）ポリマーコンジュゲート脂質、（ｂ）カチオン性にイオン化可能な脂質、及び（ｃ）１つ以上の中性脂質を含む。いくつかの実施形態では、ポリマー結合脂質は、ＰＥＧ結合脂質を含む。いくつかの実施形態では、ポリマー結合脂質は、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミドを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の中性脂質は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＳＣ）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の中性脂質は、コレステロールを含む。いくつかの実施形態では、カチオン性にイオン化可能な脂質は、［（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル］ジ（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約５０～１５０ｎｍの平均直径を有する。

本明細書に提供される別の態様は、本明細書に記載されるような組成物と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物に関する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、凍結保護剤を含み、任意選択的に凍結保護剤は、スクロースである。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、水性緩衝溶液を含み、任意選択的に水性緩衝溶液は、トリス塩基、トリスＨＣｌ、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｎａ_２ＨＰＯ_４、及びＫＨ_２ＰＯ_４のうちの１つ以上を含む。

本明細書に提供されるさらなる態様は、（ｉ）第１のポリリボヌクレオチドを含む第１の医薬組成物であって、第１のポリリボヌクレオチドが、第１のポリペプチドをコードし、第１のポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む、第１の医薬組成物と、（ｉｉ）第２のポリリボヌクレオチドを含む第２の医薬組成物であって、第２のポリリボヌクレオチドが、第２のポリペプチドをコードし、第２のポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＴ細胞抗原を含む、第２の医薬組成物と、を含む組み合わせに関する。いくつかの実施形態では、第１のポリリボヌクレオチドは、本明細書に記載の特定の実施形態によるポリリボヌクレオチド、または本明細書に記載の特定の実施形態によるＲＮＡ構築物である。

提供されたポリリボヌクレオチド、提供されたＲＮＡ構築物、提供された組成物、または提供された医薬組成物を対象に投与する方法もまた、本開示の範囲内である。いくつかの実施形態では、方法は、１つ以上の用量の本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む。

一態様では、１つ以上の用量の医薬組成物を対象に投与することを含む、マラリア感染の治療における使用のための、本明細書に記載されるような医薬組成物。別の態様では、１つ以上の用量の医薬組成物を対象に投与することを含む、マラリア感染の予防における使用のための、本明細書に記載されるような医薬組成物。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような２つ以上の用量の医薬組成物が、対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような３つ以上の用量の医薬組成物が、対象に投与される。いくつかの実施形態では、３つ以上の用量のうちの第２の用量は、３つ以上の用量のうちの第１の用量が対象に投与されてから少なくとも４週間後に対象に投与される。いくつかの実施形態では、３つ以上の用量のうちの第３の用量は、３つ以上の用量のうちの第２の用量が対象に投与されてから少なくとも４週間後に対象に投与される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような医薬組成物の第４の用量は、対象に投与される。いくつかの実施形態では、第４の用量は、３つ以上の用量のうちの第３の用量が対象に投与されてから少なくとも１年後に対象に投与される。

本明細書に記載の特定の実施形態による組み合わせを対象に投与することを含む方法もまた、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、第１の医薬組成物及び第２の医薬組成物は、同じ日に投与される。いくつかの実施形態では、第１の医薬組成物及び第２の医薬組成物は、異なる日に投与される。いくつかの実施形態では、第１の医薬組成物及び第２の医薬組成物は、対象の体の異なる位置で対象に投与される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術は、マラリア感染を治療するために有用であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術は、マラリア感染を予防するために有用であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術に適応可能な対象は、マラリア感染を有するか、またはそれを発症するリスクにある。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術に適応可能な対象は、ヒトである。

いくつかの実施形態では、投与は、対象における抗マラリア免疫応答を誘導する。いくつかの実施形態では、対象における抗マラリア免疫応答は、適応免疫応答を含む。いくつかの実施形態では、対象における抗マラリア免疫応答は、Ｔ細胞応答を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞応答は、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、抗マラリア免疫系応答は、Ｂ細胞応答を含む。いくつかの実施形態では、抗マラリア免疫応答は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ抗原に対して指向される抗体の産生を含む。

本開示の範囲内には、マラリア感染の治療における本明細書に記載されるような医薬組成物の使用、マラリア感染の予防における本明細書に記載されるような医薬組成物の使用、及び対象における抗マラリア免疫応答の誘導における本明細書に記載されるような医薬組成物の使用も含まれる。

また、本開示の範囲内には、本明細書に記載の様々な実施形態によるポリリボヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、本明細書に記載の様々な実施形態によるＲＮＡ構築物によってコードされるポリペプチド、本明細書に記載のポリリボヌクレオチドを含む宿主細胞、本明細書に記載のＲＮＡ構築物を含む宿主細胞、及び本明細書に記載のポリペプチドを含む宿主細胞がある。

ＨＥＫ２９３Ｔ細胞における、異なるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードする非製剤化ＲＮＡ構築物のインビトロ発現を示す。Ａは、発現タンパク質の存在について陽性である総ＨＥＫ２９３Ｔ集団の割合によって測定されるトランスフェクション率を示す。Ｂは、トランスフェクト細胞及び非トランスフェクト細胞の両方についての総ＨＥＫ２９３Ｔ集団の平均蛍光によって測定される総発現を示す。透過性細胞は、発現した総タンパク質（黒色のバー、細胞内染色）を示し、非透過性細胞は、表面発現したタンパク質（灰色のバー、表面染色）のみを示す。各試料を３重に染色し、バーは、平均及びＳＤの表示であり、ＮＴは、非トランスフェクトである。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞における製剤化ＲＮＡ構築物のインビトロ発現を示す。発現タンパク質の存在について陽性である総ＨＥＫ２９３Ｔ集団の割合によって測定されるトランスフェクション率を示す。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞における製剤化ＲＮＡ構築物のインビトロ発現を示す。トランスフェクト細胞及び非トランスフェクト細胞の両方についての総ＨＥＫ２９３Ｔ集団の平均蛍光によって測定される総発現を示す。透過性細胞は、発現した総タンパク質（黒色のバー、細胞内染色）を示し、非透過性細胞は、表面発現したタンパク質（灰色のバー、表面染色）のみを示す。各試料を３重に染色し、バーは、平均及びＳＤの表示である。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞における製剤化ＲＮＡ構築物のインビトロ発現を示す。培養上清中で検出されたタンパク質の量を示しており、各データ点は、３重反復を表し、ＮＴは、非トランスフェクトである。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞における、異なるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチドをコードする非製剤化ＲＮＡ構築物５９及び６０のインビトロ発現を示す。Ａは、発現タンパク質の存在について陽性である総ＨＥＫ２９３Ｔ集団の割合によって測定されるトランスフェクション率を示す。Ｂは、トランスフェクト細胞及び非トランスフェクト細胞の両方についての総ＨＥＫ２９３Ｔ集団の平均蛍光によって測定される総発現を示す。透過性細胞は、発現した総タンパク質（黒色のバー、細胞内染色）を示し、非透過性細胞は、表面発現したタンパク質（灰色のバー、表面染色）のみを示す。タンパク質を、抗ＰｆＣＳＰ２Ａ１０抗体を使用して検出した。各試料を３重に染色し、バーは、平均及びＳＤの表示であり、ＮＴは、非トランスフェクトである。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞における、異なるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチドをコードする非製剤化ＲＮＡ構築物９１、１００、及び１０４のインビトロ発現を示す。Ａは、発現タンパク質の存在について陽性である総ＨＥＫ２９３Ｔ集団の割合によって測定されるトランスフェクション率を示す。Ｂは、トランスフェクト細胞及び非トランスフェクト細胞の両方についての総ＨＥＫ２９３Ｔ集団の平均蛍光によって測定される総発現を示す。透過性細胞は、発現した総タンパク質（黒色のバー、細胞内染色）を示し、非透過性細胞は、表面発現したタンパク質（灰色のバー、表面染色）のみを示す。タンパク質を、抗ＰｆＣＳＰＬ９抗体を使用して検出した。各試料を３重に染色し、バーは、平均及びＳＤの表示であり、ＮＴは、非トランスフェクトである。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞における、異なるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチドをコードする非製剤化ＲＮＡ構築物８７及び８８のインビトロ発現を示す。Ａは、発現タンパク質の存在について陽性である総ＨＥＫ２９３Ｔ集団の割合によって測定されるトランスフェクション率を示す。Ｂは、トランスフェクト細胞及び非トランスフェクト細胞の両方についての総ＨＥＫ２９３Ｔ集団の平均蛍光によって測定される総発現を示す。透過性細胞は、発現した総タンパク質（黒色のバー、細胞内染色）を示し、非透過性細胞は、表面発現したタンパク質（灰色のバー、表面染色）のみを示す。タンパク質を、抗ＰｆＣＳＰＬ９抗体を使用して検出した。各試料を３重に染色し、バーは、平均及びＳＤの表示であり、ＮＴは、非トランスフェクトである。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞における、異なるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチドをコードする製剤化ＲＮＡ構築物８７、８８、９１、１００、及び１０４のインビトロ発現を示す。Ａは、発現タンパク質の存在について陽性である総ＨＥＫ２９３Ｔ集団の割合によって測定されるトランスフェクション率を示す。Ｂは、トランスフェクト細胞及び非トランスフェクト細胞の両方についての総ＨＥＫ２９３Ｔ集団の平均蛍光によって測定される総発現を示す。透過性細胞は、発現した総タンパク質（黒色のバー、細胞内染色）を示し、非透過性細胞は、表面発現したタンパク質（灰色のバー、表面染色）のみを示す。タンパク質を、抗ＰｆＣＳＰＬ９抗体を使用して検出した。各試料を３重に染色し、バーは、平均及びＳＤの表示であり、ＮＴは、非トランスフェクトである。製剤化ＲＮＡ構築物によってマウス中に誘導される免疫原性を示す。Ａは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）ＣＳＰ完全長タンパク質（「ＰｆＣＳＰ－ＦＬ」）に対する抗体を示す。Ｂは、ＰｆＣＳＰＣ末端ドメイン（「ＰｆＣＳＰ－Ｃ」）に対する抗体を示す。各データ点は、１匹のマウスを表し、バーは、平均及びＳＥＭを示す。ＬＤＬは、検出下限である。Ｃは、少数の反復の末端まで、Ｎ末端ドメインの末端に及ぶ領域に対する抗体を示す（「ＰｆＣｓｐ－７６～１４０」）。製剤化ＲＮＡ構築物８７、８８、９１、１００、及び１０４によってマウス中に誘導される免疫原性を示す。Ａは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）ＣＳＰ完全長タンパク質（「ＰｆＣＳＰ－ＦＬ」）に対する抗体を示す。Ｂは、ＰｆＣＳＰＣ末端ドメイン（「ＰｆＣＳＰ－Ｃ末端（３Ｄ７）」）に対する抗体を示す。各データ点は、１匹のマウスを表し、バーは、平均及びＳＥＭを示す。ＬＤＬは、検出下限である。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。図９Ｂ～図９Ｋのデータの視覚的要約をヒートマップの形態で示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。各々、ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。各々、ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。各々、ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。各々、ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。各々、ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。各々、ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。各々、ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。各々、ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。各々、ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。各々、ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。チャレンジ研究中に、異なる製剤化ＲＮＡ構築物８７、８８、９１、１０４、及び１００で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合をヒートマップ形式で示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、様々なエピトープへの結合を示す。ＥＣＬシグナルに対する希釈ステップをプロットするときに作成される曲線下面積（ＡＵＣ）を表すバーを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍスポロゾイト溶解物中のＣＳＰタンパク質への結合特異性を示す。Ａは、発光（ｃｐｓ、１秒当たりのカウント）によって評価されるスポロゾイト（ｓｐｚ）溶解物中の抗体（血清希釈１：１２５０）とＣＳＰタンパク質との間の結合を示す。Ｂは、陰性対照として使用されるマウス抗Ｐｆｓ２５ｍＡｂ３２Ｆ８１と、陽性対照として使用されるマウス抗ＣＳＰｍＡｂ３ＳＰ２との結合を示す。Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍスポロゾイト横断を阻害する能力について、異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。０％の阻害として設定されたビヒクル対照と比較した、横断活性の阻害の割合（平均及びＳＥＭ）としての結果を示す。Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍスポロゾイト横断を阻害する能力について、異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。陰性対照（ビヒクルマウスからの血清、図１３Ｂ）及び陽性対照（ｍＡｂ３１７、主要な反復領域のＮＡＮＰ（配列番号１４７）反復に結合し、横断を阻害することが知られている抗体、図１３Ｃ）の結果を示し、００２、００３、００５、０１２、０１４、及び０１８は、異なる実験の実行を示す。Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍスポロゾイト横断を阻害する能力について、異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。陰性対照（ビヒクルマウスからの血清、図１３Ｂ）及び陽性対照（ｍＡｂ３１７、主要な反復領域のＮＡＮＰ（配列番号１４７）反復に結合し、横断を阻害することが知られている抗体、図１３Ｃ）の結果を示し、００２、００３、００５、０１２、０１４、及び０１８は、異なる実験の実行を示す。初代ヒト肝細胞のＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍスポロゾイト感染を阻害する能力について、異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。Ａ～Ｄは、０％の阻害として設定されたビヒクル対照と比較した、感染活性の阻害の割合（平均及びＳＥＭ）としての結果を示す。Ｅ～Ｆは、陰性対照（ビヒクルマウスからの血清、Ｅ）及び陽性対照（ｍＡｂ３１７、肝細胞感染を阻害することが知られている抗体、Ｆ）からの結果を示す。初代ヒト肝細胞のＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍスポロゾイト感染を阻害する能力について、異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。Ａ～Ｃは、０％の阻害として設定されたビヒクル対照と比較した、感染活性の阻害の割合（平均及びＳＥＭ）としての結果を示す。Ｄ～Ｅは、陰性対照（ビヒクルマウスからの血清、Ｄ）及び陽性対照（ｍＡｂ３１７、肝細胞感染を阻害することが知られている抗体、Ｅ）からの結果を示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体が、ヒト補体に結合し、ＰｆＣＳＰスポロゾイト溶解を誘導する能力を示す。結果は、記録された総事象の割合として、生存している（非溶解）スポロゾイトとして示される。Ａ～Ｃは、希釈を増加させた（それぞれ１：１０、１：１００、及び１：１０００）同じデータを表す。Ｄは、同じ希釈でのビヒクル血清対照を表す。Ｅは、ＰｆＣＳＰに結合し、完全なスポロゾイト溶解を誘導する陽性対照ｍＡｂ３１７抗体、及びスポロゾイト内に発現しないＰｆタンパク質に結合し、したがって、スポロゾイト溶解を誘導しない陰性対照ｍＡｂ１２４５抗体を使用した場合の結果を示す。各データ点は、プールされた血清試料の技術的複製を表し、バーは、平均及びＳＥＭを示す。異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の、完全長ＰｆＣＳＰ及び２つのペプチド（接合部＋少数の反復及び主要な反復）への結合及び解離を示す。同じ構築物によって免疫化した全ての動物からの血清試料を、分析前にプールした。Ａは、それぞれの結合パートナーへの抗体の結合レベルをＲＵで示す。Ｂは、最初の結合から計算された、解離の１５分後に依然として測定可能な抗体：抗原複合体の割合を意味する、残留応答の割合を表す。ＲＵは、相対単位である。ＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図１８Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図１８Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図１８Ｃ）、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図１８Ｄ））、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図１８Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図１８Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図１８Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図１８Ｃ）、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図１８Ｄ））、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図１８Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図１８Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図１８Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図１８Ｃ）、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図１８Ｄ））、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図１８Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図１８Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図１８Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図１８Ｃ）、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図１８Ｄ））、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図１８Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図１８Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図１８Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図１８Ｃ）、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図１８Ｄ））、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図１８Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－αの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図１９Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図１９Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図１９Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図１９Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図１９Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－αの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図１９Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図１９Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図１９Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図１９Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図１９Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－αの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図１９Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図１９Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図１９Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図１９Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図１９Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－αの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図１９Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図１９Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図１９Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図１９Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図１９Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－αの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図１９Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図１９Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図１９Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図１９Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図１９Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２の分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＬ－２分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２０Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２０Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２０Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２０Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２０Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２の分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＬ－２分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２０Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２０Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２０Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２０Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２０Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２の分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＬ－２分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２０Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２０Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２０Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２０Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２０Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２の分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＬ－２分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２０Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２０Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２０Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２０Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２０Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２の分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＬ－２分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２０Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２０Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２０Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２０Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２０Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＬ－２及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２１Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２１Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２１Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２１Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２１Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＬ－２及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２１Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２１Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２１Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２１Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２１Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＬ－２及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２１Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２１Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２１Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２１Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２１Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＬ－２及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２１Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２１Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２１Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２１Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２１Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＬ－２及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２１Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２１Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２１Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２１Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２１Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２２Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２２Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２２Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２２Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２２Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２２Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２２Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２２Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２２Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２２Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２２Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２２Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２２Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２２Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２２Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２２Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２２Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２２Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２２Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２２Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２２Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２２Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２２Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２２Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２２Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α及びＩＬ－２の分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α及びＩＬ－２分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２３Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２３Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２３Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２３Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２３Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α及びＩＬ－２の分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α及びＩＬ－２分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２３Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２３Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２３Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２３Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２３Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α及びＩＬ－２の分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α及びＩＬ－２分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２３Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２３Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２３Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２３Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２３Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α及びＩＬ－２の分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α及びＩＬ－２分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２３Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２３Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２３Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２３Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２３Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α及びＩＬ－２の分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α及びＩＬ－２分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２３Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２３Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２３Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２３Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２３Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２４Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２４Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２４Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２４Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２４Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２４Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２４Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２４Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２４Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２４Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２４Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２４Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２４Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２４Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２４Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２４Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２４Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２４Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２４Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２４Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、及びＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及びＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（ＰｆＣＳＰ＿ＦＬ＿ｐｅｐ、図２４Ａ）、ＭＨＣ－Ｉ（図２４Ｂ）、ＭＨＣ－ＩＩ（図２４Ｃ）上に存在すると予測されるエピトープのペプチド、または対照（例えば、陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ［配列番号４２５］、図２４Ｄ）、４μｇ／ｍＬ、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（図２４Ｅ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＦＮ－γ分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表す。培地及びコンカナバリンＡ対照中の各データ点は、全てのマウスからの脾細胞のプールの３重の平均を表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２の分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＬ－２分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表す。培地及びコンカナバリンＡ対照中の各データ点は、全てのマウスからの脾細胞のプールの３重の平均を表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－αの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＮＦ－α分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ））をカバーする重複ペプチドプールを用いて処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表す。培地及びコンカナバリンＡ対照中の各データ点は、全てのマウスからの脾細胞のプールの３重の平均を表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γ及びＩＬ－２の両方の分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＦＮ－γ＋ＩＬ－２分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表す。培地及びコンカナバリンＡ対照中の各データ点は、全てのマウスからの脾細胞のプールの３重の平均を表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αの両方の分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＦＮ－γ＋＋ＴＮＦ－α分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表す。培地及びコンカナバリンＡ対照中の各データ点は、全てのマウスからの脾細胞のプールの３重の平均を表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２及びＴＮＦ－αの両方の分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＬ－２＋ＴＮＦ－α分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）；陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表す。培地及びコンカナバリンＡ対照中の各データ点は、全てのマウスからの脾細胞のプールの３重の平均を表す。ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、及びＴＮＦ－αの分泌によって評価される、Ｔ細胞の活性化を示す。ＩＦＮ－γ＋ＩＬ－２＋ＴＮＦ－α分泌を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ））をカバーする重複ペプチドプールで処置した単離された脾細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの）を使用して評価した。試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。各データ点は、単一のマウスを表し、バーは、５×１０^５脾細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表す。培地及びコンカナバリンＡ対照中の各データ点は、全てのマウスからの脾細胞のプールの３重の平均を表す。ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γの分泌によって評価される、ＣＤ４Ｔ細胞の活性化のみを示す。ＩＦＮ－γ分泌を、ＭＡＣＳ分離を使用してＣＤ４^＋Ｔ細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞のプールからの）を単離した後にｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイによって評価した。次いで、細胞を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ）、培地対照（Ｄ））をカバーする重複ペプチドプールでインキュベートした。プールした試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。データ点及びバーは、１×１０^５のＣＤ４Ｔ細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２の分泌によって評価される、ＣＤ４Ｔ細胞のみの活性化を示す。ＩＬ－２分泌を、ＭＡＣＳ分離を使用してＣＤ^４＋Ｔ細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞のプールからの）を単離した後にｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイによって評価した。次いで、細胞を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ）、培地対照（Ｄ））をカバーする重複ペプチドプールでインキュベートした。プールした試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。データ点及びバーは、１×１０^５のＣＤ４Ｔ細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－αの分泌によって評価される、ＣＤ４Ｔ細胞の活性化のみを示す。ＴＮＦ－α分泌を、ＭＡＣＳ分離を使用してＣＤ４^＋Ｔ細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞のプールからの）を単離した後にｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイによって評価した。次いで、細胞を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ）、培地対照（Ｄ））をカバーする重複ペプチドプールでインキュベートした。プールした試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。データ点及びバーは、１×１０^５のＣＤ４Ｔ細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γ及びＩＬ－２の両方の分泌によって評価される、ＣＤ４Ｔ細胞のみの活性化を示す。ＩＦＮ－γ＋ＩＬ－２分泌を、ＭＡＣＳ分離を使用してＣＤ４^＋Ｔ細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞のプールからの）を単離した後にｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイによって評価した。次いで、細胞を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ）、培地対照（Ｄ））をカバーする重複ペプチドプールでインキュベートした。プールした試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。データ点及びバーは、１×１０^５のＣＤ４Ｔ細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αの両方の分泌によって評価される、ＣＤ４Ｔ細胞のみの活性化を示す。ＩＦＮ－γ＋ＴＮＦ－α分泌を、ＭＡＣＳ分離を使用してＣＤ４^＋Ｔ細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞のプールからの）を単離した後にｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイによって評価した。次いで、細胞を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ）、培地対照（Ｄ））をカバーする重複ペプチドプールでインキュベートした。プールした試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定したが、データ点及びバーは、１×１０^５のＣＤ４Ｔ細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２及びＴＮＦ－αの両方の分泌によって評価される、ＣＤ４Ｔ細胞のみの活性化を示す。ＩＬ－２＋ＴＮＦ－α分泌を、ＭＡＣＳ分離を使用してＣＤ４^＋Ｔ細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞のプールからの）を単離した後にｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイによって評価した。次いで、細胞を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ）、培地対照（Ｄ））をカバーする重複ペプチドプールでインキュベートした。プールした試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。データ点及びバーは、１×１０^５のＣＤ４Ｔ細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、及びＴＮＦ－αの分泌によって評価される、ＣＤ４Ｔ細胞のみの活性化を示す。ＩＦＮ－γ＋ＩＬ－２＋ＴＮＦ－α分泌を、ＭＡＣＳ分離を使用してＣＤ４^＋Ｔ細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞のプールからの）を単離した後にｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイによって評価した。次いで、細胞を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ）、培地対照（Ｄ））をカバーする重複ペプチドプールでインキュベートした。プールした試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。データ点及びバーは、１×１０^５のＣＤ４Ｔ細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γの分泌によって評価される、ＣＤ８Ｔ細胞のみの活性化を示す。ＩＦＮ－γ分泌を、ＭＡＣＳ分離を使用してＣＤ８^＋Ｔ細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞のプールからの）を単離した後にｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイによって評価した。次いで、細胞を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ）、培地対照（Ｄ））をカバーする重複ペプチドプールでインキュベートした。プールした試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。データ点及びバーは、１×１０^５のＣＤ８Ｔ細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２の分泌によって評価される、ＣＤ８Ｔ細胞のみの活性化を示す。ＩＬ－２分泌を、ＭＡＣＳ分離を使用してＣＤ８^＋Ｔ細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞のプールからの）を単離した後にｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイによって評価した。次いで、細胞を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ）、培地対照（Ｄ））をカバーする重複ペプチドプールでインキュベートした。プールした試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。データ点及びバーは、１×１０^５のＣＤ８Ｔ細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＴＮＦ－αの分泌によって評価される、ＣＤ８Ｔ細胞のみの活性化を示す。ＴＮＦ－α分泌を、ＭＡＣＳ分離を使用してＣＤ８^＋Ｔ細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞のプールからの）を単離した後にｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイによって評価した。次いで、細胞を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ）、培地対照（Ｄ））をカバーする重複ペプチドプールでインキュベートした。プールした試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。データ点及びバーは、１×１０^５のＣＤ８Ｔ細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γ及びＩＬ－２の両方の分泌によって評価される、ＣＤ８Ｔ細胞の活性化のみを示す。ＩＦＮ－γ＋ＩＬ－２分泌を、ＭＡＣＳ分離を使用してＣＤ８^＋Ｔ細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞のプールからの）を単離した後にｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイによって評価した。次いで、細胞を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ）、培地対照（Ｄ））をカバーする重複ペプチドプールでインキュベートした。プールした試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。データ点及びバーは、１×１０^５のＣＤ８Ｔ細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αの両方の分泌によって評価される、ＣＤ８Ｔ細胞のみの活性化を示す。ＩＦＮ－γ＋ＴＮＦ－α分泌を、ＭＡＣＳ分離を使用してＣＤ８^＋Ｔ細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞のプールからの）を単離した後にｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイによって評価した。次いで、細胞を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ）、培地対照（Ｄ））をカバーする重複ペプチドプールでインキュベートした。プールした試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。データ点及びバーは、１×１０^５のＣＤ８Ｔ細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＬ－２及びＴＮＦ－αの両方の分泌によって評価される、ＣＤ８Ｔ細胞のみの活性化を示す。ＩＬ－２＋ＴＮＦ－α分泌を、ＭＡＣＳ分離を使用してＣＤ８^＋Ｔ細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞のプールからの）を単離した後にｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイによって評価した。次いで、細胞を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ）、培地対照（Ｄ））をカバーする重複ペプチドプールでインキュベートした。プールした試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。データ点及びバーは、１×１０^５のＣＤ８Ｔ細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、及びＴＮＦ－αの分泌によって評価される、ＣＤ８Ｔ細胞のみの活性化を示す。ＩＦＮ－γ＋ＩＬ－２＋ＴＮＦ－α分泌を、ＭＡＣＳ分離を使用してＣＤ８^＋Ｔ細胞（異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞のプールからの）を単離した後にｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイによって評価した。次いで、細胞を、完全長ＣＳＰタンパク質（Ａ）または対照（例えば、陰性対照：Ｔｒｐ１、２μｇ／ｍＬ（Ｂ）、陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ（Ｃ）、培地対照（Ｄ））をカバーする重複ペプチドプールでインキュベートした。プールした試料を３重に測定し、陰性対照を重複して測定した。データ点及びバーは、１×１０^５のＣＤ８Ｔ細胞当たりの群平均スポット形成単位（ＳＦＵ）±ＳＤを表し、ｖｅは、ビヒクルである。ＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトでのチャレンジ、ならびにこの免疫化によって誘導される免疫原性に対する、製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスの保護を示す。製剤化ＲＮＡ構築物、ビヒクル、または陽性対照で免疫化したマウスについて、ＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトでのチャレンジ後１１日目までの保護されたマウスの割合を示す。チャレンジの２４時間前に、１００μｇの２Ａ１０モノクローナル抗体を受けたマウスを、陽性対照として使用した。ＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトでのチャレンジ、ならびにこの免疫化によって誘導される免疫原性に対する、製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスの保護を示す。製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウス及びビヒクルのみを注射したマウスについて、ブーストの２週間後（３５日目、図４６Ｂ）及びチャレンジの１日前（４９日目、図４６Ｃ）の完全長ＰｆＣＳＰに対するエンドポイント力価を示す。平均±ＳＥＭ及び個々の動物値を示す。ＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトでのチャレンジ、ならびにこの免疫化によって誘導される免疫原性に対する、製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスの保護を示す。製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウス及びビヒクルのみを注射したマウスについて、ブーストの２週間後（３５日目、図４６Ｂ）及びチャレンジの１日前（４９日目、図４６Ｃ）の完全長ＰｆＣＳＰに対するエンドポイント力価を示す。平均±ＳＥＭ及び個々の動物値を示す。ＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトでのチャレンジ、ならびにこの免疫化によって誘導される免疫原性に対する、製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスの保護を示す。（チャレンジ研究中にＲＮＡ構築物２、２３、及び３９による免疫化によって生成された）抗体の特異的ＰｆＣＳＰエピトープへの結合の視覚的要約を示す。スポロゾイト上の天然ＰｆＣＳＰを認識し、スポロゾイト生存率及び運動性を阻害する能力について、製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。Ａは、固定されたＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトを使用したエンドポイント力価の対数を示す。記号は、個々のマウスからの血清を使用した平均±ＳＥＭを表す。Ｂは、フローサイトメトリー（前方散乱光幅（ＦＳＣ－Ｗ））によって測定される、免疫化したマウスからの血清試料によって誘発されるサーカムスポロゾイト沈降反応（ＣＳＰＲ）の推定長さを示す。記号は、個々のマウスからの血清を使用した平均±ＳＥＭを表す。Ｃは、懸濁液（ＰＢＳ）中のスポロゾイトに対する免疫化マウスからの血清試料の細胞毒性を示す。記号は、個々のマウスからの血清を使用した平均±ＳＥＭを表す。Ｄは、３Ｄ（マトリゲル）における細胞毒性を示す。記号は、個々のマウスからの血清を使用した平均±ＳＥＭを表す。Ｅは、スポロゾイト滑走速度の阻害を示す。円は、各群からのプールされた血清試料の重複の平均±ＳＥＭを表す。ＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトでのチャレンジ、ならびに３つの別個の実験からの免疫化によって誘導される免疫原性に対する、製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスの保護を示す。製剤化ＲＮＡ構築物、ビヒクル（生理食塩水）、または陽性対照で免疫化したマウスについて、ＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトでのチャレンジ後１１日目までの保護されたマウスの割合を示す。チャレンジの２４時間前に、１００μｇの２Ａ１０モノクローナル抗体またはＭｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）を受けたマウスを、陽性対照として使用した。ＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトでのチャレンジ、ならびに３つの別個の実験からの免疫化によって誘導される免疫原性に対する、製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスの保護を示す。製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウス及びビヒクルのみを注射したマウスについて、ブーストの２週間後（３５日目）及びチャレンジの１日前（４９日目）の完全長ＰｆＣＳＰに対するエンドポイント力価を示す。平均±ＳＥＭ及び個々の動物値を示す。チャレンジの２４時間前に、１００μｇの２Ａ１０モノクローナル抗体を受けたマウスを、陽性対照として実験１で使用した。この群からの血清試料を、２Ａ１０による受動免疫化の２０時間後に採取した。５μｇのＭｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）で２回ＩＭを免疫化したマウスを、実験２及び実験３で陽性対照として使用した。ビヒクルで注射したマウスを、全ての実験で陰性対照として使用した。製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。天然のＰｆＣＳＰスポロゾイトを認識する能力について、製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。示されるグラフは、チャレンジ研究の実験１に対応し、固定されたＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトを使用した抗スポロゾイトエンドポイント力価の対数を示す。記号は、個々のマウスからの血清を使用した平均±ＳＥＭを表す。２Ａ１０は、陽性抗体対照、ＩＦＡは、免疫蛍光アッセイである。製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。スポロゾイト滑走運動性を阻害する能力について、製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。示されるグラフは、チャレンジ研究の実験１に対応し、スポロゾイト滑走速度（μｍ／ｓ）を示す。記号は、各群からのプールされた血清試料の重複の平均±ＳＥＭを表す。２Ａ１０は陽性抗体対照、Ｖｅｈはビヒクルである。製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。スポロゾイト表面上で天然ＰｆＣＳＰに結合及び架橋する能力について、製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。示されるグラフは、チャレンジ研究の実験１に対応し、フローサイトメトリー（前方散乱光幅（ＦＳＣ－Ｗ））によって測定されるとき、１７％の免疫血清によって誘発されるサーカムスポロゾイト沈降反応（ＣＳＰＲ）の推定長さを表す。記号は、個々のマウスからの血清を使用した平均±ＳＥＭを表す。２Ａ１０は、陽性抗体対照、Ｖｅｈはビヒクルである。製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。上記の懸濁液（ＰＢＳ）、及び以下の３Ｄ（マトリゲル）におけるスポロゾイトに対する、免疫化マウスからの血清試料中に存在する抗体の細胞毒性を示す。図４９Ｄは、懸濁液中のＰｆＣＳＰ発現のＰ．ベルゲイスポロゾイトに対して測定された１７％の免疫血清の細胞毒性を示し、生存可能なスポロゾイトの割合として提示される。製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。上記の懸濁液（ＰＢＳ）、及び以下の３Ｄ（マトリゲル）におけるスポロゾイトに対する、免疫化マウスからの血清試料中に存在する抗体の細胞毒性を示す。図４９Ｄは、懸濁液中のＰｆＣＳＰ発現のＰ．ベルゲイスポロゾイトに対して測定された１７％の免疫血清の細胞毒性を示し、生存可能なスポロゾイトの割合として提示される。３Ｄマトリゲルにおいて測定され、生理食塩水群に対して正規化された、ＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトに対する１７％の免疫血清の細胞毒性を示す（生存率＝１００％）。記号は、個々のマウスからの血清を使用した平均±ＳＥＭを表す。２Ａ１０は、陽性抗体対照、Ｖｅｈは、ビヒクル、ＰＢＳは、リン酸緩衝生理食塩水である。天然のＰｆＣＳＰスポロゾイトを認識する能力について、５つの優先構築物の製剤化ＲＮＡで免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。各グラフは、異なる実験を表し、固定されたＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトを使用した抗スポロゾイトエンドポイント力価の対数を示す。バーは、個々のマウスからの血清を使用した平均±ＳＥＭを表す。２Ａ１０は、陽性抗体対照、Ｍｏｓは、Ｍｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）陽性対照、ＩＦＡは、免疫蛍光アッセイである。スポロゾイト滑走運動性を阻害する能力について、５つの優先構築物の製剤化ＲＮＡで免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。各グラフは、異なる実験を表し、スポロゾイト滑走速度（μｍ／ｓ）を示す。バーは、各群からのプールされた血清試料の重複（実験１における）または単一反復（実験２及び実験３）の平均±ＳＥＭを表す。２Ａ１０は、陽性抗体対照、Ｍｏｓは、Ｍｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）陽性対照、Ｖｅｈは、ビヒクルである。スポロゾイト表面上で天然ＰｆＣＳＰに結合及び架橋する能力について、５つの優先構築物の製剤化ＲＮＡで免疫化したマウスから生成された抗体の評価を示す。各グラフは、異なる実験を表し、フローサイトメトリー（前方散乱光幅（ＦＳＣ－Ｗ））によって測定されるように、１７％の免疫血清によって誘発されるサーカムスポロゾイト沈降反応（ＣＳＰＲ）の推定長さを示す。記号は、個々のマウスからの血清を使用した平均±ＳＥＭを表す。２Ａ１０は、陽性抗体対照、Ｍｏｓは、Ｍｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）陽性対照、Ｖｅｈは、ビヒクルである。上記の懸濁液（ＰＢＳ）、及び以下の３Ｄ（マトリゲル）におけるスポロゾイトに対する、５つの優先製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化した血清試料中に存在する抗体の細胞毒性を示す。Ａは、懸濁液中のＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトに対して測定された１７％の免疫血清の細胞毒性を示し、生存可能なスポロゾイトの割合として提示される。Ｂは、３Ｄマトリゲルにおいて測定され、生理食塩水群に対して正規化された、ＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトに対する１７％免疫血清の細胞毒性を示す（生存率＝１００％）。各グラフは、独立したチャレンジ実験（実験１、実験２、及び実験３として示す）を表す。バーは、個々のマウスからの血清を使用した平均±ＳＥＭを表す。２Ａ１０は、陽性抗体対照、Ｍｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）は、陽性対照、Ｖｅｈは、ビヒクル、ＰＢＳは、リン酸緩衝生理食塩水である。例示的なＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物の概略図を含む。ＲＮＡ構築物９１における円は、Ｏ－フコース部位を除去するためのＴ３３７Ｎ変異（配列番号１に従って番号付けされる）を示す。

定義
本開示の化合物は、上に概説されるものを含み、本明細書に開示されるクラス、サブクラス及び種によってさらに示される。本明細書で使用する場合、以下の定義を、別段指定されない限り適用するものとする。本開示の目的では、化学元素は、元素周期表、ＣＡＳバージョン、ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＰｈｙｓｉｃｓ、第７５版によって同定した。さらに、有機化学の一般原則は、「ＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ」、ＴｈｏｍａｓＳｏｒｒｅｌｌ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｃｉｅｎｃｅＢｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９、及び「Ｍａｒｃｈ’ｓＡｄｖａｎｃｅｄＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第５版：Ｅｄ．，Ｅｄ．：Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．ａｎｄＭａｒｃｈ，Ｊ．，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ：２００１に記載されており、これらの各々の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。

別段指定されない限り、本明細書に示される構造は、構造の全ての立体異性（例えば、エナンチオマーまたはジアステレオマー）形態、ならびに構造の全ての幾何または立体配座異性形態を含むことを意図している。例えば、各立体中心のＲ及びＳ配置は、本開示の一部として企図される。したがって、提供される化合物の単一の立体化学異性体、ならびにエナンチオマー、ジアステレオマー及び幾何（または立体配座）混合物は、本開示の範囲内にある。例えば、場合によっては、提供される化合物は化合物の１つ以上の立体異性体を示し、別段指定されない限り、各立体異性体を単独で及び／または混合物として表す。別段指定されない限り、提供される化合物の全ての互変異性形態は、本開示の範囲内にある。

別段指定されない限り、本明細書に示される構造は、１つ以上の同位体濃縮原子が存在しているという点でのみ異なっている化合物を含むことを意図している。例えば、重水素または三重水素による水素の置き換え、または１３Ｃまたは１４Ｃ濃縮炭素による炭素の置き換えを含んでいる本構造を有する化合物は、本開示の範囲内にある。

約：「約」という用語は、値に関して本明細書で使用する場合、参照される値と文脈上類似している値を指す。概して、その文脈において「約」により包含される適切な変動の度合いは、文脈に精通している当業者に明らかである。例えば、いくつかの実施形態では、「約」という用語は、参照される値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ未満内のある範囲の値を包含し得る。

薬剤：本明細書で使用する場合、「薬剤」という用語は、物理的実体を指し得る。いくつかの実施形態では、薬剤は、特定の特徴及び／または効果によって特徴付けられ得る。例えば、本明細書で使用する場合、「治療剤」という用語は、治療効果を有する及び／または所望の生物学的及び／または薬理学的効果を誘発する物理的実体を指す。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、小分子、ポリペプチド、核酸、単糖、脂質、金属、またはそれらの組み合わせもしくは複合体が挙げられる、あらゆる化学クラスの化合物、分子、または実体であり得る。

アミノ酸：最も広義には、本明細書で使用する場合、「アミノ酸」という用語は、例えば、１つ以上のペプチド結合の形成により、ポリペプチド鎖中に組み込まれ得るか、組み込まれるか、または組み込まれている化合物及び／または物質を指す。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、一般構造Ｈ_２Ｎ－Ｃ（Ｈ）（Ｒ）－ＣＯＯＨを有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸である。いくつかの実施形態では、アミノ酸は非天然アミノ酸であり、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、Ｄ－アミノ酸であり、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、Ｌ－アミノ酸である。「標準アミノ酸」は、天然に存在するペプチドに一般的に見られる２０種の標準Ｌ－アミノ酸のいずれかを指す。「非標準アミノ酸」とは、合成によって調製されたのか天然の供給源から得られたのかにかかわらず、標準アミノ酸以外の任意のアミノ酸を指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチド中のカルボキシ末端及び／またはアミノ末端のアミノ酸を含めて、アミノ酸は、上記の一般構造と比較して構造上の修飾を含有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、一般構造と比較して、メチル化、アミド化、アセチル化、ペグ化、グリコシル化、リン酸化、及び／または（例えば、アミノ基、カルボン酸基、１つ以上のプロトン、及び／またはヒドロキシル基の）置換によって修飾され得る。いくつかの実施形態では、そのような修飾は、修飾アミノ酸を含有するポリペプチドの循環半減期を、それ以外の点では同一である未修飾アミノ酸を含有するものと比較して変化させ得る。いくつかの実施形態では、そのような修飾によって、修飾アミノ酸を含むポリペプチドの関連する活性は、未修飾のアミノ酸を含む以外同じであるものと比較して、顕著に変化しない。文脈からは明らかであろうが、「アミノ酸」という用語は、いくつかの実施形態では、遊離アミノ酸を指すために使用され得、いくつかの実施形態では、ポリペプチドのアミノ酸残基を指すために使用され得る。

抗原：本明細書で使用する場合、「抗原」という用語は、免疫応答を誘発する作用因子、及び／またはＴ細胞受容体（例えば、ＭＨＣ分子によって提示された場合）もしくは抗体に結合する作用因子を指す。

抗マラリア免疫応答：本明細書で使用する場合、「抗マラリア免疫応答」という用語は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍに由来する１つ以上の抗原に向けられた免疫応答を指す。

関連している：２つの事象または実体が互いに「関連している」とは、本明細書でその用語が使用される場合、一方の存在、レベル、度合い、タイプ及び／または形態が他方のそれらと相関しているときにいう。例えば、特定の実体（例えば、ポリペプチド、遺伝的シグネチャー、代謝物質、微生物など）は、その存在、レベル、及び／または形態が、（例えば、関連する集団にわたって）疾患、障害、または症状の発生、易罹患性、重症度、病期などと相関する場合、特定の疾患、障害、または症状に関連するとみなされる。いくつかの実施形態では、２つ以上の実体は、互いに物理的に近接するように及び／または近接状態を保つように直接的または間接的に相互作用する場合、互いに物理的に「関連」する。いくつかの実施形態では、互いに物理的に関連する２つ以上の実体は、互いに共有結合的に連結している。いくつかの実施形態では、互いに物理的に関連する２つ以上の実体は、互いに共有結合的に連結していないが、例えば、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、磁気、及びそれらの組み合わせによって、非共有結合的に関連している。

Ｃ末端ドメイン：本明細書で使用する場合、「Ｃ末端ドメイン」という用語は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（分離株３Ｄ７）の野生型ＣＳＰ配列（配列番号１）のアミノ酸２７３～３９７に対応するＣＳＰポリペプチドの領域を指す。

Ｃ末端領域：本明細書で使用する場合、「Ｃ末端領域」という用語は、野生型ＣＳＰ配列（配列番号１）のアミノ酸２７３～３７５に対応するＣＳＰポリペプチドの領域を指す。いくつかの実施形態では、セリンは、Ｃ末端領域の直後である。いくつかの実施形態では、セリン及びバリンは、Ｃ末端領域の直後である。

中央ドメイン：「中央ドメイン」という用語は、本明細書で使用する場合、野生型ＣＳＰ配列（配列番号１）のアミノ酸１０５～２７２に対応するＣＳＰポリペプチドの領域を指す。

特徴的な部分：本明細書で使用する場合、「特徴的な部分」という用語は、最も広義には、その存在（または不在）が、ポリペプチドもしくはその領域の特定の特徴、属性、または活性の存在（または不在）と相関する、ポリペプチドもしくはその領域の部分を指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチドもしくはその領域の特徴的な部分は、特定の特徴、属性、または活性を共有するポリペプチドもしくはその領域及び関連ポリペプチドもしくはその領域に見出される部分であるが、特定の特徴、属性または活性を共有しない部分ではない。特定の実施形態では、特徴的な部分は、インタクトなポリペプチドまたはその領域と少なくとも１つの機能的特徴を共有する。例えば、いくつかの実施形態では、ポリペプチドまたはその領域の「特徴的な部分」は、一緒にポリペプチドまたはその領域の特徴であるアミノ酸の連続したストレッチ、またはアミノ酸の連続したストレッチの集合を含むものである。いくつかの実施形態では、各そのような連続したストレッチは、一般に、２、５、１０、１５、２０、５０、またはそれ以上のアミノ酸を含有する。概して、ポリペプチドまたはその領域（例えば、ＣＳＰ、そのＮ末端ドメイン、その主要な反復領域など）の特徴的な部分は、上記で指定された配列及び／または構造的同一性に加えて、関連するインタクトなポリペプチドまたはその領域と少なくとも１つの機能的特徴を共有する部分である。いくつかの実施形態では、特徴的な部分は、生物学的に活性である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような断片は、部分であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、特徴的な断片は、「特性的な部分」であり得る。

併用療法：本明細書で使用する場合、「併用療法」という用語は、対象が２つ以上の治療レジメン（例えば、２つ以上の治療剤（例えば、２つ以上の抗体剤））に同時に曝露される状況を指す。いくつかの実施形態では、２つ以上のレジメンが同時に投与され得、いくつかの実施形態では、そのようなレジメンが逐次投与され得（例えば、第１レジメンの全ての「用量」が、第２レジメンのあらゆる用量の投与に先立って投与され）、いくつかの実施形態では、そのような薬剤が、重複した投薬レジメンで投与される。いくつかの実施形態では、併用療法の施与は、１つ以上の薬剤（複数可）または様式（複数可）を、併用されている他の薬剤（複数可）または様式（複数可）を受けている対象に施与することを伴い得る。明確にするために記すと、併用療法は、個々の薬剤が単一の組成物で一緒に（またはさらには必ず同時に）投与されることを必要としないが、いくつかの実施形態では、２つ以上の薬剤またはそれらの活性部分が、複合組成物で一緒に投与されてもよい。

「同等」という用語は、本明細書で使用する場合、互いに同一ではない可能性があるが、当業者が、観察された相違点または類似点に基づいて結論が合理的に導き出され得ることを理解するそれらの間の比較を可能にするのに十分に類似している２つ以上の薬剤、実体、状況、条件のセットなどを指す。いくつかの実施形態では、比較可能な条件、状況、個人、または集団のセットは、複数の実質的に同一の特徴、及び１つまたは少数の異なる特徴によって特徴付けられる。当業者は、文脈における任意の所与の状況で、２つ以上のそのような薬剤、物質、状況、条件のセットなどが比較可能とみなされるために、どの程度の同一性が必要とされるかを理解するであろう。例えば、当業者は、一連の状況、個体、または集団は、異なる一連の状況、個体、または集団の下で、またはそれらを用いて得られた結果または観察された現象の違いが、変動するそれらの特徴の変動によって引き起こされるか、または特徴の変動を示す合理的な結論を保証するのに十分な数及びタイプの実質的に同一の特徴によって特徴付けられる場合、互いに比較可能であることを理解するであろう。

に対応する：本明細書で使用する場合、「に対応する」という用語は、２つ以上の実体の間の関係性を指す。例えば、「に対応する」という用語は、ある化合物または組成物における構造要素の位置／同一性を、別の化合物または組成物に対して（例えば、適切な参照化合物または組成物に対して）相対的に指定するために使用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ポリマー中のモノマー残基（例えば、ポリペプチド中のアミノ酸残基またはポリヌクレオチド中の核酸残基）を、適切な参照ポリマー中のある残基に「対応する」として同定することができる。例えば、当業者は、簡潔にするためにしばしばポリペプチド中の残基を、参照関連ポリペプチドを基準とした標準的な番号付け体系を用いて指定し、その結果として、特定のアミノ酸鎖において例えば１９０位の残基「に対応する」アミノ酸が、必ずしも実際に１９０^番目のアミノ酸になっていなくてもよく、参照ポリペプチドでの１９０の所に見られる残基に対応するようにしていることを、理解するであろうし、当業者であれば、「対応する」アミノ酸を同定する方法を容易に理解する。例えば、当業者であれば、本開示に従って例えばポリペプチド及び／または核酸の中の「対応する」残基を同定するために利用され得る様々なアラインメント方略、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＣＳ－ＢＬＡＳＴ、ＣＵＳＡＳＷ＋＋、ＤＩＡＭＯＮＤ、ＦＡＳＴＡ、ＧＧＳＥＡＲＣＨ／ＧＬＳＥＡＲＣＨ、Ｇｅｎｏｏｇｌｅ、ＨＭＭＥＲ、ＨＨｐｒｅｄ／ＨＨｓｅａｒｃｈ、ＩＤＦ、Ｉｎｆｅｒｎａｌ、ＫＬＡＳＴ、ＵＳＥＡＲＣＨ、ｐａｒａｓａｉｌ、ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ、ＰＳＩ－Ｓｅａｒｃｈ、ＳｃａｌａＢＬＡＳＴ、Ｓｅｑｕｉｌａｂ、ＳＡＭ、ＳＳＥＡＲＣＨ、ＳＷＡＰＨＩ、ＳＷＡＰＨＩ－ＬＳ、ＳＷＩＭＭまたはＳＷＩＰＥなどのソフトウェアプログラムを認識するであろう。また、「に対応する」という用語が場合によって、別の事象または実体（例えば、適切な参照事象または実体）との意味のある類似性を有している事象または実体を表すために使用され得ることも、当業者には認識されるであろう。一例であるが、ある生物における遺伝子またはタンパク質は、別の生物からの遺伝子またはタンパク質「に対応する」と記載することができる。その目的は、いくつかの実施形態では、それが類似の役割を果たすか、または類似の機能を果たし、及び／または、それが特定の程度の配列同一性もしくは相同性を示すか、または特定の特徴的な配列要素を共有することを、示すためである。

投薬レジメン：当業者は、「投薬レジメン」（または「治療レジメン」）という用語が、典型的には期間を隔てられる、対象に個別に投与される一組の単位用量（典型的には２つ以上）を指すように使用され得ることを十分に理解するであろう。いくつかの実施形態では、所与の治療剤は、１回以上の用量を含み得るものである推奨投薬レジメンを有している。

コードする：本明細書で使用する場合、「コードする」または「コードしている」という用語は、規定のヌクレオチド（例えば、ポリリボヌクレオチド）の配列または規定のアミノ酸の配列を有する第２分子の産生を誘導する第１分子の配列情報を指す。例えば、ＤＮＡ分子は、（例えば、ＤＮＡ依存的ＲＮＡポリメラーゼ酵素を含む転写プロセスによって）ＲＮＡ分子をコードし得る。ＲＮＡ分子は、（例えば、翻訳プロセスによって）ポリペプチドをコードし得る。したがって、遺伝子、ｃＤＮＡまたはＲＮＡ分子は、その遺伝子に対応するＲＮＡの転写及び翻訳によって細胞内または他の生体系内にポリペプチドが産生される場合、ポリペプチドをコードしている。いくつかの実施形態では、標的抗原をコードするポリリボヌクレオチドのコード領域はコード鎖を指し、当該コード鎖のヌクレオチド配列は、そのような標的抗原のポリリボヌクレオチド配列と同一なものである。いくつかの実施形態では、標的抗原をコードするポリリボヌクレオチドのコード領域は、そのような標的抗原の非コード鎖を指し、当該非コード鎖は、遺伝子またはｃＤＮＡの転写のための鋳型として使用され得るものである。

発現：本明細書で使用する場合、核酸配列の「発現」という用語は、核酸配列からの遺伝子産物の生成を指す。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、転写産物、例えば、本明細書に提供されるポリリボヌクレオチドであり得る。いくつかの実施形態では、遺伝子産物はポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、核酸配列の発現は、（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の産生（例えば、転写による）、（２）ＲＮＡ転写産物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集などによる）、（３）ポリペプチドもしくはタンパク質へのＲＮＡの翻訳、及び／または（４）ポリペプチドもしくはタンパク質の翻訳後修飾、のうちの１つ以上を伴う。

ヘルパー抗原：本明細書で使用する場合、「ヘルパー抗原」という用語は、抗原がＣＳＰポリペプチドに由来しない、１つ以上のＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含むポリペプチドに含まれる抗原を指す。

異種：本明細書で使用する場合、「異種」という用語は、分泌シグナルまたは膜貫通領域に関して、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ以外のウイルスまたは生物からの分泌シグナルまたは膜貫通領域を指す。

相同性：本明細書で使用する場合、「相同性」または「相同体」という用語は、ポリヌクレオチド分子（例えばＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間、及び／またはポリペプチド分子間の全体的近縁性を指す。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）及び／またはポリペプチド分子は、それらの配列が少なくとも１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％同一である場合に、互いに相同であるとみなされる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）及び／またはポリペプチド分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％類似している（例えば、対応する位置において、関係する化学的特性を有する残基を含有する）場合に、互いに相同であるとみなされる。例えば、当業者には周知のとおり、特定のアミノ酸は、典型的に「疎水性」アミノ酸または「親水性」アミノ酸として、及び／または、「極性」側鎖または「非極性」側鎖を有するとして、互いに類似すると分類される。同じタイプの別のアミノ酸に対する１つのアミノ酸の置換は、多くの場合「相同」置換とみなされ得る。

同一性：本明細書で使用する場合、「同一性」という用語は、ポリヌクレオチド分子（例えばＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間、及び／またはポリペプチド分子間の全体的近縁性を意味する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）及び／またはポリペプチド分子同士は、それらの配列が少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である場合、互いに「実質的に同一」であるとみなされる。２つの核酸配列またはポリペプチド配列の同一性パーセントの計算は、例えば、最適な比較の目的のために２つの配列を整列させることによって実施され得る（例えば、最適なアラインメントのために第１及び第２配列の片方または両方にギャップが導入され得、比較目的のために非同一配列が無視され得る）。特定の実施形態では、比較目的のために整列させる配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または実質的に１００％である。そして、対応する位置のヌクレオチドを比較する。第１の配列における位置が、第２の配列における対応する位置と同じ残基によって占有される場合には、それらの分子は、その位置において同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮したうえで、配列によって共有される同一の位置の数の関数となる。配列の比較及び２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。例えば、２つのヌクレオチド配列の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＭｅｙｅｒｓとＭｉｌｌｅｒ（１９８９）のアルゴリズムを使用して求めることができる。いくつかの例示的な実施形態では、ＡＬＩＧＮプログラムを用いて行われる核酸配列比較は、ＰＡＭ１２０重み残基表、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティを用いる。代替的に、２ヌクレオチド配列間での同一性パーセントは、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを使用するＧＣＧソフトウェアパッケージ内のＧＡＰプログラムを用いて決定され得る。

増加した、誘導された、または低減された：本明細書で使用する場合、これらの用語または文法的に同等な比較用語は、比較可能な参照測定値と比べての値を指し示している。例えば、いくつかの実施形態では、提供される組成物（例えば、医薬組成物）を用いてもたらされた評価値は、比較可能な参照組成物を用いて得られた評価値に比べて「増加」し得る。代替的または追加的に、いくつかの実施形態では、対象においてもたらされた評価値は、同じ対象において異なる条件下で（例えば、事象の前もしくは後に、または事象、例えば本明細書に記載の組成物（例えば医薬組成物）の投与の存在下もしくは不在下で）得られたかまたは異なる比較可能な対象において（例えば、前もって条件、例えば本明細書に記載の組成物（例えば医薬組成物）の投与の不在に曝された点で目的の対象とは異なっている比較可能な対象において）得られた評価値に比べて、「増加」し得る。いくつかの実施形態では、比較用語は、（例えば、統計的重要性をもたらすのに十分な優勢及び／または規模の）統計的に重要な差異があることを意味する。所定の状況において、そのような統計的有意性を得るために必要なまたは十分な差異の程度及び／または広がりを決定することは、当業者に認識されているか、当業者が容易にできることである。いくつかの実施形態では、「低減」という用語または同等の用語は、評価値のレベルが、比較可能な参照に対して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、またはそれ以上低減していることを指す。いくつかの実施形態では、「低減」という用語または同等の用語は、完全な阻害または実質的に完全な阻害を指し、すなわち、ゼロまたは実質的にゼロへの低減を指す。いくつかの実施形態では、「増加した」または「誘導された」という用語は、同等の参照と比較して、評価値のレベルが少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、少なくとも５００％、またはそれ以上増加することを指す。

順で：ポリヌクレオチドまたはポリリボヌクレオチドに関して本明細書で使用する場合、「順で」は、ポリヌクレオチドまたはポリリボヌクレオチドに沿った５’から３’の特徴の順序を指す。ポリペプチドに関して本明細書で使用する場合、「順で」は、ポリペプチドに沿って最もＮ末端側にある特徴部から最もＣ末端側にある特徴部へと移動する特徴部の順序を指す。「順で」は、列挙された特徴部の間にさらなる特徴部が存在し得ないことを意味するものではない。例えば、ポリヌクレオチドの特徴部Ａ、Ｂ及びＣが、「順で、特徴部Ａ、特徴部Ｂ及び特徴部Ｃ」であるものとして本明細書に記載されている場合、この記載は、例えば特徴部Ｄが特徴部Ａと特徴部Ｂとの間に位置していることを排除するものではない。

単離された：「単離された」という用語は、天然状態から修飾または除去されることを意味する。例えば、生きている動物の中に天然に存在する核酸またはペプチドは、「単離され」てはいないが、その天然状態の共存物質から部分的または完全に分離された同じ核酸またはペプチドは、「単離され」ている。単離された核酸またはタンパク質は、実質的に精製された形態で存在することができるか、または例えば、宿主細胞などの非天然環境に存在することができる。

接合部：本明細書で使用する場合、「接合部」という用語は、野生型ＣＳＰ配列（配列番号１）のアミノ酸９８～１０４に対応するＣＳＰポリペプチドの領域を指す。

接合部領域：本明細書で使用する場合、「接合部領域」という用語は、野生型ＣＳＰ配列（配列番号１）のアミノ酸９３～１０４に対応するＣＳＰポリペプチドの領域を指す。

接合部領域バリアント：本明細書で使用する場合、「接合部領域バリアント」という用語は、野生型ＣＳＰ配列（配列番号１）のアミノ酸９３～１０４と比較して、１つ以上の置換変異を含む接合部領域を指す。

リンカー：本明細書で使用する場合、「リンカー」という用語は、異なる領域、部分、または抗原を互いに接続するポリペプチドの部分を指す。

脂質：本明細書で使用する場合、「脂質」及び「脂質様物質」という用語は、１つ以上の疎水性部分または基、及び任意選択的に１つ以上の親水性部分または基を含む分子として広義に定義される。疎水性部分及び親水性部分を含む分子もまた、典型的には両親媒性物質として示される。

主要な反復領域：本明細書で使用する場合、「主要な反復領域」という用語は、野生型ＣＳＰ配列（配列番号１）のアミノ酸１２９～２７２に対応し、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の３５の反復を含むＣＳＰポリペプチドの領域を指す。アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の３５の反復が２つの連続したストレッチに分離され、第１のストレッチは、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の１７の反復を含み、第２のストレッチは、ＮＶＤＰ（配列番号１４４）のアミノ酸配列に隣接するアミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の１８の反復を含む。主要な反復領域の部分は、少なくともアミノ酸配列ＮＰＮＡ（配列番号１４１）を含む。好ましくは、主要な反復領域の部分は、少なくともアミノ酸配列ＮＡＮＰＮＡ（配列番号１５３）及びＮＰＮＡＮＰ（配列番号１５０）を含む。本明細書で使用する場合、配列Ａに関して「反復」は、配列Ａが１回存在することを指し、配列Ａの「１つ以上の反復」は、配列Ａが１回以上存在することを指す。

メロゾイト期特異的Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ抗原：本明細書で使用する場合、「メロゾイト期特異的Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ抗原」という用語は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ生活環のメロゾイト期中に発現される抗原を指す。

少数の反復領域：本明細書で使用する場合、「少数の反復領域」という用語は、野生型ＣＳＰ配列（配列番号１）のアミノ酸１０５～１２８に対応し、アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＶＤＰ（配列番号１０２）の３つの反復を含むＣＳＰポリペプチドの領域を指す。少数の反復領域は、アミノ酸配列ＮＰＮＡ（配列番号１４１）を含まず、アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＡ（配列番号１５３）またはＮＰＮＡＮＰ（配列番号１５０）を含まない。本明細書で使用する場合、配列Ａに関して「反復」は、配列Ａが１回存在することを指し、配列Ａの「３つの反復」は、配列Ａが３回以上存在することを指す。

多量体化領域：本明細書で使用する場合、「多量体化領域」という用語は、多量体のアセンブリを複合体へと導く領域を指し、各多量体は、多量体化領域に関連するポリペプチドを含む。

Ｎ末端ドメイン：本明細書で使用する場合、「Ｎ末端ドメイン」という用語は、野生型ＣＳＰ配列（配列番号１）のアミノ酸１９～９２に対応するＣＳＰポリペプチドの領域を指す。

Ｎ末端端部領域：本明細書で使用する場合、「Ｎ末端端部領域」という用語は、野生型ＣＳＰ配列（配列番号１）のアミノ酸８１～９２に対応するＣＳＰポリペプチドの領域を指す。

Ｎ末端領域：本明細書で使用する場合、「Ｎ末端領域」という用語は、野生型ＣＳＰ配列（配列番号１）のアミノ酸１９～８０に対応するＣＳＰポリペプチドの領域を指す。

ＲＮＡ脂質ナノ粒子：本明細書で使用する場合、「ＲＮＡ脂質ナノ粒子」という用語は、少なくとも１つの脂質と、ＲＮＡ分子（複数可）、例えば本明細書に提供される１つ以上のポリリボヌクレオチドとを含むナノ粒子を指す。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ脂質ナノ粒子は、少なくとも１つの陽イオン性アミノ脂質を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ脂質ナノ粒子は、少なくとも１つの陽イオン性アミノ脂質、少なくとも１つのヘルパー脂質、及び少なくとも１つのポリマー結合脂質（例えば、ＰＥＧ結合脂質）を含む。様々な実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡ脂質ナノ粒子は、約１００ｎｍ～１０００ｎｍ、または約２００ｎｍ～９００ｎｍ、または約２００ｎｍ～８００ｎｍ、または約２５０ｎｍ～約７００ｎｍの平均サイズ（例えば、Ｚ平均）を有することができる。本開示のいくつかの実施形態では、ＲＮＡ脂質ナノ粒子は、約３０ｎｍ～約２００ｎｍ、または約３０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約５０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１３０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１００ｎｍ、約８０ｎｍ～約１００ｎｍ、約９０ｎｍ～約１００ｎｍ、約７０～約９０ｎｍ、約８０ｎｍ～約９０ｎｍ、または約７０ｎｍ～約８０ｎｍの粒径（例えば、Ｚ平均）を有し得る。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子の平均粒径は、平均粒子直径を測定することによって決定される。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ脂質ナノ粒子は、脂質を本明細書に記載のＲＮＡ分子と混合することによって調製され得る。

中和：本明細書で使用する場合、「中和」という用語は、抗体などの結合剤が、受容体結合タンパク質などの寄生虫の生物学的活性部位に結合し、それによって細胞の寄生虫感染を阻害する事象を指す。いくつかの実施形態では、「中和」という用語は、結合剤が細胞に感染する能力を排除するか、または顕著に低減する事象を指す。

核酸／ポリヌクレオチド：本明細書で使用する場合、「核酸」という用語は、少なくとも１０ヌクレオチド以上のポリマーを指す。いくつかの実施形態では、核酸は、ＤＮＡであるかまたはＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡであるかまたはＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）であるか、またはペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、一本鎖核酸であるか、または一本鎖核酸を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、二本鎖核酸であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、一本鎖部分及び二本鎖部分を両方とも含む。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のホスホジエステル結合を含む主鎖を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合及び非ホスホジエステル結合の両方を有する骨格を含む。例えば、いくつかの実施形態では、核酸は、例えば、「ペプチド核酸」のように、１つ以上のホスホロチオエート結合もしくは５’－Ｎ－ホスホルアミダイト結合及び／または１つ以上のペプチド結合を含む骨格を含み得る。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の、または全ての天然残基（例えば、アデニン、シトシン、デオキシアデノシン、デオキシシチジン、デオキシグアノシン、デオキシチミジン、グアニン、チミン、ウラシル）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の、または全ての非天然残基を含む。いくつかの実施形態では、非天然残基は、ヌクレオシド類似体（例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロ－ピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ－５プロピニル－シチジン、Ｃ－５プロピニル－ウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、６－Ｏ－メチルグアニン、２－チオシチジン、メチル化塩基、インターカレート塩基、及びそれらの組み合わせ）を含む。いくつかの実施形態では、非天然残基は、天然残基のものと比較して、１つ以上の修飾糖（例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノース、及びヘキソース）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡまたはポリペプチドなどの機能的遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のイントロンを含むヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸は、天然源からの単離、酵素合成（例えば、インビボまたはインビトロでの相補的鋳型に基づく重合による）、組換え細胞もしくは系における複製、または化学合成によって調製され得る。いくつかの実施形態では、核酸は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９０００、９５００、１０，０００、１０，５００、１１，０００、１１，５００、１２，０００、１２，５００、１３，０００、１３，５００、１４，０００、１４，５００、１５，０００、１５，５００、１６，０００、１６，５００、１７，０００、１７，５００、１８，０００、１８，５００、１９，０００、１９，５００もしくは２０，０００個、またはそれよりも多い残基またはヌクレオチドの長さである。

薬学的有効量：「薬学的有効量」または「治療有効量」という用語は、単独で、またはさらなる用量と一緒に、所望の反応または所望の効果をもたらす量を指す。特定の疾患（例えば、マラリア）の治療の場合、いくつかの実施形態における所望の反応は、疾患（例えば、マラリア）の経過の阻害に関する。いくつかの実施形態では、そのような阻害は、疾患（例えば、マラリア）の経過を遅くすること、及び／または疾患（例えば、マラリア）の経過を中断すること、または逆転させることを含み得る。いくつかの実施形態では、疾患（例えば、マラリア）の治療における所望の反応は、疾患（例えば、マラリア）または状態（例えば、マラリア関連状態）の発症の遅延または予防であり得るか、またはそれを含み得る。本明細書に記載の有効量の組成物（例えば、医薬組成物）は、例えば、治療されるべき疾患（例えば、マラリア）または状態（例えば、マラリア関連状態）、そのような疾患（例えば、マラリア）または状態（例えば、マラリア関連状態）の重症度、例えば、年齢、生理学的状態、サイズ及び体重、治療の期間、付随する療法のタイプ（存在する場合）、特定の投与経路及び類似の要因を含む、患者の個々のパラメータに依存する。したがって、本明細書に記載の組成物（例えば、医薬組成物）の用量は、様々なそのようなパラメータによって決まり得る。患者における反応が初回用量では不十分な場合には、より高い用量（または異なる、より局所的な投与経路によって達成される、効果的により高い用量）が使用され得る。

ポリペプチド：本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸のポリマー鎖を指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然に存在するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然に存在しないアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、人の作用によって設計及び／または産生されているという点で操作されたアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、またはその両方を含み得るかまたは天然アミノ酸、非天然アミノ酸、またはその両方からなり得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然アミノ酸のみまたは非天然アミノ酸のみを含み得るかまたは天然アミノ酸のみまたは非天然アミノ酸のみからなり得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｄ－アミノ酸、Ｌ－アミノ酸、またはその両方を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｄ－アミノ酸のみを含み得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸のみを含み得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、１つ以上のペンダント基または他の修飾を含み得、例えば、ポリペプチドのＮ末端、ポリペプチドのＣ末端、またはそれらの任意の組み合わせにおいて、１つ以上のアミノ酸側鎖を修飾するかまたは１つ以上のアミノ酸側鎖についた１つ以上のペンダント基または他の修飾を含み得る。いくつかの実施形態では、そのようなペンダント基または修飾は、アセチル化、アミド化、脂質化、メチル化、ペグ化など（それらの組み合わせを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、環状であり得、及び／または環状部分を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、環状ではなく、及び／または環状部分を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは線状である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ステープルポリペプチドであり得るかまたはステープルポリペプチドを含み得る。いくつかの実施形態では、「ポリペプチド」という用語は、参照するポリペプチド、活性、または構造の名称に付与されることがあり、そのような場合、それは、関連する活性または構造を共有し、したがってポリペプチドの同じクラスまたはファミリーのメンバーとみなし得るポリペプチドを指すために使用される。そのようなクラスの各々について、アミノ酸配列及び／または機能が既知であるクラス内の例示的ポリペプチドを、本明細書は示し、及び／または、当業者は認識するであろう。いくつかの実施形態では、そのような例示的ポリペプチドは、ポリペプチドのクラスまたはファミリーについての参照ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドのクラスまたはファミリーのメンバーは、当該クラスの参照ポリペプチドと（いくつかの実施形態では、当該クラス内の全てのポリペプチドと）、顕著な配列相同性または同一性を示し、共通の配列モチーフ（例えば、特徴的な配列要素）を共有し、及び／または、共通の活性（いくつかの実施形態では、同等のレベルまたは指定範囲内の活性）を共有する。例えば、いくつかの実施形態では、メンバーのポリペプチドは、参照ポリペプチドとの少なくとも約３０～４０％、しばしば約５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超、９１％超、９２％超、９３％超、９４％超、９５％超、９６％超、９７％超、９８％超、９９％超の、もしくはそれを上回る全体的な配列相同性もしくは同一性の度合いを示し、及び／またはしばしば９０％超かもしくは場合によっては９５％超、９６％超、９７％超、９８％超もしくは９９％超の非常に高い配列同一性を示す少なくとも１つの領域（例えば、いくつかの実施形態では特徴的な配列要素であり得るかまたはそれを含み得る、保存された領域）を含む。そのような保存された領域は、通常、少なくとも３～４つ、しばしば最大３５以上のアミノ酸を包含し、いくつかの実施形態では、保存された領域は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５またはそれよりも多くの連続したアミノ酸の少なくとも１つのストレッチを包含する。いくつかの実施形態では、関連するポリペプチドは、親ポリペプチドの断片を含み得るか、またはそれからなり得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物である。Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍタンパク質、またはその１つ以上の部分を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの少なくとも１つの領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、本明細書に記載されるように、分泌シグナル（例えば、異種分泌シグナル）、膜貫通領域（例えば、異種膜貫通領域）、ヘルパー抗原、多量体化領域、及び／またはリンカーなどの１つ以上の追加のアミノ酸配列をさらに含む。

本明細書で使用する場合、「予防する」または「予防」という用語は、疾患、障害、及び／または状態の発生と関連して使用される場合、疾患、障害、及び／または病態が生じるリスクの低減、及び／または疾患、障害、もしくは状態の１つ以上の特徴もしくは症状の発生遅延を意味する。防止は、事前に定義された期間の間、疾患、障害、または病態の発症を遅延させた場合、完了したとみなし得る。いくつかの実施形態では、予防は、臨床的マラリアを発症するリスクを低減することを指す。

Ｒ１：本明細書で使用する場合、「Ｒ１」という用語は、野生型ＣＳＰ配列（配列番号１）のアミノ酸９３～９７に対応するＣＳＰポリペプチドの領域を指す。

参照：本明細書で使用する場合、「参照」という用語は、比較対象となる基準または対照を表す。例えば、いくつかの実施形態では、目的の薬剤、動物、個体、集団、試料、配列または値は、参照または対照薬剤、動物、個体、集団、試料、配列または値と比較される。いくつかの実施形態では、参照または対照は、目的の試験または測定と実質的に同時に、試験及び／または測定される。いくつかの実施形態では、参照または対照は、任意選択的に有形的表現媒体に具現化されたヒストリカルな参照または対照である。典型的には、当業者には明らかなように、参照または対照は、評価対象と比較可能な条件または状況下で測定または特性評価される。当業者は、考えられる特定の参照または対照への依存及び／または比較を正当化するのに十分な類似性が存在する場合を理解するであろう。

リボ核酸（ＲＮＡ）またはポリリボヌクレオチド：本明細書で使用する場合、「リボ核酸」、「ＲＮＡ」、または「ポリリボヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチドのポリマーを指す。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、一本鎖である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、二本鎖である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、一本鎖部分及び二本鎖部分を両方とも含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、上記の「核酸／ポリヌクレオチド」の定義の中で記載されている主鎖構造を含み得る。ＲＮＡは、調節ＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡなど）、またはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であり得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、ｍＲＮＡである。ＲＮＡがｍＲＮＡであるいくつかの実施形態では、ＲＮＡは、通常、その３’末端にポリ（Ａ）領域を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、ｍＲＮＡであり、ＲＮＡは、典型的には、例えば、翻訳を開始するためにｍＲＮＡを認識してリボソームに付着させるための当該技術分野で認識されているキャップ構造をその５’末端に含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは合成ＲＮＡである。合成ＲＮＡとしては、インビトロで（例えば、酵素合成法及び／または化学合成法によって）合成されるＲＮＡが挙げられる。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドは、ポリペプチドをコードし、これは好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物である。

リボヌクレオチド：本明細書で使用する場合、「リボヌクレオチド」という用語は、非修飾リボヌクレオチド及び修飾リボヌクレオチドを包含する。例えば、未修飾リボヌクレオチドとしては、プリン塩基であるアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基であるシトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）が挙げられる。修飾リボヌクレオチドは、例えば、（ａ）末端修飾、例えば、５’末端修飾（例えば、リン酸化、脱リン酸化、コンジュゲーション、反転結合など）、３’末端修飾（例えば、コンジュゲーション、反転結合など）、（ｂ）塩基修飾、例えば、修飾塩基、安定化塩基、不安定化塩基、またはパートナーの拡大されたレパートリーと塩基対を有する塩基、または共役塩基への置き換え、（ｃ）糖修飾（例えば、２’位または４’位における）または糖の置き換え、及び（ｄ）ホスホジエステル結合の修飾または置き換えを含む、ヌクレオシド間結合修飾を含むが、これらに限定されない、１つ以上の修飾を含み得る。「リボヌクレオチド」という用語は、修飾及び非修飾リボヌクレオチドトリホスフェートを含むリボヌクレオチドトリホスフェートも包含する。

分泌シグナル：本明細書で使用する場合、「分泌シグナル」という用語は、分泌経路への移行ための関連ポリペプチドを標的とするアミノ酸配列モチーフを指す。

対象：本明細書で使用する場合、「対象」という用語は、例えば実験、診断、予防及び／または治療を目的として本明細書に記載の組成物を投与される生物を指す。典型的な対象として、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長動物、家庭のペットなど）及びヒトが挙げられる。いくつかの実施形態では、対象は、ヒト対象である。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）に感受性がある。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）の１つ以上の症状または特徴を示す。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）の１つ以上の非特異的症状を示す。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）のいかなる症状または特徴も示さない。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）への感受性またはそのリスクに特徴的な１つ以上の特徴を有する者である。いくつかの実施形態では、対象は患者である。いくつかの実施形態では、対象は、診断及び／または療法が施される及び／または施された個体である。

罹患している：疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／または、マラリア関連状態）に「罹患している」個体は、疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状を有する、及び／またはそれらを示す。

に感受性がある：疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）「に感受性がある」個体は、一般市民のメンバーよりも、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）を発症するより高いリスクを有する個体である。いくつかの実施形態では、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）に感受性がある個体は、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）があると診断されていない場合がある。いくつかの実施形態では、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）に感受性がある個体は、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）の症状を呈する場合がある。いくつかの実施形態では、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）に感受性がある個体は、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）の症状を呈さない場合がある。いくつかの実施形態では、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）に感受性がある個体は、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）を発症する。いくつかの実施形態では、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）に感受性がある個体は、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）の症状を呈さない。

療法：「療法」という用語は、治療効果を有する、及び／または所望の生物学的及び／または薬理学的効果を誘発する（例えば、関連する集団に投与されると、そのような効果を有する可能性が統計的に高いことが実証されている）薬剤または介入の投与または送達を指す。いくつかの実施形態では、治療薬または療法は、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）の１つ以上の症状または特徴を緩和する、改善する、軽減する、阻害する、予防する、発生を遅延させる、重症度を低減させる、及び／または発生率を低減させるために使用され得る任意の物質である。いくつかの実施形態では、治療薬または療法は、疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状または特徴を緩和する、軽減する、阻害する、提示する、発生を遅延させる、重症度を低減させる、及び／または発生率を低減させるために実施され得る医学的介入である。

膜貫通領域：本明細書で使用する場合、「膜貫通領域」という用語は、細胞の形質膜などの生体膜に及ぶポリペプチドの領域を指す。

治療する：本明細書で使用する場合、「治療する」、「治療」、または「治療すること」は、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）の１つ以上の症状または特徴を部分的または完全に緩和する、改善する、軽減する、阻害する、予防する、発生を遅延させる、重症度を低減させる、及び／または発生率を低減させるために使用される任意の方法を意味する。治療は、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）の徴候を呈さない対象に施行されてもよい。いくつかの実施形態では、治療は、例えば、疾患、障害、及び／または状態に関連する状態を生じるリスクを低下させる目的で、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）の初期徴候のみを呈する対象に施行されてもよい。いくつかの実施形態では、治療は、疾患、障害、及び／または状態（例えば、マラリア及び／またはマラリア関連状態）の後期段階で対象に施行されてもよい。

バリアント：本明細書で使用する場合、「バリアント」という用語は、参照分子との顕著な構造的（例えば、一次的または二次的）同一性を示すが、参照分子とは構造的に異なる分子を指す。例えば、バリアントポリペプチドまたは核酸は、アミノ酸またはヌクレオチド配列における１つ以上の差、及び／または、ポリペプチドまたは核酸の共有結合的構成要素（例えば、ポリペプチドまたは核酸骨格が付着している）である化学部分（例えば、炭水化物、脂質、リン酸基）における１つ以上の差の結果として、参照ポリペプチドまたは核酸とは異なる場合がある。

特定の実施形態の詳細な説明
Ｉ．マラリア
マラリアは、Ａｎｏｐｈｅｌｅｓｓｐｐ．蚊の咬傷によって伝播する単細胞真核生物Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫によって引き起こされる蚊媒介性感染症である（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｍ．，ｅｔａｌ．Ｍａｌａｒｉａ．ＮａｔＲｅｖＤｉｓＰｒｉｍｅｒｓ３，１７０５０，２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。マラリアを伝播する蚊は、感染した対象（例えば、ヒト）から採取した以前のブラッドミールを通じて感染していなければならない。蚊が感染した対象を刺すときに、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫を含む少量の血液が採取される。次いで、感染した蚊がその後に非感染対象を刺し、対象を感染させ得る。

マラリアは依然として最も深刻な感染症の１つであり、年間およそ２億の臨床症例及び５０万人～６０万人の死亡を引き起こしている。マラリアの治療的処置の開発に多大な努力が費やされてきたが、多くのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫は、利用可能な治療法に対して耐性を発達させてきた。ＭａｌａｒｉａＥｒａｄｉｃａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈＡｇｅｎｄａＩｎｉｔｉａｔｉｖｅによると、マラリア根絶は効果的なワクチン接種を通してのみ達成可能である。

２０１５年、ＥｕｒｏｐｅａｎＭｅｄｉｃｉｎｅｓＡｇｅｎｃｙは、マラリアワクチン開発のマイルストーンである「ＲＴＳ，Ｓ」として知られるマラリアワクチン候補に肯定的なレビューを与えた。２０１９年、ＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎは、３つのサハラ以南のアフリカ諸国の一部で、少なくとも生後５ヶ月の小児にＲＴＳ、Ｓを提供するパイロットプログラムを開始した。ＲＴＳ，Ｓ／ＡＳ０１は、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に融合したＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからのＣＳＰの主要な反復領域及びＣ末端の部分からなるアジュバント化タンパク質サブユニットワクチンである。ワクチンは、このＰｆＣＳＰ－ＨＢｓＡｇ化合物と、ウイルス様粒子（ＲＴＳ，Ｓ／ＡＳ０１、Ｍｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標））を形成するＨＢｓＡｇとのミックスである。ＲＴＳ、Ｓは、４つの用量：少なくとも１ヶ月間隔で与えられる最初の３用量スケジュール、及び用量３の１５～１８ヶ月後の第４の用量を必要とするレジメンに従って投与される（例えば、Ｖａｎｄｏｏｌａｅｇｈｅ＆ＳｃｈｕｅｒｍａｎＥｘｐｅｒｔＲｅｖＶａｃｃｉｎｅｓ．１５：１４８１，２０１６；ＰＡＴＨ＿ＭＶＩ＿ＲＴＳＳ＿ＦａｃｔＳｈｅｅｔ＿０４２０１９を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。報告によると、ＲＴＳ，Ｓは、１８ヶ月間にわたって小児のおよそ３０％～５０％を臨床疾患から保護することが示される。ＲＴＳ，Ｓは、保護抗体及びＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘導するが、無視できるほどのＣＤ８＋Ｔ細胞応答のみを誘導することが報告されている（例えば、Ｍｏｒｉｓｅｔａｌ．ＨｕｍＶａｃｃｉｎＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ１４：１７，２０１８を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ブースターによる３用量シリーズとして生後５～１７ヶ月の小児に送達されたＲＴＳ，Ｓの第ＩＩＩ相試験は、１ｙｒ（年）後に、生後５～１７ヶ月の小児において中等度のワクチン有効性を示して、全研究期間にわたって臨床的マラリア症例の３６％を予防し、追跡期間中央値は４年であり、伝播設定は、高くて２０％～低くて６６％の範囲であった。さらに、公開された文献は、高マラリア曝露の小児における５年後の潜在的な負の有効性の報告を含む、経時的に保護が衰えることを示唆している（Ｏｌｏｔｕｅｔａｌ．２０１６，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７４：２５１９－２９を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。したがって、有効なマラリアワクチンは、世界の健康にとって非常に重要な、いまだ満たされていない医療ニーズのままである。

Ａ．ライフサイクル
ブラッドミール中、感染した蚊は、その抗凝固唾液とともに、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｓｐｐ．の肝病期として知られるスポロゾイトを注入する。スポロゾイトは、皮膚を通ってリンパ管へと移動し、肝臓の肝細胞へと移動する。この移動は非常に迅速に行われ、わずか数分で完了し得る（Ｓｉｎｎｉｓｅｔａｌ．，ＰａｒａｓｉｔｏｌＩｎｔ．２００７Ｓｅｐ；５６（３）：１７１－８を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。これは、ほんの少数（最大で数百であると考えられる）のスポロゾイトが蚊によって注入され、その数のほんの一部が肝臓に感染を確立し、成熟した肝病期寄生虫に発達するため、治療介入に最も好ましいマラリア感染のボトルネックであることが知られる時間である（Ｆｌｏｒｅｓ－Ｇａｒｃｉａｅｔａｌ．，ｍＢｉｏ．２０１８Ｎｏｖ２０；９（６）：ｅ０２１９４－１８、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。したがって、免疫系が、肝細胞に入る前にスポロゾイトをクリアするようにプライミングされている対象は、感染を効率的にクリアすることができる。

このボトルネック中にマラリア感染をクリアすることに関連する１つの特定の課題は、スポロゾイト表面上の最も豊富で免疫原性のあるタンパク質、サーカムスポロゾイトタンパク質（ＣＳＰ）が、蚊からの可変的に低い接種及び接種後の肝細胞感染の動態に起因して、少量かつ短時間だけ免疫系に曝露されることである。肝臓感染が確立された後、寄生虫は、もはやＣＳＰを発現せず、代わりに表面抗原の異なるモザイクを有する段階へと分化する。さらに、抗体の二価性と結合された寄生虫の表面上の隣接するＣＳＰの密度及び近接性に起因して、ＣＳＰへの抗体の結合は、ＣＳＰ沈降反応と呼ばれる現象を生じさせることができ、それによって、抗体は、隣接するＣＳＰを架橋し、それらを沈降させて寄生虫表面から脱落させ、寄生虫がその通常のＣＳＰ移行プロセス中に置き換えることができる沈降させた抗体結合したＣＳＰのトレイルを残すことができる（Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅｅｔａｌ．，ＳｃｉＲｅｐ１１，５３１８（２０２１）；Ｓｔｅｗａｒｄｅｔａｌ．，ＪＰｒｏｔｏｚｏｏｌ．１９９１Ｊｕｌ－Ａｕｇ；３８（４）：４１１－２１に記載されており、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

皮膚の接種部位から肝臓へと移動する際、スポロゾイトは宿主細胞を横断する（Ｍｏｔａｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２００１Ｊａｎ５；２９１（５５０１）：１４１－４）。スポロゾイトは、肝細胞へのアクセスを得るために、線維芽細胞及び食細胞を含む、真皮における異なるタイプの宿主細胞を横断する（Ａｍｉｎｏｅｔａｌ．，ＣｅｌｌＨｏｓｔＭｉｃｒｏｂｅ．２００８Ｆｅｂ１４；３（２）：８８－９６、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる）、及び肝臓内皮細胞及びＫｕｐｆｆｅｒ細胞を含有する肝臓洞関門（Ｆｒｅｖｅｒｔｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＢｉｏｌ３（６）：ｅ１９２．２００５、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる）、及び正弦波内皮細胞（Ｔａｖａｒｅｓｅｔａｌ．，ＪＥｘｐＭｅｄ２０１３Ｍａｙ６；２１０（５）：９０５－１５、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。スポロゾイトは、低硫酸化ヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）を有する細胞を優先的に横断するが、高硫酸化ＨＳＰＧを有する細胞に優先的に侵入する（Ｃｏｐｐｉｅｔａｌ．，ＣｅｌｌＨｏｓｔ＆Ｍｉｃｒｏｂｅ２，３１６－３２７，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２００７、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

細胞横断は、マクロファージへのＰ．ベルゲイスポロゾイトの非貪食性進入、続いてこれらの細胞からの「脱出」として最初に観察された（Ｖａｎｄｅｒｂｅｒｇｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｕｋ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３７：５２８－５３６，１９９０、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。生化学的、生物物理学的、及び段階的な横断のプロセスは、依然として研究されている。しかしながら、電子顕微鏡によって、宿主細胞の破壊は、宿主細胞に進入するとき及び宿主細胞から排出されるときに生じることが示唆されている（Ｍｏｔａｅｔａｌ．，２００１；Ｔａｖａｒｅｓｅｔａｌ．，２０１３、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。また、Ｐ．ｙｏｅｌｉｉスポロゾイトが一過性空胞を介して肝細胞に進入することができ、宿主膜の破壊が細胞に進入するときではなく細胞から排出されるときに生じることが示されている（Ｒｉｓｃｏ－Ｃａｓｔｉｌｌｏｅｔａｌ．，ＣｅｌｌＨｏｓｔＭｉｃｒｏｂｅ２０１５Ｎｏｖ１１；１８（５）：５９３－６０３、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

スポロゾイトはまた、生産性肝細胞感染を確立する前に肝細胞を横断する（Ｍｏｔａｅｔａｌ．，２００１、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。なぜこれが生じるのかについて、いくつかの可能性が浮かび上がった。第１の仮説は、肝細胞を介した移動が、頂端エキソサイトーシスを活性化することによる侵入のために寄生虫をプライミングすることを示唆した（Ｍｏｔａｅｔａｌ．，ＮａｔＭｅｄ２００２Ｎｏｖ；８（１１）：１３１８－２２、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。第２の理論は、横断により肝細胞成長因子（ＨＧＦ）が放出されて、隣接する肝細胞を感染に対してより感受性があるようにすることを示唆した（Ｃａｒｒｏｌｏｅｔａｌ．，ＮａｔＭｅｄ．２００３Ｎｏｖ；９（１１）：１３６３－９、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。最後に、他の研究は、スポロゾイトが横断のための機構をオフにし、侵入機構を活性化するのに時間がかかること（Ａｍｉｎｏｅｔａｌ．，２００８、Ｃｏｐｐｉｅｔａｌ．，２００７、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、及びその横断は、主に、細胞障壁を貫通し、肝臓に向かう途中で食作用を回避するように機能することを示唆する（Ａｍｉｎｏｅｔａｌ．，２００８、Ｃｏｐｐｉｅｔａｌ．，２００７，Ｔａｖａｒｅｓｅｔａｌ．，２０１３、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

スポロゾイトがヒト細胞を横断することが示されている（Ｂｅｈｅｔｅｔａｌ．，ＭａｌａｒＪ２０１４Ａｐｒ５；１３：１３６、Ｃｈａｅｔａｌ．，ＪＥｘｐＭｅｄ２０１５Ａｕｇ２４；２１２（９）：１３９１－４０３、Ｄｕｍｏｕｌｉｎｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＯｎｅ２０１５Ｊｕｎ１２；１０（６）、ｅ０１２９６２３、ｖａｎＳｃｈａｉｊｋｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＯＮＥ，３（１０）ｅ３５４９２００８、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）が、横断プロセスのための分子基盤は、ほとんど研究されていない。サーカムスポロゾイトタンパク質（ＣＳＰ）に対する抗体は、横断を損なう（Ｄｕｍｏｕｌｉｎｅｔａｌ．，２０１５、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）が、これは、直接的な影響ではなく、運動性の阻害に起因する可能性が高い（Ｃｈａｅｔａｌ．，ＪＥｘｐＭｅｄ２０１６Ｓｅｐ１９；２１３（１０）：２０９９－１１２、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。さらに、スポロゾイトを用いたクロロキン予防によって誘導される抗体は、細胞横断を妨害し、これらはまた、ＣＳＰを標的とし得る（Ｂｅｈｅｔｅｔａｌ．，２０１４、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。最近、寄生虫表面上のグリセルアルデヒド３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）が、横断中にＫｕｐｆｆｅｒ細胞上のＣＤ６８と相互作用することが示された（Ｃｈａｅｔａｌ．，２０１５，Ｃｈａｅｔａｌ．，２０１６、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

Ｐ．ベルゲイなどのげっ歯類Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫において、細胞横断に不可欠であると思われる２つのスポロゾイトミクロネームタンパク質が同定されている（［ＳＰＥＣＴ１；Ｉｓｈｉｎｏｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＢｉｏｌ．，２（２００４），ｐｐ．７７－８４、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる］、及びＳＰＥＣＴ２［Ｉｓｈｉｎｏｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，７（２００５），ｐｐ．１９９－２０８、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、パーフォリン様タンパク質１とも称されるタンパク質１［ＰＬＰ１］［Ｋａｉｓｅｒｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．，１３３（２００４），ｐｐ．１５－２６、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる］。ＳＰＥＣＴ１またはＳＰＥＣＴ２の遺伝的撹乱は、スポロゾイトがマウス細胞を横断することができないようにしたが、それらは依然としてインビトロで肝細胞に侵入した（Ｉｓｈｉｎｏｅｔａｌ．，２００４，Ｉｓｈｉｎｏｅｔａｌ．，２００５、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。げっ歯類に注射した場合、ＳＰＥＣＴ１またはＳＰＥＣＴ２を欠くスポロゾイトは肝臓感染について損なわれたが、少数のスポロゾイトは依然として肝臓感染を確立し、その後の開存性をもたらした。しかしながら、Ｋｕｐｆｆｅｒ細胞の欠失により、変異体は、野生型寄生虫と同等のレベルで肝臓感染を確立することができた（Ｉｓｈｉｎｏｅｔａｌ．，２００４，Ｉｓｈｉｎｏｅｔａｌ．，２００５、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。このデータは、げっ歯類に感染するスポロゾイトによる横断が、正弦波層を通してナビゲートするために重要であるが、肝細胞侵入、マラリア性赤血球外形態発達、または赤血球内での成長のためには重要ではないことを示唆している（Ｉｓｈｉｎｏｅｔａｌ．，２００４，Ｉｓｈｉｎｏｅｔａｌ．，２００５、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

Ｐ．ｙｏｅｌｉｉにおけるＳＰＥＣＴ２のオルソログ、ＰＬＰ１は、細胞横断において役割を果たすことが示されている。このタンパク質は、肝細胞進入には必要ではないが、横断中の一過性空胞からの放出において役割を果たす（Ｒｉｓｃｏ－Ｃａｓｔｉｌｌｏｅｔａｌ．，２０１５、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。したがって、げっ歯類に感染するスポロゾイトは、進入ステップで空胞を生成することによって宿主細胞を横断することができ、パーフォリン様タンパク質（例えば、ＳＰＥＣＴ２／ＰＬＰ１）を使用して、細胞からの排出中に、この区画及び／または宿主細胞から脱出することができる。

いったんスポロゾイトが肝細胞に侵入すると、それらは、複数回の複製後に肝細胞を溶解することができる寄生虫の複製形態であるメロゾイトに分化する。数日以内に、数百個のスポロゾイトが数十万個のメロゾイトになる可能性がある。感染した肝細胞が破壊すると、それらはメロゾイトを血流に放出し、そこで赤血球に侵入し、疾患の症状段階である無性生殖段階を開始する。数日以内に、何百万ものメロゾイトが血液中に存在する可能性がある。

マラリアの症状は、典型的には、最初の赤血球侵入の４～８日後に発症する。赤血球内のメロゾイトの複製サイクルは、溶血まで３６～７２時間続き、別の回の赤血球感染のためにメロゾイトを放出する。したがって、同期感染（単一の感染性咬傷に起因する感染）では、感染した赤血球が溶解し、エンドトキシンが大量に放出されると、３６～７２時間毎に発熱が生じる。

Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｓｐｐ．寄生虫は、宿主赤血球（成熟赤血球）または網状赤血球（未成熟赤血球）上の受容体と相互作用する寄生虫の表面上のタンパク質によって媒介される特定のリガンド－受容体相互作用を通じて赤血球への進入を得、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍは、赤血球及び網状赤血球に侵入及び複製することができ、Ｐ．ｖｉｖａｘ及び他の種は、赤血球ほど多量にはない網状赤血球に主に侵入する。侵入に関連付けられている赤血球結合タンパク質または網状赤血球結合タンパク質の大部分は、冗長であるか、またはバリアント形態のファミリーとして発現されるが、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍについては、２つの必須の赤血球受容体（ベイシジン及び補体崩壊促進因子（ＣＤ５５としても知られる））が同定されている。

Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｖｉｖａｘ及びＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｏｖａｌｅはまた、肝臓において休眠状態、すなわちヒプノゾイトに入り得る。

赤血球から放出されるメロゾイトは、他の赤血球に侵入し、複製を続けるか、または場合によっては、雄配偶子母細胞または雌配偶子母細胞に分化する。配偶子母細胞は、皮膚毛細血管で濃縮され、次いで、別のブラッドミールにおいて蚊ベクターに取り込まれる。蚊の腸内において、各雄配偶子母細胞は３回の有糸分裂後に８つの雄性生殖体を産生し、雌配偶子母細胞は雌性生殖体へと成熟する。雄性生殖体は、鞭毛を有する運動性形態であり、雌性生殖体を求める。雄及び雌配偶子母細胞は融合し、２倍体接合体を形成し、これは伸長してオーキネートとなる。この運動性形態は、囲食膜に進入するためにキチナーゼを分泌して、中腸の基底側外側へと中腸上皮を横断し、基底膜においてそれ自体をオーシストとして確立する。オーシストは１４～１５日間で成熟し、複製のサイクルを経て、最終的には寄生虫の生存に有益な糖分及び基質が豊富な環境である血体腔に遊離するスポロゾイトを形成する。単一のオーシストから何千ものスポロゾイトが形成され、血体腔全体にランダムに分布する状態になる。これらのスポロゾイトは運動性であり、血リンパを急速に破壊し、唾液腺への侵入に成功するのはわずかおよそ２０％である。唾液腺の侵入に続いて、スポロゾイトは、肝臓侵入に備えて未知のメカニズムを介して再プログラムされる。この再プログラムの証拠は、中腸の（オーシストから直接）が肝細胞に侵入することができないこと、及び唾液腺に侵入することに成功したスポロゾイトが、１つを提示された場合に別の唾液腺に再侵入することができないという事実によっても実証されている。唾液腺スポロゾイトは、唾液がそれほど生成されないために蚊の挙動及び唾液腺の機能を変化させて蚊のプローブ挙動の増加をもたらし、蚊の咬傷を介してヒト宿主に伝播する可能性を高める。

肝臓におけるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｓｐｐ．の侵入または増殖を防止するいくつかの薬物は、予防活性を有し、赤血球期をブロックする薬物は、疾患の症候相の治療に必要であり、蚊における配偶子母細胞の形成またはその発症を阻害する化合物（血液を餌とする蚊を殺す薬物を含む）は、伝播ブロッキング剤である（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，ｅｔａｌ．Ｍａｌａｒｉａ．ＮａｔＲｅｖＤｉｓＰｒｉｍｅｒｓ３，１７０５０（２０１７）、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

Ｂ．ゲノム
Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ３Ｄ７ゲノムの最初の配列が２００２年に完成して以来、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫に関するゲノム研究は急速に進んでいる。蚊の中腸での受精後の短い２倍体相を除いて、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫はその生活環を通じて１倍体である。異なる種のゲノムは、２０～３５メガベースの範囲であり、１４個の染色体、およそ３５キロベースの円形プラスミドゲノム、及び６キロベースのミトコンドリアＤＮＡの複数のコピーを含む。異なる種からのゲノムの比較は、相同遺伝子が、異なる染色体の間で異なる順序で配置された合成ブロックにしばしば見出されることを示した。

Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｓｐｐ．のアデニン－チミン（ＡＴ）含有量はまた、非常に異なる場合があり、例えば、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐ．ｒｅｉｃｈｅｎｏｗｉ、及びＰ．ｇａｌｌｉｎａｃｅｕｍでは約８０％ＡＴ、げっ歯類Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫では約７５％ＡＴ、及びＰ．ｖｉｖａｘ、Ｐ．ｋｎｏｗｌｅｓｉ、及びＰ．ｃｙｎｏｍｏｌｇｉでは約６０％ＡＴである。ＡＴ含有量は、多くの場合、タンパク質コードエキソンよりもイントロン及び遺伝子間非コード領域で高く、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍゲノム全体では平均８０．６％ＡＴであるのに対し、非コード配列では８６．５％である。Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍの高いＡＴ含有量は、多数の低複雑性領域、単純配列反復、及びマイクロサテライト、ならびに高度に歪んだコドン使用バイアスを反映する。ＡＴリッチ反復の多型は、薬物耐性遺伝子のリンケージマッピング及び寄生虫集団の進化及び構造を追跡するための豊富なマーカーを提供する。

Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫ゲノムは、例えば、抗原の変動、シグナル伝達、タンパク質輸送、及び接着を含む、宿主との寄生虫相互作用において重要な役割を果たす多重遺伝子ファミリーを担持する。遺伝子ファミリーの中で、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ赤血球膜タンパク質１（ＰｆＥＭＰ１）をコードする遺伝子が最も広く研究されている。個々のＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ寄生虫は、そのゲノム内にｖａｒ遺伝子の５０～１５０コピーの固有のセットを担持し、ここで、遺伝子発現のスイッチが、抗原の変動を生成し得る。ＰｆＥＭＰ１は、深部組織における感染した赤血球（ｉＲＢＣ、感染した赤血球）の細胞接着を媒介する、脳性マラリア及び胎盤マラリアなどの臨床的発現の病因において重要な役割を果たす。異なるＰｆＥＭＰ１分子は、α２－マクログロブリン、ＣＤ３６、コンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）、補体１ｑ、ＣＲ１、Ｅ－セレクチン及びＰ－セレクチン、内皮タンパク質Ｃ受容体（ＥＰＣＲ）、ヘパラン硫酸、ＩＣＡＭ１、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＰＥＣＡＭ１、トロンボスポンジン（ＴＳＰ）、ならびにＶＣＡＭ１を含む様々な宿主分子に結合する。そのような結合は、様々な宿主の炎症応答の活性化をもたらす。ヘモグロビンＣ及びヘモグロビンＳ形質状態を含むヘモグロビン異常は、ｉＲＢＣのノブ構造におけるＰｆＥＭＰ１のディスプレイを妨げる。この宿主細胞表面上のＰｆＥＭＰ１の不十分なディスプレイは、重篤な疾患の発症を促進する炎症プロセスの細胞接着及び活性化を低減することによって、マラリアに対する保護を提供する。

大型のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ散在反復（ｐｉｒ）多重遺伝子ファミリーのメンバーは、寄生虫種、例えば、Ｐ．ｙｏｅｌｉｉのｙｉｒ、Ｐ．ｂｅｒｇｈｅｉのｂｉｒ、Ｐ．ｖｉｖａｘのｖｉｒなどによって異なる名称である。いくつかのＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ遺伝子ファミリー（ｓｔｅｖｏｒ、ｒｉｆ、及びＰｆＭＣ－２ＴＭ）は、特徴的に、短い第１のエキソン、長い第２のエキソン、及び膜貫通ドメインをコードする第３のエキソンを含む、それらの類似の遺伝子構造によってｐｉｒで分類される。最近の研究では、Ｐ．ｃｈａｂａｕｄｉ（ｃｉｒ）からのｐｉｒ遺伝子は、ｉＲＢＣ内及びｉＲＢＣの表面上の異なる細胞位置、ならびにメロゾイトにおいて発現することが示された。Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫は、そのゲノムの大部分を、宿主の免疫防御の回避と感染に不可欠な分子プロセスの保護を確実にする遺伝子ファミリーに充てている。これらのファミリーは、その調査に固有の困難さにもかかわらず、寄生虫と宿主の相互作用及び毒性におけるその役割に関する研究の重要性を強調する。

追加の例示的な多型性遺伝子ファミリーは、６つのシステイン（６－Ｃｙｓ）を有するタンパク質をコードする１４個の遺伝子ファミリーを含む。これらのタンパク質は、多くの場合、宿主タンパク質と相互作用する寄生虫表面上に局在化し、異なる寄生虫発育期で発現される。６－Ｃｙｓタンパク質はまた、多様な機能を実証し、例えば、寄生虫受精、交配相互作用、免疫応答の回避、及び肝細胞の侵入において役割を果たすことが示されている。無性期で発現されるタンパク質は、一般に、多型性及び／または選択中であり、それらが宿主免疫応答の標的であり得ることを示唆するが、しかしながら、寄生虫発症におけるそれらの機能は、大部分が未知のままである。

Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍゲノムは、高度に多型性であり得る。初期の研究は、数十から数百のキロベースを伴う多型を実証し、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍの染色体構造は中央領域で主に保存されているが、広範囲の多型はテロメアの近くに長さと配列の両方であることを示した。サブテロメアの変動の多くは、反復配列及び遺伝子のファミリーのブロック内での組換えによって説明された。

Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍにおける単純配列反復（マイクロサテライト）の頻度は、ｋｂＤＮＡ当たりおよそ１個の多型マイクロサテライトであると推定される。いかなる１つの理論によっても拘束されることを望むものではないが、この高い速度は、ゲノムのＡＴリッチ性質を反映し得る。マイクロサテライトは、ＡＴ含有量が低いゲノムを有する他のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ種ではそれほど頻繁ではないと思われる。ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃゲノムの高度に多型性及び反復構造に加えて、多数の単一塩基多型（ＳＮＰ）及びコピー数変異（ＣＮＶ）も存在する（Ｓｕｅｔａｌ．，ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＧｅｎｏｍｉｃｓａｎｄＧｅｎｅｔｉｃｓ：ＮｅｗＩｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏＭａｌａｒｉａＰａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，ＤｒｕｇＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ，Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ，ａｎｄＥｖｏｌｕｔｉｏｎ．ＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌＲｅｖ．２０１９Ｊｕｌ３１；３２（４）、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

Ｃ．Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍタンパク質
Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫は、そのライフサイクルの異なる段階で様々なタンパク質を発現することが知られる。例示的なマラリアタンパク質を以下に記載し、例示的なアミノ酸配列に対応する配列番号を以下の表２に記載する。

サーカムスポロゾイトタンパク質（ＣＳＰ）は、蚊の中腸におけるスポロゾイトの形成、オーシストからのスポロゾイトの放出、唾液腺の侵入、肝臓中の肝細胞へのスポロゾイトの付着、及び肝細胞のスポロゾイトの侵入に必要であるため、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ生活環に関与する多機能タンパク質である（例えば、Ｚｈａｏｅｔａｌ．（２０１６）ＰＬｏＳＯＮＥ１１（８）：ｅ０１６１６０７を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＣＳＰは、全てのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ種に存在し、種にわたってアミノ酸配列に変動が存在するが、中央反復領域及び非反復隣接領域の全体的なドメイン構造は十分に保存されている（例えば、Ｚｈａｏｅｔａｌ．（２０１６）ＰＬｏＳＯＮＥ１１（８）：ｅ０１６１６０７、Ｗａｈｌｅｔａｌ．（２０２２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１９：ｅ２０２０１３１３を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＣＳＰ配列は既知であり（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ａ０Ａ２Ｌ１ＣＦ５２、Ａ０Ａ２Ｌ，１ＣＦ８８、Ｃ６ＦＧＺ３、Ｃ６ＦＨ２、７Ｃ６ＦＨＧ７、Ｍ１Ｖ０６０、Ｍ１Ｖ０Ａ３、Ｍ１Ｖ０Ｂ０、Ｍ１Ｖ０Ｃ４、Ｍ１Ｖ０Ｅ０、Ｍ１Ｖ９Ｉ４、Ｍ１ＶＦＮ９、Ｍ１ＶＫＺ２、Ｐ０２８９３、Ｑ５ＥＩＪ９、Ｑ５ＥＩＫ２、Ｑ５ＥＩＫ８、Ｑ５ＥＩＬ３、Ｑ５ＥＩＬ５、Ｑ５ＥＩＬ８、Ｑ５Ｒ２Ｌ２、Ｑ７Ｋ７４０、Ｑ８Ｉ９Ｇ５、Ｑ８Ｉ９Ｊ３、Ｑ８Ｉ９Ｊ４を参照のこと）、表１には、アジア、南米及びアフリカからのＣＳＰＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株の例示的な配列が含まれる。

例示的なＣＳＰアミノ酸配列は、配列番号１に提供される。

ＲＨ５は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）に見出され、ヒトに感染する他の種のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍには見出されない。ＲＨ５オルソログは、チンパンジー及びゴリラに感染する寄生虫を含む、Ｌａｖａｒｅｎｉａ亜属に属する他の種にも見出され、ヒト赤血球のＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ侵入において固有の役割を示す。例えば、Ｒａｇｏｔｔｅ，ｅｔａｌ．ＴｒｅｎｄｓＰａｒａｓｉｔｏｌ．３６（６）２０２０を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＲＨ５は、成熟シゾント期中に発現され、システインリッチ防御抗原（ＣｙＲＰＡ）及びＲＨ５相互作用タンパク質（Ｒｉｐｒ）と複合体化して、赤血球表面タンパク質ベイシジンに結合する細長いタンパク質三量体をメロゾイト表面上に形成することができる。例えば、Ｒａｇｏｔｔｅ（２０２０）を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

ヒトにおいて、ベイシジンへのＲＨ５結合は、膜変形の下流で作用する侵入において重要な役割を果たす。ＲＨ５のベイシジンへの結合は、赤血球内のカルシウムのスパイク誘導に必要であり、これは、メロゾイトが抗ＲＨ５、抗Ｒｉｐｒ、または抗ベイシジン抗体または可溶性ベイシジンの存在下で侵入しようとするとブロックされる。例えば、Ｒａｇｏｔｔｅ（２０２０）を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

ＲＨ５は、成熟シゾント期に発現する６３ｋＤａのタンパク質である。これは、処理され、寄生虫によって脱落される４５ｋＤａの形態に切断される。ＰｆＲＨ５の構造は、２つの３本のヘリカルのバンドルが一緒になって形成された凧のようなアーキテクチャを明らかにする。例えば、Ｒａｇｏｔｔｅ（２０２０）を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

ＲＨ５配列は、既知であり（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ａ０Ａ１５９ＳＫ４４、Ａ０Ａ１５９ＳＫ９９、Ａ０Ａ１５９ＳＫＳ８、Ａ０Ａ１５９ＳＫＷ８、Ａ０Ａ１５９ＳＬ２３、Ａ０Ａ１５９ＳＬ７８、Ａ０Ａ１５９ＳＬ９６、Ａ０Ａ１５９ＳＬＭ７、Ａ０Ａ１５９ＳＭＣ８、Ａ０Ａ１５９ＳＭＲ９、Ａ０Ａ１６１ＦＱＴ０、Ａ０Ａ１Ｂ１ＵＺＥ２、Ａ０Ａ１Ｂ１ＵＺＥ４、Ａ０Ａ１Ｂ１ＵＺＥ５、Ａ０Ａ３４６ＲＣＩ１、Ａ０Ａ３４６ＲＣＪ０、Ａ０Ａ３４６ＲＣＪ２、Ａ０Ａ３４６ＲＣＪ３、Ａ０Ａ３４６ＲＣＪ４、Ａ０Ａ３４６ＲＣＫ４、Ａ０Ａ３４６ＲＣＫ５、Ａ０Ａ３４６ＲＣＫ６、Ａ０Ａ３４６ＲＣＫ９、Ｂ２Ｌ３Ｎ７、Ｑ８ＩＦＭ５を参照されたく、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、例示的なＲＨ５アミノ酸配列は、配列番号３６５に提供される。

Ｐ１１３は、未処理のＲＨ５のＮ末端と直接相互作用するグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）連結タンパク質であり、ＲＨ５侵入複合体がメロゾイト表面にテザーされるメカニズムを提供する。例えば、Ｒａｇｏｔｔｅ（２０２０）を参照されたい。Ｐ１１３オルソログは、これまでに配列決定された全てのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ種に見出され、共通かつ保存された機能（複数可）を示唆する（Ｂｕｌｌｅｎｅｔａｌ．（２０２２）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ１１７：１２４５－１２６２、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。それにもかかわらず、マラリア、Ｐ．ベルゲイのげっ歯類モデルでは、ｐ１１３ノックアウト寄生虫が生存可能であり、タンパク質が無性血液期の成長及び侵入に不可欠ではなかったことを示す。しかしながら、ノックアウト寄生虫は、天然スポロゾイト伝播における欠陥を示し、感染したマウスの開存性の遅延につながる（Ｏｆｆｅｄｄｕｅｔａｌ．（２０１４）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ１９３：１０１－１０９、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＰ１１３配列は既知である（例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ８ＩＬＰ３を参照されたい）。例示的なＰ１１３アミノ酸配列は、配列番号３２６に提供される。

システインリッチ防御抗原（ＣｙＲＰＡ）は、予測されるＮ末端分泌シグナルを有する４３ｋＤａタンパク質である。ＣｙＲＰＡは、ＲＨ５及びＲｉｐｒを含むマルチタンパク質複合体の一部であり、Ｃａ^２＋の放出及びタイトジャンクションの確立を誘発するために重要である。ＰｆＣｙＲＰＡは、５％の罹患率を超える単一のＳＮＰのみを有して非常に保存されており、侵入に不可欠であり（条件付きノックダウンが侵入活性の喪失を引き起こすため）、自然曝露からの血清反応性が不良である（例えば、Ｒａｇｏｔｔｅ（２０２０）を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣｙＲＰＡ配列は既知である（例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ａ０Ａ２Ｓ１Ｑ７Ｐ０、Ａ０Ａ２Ｓ１Ｑ７Ｐ５、Ａ０Ａ２Ｓ１Ｑ７Ｑ４、Ｑ８ＩＦＭ８を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。例示的なＣｙＲＰＡアミノ酸配列は、配列番号３２９に提供される。

ＲＨ５相互作用タンパク質（Ｒｉｐｒ）は、およそ１２０ｋＤａのタンパク質であり、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ生活環のシゾント期中にミクロネームに局在化する。完全長１２０ｋＤａタンパク質は、同様のサイズの２つの断片、Ｎ末端断片（ＥＧＦドメイン１及び２を含む）及びＣ末端断片（ＥＧＦドメイン３～１０を含む）に処理される。Ｒｉｐｒは、メロゾイトと赤血球との間の接合部における寄生虫侵入中にＲＨ５及びＣｙＲＰＡと共存する。ＰｆＲｉｐｒのコンディショナルノックアウトを有する寄生虫は、膜変形を誘導するが、侵入を完了することはできない（例えば、Ｒａｇｏｔｔｅ（２０２０）を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＲｉｐｒ配列は既知である（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ａ０Ａ１９３ＰＤＩ９、Ａ０Ａ１９３ＰＤＫ３、Ａ０Ａ１９３ＰＤＫ８、Ａ０Ａ１９３ＰＤＬ３、Ａ０Ａ１９３ＰＤＬ９、Ａ０Ａ１９３ＰＤＰ４、Ａ０Ａ１９３ＰＤＱ８、Ａ０Ａ１９３ＰＥ０１、Ａ０Ａ１９３ＰＥ０５、Ａ０Ａ１９３ＰＥ０７、Ｏ９７３０２、Ａ０Ａ１９３ＰＥ１７を参照されたい）。例示的なＲｉｐｒアミノ酸配列は、配列番号３３２に提供される。

Ｅ１４０は、ゲノム配列が利用可能な全てのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ種において見出され、種間で３４～９２％の範囲のアミノ酸同一性を有して、十分に保存されている。例えば、Ｓｍｉｔｈ，ｅｔａｌ．ＰＬｏＳｏｎｅ１５．５（２０２０）：ｅ０２３２２３４；ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０２３２２３；ａｎｄＵ．Ｓ．ＰａｔｅｎｔＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．ＵＳ２０１９／０１１７７５２を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。Ｅ１４０はまた、世界中の異なる場所から単離されたＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ株においても高度に保存されており（９５～９９％）、低い変異頻度を呈す。Ｅ１４０は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫の異なる生活環で発現される（具体的には、Ｅ１４０は、スポロゾイト期、肝病期、及び血液期の寄生虫で検出されている）。

タンパク質構造アルゴリズムは、Ｅ１４０タンパク質が、寄生虫または宿主由来の膜に及ぶと推定できる５つの膜貫通ドメインを有すると予測する。Ｅ１４０は、成熟スポロゾイト期、後期肝病期、及び後期シゾント期におけるタンパク質発現の明確なパターンを示す。それは、スポロゾイトの前端と後端、後期肝病期の、寄生体胞空間、及び後期シゾント期の発育するメロゾイトの周りに輸送する。また、成熟した唾液腺スポロゾイト、ならびにオーシスト由来のスポロゾイト及びオーシストにおいて発現することが知られている。

Ｅ１４０配列は、既知であり（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ａ０Ａ６５０Ｄ６４９、Ａ０Ａ６５０Ｄ６５３、Ａ０Ａ６５０Ｄ６７２、Ａ０Ａ６５０Ｄ６８７、Ａ０Ａ６５０Ｄ６９０、Ａ０Ａ６５０Ｄ６９４、Ａ０Ａ６５０Ｄ６Ａ３、Ａ０Ａ６５０Ｄ６Ｂ８、Ａ０Ａ６５０Ｄ６Ｌ３、Ａ０Ａ６５０Ｄ６Ｌ７、Ｑ８Ｉ２９９を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、例示的なＥ１４０アミノ酸配列は、配列番号３３５に提供される。

ＣｅｌＴＯＳは、肝臓侵入プロセス中にＫｕｐｆｅｒ細胞を通過するスポロゾイト横断に必要とされる。ＣｅｌＴＯＳは、細胞内から細孔を形成し、スポロゾイトが肝臓内に放出されることを可能にする。抗体エピトープは、免疫化したマウス及び感染したヒト集団（Ｐｆ及びＰｖ）から特徴付けられている。マウス研究では、ＣｅｌＴＯＳによる免疫化は、保護及びチャレンジに対する保護を提供することが示されている。ＣｅｌＴＯＳによるワクチン接種は、細孔形成複合体の細胞外ドメインに結合し、細孔の完全な形成をブロックし、肝臓へのスポロゾイトの横断を防止することができる抗体を生成し得る。例えば、Ｊｉｍａｈｅｔａｌ．，Ｅｌｉｆｅ２０１６Ｄｅｃ１；５：ｅ２０６２１．ｄｏｉ：１０．７５５４／ｅＬｉｆｅ．２０６２１、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣｅｌＴＯＳ配列は、既知であり（例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｍ１ＥＴＪ８、Ｑ５３ＵＢ７、Ａ０Ａ２Ｒ４ＱＬＡ５、Ａ０Ａ２Ｒ４ＱＬＩ０、Ａ０Ａ２Ｒ４ＱＬＩ５、Ａ０Ａ２Ｒ４ＱＬＪ１、Ａ０Ａ２Ｒ４ＱＬＪ４、Ｍ１ＥＴＪ８、Ｑ５３ＵＢ８、Ｑ８Ｉ５Ｐ１を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。例示的なＣｅｌＴＯＳアミノ酸配列は、配列番号３５０に提供される。

ＳＰＥＣＴ１及びＳＰＥＣＴ２（後者は、パーフォリン様タンパク質１（ＰＬＰ１）とも称される）は、細胞横断において役割を果たし得る必須のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍタンパク質である。Ｙａｎｇｅｔａｌ．，ＣｅｌｌＲｅｐ．２０１７Ｍａｒ２８；１８（１３）：３１０５－３１１６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｒｅｐ．２０１７．０３．０１７を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍＳＰＥＣＴ１またはＳＰＥＣＴ２の標的化破壊は、ヒト化マウスにおける肝病期の発症におけるスポロゾイトの感染性を低減することが示されている。しかしながら、これらの２つのタンパク質の細胞横断のメカニズムは、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍではまだ定義されていない。Ｙａｎｇｅｔａｌ．を参照されたい。

ＳＰＥＣＴ１及びＳＰＥＣＴ２は、肝細胞の侵入前に、真皮及び肝類洞壁にわたるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫の交配において果たすと考えられる重要な役割のために、魅力的な前赤血球期免疫標的とみなされる。組換えＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍＳＰＥＣＴ２は、ＰｆＳＰＥＣＴ２のＭＡＣＰＦ／ＣＤＣドメインと同様に、Ｃａ^２＋依存的様態で赤血球の溶解を引き起こすことが示されている。ＰｆＳＰＥＣＴ２はまた、赤血球からのＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍメロゾイトのＣａ２＋依存的放出にも関与している。

ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＳＰＥＣＴ１及びＳＰＥＣＴ２配列は既知であり（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｑ８ＩＤＲ４及びＱ９Ｕ０Ｊ９を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、例示的なアミノ酸配列は、配列番号３５３及び３５６にそれぞれ提供される。

エクスポートタンパク質１（ＥＸＰ１）は、赤血球内期及び肝病期中に発現されるＮ末端シグナルペプチドを有するシングルパス膜貫通タンパク質である（例えば、Ｓｐｉｅｌｍａｎｎｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＭｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０１２Ｏｃｔ；３０２（４－５）：１７９－８６を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＥＸＰ１は、最初にメロゾイト中の高密度の顆粒に局在化し、次いで侵入後に寄生体胞膜（ＰＶＭ）に輸送されることが示された（例えば、Ｉｒｉｋｏｅｔａｌ．，ＰａｒａｓｉｔｏｌＩｎｔ．２０１８Ｏｃｔ；６７（５）：６３７－６３９、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いったんＰＶＭに局在化されると、ＥＸＰ１は、寄生体胞内腔に曝露されるＮ末端と、赤血球細胞質に曝露されるＣ末端とを有するホモオリゴマーを形成する（例えば、Ｍｅｓｅｎ－Ｒａｍｉｒｅｚｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＢｉｏｌ．２０１９Ｓｅｐ３０；１７（９）：ｅ３０００４７３を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

ＥＸＰ１は、酸化損傷からＰｌａｓｍｏｄｉｕｍを保護し得るグルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）活性を有することが実証されている（例えば、Ｍｅｓｅｎ－Ｒａｍｉｒｅｚｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＢｉｏｌ１７（９）２０１９Ｓｅｐ３０；１７（９）：ｅ３０００４７３を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。最近、ＰＶＭ内の栄養素透過性チャネルであるＥＸＰ２の正しい局在化を維持することによるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ生存にＥＸＰ１が重要であることが実証された（例えば、Ｍｅｓｅｎ－Ｒａｍｉｒｅｚｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＢｉｏｌ．２０１９Ｓｅｐ３０；１７（９）：ｅ３０００４７３を参照されたく、これはその全体が参照として本明細書に組み込まれる）。

Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍＥＸＰ１ポリペプチド配列は、既知であり（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｑ８ＩＩＦ０、Ｗ７ＪＴＤ３、Ｑ２５８４０、Ｑ５４８Ｕ２、Ｑ５ＶＫＫ２、Ｑ５ＶＫＫ５、Ｑ５ＷＲＨ８、Ｑ６Ｖ９Ｇ４、Ｑ６Ｖ９Ｇ６、Ｑ６Ｖ９Ｇ９、Ｑ６Ｖ９Ｈ１、Ｑ６Ｖ９Ｈ２、Ｑ９Ｕ５９０、Ｐ０４９２３、Ｐ０４９２６を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。例示的なＥＸＰ１アミノ酸配列は、配列番号３１４に提供される。

感染性スポロゾイト遺伝子３（ＵＩＳ３）で上方制御されたタンパク質は、感染した肝細胞中のスポロゾイト寄生体胞膜（ＰＶＭ）に局在化する膜結合タンパク質である。ＵＩＳ３は、肝臓脂肪酸結合タンパク質（Ｌ－ＦＡＢＰ）と相互作用し、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ成長期に脂肪酸及び／または脂質インポートに関与することが示された（例えば、Ｓｈａｒｍａｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２００８Ａｕｇ２９；２８３（３５）：２４０７７－２４０８８；Ｍｉｋｏｌａｊｃｚａｋｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＰａｒａｓｉｔｏｌ．２００７Ａｐｒ；３７（５）：４８３－９に見出すことができ、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

宿主肝細胞のスポロゾイト侵入後、重要なＰｌａｓｍｏｄｉｕｍの構造的特徴（例えば、寄生体胞膜）の合成がある。肝細胞期では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍは、その膜の迅速な合成のために宿主脂肪酸に依存する（例えば、Ｓｈａｒｍａｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２００８Ａｕｇ２９；２８３（３５）：２４０７７－２４０８８を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＰＶＭへのＵＩＳ３挿入は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍに、急速なスポロゾイト成長期中に必須脂肪酸及び／または脂質をインポートする方法を提供する（例えば、Ｓｈａｒｍａｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２００８Ａｕｇ２９；２８３（３５）：２４０７７－２４０８８を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

げっ歯類マラリアモデルにおいてマラリアから保護されるＵＩＳ３－欠損Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍベルゲイスポロゾイトによる免疫化（Ｍｕｅｌｌｅｒｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００５Ｊａｎ１３；４３３（７０２２）：１６４－７を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＵＩＳ３欠損Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍベルゲイは、肝臓で形質転換プロセスを開始することができるが、それらは、トロフォゾイトへの形質転換中に重篤な欠陥を示す（例えば、Ｍｕｅｌｌｅｒｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００５Ｊａｎ１３；４３３（７０２２）：１６４－７を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＵＩＳ３欠損Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍベルゲイはまた、成熟した肝臓シゾントに発育することができず、したがって、肝臓自体内のマラリア感染が中止する（例えば、Ｍｕｅｌｌｅｒｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００５Ｊａｎ１３；４３３（７０２２）：１６４－７を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。さらに、以前に、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍベルゲイに由来するＵＩＳ３及びＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍに由来するＵＩＳ３は、低い（すなわち、３４％）アミノ酸配列同一性を呈したことが実証された（例えば、Ｍｕｅｌｌｅｒｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００５Ｊａｎ１３；４３３（７０２２）：１６４－７を参照されたく、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＵＩＳ３配列は、既知であり（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ａ０Ａ５０９ＡＲＳ３、Ａ０Ａ１Ｃ６ＹＬＰ３、Ｑ８ＩＥＵ１、Ａ０Ａ３８４ＫＬＩ１、Ａ０Ａ１Ｇ４Ｈ４２３、Ａ０Ａ０７７ＹＢ０１、Ｑ９ＮＦＵ４を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。例示的なＵＩＳ３アミノ酸配列は、配列番号３５９に提供される。

感染性スポロゾイト遺伝子４（ＵＩＳ４）で上方制御されたものは、単一の膜貫通ドメインを含有し、スポロゾイトの分泌オルガネラ及び肝病期の寄生体胞膜（ＰＶＭ）に局在化する。ＵＩＳ４は、オーシストで産生される血液期または早期スポロゾイトでは発現されない（例えば、Ｍａｃｋｅｌｌａｒｅｔａｌ．，ＥｕｋａｒｙｏｔＣｅｌｌ．２０１０Ｍａｙ；９（５）：７８４－７９４を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

ＵＩＳ４遺伝子の欠失は、早期肝病期の発症の阻止に関連している（例えば、ＶａｕｇｈａｎａｎｄＫａｐｐｅ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂＰｅｒｓｐｅｃｔＭｅｄ．２０１７Ｊｕｎ１；７（６）：ａ０２５４８６を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。最近、ＵＩＳ４は、宿主細胞質防御の一部として配置される宿主アクチン構造を回避することによって、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍベルゲイ生存に関与することが実証された（例えば、Ｂａｎａｅｔａｌ．，ｉＳｃｉｅｎｃｅ．２０２２Ａｐｒ２２；２５（５）：１０４２８１．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｓｃｉ．２０２２．１０４２８１．ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ２０２２Ｍａｙ２０を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍは、Ｐ．ｙｏｅｌｉｉＵＩＳ４に対する機能的補完物として機能することができない、ＥＴＲＡＭＰ１０．３という名称のＵＩＳ４に対するオルソログを有し、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍの生活環において異なる機能を果たす可能性が高いことを示す（Ｍａｃｋｅｌｌａｒｅｔａｌ．，Ｅｕｋａｒｙｏｔ．Ｃｅｌｌ９：７８４－９４（２０１０）を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ早期転写膜タンパク質１０．３（ＥＴＲＡＭＰ１０．３）は、およそ１０ｋＤａのタンパク質であり、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ種にわたって保存され、寄生体胞に位置するタンパク質を含む、早期転写膜タンパク質多重遺伝子ファミリーのメンバーである。いくつかのＥＴＲＡＭＰタンパク質は、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍに特異的であり、他の生物に感染するＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ種には見出されない。ＥＴＲＡＭＰ１０．３は、肝臓及び血液期Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ寄生虫の両方で発現する一例である。ＥＴＲＡＭＰ１０．３転写は、ヒト宿主におけるＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ血液期感染の環状期からトロフォゾイト期への移行中にピークに達することが見出されている。ＥＴＲＡＭＰ１０．３は、寄生体胞に局在化し、血液期感染中に宿主赤血球にエクスポートされる。ＥＴＲＡＭＰ１０．３は、感染性スポロゾイト遺伝子４（ＵＩＳ４）において上方制御されると称されることがあるが、ＥＴＲＡＭＰ１０．３は、類似性及び構造的類似性に基づいて、ＵＩＳ４のオルソログであると理解される。しかしながら、ＥＴＲＡＭＰ１０．３は、ＵＩＳ４の機能的オルソログではなく、異なる生物学的役割を果たし得る。ＥＴＲＡＭＰ１０．３の生物学的機能はまだ完全に解決されていないが、宿主赤血球内の小胞構造への局在化は、宿主－寄生虫相互作用または感染した赤血球の再構築における役割を示唆する。ＥＴＲＡＭＰ１０．３は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ生活環において重要な役割を担うと思われる。ＥＴＲＡＭＰ１０．３が欠失すると、この欠失により、マウスにおける肝病期発症の中断及び無性血液期の進行につながり得る。

文献において「ＵＩＳ４」及び「ＥＴＲＡＭＰ１０．３」という用語は、異なるタンパク質を指すために使用されることがあるが、本開示の文脈において、「ＵＩＳ４」及び「ＥＴＲＡＭＰ１０．３」という用語は、ＥＴＲＡＭＰ１０．３を指すように互換的に使用される。

ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＥＴＲＡＭＰ１０．３配列は、既知であり（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｑ８ＩＪＭ９を参照されたく、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。例示的なＥＴＲＡＭＰ１０．３アミノ酸配列は、配列番号３６２に提供される。

肝特異的タンパク質１（ＬＩＳＰ－１）は、肝細胞においてＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ発症中に発現され、寄生体胞膜（ＰＶＭ）に局在化される（例えば、Ｉｓｈｉｎｏｅｔａｌ．，ＣｅｌｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００９Ｓｅｐ；１１（９）：１３２９－１３３９を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＬＩＳＰ－１は、後期肝病期発症中に高レベルで発現し、ＰＶＭ分解及びその後のメロゾイト放出に関与することが示された（例えば、Ｉｓｈｉｎｏｅｔａｌ．，ＣｅｌｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００９Ｓｅｐ；１１（９）：１３２９－１３３９を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

ＬＩＳＰ－１を欠損した細胞内Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍは、肝臓メロゾイトに発育し、赤血球に対する正常な感染性を示す（例えば、Ｉｓｈｉｎｏｅｔａｌ．，ＣｅｌｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００９Ｓｅｐ；１１（９）：１３２９－１３３９を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。しかしながら、ＬＩＳＰ１欠損肝病期Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍは、ＰＶＭを破壊せず、肝細胞内に捕捉されたままである（例えば、Ｉｓｈｉｎｏｅｔａｌ．，ＣｅｌｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００９Ｓｅｐ；１１（９）：１３２９－１３３９を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＬＩＳＰ－１配列は、既知である（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ａ０Ａ２Ｉ０Ｃ２Ｘ６、Ｑ８ＩＬＲ５を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。例示的なＬＩＳＰ－１アミノ酸配列は、配列番号３０８に提供される。

肝特異的タンパク質２（ＬＩＳＰ－２）は、修飾された６－ｃｙｓドメインを含有し、肝細胞におけるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍの発症中に発現される（例えば、Ｏｒｉｔｏｅｔａｌ．，ＭｏｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０１３Ｊａｎ；８７（１）：６６－７９を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＬＩＳＰ－２は、肝病期Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍによって発現され、肝細胞にエクスポートされ、核を含む宿主細胞全体に分布することが示された（例えば、Ｏｒｉｔｏｅｔａｌ．，ＭｏｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０１３Ｊａｎ；８７（１）：６６－７９を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

ＬＩＳＰ２が欠損している細胞内Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍは、メロゾイト発症中に効果的に成熟しない（例えば、Ｏｒｉｔｏｅｔａｌ．，ＭｏｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０１３Ｊａｎ；８７（１）：６６－７９を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＬＩＳＰ－２配列は既知である（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ａ０Ａ２Ｉ０ＢＺＲ４、Ｑ８Ｉ１Ｘ６、Ｑ９Ｕ０Ｄ４を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。例示的なＬＩＳＰ－２アミノ酸配列は、配列番号３１１に提供される。

トロンボスポンジン関連接着タンパク質（ＴＲＡＰ）は、一般的にｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子Ａドメインと称されるＮ末端ドメインを含有するが、それは、インビトロでのスポロゾイト運動性及びインビボでの感染に必要な結合Ｍｇ^２＋イオンを有する金属イオン依存性接着部位（ＭＩＤＡＳ）を含有するため、インテグリンＩドメインに最も類似している（例えば、Ｌｕｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＯｎｅ．２０２０；１５（１）：ｅ０２１６２６０を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。Ｉドメインが伸長可能なβリボン、続いてトロンボスポンジン反復（ＴＳＲ）ドメイン、Ｃ末端のプロリンリッチセグメント、シングルパス貫通膜ドメイン、及び細胞質ドメインに挿入される（例えば、Ｌｕｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＯｎｅ．２０２０；１５（１）：ｅ０２１６２６０を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。プロリンリッチセグメントの配列分析により、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＴＲＡＰにおけるＳＨ３ドメイン結合ＰｘｘＰモチーフの存在が明らかになった（Ａｋｈｏｕｒｉｅｔａｌ．，ＭａｌａｒＪ．２００８Ａｐｒ２２；７：６３．ｄｏｉ：１０．１１８６／１４７５－２８７５－７－６３を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

ＴＲＡＰは、ミクロネームに保存され、寄生虫が宿主細胞と接触すると、スポロゾイト先端において表面露出するようになる（例えば、Ａｋｈｏｕｒｉｅｔａｌ．，ＭａｌａｒＪ．２００８Ａｐｒ２２；７：６３．ｄｏｉ：１０．１１８６／１４７５－２８７５－７－６３を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。また、ＴＲＡＰは、蚊の唾液腺及び肝細胞上の宿主受容体の滑走運動性及び認識におけるスポロゾイトを補助することによって、スポロゾイトの肝細胞侵入において重要な役割を果たす（Ａｋｈｏｕｒｉｅｔａｌ．，ＭａｌａｒＪ．２００８Ａｐｒ２２；７：６３．ｄｏｉ：１０．１１８６／１４７５－２８７５－７－６３を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍトラップ配列は、既知であり（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ａ０Ａ５Ｑ２ＥＸＫ８、Ａ０Ａ５Ｑ２ＥＺＤ７、Ａ０Ａ５Ｑ２Ｆ１Ｆ６、Ａ０Ａ５Ｑ２Ｆ２Ｂ８、Ａ０Ａ５Ｑ２Ｆ２Ｈ６、Ａ０Ａ５Ｑ２Ｆ４Ｇ９、Ｏ７６１１０、Ｐ１６８９３、Ｑ０１５０７、Ｑ２６０２０、Ｑ７６ＮＭ２、Ｗ８ＶＮＢ６を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、例示的なトラップアミノ酸配列は、配列番号２８７に提供される。

肝病期関連タンパク質（ＬＳＡＰ－１）は、その発症を通して主に細胞内肝臓寄生虫の末梢に見出されることが示されているが、血液期寄生虫には見出されず、場合によっては唾液腺スポロゾイトにおいてわずかな量では見出されない可能性がある（例えば、Ｓｉａｕｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＰａｔｈｏｇ．２００８Ａｕｇ８；４（８）：ｅ１０００１２１を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＬＳＡＰ－１は、唾液腺トランスクリプトーム中で最も豊富な転写産物の１つであるが、スポロゾイトのプロテオミクス調査では検出されていない。むしろ、発現は、肝病期でのみ検出されている（例えば、Ｓｉａｕｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＰａｔｈｏｇ．２００８Ａｕｇ８；４（８）：ｅ１０００１２１を参照されたく、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＬＳＡＰ－１配列は、既知である（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｑ８Ｉ６３２、Ｗ７ＪＲ５３を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。例示的なＬＳＡＰ－１アミノ酸配列は、配列番号３０２に提供される。

ＬＳＡＰ－１と同様に、ＬＳＡＰ－２もまた、唾液腺トランスクリプトーム中で最も豊富な転写産物であるが、スポロゾイトのプロテオミクス調査では検出されていない。ＬＳＡＰ－２は、他の抗原と組み合わせた場合、ワクチンとしていくらかの有効性を示している。例えば、Ｈａｌｂｒｏｔｈｅｔａｌ．，ＩｎｆｅｃｔＩｍｍｕｎ．２０２０Ｊａｎ２２；８８（２）：ｅ００５７３－１９．ｄｏｉ：１０．１１２８／ＩＡＩ．００５７３－１９．Ｐｒｉｎｔ２０２０Ｊａｎ２２を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＬＳＡＰ－２配列は、既知である（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｑ８Ｉ６３２、Ｗ７ＪＲ５３を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。例示的なＬＳＡＰ－２アミノ酸配列は、配列番号３０５に提供される。

肝病期抗原１（ＬＳＡ－１）は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍが肝細胞に侵入し、抗原が寄生体胞に蓄積した後に発現される（例えば、Ｔｕｃｋｅｒ，Ｋ．ｅｔａｌ．，２０１６，‘Ｐｒｅ－ＥｒｙｔｈｒｏｃｙｔｉｃＶａｃｃｉｎｅＣａｎｄｉｄａｔｅｓｉｎＭａｌａｒｉａ’，ｉｎＡ．Ｊ．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ｍｏｒａｌｅｓ（ｅｄ．），ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＭａｌａｒｉａ，ＩｎｔｅｃｈＯｐｅｎ，Ｌｏｎｄｏｎ．１０．５７７２／６５５９２を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＬＳＡ－１の機能は現在のところ知られていない（例えば、Ｔｕｃｋｅｒ，Ｋ．ｅｔａｌ．，２０１６，「Ｐｒｅ－ＥｒｙｔｈｒｏｃｙｔｉｃＶａｃｃｉｎｅＣａｎｄｉｄａｔｅｓｉｎＭａｌａｒｉａ」，ｉｎＡ．Ｊ．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ｍｏｒａｌｅｓ（ｅｄ．），ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＭａｌａｒｉａ，ＩｎｔｅｃｈＯｐｅｎ，Ｌｏｎｄｏｎ．１０．５７７２／６５５９２を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

ＬＳＡ－１は、高度に保存されたＣ末端領域及びＮ末端領域に隣接する８０を超える１７個のアミノ酸残基反復ユニットからなる大きな中央領域を含む２３０ｋＤａの赤血球前段階タンパク質である（Ｒｉｃｈｉｅ，Ｔ．Ｌ．ａｎｄＰａｒｅｋｈ，Ｆ．Ｋ．（２００９）Ｍａｌａｒｉａ、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＩｎＶａｃｃｉｎｅｓｆｏｒＢｉｏｄｅｆｅｎｓｅａｎｄＥｍｅｒｇｉｎｇａｎｄＮｅｇｌｅｃｔｅｄＤｉｓｅａｓｅｓ（Ｂａｒｒｅｔｔ，Ａ．Ｄ．Ｔ．ａｎｄＳｔａｎｂｅｒｒｙＬ．Ｒ．，ｅｄｓ），ｐｐ．１３０９－１３６４，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＬＳＡ１は、肝病期Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍによってのみ発現され、スポロゾイトによっては発現されない（Ｒｉｃｈｉｅ，Ｔ．Ｌ．ａｎｄＰａｒｅｋｈ，Ｆ．Ｋ．（２００９）Ｍａｌａｒｉａ、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＩｎＶａｃｃｉｎｅｓｆｏｒＢｉｏｄｅｆｅｎｓｅａｎｄＥｍｅｒｇｉｎｇａｎｄＮｅｇｌｅｃｔｅｄＤｉｓｅａｓｅｓ（Ｂａｒｒｅｔｔ，Ａ．Ｄ．Ｔ．ａｎｄＳｔａｎｂｅｒｒｙＬ．Ｒ．，ｅｄｓ），ｐｐ．１３０９－１３６４，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。反復領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍの株間でタンパク質の顕著な変動をもたらす（例えば、Ｔｕｃｋｅｒ，Ｋ．ｅｔａｌ．，２０１６，「Ｐｒｅ－ＥｒｙｔｈｒｏｃｙｔｉｃＶａｃｃｉｎｅＣａｎｄｉｄａｔｅｓｉｎＭａｌａｒｉａ」，ｉｎＡ．Ｊ．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ｍｏｒａｌｅｓ（ｅｄ．），ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＭａｌａｒｉａ，ＩｎｔｅｃｈＯｐｅｎ，Ｌｏｎｄｏｎ．１０．５７７２／６５５９２を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＬＳＡ－１配列は、既知である（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｑ２５８８６、Ｑ２５８８７、Ｑ２５８９３、Ｑ２６０２８、Ｑ９ＧＴＸ５、Ｏ９６１２５を参照されたく、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。例示的なＬＳＡ－１アミノ酸配列は、配列番号２９０に提供される。

肝病期抗原３（ＬＳＡ－３）は、２つの短い反復領域及び１つの長い反復領域に隣接する３つの非反復領域（ＮＲ－Ａ、ＮＲ－Ｂ、及びＮＲ－Ｃ）からなる２００－ｋＤａタンパク質である（例えば、Ｔｕｃｋｅｒ，Ｋ．ｅｔａｌ．，２０１６，「Ｐｒｅ－ＥｒｙｔｈｒｏｃｙｔｉｃＶａｃｃｉｎｅＣａｎｄｉｄａｔｅｓｉｎＭａｌａｒｉａ」，ｉｎＡ．Ｊ．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ｍｏｒａｌｅｓ（ｅｄ．）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＭａｌａｒｉａ，ＩｎｔｅｃｈＯｐｅｎ，Ｌｏｎｄｏｎ．１０．５７７２／６５５９２（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。非反復領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍの地理的に多様な株にわたって十分に保存されている（例えば、Ｔｕｃｋｅｒ，Ｋ．ｅｔａｌ．，２０１６，‘Ｐｒｅ－ＥｒｙｔｈｒｏｃｙｔｉｃＶａｃｃｉｎｅＣａｎｄｉｄａｔｅｓｉｎＭａｌａｒｉａ’，ｉｎＡ．Ｊ．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ｍｏｒａｌｅｓ（ｅｄ．），ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＭａｌａｒｉａ，ＩｎｔｅｃｈＯｐｅｎ，Ｌｏｎｄｏｎ．１０．５７７２／６５５９２を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。最も顕著な変動は、反復領域の組成ではなく、反復サブユニットの組織及び数に起因する反復領域である（例えば、Ｔｕｃｋｅｒ，Ｋ．ｅｔａｌ．，２０１６，‘Ｐｒｅ－ＥｒｙｔｈｒｏｃｙｔｉｃＶａｃｃｉｎｅＣａｎｄｉｄａｔｅｓｉｎＭａｌａｒｉａ’，ｉｎＡ．Ｊ．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ｍｏｒａｌｅｓ（ｅｄ．），ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＭａｌａｒｉａ，ＩｎｔｅｃｈＯｐｅｎ，Ｌｏｎｄｏｎ．１０．５７７２／６５５９２を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

最近、インビトロデータは、ＬＳＡ－３（特に、ＬＳＡ－３のＣ末端部分）に対する抗体がある程度の保護を提供し得ることを示している（例えば、Ｍｏｒｉｔａｅｔａｌ，ＳｃｉＲｅｐ．２０１７Ａｐｒ５；７：４６０８６．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ４６０８６を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＬＳＡ－３配列は、既知である（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｃ７ＤＵ２１、Ｃ７ＤＵ２２、Ｃ７ＤＵ２３、Ｃ７ＤＵ２４、Ｃ７ＤＵ２５、Ｃ７ＤＵ２６、Ｃ７ＤＵ２７、Ｃ７ＤＵ２８、Ｃ７ＤＵ２９、Ｃ７ＤＵ３２、Ｃ７ＤＵ３３、Ｃ７ＤＵ３４、Ｃ７ＤＵ３６、Ｃ７ＤＵ３７、Ｃ７ＤＵ３８、Ｃ７ＤＵ３９、Ｃ７ＤＵ４０、Ｑ８Ｉ０４２、Ｑ８Ｉ０Ａ５、Ｑ８Ｉ０Ｄ０、Ｑ８ＩＦＲ１、Ｑ８ＩＦＲ２、Ｑ８ＩＦＲ３、Ｑ８ＩＦＲ４、Ｑ８ＩＦＲ５、Ｑ８ＩＦＲ６、Ｑ８ＩＦＲ７、Ｑ８ＩＦＲ８、Ｑ８ＩＦＲ９、Ｑ８ＩＦＳ０、Ｑ８ＩＦＳ１、Ｑ８ＩＦＳ２、Ｑ８ＩＦＳ３、Ｑ８ＩＦＳ４、Ｑ８ＩＦＳ５、Ｑ８ＩＦＳ６、Ｑ８ＩＦＳ７、Ｑ８ＩＦＳ８、Ｑ８ＩＦＳ９、Ｑ８ＩＦＴ０、Ｑ８ＩＦＴ１、Ｑ８ＩＦＴ２、Ｑ８ＩＦＴ３、Ｑ８ＩＦＴ４、Ｑ９Ｕ０Ｎ９、Ｑ９Ｕ０Ｐ０、Ａ０Ａ２Ｉ０ＢＶＤ６、Ａ０ＰＦＭ９、Ｏ９６２７５を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。例示的なＬＳＡ－３アミノ酸配列は、配列番号２９９に提供される。

グルタミン酸リッチタンパク質（ＧＡＲＰ）は、その全ての残基の２４％を構成するそのグルタミン酸リッチアミノ酸配列からその名前が由来する８０ｋＤＡタンパク質である。ＧＡＲＰは、主に環状期及びトロフォゾイトにおいて発現され、細胞培養においては非必須遺伝子であるが、動物モデルにおいては非常に免疫原性であることが示されている。ＧＡＲＰは細胞培養において必須ではないが、感染した赤血球の末梢へのその局在化は、感染した赤血球の隔離における役割を示し得る。隔離におけるＧＡＲＰの関与は、塩化物／重炭酸塩陰イオン交換体と結合することによって生じることが提案されている。ＧＡＲＰに対する抗体は、重度のマラリアに対する保護の署名として機能することが提案されており、サルにおける実験試験において有効性を示している（例えば、Ｈｏｎｅｔａｌ，ＴｒｅｎｄｓｉｎＰａｒａｓ２０２０Ａｕｇ；３６（８）：６５３－６５５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｐｔ．２０２０．０５．０１２、及びＬａｕｅｔａｌ，ＰｌｏｓＰａｔｈ．２０１４１０，ｅ１００４１３５を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＧＡＲＰ配列は既知であり（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｑ９ＧＴＷ３、Ｑ９Ｕ０Ｎ１を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、例示的なＧＡＲＰアミノ酸配列は、配列番号３４１に提供される。

寄生虫に感染した赤血球特異的タンパク質２（ＰＩＥＳＰ２）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｑ８Ｉ４８８を参照されたい）は、トロフォゾイト期で最初に発現され、脳性マラリアの臨床的進行に重要であると考えられる高免疫原性タンパク質である。このタンパク質は主に赤血球内に見出されるが、赤血球の表面に存在することが示されており、脳の血管系の内皮細胞に付着することができる。ＰＩＥＳＰ２に対する抗体は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍの血管付着を予防することが分かっており、脳内の炎症反応及び脳性マラリア進行中の血液脳関門の障害の予防に有用であることが証明され得る（例えば、Ｌｉｕｅｔａｌ，ＩｎｔＪＢｉｏｌＭａｃｒｏｍｏｌ．２０２１Ａｐｒ３０；１７７：５３５－５４７．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｊｂｉｏｍａｃ．２０２１．０２．１４５を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＰＩＥＳＰ２配列は既知であり（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｑ８Ｉ４８８を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、例示的なＰＩＥＳＰ２アミノ酸配列は、配列番号３４４に提供される。

Ｓｃｈｉｚｏｎｔｅｇｒｅｓｓ抗原－１（ＳＥＡ１）は、膜貫通ドメインまたは既知の標的化シグナルを欠く大きな２４４ｋＤＡタンパク質である。ＳＥＡ１の機能は知られていないが、げっ歯類ワクチン研究で有効であることが示されており、小児に見出される保護抗体の標的として提案されている。ＳＥＡ１は、このタンパク質に対する抗体がＰｌａｓｍｏｄｉｕｍメロゾイトの放出を阻害することが報告された後にその名前を得た。ＳＥＡ１は、核分裂中にセントロメアに密接に局在化し、複製の本質的プロセスにおけるその役割に影響を及ぼす。今日まで、様々な研究は、放出におけるＳＥＡ１の役割だけでなく、複製中の核の有糸分裂における役割も提案している。（Ｐｅｒｒｉｎｅｔａｌ．２０２１、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）（例えば、Ｐｅｒｒｉｎｅｔａｌ，ｍＢｉｏ．２０２１Ｍａｒ９；１２（２）：ｅ０３３７７－２０．ｄｏｉ：１０．１１２８／ｍＢｉｏ．０３３７７－２０を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＳＥＡ１配列は既知であり（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ａ０Ａ１４３ＺＸＭ２を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、例示的なＳＥＡ１アミノ酸配列は、配列番号３４７に提供される。

Ｄ．Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ配列の実施形態
Ｐｌａｓｍｏｉｄｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からの例示的な野生型ＣＳＰポリペプチドアミノ配列は、配列番号１に提示され、以下：分泌シグナル（アミノ酸１～１８）、Ｎ末端ドメイン（アミノ酸１９～１０４）、接合部領域（アミノ酸９３～１０４）、中央ドメイン（アミノ酸１０５～２７２）、及びＣ末端ドメイン（アミノ酸２７３～３９７）を含む。例示的な配列番号１では、Ｎ末端ドメインは、Ｎ末端領域（アミノ酸１９～８０）、Ｎ末端端部領域（アミノ酸８１～９２）、及び接合部領域（アミノ酸９３～１０４）を含む。例示的な配列番号１では、接合部領域は、９８～１０４位にＲ１領域（アミノ酸９３～９７）及び接合部（配列番号１３２）を含む。例示的な配列番号１では、中央ドメインは、少数の反復領域（アミノ酸１０５～１２８）及び主要な反復領域（アミノ酸１２９～２７２）を含む。例示的な配列番号１では、少数の反復領域は、アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＶＤＰ（配列番号１０２）の３つの反復を含む。例示的な配列番号１では、主要な反復領域は、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の３５の反復を含み、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の３５の反復は、２つの連続したストレッチに分離され、１つのストレッチは、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の１７の反復を含み、１つのストレッチは、ＮＶＤＰ（配列番号１４４）のアミノ酸配列に隣接するアミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の１８の反復を含む。主要な反復領域は、アミノ酸配列ＮＰＮＡＮＰ（配列番号１５０）及びＮＡＮＰＮＡ（配列番号１５３）を含む。例示的な配列番号１では、Ｃ末端ドメインは、Ｃ末端領域（アミノ酸２７３～３７５）、セリン－バリン（アミノ酸３７６～３７７）、及び膜貫通ドメイン（アミノ酸３７８～３９７）を含む。例示的な配列番号１では、Ｃ末端領域は、Ｔｈ２Ｒ領域（アミノ酸３１４～３２７）及びＴｈ３Ｒ領域（アミノ酸３５２～３６３）を含む。

ＩＩ．Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物
本開示は、数ある中でも特に、本明細書に記載の１つ以上のマラリアタンパク質、またはその１つ以上の部分を含む、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物（本明細書では「マラリア（ｍａｌａｒｉａ）ポリペプチド構築物」または「マラリア（ｍａｌａｒｉａｌ）ポリペプチド構築物」とも称される）を発現するモダリティとして、ＲＮＡ技術を利用する。例えば、いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分（例えば、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの免疫原性断片）を含む。ＣＳＰポリペプチドまたは領域の部分は、ＣＳＰポリペプチドまたは領域の特徴的な部分であり得る。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、本明細書に記載されるように、分泌シグナル（例えば、異種分泌シグナル）、膜貫通領域（例えば、異種膜貫通領域）、ヘルパー抗原、多量体化領域、及び／またはリンカーなどの１つ以上の追加のアミノ酸配列をさらに含む。

Ａ．ＣＳＰ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＣＳＰ、例えば、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ、例えば、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍＣＳＰ（配列番号１）、またはそのバリアント（例えば、ＣＳＰ、例えば、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ、例えば、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍＣＳＰの１つ以上の免疫原性断片、またはその免疫原性バリアント）の１つ以上の領域または部分を含む。ＣＳＰの領域（またはＣＳＰポリペプチド領域）は、Ｎ末端領域、Ｎ末端端部領域、接合部領域、少数の反復領域、主要な反復領域、またはＣ末端領域を指し得る。ＣＳＰの部分（またはＣＳＰポリペプチド部分）は、ＣＳＰポリペプチド領域の一部または２つ以上のＣＳＰポリペプチド領域に及ぶ一部を指し得る。いくつかの実施形態では、ＣＳＰポリペプチド部分は、配列番号１によるアミノ酸配列の２５、３０、３５、４０、または４５の連続したアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、分泌シグナルまたは膜貫通領域を含まず、例えば、配列番号１によるアミノ酸配列のアミノ酸１９～３７５に対応するか、または配列番号１によるアミノ酸配列のアミノ酸１９～３７６もしくは１９～３７７に対応する、すなわち、Ｃ末端領域の直後にセリンもしくはセリン及びバリンを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＣＳＰの少数の反復領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＣＳＰの少数の反復領域の部分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＰの少数の反復領域の部分は、長さ約１０、１５、２０、２１、２２、または２３の連続したアミノ酸である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＣＳＰの主要な反復領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＣＳＰの主要な反復領域の部分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＰの主要な反復領域の部分は、長さ約１００、１１０、１２０、１３０、１３５、１４０、１４１、または１４２のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＣＳＰＣ末端領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＣＳＰＣ末端領域の部分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＰＣ末端領域の部分は、長さ約８０、９０、９５、１００、１０１、または１０２のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＣＳＰＮ末端領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＣＳＰＮ末端領域の部分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＰＮ末端領域の部分は、長さ約４５、５０、５５、６０、または６１のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＣＳＰＮ末端端部領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＣＳＰＮ末端端部領域の部分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＰＮ末端端部領域の部分は、長さ約８、９、１０、または１１のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＣＳＰ接合部領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＣＳＰ接合部領域の部分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＰ接合部領域の部分は、長さ約８、９、１０、または１１のアミノ酸である。

少数の反復領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の１つ以上の反復を含む１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの少数の反復領域またはその部分を含み、ポリペプチドは、ＮＰＮＡ、ＮＰＮＡＮＰ（配列番号１５０）、またはＮＡＮＰＮＡ（配列番号１５３）のアミノ酸配列を含まない。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２）の反復を含む、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の２つ以上（例えば、２～１２、または２～１０、または２～９、または２～８、または４～１２、または４～１０）の反復を含む１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の正確に３つの反復を含む、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の正確に８回の反復を含む、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の正確に９つの反復を含む、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む。

いくつかの実施形態では、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の反復は、全て互いに連続している。いくつかの実施形態では、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の反復は、全て互いに連続しているわけではない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの少数の反復領域の４つの部分を含み、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチドの各部分は、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の２つの連続した反復を含む。

Ｃ末端領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、配列番号１のアミノ酸２７３～３７５）、またはその１つ以上の部分を含み、Ｃ末端領域は、膜貫通領域を含まない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、正確に１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域を含み、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域は、配列番号１のアミノ酸２７３～３７５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域（例えば、配列番号１のアミノ酸２７３～３７５）の２つ以上の部分を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の１つ以上の部分を含み、１つ以上の部分の各々は、（ｉ）配列番号１のアミノ酸３１４～３２７（または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸３１４～３２７）、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸３５２～３６３（または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸３５２～３６３）、（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸３２６～３７４（または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸３２６～３７４）、（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸３６４～３７７（または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸３６４～３７７）、または（ｖ）それらの組み合わせを含むか、またはそれらからなる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の１つの部分を含み、部分は、（ｉ）配列番号１のアミノ酸３１４～３２７（または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸３１４～３２７）、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸３５２～３６３（または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸３５２～３６３）、（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸３２６～３７４（または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号Ｚのアミノ酸３２６～３７４）、（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸３６４～３７７（または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸３６４～３７７）、または（ｖ）それらの組み合わせを含むか、またはそれらからなる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の１つ以上の部分を含み、１つ以上の部分は、まとめて、（ｉ）配列番号１のアミノ酸３１４～３２７（または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸３１４～３２７）、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸３５２～３６３（または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸３５２～３６３）、（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸３２６～３７４（または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸３２６～３７４）、（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸３６４～３７７（または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸３６４～３７７）、または（ｖ）それらの組み合わせを含むか、またはそれらからなる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリンアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリンアミノ酸配列を含む。

接合部領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、正確に１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域を含む。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域は、配列番号１のアミノ酸９３～１０４（または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸９３～１０４）を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の１つ以上の部分を含む。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の１つ以上の部分は、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、Ｑ９６、及びＰ９７のうちの１つ以上の欠失を含み、アミノ酸番号付けは、配列番号１に対応する。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の１つ以上の部分は、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、及びＱ９６の欠失を含み、アミノ酸番号付けは、配列番号１に対応する。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の１つ以上の部分は、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、Ｑ９６、及びＰ９７の欠失を含み、アミノ酸番号付けは、配列番号１に対応する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸置換変異を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換変異は、Ｋ９３Ａ変異、Ｌ９４Ａ変異、またはその両方を含み、アミノ酸番号付けは、配列番号１に対応する。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアントは、ＡＡＫＱのアミノ酸配列（配列番号４２６）を含む。

Ｎ末端端部領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域は、配列番号１のアミノ酸８１～９２（または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸８１～９２）を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその任意の部分を含まない（すなわち、ＣＳＰＮ末端端部領域またはその任意の部分を欠くか、または除外する）。

Ｎ末端領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域は、配列番号１のアミノ酸１９～８０を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域は、配列番号１のアミノ酸１９～８０に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその任意の部分を含まない（すなわち、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその任意の部分を欠くかまたは除外する）。

主要な反復領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、正確に１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分を含み、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分は、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の合計少なくとも２つかつ最大で３５の反復を含む。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分は、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の反復の２つの連続したストレッチを含み、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の反復の２つの連続したストレッチは、ＮＶＤＰ（配列番号１４４）のアミノ酸配列に隣接する。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域は、Ｎ末端からＣ末端の順で、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の１７の反復、ＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１４４）、及びアミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の１８の反復を含む。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域の部分は、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の最大で１８の連続した反復からなる。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域の部分は、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の２つの連続した反復からなる。１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分は、常に、ＮＰＮＡＮＰ（配列番号１５０）またはＮＡＮＰＮＡ（配列番号１５３）のアミノ酸配列の少なくとも１つの反復を含む。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域は、配列番号１のアミノ酸１２９～２７２に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域、またはアミノ酸配列ＮＰＮＡ（配列番号１４１）を含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域の部分を含まない（すなわち、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域、またはアミノ酸配列ＮＰＮＡ［配列番号１４１］を含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域の部分を欠くかまたは除外する）。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、任意選択的に、以下のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分のうちの１つ以上を含み、存在する場合、以下のＮ末端からＣ末端の順で、（ｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、（ｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、（ｉｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント、（ｉｖ）ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列（配列番号１０２）の１つ以上の反復、（ｖ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分、及び（ｖｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分、である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、任意選択的に、以下のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分のうちの１つ以上を含み、存在する場合、以下のＮ末端からＣ末端の順で、（ｉ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域もしくはその部分、（ｉｉ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域もしくはその部分、（ｉｉｉ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、もしくはそのバリアント、（ｉｖ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの少数の反復配列、（ｖ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域もしくはその部分、及び（ｖｉ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域もしくはその部分、である。

Ｂ．分泌シグナル
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、例えば、哺乳動物細胞において機能的である分泌シグナルを含む。いくつかの実施形態では、分泌シグナルは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ分泌シグナルは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ分泌シグナルは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからである。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ分泌シグナルは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７（配列番号１７４）からである。

いくつかの実施形態では、利用される分泌シグナルは、異種分泌シグナルである。いくつかの実施形態では、異種分泌シグナルは、非ヒト分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、異種分泌シグナルは、ウイルス分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ウイルス分泌シグナルは、ＨＳＶ分泌シグナル（例えば、ＨＳＶ－１もしくはＨＳＶ－２分泌シグナル）を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ分泌シグナルは、ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、分泌シグナルは、Ｅｂｏｌａウイルス分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｅｂｏｌａウイルス分泌シグナルは、Ｅｂｏｌａウイルススパイク糖タンパク質（ＳＧＰ）分泌シグナルを含むか、またはそれからなる。

本開示は、いくつかの実施形態では、寄生抗原をコードするポリペプチド構築物にウイルス分泌シグナルを含めることは、１つ以上の改善された特徴を有することができるという洞察を提供する。いくつかの実施形態では、ポリペプチド構築物は、ウイルス分泌シグナル及び１つ以上の寄生抗原を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の寄生抗原は、１つ以上のマラリア抗原を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のマラリア抗原は、本明細書に記載されるような１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、ウイルス分泌シグナルは、ＨＳＶ分泌シグナル（例えば、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２分泌シグナル）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ分泌シグナルは、ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）分泌シグナルを含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＶｇＤ分泌シグナルは、ＨＳＶ－１ｇＤ分泌シグナルを含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＶｇＤ分泌シグナルは、ＨＳＶ－２ｇＤ分泌シグナルを含む。

いくつかの実施形態では、ポリペプチド構築物は、ＨＳＶ－１ｇＤ分泌シグナル及び１つ以上の寄生抗原を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド構築物は、ＨＳＶ－１ｇＤ分泌シグナル及び１つ以上のマラリア抗原を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド構築物は、本明細書に記載されるようなＨＳＶ－１ｇＤ分泌シグナル及び１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む。

いくつかの実施形態では、ポリペプチド構築物は、ＨＳＶ－２ｇＤ分泌シグナル及び１つ以上の寄生抗原を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド構築物は、ＨＳＶ－２ｇＤ分泌シグナル及び１つ以上のマラリア抗原を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド構築物は、本明細書に記載されるように、ＨＳＶ－２ｇＤ分泌シグナル及び１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む。

いくつかの実施形態では、寄生抗原及びウイルス分泌シグナルを含むポリペプチド構築物は、１つ以上の改善された特徴を有する。いくつかの実施形態では、改善された特徴は、例えば、発現の増加（例えば、エクスビボ発現の増加（例えば、細胞外発現）、またはインビボ発現の増加（例えば、細胞外発現））、スポロゾイト横断の阻害の改善、及び／またはスポロゾイト結合の改善である。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ウイルス分泌シグナルを含み、１つ以上の改善された特徴を有する。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＨＳＶ分泌シグナル（例えば、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２分泌シグナル）を含み、１つ以上の改善された特徴を有する。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）分泌シグナルを含み、１つ以上の改善された特徴を有する。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）分泌シグナルを含み、１つ以上の改善された特徴を有する。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）分泌シグナルを含み、１つ以上の改善された特徴を有する。

いくつかの実施形態では、ウイルス分泌領域を含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍムポリペプチド構築物は、発現の増加（例えば、エクスビボ発現の増加（例えば、細胞外発現）、またはインビボ発現の増加（例えば、細胞外発現）を有する。例えば、いくつかの実施形態では、異種分泌領域を含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、例えば、哺乳動物細胞において、エクスビボ発現の増加を有する。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞は、以下の実施例１に記載されるような（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞）にあることができる。

いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ウイルス分泌シグナルを含み、非ウイルス分泌シグナル（例えば、Ｐｆ分泌シグナル）を有する他の同一の構築物と比較して、哺乳動物細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞）において増加した発現を有する。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＨＳＶ分泌シグナル（例えば、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２分泌シグナル）を含み、非ウイルス分泌シグナル（例えば、Ｐｆ分泌シグナル）を有する以外は同一である構築物と比較して、哺乳動物細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞）において増加した発現を有する。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）分泌シグナルを含み、非ウイルス分泌シグナル（例えば、Ｐｆ分泌シグナル）を有する以外は同一である構築物と比較して、哺乳動物細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞）における発現の増加を有する。

いくつかの実施形態では、異種分泌領域を含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、スポロゾイト横断の改善された阻害を有する。例えば、いくつかの実施形態では、異種分泌領域を含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、例えば、以下の実施例２に記載されるような、例えば、横断アッセイを使用して測定されるような、スポロゾイト横断を阻害する抗体の改善された産生を有する。

いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ウイルス分泌シグナルを含み、非ウイルス分泌シグナル（例えば、Ｐｆ分泌シグナル）を有する以外は同一である構築物と比較して、改善されたスポロゾイト横断阻害を有する。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＨＳＶ分泌シグナル（例えば、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２分泌シグナル）を含み、非ウイルス分泌シグナル（例えば、Ｐｆ分泌シグナル）を有する以外は同一である構築物と比較して、改善されたスポロゾイト横断の阻害を有する。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）分泌シグナルを含み、それ以外の点では同一である非ウイルス分泌シグナル（例えば、Ｐｆ分泌シグナル）を有する構築物に対してスポロゾイト横断の改善された阻害を有する。

いくつかの実施形態では、異種分泌領域を含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、改善されたスポロゾイト結合を有する。例えば、いくつかの実施形態では、例えば、以下の実施例２に記載されるように、異種分泌領域を含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＰｆＣＳＰ発現ベルゲイＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ（ＰｂＰｆ）スポロゾイト上の天然ＰｆＣＳＰへの結合を改善する。

いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ウイルス分泌シグナルを含み、それ以外の点では同一である非ウイルス分泌シグナル（例えば、Ｐｆ分泌シグナル）を有する構築物に対してスポロゾイト結合の改善された阻害を有する。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＨＳＶ分泌シグナル（例えば、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２分泌シグナル）を含み、それ以外の点では同じである非ウイルス分泌シグナル（例えば、Ｐｆ分泌シグナル）を有する構築物に対して改善されたスポロゾイト結合を有する。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）分泌シグナルを含み、それ以外の点では同一である非ウイルス分泌シグナル（例えば、Ｐｆ分泌シグナル）を有する構築物に対して改善されたスポロゾイト結合を有する。

いくつかの実施形態では、分泌シグナルは、約１５～３０アミノ酸の長さによって特徴付けられる。

多くの実施形態では、分泌シグナルは、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物のＮ末端に位置付けられる。いくつかの実施形態では、分泌シグナルは、好ましくは、それが関連するＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物の、規定された細胞区画、好ましくは細胞表面、小胞体（ＥＲ）、またはエンドソーム－リソソーム区画への輸送を可能にする。

いくつかの実施形態では、分泌シグナルは、Ｓ１Ｓ２シグナルペプチド（ａａ１－１９）、免疫グロブリン分泌シグナルペプチド（ａａ１－２２）、ヒトＳＰＡＲＣシグナルペプチド、ヒトインスリンアイソフォーム分泌シグナル、ヒトアルブミンシグナルペプチドなどから選択される。当業者は、例えば、ＷＯ２０１７／０８１０８２に開示されるような他の分泌シグナル（これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）（例えば、配列番号１～１１１５及び１７２８、またはそれらの断片バリアント）を認識するであろう。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、分泌シグナルを含まない。

いくつかの実施形態では、分泌シグナルは、表３に列挙される配列番号によるアミノ酸配列を含むもの、またはそれに対して１、２、３、４、または５つのアミノ酸差を有する分泌シグナルである。いくつかの実施形態では、シグナル配列は、以下の表３に提供されるもの及び／または以下の表４に提供される配列によってコードされるものから選択される。

Ｃ．膜貫通領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、膜貫通領域を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ膜貫通領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、利用される膜貫通領域は、通常、自然界でＣＳＰと会合するものである。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ膜貫通領域は、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＧＰＩアンカー領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからである。いくつかの実施形態では、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＧＰＩアンカー領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７（配列番号２３１）、例えば、配列番号１のアミノ酸３７８～３９７からである。いくつかの実施形態では、利用される膜貫通領域は、異種膜貫通領域である。

いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物のＮ末端に位置する。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物のＣ末端に位置する。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物のＮ末端またはＣ末端に位置しない。

膜貫通領域は、当該技術分野で既知であり、そのうちのいずれかは、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物で利用することができる。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、インフルエンザウイルスのヘマグルチニン（ＨＡ）、ＨＩＶ－１のＥｎｖ、ウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、マウス乳癌腫瘍ウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）のＧタンパク質、狂犬病ウイルス、または７つの膜貫通ドメイン受容体の膜貫通ドメインを含むか、またはそれである。

いくつかの実施形態では、異種膜貫通領域は、ヘマグルチン膜貫通領域を含まない。いくつかの実施形態では、異種膜貫通領域は、非ヒト膜貫通領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、異種膜貫通領域は、ウイルス膜貫通領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、異種膜貫通領域は、ＨＳＶ膜貫通領域（例えば、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２の膜貫通領域）を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ膜貫通領域は、ＨＳＶｇＤ膜貫通領域を含むか、またはそれからなる、例えば、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、異種膜貫通領域は、ヒト膜貫通領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒト膜貫通領域は、ヒト崩壊促進因子グリコシルホスファチジルイノシトール（ｈＤＡＦ－ＧＰＩ）アンカー領域を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ｈＤＡＦ－ＧＰＩアンカー領域は、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、膜貫通領域を含まない。

Ｇ．ヘルパー抗原
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のヘルパー抗原を含む。当業者は、例えば、ＷＯ２０２０１２８０３１（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものを含む、様々な潜在的に有用なヘルパー抗原（例えば、Ｐ２破傷風トキソイド、ＰＡＤＲＥペプチド、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ））を認識している。いくつかの実施形態では、ヘルパー抗原は、抗原がＣＳＰポリペプチドまたはその部分ではないことを条件に、マラリアタンパク質（例えば、本明細書に記載のマラリアタンパク質）である。いくつかの実施形態では、ヘルパー抗原は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸ヒドロリラーゼ抗原、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期抗原１（ａ）、（ＬＳＡ－１（ａ））、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期抗原１（ｂ）（ＬＳＡ－１（ｂ））、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍトロンボスポンジン関連匿名タンパク質（ＴＲＡＰ）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期関連タンパク質１（ＬＳＡＰ１）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期関連タンパク質２（ＬＳＡＰ２）、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＵＩＳ３、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＵＩＳ４、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＥＴＲＡＭＰ１０．３、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝特異的タンパク質１（ＬＩＳＰ－１）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝特異的タンパク質２（ＬＩＳＰ－２）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期抗原３（ＬＳＡ－３）、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＥＸＰ１、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＥ１４０、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ網状赤血球結合タンパク質ホモログ５（Ｒｈ５）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍグルタミン酸リッチタンパク質（ＧＡＲＰ）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫感染赤血球表面タンパク質２（ＰＩＥＳＰ２）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍシステインリッチ防御抗原（ＣｙＲＰＡ）、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＲｉｐｒ、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＰ１１３、またはそれらの組み合わせである。

いくつかの実施形態では、ヘルパー抗原は、例えば、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸ヒドロリラーゼ抗原を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヘルパー抗原は、例えば、配列番号２４３によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ肝病期抗原３を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヘルパー抗原は、例えば、配列番号２４６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ抗原、例えば、ＡｎｏｐｈｅｌｅｓｇａｍｂｉａｅＴＲＩＯを含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、分泌シグナル（例えば、本明細書に記載の分泌シグナル）を含み、ヘルパー抗原は、分泌シグナルの直後である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｃ末端に位置するヘルパー抗原を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＣＳＰ部分とヘルパー抗原との間にリンカーを含む。

Ｅ．多量体化領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上の多量体化領域（例えば、異種多量体化領域）を含む。いくつかの実施形態では、異種多量体化領域は、二量体化領域、三量体化領域、または四量体化領域を含む。

いくつかの実施形態では、多量体化領域は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／０８１０８２に記載されるものである（例えば、配列番号１１１６～１１６７、またはその断片もしくはバリアント）。例示的な三量体化及び四量体化領域としては、操作されたロイシンジッパー、腸内細菌ファージＴ４からのフィブリチンフォルドンドメイン、ＧＣＮ４ｐｌｌ、ＧＣＮ４－ｐｌｌ、及びｐ５３が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、提供されるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、三量体複合体を形成することができる。例えば、提供されるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、例えば、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物の三量体複合体などの多量体複合体の形成を可能にする多量体化領域を含み得る。いくつかの実施形態では、多量体複合体の形成を可能にする多量体化領域は、三量体化領域、例えば、本明細書に記載の三量体化領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、例えば、その免疫原性を増大させるために、Ｔ４－フィブリチン由来の「フォルドン」三量体化領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、配列番号２５５によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる多量体化領域を含む。

Ｆ．リンカー
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上のアミノ酸であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、約３０以下、２５以下、２０以下、１５以下、１０以下、またはそれ以下のアミノ酸であるかまたは約３０以下、２５以下、２０以下、１５以下、１０以下、またはそれ以下のアミノ酸を含む。リンカーは、任意のアミノ酸配列を含むことができ、特定のアミノ酸に限定されない。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のグリシン（Ｇ）アミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のセリン（Ｓ）アミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、高度に切断可能なリンカーを生成するため、切断予測因子に基づいて選択されるアミノ酸を含む。

いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｓ－Ｇ_４－Ｓ－Ｇ_４－Ｓであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２６７によるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２５８によるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２６１、２６７、２５８、２７６、２７９、２７０、２８２、２６４、または２７３によるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／０８１０８２に記載の配列であるか、またはそれを含む（配列番号１５０９～１５６５、またはその断片もしくはバリアントを参照されたい）。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｃ末端領域またはその部分と膜貫通領域との間にリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、少数の反復配列の後にリンカーを含む。

Ｇ．Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物の実施形態
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、上述の１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む。領域の例示的な組み合わせを以下に説明する。

完全長ＣＳＰ構築物
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰの１つ以上の領域または部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｎ末端領域、Ｎ末端端部領域、接合部領域、少数の反復領域、主要な反復領域、及びＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰの主要な反復領域部分及びＣ末端領域またはその対応する部分のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、構造：Ｎ末端領域－Ｎ末端端部領域－接合部領域－少数の反復領域－主要な反復領域－Ｃ末端領域を有し、領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰからのものである。好ましい実施形態では、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｃ末端領域の直後にセリンまたはセリン及びバリンを有する。好ましい実施形態では、Ｎ末端領域もしくはその部分は、配列番号１の１９～８０位のアミノ酸配列、または配列番号１の１９～８０位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、Ｎ末端端部領域もしくはその部分は、配列番号１の８１～９２位のアミノ酸配列、または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１の８１～９２位のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、接合部領域もしくはその部分は、配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列、または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、少数の反復領域もしくはその部分は、配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列、または配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、主要な反復領域もしくはその部分は、配列番号１の１２９～２７２位のアミノ酸配列、または配列番号１の１２９～２７２位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、Ｃ末端領域もしくはその部分は、配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列、または配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、配列番号１の１９～３７５位のアミノ酸配列、または配列番号１の１９～３７５位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

前述の全てのＣＳＰ領域を含み、かつＣ末端領域の直後にセリンまたはセリン及びバリンを含む、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、完全長ＣＳＰ構築物と称される。

いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、以下の構造を有し得る：
完全長ＣＳＰ構築物、
ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物、
完全長ＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物、
完全長ＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物、
完全長ＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
異種ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物、
完全長ＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ、
異種ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ、
完全長ＣＳＰ構築物－多量体化、
ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－多量体化、
完全長ＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－多量体化、
ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－多量体化、
Ｐｆｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－多量体化、
完全長ＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－多量体化、
Ｐｆｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－多量体化、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－多量体化、
完全長ＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ多量体化、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－多量体化、
Ｐｆｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－多量体化、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－多量体化、
異種ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－多量体化、
完全長ＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－多量体化、または
異種ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－多量体化。

非連続の少数の反復領域を有するＣＳＰ構築物
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰのＮ末端端部領域、接合部領域、少数の反復領域、主要な反復領域、及びＣ末端領域、またはそれらの対応する部分のうちの１つ以上を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、構造：Ｎ末端端部領域－接合部領域－［少数の反復領域－主要な反復領域部分］_ｘ－少数の反復領域－Ｃ末端領域を有し、［少数の反復領域－主要な反復領域部分］は、ｘ回反復し、領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰからである。いくつかの実施形態では、ｘは、２～５である（すなわち、［少数の反復領域－主要な反復領域部分］は、２～５回反復する）。好ましい実施形態では、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、［少数の反復領域－主要な反復領域部分］の２つの反復を有し、その結果、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、構造：Ｎ末端端部領域－接合部領域－少数の反復領域－主要な反復領域部分－少数の反復領域－主要な反復領域部分－少数の反復領域－Ｃ末端領域を有する。好ましい実施形態では、Ｎ末端端部領域もしくはその部分は、配列番号１の８１～９２位のアミノ酸配列、または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１の８１～９２位のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、接合部領域は、配列番号１のＲ１領域（アミノ酸９３～９７）を含む。好ましい実施形態では、接合部領域もしくはその部分は、配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列、または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、少数の反復領域もしくはその部分は、配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列、または配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、主要な反復領域部分は、配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の少なくとも４つの反復、少なくとも５つの反復、少なくとも６つの反復、少なくとも７つの反復を含む。好ましい実施形態では、主要な反復領域部分は、ＮＡＮＰＮＡＮＰＮＡＮＰＮＡＮＰＮＡＮＰＮＡＮＰの配列（配列番号４３７）を含む。好ましい実施形態では、Ｃ末端領域もしくはその部分は、配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列、または配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。前述の全てのＣＳＰ領域またはその対応する部分を含み、非連続の少数の反復領域（すなわち、少数の反復領域－主要な反復領域部分－少数の反復領域－主要な反復領域部分－少数の反復領域）を含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、３ｘＭＲＣＳＰ構築物と称される。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、以下の構造を有し得る：
３ｘＭＲＣＳＰ構築物、
ｓｅｃ－３ｘＭＲＣＳＰ構築物、
３ｘＭＲＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
ｓｅｃ－３ｘＭＲＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－３ｘＭＲＣＳＰ構築物、
３ｘＭＲＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－３ｘＭＲＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－３ｘＭＲＣＳＰ構築物、
３ｘＭＲＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－３ｘＭＲＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－３ｘＭＲＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－３ｘＭＲＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
異種ｓｅｃ－３ｘＭＲＣＳＰ構築物、
３×ＭＲＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ、または
異種ｓｅｃ－３ｘＭＲＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ。

Ｎ末端領域欠失ＣＳＰ構築物
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰのＮ末端端部領域、接合部領域、少数の反復領域、主要な反復領域、及びＣ末端領域、またはそれらの対応する部分のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、構造：Ｎ末端端部領域－接合部領域－少数の反復領域－主要な反復領域－Ｃ末端領域を有し、領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰからである。好ましい実施形態では、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｃ末端領域の直後にセリンまたはセリン及びバリンを有する。好ましい実施形態では、Ｎ末端端部領域またはその部分は、配列番号１の８１～９２位のアミノ酸配列、または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１の８１～９２位のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、接合部領域またはその部分は、配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列、または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、少数の反復領域もしくはその部分は、配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列、または配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、主要な反復領域もしくはその部分は、配列番号１の１２９～２７２位のアミノ酸配列、または配列番号１の１２９～２７２位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、Ｃ末端領域もしくはその部分は、配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列、または配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。Ｎ末端領域またはその部分を除く前述の全てＣＳＰ領域またはその対応する部分を含み、Ｃ末端領域の直後にセリンまたはセリン及びバリンを含むそのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ｄＮＴＣＳＰ構築物と称される。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、以下の構造を有し得る：
ｄＮＴＣＳＰ構築物、
ｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物、
ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
ｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物、
ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物、
ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
異種ｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物、
ｄＮＴＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ、または
異種ｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ。

Ｎ末端領域及び主要な反復領域欠失ＣＳＰ構築物
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰのＮ末端端部領域、接合部領域、１つ以上の少数の反復領域、及びＣ末端領域、またはそれらの対応する部分のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、構造：Ｎ末端端部領域－接合部領域－１つ以上の少数の反復領域－Ｃ末端領域を有し、領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰからである。好ましい実施形態では、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｃ末端領域の直後にセリンまたはセリン及びバリンを有する。好ましい実施形態では、Ｎ末端端部領域もしくはその部分は、配列番号１の８１～９２位のアミノ酸配列、または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１の８１～９２位のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、接合部領域もしくはその部分は、配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列、または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、少数の反復領域もしくはその部分は、配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列、または配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態ではＣ末端領域もしくはその部分は、配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列、または配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、２つ以上の少数の反復領域、例えば、３つの少数の反復領域を有する。Ｎ末端領域及び主要な反復領域、またはそれらの対応する部分を除く前述の全てのＣＳＰ領域または対応する部分を含み、１つ以上の少数の反復領域を有し、かつＣ末端領域の直後にセリンまたはセリン及びバリンを含むそのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物と称される。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、以下の構造を有し得る：
ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物、
ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物、
ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物、
ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物、
ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
異種ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物、
ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ、
異種ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ、
ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ヘルパー抗原、
ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物、ＣＳＰ構築物ヘルパー抗原、
ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ヘルパー抗原、
ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ヘルパー抗原、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物ヘルパー抗原、
ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ヘルパー抗原、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ヘルパー抗原、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ヘルパー抗原、
ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ヘルパー抗原、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ヘルパー抗原、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ヘルパー抗原、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ヘルパー抗原、
異種ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ヘルパー抗原、
ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ヘルパー抗原、または
異種ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ヘルパー抗原。

Ｎ末端ドメイン欠失ＣＳＰ構築物
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰの接合部領域、１つ以上の少数の反復領域、主要な反復領域、及びＣ末端領域、またはそれらの対応する部分のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、構造：接合部領域－１つ以上の少数の反復領域－主要な反復領域－Ｃ末端領域を有し、領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰからである。好ましい実施形態では、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｃ末端領域の直後にセリンまたはセリン及びバリンを有する。好ましい実施形態では、接合部領域もしくはその部分は、配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列、または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、少数の反復領域もしくはその部分は、配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列、または配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、主要な反復領域もしくはその部分は、配列番号１の１２９～２７２位のアミノ酸配列、または配列番号１の１２９～２７２位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、Ｃ末端領域もしくはその部分は、配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列、または配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、２つ以上の少数の反復領域、例えば、３つの少数の反復領域を有する。Ｎ末端ドメインを除く（すなわち、Ｎ末端領域及びＮ末端端部領域を除く）前述の全てのＣＳＰ領域もしくはその対応する部分、またはその部分を含み、１つ以上の少数の反復領域を有し、Ｃ末端領域の直後にセリンまたはセリン及びバリンを含むそのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ｄＮＤＣＳＰ構築物と称される。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、以下の構造を有し得る：
ｄＮＤＣＳＰ構築物、
ｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物、
ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
ｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物、
ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物、
ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
異種ｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物、
ｄＮＤＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ、または
異種ｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ。

Ｎ末端ドメイン及び主要な反復領域欠失ＣＳＰ構築物
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰの接合部領域、１つ以上の少数の反復領域、及びＣ末端領域、またはそれらの対応する部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、構造：接合部領域－１つ以上の少数の反復領域－Ｃ末端領域を有し、領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰからである。好ましい実施形態では、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｃ末端領域の直後にセリンまたはセリン及びバリンを有する。好ましい実施形態では、接合部領域もしくはその部分は、配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列、または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、少数の反復領域もしくはその部分は、配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列、または配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態ではＣ末端領域もしくはその部分は、配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列、または配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、２つ以上の少数の反復領域、例えば、３つの少数の反復領域を有する。Ｎ末端ドメインを除く（すなわち、Ｎ末端領域及びＮ末端端部領域を除く）前述の全てのＣＳＰ領域またはその対応する部分、及び主要な反復領域またはその対応する部分を含み、１つ以上の少数の反復領域を有し、Ｃ末端領域の直後にセリンまたはセリン及びバリンを含むそのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物と称される。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、以下の構造を有し得る：
ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物、
ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物、
ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物、
ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物、
ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
異種ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物、
ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ、または
異種ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ。

接合部領域バリアントまたは部分を有するＮ末端ドメイン及び主要な反復領域欠失ＣＳＰ構築物
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰの接合部領域バリアントまたは接合部領域部分、１つ以上の少数の反復領域、及びＣ末端領域、またはそれらの対応する部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、構造：接合部領域バリアントまたは接合部領域－１つ以上の少数の反復領域－Ｃ末端領域を有し、領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰからである。好ましい実施形態では、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｃ末端領域の直後にセリンまたはセリン及びバリンを有する。好ましい実施形態では、接合部領域バリアントまたはその部分は、１、２、３、４、または５つのアミノ酸置換を有する、配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、接合部領域バリアントまたはその部分は、Ｋ９３Ａ変異、Ｌ９４Ａ変異、またはその両方を有する、配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、接合部領域部分は、配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列の部分からなる。好ましい実施形態では、接合部領域部分は、配列番号１の９７～１０４位のアミノ酸配列からなる。好ましい実施形態では、接合部領域部分は、配列番号１の９８～１０４位のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。好ましい実施形態では、少数の反復領域またはその部分は、配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列、または配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、Ｃ末端領域またはその部分は、配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列、または配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、２つ以上の少数の反復領域、例えば、３つの少数の反復領域を有する。Ｎ末端ドメインを除く（すなわち、Ｎ末端領域及びＮ末端端部領域を除く）前述の全てのＣＳＰ領域もしくはその対応する部分、及び主要な反復領域もしくはその対応する部分を含み、接合部領域バリアントもしくは接合部領域部分を有し、１つ以上の少数の反復領域を有し、Ｃ末端領域の直後にセリンまたはセリン及びバリンを含むそのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物と称される。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、以下の構造を有し得る：
ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物、
ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物、
ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物、
ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物、
ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
異種ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物、
ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ、または
異種ｓｅｃ－ｄＮＤ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ。

ＣＳＰ構築物を含有する主要な反復領域部分及びＣ末端領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰの主要な反復領域部分及びＣ末端領域またはその対応する部分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、構造：主要な反復領域部分－Ｃ末端領域を有し、領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰからである。好ましい実施形態では、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｃ末端領域の直後にセリンまたはセリン及びバリンを有する。いくつかの実施形態では、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、主要な反復部分として、アミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の２つ～３５の反復、好ましくはアミノ酸配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の１８の反復を有する。好ましい実施形態では、Ｃ末端領域またはその部分は、配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列、または配列番号１の２７３～３７５位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。前述のＣＳＰの主要な反復領域、Ｃ末端領域の部分のみを含み、Ｃ末端領域の直後にセリンまたはセリン及びバリンを含むか、またはその対応する部分を含むそのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物と称される。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、以下の構造を有し得る：
ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物、
ｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物、
ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
ｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物、
ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物、
ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
異種ｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物、
ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ、または
異種ｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ。

非連続の少数の反復領域を有するＮ末端及びＣ末端欠失ＣＳＰ構築物
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰのＮ末端端部領域、接合部領域、少数の反復領域、主要な反復領域、及びＣ末端領域、またはそれらの対応する部分のうちの１つ以上を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、構造：［接合部領域－少数の反復領域－主要な反復領域部分］_ｘ、ここで、［接合部領域－少数の反復領域－主要な反復領域部分］は、ｘ回反復し、領域は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのＣＳＰからである。いくつかの実施形態では、ｘは、２～５である（すなわち、［接合部領域－少数の反復領域－主要な反復領域部分］は、２～５回反復する）。好ましい実施形態では、そのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、［接合部領域－少数の反復領域－主要な反復領域部分］の３つの反復を有し、その結果、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、構造：接合部領域－少数の反復領域－主要な反復領域部分－接合部領域－少数の反復領域－主要な反復領域部分－接合部領域－少数の反復領域－Ｃ末端領域を有する。好ましい実施形態では、Ｎ末端端部領域もしくはその部分は、配列番号１の８１～９２位のアミノ酸配列、または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１の８１～９２位のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、接合部領域は、配列番号１のＲ１領域（アミノ酸９３～９７）を含む。好ましい実施形態では、接合部領域は、２回反復する。好ましい実施形態では、接合部領域またはその部分は、配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列、または１、２、３、４、もしくは５つのアミノ酸置換を有する配列番号１の９３～１０４位のアミノ酸配列の２倍の反復を含む。好ましい実施形態では、少数の反復領域もしくはその部分は、配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列、または配列番号１の１０５～１２８位のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、主要な反復領域部分は、配列ＮＡＮＰ（配列番号１４７）の少なくとも４つの反復、少なくとも５つの反復、少なくとも６つの反復、少なくとも７つの反復を含む。好ましい実施形態では、主要な反復領域部分は、ＮＡＮＰＮＡＮＰＮＡＮＰＮＡＮＰＮＡＮＰＮＡＮＰの配列（配列番号４３７）を含む。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ構築物は、１つ以上のリンカー（例えば、ｇｌｙ－ｓｅｒリンカー）をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ構築物は、各主要な反復領域部分配列の後に、リンカー（例えば、ｇｌｙ－ｓｅｒリンカー）をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ構築物は、最後の部分的な主要な反復配列の後にリンカー（例えば、ｇｌｙ－ｓｅｒリンカー）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２５８のアミノ酸配列を有する。前述の全てのＣＳＰ領域またはその対応する部分を含み、［接合部領域－少数の反復領域－主要な反復領域部分］の３つの反復を含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物と称される。いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、以下の構造を有し得る：
３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物、
ｓｅｃ－３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物、
３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
ｓｅｃ－３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物－ＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物、
３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物、
３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ、
Ｐｆｓｅｃ－３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ、
異種ｓｅｃ－３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物、
３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ、または
異種ｓｅｃ－３ｘＭＲ－ｄＮＣＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ。

Ｈ．例示的な構築物配列
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、表５に列挙される配列番号によって提供されるアミノ酸配列を有し、及び／または表６Ａもしくは表６Ｂに列挙される配列番号によって提供されるヌクレオチド配列によってコードされる。本明細書で使用する場合、「ＥＲＭＡ」構築物は、「ＲＮＡ構築物」であり、例えば、「ＥＲＭＡ１」は、以下の表５、６Ａ、及び６Ｂの「ＲＮＡ構築物１」に対応し、「ＥＲＭＡ２」は、「ＲＮＡ構築物２」に対応する。

ＩＩＩ．ポリリボヌクレオチド
Ａ．例示的なポリリボヌクレオチドの特徴
本明細書に記載のポリリボヌクレオチドは、本明細書に記載の１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリリボヌクレオチドは、目的の５’ＵＴＲ及び／または目的の３’ＵＴＲをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ポリＡテールをコードするヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリリボヌクレオチドは、転写中に組み込まれてもよく、または転写後のポリリボヌクレオチドに結合されてもよい５’キャップを含み得る。

１．５’キャップ
ｍＲＮＡの構造的特徴の１つは、５プライム（５’）末端でのキャップ構造である。天然の真核生物ｍＲＮＡは、５’から５’への三リン酸エステル結合を介してｍＲＮＡに連結された７－メチルグアノシンキャップを有し、ｃａｐ０構造（ｍ７ＧｐｐｐＮ）となっている。ほとんどの真核生物ｍＲＮＡ及びいくつかのウイルスｍＲＮＡでは、「ｃａｐ１」及び「ｃａｐ２」の５プライム末端をそれぞれ産生する第１及び後続のヌクレオチドの２’－ヒドロキシ基（２’－ＯＨ）（例えば、２’－ヒドロキシル基をメチル化して、２’－Ｏ－Ｍｅを形成し得る）で、さらなる修飾が生じ得る。Ｄｉａｍｏｎｄ，ｅｔａｌ．，（２０１４）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ＆ｇｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＲｅｖｉｅｗｓ，２５：５４３－５５０は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるが、ｃａｐ０－ｍＲＮＡが、ｍＲＮＡ５’末端の最後２番目の位置における２’－Ｏ－Ｍｅの役割が決定的であるｃａｐ１－ｍＲＮＡと同様に効率的に翻訳することができないことを報告した。２’－Ｏ－ｍｅｔの欠如は、先天性免疫を誘発し、ＩＦＮ応答を活性化することが示されている。Ｄａｆｆｉｓ，ｅｔａｌ．（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ，４６８：４５２－４５６、及びＺｕｅｓｔｅｔａｌ．（２０１１）ＮａｔｕｒｅＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１２：１３７－１４３、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

ＲＮＡキャップは、詳しく研究され、説明されている（例えば、ＤｅｃｒｏｌｙＥｅｔａｌ．（２０１２）ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓ１０：５１－６５、及びＲａｍａｎａｔｈａｎＡ．ｅｔａｌ．，（２０１６）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ；４４（１６）：７５１１－７５２６、これらの各々の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の文脈で好適であり得る５’－キャップ構造は、ｃａｐ０（第１の核酸塩基のメチル化、例えば、ｍ７ＧｐｐｐＮ）、ｃａｐ１（ｍ７ＧｐｐｐＮの隣接するヌクレオチドのリボースの追加のメチル化）、ｃａｐ２（ｍ７ＧｐｐｐＮの下流の第２のヌクレオチドのリボースの追加のメチル化）、ｃａｐ３（ｍ７ＧｐｐｐＮの下流の第３のヌクレオチドのリボースの追加のメチル化）、ｃａｐ４（ｍ７ＧｐｐｐＮの下流の第４のヌクレオチドのリボースの追加のメチル化）、ＡＲＣＡ（抗リバースキャップ類似体）、修飾ＡＲＣＡ（ホスホロチオエート修飾ＡＲＣＡ）、イノシン、Ｎ１－メチル－グアノシン、２’－フルオロ－グアノシン、７－デアザ－グアノシン、８－オキソ－グアノシン、２－アミノ－グアノシン、ＬＮＡ－グアノシン、及び２－アジド－グアノシンである。

本明細書で使用される用語５’－キャップは、ＲＮＡ、例えばｍＲＮＡの５’－末端上に見出される構造を指し、そして一般に、５’－５’－三リン酸結合（ＧｐｐｐまたはＧ（５’）ｐｐｐ（５’）とも称される）を介して、ＲＮＡ、例えばｍＲＮＡに接続されたグアノシンヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、５’キャップ内に含まれるグアノシンヌクレオシドが、例えば、塩基（グアニン）上の１つ以上の位置での（例えば７位での）メチル化によって、及び／またはリボースの１つ以上の位置でのメチル化によって、修飾されていてもよい。いくつかの実施形態では、５’キャップに含まれるグアノシンヌクレオシドは、リボースでの３’Ｏメチル化（３’ＯＭｅＧ）を含む。いくつかの実施形態では、５’キャップに含まれるグアノシンヌクレオシドは、グアニンの７位でのメチル化（ｍ７Ｇ）を含む。いくつかの実施形態では、５’キャップに含まれるグアノシンヌクレオシドは、グアニンの７位でのメチル化及びリボースでの３’Ｏメチル化を含む（ｍ７（３’ＯＭｅＧ））。当然のことながら、上記の段落で使用した表記法、例えば、「（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇ」または「ｍ７（３’ＯＭｅＧ）」は、本明細書に記載の他の構造にも当てはまる。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡへの、本明細書に開示される５’－キャップの提供は、５’－キャップがＲＮＡ鎖中に転写に伴って発現されるインビトロ転写によって達成されてもよいし、キャッピング酵素を使用して転写後にＲＮＡに付着されてもよい。いくつかの実施形態では、開示するキャップによる同時転写的キャッピングは、適切な参照比較物による同時転写的キャッピングと比較して、ＲＮＡのキャッピング効率を向上させる。いくつかの実施形態では、キャッピング効率を向上させることによって、ＲＮＡの翻訳効率及び／または翻訳速度を向上させることができ、及び／またはコードされたポリペプチドの発現を増加させることができる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドに対する改変は、非加水分解性キャップ構造をもたらし、それは、例えば、デキャッピングを防ぎ、ＲＮＡ半減期を伸ばすことができる。

いくつかの実施形態では、利用される５’キャップは、ｃａｐ０構造、ｃａｐ１構造、またはｃａｐ２構造である。例えば、ＲａｍａｎａｔｈａｎＡｅｔａｌ．の図１、及びＤｅｃｒｏｌｙＥｅｔａｌ．の図１を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡは、ｃａｐ１構造を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡは、ｃａｐ２を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡは、ｃａｐ０構造を含む。いくつかの実施形態では、ｃａｐ０構造は、グアニンの７位でメチル化されたグアノシンヌクレオシド（（ｍ^７）Ｇ）を含む。いくつかの実施形態では、そのようなｃａｐ０構造は、５’－５’－三リン酸結合を介してＲＮＡに接続されており、本明細書では（ｍ^７）Ｇｐｐｐとも称される。いくつかの実施形態では、ｃａｐ０構造は、グアノシンのリボソームの２’位でメチル化されたグアノシンヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ｃａｐ０構造は、グアノシンのリボースの３位でメチル化されたグアノシンヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、５’キャップの中に含まれているグアノシンヌクレオシドは、グアニンの７位及びリボースの２’位におけるメチル化を含む（（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）Ｇ）。いくつかの実施形態では、５’キャップの中に含まれているグアノシンヌクレオシドは、グアニンの７位及びリボースの２’位におけるメチル化を含む（（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇ）。

いくつかの実施形態では、ｃａｐ１構造は、グアニンの７位でメチル化され（（ｍ^７）Ｇ）、任意選択的に、リボースの２’位または３’位でメチル化されたグアノシンヌクレオシド、ならびにＲＮＡ中の２’Ｏメチル化された第１のヌクレオチド（（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１）を含む。いくつかの実施形態では、ｃａｐ１構造は、メチル化がグアニンの７位（（ｍ^７）Ｇ）及びリボースの３’位においてなされたグアノシンヌクレオシド、ならびにＲＮＡ中の２’Ｏメチル化された１番目のヌクレオチド（（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１）を含む。いくつかの実施形態では、ｃａｐ１構造は、５’－５’三リン酸結合を介してＲＮＡに接続されており、本明細書中では、（（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（^２’－Ｏ）Ｎ_１）または（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（^２’－Ｏ）Ｎ_１）とも称され、ここで、Ｎ_１は、本明細書で定義及び記載されているとおりである。いくつかの実施形態では、ｃａｐ１構造は、２位にある第２のヌクレオチド、Ｎ_２を含み、Ａ、Ｇ、Ｃ、またはＵ、例えば、（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐＮ_２または（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐＮ_２から選択され、ここで、Ｎ_１及びＮ_２の各々は、本明細書で定義及び記載されているとおりである。

いくつかの実施形態では、ｃａｐ２構造は、グアニンの７位でメチル化され（（ｍ^７）Ｇ）、任意選択的に、リボースの２’位または３’位でメチル化されたグアノシンヌクレオシド、ならびにＲＮＡ中の２’Ｏメチル化された第１及び第２のヌクレオチド（（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_２）を含む。いくつかの実施形態では、ｃａｐ２構造は、メチル化がグアニンの７位（（ｍ^７）Ｇ）及びリボースの３’位においてなされたグアノシンヌクレオシド、ならびにＲＮＡ中の２’Ｏメチル化された１番目及び２番目のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ｃａｐ２構造は、５’－５’－三リン酸結合を介してＲＮＡに接続されており、本明細書では、例えば、（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐ（^２’－Ｏ）Ｎ_２）または（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐ（^２’－Ｏ）Ｎ_２とも称され、Ｎ_１及びＮ_２の各々は、本明細書で定義及び記載されているとおりである。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、ジヌクレオチドキャップ構造である。いくつかの実施形態では、５’キャップは、Ｎ_１を含むジヌクレオチドキャップ構造であり、ここで、Ｎ_１は、本明細書で定義及び記載されているとおりである。いくつかの実施形態では、５’キャップは、ジヌクレオチドキャップＧ＊Ｎ_１であり、ここで、Ｎ_１は、上記及び本明細書で定義されているとおりであり、Ｇ＊は、式（Ｉ）の構造：
またはその塩の構造を含み、
式中、各Ｒ^２及びＲ^３は、－ＯＨまたは－ＯＣＨ_３であり、Ｘは、ＯまたはＳである。

いくつかの実施形ａ態では、Ｒ^２は－ＯＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ^２は－ＯＣＨ_３である。いくつかの実施形態では、Ｒ^３は－ＯＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ^３は－ＯＣＨ_３である。いくつかの実施形態では、Ｒ^２は－ＯＨであり、Ｒ^３は－ＯＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ^２はＯＨであり、Ｒ^３は－ＣＨ_３である。いくつかの実施形態では、Ｒ^２は－ＣＨ_３であり、Ｒ^３は－ＯＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ^２は－ＣＨ_３であり、Ｒ^３は－ＣＨ_３である。

いくつかの実施形態では、ＸはＯである。いくつかの実施形態では、ＸはＳである。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、ジヌクレオチドｃａｐ０構造である（例えば、（ｍ^７）ＧｐｐｐＮ_１、（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）ＧｐｐｐＮ_１、（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）ＧｐｐｐＮ_１、（ｍ^７）ＧｐｐＳｐＮ_１、（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）ＧｐｐＳｐＮ_１、または（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）ＧｐｐＳｐＮ_１）であり、ここで、Ｎ_１は、本明細書で定義及び記載されているとおりである）。いくつかの実施形態では、５’キャップは、ジヌクレオチドｃａｐ０構造（例えば、（ｍ^７）ＧｐｐｐＮ_１、（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）ＧｐｐｐＮ_１、（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）ＧｐｐｐＮ_１、（ｍ^７）ＧｐｐＳｐＮ_１、（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）ＧｐｐＳｐＮ_１、または（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）ＧｐｐＳｐＮ_１）であり、ここで、Ｎ_１はＧである。いくつかの実施形態では、５’キャップは、ジヌクレオチドｃａｐ０構造（例えば、（ｍ^７）ＧｐｐｐＮ_１、または（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）ＧｐｐｐＮ_１、（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）ＧｐｐｐＮ_１、（ｍ^７）ＧｐｐＳｐＮ_１、（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）ＧｐｐＳｐＮ_１、または（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）ＧｐｐＳｐＮ_１）であり、ここで、Ｎ_１は、Ａ、Ｕ、またはＣである。いくつかの実施形態では、５’キャップは、ジヌクレオチドｃａｐ１構造（例えば、（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１、（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１、（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１、（ｍ^７）ＧｐｐＳｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１、（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）ＧｐｐＳｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１、または（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）ＧｐｐＳｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１であり、ここで、Ｎ_１は、本明細書で定義及び記載されているとおりである。いくつかの実施形態では、５’キャップは、（ｍ^７）ＧｐｐｐＧ（「Ｅｃａｐ０」）、（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｇ（「Ｅｃａｐ１」）、（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）ＧｐｐｐＧ（「ＡＲＣＡ」または「Ｄ１」）、及び（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）ＧｐｐＳｐＧ（「ベータ－Ｓ－ＡＲＣＡ」）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、５’キャップは、以下の構造を有する（ｍ^７）ＧｐｐｐＧ（「Ｅｃａｐ０」）であるか、
またはその塩である。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、以下の構造を有する（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｇ（「Ｅｃａｐ１」）であるか、
またはその塩である。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、以下の構造を有する（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）ＧｐｐｐＧ（「ＡＲＣＡ」または「Ｄ１」）であるか、
またはその塩である。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、以下の構造を有する（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）ＧｐｐＳｐＧ（「ベータ－Ｓ－ＡＲＣＡ」）であるか、
またはその塩である。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、トリヌクレオチドキャップ構造である。いくつかの実施形態では、５’キャップは、Ｎ_１ｐＮ_２を含むトリヌクレオチドキャップ構造であり、ここで、Ｎ_１及びＮ_２は、本明細書で定義及び記載されているとおりである。いくつかの実施形態では、５’キャップは、ジヌクレオチドキャップＧ＊Ｎ_１ｐＮ_２であり、ここで、Ｎ_１及びＮ_２は、上記及び本明細書で定義されているとおりであり、Ｇ＊は、式（Ｉ）の構造：
またはその塩を含み、式中、Ｒ^２、Ｒ^３及びＸは、本明細書で定義及び記載されているとおりである。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、トリヌクレオチドｃａｐ０構造である（例えば、（ｍ^７）ＧｐｐｐＮ_１ｐＮ_２、（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）ＧｐｐｐＮ_１ｐＮ_２、または（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）ＧｐｐｐＮ_１ｐＮ_２）であり、ここで、Ｎ_１及びＮ_２は、本明細書で定義及び記載されているとおりである）。いくつかの実施形態では、５’キャップは、トリヌクレオチドｃａｐ１構造である（例えば、（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐＮ_２、（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐＮ_２、（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐＮ_２）であり、ここで、Ｎ_１及びＮ_２は、本明細書で定義及び記載されているとおりである）。いくつかの実施形態では、５’キャップは、トリヌクレオチドｃａｐ２構造である（例えば、（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_２、（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_２、（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_２）であり、ここで、Ｎ_１及びＮ_２は、本明細書で定義及び記載されているとおりである）。いくつかの実施形態では、５’キャップは、（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＡｐＧ（「ＣｌｅａｎＣａｐＡＧ」、「ＣＣ４１３」）、（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＧｐＧ（「ＣｌｅａｎＣａｐＧＧ」）、（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＡｐＧ、（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＧｐＧ、（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ_２ ^{６，２’－Ｏ}）ＡｐＧ、及び（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＡｐＵからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、以下の構造を有する（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＡｐＧ（「ＣｌｅａｎＣａｐＡＧ」、「ＣＣ４１３」）であるか、
またはその塩である。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、以下の構造を有する（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＧｐＧ（「ＣｌｅａｎＣａｐＧＧ」）であるか、
またはその塩である。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、以下の構造を有する（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＡｐＧであるか、
またはその塩である。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、以下の構造を有する（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＧｐＧであるか、
またはその塩である。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、以下の構造を有する（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ_２ ^{６，２’－Ｏ}）ＡｐＧであるか、
またはその塩である。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、以下の構造を有する（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＡｐＵであるか、
またはその塩である。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、テトラヌクレオチドキャップ構造である。いくつかの実施形態では、５’キャップは、Ｎ_１ｐＮ_２ｐＮ_３を含むテトラヌクレオチドキャップ構造であり、ここで、Ｎ_１、Ｎ_２及びＮ_３は、本明細書で定義及び記載されているとおりである。いくつかの実施形態では、５’キャップは、テトラヌクレオチドキャップＧ＊Ｎ_１ｐＮ_２ｐＮ_３であり、ここで、Ｎ_１、Ｎ_２及びＮ_３は、上記及び本明細書で定義されているとおりであり、Ｇ＊は、式（Ｉ）の構造：
またはその塩を含み、式中、Ｒ^２、Ｒ^３及びＸは、本明細書で定義及び記載されているとおりである。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、テトラヌクレオチドｃａｐ０構造である（例えば、（ｍ^７）ＧｐｐｐＮ_１ｐＮ_２ｐＮ_３、（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）ＧｐｐｐＮ_１ｐＮ_２ｐＮ_３、または（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）ＧｐｐｐＮ_１Ｎ_２ｐＮ_３）であり、ここで、Ｎ_１、Ｎ_２、及びＮ_３は、本明細書で定義及び記載されているとおりである）。いくつかの実施形態では、５’キャップは、テトラヌクレオチドＣａｐ１構造である（例えば、（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐＮ_２ｐＮ_３、（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐＮ_２ｐＮ_３、（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐＮ_２Ｎ_３）であり、ここで、Ｎ_１、Ｎ_２、及びＮ_３は、本明細書で定義及び記載されているとおりである。いくつかの実施形態では、５’キャップは、テトラヌクレオチドＣａｐ２構造である（例えば、（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_２ｐＮ_３、（ｍ_２ ^{７，２’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２－Ｏ）Ｎ_１ｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_２ｐＮ_３、（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_１ｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｎ_２ｐＮ_３）であり、ここで、Ｎ_１、Ｎ_２、及びＮ_３は、本明細書で定義及び記載されているとおりである）。いくつかの実施形態では、５’キャップは、（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ａｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＧｐＧ、（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｇｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＧｐＣ、（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ａｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＵｐＡ、及び（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ａｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＧｐＧからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、以下の構造を有する（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ａｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＧｐＧであるか、
またはその塩である。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、以下の構造を有する（ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ｇｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＧｐＣであるか、
またはその塩である。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、以下の構造を有する（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ａｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＵｐＡであるか、
またはその塩である。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、以下の構造を有する（ｍ^７）Ｇｐｐｐ（ｍ^２’－Ｏ）Ａｐ（ｍ^２’－Ｏ）ＧｐＧであるか、
またはその塩である。

２．キャップ近位の配列
いくつかの実施形態では、本開示に従って利用される５’ＵＴＲは、例えば、本明細書に開示されるようなキャップ近位の配列を含む。いくつかの実施形態では、キャップ近位の配列は、５’キャップに隣接する配列を含む。いくつかの実施形態では、キャップ近位の配列は、ＲＮＡポリヌクレオチドの＋１位、＋２位、＋３位、＋４位、及び／または＋５位にヌクレオチドを含む。

いくつかの実施形態では、キャップ構造は、キャップ近位の配列の１つ以上のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、キャップ構造は、ｍ^７グアノシンキャップ及びＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド＋１（Ｎ_１）を含む。いくつかの実施形態では、キャップ構造は、ｍ^７グアノシンキャップ及びＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド＋２（Ｎ_２）を含む。いくつかの実施形態では、キャップ構造は、ｍ^７グアノシンキャップならびにＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド＋１及び＋２（Ｎ_１及びＮ_２）を含む。いくつかの実施形態では、キャップ構造は、ｍ^７グアノシンキャップならびにＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド＋１、＋２、及び＋３（Ｎ_１、Ｎ_２、及びＮ_３）を含む。

当業者は、本開示を読んで、いくつかの実施形態では、キャップ近位の配列の１つ以上の残基（例えば、残基＋１、＋２、＋３、＋４、及び／または＋５）の１つ以上）が、キャップ実体（例えば、ｃａｐ１またはｃａｐ２構造など）内に含まれていることによって、ＲＮＡ内に含まれ得る；代替的に、いくつかの実施形態では、キャップ近位の配列内の残基の少なくとも一部が、酵素によって加えられ得る（例えば、Ｔ７ポリメラーゼなどのポリメラーゼによって）ことを理解するであろう。例えば、ｍ_２ ^{７，３’－Ｏ}Ｇｐｐｐ（ｍ_１ ^２’－Ｏ）ＡｐＧキャップが利用される特定の例示的な実施形態では、＋１（すなわち、Ｎ_１）及び＋２（すなわち、Ｎ_２）は、キャップの（ｍ_１ ^２’－Ｏ）Ａ及びＧ残基であり、＋３、＋４、及び＋５は、ポリメラーゼ（例えば、Ｔ７ポリメラーゼ）により付加されている。

いくつかの実施形態では、５’キャップは、ジヌクレオチドキャップ構造であり、キャップ近位の配列は、５’キャップのＮ_１を含み、Ｎ_１は、任意のヌクレオチド、例えば、Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵである。いくつかの実施形態では、５’キャップは、トリヌクレオチドキャップ構造（例えば、上述及び本明細書に記載されるトリヌクレオチドキャップ構造）であり、キャップ近位の配列は、５’キャップのＮ_１及びＮ_２を含み、Ｎ_１及びＮ_２は、独立して、任意のヌクレオチド、例えば、Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵである。いくつかの実施形態では、５’キャップは、テトラヌクレオチドキャップ構造（例えば、上述及び本明細書に記載されるトリヌクレオチドキャップ構造）であり、キャップ近位の配列は、５’キャップのＮ_１、Ｎ_２及びＮ_３を含み、Ｎ_１、Ｎ_２及びＮ_３は、任意のヌクレオチド、例えば、Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵである。

いくつかの実施形態では、例えば、５’キャップは、ジヌクレオチドキャップ構造であり、キャップ近位の配列は、５’キャップのＮ_１、ならびにＮ_２、Ｎ_３、Ｎ_４、及びＮ_５を含み、Ｎ_１～Ｎ_５は、ＲＮＡポリヌクレオチドの＋１、＋２、＋３、＋４、及び／または＋５位に相当する。いくつかの実施形態では、例えば、５’キャップは、トリヌクレオチドキャップ構造であり、キャップ近位の配列は、５’キャップのＮ_１及びＮ_２、ならびにＮ_３、Ｎ_４及びＮ_５を含み、Ｎ_１～Ｎ_５は、ＲＮＡポリヌクレオチドの＋１、＋２、＋３、＋４、及び／または＋５位に相当する。いくつかの実施形態では、例えば、５’キャップは、テトラヌクレオチドキャップ構造であり、キャップ近位の配列は、５’キャップのＮ_１、Ｎ_２、及びＮ_３、ならびにＮ_４及びＮ_５を含み、Ｎ_１～Ｎ_５は、ＲＮＡポリヌクレオチドの＋１、＋２、＋３、＋４、及び／または＋５位に相当する。

いくつかの実施形態では、Ｎ_１はＡである。いくつかの実施形態では、Ｎ_１はＣである。いくつかの実施形態では、Ｎ_１はＧである。いくつかの実施形態では、Ｎ_１はＵである。いくつかの実施形態では、Ｎ_２はＡである。いくつかの実施形態では、Ｎ_２はＣである。いくつかの実施形態では、Ｎ_２はＧである。いくつかの実施形態では、Ｎ_２はＵである。いくつかの実施形態では、Ｎ_３はＡである。いくつかの実施形態では、Ｎ_３はＣである。いくつかの実施形態では、Ｎ_３はＧである。いくつかの実施形態では、Ｎ_３はＵである。いくつかの実施形態では、Ｎ_４はＡである。いくつかの実施形態では、Ｎ_４はＣである。いくつかの実施形態では、Ｎ_４はＧである。いくつかの実施形態では、Ｎ_４はＵである。いくつかの実施形態では、Ｎ_５Ａである。いくつかの実施形態では、Ｎ_５はＣである。いくつかの実施形態では、Ｎ_５はＧである。いくつかの実施形態では、Ｎ_５はＵである。当然のことながら、上述及び本明細書に記載の実施形態（例えば、Ｎ_１～Ｎ_５について）の各々は、単独または組み合わせとすることができ、及び／または上述及び本明細書に記載の変更物の他の実施形態（例えば、５’キャップ）と組み合わせることができる。

３．５’ＵＴＲ
いくつかの実施形態では、本開示に従って利用される核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）は、５’－ＵＴＲを含む。いくつかの実施形態では、５’－ＵＴＲは、複数の明確な配列要素を含み得、いくつかの実施形態では、そのような複数の配列要素は、１つ以上の特定の配列要素の複数のコピーであり得るか、またはそれを含み得る（例えば、特定の供給源からであり得るか、またはそれ以外の場合、機能的もしくは特徴的配列要素として知られ得る）。いくつかの実施形態では、５’－ＵＴＲは、複数の異なる配列要素を含む。

「非翻訳領域」または「ＵＴＲ」という用語は、当該技術分野で、転写されるがアミノ酸配列に翻訳されないＤＮＡ分子の領域に対して、あるいは、ＲＮＡポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ分子）の対応する領域に対して、一般的に使用される。非翻訳領域（ＵＴＲ）は、オープンリーディングフレームの５’（上流側）に（５’－ＵＴＲ）、及び／またはオープンリーディングフレームの３’（下流側）に（３’－ＵＴＲ）存在し得る。本明細書で使用する場合、「５つのプライム非翻訳領域」または「５’ＵＴＲ」という用語は、ポリリボヌクレオチドの５’末端（例えば、転写開始部位）とポリリボヌクレオチドのコード領域の開始コドンとの間のポリリボヌクレオチドの配列を指す。いくつかの実施形態では、「５’ＵＴＲ」は、ポリリボヌクレオチドの５’末端（例えば、転写開始部位）で始まり、例えば、その天然の文脈で、ポリリボヌクレオチドのコード領域の開始コドン（通常、ＡＵＧ）の前に１つのヌクレオチド（ｎｔ）を終了するポリリボヌクレオチドの配列を指す。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、コザック配列を含む。５’－ＵＴＲは、（存在する場合）５’キャップの下流にあり、例えば、５’キャップに直接隣接している。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する５’ＵＴＲは、キャップ近位の配列（例えば、本明細書で定義及び記載されているように）を含む。いくつかの実施形態では、キャップ近位の配列は、５’キャップに隣接する配列を含む。

例示的な５’ＵＴＲとしては、ヒトアルファグロビン（ｈＡｇ）５’ＵＴＲまたはその断片、ＴＥＶ５’ＵＴＲまたはその断片、ＨＳＰ７０５’ＵＴＲまたはその断片、またはｃ－Ｊｕｎ５’ＵＴＲまたはその断片が挙げられる。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡは、ｈＡｇ５’ＵＴＲまたはその断片を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡは、配列番号４１５による核酸配列で、５’ＵＴＲに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する５’ＵＴＲを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡは、配列番号４１５による核酸配列を有する５’ＵＴＲを含む。

４．ポリＡ尾部
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）は、例えば、本明細書に記載されるようなポリアデニル酸（ポリＡ）配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリＡ配列は、３’－ＵＴＲの下流側に、例えば３’－ＵＴＲに隣接して位置する。

本明細書で使用する場合、「ポリ（Ａ）配列」または「ポリ－Ａ尾部」という用語は、典型的にはＲＮＡポリヌクレオチドの３’末端に位置するアデニラート残基の中断されていない配列、または中断された配列を指す。ポリＡ配列は、当業者に既知であり、本明細書に記載のＲＮＡにおいて３’－ＵＴＲに続き得る。連続ポリＡ配列は、連続するアデニル酸残基を特徴とする。本来、連続ポリＡ配列が典型的である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、連続ポリＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、断続ポリＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡは、転写後に鋳型非依存性ＲＮＡポリメラーゼによってＲＮＡの遊離３’－末端に付着したポリ（Ａ）配列、またはＤＮＡによってコードされ、鋳型依存性ＲＮＡポリメラーゼによって転写されるポリ（Ａ）配列を有することができる。

約１２０Ａのヌクレオチドのポリ（Ａ）配列は、トランスフェクトされた真核細胞におけるＲＮＡのレベル、ならびにポリ（Ａ）配列の上流（５’）に存在するオープンリーディングフレームから翻訳されるタンパク質のレベルに有益な影響を有することが実証されている（Ｈｏｌｔｋａｍｐｅｔａｌ．，２００６，Ｂｌｏｏｄ，ｖｏｌ．１０８，ｐｐ．４００９－４０１７、これは参照により本明細書に組み込まれる）。

いくつかの実施形態では、本開示に従うポリ（Ａ）配列は、特定の長さに限定されず、いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、任意の長さである。いくつかの実施形態では、ポリＡ配列は、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも８０、または少なくとも１００個であり、かつ５００個以下、４００個以下、３００個以下、２００個以下、または１５０個以下のＡヌクレオチド、かつ、特に、約１２０個のＡヌクレオチドを含むか、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも８０、または少なくとも１００個であり、かつ５００個以下、４００個以下、３００個以下、２００個以下、または１５０個以下のＡヌクレオチド、かつ、特に、約１２０個のＡヌクレオチドから実質的になるか、または少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも８０、または少なくとも１００個であり、かつ５００個以下、４００個以下、３００個以下、２００個以下、または１５０個以下のＡヌクレオチド、かつ、特に、約１２０個のＡヌクレオチドからなる。この文脈では、「から本質的になる」は、ポリ（Ａ）配列内のほとんどのヌクレオチド、典型的には、ポリ（Ａ）配列内のヌクレオチドの数の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％がＡヌクレオチドであるが、残りのヌクレオチドが、Ａヌクレオチド以外のヌクレオチド、例えば、Ｕヌクレオチド（ウリジラート）、Ｇヌクレオチド（グアニラート）、またはＣヌクレオチド（シチジラート）であることを容認することを意味する。この文脈において、「からなる」は、ポリ（Ａ）配列内の全てのヌクレオチド、すなわちポリ（Ａ）配列内のヌクレオチドの数の１００％が、Ａヌクレオチドであることを意味する。「ヌクレオチド」または「Ａ」という用語は、アデニル酸を指す。

いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、コード鎖と相補的な鎖内に反復ｄＴヌクレオチド（デオキシチミジラート）を含むＤＮＡ鋳型に基づくＲＮＡ転写中に、例えばインビトロ転写ＲＮＡの調製中に付着される。ポリＡ配列をコードするＤＮＡ配列（コード鎖）は、ポリＡカセットと呼ばれる。

いくつかの実施形態では、ＤＮＡのコード鎖に存在するポリＡカセットは、ｄＡヌクレオチドから本質的になるが、４種のヌクレオチド（ｄＡ、ｄＣ、ｄＧ、及びｄＴ）のランダムな配列によって中断されている。そのようなランダムな配列は、５～５０、１０～３０、または１０～２０ヌクレオチドの長さであり得る。そのようなカセットは、ＷＯ２０１６／００５３２４Ａ１（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１６／００５３２４Ａ１に開示される任意のポリ（Ａ）カセットを、本開示に従って使用してもよい。ｄＡヌクレオチドから本質的になるが、４つのヌクレオチド（ｄＡ、ｄＣ、ｄＧ、ｄＴ）の分布が等しく、かつ長さが、例えば５～５０ヌクレオチドであるランダムな配列によって中断されているポリ（Ａ）カセットは、ＤＮＡレベルで、Ｅ．ｃｏｌｉ内でのプラスミドＤＮＡの一定の増殖を示し、そして依然として、ＲＮＡレベルで、ＲＮＡ安定性の支持に関する有益な特性と関連し、翻訳効率が包含される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡポリヌクレオチドに含まれるポリＡ配列は、Ａヌクレオチドから本質的になるが、４種のヌクレオチド（Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｕ）のランダムな配列によって中断されている。そのようなランダムな配列は、５～５０、１０～３０、または１０～２０ヌクレオチドの長さであり得る。

いくつかの実施形態では、Ａヌクレオチド以外のヌクレオチドは、ポリ（Ａ）配列の側面に、その３’末端にて位置しない、すなわち、ポリ（Ａ）配列は、その３’－末端にて、Ａ以外のヌクレオチドによってマスクされないし、Ａ以外のヌクレオチドが後に続かない。

いくつかの実施形態では、ポリＡ配列は、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも８０、または少なくとも１００個であり、かつ５００個以下、４００個以下、３００個以下、２００個以下、または１５０個以下のヌクレオチドを含み得る。いくつかの実施形態では、ポリＡ配列は、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも８０、または少なくとも１００個であり、かつ５００個以下、４００個以下、３００個以下、２００個以下、または１５０個以下のヌクレオチドから本質的になり得る。いくつかの実施形態では、ポリＡ配列は、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも８０、または少なくとも１００個であり、かつ５００個以下、４００個以下、３００個以下、２００個以下、または１５０個以下のヌクレオチドからなり得る。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、少なくとも１００個のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、約１５０個のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、約１２０個のヌクレオチドを含む。

いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は、約５０個以上、約６０個以上、約７０個以上、約８０個以上、約９０個以上、約１００個以上、約１２０、または約１５０もしくは約２００個などの特定の数のアデノシンを含む。いくつかの実施形態では、鎖状構築物のポリＡテールは、２００個以下のＡ残基を含み得る。いくつかの実施形態では、配列構築物のポリＡテールは、約２００個のＡ残基を含み得る。いくつかの実施形態では、配列構築物のポリＡテールは、１８０個以下のＡ残基を含み得る。いくつかの実施形態では、配列構築物のポリＡテールは、約１８０個のＡ残基を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリＡテールは、１５０個以下の残基を含み得る。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、配列番号４２８のヌクレオチド配列を含むポリ（Ａ）配列、または配列番号４２８のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリＡテールは、リンカーによって中断された複数のＡ残基を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヌクレオチド配列ＧＣＡＴＡＴＧＡＣ

５．３’ＵＴＲ
いくつかの実施形態では、本開示に従って利用されるＲＮＡは、３’－ＵＴＲを含む。本明細書で使用する場合、「３つのプライム非翻訳領域」、「３’非翻訳領域」、または「３’ＵＴＲ」という用語は、オープンリーディングフレーム配列のコード領域の終止コドンの後に始まるｍＲＮＡ分子の配列を指す。いくつかの実施形態では、３’ＵＴＲは、例えば、その自然な文脈で、オープンリーディングフレーム配列のコード領域の終止コドンの直後に開始する。他の実施形態では、３’ＵＴＲは、例えば、その自然な文脈で、オープンリーディングフレーム配列のコード領域の終止コドンの直後に開始しない。「３’－ＵＴＲ」という用語は、好ましくは、ポリ（Ａ）配列を含まない。したがって、３’－ＵＴＲは、ポリ（Ａ）配列（存在する場合）の上流側に、例えばポリ（Ａ）配列に直接隣接して存在する。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡは、Ｆ要素及び／またはＩ要素を含む３’ＵＴＲを含む。いくつかの実施形態では、３’ＵＴＲまたはそれに対する近位の配列は、制限部位を含む。いくつかの実施形態では、制限部位は、ＢａｍＨＩ部位である。いくつかの実施形態では、制限部位は、ＸｈｏＩ部位である。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡ構築物は、Ｆ要素を含む。いくつかの実施形態では、Ｆ要素配列は、分断のアミノ末端側エンハンサー（ＡＥＳ）の、３’－ＵＴＲである。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡは、配列番号４１６による核酸配列で、３’ＵＴＲに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する３’ＵＴＲを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡは、配列番号４１６による核酸配列を有する３’ＵＴＲを含む。

いくつかの実施形態では、３’ＵＴＲは、ＷＯ２０１７／０６０３１４（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるＦＩ要素である。

Ｂ．ＲＮＡ形態
ＲＮＡ組成物（例えば、医薬組成物）に有用な少なくとも３つの明確な形態、すなわち、ｍＲＮＡ（ｕＲＮＡ）、ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡ（ｍｏｄＲＮＡ）、及び自己増幅ｍＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）を含有する非修飾ウリジンが開発されている。これらのプラットフォームの各々は、固有の特徴を示す。概して、３つの形態全てにおいて、ＲＮＡはキャップされ、非翻訳領域（ＵＴＲ）に隣接するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含有し、３’末端にポリＡ尾部を有する。ｕＲＮＡ及びｍｏｄＲＮＡベクターのＯＲＦは、抗体剤またはその部分をコードする。ｓａＲＮＡは、多重のＯＲＦを有する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡは、修飾ヌクレオシドを有し得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、少なくとも１つの（例えば、全ての）ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。

本明細書で使用する場合、「ウラシル」という用語は、ＲＮＡの核酸に存在し得る核酸塩基の１つを表す。ウラシルの構造は以下のとおりである。

本明細書で使用する場合、「ウリジン」という用語は、ＲＮＡに存在し得るヌクレオシドの１つを表す。ウリジンの構造は以下のとおりである。

ＵＴＰ（ウリジン５’三リン酸）は、以下の構造を有する。

プソイドＵＴＰ（プソイドウリジン５’三リン酸）は、以下の構造を有する。

「プソイドウリジン」は、ウリジンの異性体である修飾ヌクレオシドの一例であり、そこにおいてウラシルは、窒素－炭素グリコシド結合の代わりに炭素－炭素結合を介してペントース環に結合している。

別の例示的な修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１Ψ）であり、これは以下の構造を有する。

Ｎ１－メチル－プソイド－ＵＴＰは、以下の構造を有する。

別の例示的な修飾ヌクレオシドは、５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）であり、これは以下の構造を有する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡの中の１つ以上のウリジンが、修飾ヌクレオシドに置き換わっている。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、修飾ウリジンである。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。

いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、独立してプソイドウリジン（ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）、及び５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）から選択される。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（ψ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、２種以上の修飾ヌクレオシドを含んでもよく、そのような修飾ヌクレオシドは、独立してプソイドウリジン（ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）、及び５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）から選択される。いくつかの実施形態では、そのような修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（ψ）及びＮ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）を含む。いくつかの実施形態では、そのような修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（ψ）及び５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、そのような修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）及び５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、そのような修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）、及び５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）を含む。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡにおいて１つ以上、例えば全てのウリジンを置き換えている修飾ヌクレオシドは、３－メチル－ウリジン（ｍ３Ｕ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５－アザ－ウリジン、６－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ウリジン（ｓ２Ｕ）、４－チオ－ウリジン（ｓ４Ｕ）、４－チオ－プソイドウリジン、２－チオ－プソイドウリジン、５－ヒドロキシ－ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５－アミノアリル－ウリジン、５－ハロ－ウリジン（例えば、５－ヨード－ウリジン、または５－ブロモ－ウリジン）、ウリジン５－オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５－カルボキシメチル－ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１－カルボキシメチル－プソイドウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、１－エチル－プソイドウリジン、５－メチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－ウリジン（τｍ５Ｕ）、１－タウリノメチル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン（τｍ５ｓ２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオ－プソイドウリジン）、５－メチル－２－チオ－ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１－メチル－４－チオ－プソイドウリジン（ｍ１ｓ４ψ）、４－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、３－メチル－プソイドウリジン（ｍ３ψ）、２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロプソイドウリジン、５，６－ジヒドロウリジン、５－メチル－ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン、２－メトキシ－ウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－プソイドウリジン、４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）プソイドウリジン（ａｃｐ３ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオ－ウリジン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α－チオ－ウリジン、２’－Ｏ－メチル－ウリジン（Ｕｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’－Ｏ－メチル－プソイドウリジン（ψｍ）、２－チオ－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１－チオ－ウリジン、デオキシチミジン、２’－Ｆ－ａｒａ－ウリジン、２’－Ｆ－ウリジン、２’－ＯＨ－ａｒａ－ウリジン、５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジン、５－［３－（１－Ｅ－プロペニルアミノ）ウリジン、または当該技術分野で既知の任意の他の修飾ウリジンの、任意の１つ以上であり得る。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、他の修飾ヌクレオシドを含むか、またはさらなる修飾ヌクレオシド、例えば修飾シチジンを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＲＮＡにおいて５－メチルシチジンが、一部の、または全ての、好ましくは全てのシチジンの代わりに用いられる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、５－メチルシチジンと、プソイドウリジン（ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）、及び５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）から選択される１つ以上と、を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、５－メチルシチジン及びＮ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、各シチジンの代わりに５－メチルシチジンを、及び各ウリジンの代わりにＮ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）を含む。

本開示のいくつかの実施形態では、ＲＮＡは、「レプリコンＲＮＡ」または単に「レプリコン」、特に、「自己複製ＲＮＡ」または「自己増幅ＲＮＡ」である。１つの特に好ましい実施形態では、レプリコンまたは自己複製ＲＮＡは、一本鎖（ｓｓ）ＲＮＡウイルス、特にプラス鎖ｓｓＲＮＡウイルス、例えばアルファウイルスに由来するか、またはそれに由来する要素を含む。アルファウイルスは、プラス鎖ＲＮＡウイルスの典型例である。アルファウイルスは、感染細胞の細胞質内で複製される（アルファウイルス生活環のレビューについては、Ｊｏｓｅｅｔａｌ．，ＦｕｔｕｒｅＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．，２００９，ｖｏｌ．４，ｐｐ．８３７－８５６を参照されたく、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。多くのアルファウイルスの総ゲノム長は通常、１１，０００～１２，０００ヌクレオチドの範囲であり、ゲノムＲＮＡは通常、５’キャップ及び３’ポリＡテールを有する。アルファウイルスのゲノムは、非構造タンパク質（ウイルスＲＮＡの転写、修飾、及び複製に関与するとともに、タンパク質修飾に関与する）及び構造タンパク質（ウイルス粒子を形成する）をコードする。そのゲノムには通常２つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）がある。４つの非構造タンパク質（ｎｓＰ１～ｎｓＰ４）が、典型的に、ゲノムの５’末端付近で始まる第１のＯＲＦによって一緒にコードされる一方、アルファウイルス構造タンパク質は、第１のＯＲＦの下流側に見出され、かつゲノムの３’末端付近に及ぶ第２のＯＲＦによって一緒にコードされる。典型的に、第１のＯＦＲは、第２のＯＲＦよりも大きく、比はおおよそ２：１である。アルファウイルスによって感染した細胞では、非構造タンパク質をコードする核酸配列のみがゲノムＲＮＡから翻訳され、一方で構造タンパク質をコードする遺伝子情報は、真核生物のメッセンジャーＲＮＡに類似するＲＮＡ分子であるサブゲノム転写産物から翻訳可能である（ｍＲＮＡ、Ｇｏｕｌｄｅｔａｌ．，２０１０，ＡｎｔｉｖｉｒａｌＲｅｓ．，ｖｏｌ．８７ｐｐ．１１１－１２４、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。感染後、すなわちウイルスの生活環の初期段階において、（＋）鎖ゲノムＲＮＡは、非構造ポリタンパク質（ｎｓＰ１２３４）をコードするオープンリーディングフレームの翻訳のために、メッセンジャーＲＮＡのように直接作用する。

アルファウイルス由来のベクターは、標的細胞または標的生物に外来遺伝情報を送達するために提案されている。単純なアプローチでは、第１のＯＲＦはアルファウイルス由来のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（レプリカーゼ）をコードしており、翻訳されるとＲＮＡの自己増幅を媒介する。アルファウイルス構造タンパク質をコードする第２のＯＲＦは、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするオープンリーディングフレームによって置き換えられる。アルファウイルスをベースとするトランス複製システムは、２つの別個の核酸分子上のアルファウイルスヌクレオチド配列要素に依存している。その１つの核酸分子はウイルスレプリカーゼをコードし、もう１つの核酸分子は、トランスで当該レプリカーゼによって複製されることができる（そのため、トランス複製システムと呼ばれる）。トランス複製には、特定の宿主細胞におけるこれらの核酸分子の両方の存在が必要である。トランスにおいてレプリカーゼにより複製可能な核酸分子は、アルファウイルスレプリカーゼによる認識とＲＮＡ合成を可能にするために、特定のアルファウイルス配列要素を含まなければならない。

非修飾ウリジンプラットフォームの特徴としては、例えば、固有のアジュバント効果、ならびに良好な忍容性及び安全性のうちの１つ以上を挙げることができる。修飾ウリジン（例えば、プソイドウリジン）プラットフォームの特徴は、低減されたアジュバント効果、鈍化された免疫自然免疫センサ活性化能力、したがって良好な忍容性及び安全性を含み得る。自己増幅プラットフォームの特徴には、例えば、タンパク質発現の長い持続時間、良好な忍容性及び安全性、非常に低いワクチン用量で有効性が得られるより高い尤度が含まれ得る。

本開示は、例えば改善された製造性、カプセル化、発現のレベル（及び／またはタイミング）などのために最適化された、特定のＲＮＡ構築物を提供する。特定の構成要素について以下に述べ、特定の好ましい実施形態を本明細書に例示する。

Ｃ．コドン最適化及びＧＣ濃縮
本明細書で使用する場合、「コドン最適化された」という用語は、好ましくは核酸分子にコードされるアミノ酸配列を変化させることなく、宿主生物（例えば、核酸分子（例えばポリリボヌクレオチド）を受ける対象）の典型的なコドン使用を反映するように核酸分子（例えば、ポリリボヌクレオチド）のコード領域においてコドンを変化させることを指す。本開示に関連して、いくつかの実施形態では、コード領域は、本明細書に記載のＲＮＡ分子を使用して治療される対象において最適な発現をもたらすためにコドンが最適化される。いくつかの実施形態では、コドン最適化は、高頻度で生じるｔＲＮＡが利用可能なコドンが「まれなコドン」の代わりに挿入されるように行うことができる。いくつかの実施形態では、コドン最適化は、本明細書に記載のＲＮＡのコード領域のグアノシン／シトシン（Ｇ／Ｃ）含量を、野生型ＲＮＡの対応するコード配列のＧ／Ｃ含量よりも増加させることを含み得る。ここで、ＲＮＡによってコードされるアミノ酸配列は、対応するアミノ酸配列に対して修飾されていないことが好ましい。

いくつかの実施形態では、コード配列（「コード領域」とも呼ばれる）は、組成物（例えば、医薬組成物）が投与される対象（例えば、ヒト）における発現のために最適化されたコドンである。したがって、いくつかの実施形態では、そのようなポリヌクレオチド（例えば、ポリリボヌクレオチド）の中の配列は、関連する抗原またはその断片もしくはエピトープをコードする野生型配列と比較して、当該抗原またはその断片もしくはエピトープのアミノ酸配列が野生型である場合でさえ、異なり得る。

いくつかの実施形態では、関連する対象（例えば、ヒト）における発現のためのコドン最適化のための戦略、及び場合によっては、特定の細胞または組織における発現のためのコドン最適化のための戦略でさえもある。

様々な種は、特定のアミノ酸の特定のコドンについて特定の偏りを呈する。ある理論に縛られるつもりはないが、コドンバイアス（生物間のコドン使用率の相違）はしばしばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の翻訳効率と相関しており、それはさらに、数ある中でも特に、翻訳されるコドンの特性や特定の転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）分子の利用可能性に特に依存していると考えられている。細胞内の選択されるｔＲＮＡの優位性は、一般にペプチド合成で最も頻繁に使用されるコドンを反映し得る。したがって、コドン最適化に基づき、特定の生物において最適な遺伝子発現ができるよう遺伝子を調整することができる。コドン使用頻度表は、例えば、ｋａｚｕｓａ．ｏｒｊｐ／ｃｏｄｏｎ／で入手可能な「ＣｏｄｏｎＵｓａｇｅＤａｔａｂａｓｅ」で容易に入手可能であり、これらの表は多数の方法で適応させてもよい。ＧｅｎｅＦｏｒｇｅ（Ａｐｔａｇｅｎ；Ｊａｃｏｂｕｓ，ＰＡ）のような特定の対象またはその細胞での発現のために特定の配列をコドン最適化するコンピューターアルゴリズムも利用できる。

いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ポリリボヌクレオチド）は、コドン最適化され、ポリヌクレオチド（例えば、ポリリボヌクレオチド）中のコドンは、ヒトコドン使用頻度に適合される（本明細書では「ヒトコドン最適化ポリヌクレオチド」と称される）。同じアミノ酸をコードするコドンは、対象、例えば、ヒトにおいて異なる頻度で生じる。したがって、いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドのコード配列は、例えば、表７に示されるように、同じアミノ酸をコードするコドンの頻度が、ヒトコドンの使用に従ってそのコドンの天然に存在する頻度に対応するように修飾される。例えば、アミノ酸Ａｌａの場合、野生型コード配列は、好ましくは、コドン「ＧＣＣ」が０．４０の頻度で使用され、コドン「ＧＣＴ」が０．２８の頻度で使用され、コドン「ＧＣＡ」が０．２２の頻度で使用され、コドン「ＧＣＧ」が０．１０の頻度で使用されるなどのように適合される（表７を参照されたい）。したがって、いくつかの実施形態では、ヒトのコドン使用に適合した配列を得るために、そのような手順（Ａｌａで例示したような）を、ポリヌクレオチドのコード配列によってコードされる各アミノ酸に対して適用する。

ヒト発現のためのコドン最適化及び／またはＧ／Ｃリッチ化に関する特定の戦略は、ＷＯ２００２／０９８４４３（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。いくつかの実施形態では、マルチパラメトリック最適化法を用いてコード配列を最適化することができる。いくつかの実施形態では、最適化パラメータとしては、例えば転写レベル、ｍＲＮＡレベル、及び／または翻訳レベルに影響を及ぼすことができるタンパク質発現に作用するパラメータを挙げることができる。いくつかの実施形態では、例示的な最適化パラメータとしては、転写レベルのパラメータ（例えば、ＧＣ含量、コンセンサススプライス部位、隠れたスプライス部位、ＳＤ配列、ＴＡＴＡボックス、終結シグナル、人工組換え部位、及びそれらの組み合わせを含む）、ｍＲＮＡレベルのパラメータ（例えば、ＲＮＡ不安定性モチーフ、リボソーム進入部位、反復配列、及びそれらの組み合わせを含む）、翻訳レベルのパラメータ（例えば、コドン使用頻度、未成熟ポリＡ部位、リボソーム進入部位、二次構造、及びそれらの組み合わせを含む）、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、コード配列は、Ｆａｔｈｅｔａｌ．“ＭｕｌｔｉｐａｒａｍｅｔｅｒＲＮＡａｎｄＣｏｄｏｎＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎに記載されるようにＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒａｌｇｏｒｉｔｈｍによって最適化され得る：ＡＳｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄＴｏｏｌｔｏＡｓｓｅｓｓａｎｄＥｎｈａｎｃｅＡｕｔｏｌｏｇｏｕｓＭａｍｍａｌｉａｎＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ”ＰＬｏＳＯＮＥ６（３）：ｅ１７５９６；Ｒａｂｂｅｔａｌ．（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、“ＴｈｅＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒＡｌｇｏｒｉｔｈｍ：ｕｓｉｎｇａｓｌｉｄｉｎｇｗｉｎｄｏｗａｐｐｒｏａｃｈｔｏｃｏｐｅｗｉｔｈｔｈｅｖａｓｔｓｅｑｕｅｎｃｅｓｐａｃｅｉｎｍｕｌｔｉｐａｒａｍｅｔｅｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ”ＳｙｓｔｅｍｓａｎｄＳｙｎｔｈｅｔｉｃＢｉｏｌｏｇｙ（２０１０）４：２１５－２２５、及びＧｒａｆｔｅｔａｌ．“Ｃｏｄｏｎ－ｏｐｔｉｍｉｚｅｄｇｅｎｅｓｔｈａｔｅｎａｂｌｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｍａｍｍａｌｉａｎｃｅｌｌｓａｎｄｅｌｉｃｉｔｅｆｆｉｃｉｅｎｔｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎｍｉｃｅａｆｔｅｒｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎｏｆｎａｋｅｄＤＮＡ” ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＭｅｄ（２００４）９４：１９７－２１０、これらの各々の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、コード配列は、他の最適化アルゴリズムと比較して、Ｅｕｒｏｆｉｎのアプリケーションノート「Ｅｕｒｏｆｉｎの適合・最適化ソフトウェア「ＧＥＮＥｉｕｓ」」にあるＥｕｒｏｆｉｎの適合・最適化アルゴリズム「ＧＥＮＥｉｕｓ」によって最適化してもよい（その全内容は、本明細書に記載の目的のために参照により組み込まれる）。

いくつかの実施形態では、本開示に従って利用されるコード配列は、本明細書に記載のマラリア構築物の野生型コード配列またはその部分と比較して増加したＧ／Ｃ含有量を有する。いくつかの実施形態では、コード領域のグアノシン／シチジン（Ｇ／Ｃ）含有量は、本明細書に記載のマラリア構築物の野生型コード配列に対して修飾されるが、ポリリボヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列は修飾されない。

特定の理論に縛られるつもりはないが、ＧＣリッチ化によってペイロード配列の翻訳が向上すると言える。一般的に、Ｇ（グアノシン）／Ｃ（シチジン）含量が高くなった配列は、Ａ（アデノシン）／Ｕ（ウリジン）含量が高くなった配列よりも安定している。いくつかのコドンが１つの同じアミノ酸をコードするという事実（いわゆる遺伝暗号の縮退）を考慮すると、安定性にとって最も好ましいコドンを決定することができる（いわゆる代替コドンの使用）。ポリリボヌクレオチドによってコードされるアミノ酸に応じて、野生型配列に対し、リボ核酸配列の修飾には様々な可能性がある。特に、Ａ及び／またはＵヌクレオシドを含むコドンは、これらのコドンを、同じアミノ酸をコードするがＡ及び／またはＵを含まない、またはＡ及び／またはＵヌクレオシドの含量が少ない他のコドンに置き換えることで、修飾することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリリボヌクレオチドのコード領域のＧ／Ｃ含量は、コドン最適化前のコード領域のＧ／Ｃ含量、例えば野生型ＲＮＡのＧ／Ｃ含量と比較して、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、またはさらにそれ以上増加している。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリリボヌクレオチドのコード領域のＧ／Ｃ含量は、コドン最適化前のコード領域のＧ／Ｃ含量、例えば野生型ＲＮＡのＧ／Ｃ含量と比較して、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、またはさらにそれ以上に低下している。

いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドの安定性及び翻訳効率は、ポリリボヌクレオチドの安定性及び／または翻訳効率に寄与するために確立された１つ以上の要素を組み込んでもよく；例示的なそのような要素は、例えば、参照によって本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＥＰ２００６／００９４４８に記載されている。いくつかの実施形態では、本開示に従って使用されるポリリボヌクレオチドの発現を増やすために、発現されているペプチドまたはタンパク質の配列を変えることなく、コード領域内、すなわち、発現されているペプチドまたはタンパク質をコードする配列内でポリリボヌクレオチドが修飾されてもよく、例えば、ＧＣ含量を増やしてｍＲＮＡの安定性を高め、及び／またはコドン最適化を実施し、したがって細胞における翻訳を増強するように、発現されているペプチドまたはタンパク質の配列を変えることなく、ポリリボヌクレオチドが修飾されてもよい。

Ｄ．例示的な構成
数ある中でも特に、本開示は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分とともにウイルス分泌シグナルを含む、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするポリリボヌクレオチドを提供する。本開示は、そのようなポリリボヌクレオチドが、対象の免疫系に効果的に提示され、免疫応答を誘導することができるポリペプチドをもたらすという洞察を提供する。したがって、本開示は、そのようなポリペプチド、及びポリリボヌクレオチドをコードすることが、対象（例えば、ヒト）に投与される医薬組成物（例えば、免疫原性組成物、例えば、ワクチン）において特に有効であるという認識を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上の寄生抗原を有するＨＳＶ－１ｇＤ分泌シグナル及び／またはＨＳＶ－１ｇＤ膜貫通ドメインを含む、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするポリリボヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上のマラリア抗原を有するＨＳＶ－１ｇＤ分泌シグナル及び／またはＨＳＶ－１ｇＤ膜貫通ドメインを含む、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするポリリボヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を有するＨＳＶ－１ｇＤ分泌シグナル及び／またはＨＳＶ－１ｇＤ膜貫通ドメインを含む、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするポリリボヌクレオチドを提供する。

いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドは、ポリペプチドをコードすることができ、ポリペプチドは、ＨＳＶ－１ｇＤ分泌シグナル、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分、及びＨＳＶ－１ｇＤ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ポリペプチドをコードするポリリボヌクレオチドを対象に投与することを含み得、ポリペプチドは、ＨＳＶ－１ｇＤ分泌シグナル、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分、及びＨＳＶ－１ｇＤ膜貫通ドメインを含み、対象は、哺乳動物（例えば、ヒト）である。

いくつかの実施形態では、ＨＳＶ－１ｇＤ分泌シグナルは、配列番号１５９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ－１ｇＤ分泌シグナルは、配列番号１５９のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ－１ｇＤ分泌シグナルは、配列番号１６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ－１ｇＤ分泌シグナルは、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、ＨＳＶ－１ｇＤ膜貫通ドメインは、配列番号２３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ－１ｇＤ膜貫通ドメインは、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分は、本明細書に記載されるようなものである。

Ｅ．Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするポリリボヌクレオチドの実施形態
以下では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするポリリボヌクレオチドの例示的な実施形態を記載し、その要素を説明するときに使用される特定の用語は、以下の意味を有する：
ｃａｐ：ｍ２７，２’ＯＧ（５’）ｐｐＳｐ（５’）Ｇ（具体的には、そのＤ１ジアステレオマー）、ｍ２７，３’ＯＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ、及びｍ２７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１２’－Ｏ）ＡｐＧからなる群から選択される５’キャップ構造。
ｈＡｇ－コザック：翻訳効率を向上させるために最適化された「コザック配列」を有する、ヒトアルファ－グロビンｍＲＮＡの５’－ＵＴＲ配列。
ｓｅｃ：分泌シグナルをコードする配列。
抗原：Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からの、１つ以上のポリペプチドＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ構築物もしくはその部分、またはバリアント（例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物またはその免疫原性バリアントの免疫原性断片）をコードする配列。
ＴＭＤ：膜貫通領域をコードする配列。
リンカー：ペプチドリンカーをコードする配列。
ＦＩ要素：３’－ＵＴＲは、「スプリットのアミノ末端エンハンサー」（ＡＥＳ）ｍＲＮＡ（Ｆと呼ばれる）及びミトコンドリアでコードされた１２ＳリボソームＲＮＡ（Ｉと呼ばれる）に由来する２つの配列要素の組み合わせである。これらを、ＲＮＡ安定性を付与し、総タンパク質発現を増強する配列についてのエクスビボ選択プロセスによって同定した。
Ａ３０Ｌ７０：３０個のアデノシン残基、続いて１０個のヌクレオチドリンカー配列、及び樹状細胞におけるＲＮＡの安定性及び翻訳効率を強化するように設計された別の７０個のアデノシン残基のストレッチからなる、１１０ヌクレオチド長を測定するポリ（Ａ）尾部。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするポリリボヌクレオチドは、以下の構造のうちの１つを有する：
キャップ－ｈＡｇ－コザック－抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－抗原－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、または
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－抗原－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０。

いくつかの実施形態では、ｈＡｇ－コザックは、配列番号４１５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＩは、配列番号４１６のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、Ａ３０Ｌ７０は、配列番号４１７のヌクレオチド配列を含む。

いくつかの実施形態では、分泌シグナルは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からであり、本明細書ではＰｆｓｅｃと称され、配列番号１７４に定義される配列を有する。いくつかの実施形態では、分泌シグナルは、異種であり、表３に提供されるアミノ酸配列から選択される。いくつかの実施形態では、分泌シグナルは、ＨＳＶ１－ｇＤであり、本明細書では、ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃと称され、配列番号１５９、配列番号１６２、または配列番号１６５で定義される配列を有する。

いくつかの実施形態では、ＴＭＤは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７からのグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー領域であり、本明細書ではＰｆＴＭＤと称され、配列番号２３１のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＴＭＤは、異種である。いくつかの実施形態では、ＴＭＤは、ＨＳＶ１－ｇＤからであり、本明細書では、ＨＳＶ－１ＴＭＤと称され、配列番号２３４のアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態では、抗原は、上記で定義された完全長ＣＳＰ構築物、上記で定義されたＮ末端領域欠失ＣＳＰ構築物、上記で定義されたＮ末端領域及び主要な領域欠失ＣＳＰ構築物、上記で定義されたＮ末端ドメイン欠失ＣＳＰ構築物、上記で定義されたＮ末端ドメイン及び主要な反復領域欠失ＣＳＰ構築物、上記で定義された修飾された接合部領域バリアントもしくは部分を有するＮ末端ドメイン及び主要な反復領域欠失ＣＳＰ構築物、または上記で定義されたＣＳＰ構築物を含有する主要な反復領域部分及びＣ末端領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリリボヌクレオチドは、以下の構造のうちの１つを有する：
キャップ－ｈＡｇ．コザック－完全長ＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－完全長ＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－完全長ＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－完全長ＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－完全長ＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－完全長ＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｄＮＴ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ヘルパー抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｄＮＤＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要なＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｄＮＤ－ｄ主要な－ｍｏｄＪＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
ｃａｐ－ｈＡｇ－コザック－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、または
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０。

いくつかの実施形態では、異なる要素（ｓｅｃ、抗原、ＴＭＤ）は、１つ以上のリンカー、例えば、配列番号２６１、２６７、２５８、２７６（ＧＧＳ）、２７９（ＧＧＧＳ）、２７０、２８２、２６４、または２７３によるアミノ酸配列から選択されるリンカーによって連結されてもよい。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２５８のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２７９（ＧＧＧＳ）のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２７０のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２８２のアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードする配列は、ウリジンを（部分的にまたは完全に、好ましくは完全に）置き換える修飾ヌクレオシドを含み、修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）、及び５－メチル－ウリジンからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードする配列は、コドン最適化されている。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードする配列のＧ／Ｃ含有量は、野生型コード配列と比較して増加する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡ（特に、ｍＲＮＡ）は、以下を含む：
配列番号４１５のヌクレオチド配列、または配列番号４１５のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、５’ＵＴＲ、
配列番号４１６のヌクレオチド配列、または配列番号４１６のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、３’ＵＴＲ、
配列番号４１７のヌクレオチド配列を含むポリＡ配列。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡ（特に、ｍＲＮＡ）は、以下を含む：
ｍＲＮＡの５’末端におけるキャッピング構造としてのｍ２７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１２’－Ｏ）ＡｐＧ、
配列番号４１５のヌクレオチド配列、または配列番号４１５のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、５’ＵＴＲ、
配列番号４１６のヌクレオチド配列、または配列番号４１６のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、３’ＵＴＲ、
配列番号４１７のヌクレオチド配列を含むポリＡ配列。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、非修飾である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、修飾されている。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、少なくとも１つのシチジンの代わりに（例えば、各ウリジンの代わりに）Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡ（特に、ｍＲＮＡ）は、以下を含む：
ｍＲＮＡの５’末端における特異的キャッピング構造としてのｍ２７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１２’－Ｏ）ＡｐＧ、
配列番号４１５のヌクレオチド配列、または配列番号４１５のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、５’ＵＴＲ、
配列番号４１６のヌクレオチド配列、または配列番号４１６のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、３’ＵＴＲ、
配列番号４１７のヌクレオチド配列を含むポリ（Ａ）配列、及び
少なくとも１つのウリジンの代わりに（例えば、各ウリジンの代わりに）Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの１つ以上のマラリアポリペプチドまたはその部分を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍＣＳＰタンパク質、その免疫原性バリアント、またはＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍＣＳＰタンパク質もしくはその免疫原性バリアントの免疫原性断片に由来する１つ以上の領域もしくはその部分を含む。したがって、いくつかの実施形態では、本開示で使用されるＲＮＡ、例えばｍＲＮＡは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍＣＳＰタンパク質、その免疫原性バリアント、またはＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍＣＳＰタンパク質もしくはその免疫原性バリアントの免疫原性断片を含むアミノ酸配列をコードする。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の（例えば、本開示の組成物／製剤に含まれる、及び／または本開示の方法で使用される）ＲＮＡ（特に、ｍＲＮＡ）は、ワクチンＲＮＡを活性物質として、及びＡＬＣ－０３１５（（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）、ＡＬＣ－０１５９（２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、及びコレステロールを含む他の成分として含有する産物として提示されてもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡ（特に、ｍＲＮＡ）は、液体、固体、またはそれらの組み合わせとして製剤化されるか、または製剤化されることとする。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡ（特に、ｍＲＮＡ）は、注射用に製剤化されるか、または製剤化されることとする。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡ（特に、ｍＲＮＡ）は、筋肉内投与用に製剤化されるか、または製剤化されることとする。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡ（特に、ｍＲＮＡ）は、組成物、例えば、医薬組成物として製剤化されるか、または製剤化されることとする。

いくつかの実施形態では、組成物は、カチオン性にイオン化可能な脂質を含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、カチオン性にイオン化可能な脂質及び１つ以上の追加の脂質を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の脂質は、ポリマーコンジュゲート脂質、中性脂質、及びそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、中性脂質は、リン脂質、ステロイド脂質、及びそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の脂質は、ポリマーコンジュゲート脂質、リン脂質、及びステロイド脂質の組み合わせである。

いくつかの実施形態では、組成物は、カチオン性にイオン化可能な脂質、ＰＥＧコンジュゲート脂質であるポリマーコンジュゲート脂質、コレステロール、及びリン脂質を含む。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＤＳＰＣである。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＤＯＰＥである。

いくつかの実施形態では、組成物は、カチオン性にイオン化可能な脂質、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミドであるポリマーコンジュゲート脂質、コレステロール、及びリン脂質を含む。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＤＳＰＣである。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＤＯＰＥである。

いくつかの実施形態では、組成物は、（（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）であるカチオン性にイオン化可能な脂質、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミドであるポリマーコンジュゲート脂質、コレステロール、及びリン脂質を含む。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＤＳＰＣである。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＤＯＰＥである。いくつかの実施形態では、（ｉ）ＲＮＡ、（ｉｉ）カチオン性にイオン化可能な脂質、及び存在する場合、（ｉｉｉ）１つ以上の追加の脂質の少なくとも部分は、粒子内に存在する。いくつかの実施形態では、粒子は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）などのナノ粒子である。

いくつかの実施形態では、組成物、特に医薬組成物は、ワクチンである。

いくつかの実施形態では、組成物、特に医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、及び／または賦形剤をさらに含む。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡ及び／または組成物、特に、医薬組成物は、キットの構成要素／複数の構成要素である。

いくつかの実施形態では、キットは、対象におけるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍに対する免疫応答を誘導するためにＲＮＡを使用するための説明書をさらに含む。

いくつかの実施形態では、キットは、対象におけるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ感染を治療的または予防的に治療するためにＲＮＡを使用するための説明書をさらに含む。

いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡ（特に、ｍＲＮＡ）、例えば本開示に記載されるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするＲＮＡは、非免疫原性である。免疫刺激物質をコードするＲＮＡは、アジュバント効果を提供するために本開示に従って投与され得る。免疫刺激物質をコードするＲＮＡは、標準ＲＮＡまたは非免疫原性ＲＮＡであり得る。

Ｆ．ポリリボヌクレオチドの組み合わせ
本開示は、数ある中でも特に、２つ以上のポリペプチド構築物を発現するモダリティとしてＲＮＡ技術を利用する。いくつかの実施形態では、２つ以上の異なるポリペプチド構築物は、２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物である。本明細書にさらに記載されるように、いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のマラリアタンパク質、またはその１つ以上の部分を含む。

いくつかの実施形態では、２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、第１のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物及び第２のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物を含む。いくつかの実施形態では、第１のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分（例えば、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの免疫原性断片）を含む。いくつかの実施形態では、そのような第１のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、本明細書に記載されるような、分泌シグナル（例えば、異種分泌シグナル）、膜貫通領域（例えば、異種膜貫通領域）、ヘルパー抗原、多量体化領域、及び／またはリンカーなどの１つ以上の追加のアミノ酸配列をさらに含む。

いくつかの実施形態では、第２のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、第１のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物とは異なる。いくつかの実施形態では、第２のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド領域またはその部分（例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチドの免疫原性断片）を含み、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド領域またはその部分は、第１のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物に含まれる１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分とは異なる。１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド領域またはその部分は、第２のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物が第１のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物と同一ではないように、第１のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物に含まれる１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分とは異なり、本開示は、第１及び第２のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物に共通のいくつかのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド領域またはその部分が存在し得ることを企図する。例えば、第１のマラリア構築物が、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域部分及びＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域を含む場合、第２のマラリア構築物は、とりわけ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド領域またはその部分、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域を含むことができる。いくつかの実施形態では、第２のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、本明細書に記載されるように、分泌シグナル（例えば、異種分泌シグナル）、膜貫通領域（例えば、異種膜貫通領域）、ヘルパー抗原、多量体化領域、及び／またはリンカーなどの１つ以上の追加のアミノ酸配列をさらに含む。

特定の実施形態では、第１のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分（例えば、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの免疫原性断片）を含み、第２のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド領域またはその部分を含み、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド領域またはその部分は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＴ細胞抗原を含む。

上記によれば、本開示は、各々がポリペプチド構築物をコードする２つ以上のポリリボヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、各々がＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードする、２つ以上のポリリボヌクレオチド。本明細書にさらに記載されるように、いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物は、１つ以上のマラリアタンパク質、またはその１つ以上の部分を含む。

いくつかの実施形態では、２つ以上のポリリボヌクレオチドの組み合わせは、各々が、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードする。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組み合わせは、（ｉ）第１のポリリボヌクレオチドであって、第１のポリリボヌクレオチドは、第１のポリペプチドをコードし、第１のポリペプチドは、本明細書に記載されるように、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む、第１のポリリボヌクレオチドと、（ｉｉ）第２のポリリボヌクレオチドであって、第２のポリリボヌクレオチドは、第２のポリペプチドをコードし、第２のポリペプチドは、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド領域またはその部分を含む、第２のポリリボヌクレオチドと、を含み得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組み合わせは、（ｉ）第１のポリリボヌクレオチドであって、第１のポリリボヌクレオチドは、第１のポリペプチドをコードし、第１のポリペプチドは、本明細書に記載されるように、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む、第１のポリリボヌクレオチドと、（ｉｉ）第２のポリリボヌクレオチドであって、第２のポリリボヌクレオチドは、第２のポリペプチドをコードし、第２のポリペプチドは、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＴ細胞抗原を含む、第２のポリリボヌクレオチドと、を含み得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、第１及び第２のポリリボヌクレオチドは、本明細書に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードし、以下の構造のうちの１つを有する：
キャップ－ｈＡｇ－コザック－抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－抗原－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－抗原－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、または
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－抗原－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０。

いくつかの実施形態では、抗原は、上記で定義された完全長ＣＳＰ構築物、上記で定義されたＮ末端領域欠失ＣＳＰ構築物、上記で定義されたＮ末端領域及び主要な領域欠失ＣＳＰ構築物、上記で定義されたＮ末端ドメイン欠失ＣＳＰ構築物、上記で定義されたＮ末端ドメイン及び主要な反復領域欠失ＣＳＰ構築物、上記で定義された修飾された接合部領域バリアントもしくは部分を有するＮ末端ドメイン及び主要な反復領域欠失ＣＳＰ構築物、または上記で定義されたＣＳＰ構築物を含有する主要な反復領域部分及びＣ末端領域を含む。いくつかの実施形態では、抗原は、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＴ細胞抗原を含む。

いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドの異なる要素（ｓｅｃ、抗原、ＴＭＤ）は、１つ以上のリンカー、例えば、配列番号２６１、２６７、２５８、２７６、２７９、２７０、２８２、２６４、または２７３によるアミノ酸配列から選択されるリンカーによって連結されてもよい。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２５８によるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２７９によるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２７０によるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２８２によるアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組み合わせは、（ｉ）第１のポリリボヌクレオチドが第１のポリペプチドをコードする、第１のポリリボヌクレオチドと、（ｉｉ）第２のポリリボヌクレオチドが第２のポリペプチドをコードし、第２のポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド領域またはその部分を含む、第２のポリリボヌクレオチドと、を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組み合わせは、（ｉ）第１のポリリボヌクレオチドが第１のポリペプチドをコードする、第１のポリリボヌクレオチドと、（ｉｉ）第２のポリリボヌクレオチドが第２のポリペプチドをコードし、第２のポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＴ細胞抗原を含む、第２のポリリボヌクレオチドと、を含み得る。いくつかの実施形態では、第１のポリリボヌクレオチドは、以下の構造のうちの１つを有する：
キャップ－ｈＡｇ－コザック－完全長ＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－完全長ＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－完全長ＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－完全長ＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＨＳＶ－１ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－完全長ＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－完全長ＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－Ｐｆｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｄＮＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
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キャップ－ｈＡｇ－コザック－ＨＳＶ－１ｇＤｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＰｆＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
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キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、
キャップ－ｈＡｇ－コザック－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０、または
キャップ－ｈＡｇ－コザック－異種ｓｅｃ－ｐ主要な－ＣＴＣＳＰ構築物－異種ＴＭＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第１及び／または第２のポリリボヌクレオチドは、ウリジンを（部分的にまたは完全に、好ましくは完全に）置き換える修飾ヌクレオシドを含み、修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン（ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）、及び５－メチル－ウリジンからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第１及び／または第２のポリリボヌクレオチドは、コドン最適化されている。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第１及び／または第２のポリリボヌクレオチドのＧ／Ｃ含有量は、野生型コード配列と比較して増加する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第１の及び／または第２のポリリボヌクレオチドは、
配列番号４１５のヌクレオチド配列、または配列番号４１５のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、５’ＵＴＲ、
配列番号４１６のヌクレオチド配列、または配列番号４１６のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、３’ＵＴＲ、及び
配列番号４１７のヌクレオチド配列を含むポリＡ配列、を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第１の及び／または第２のポリリボヌクレオチドは、
ポリリボヌクレオチドの５’末端におけるキャッピング構造としてのｍ２７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１２’－Ｏ）ＡｐＧ、
配列番号４１５のヌクレオチド配列、または配列番号４１５のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、５’ＵＴＲ、
配列番号４１６のヌクレオチド配列、または配列番号４１６のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、３’ＵＴＲ、及び
配列番号４１７のヌクレオチド配列を含むポリＡ配列、を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第１及び／または第２のポリリボヌクレオチドは、未修飾である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第１及び／または第２のポリリボヌクレオチドは、修飾されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第１及び／または第２のポリリボヌクレオチドは、少なくとも１つのウリジンの代わりに（例えば、各ウリジンの代わりに）Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第１の及び／または第２のポリリボヌクレオチドは、
ｍＲＮＡの５’末端におけるキャッピング構造としてのｍ２７，３’－ＯＧｐｐｐ（ｍ１２’－Ｏ）ＡｐＧ、
配列番号４１５のヌクレオチド配列、または配列番号４１５のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、５’ＵＴＲ、
配列番号４１６のヌクレオチド配列、または配列番号４１６のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、３’ＵＴＲ、
配列番号４１７のヌクレオチド配列を含むポリ（Ａ）配列、及び
少なくとも１つのウリジンの代わりに（例えば、各ウリジンの代わりに）Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）、を含む。

いくつかの実施形態では、上述の組み合わせは、本明細書に記載されるような医薬組成物中で投与することができる。いくつかの実施形態では、上述のような組み合わせの２つ以上のポリリボヌクレオチドを、本明細書に記載されるような別個の医薬組成物で投与することができる。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組み合わせは、（ｉ）第１のポリリボヌクレオチドを含む第１の医薬組成物であって、第１のポリリボヌクレオチドは、第１のポリペプチドをコードし、第１のポリペプチドは、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む、第１の医薬組成物と、（ｉｉ）第２のポリリボヌクレオチドを含む第２の医薬組成物であって、第２のポリリボヌクレオチドは、第２のポリペプチドをコードし、第２のポリペプチドは、１つ以上のポリペプチド領域またはその部分を含む、第２の医薬組成物と、を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組み合わせは、（ｉ）第１のポリリボヌクレオチドを含む第１の医薬組成物であって、第１のポリリボヌクレオチドは、第１のポリペプチドをコードし、第１のポリペプチドは、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む、第１の医薬組成物と、（ｉｉ）第２のポリリボヌクレオチドを含む第２の医薬組成物であって、第２のポリリボヌクレオチドは、第２のポリペプチドをコードし、第２のポリペプチドは、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＴ細胞抗原を含む、第２の医薬組成物と、を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような第１または第２のポリリボヌクレオチド（例えば、本開示の組成物／製剤に含有され、及び／または本開示の方法で使用される）は、活性物質として本明細書に記載されるような第１または第２のポリリボヌクレオチドと、ＡＬＣ－０３１５（（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）、ＡＬＣ－０１５９（２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、及びコレステロールを含む他の成分とを含む産物として提示され得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような第１または第２のポリリボヌクレオチドは、液体、固体、またはそれらの組み合わせとして製剤化されるか、または製剤化されることとする。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような第１または第２のポリリボヌクレオチドは、注射用に製剤化されるか、または製剤化されることとする。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような第１または第２のポリリボヌクレオチドは、筋肉内投与用に製剤化されるか、または製剤化されることとする。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような第１または第２のポリリボヌクレオチドは、組成物、例えば、医薬組成物として製剤化されるか、または製剤化されることとする。

いくつかの実施形態では、組成物は、カチオン性にイオン化可能な脂質と、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミドであるポリマーコンジュゲート脂質と、コレステロールと、リン脂質とを含む。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＤＳＰＣである。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＤＯＰＥである。

いくつかの実施形態では、組成物は、（（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）であるカチオン性にイオン化可能な脂質、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミドであるポリマーコンジュゲート脂質、コレステロール、及びリン脂質を含む。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＤＳＰＣである。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＤＯＰＥである。いくつかの実施形態では、（ｉ）本明細書に記載されるような第１または第２のポリリボヌクレオチド、（ｉｉ）カチオン性にイオン化可能脂質、及び存在する場合、（ｉｉｉ）１つ以上の追加の脂質、のうちの少なくとも部分は、粒子内に存在する。いくつかの実施形態では、粒子は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）などのナノ粒子である。

ＩＶ．ＲＮＡ送達技術
提供されるポリリボヌクレオチドは、例えば、裸のＲＮＡとしての送達、またはウイルス及び／または非ウイルスベクター、ポリマーベースのベクター、脂質組成物、ナノ粒子（例えば、脂質ナノ粒子、ポリマーナノ粒子、脂質ポリマーハイブリッドナノ粒子など）、及び／またはペプチドベースのベクターによって媒介される送達を含む、当該技術分野で既知の任意の適切な方法を使用して、本明細書に記載の治療用途のために送達され得る。本明細書に記載の送達ポリリボヌクレオチドに有用であり得る様々なアプローチに関する情報については、例えば、Ｗａｄｈｗａｅｔａｌ．“ＯｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓａｎｄＣｈａｌｌｅｎｇｅｓｉｎｔｈｅＤｅｌｉｖｅｒｙｏｆｍＲＮＡ－ＢａｓｅｄＶａｃｃｉｎｅｓ”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（２０２０）１０２（２７ｐａｇｅｓ）を参照されたく、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、１つ以上のポリリボヌクレオチドは、送達（例えば、投与）のために脂質ナノ粒子とともに製剤化され得る。

いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、細胞外ＲＮアーゼからポリリボヌクレオチドを保護するように設計され得、及び／または標的細胞（例えば、肝細胞）へのＲＮＡの全身送達のために工学操作され得る。いくつかの実施形態では、そのような脂質ナノ粒子は、ポリリボヌクレオチドが対象に静脈内または筋肉内投与される場合にポリリボヌクレオチドを送達するのに特に有用であり得る。

Ａ．脂質組成物
１．脂質及び脂質様材料
「脂質」及び「脂質様材料」という用語は、本明細書では、１つ以上の疎水性部分または基、及び任意選択的に１つ以上の親水性部分または基も含む分子として広く定義される。疎水性部分及び親水性部分を含む分子は、両親媒性物質と表されることも多い。脂質は通常、水に難溶性である。水性環境において、両親媒的性質は、分子が組織構造及び異なる相に自己組織化することを可能にする。そういった相の１つは、小胞、多層／単層リポソーム、または水性環境中の膜に存在するような、脂質二重層からなる。疎水性は、以下に限定されないが、長鎖飽和脂肪族炭化水素基及び長鎖不飽和脂肪族炭化水素基、ならびに１つ以上の芳香族基、脂環式基、または複素環基（複数可）によって置換されるような基が挙げられる無極基の包含によって与えることができる。親水性基は、極性及び／または荷電基を含み得、炭水化物、リン酸塩、カルボン酸、硫酸塩、アミノ、スルフヒドリル、ニトロ、ヒドロキシル、及び他の同様の基を含み得る。

多くの場合、両親媒性化合物は、極性のある頭部が、長い疎水性尾部に付着されている。いくつかの実施形態では、極性部分は、水に可溶性である一方、非極性部分は、水に不溶性である。加えて、極性部分は、形式正電荷を有しても、形式負電荷を有してもよい。代替的に、極性部分は、形式正電荷及び負電荷の双方を有してもよいし、双性イオンであっても分子内塩であってもよい。本開示の目的で、両親媒性化合物は、以下に限定されないが、１つまたは複数の天然または非天然の脂質及び脂質様化合物であり得る。

「脂質様材料」は、脂質に構造的及び／または機能的に関連するが、厳密な意味で脂質とみなされない場合がある物質である。例えば、当該用語は、水性環境において、ベシクル、多層／単層リポソーム、または膜内にそのまま存在する両親媒性層を形成することができる化合物を含み、そして界面活性剤、または親水性部分及び疎水性部分の双方を有する合成化合物を含む。一般的に言えば、当該用語は、脂質のものに類似していても類似していなくてもよい、構造組織化が異なる親水性部分及び疎水性部分を含む分子を指す。

両親媒性層内に含まれ得る両親媒性化合物の具体例としては、リン脂質、アミノ脂質、及びスフィンゴ脂質が挙げられるが、これらに限定されない。

一般に、脂質は、８つのカテゴリー：脂肪酸、グリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、ポリケチド（ケトアシルサブユニットの縮合に由来する）、ステロール、及びプレノール脂質（イソプレンサブユニットの縮合に由来する）に分けられ得る。「脂質」という用語は時折、脂肪の同義語として使用されるが、脂肪は、トリグリセリドと呼ばれる脂質のサブグループである。また、脂質は、脂肪酸及びその誘導体などの分子（トリ、ジ、モノグリセリド、及びリン脂質が挙げられる）、ならびにコレステロールなどのステロール含有代謝物質を包含する。

脂肪酸は、カルボン酸基で終わる炭化水素鎖でできている分子の多様な基である；この配置は、分子に、極性のある親水性末端、及び水に不溶性である無極性の疎水性末端を付与する。典型的に４～２４炭素長の炭素鎖は、飽和していても不飽和であってもよく、そして酸素、ハロゲン、窒素、及び硫黄を含有する官能基に付着されていてもよい。脂肪酸が二重結合を含有する場合、分子の立体配置に顕著な影響を与えるシスまたはトランスの幾何異性の可能性が存在する。シス二重結合は、脂肪酸鎖を曲げさせ、これは、鎖内のより多くの二重結合と化合するのに有効である。脂肪酸カテゴリー内の他の主要な脂質クラスは、脂肪エステル及び脂肪アミドである。

グリセロ脂質は、モノ、ジ、及びトリ置換されたグリセロールで構成され、最も知られているのは、トリグリセリドと呼ばれる、グリセロールの脂肪酸トリエステルである。文言「トリアシルグリセロール」は時折、「トリグリセリド」と同義的に使用される。これらの化合物において、グリセロールの３つのヒドロキシル基は各々、典型的には異なる脂肪酸によって、エステル化される。グリセロ脂質の追加のサブクラスは、グリコシルグリセロールによって表され、これは、グリコシド結合を介してグリセロールに付着された１つ以上の糖残基の存在によって特徴付けられる。

グリセロリン脂質は、エステル結合によって２つの脂肪酸由来の「尾部」に連結され、リン酸エステル結合による１つの「頭部」基に連結されたグリセロールコアを含有する両親媒性分子（疎水性及び親水性領域の両方を含有する）である。通常リン脂質と称されるグリセロリン脂質（スフィンゴミエリンもまた、リン脂質として分類される）の例としては、ホスファチジルコリン（別名ＰＣ、ＧＰＣｈｏ、またはレシチン）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥまたはＧＰＥｔｎ）、及びホスファチジルセリン（ＰＳまたはＧＰＳｅｒ）がある。

スフィンゴ脂質は、一般的な構造的特徴、スフィンゴイド塩基骨格を共有する化合物の複合ファミリーのメンバーである。哺乳動物における主要なスフィンゴイド塩基は、一般的にスフィンゴシンと称される。セラミド（Ｎ－アシル－スフィンゴイド塩基）は、アミド連結脂肪酸を有するスフィンゴイド塩基誘導体の主要なサブクラスである。脂肪酸は、典型的には飽和されているか、または一価不飽和であり、１６～２６個の炭素原子の鎖長である。哺乳動物の主要なホスホスフィンゴ脂質は、スフィンゴミエリン（セラミドホスホコリン）であるが、昆虫は主に、セラミドホスホエタノールアミンを含有し、そして菌類は、ファイトセラミドホスホイノシトール及びマンノース含有頭部基を有する。スフィンゴ糖脂質は、グリコシド結合を介してスフィンゴイド塩基に連結された１つ以上の糖残基で構成される分子の多様なファミリーである。これらの例としては、単純なスフィンゴ糖脂質及び複雑なスフィンゴ糖脂質、例えばセレブロシド及びガングリオシドがある。

ステロール、例えばコレステロール及びその誘導体、またはトコフェロール及びその誘導体は、グリセロリン脂質及びスフィンゴミエリンとともに、膜脂質の重要な構成要素である。

糖脂質は、脂肪酸が糖骨格に直接連結され、膜二重層と和合性である構造を形成する化合物である。糖脂質において、単糖が、グリセロ脂質及びグリセロリン脂質中に存在するグリセロール骨格と置換されている。最もよく知られている糖脂質は、グラム陰性細菌におけるリポ多糖の脂質Ａ構成要素のアシル化されたグルコサミン前駆体である。典型的な脂質Ａ分子は、７つもの脂肪アシル鎖により誘導体化されているグルコサミンの二糖である。Ｅ．ｃｏｌｉの成長に必要とされる最小リポ多糖は、Ｋｄｏ２－脂質Ａであり、これは、２つの３－デオキシ－Ｄ－マンノ－オクツロソン酸（Ｋｄｏ）残基によりグリコシル化されているグルコサミンのヘキサアシル化された二糖である。

ポリケチドは、古典的な酵素、及び脂肪酸シンターゼと機械学的特徴を共有する反復的かつマルチモジュラーの酵素によるアセチル及びプロピオニルサブユニットの重合によって合成される。ポリケチドは、動物、植物、細菌、真菌、及び海洋の供給源由来の多数の二次代謝物質及び天然の産物を含んで、大きな構造多様性を有する。多くのポリケチドは、骨格が多くの場合、グリコシル化、メチル化、ヒドロキシル化、酸化、または他のプロセスによってさらに修飾されている環状の分子である。

脂質及び脂質様材料は、陽イオン性、陰イオン性、または中性であってもよい。中性脂質または脂質様材料は、選択されたｐＨで非荷電または中性の両性イオン形態で存在する。

いくつかの実施形態では、本開示で使用するための好適な脂質または脂質様材料には、ＷＯ２０２０／１２８０３１及びＵＳ２０２００１６３８７８に記載のものが含まれ、その各々の内容全体が、本明細書に記載の目的のために参照により本明細書に組み込まれる。

２．カチオン性またはカチオン性にイオン化可能な脂質または脂質様材料
いくつかの実施形態では、本明細書の使用が意図されるカチオン性またはカチオン性にイオン化可能な脂質または脂質様材料として、核酸に静電的に結合することができるあらゆるカチオン性またはカチオン性にイオン化可能な脂質または脂質様材料が挙げられる。一実施形態では、本明細書の使用が企図されるカチオン性脂質もしくはカチオン性にイオン化可能な脂質または脂質様材料は、核酸と複合体を形成するか、または核酸が包囲もしくは封入される小胞を形成することによって、核酸と会合することができる。

カチオン性脂質または脂質様材料は、それらが正味の正電荷（例えば、関連するｐＨで）を有することを特徴とする。カチオン性脂質または脂質様材料は、負に帯電する核酸に、静電的な相互作用によって結合する。一般に、カチオン性脂質は、親油性部分、例えば、ステロール、アシル鎖、ジアシル、またはより多くのアシル鎖を有し、そして脂質の頭部基は典型的に、正電荷を有する。

特定の実施形態では、カチオン性脂質または脂質様材料は、特定のｐＨ、特に酸性ｐＨにてのみ、正味の正電荷を有する一方、好ましくは、正味の正電荷を有しておらず、好ましくは、電荷を有していない、すなわち、異なる、好ましくはより高いｐＨ、例えば生理学的ｐＨにて、中性である。このイオン性挙動は、エンドソームエスケープを補助して、毒性を低減することにより、生理学的ｐＨにてカチオン性のままである粒子と比較して、有効性を増強すると考えられる。

いくつかの実施形態では、カチオン性またはカチオン性にイオン化可能な脂質または脂質様材料は、正に帯電されるか、またはプロトン化されることができる少なくとも１つの窒素原子（Ｎ）を含む頭部基を含む。

カチオン性脂質の例としては、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）；Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ジオレイルオキシプロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）、３－（Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル）コレステロール（ＤＣ－Ｃｈｏｌ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）；１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＤＡＰ）；１，２－ジアシルオキシ－３－ジメチルアンモニウムプロパン；１，２－ジアルキルオキシ－３－ジメチルアンモニウムプロパン；ジオクタデシルジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、１，２－ジステアリルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（ＤＳＤＭＡ）、２，３－ジ（テトラデコキシ）プロピル－（２－ヒドロキシエチル）－ジメチルアザニウム（ＤＭＲＩＥ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（ＤＭＥＰＣ）、１，２－ジミリストイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、１，２－ジオレイルオキシプロピル－３－ジメチル－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、及び２，３－ジオレオイルオキシ－Ｎ－［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパンアミウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、１，２－ジリノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、３－ジメチルアミノ－２－（コレスト－５－エン－３－ベータ－オキシブタン－４－オキシ）－１－（シス，シス－９，１２－オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣＬｉｎＤＭＡ）、２－［５’－（コレスト－５－エン－３－ベータ－オキシ）－３’－オキサペントキシ］－３－ジメチル－１－（シス，シス－９’，１２’－オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣｐＬｉｎＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－３，４－ジオレイルオキシベンジルアミン（ＤＭＯＢＡ）、１，２－Ｎ，Ｎ’－ジオレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＯｃａｒｂＤＡＰ）、２，３－ジリノレオイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロピルアミン（ＤＬｉｎＤＡＰ）、１，２－Ｎ，Ｎ’－ジリノレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ）、１，２－ジリノレオイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＣＤＡＰ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＸＴＣ２－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル－４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（テトラデシルオキシ）－１－プロパンアミニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、（±）－Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（シス－９－テトラデセニルオキシ）－１－プロパンアミニウムブロミド（ＧＡＰ－ＤＭＯＲＩＥ）、（±）－Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（ドデシルオキシ）－１－プロパンアミニウムブロミド（ＧＡＰ－ＤＬＲＩＥ）、（±）－Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（テトラデシルオキシ）－１－プロパンアミニウムブロミド（ＧＡＰ－ＤＭＲＩＥ）、Ｎ－（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（テトラデシルオキシ）－１－プロパンアミニウムブロミド（βＡＥ－ＤＭＲＩＥ）、Ｎ－（４－カルボキシベンジル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（オレオイルオキシ）プロパン－１－アミニウム（ＤＯＢＡＱ）、２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ）、１，２－ジミリストイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＭＤＡＰ）、１，２－ジパルミトイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＰＤＡＰ）、Ｎ１－［２－（（１Ｓ）－１－［（３－アミノプロピル）アミノ］－４－［ジ（３－アミノ－プロピル）アミノ］ブチルカルボキサミド）エチル］－３，４－ジ［オレイルオキ］－ベンズアミド（ＭＶＬ５）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（ＤＯＥＰＣ）、２，３－ビス（ドデシルオキシ）－Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－１－アンモニウムブロミド（ＤＬＲＩＥ）、Ｎ－（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（テトラデシルオキシ）プロパン－１－アミニウムブロミド（ＤＭＯＲＩＥ）、ジ（Ｚ）－ノン－２－エン－１－イル）８，８’－（（（（２（ジメチルアミノ）エチル）チオ）カルボニル）アザンジイル）ジオクタノエート（ＡＴＸ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（ドデシルオキシ）プロパン－１－アミン（ＤＬＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（テトラデシルオキシ）プロパン－１－アミン（ＤＭＤＭＡ）、ジ（（Ｚ）－ノン－２－エン－１－イル）－９－（（４－（ジメチルアミノブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）、Ｎ－ドデシル－３－（（２－ドデシルカルバモイル－エチル）－｛２－［（２－ドデシルカルバモイル－エチル）－２－｛（２－ドデシルカルバモイル－エチル）－［２－（２－ドデシルカルバモイル－エチルアミノ）－エチル］－アミノ｝－エチルアミノ］プロピオンアミド（リピドイド９８Ｎ１２－５）、１－［２－［ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ］エチル－［２－［４－［２－［ビス（２ヒドロキシドデシル）アミノ］エチル］ピペラジン－１－イル］エチル］アミノ］ドデカン－２－オール（リピドイドＣ１２－２００）、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）（ＤＯＴＭＡ及び１，２－ジオレオイル－ｓｎ－３ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む市販のカチオン性リポソーム、ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ社製、ＧｒａｎｄＩｓｌａｎｄ，Ｎ．Ｙ．）、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）（Ｎ－（１－（２，３ジオレイルオキシ）プロピル）－Ｎ－（２－（スペルミンカルボキサミド）エチル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）及び（ＤＯＰＥ）を含む市販のカチオン性リポソーム、ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ社製）、及びＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭ（登録商標）（ＰｒｏｍｅｇａＣｏｒｐ．Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．から市販されている、エタノール中のジオクタデシルアミドグリシルカルボキシスペルミン（ＤＯＧＳ）を含む市販のカチオン性脂質）、または前述のいずれかの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。本開示で使用するためのさらなる好適なカチオン性脂質としては、ＷＯ２０２０／１２８０３１及びＵＳ２０２００１６３８７８に記載のものが挙げられ、それらの各々の内容全体が、本明細書に記載の目的のために参照により本明細書に組み込まれる。本開示で使用するためのさらなる好適なカチオン性脂質としては、ＷＯ２０１０／０５３５７２（段落［００２２５］に記載のＣｌ２－２００を含む）及びＷＯ２０１２／１７０９３０に記載のものが挙げられ、これらの両方が、本明細書に記載の目的のために参照により本明細書に組み込まれる。本開示で使用するための追加の好適なカチオン性脂質としては、ＨＧＴ４００３、ＨＧＴ５０００、ＨＧＴＳ００１、ＨＧＴ５００１、ＨＧＴ５００２が挙げられる（ＵＳ２０１５０１４００７０Ａ１を参照されたく、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物（例えば、免疫原性組成物、例えば、ワクチン）組成物に有用な製剤は、少なくとも１つのカチオン性脂質を含むことができる。代表的なカチオン性脂質としては、１，２－ジリノレイオキシ－３－（ジメチルアミノ）アセトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＡＣ）、１，２－ジリノレイオキシ－３モルホリノプロパン（ＤＬｉｎ－ＭＡ）、１，２－ジリノレイオイル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＡＰ）、１，２－ジリノレイルチオ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｓ－ＤＭＡＰ）、１－リノレオイル－２－リノレイルオキシ－３ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－２－ＤＭＡＰ）、１，２－ジリノレイル－３－リノレイルオキシ－３－トリメチルアミノプロパンクロリド塩（ＤＬｉｎ－ＴＭＡ．ＣＩ）、１，２－ジリノレイル－３－トリメチルアミノプロパンクロリド塩（ＤＬｉｎ－ＴＡＰ．ＣＩ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－（Ｎ－メチルピペラジノ）プロパン（ＤＬｉｎ－ＭＰＺ）、３－（Ｎ，Ｎジリノレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＬｉｎＡＰ）、３－（Ｎ，Ｎ，ジオレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＯＡＰ）、１，２－ジリノオレイルオキソ－３－（２－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）エトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＥＧ－ＤＭＡ）、及び２，２－ジリノオレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、ジリノレイルメチル－４－ジメチルアミノ酪酸（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、ＭＣ３（ＵＳ２０１００３２４１２０、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、本開示に従って有用なアミノまたはカチオン性脂質は、少なくとも１つのプロトン化可能または脱プロトン化可能な基を有し、その結果、脂質は、生理学的ｐＨ（例えば、ｐＨ７．４）以下のｐＨで正に荷電され、第２のｐＨで中性であり、好ましくは生理学的ｐＨ以上である。もちろん、ＰＨの関数としてのプロトンの添加または除去は、平衡プロセスであり、荷電または中性脂質への言及は、優勢な種の性質を指し、全ての脂質が荷電または中性形態で存在しなければならないことを必要としないことが理解されるであろう。２つ以上のプロトン化または脱プロトン化基を有する脂質、または両性イオン性である脂質は除外されず、同様に本発明の文脈に好適であってもよい。

いくつかの実施形態では、プロトン化可能な脂質は、約４～約１１の範囲のプロトン化可能な基のｐＫａ、例えば、約５～約７のｐＫａを有する。

いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、本開示に従って利用される脂質組成物中に存在する総脂質の約１０モル％～約１００モル％、約２０モル％～約１００モル％、約３０モル％～約１００モル％、約４０モル％～約１００モル％、または約５０モル％～約１００モル％を含み得る。

３．追加の脂質または脂質様材料
いくつかの実施形態では、本開示に従って利用される製剤は、カチオン性脂質もしくはカチオン性にイオン化可能な脂質または脂質様材料以外の脂質または脂質様材料、すなわち、非カチオン性脂質または脂質様材料（非カチオン性にイオン化可能な脂質または脂質様材料を含む）を含み得る。まとめて、アニオン性脂質または脂質様材料及び中性脂質または脂質様材料は、本明細書中で非カチオン性脂質または脂質様材料と称される。いくつかの実施形態では、イオン化可能／カチオン性脂質または脂質様材料に加えて、コレステロール及び脂質などの他の疎水性部分の追加によって核酸粒子の製剤を最適化することにより、例えば、粒子安定性及び核酸デリバリーの有効性を強化することができる。

いくつかの実施形態では、脂質または脂質様材料が組み込まれてもよく、これは、粒子の電荷全体に影響を及ぼしても及ぼさなくてもよい。特定の実施形態では、そのような脂質または脂質様材料は、非カチオン性脂質または脂質様材料である。

いくつかの実施形態では、非カチオン性脂質は、例えば、１つ以上のアニオン性脂質及び／または中性脂質を含んでもよい。「アニオン性脂質」は、（例えば、選択されたｐＨで）負に帯電する。

「中性脂質」は、非荷電または中性両性イオン形態（例えば、選択されたｐＨで）のいずれかで存在する。いくつかの実施形態では、製剤は、以下の中性脂質構成要素（１）リン脂質、（２）コレステロールもしくはその誘導体、または（３）リン脂質及びコレステロールの混合物もしくはその誘導体のうちの１つを含む。コレステロール誘導体の例としては、コレスタノール、コレスタノン、コレステノン、コプロスタノール、コレステリル－２’－ヒドロキシエチルエーテル、コレステリル－４’－ヒドロキシブチルエーテル、トコフェロール、ならびにそれらの誘導体及びそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。

使用することができる具体的な例示的なリン脂質として、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、またはスフィンゴミエリンが挙げられるが、これらに限定されない。そのようなリン脂質として、特に、ジアシルホスファチジルコリン、例えば、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジペンタデカノイルホスファチジルコリン、ジラウロイルフォスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジアラキドイルホスファチジルコリン（ＤＡＰＣ）、ジベヘノイルホスファチジルコリン（ＤＢＰＣ）、ジトリコサノイルホスファチジルコリン（ＤＴＰＣ）、ジリグノセロイルファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、パルミトイルオレオイル－ホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミサクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ＬｙｓｏＰＣ）、ならびにホスファチジルエタノールアミン、特に、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、例えば、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパルミトイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジラウロイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＬＰＥ）、ジフィタノイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＰｙＰＥ）、及び疎水性鎖が異なるさらなるホスファチジルエタノールアミン脂質が挙げられる。

特定の実施形態では、本開示に従って利用される製剤は、ＤＳＰＣまたはＤＳＰＣ及びコレステロールを含む。

特定の実施形態では、本開示に従って利用される製剤は、カチオン性脂質及び追加の（非カチオン性）脂質の双方を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書の製剤は、ポリマーコンジュゲート脂質、例えばペグ化脂質を含む。「ペグ化脂質」は、脂質部分及びポリエチレングリコール部分の両方を含む。ペグ化脂質は、当該技術分野で既知である。

理論に縛られるつもりはないが、製剤中の他の脂質（複数可）の量と比較した（総）カチオン性脂質の量は、核酸の電荷、粒径、安定性、組織選択性、及び生物活性などの重要な特徴に影響を及ぼし得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質の、少なくとも１つの追加の脂質に対するモル比は、約１０：０～約１：９、約４：１～約１：２、または約３：１～約１：１である。

いくつかの実施形態では、非カチオン性脂質、特に中性脂質（例えば、１つ以上のリン脂質及び／またはコレステロール）は、製剤中に存在する総脂質の約０モル％～約９０モル％、約０モル％～約８０モル％、約０モル％～約７０モル％、約０モル％～約６０モル％、または約０モル％～約５０モル％を含み得る。

４．リポプレックス粒子
本開示の特定の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡは、ＲＮＡリポプレックス粒子に存在してもよい。

「ＲＮＡリポプレックス粒子」は、脂質、特にカチオン性脂質、及びＲＮＡを含有する。正に帯電するリポソームと負に帯電するＲＮＡとの間の静電相互作用は、ＲＮＡリポプレックス粒子の複合体形成及び自然発生的形成をもたらす。正に帯電するリポソームは、一般に、カチオン性脂質、例えばＤＯＴＭＡ、及び追加の脂質、例えばＤＯＰＥを用いて合成され得る。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子はナノ粒子である。

特定の実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、カチオン性脂質及び追加の脂質の両方を含む。例示的な実施形態では、カチオン性脂質は、ＤＯＴＭＡであり、追加の脂質は、ＤＯＰＥである。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質の、少なくとも１つの追加の脂質に対するモル比は、約１０：０～約１：９、約４：１～約１：２、または約３：１～約１：１である。特定の実施形態では、モル比は、約３：１、約２．７５：１、約２．５：１、約２．２５：１、約２：１、約１．７５：１、約１．５：１、約１．２５：１、または約１：１であり得る。例示的な実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質の、少なくとも１つの追加の脂質に対するモル比は、約２：１である。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、一実施形態では、約２００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約８００ｎｍ、約２５０～約７００ｎｍ、約４００～約６００ｎｍ、約３００ｎｍ～約５００ｎｍ、または約３５０ｎｍ～約４００ｎｍの範囲の平均直径を有する。特定の実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、平均直径が約２００ｎｍ、約２２５ｎｍ、約２５０ｎｍ、約２７５ｎｍ、約３００ｎｍ、約３２５ｎｍ、約３５０ｎｍ、約３７５ｎｍ、約４００ｎｍ、約４２５ｎｍ、約４５０ｎｍ、約４７５ｎｍ、約５００ｎｍ、約５２５ｎｍ、約５５０ｎｍ、約５７５ｎｍ、約６００ｎｍ、約６２５ｎｍ、約６５０ｎｍ、約７００ｎｍ、約７２５ｎｍ、約７５０ｎｍ、約７７５ｎｍ、約８００ｎｍ、約８２５ｎｍ、約８５０ｎｍ、約８７５ｎｍ、約９００ｎｍ、約９２５ｎｍ、約９５０ｎｍ、約９７５ｎｍ、または約１０００ｎｍである。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、平均直径が約２５０ｎｍ～約７００ｎｍに及ぶ。別の実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、平均直径が約３００ｎｍ～約５００ｎｍに及ぶ。例示的な実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、平均直径が約４００ｎｍである。

本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子及びＲＮＡリポプレックス粒子を含む組成物は、非経口投与後、特に静脈内投与後の標的組織へのＲＮＡの送達に有用である。ＲＮＡリポプレックス粒子は、エタノール中の脂質の溶液を水または好適な水相に注入することによって得ることができるリポソームを使用して調製され得る。一実施形態では、水相は、酸性ｐＨを有する。一実施形態では、水相は、例えば、約５ｍＭの量で酢酸を含む。リポソームは、リポソームをＲＮＡと混合することによってＲＮＡリポプレックス粒子を調製するのに使用され得る。一実施形態では、リポソーム及びＲＮＡリポプレックス粒子は、少なくとも１つのカチオン性脂質及び少なくとも１つの追加の脂質を含む。一実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質は、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）及び／または１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＴＡＰ）を含む。一実施形態では、少なくとも１つの追加の脂質は、１，２－ジ－（９Ｚ－オクタデセノイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、コレステロール（Ｃｈｏｌ）及び／または１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）を含む。一実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質は、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）を含み、少なくとも１つの追加の脂質は、１，２－ジ－（９Ｚ－オクタデセノイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む。一実施形態では、リポソーム及びＲＮＡリポプレックス粒子は、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）及び１，２－ジ－（９Ｚ－オクタデセノイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む。

脾臓標的化ＲＮＡリポプレックス粒子は、参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２０１３／１４３６８３に記載されている。正味の負電荷を有するＲＮＡリポプレックス粒子は、脾臓組織または脾臓細胞、例えば抗原提示細胞、特に樹状細胞を優先的に標的とするのに使用され得ることが見出された。したがって、ＲＮＡリポプレックス粒子の投与の後に、脾臓におけるＲＮＡ蓄積及び／またはＲＮＡ発現が起こる。したがって、本開示のＲＮＡリポプレックス粒子は、脾臓内でＲＮＡを発現させるのに使用され得る。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子の投与の後に、肺及び／または肝臓におけるＲＮＡ蓄積及び／またはＲＮＡ発現は、起こらないか、または本質的に起こらない。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子の投与後、脾臓におけるプロフェッショナル抗原提示細胞などの抗原提示細胞におけるＲＮＡ蓄積及び／またはＲＮＡ発現が生じる。したがって、本開示のＲＮＡリポプレックス粒子は、そのような抗原提示細胞内でＲＮＡを発現させるのに使用され得る。一実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞及び／またはマクロファージである。

５．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡなどの核酸は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の形態で投与される。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、１つ以上の核酸分子が付着されるか、または１つ以上の核酸分子がカプセル化される粒子を形成することができるあらゆる脂質を含み得る。

いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、１つ以上のカチオン性脂質及び１つ以上の安定化脂質を含む。安定化脂質としては、中性脂質及びペグ化脂質が挙げられる。

いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、カチオン性脂質、中性脂質、ステロール、ポリマーコンジュゲート脂質、及び脂質ナノ粒子内にカプセル化された、または脂質ナノ粒子と会合したＲＮＡを含む。

いくつかの実施形態では、中性脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＯＰＥ、ＤＯＰＧ、ＤＰＰＧ、ＰＯＰＥ、ＤＰＰＥ、ＤＭＰＥ、ＤＳＰＥ、及びＳＭからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、中性脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＯＰＥ、及びＳＭからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、中性脂質は、ＤＳＰＣである。

いくつかの実施形態では、ステロールはコレステロールである。

いくつかの実施形態では、ポリマーコンジュゲート脂質は、ペグ化脂質である。いくつかの実施形態では、ペグ化脂質は、以下の構造：
またはその薬学的に許容される塩、互変異性体、もしくは立体異性体を有し、式中、
Ｒ^１２及びＲ^１３が、各々独立して、１０～３０個の炭素原子を含有する直鎖または分枝鎖、飽和または不飽和アルキル鎖であり、アルキル鎖は、１つ以上のエステル結合によって任意選択的に中断され、ｗは、３０～６０の範囲の平均値を有する。いくつかの実施形態では、Ｒ^１２及びＲ^１３は、各々独立して、１２～１６個の炭素原子を含有する直鎖飽和アルキル鎖である。いくつかの実施形態では、ｗは、平均値が４０～５５に及ぶ。いくつかの実施形態では、平均ｗは、約４５である。いくつかの実施形態では、Ｒ^１２及びＲ^１３は、各々独立して、約１４個の炭素原子を含有する直鎖飽和アルキル鎖であり、ｗは、約４５の平均値を有する。

いくつかの実施形態では、ペグ化脂質は、例えば以下の構造を有する、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００である：

いくつかの実施形態では、ＬＮＰのカチオン性脂質構成要素は、式（ＩＩＩ）の構造：
またはその薬学的に許容される塩、互変異性体、プロドラッグ、もしくは立体異性体を有し、式中：
Ｌ^１またはＬ^２のうちの一方が、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）_ｘ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、または－ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）Ｏ－であり、Ｌ^１またはＬ^２の他方は、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）_ｘ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^ａ－、もしくは－ＮＲ^ａＣ（＝Ｏ）Ｏ－、または直接結合であり、
Ｇ^１及びＧ^２が、各々独立して、非置換Ｃ_１－Ｃ_１２アルキレンまたはＣ_１－Ｃ_１２アルケニレンであり、
Ｇ^３は、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_２４アルケニレン、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルケニレンであり；
Ｒ^ａが、ＨまたはＣ_１－Ｃ_１２アルキルであり、
Ｒ^１及びＲ^２が、各々独立して、Ｃ_６－Ｃ_２４アルキル、またはＣ_６－Ｃ_２４アルケニルであり、
Ｒ^３が、Ｈ、ＯＲ^５、ＣＮ、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^４、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^４、または－ＮＲ^５Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^４であり、
Ｒ^４が、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルであり、
Ｒ^５が、Ｈ、またはＣ_１－Ｃ_６アルキルであり、
ｘは、０、１または２である。

式（ＩＩＩ）の前述の実施形態のうちのいくつかでは、脂質は、以下の構造（ＩＩＩＡ）または（ＩＩＩＢ）のうちの１つを有し：
式中、
Ａは、３～８員シクロアルキルまたはシクロアルキレン環であり；
Ｒ^６は、出現する毎に、独立してＨ、ＯＨ、またはＣ_１～Ｃ_２４アルキルであり；
ｎは、１～１５に及ぶ整数である。

式（ＩＩＩ）の前述の実施形態のうちのいくつかでは、脂質は、構造（ＩＩＩＡ）を有し、他の実施形態では、脂質は、構造（ＩＩＩＢ）を有する。

式（ＩＩＩ）の他の実施形態では、脂質は、以下の構造（ＩＩＩＣ）または（ＩＩＩＤ）のうちの１つを有し：
ｙ及びｚは、各々独立して、１～１２に及ぶ整数である。

式（ＩＩＩ）の前述の実施形態のうちのいずれかでは、Ｌ^１またはＬ^２のうちの１つは、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－である。例えば、いくつかの実施形態では、Ｌ^１及びＬ^２の各々は、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－である。前述のうちのいずれかのいくつかの異なる実施形態では、Ｌ^１及びＬ^２は、各々独立して、－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－、または－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－である。例えば、いくつかの実施形態では、Ｌ^１及びＬ^２の各々は、－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－である。

式（ＩＩＩ）のいくつかの異なる実施形態では、脂質は、以下の構造（ＩＩＩＥ）または（ＩＩＩＦ）のうちの１つを有する：

式（ＩＩＩ）の前述の実施形態のうちのいくつかでは、脂質は、以下の構造（ＩＩＩＧ）、（ＩＩＩＨ）、（ＩＩＩＩ）、または（ＩＩＩＪ）のうちの１つを有する：

式（ＩＩＩ）の前述の実施形態のうちのいくつかでは、ｎは、２～１２、例えば、２～８または２～４に及ぶ整数である。例えば、いくつかの実施形態では、ｎは、３、４、５、または６である。いくつかの実施形態では、ｎは、３である。いくつかの実施形態では、ｎは、４である。いくつかの実施形態では、ｎは、５である。いくつかの実施形態では、ｎは、６である。

式（ＩＩＩ）の他の前述の実施形態の一部において、ｙ及びｚは、各々独立して、２～１０に及ぶ整数である。例えば、いくつかの実施形態では、ｙ及びｚは、各々独立して、４～９または４～６に及ぶ整数である。

式（ＩＩＩ）の前述の実施形態のうちのいくつかでは、Ｒ^６は、Ｈである。前述の実施形態のうちの他の実施形態では、Ｒ^６は、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ^６は、ＯＨである。

式（ＩＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｇ^３は、非置換である。他の実施形態では、Ｇ３は、置換されている。様々な異なる実施形態では、Ｇ^３は、直鎖Ｃ_１－Ｃ_２４アルキレン、または直鎖Ｃ_１－Ｃ_２４アルケニレンである。

式（ＩＩＩ）のいくつかの他の前述の実施形態では、Ｒ^１もしくはＲ^２、または両方は、Ｃ_６－Ｃ_２４アルケニルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ^１及びＲ^２は、各々独立して、以下の構造を有し：
式中、
Ｒ^７ａ及びＲ^７ｂが、各出現において、独立して、Ｈ、またはＣ_１－Ｃ_１２アルキルであり、
ａは、２～１２の整数であり、
Ｒ^７ａ、Ｒ^７ｂ及びａが各々、Ｒ^１及びＲ^２が各々独立して、６～２０個の炭素原子を含むように選択される。例えば、いくつかの実施形態では、ａは、５～９または８～１２に及ぶ整数である。

式（ＩＩＩ）の前述の実施形態のうちのいくつかでは、Ｒ^７ａの少なくとも１つの出現は、Ｈである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ^７ａは、各出現においてＨである。前述の他の異なる実施形態では、Ｒ^７ｂの少なくとも１つの出現は、Ｃ_１－Ｃ_８アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｃ_１－Ｃ_８アルキルは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ヘキシル、またはｎ－オクチルである。

式（ＩＩＩ）の異なる実施形態では、Ｒ^１もしくはＲ^２、または両方は、以下の構造のうちの１つを有する：

式（ＩＩＩ）の前述の実施形態のうちのいくつかでは、Ｒ^３は、ＯＨ、ＣＮ、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^４、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^４、または－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ^４である。いくつかの実施形態では、Ｒ^４は、メチルまたはエチルである。

様々な異なる実施形態では、式（ＩＩＩ）のカチオン性脂質は、以下の表８に示される構造のうちの１つを有する。

様々な異なる実施形態では、カチオン性脂質は、以下の表９に示される構造のうちの１つを有する。

いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、イオン性脂質様材料（リピドイド）であるカチオン性脂質を含む。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、以下の構造を有する：

いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約３０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約５０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１３０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１００ｎｍ、約７０～約９０ｎｍ、または約７０ｎｍ～約８０ｎｍの平均サイズ（例えば、平均直径）を有することができる。いくつかの実施形態では、本開示による脂質ナノ粒子は、約５０ｎｍ～約１００ｎｍの平均サイズ（例えば、平均直径）を有することができる。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約５０ｎｍ～約１５０ｎｍの平均サイズ（例えば、平均直径）を有することができる。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約６０ｎｍ～約１２０ｎｍの平均サイズ（例えば、平均直径）を有することができる。いくつかの実施形態では、本開示による脂質ナノ粒子は、約３０ｎｍ、３５ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、または１５０ｎｍの平均サイズ（例えば、平均直径）を有することができる。「平均直径（ａｖｅｒａｇｅｄｉａｍｅｔｅｒ）」または「平均直径（ｍｅａｎｄｉａｍｅｔｅｒ）」という用語は、長さ寸法に関するいわゆるＺ平均、及び無次元である多分散度（ＰＩ）を結果として提供するものであるいわゆるキュマルトアルゴリズムをデータ分析に使用する動的レーザ光散乱（ＤＬＳ）によって測定したときの、粒子の平均流体力学的直径を指す（Ｋｏｐｐｅｌ，Ｄ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．５７，１９７２，ｐｐ４８１４－４８２０，ＩＳＯ１３３２１、これは参照により本明細書に組み込まれる）。ここで、粒子の「平均直径（ａｖｅｒａｇｅｄｉａｍｅｔｅｒ）」、「平均直径（ｍｅａｎｄｉａｍｅｔｅｒ）」、「直径」または「粒径」は、Ｚ平均のこの値と同義的に使用される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、約０．５未満、約０．４未満、約０．３未満、または約０．２以下の多分散指数を呈し得る。一例として、脂質ナノ粒子は、約０．１～約０．３、または約０．２～約０．３の範囲内の多分散指数を呈し得る。「多分散度」は、好ましくは、「平均直径」の定義の中で言及したようないわゆるキュマルト分析による動的光散乱測定値に基づいて計算される。特定の必要条件下では、それは、リボ核酸ナノ粒子のアンサンブル（例えば、リボ核酸ナノ粒子）の粒径分布の尺度として解釈され得る。

本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、カチオン性ポリマー中のカチオン性（窒素）基（Ｎ／Ｐ中の「Ｎ」）とＲＮＡ中のアニオン性（リン酸）基（Ｎ／Ｐ中の「Ｐ」）とのモル比である「Ｎ／Ｐ比」を特徴とすることができる。カチオン性基は、カチオン性形態（例えば、Ｎ^＋）である基、またはカチオン性になるようにイオン化可能である基のいずれかであることが理解される。Ｎ／Ｐ比（例えば、約５のＮ／Ｐ比）における単一の数の使用は、その数が１を超えることを指すように意図され、例えば、約５のＮ／Ｐ比は、５：１を意味するように意図される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、５以上のＮ／Ｐ比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、約５、６、７、８、９、または１０であるＮ／Ｐ比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子のＮ／Ｐ比は、約１０～約５０である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子のＮ／Ｐ比は、約１０～約７０である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子のＮ／Ｐ比は、約１０～約１２０である。

Ｂ．脂質ナノ粒子を作製するための例示的な方法
核酸を含む脂質及び脂質ナノ粒子ならびにそれらの調製方法は、当該技術分野で既知であり、例えば、米国特許第８，５６９，２５６号、同第５，９６５，５４２号及び米国特許公開第２０１６／０１９９４８５号、同第２０１６／０００９６３７号、同第２０１５／０２７３０６８号、同第２０１５／０２６５７０８号、同第２０１５／０２０３４４６号、同第２０１５／０００５３６３号、同第２０１４／０３０８３０４号、同第２０１４／０２００２５７号、同第２０１３／０８６３７３号、同第２０１３／０３３８２１０号、同第２０１３／０３２３２６９号、同第２０１３／０２４５１０７号、同第２０１３／０１９５９２０号、同第２０１３／０１２３３３８号、同第２０１３／００２２６４９号、同第２０１３／００１７２２３号、同第２０１２／０２９５８３２号、同第２０１２／０１８３５８１号、同第２０１２／０１７２４１１号、同第２０１２／００２７８０３号、同第２０１２／００５８１８８号、同第２０１１／０３１１５８３号、同第２０１１／０３１１５８２号、同第２０１１／０２６２５２７号、同第２０１１／０２１６６２２号、同第２０１１／０１１７１２５号、同第２０１１／００９１５２５号、同第２０１１／００７６３３５号、同第２０１１／００６００３２号、同第２０１０／０１３０５８８号、同第２００７／００４２０３１号、同第２００６／０２４００９３号、同第２００６／００８３７８０号、同第２００６／０００８９１０号、同第２００５／０１７５６８２号、同第２００５／０１７０５４号、同第２００５／０１１８２５３号、同第２００５／００６４５９５号、同第２００４／０１４２０２５号、同第２００７／００４２０３１号、同第１９９９／００９０７６号、及びＰＣＴ公開第ＷＯ９９／３９７４１号、同第ＷＯ２０１８／０８１４８０号、同第ＷＯ２０１７／００４１４３号、同第ＷＯ２０１７／０７５５３１号、同第ＷＯ２０１５／１９９９５２号、同第ＷＯ２０１４／００８３３４号、同第ＷＯ２０１３／０８６３７３号、同第ＷＯ２０１３／０８６３２２号、同第ＷＯ２０１３／０１６０５８号、同第ＷＯ２０１３／０８６３７３号、同第Ｗ０２０１１／１４１７０５号、及び同第ＷＯ２００１／０７５４８（これらの全開示の各々は、本明細書に記載の目的のために参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているようなものが含まれる。

例えば、いくつかの実施形態では、カチオン性脂質、中性脂質（例えば、ＤＳＰＣ、及び／またはコレステロール）、ならびにポリマーコンジュゲート脂質は、所定のモル比（例えば、本明細書に記載されるもの）でエタノール中に可溶化することができる。いくつかの実施形態では、複数の脂質ナノ粒子（脂質ナノ粒子）は、およそ１０：１～３０：１の総脂質対ポリリボヌクレオチドの重量比で調製される。いくつかの実施形態では、そのようなポリリボヌクレオチドは、酢酸緩衝液で０．２ｍｇ／ｍＬに希釈され得る。

いくつかの実施形態では、エタノール注入技術を使用して、ポリリボヌクレオチドを含むコロイド状脂質分散体は、以下のように形成され得る：カチオン性脂質、中性脂質、及びポリマーコンジュゲート脂質などの脂質を含むエタノール溶液を、ポリリボヌクレオチドを含む水溶液（例えば、本明細書に記載されるもの）中に注入する。

いくつかの実施形態では、脂質及びポリリボヌクレオチド溶液は、例えばピストンポンプを使用して、各溶液を制御された流量で混合ユニットに圧送することにより、室温で混合され得る。いくつかの実施形態では、混合ユニットへの脂質溶液及びＲＮＡ溶液の流量は１：３の比に維持される。混合によって、エタノール性脂質溶液がポリリボヌクレオチド水溶液で希釈されるにつれて核酸－脂質粒子が形成される。脂質の溶解度が低下すると同時に、正電荷を帯びた陽イオン性脂質が、負に帯電したＲＮＡと相互作用する。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡ封入脂質ナノ粒子を含む溶液は、濃度調整、緩衝液交換、製剤化及び／またはろ過の１つ以上によって処理され得る。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡ封入脂質ナノ粒子は、ろ過によって処理され得る。

いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子の粒径及び／または内部構造（ＲＮＡの有無にかかわらず）は、例えば、小角度Ｘ線散乱（ＳＡＸＳ）及び／または透過型電子顕微鏡（ＣｒｙｏＴＥＭ）などの適切な技術によってモニタリングされ得る。

Ｖ．医薬組成物
本開示は、本明細書に記載の１つ以上のポリリボヌクレオチドを含む組成物、例えば医薬組成物を提供する。医薬製剤は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含んでもよく、そのような賦形剤には、本明細書で使用する場合、所望の特定の剤形に好適な任意の及び全ての溶媒、分散媒体、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散助剤または懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、防腐剤、固体結合剤、潤滑剤などがある。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔＥｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６、参照により本明細書に組み込まれる）は、医薬組成物を製剤化する際に使用される様々な賦形剤及びその調製のための既知の技術を開示している。任意の通常の賦形剤媒体は、ある望ましくない生物学的作用を生じさせたりあるいは医薬組成物の任意の他の構成要素（複数可）と有害な態様で相互作用したりすることなどにより物質またはその誘導体と不適合である場合を除き、その使用は、本開示の範囲内であると考えられる。

いくつかの実施形態では、賦形剤は、ヒトでの使用及び獣医学的使用のために承認されているものである。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国食品医薬品局によって承認されているものである。いくつかの実施形態では、賦形剤は、医薬品グレードである。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、及び／または国際薬局方の基準を満たす。

医薬組成物の製造に使用される薬学的に許容される賦形剤としては、不活性希釈剤、分散剤及び／または造粒剤、界面活性剤及び／または乳化剤、崩壊剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤、潤滑剤、及び／または油が挙げられるが、これらに限定されない。そのような賦形剤は、任意選択的に、医薬製剤に含まれ得る。配合者の判断に従って、カカオバター及び坐剤ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味料、香味剤、及び／または香料などの賦形剤を組成物に存在させることができる。

医薬の処方及び／または製造に関する一般的な考慮事項は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ２１ｓｔｅｄ．，ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５（参照により本明細書に組み込まれる）において見ることができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体または希釈剤、ならびに他の任意の既知の補助剤及び賦形剤を用いて、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ２１ｓｔｅｄ．，ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されるような通常法に従い製剤化することができる。

本明細書に記載の医薬組成物は、当該技術分野で既知の適切な方法により投与することができる。当業者には明らかなとおり、投与経路及び／または投与様式は、例えば、本明細書に記載の医薬組成物の安定性及び／または薬物動態及び／または薬力学を含むが、これらに限定されない、いくつかの要因に依存し得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、非経口投与のために製剤化される。非経口投与には、経腸及び局所投与以外の投与様式（通常、注射による）が含まれ、静脈内、筋肉内、動脈内、皮内、皮下、表皮下、または関節内の注射及び注入が含まれるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、静脈内、筋肉内、または皮下の投与用に製剤化されている。特に好ましい実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、筋肉内投与用に製剤化されている。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、静脈内投与用に製剤化されている。いくつかの実施形態では、静脈内投与に有用であり得る薬学的に許容される賦形剤としては、滅菌水溶液または分散液、及び滅菌注射用溶液または分散液を調製するための滅菌粉末が挙げられる。

治療用組成物は、典型的に、製造及び保存の条件下で、無菌及び安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、脂質ナノ粒子、または高い薬物濃度に好適な他の秩序構造として、製剤化することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの好適な混合物を含む、溶媒または分散媒であり得る。例えば、界面活性剤を使用して、適切な流動性を維持することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、マンニトールなどのポリアルコール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含めることが好ましい。いくつかの実施形態では、注射可能な組成物の持続的な吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを、組成物中に含めることによって、もたらされ得る。

滅菌注射用溶液は、必要な量の活性化合物を、上記の成分のうちの１つまたは組み合わせを含む適切な溶媒中に組み込み、必要に応じて、続いて滅菌及び／または精密ろ過することによって調製することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物を、本明細書の記載のとおり及び／または当該技術分野で既知の方法に示されるように、調製することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＡＬＣ－０３１５、ＡＬＣ－０１５９、ＤＳＰＣ、コレステロール、スクロース、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｎａ_２ＨＰＯ_４、ＫＨ_２ＰＯ_４、注射用水を含む。いくつかの実施形態では、生理食塩水（等張０．９％ＮａＣｌ）が希釈剤として使用される。

これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などの補助剤も含有し得る。微生物の存在の防止は、滅菌手順及び様々な抗菌剤及び抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸など）の添加の両方によって確実にすることができる。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を本明細書に記載の医薬組成物に含めることも望ましい場合がある。加えて、注射可能な医薬形態の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの吸収を遅らせる薬剤の添加によってもたらすことができる。

本明細書に記載の医薬組成物の製剤は、薬理学の分野で既知のまたは今後開発される任意の方法によって調製することができる。概して、そのような調製方法は、活性成分（複数可）を希釈剤もしくは別の賦形剤及び／または１つ以上の他の補助成分と接触させ、次いで、必要及び／または所望に応じて、製品を所望の単回もしくは複数回投与単位に成形及び／または包装するステップを含む。

本開示による医薬組成物は、一括して、単一単位用量として、及び／または複数の単一単位用量として、調製、包装、及び／または販売され得る。本明細書で使用する場合、「単位用量」は、本明細書に記載のシステム及び／または方法を使用して製造される所定量の少なくとも１つのＲＮＡ製品を含む医薬組成物の個別の量である。

医薬組成物において、脂質ナノ粒子に封入されるポリリボヌクレオチド、薬学的に許容される賦形剤、及び／または任意の追加成分の相対的な量は、治療される対象、標的細胞、疾患または障害に応じて変わり得、また、組成物の投与経路によってもさらに変わり得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、当業者に既知の慣用的な方法により、薬学的に許容される剤形に製剤化される。本明細書に記載の医薬組成物中の活性成分（例えば、脂質ナノ粒子に封入されるポリリボヌクレオチド）の実際の投薬量レベルは、特定の患者、組成、及び投与様式に対して患者に毒性をもたらすことなく所望の治療反応を達成するのに有効な量の活性成分を得るために、変えることができる。選択される投薬量レベルは、様々な薬物動態学的要因に依存する。そのような要因には、用いられる本開示の特定の組成物の活性、投与経路、投与時間、用いられている特定の化合物の排泄率、治療の持続期間、用いられる特定の組成物と併用する他の薬物、化合物、及び／または物質、治療されている患者の年齢、性別、体重、状態、全般的な健康状態、及び以前の病歴、ならびに医療分野で周知の同様の要因がある。

当該技術分野の通常の知識を有する医師は、必要とされる有効量の医薬組成物を容易に決定し、処方することができる。例えば、医師は、医薬組成物中に用いられる活性成分（例えば、脂質ナノ粒子に封入されるポリリボヌクレオチド）の用量を、所望の治療効果を達成するために必要とされるレベルよりも低いレベルで開始し、所望の効果が達成されるまで用量を徐々に増加させることができる。

いくつかの実施形態では、医薬組成物を、約５ｍｇＲＮＡ／ｋｇの用量を送達するように製剤化する（例えば、限定されることなく、静脈内、筋肉内、または皮下の投与用に）。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、例えば、いくつかの実施形態において、特定の条件下でそのような組成物の安定性を高め得る１つ以上の添加物をさらに含んでもよい。添加物の例としては、塩類、緩衝物質、保存料、及び担体を挙げることができるが、これらに限定されない。例えば、いくつかの実施形態では、医薬組成物は、凍結保護剤（例えば、スクロース）及び／または緩衝水溶液をさらに含んでもよく、いくつかの実施形態では、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、及び／またはカルシウム塩などのアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩を含む１つ以上の塩を含んでもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、静脈内または筋肉内投与用の、防腐剤を含まない滅菌ＲＮＡ－脂質ナノ粒子分散液である。

本明細書に提供される医薬組成物の説明は、主に、ヒトへの投与に好適である医薬組成物を対象とするが、当業者には明らかなとおり、そのような組成物は、一般に、あらゆる種類の動物への投与に好適である。ヒトへの投与に好適な医薬組成物を様々な動物への投与に好適なものにするための修飾はよく理解されており、通常の熟練した獣医薬理学者は、たとえ実施するにしても、通常の実験を実施するだけで、そのような修飾を設計及び／または実施することができる。

ＶＩ．患者集団
いくつかの態様では、本開示の技術は、治療及び／または予防を目的として使用される。いくつかの実施形態では、本開示の技術は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫による感染の治療及び／または予防に使用される。本開示の予防目的は、曝露前予防及び／または曝露後予防を含む。いくつかのそのような実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫は、例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｋｎｏｗｌｅｓｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｏｖａｌｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｓｉｍｉｏｖａｌｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｖｉｖａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｍａｌａｒｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｏｖａｌｅｃｕｒｔｉｓｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｏｖａｌｅｗａｌｌｉｋｅｒｉ、及び／またはＰｌａｓｍｏｄｉｕｍベルゲイである。

いくつかの実施形態では、本開示の技術は、そのような感染に関連する障害の治療及び／または予防に使用される。そのような感染に関連する障害は、例えば、マラリア感染の典型的な症状及び／または合併症を含む。

いくつかの実施形態では、提供される組成物（例えば、マラリア抗原であるか、またはそれを含む）は、（例えば、感染した対象からの血清によって、提供される抗原への結合を検出することによって）抗マラリア免疫応答の１つ以上の特徴を検出及び／または特徴付けるのに有用であり得る。

いくつかの実施形態では、提供される組成物（例えば、マラリア抗原であるか、またはそれらを含む）は、それらに含まれる１つ以上の抗原に対する抗体を上昇させるのに有用であり、そのような抗体自体は、例えば、マラリア寄生虫（複数可）またはそれによる感染の検出または治療のために有用であり得る。

本開示は、コードされた抗原を産生するためのコードされた核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）の使用、及び／またはＲＮＡを産生するためのＤＮＡ構築物の使用を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示の技術は、非限定的な対象集団において利用される。いくつかの実施形態では、本開示の技術は、特定の対象集団において利用される。

いくつかの実施形態では、対象集団は、成人集団を含む。いくつかの実施形態では、成人集団は、約１９歳～約６０歳（例えば、約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、または６０歳）の対象を含む。いくつかの実施形態では、成人集団は、約１９歳～約６０歳（例えば、約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、または６０歳）の対象を含む。いくつかの実施形態では、成人集団は、約１８歳～約５５歳（例えば、約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、または６０歳）の対象を含む。

いくつかの実施形態では、対象集団は、高齢者集団を含む。いくつかの実施形態では、高齢者集団は、約６０歳、約７０歳、またはそれ以上（例えば、約６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００歳）の対象を含む。

いくつかの実施形態では、対象集団は、小児集団を含む。いくつかの実施形態では、小児集団は、およそ１８歳以下の対象を含む。いくつかのそのような実施形態では、小児集団は、約１歳～約１８歳（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８歳）の年齢の間の対象を含む。

いくつかの実施形態では、対象集団は、新生児集団を含む。いくつかの実施形態では、新生児集団は、約１２ヶ月以下（例えば、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１ヶ月以下）の対象を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術で治療される対象集団は、母親が妊娠中に本明細書に記載のそのような技術を受けなかった乳児（例えば、約１２ヶ月以下）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術で治療される対象集団は、妊婦を含み得る。いくつかの実施形態では、母親が妊娠中に開示された技術で治療された乳児（例えば、少なくとも１回の用量を受けた、または代替的に、単に両方の用量を受けた乳児）は、出生後の最初の数週間、数ヶ月、またはさらには数年（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８週間以上、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４ヶ月以上、または１、２、３、４、５年以上）にワクチン接種されない。代替的または追加的に、いくつかの実施形態では、母親が妊娠中に開示された技術で治療された（例えば、少なくとも１回の用量を受けた、または代替的にのみ、両方の用量を受けた）乳児は、生後、例えば、生後、生後最初の数週間、数ヶ月、またはさらには数年（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８週間以上、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４ヶ月以上、または１、２、３、４、５年以上）開示された技術で低減した治療を受けるか（例えば、より低用量及び／またはより少ない数の投与、例えば、ブースター、及び／または、より低い総曝露を所与の期間にわたる）、または低減したワクチン接種（例えば、より低用量及び／またはより少ない数の投与、例えば、ブースターを所与の期間にわたる）が必要である場合があり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるような組成物は、妊婦を含まない対象集団に投与される。

いくつかの実施形態では、対象集団は、生後６週間から１７ヶ月までの小児であるかまたは生後６週間から１７ヶ月までの小児を含む。

いくつかの実施形態では、対象は、１５ｋｇ／ｍ^２超かつ４０ｋｇ／ｍ^２未満の肥満度指数を有する。いくつかの実施形態では、対象は、１８．５ｋｇ／ｍ^２超かつ３５ｋｇ／ｍ未満の肥満度指数を有する。いくつかの実施形態では、対象の肥満度指数は、初回来院時に医療従事者とともに決定する。いくつかの実施形態では、対象の肥満度指数は、本明細書に記載されるような医薬組成物（例えば、免疫原性組成物、例えば、ワクチン）の第１の用量が投与されるときに決定される。

いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも４０ｋｇの体重である。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも４５ｋｇの体重である。いくつかの実施形態では、対象の体重は、初回来院時に医療従事者とともに決定する。いくつかの実施形態では、対象の体重は、本明細書に記載されるような医薬組成物（例えば、免疫原性組成物、例えば、ワクチン）の第１の用量が投与されるときに決定される。

いくつかの実施形態では、対象は、１５ｋｇ／ｍ^２超かつ４０ｋｇ／ｍ^２未満の肥満度指数を有し、少なくとも４０ｋｇの体重を有する。いくつかの実施形態では、対象は、１８．５ｋｇ／ｍ^２超かつ３５ｋｇ／ｍ^２未満の肥満度指数を有し、少なくとも４５ｋｇの体重を有する。いくつかの実施形態では、対象の肥満度指数及び体重は、初回来院時に医療従事者とともに決定する。いくつかの実施形態では、対象の肥満度指数及び体重は、本明細書に記載されるような医薬組成物（例えば、免疫原性組成物、例えば、ワクチン）の第１の用量が投与されるときに決定される。

いくつかの実施形態では、対象集団は、感染（例えば、マラリア）のリスクが高い集団を含む。いくつかのそのような実施形態では、集団は、局所的な流行または世界的なパンデミックに起因する感染の高いリスクを有するとみなされ得る。いくつかのそのような実施形態では、集団は、対象集団の地理的エリアに起因して、感染の高いリスクを有するとみなされ得る。いくつかの実施形態では、対象集団は、感染（例えば、マラリア）に曝露された対象を含む。

対象集団が妊婦であるか、または妊婦を含むいくつかの実施形態では、提供される技術は、例えば、いくつかの実施形態では、妊娠中の母親からその胎児への伝播を低減または排除することによることを含む、マラリアの伝播サイクルを中断する特定の利点を提供する。

いくつかの実施形態では、対象集団は、免疫不全の個体であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、対象は、免疫不全の個体を含まない。

いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物（例えば、免疫原性組成物、例えば、ワクチン）は、例えば、マラリア、または別の疾患、障害、もしくは状態を治療または予防するために、別の医薬組成物（例えば、免疫原性組成物、例えば、ワクチン）または治療介入と併用して（すなわち、対象（複数可）が両方に同時に曝露されるように）投与されてもよい。

いくつかの実施形態では、提供する医薬組成物（例えば、免疫原性組成物、例えばワクチン）は、タンパク質ワクチン、ＤＮＡワクチン、ＲＮＡワクチン、細胞ワクチン、複合体ワクチンなどとともに投与されてもよい。いくつかの実施形態では、提供する医薬組成物（例えば、免疫原性組成物、例えばワクチン）の１回分または複数回分の用量は、別のワクチンまたは他の療法とともに（例えば、１回の来院で）投与されてもよい。

いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物（例えば、免疫原性組成物、例えば、ワクチン）は、マラリアに曝露されたか、または曝露されたと予想される対象に投与されてもよい。いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物（例えば、免疫原性組成物、例えば、ワクチン）は、マラリア感染の症状を有しない対象に投与されてもよい。

ＶＩＩ．治療方法
いくつかの実施形態では、本開示の技術は、特定の投薬レジメンに従って対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、投与レジメンは、単回投与を含み得る。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、初回投与後に１回以上の「ブースター」投与を含み得る。いくつかの実施形態では、初期用量とブースト用量は同じ量であるが、いくつかの実施形態では異なる。いくつかの実施形態では、２回以上のブースター投与が行われる。いくつかの実施形態では、複数回の投与が一定の間隔で行われる。いくつかの実施形態では、投与間隔が長くなっていく。いくつかの実施形態では、１つ以上の後続の用量は、特定の臨床的（例えば、中和抗体レベルの低減）または状況的（例えば、新しい株の局所的発生）が生じるか、または検出される場合に投与される。

いくつかの実施形態では、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするＲＮＡ構築物を含む投与された医薬組成物（例えば、免疫原性組成物、例えば、ワクチン）は、約０．１μｇ～約３００μｇ、約０．５μｇ～約２００μｇ、または約１μｇ～約１００μｇ、例えば、約１μｇ、約３μｇ、約１０μｇ、約３０μｇ、約５０μｇ、または約１００μｇのＲＮＡ用量で投与される。いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡ構築物は、ｍｏｄＲＮＡまたはｕＲＮＡ構築物よりも低用量（例えば、２、４、５、１０倍以上）で投与される。

いくつかの実施形態では、第１のブースター用量は、初回用量の約６ヶ月以内、好ましくは、約５、４、３、２、または１ヶ月以内に投与される。いくつかの実施形態では、第１のブースター用量は、第１の用量の約１、２、３、または４週間後に開始し、第１の用量の約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２週間（例えば、第１の用量の約１～約１２週間後、または第１の用量の約２～３週間後、及び約５～６週間後、または第１の用量の約３週間後、または約４週間後）で終了する期間で投与される。

いくつかの実施形態では、複数のブースター用量（例えば、２、３、または４）用量は、第１の用量の６ヶ月以内、または第１の用量の１２ヶ月以内に投与される。

いくつかの実施形態では、第１の用量及び第２の用量は、約６、約７、約８、約９、または約１０週間の間隔を空けて投与される。言い換えれば、いくつかの実施形態では、第２の用量は、第１の用量の約６、約７週間、約８、約９、または約１０週間後に投与される。

いくつかの実施形態では、第３の用量は、第２の用量の約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、または約２０週間後に投与される。

いくつかの実施形態では、第２の用量は、第１の用量の約８週間後に投与され、第３の用量は、第２の用量の約１８週間後に投与される。

いくつかの実施形態では、有効なワクチン接種（例えば、６０％超、いくつかの実施形態では、約７０％超、約７５％超、約８０％超、約８５％超、約９０％超以上）の感染リスク、または重篤な疾患リスクの低減を達成するためには、３回以下の用量が必要である。いくつかの実施形態では、２回以下の投与が必要である。いくつかの実施形態では、１回の投与で十分である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ用量は、約６０μｇ以下、５０μｇ以下、４０μｇ以下、３０μｇ以下、２０μｇ以下、１０μｇ以下、５μｇ以下、２．５μｇ以下、または１μｇ以下である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ用量は、約０．２５μｇ、少なくとも０．５μｇ、少なくとも１μｇ、少なくとも２μｇ、少なくとも３μｇ、少なくとも４μｇ、少なくとも５μｇ、少なくとも１０μｇ、少なくとも２０μｇ、少なくとも３０μｇ、または少なくとも４０μｇである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ用量は、１用量当たり約０．２５μｇ～６０μｇ、０．５μｇ～５５μｇ、１μｇ～５０μｇ、５μｇ～４０μｇ、または１０μｇ～３０μｇであってもよい。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ用量は、約３０μｇである。いくつかの実施形態では、２回以上そのような用量が投与される。例えば、２回目の投与は、１回目の投与から約２１日後に行われる。いくつかの実施形態では、初回投与から約１ヶ月後に、第１回目のブースター投与が行われる。そのようないくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加のブースターが１ヶ月間隔（複数可）で投与される。いくつかの実施形態では、２回または３回のブースターの後、より長い間隔が導入され、少なくとも６、９、１２、１８、２４ヶ月、またはそれ以上の期間、さらなるブースターは投与されない。いくつかの実施形態では、約１８ヶ月後に追加のブースターが１回投与される。いくつかの実施形態では、例えば臨床的または環境的状況に重大な変化が見られない限り、追加のブースターは必要ない。

いくつかの実施形態では、１つ以上の転帰は、本明細書に提供される医薬組成物の１つ以上の用量の投与後に評価されてもよい。例示的な転帰としては、注射部位における局所反応（例えば、疼痛、紅斑／赤み、硬結／腫れなど）、注射部位における非自発的な報告による局所反応の頻度（例えば、疼痛、紅斑／赤み、硬結／腫れなど）、全身反応（例えば、嘔吐、下痢、頭痛、疲労、筋／関節痛、発熱など）、非自発的な報告による全身反応の頻度（例えば、嘔吐、下痢、頭痛、疲労、筋／関節痛、発熱など）、有害事象、受診を要した有害事象、重篤な有害事象、少なくとも１つの有害事象を有する対象の頻度、少なくとも１つの受診を要した有害事象を有する対象の頻度、少なくとも１つの重篤な有害事象を有する対象の頻度、血液期寄生虫血症から保護された対象の数、血液期寄生虫血症から保護された対象の割合、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、血液期寄生虫血症は、ＰＣＲ、例えば、ｑＰＣＲによって評価することができる。

いくつかの実施形態では、評価時点での抗体レベルに関する統計は、本明細書に提供される医薬組成物の１つ以上の用量の投与後に得ることができる。時点は、第１の用量の時点、第２の用量の時点、第３の用量の時点、既知もしくは疑いのあるマラリア曝露後、または既知または疑いのあるマラリア感染後を含み得る。

ＶＩＩＩ．製造方法
個々のポリリボヌクレオチドは、当該技術分野で既知の方法によって製造することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドは、例えばＤＮＡ鋳型を使用して、インビトロ転写によって産生され得る。本明細書に記載のポリリボヌクレオチドを生成するためのインビトロ転写のための鋳型として使用されるプラスミドＤＮＡもまた、本開示の範囲内である。

ＤＮＡ鋳型は、リボヌクレオチドトリホスフェート（例えば、ＡＴＰ、ＣＴＰ、ＧＴＰ、ＵＴＰ）を有する適切なＲＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼなどの組換えＲＮＡポリメラーゼ）の存在下で、インビトロＲＮＡ合成のために使用される。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチド（例えば、本明細書に記載されるもの）は、修飾リボヌクレオチド三リン酸の存在下で合成することができる。単なる例示にすぎないが、いくつかの実施形態では、プソイドウリジン（ψ）、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）、または５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）を使用してウリジン三リン酸（ＵＴＰ）を置き換えることができる。いくつかの実施形態では、プソイドウリジン（ψ）を使用してウリジン三リン酸（ＵＴＰ）を置き換えることができる。いくつかの実施形態では、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）を使用して、ウリジン三リン酸（ＵＴＰ）を置き換えることができる。いくつかの実施形態では、５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ）を使用して、ウリジン三リン酸（ＵＴＰ）を置き換えることができる。

当業者に明らかなように、インビトロ転写中に、（例えば、本明細書に記載及び／または利用されるように）ＲＮＡポリメラーゼは、典型的には、一本鎖ＤＮＡ鋳型の少なくとも部分を３’→５’方向に横断して、５’→３’方向に一本鎖相補ＲＮＡを産生する。

ポリリボヌクレオチドがポリＡ尾部を含むいくつかの実施形態では、当業者は、そのようなポリＡ尾部が、例えば、適切にテールされたＰＣＲプライマーを使用することによってＤＮＡ鋳型内にコードされ得ること、またはそれがインビトロ転写後、例えば、酵素処理（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉポリ（Ａ）ポリメラーゼなどのポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用すること）によってポリリボヌクレオチドに添加され得ることを理解するであろう。好適なポリＡテールは、本明細書で上述されている。例えば、いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）尾部は、配列番号４２８によるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリＡテールは、リンカーによって中断された複数のＡ残基を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号４３０によるヌクレオチド配列を含む。

いくつかの実施形態では、当業者は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）に５’キャップを付加することで、ＲＮＡの認識及びリボソームへの付着を容易にして、翻訳を開始し、翻訳効率を増強することができることを理解するであろう。当業者は、５’キャップはまた、５’エキソヌクレアーゼ媒介分解からＲＮＡ産物を保護し、したがって半減期を増加させることができることも理解するであろう。キャッピングのための方法は、当該技術分野で既知であり、当業者は、いくつかの実施形態では、キャッピングが、キャッピングシステム（例えば、ワクシニアウイルスのキャッピング酵素などの酵素ベースのキャッピングシステム）の存在下でインビトロ転写の後に実施され得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、キャップは、転写中にキャップがポリリボヌクレオチドに組み込まれる（共転写キャッピングとしても知られる）ように、複数のリボヌクレオチド三リン酸塩とともに、インビトロ転写中に導入され得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡを効果的にキャッピングするために、反応の過程で複数回の添加を行うＧＴＰ添加バッチ法を使用して、低濃度のＧＴＰを維持することができる。好適な５’キャップは、本明細書で上述されている。例えば、いくつかの実施形態では、５’キャップは、ｍ７（３’ＯＭｅＧ）（５’）ｐｐｐ（５’）（２’ＯＭｅＡ）ｐＧを含む。

ＲＮＡ転写の後、ＤＮＡ鋳型を消化する。いくつかの実施形態では、消化は、適切な条件下でデオキシリボヌクレアーゼＩを使用することにより達成することができる。

いくつかの実施形態では、インビトロ転写されたポリリボヌクレオチドは、緩衝溶液中で、例えば、ＨＥＰＥＳ、リン酸緩衝溶液、クエン酸緩衝溶液、酢酸緩衝溶液などの緩衝液中で、準備することができる。いくつかの実施形態では、そのような溶液は、例えば、約６．５～約７．５の範囲内の、いくつかの実施形態ではおよそ７．０のｐＨに緩衝することができる。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドの生成は、精製、混合、ろ過、及び／または充填のうちの１つ以上のステップをさらに含み得る。

いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドを精製して（例えば、インビトロ転写反応後のいくつかの実施形態では）、例えば、タンパク質、ＤＮＡ断片、及び／またはヌクレオチドのような、産生の過程で利用または形成される構成要素を除去することができる。当該技術分野で既知の様々な核酸精製を、本開示に従って使用することができる。特定の精製ステップは、例えば、沈降、カラムクロマトグラフィー（例えば、アニオン性、カチオン性、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を含むが、これらに限定されない）、固体基質ベースの精製（例えば、磁気ビーズベースの精製）のうちの１つ以上であってもよく、またはそれらを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドを、磁性ビーズによる精製（いくつかの実施形態では、磁性ビーズによるクロマトグラフィーであり得るか、またはそれを含み得る）を使用して精製することができる。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドを、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）及び／または透析ろ過を使用して精製することができる。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドを、ＨＩＣとそれに続く透析ろ過を使用して精製することができる。

いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡは、インビトロ転写中に副産物として得ることができる。いくつかのそのような実施形態では、ｄｓＲＮＡ夾雑物を除去するために第２の精製ステップを行うことができる。例えば、いくつかの実施形態では、セルロース材料（例えば、微結晶セルロース）を使用して、例えば、いくつかの実施形態では、クロマトグラフィーフォーマットで、ｄｓＲＮＡ夾雑物を除去し得る。いくつかの実施形態では、セルロース材料（例えば、微結晶セルロース）は、潜在的なＲＮアーゼ夾雑物を不活性化するために、例えばいくつかの実施形態ではオートクレーブによって前処理することができ、その後に塩基性水溶液（例えばＮａＯＨ）とともにインキュベートすることができる。いくつかの実施形態では、セルロース材料は、ＷＯ２０１７／１８２５２４（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の方法に従ってポリリボヌクレオチドを精製するために使用することができる。

いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドのバッチを、ろ過及び／または濃縮の１つ以上のステップによってさらに処理することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチド（複数可）は、例えば、ｄｓＲＮＡ夾雑物を除去した後、例えば、ポリリボヌクレオチドの濃度を所望のＲＮＡ濃度に調節するため、及び／または緩衝液を原薬緩衝液に交換するために、さらにダイアフィルトレーションを受け得る（例えば、いくつかの実施形態では、接線フローろ過によって）。

いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドを、適切な容器に充填する前に、０．２μｍろ過により処理することができる。

いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチド及びその組成物を、本明細書に記載のプロセスに従って、さもなければ当該技術分野で既知であるように製造することができる。

いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチド及びその組成物を、大量生産することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドのバッチを、１ｇ超、２ｇ超、３ｇ超、４ｇ超、５ｇ超、６ｇ超、７ｇ超、８ｇ超、９ｇ超、１０ｇ超、１５ｇ超、２０ｇ超、またはそれより大きい規模で製造することができる。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡ品質管理は、ポリリボヌクレオチド及び／またはそれを含む組成物の製造プロセス中のいかなる時点においても実行及び／またはモニタリングすることができる。例えば、いくつかの実施形態では、ＲＮＡ同一性（例えば、配列、長さ、及び／またはＲＮＡ性質）、ＲＮＡ完全性、ＲＮＡ濃度、残留ＤＮＡ鋳型、及び残留ｄｓＲＮＡのうちの１つ以上を含むＲＮＡ品質管理パラメータは、ポリリボヌクレオチド製造プロセスの各ステップまたは特定のステップの後、例えば、インビトロ転写後、及び／または各精製ステップの後に評価及び／またはモニタリングされ得る。

いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチド（例えば、インビトロ転写によって産生される）及び／またはポリリボヌクレオチドを含む組成物の安定性は、様々な試験保管条件下、例えば、室温対冷蔵庫またはある期間（例えば、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１２ヶ月、またはそれ以上）にわたるゼロ未満の温度で評価することができる。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチド（例えば、本明細書に記載されるもの）及び／またはその組成物は、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１１ヶ月、または少なくとも１２ヶ月以上を含む、少なくとも１ヶ月以上の冷蔵庫温度（例えば、約４℃～約１０℃）で安定して保管されてもよい。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチド（例えば、本明細書に記載されるもの）及び／またはその組成物は、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１１ヶ月、または少なくとも１２ヶ月以上を含む、少なくとも１ヶ月以上、ゼロ未満の温度（例えば、－２０℃以下）で安定して保管されてもよい。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチド（例えば、本明細書に記載されるもの）及び／またはそれらの組成物は、室温（例えば、約２５℃）で少なくとも１ヶ月以上安定して保管され得る。

いくつかの実施形態では、１つ以上の評価は、ポリリボヌクレオチドの製造、または他の調製もしくは使用中に（例えば、放出試験として）利用され得る。

いくつかの実施形態では、１つ以上の品質管理パラメータを評価して、本明細書に記載のポリリボヌクレオチドが（例えば、後続の製剤及び／または分配のための放出についての）許容基準を満たすか、または超えるかを決定し得る。いくつかの実施形態では、そのような品質管理パラメータは、ＲＮＡ完全性、ＲＮＡ濃度、残留ＤＮＡ鋳型、及び／または残留ｄｓＲＮＡを含み得るが、これらに限定されない。ＲＮＡの品質を評価するための特定の方法が当該技術分野で既知である。例えば、当業者には明らかなとおり、いくつかの実施形態では、１つ以上の分析試験をＲＮＡ品質評価のために使用することができる。そのような特定の分析試験の例には、ゲル電気泳動、ＵＶ吸収、及び／またはＰＣＲアッセイが含まれ得るが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドのバッチを、本明細書に記載の１つ以上の特徴について評価し、次の行動ステップ（複数可）を決定してもよい。例えば、ＲＮＡ品質評価の結果、ポリリボヌクレオチドのバッチが適切な許容基準を満たすまたは超えることが示された場合、そのようなポリリボヌクレオチドのバッチを、製造及び／または製剤及び／または流通の１つ以上のさらなるステップのために指定することができる。そうでなければ、ポリリボヌクレオチドのそのようなバッチが許容基準を満たさないか、または超えない場合、代替のアクション（例えば、バッチを破棄する）をとることができる。

いくつかの実施形態では、評価結果の要件を満たす１回分のポリリボヌクレオチドは、製造及び／または製剤化及び／または販売の１つ以上のさらなるステップのために利用され得る。

ＩＸ．ＤＮＡ構築物
数ある中でも特に、本開示は、例えば本明細書に記載の１つ以上の抗体剤またはその構成要素をコードし得る、ＤＮＡ構築物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示によって提供される及び／または本開示に従って利用されるＤＮＡ構築物は、ベクター中に含まれている。

ベクターの例としては、プラスミドベクター、コスミドベクター、ラムダファージなどのファージベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクターなどのウイルスベクター、またはバクテリア人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、Ｐ１人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体ベクターが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ベクターは、発現ベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、クローニングベクターである。概して、ベクターは、目的の核酸要素（例えば、ペイロードであるか、ペイロードをコードするか、または特定の機能性を付与する構築物など）を受容することができるか、またはそうでなければ目的の核酸要素に連結することができる核酸構築物である。

プラスミドまたはウイルスまたは他のベクターであり得る発現ベクターは、典型的には、１つ以上の制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、転写終結因子など）と機能的に連結された、目的の発現可能な配列（例えば、コード配列）を含む。通常、そのような制御要素は、目的の系での発現のために選択される。いくつかの実施形態では、系は、エクスビボ（例えば、インビトロ転写系）であり、いくつかの実施形態では、系は、インビボ（例えば、細菌、酵母、植物、昆虫、魚、脊椎動物、哺乳動物細胞または組織など）である。

クローニングベクターは、一般に、修飾、操作、及び／または複製（例えば、インビボでの複製、例えば、細菌または酵母などの単純な系での複製、またはインビトロでの複製、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応または他の増幅プロセスなどの増幅による複製）に使用される。いくつかの実施形態では、クローニングベクターは、発現シグナルを欠いてもよい。

多くの実施形態では、ベクターは、プライマー結合部位（複数可）及び／または複製起点（複数可）などの複製要素を含んでもよい。多くの実施形態では、ベクターは、制限酵素認識部位及び／またはガイドＲＮＡ結合部位などの挿入部位または修飾部位を含んでもよい。

いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクター（例えば、ＡＡＶベクター）である。いくつかの実施形態では、ベクターは、非ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、プラスミドである。

当業者は、本明細書に記載されるような組換えポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）の産生に有用な様々な技術を認識している。例えば、制限消化、逆転写、増幅（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応による）、ギブソンアセンブリなどは、十分に確立された有用なツール及び技術である。代替的または追加的に、特定の核酸を、化学合成及び／または酵素合成によって調製または組み立てることができる。いくつかの実施形態では、既知の方法の組み合わせが、組換えポリヌクレオチドを調製するために利用される。

いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチド（複数可）は、転写及び／または翻訳に適したＤＮＡ構築物（例えば、ベクター）に含まれる。

いくつかの実施形態では、発現ベクターは、発現を制御する１つまたは複数の配列（例えば、プロモーター、開始シグナル、停止シグナル、ポリアデニル化シグナル、アクチベータ、リプレッサーなど）に機能的に連結された、本開示のタンパク質及び／またはポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、所望の発現レベルを達成するように、発現を制御する単数または複数の配列が選択される。いくつかの実施形態では、発現を制御する２つ以上の配列（例えば、プロモーター）が利用される。いくつかの実施形態では、発現を制御する２つ以上の配列（例えば、プロモーター）を利用して、複数のタンパク質及び／またはポリペプチドをコードする複数のポリヌクレオチドの所望の発現レベルを達成する。いくつかの実施形態では、複数の組換えタンパク質及び／またはポリペプチドは、同じベクター（例えば、バイシストロン性ベクター、トリシストロン性ベクター、マルチシストロン性）から発現される。いくつかの実施形態では、複数のポリペプチドが発現されるが、これらの各々は、別個のベクターから発現されるものである。

いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドを含む発現ベクターは、宿主細胞においてＲＮＡ及び／またはタンパク質及び／またはポリペプチドを産生させるために使用される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、本開示のポリヌクレオチド、及び当該ポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質及び／またはポリペプチドの産生に好適なインビトロ（例えば、細胞株）、例えば、細胞または細胞株（例えば、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ細胞）、チャイニーズハムスター卵巣細胞など）であり得る。

いくつかの実施形態では、発現ベクターは、ＲＮＡ発現ベクターである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ発現ベクターは、無細胞酵素ミックス中でＲＮＡを産生するために使用されるポリヌクレオチド鋳型を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド鋳型を含むＲＮＡ発現ベクターは、試験管内転写前に酵素的に線状化される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド鋳型は、直鎖ポリヌクレオチド鋳型としてＰＣＲにより生成される。いくつかの実施形態では、線状化ポリヌクレオチドは、ＲＮＡ合成、ＲＮＡキャッピング、及び／または精製に好適な酵素と混合される。いくつかの実施形態では、得られたＲＮＡは、そのＲＮＡによってコードされるタンパク質を産生するのに好適である。

宿主細胞に発現ベクターを導入する方法は、当該技術分野で様々なものが既知である。いくつかの実施形態では、ベクターをトランスフェクションにより宿主細胞に導入することができる。いくつかの実施形態では、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、リポフェクション、またはポリエチレンイミン媒介トランスフェクションを用いてトランスフェクションを達成する。いくつかの実施形態では、ベクターを形質導入により宿主細胞に導入することができる。

いくつかの実施形態では、ベクターを宿主細胞に導入した後、形質転換された宿主細胞を培養し、当該組換えポリヌクレオチドの発現を可能にする。いくつかの実施形態では、形質転換された宿主細胞は、少なくとも１２時間、１６時間、２０時間、２４時間、２８時間、３２時間、３６時間、４０時間、４４時間、４８時間、５２時間、５６時間、６０時間、６４時間、６８時間、７２時間、またはそれ以上の時間培養される。形質転換された宿主細胞は、選択された宿主細胞の要求に従って、増殖条件（例えば、温度、二酸化炭素濃度、成長培地）の下で培養される。当業者であれば、選択された宿主細胞のための培養条件が当該技術分野で周知であることを認識するであろう。

例示的な列挙される実施形態
実施形態１．ポリペプチドをコードするポリリボヌクレオチドであって、前記ポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む、前記ポリリボヌクレオチド。

実施形態２．前記１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分の各々が、配列番号１によるアミノ酸配列の２５以上の連続したアミノ酸を含む、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態３．前記ポリペプチドが、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の１つ以上の反復を含み、前記ポリペプチドが、ＮＰＮＡのアミノ酸配列を含まない、実施形態１または２に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態４．前記ポリペプチドが、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の５つ以上の反復を含む、実施形態１または２に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態５．ポリペプチドをコードするポリリボヌクレオチドであって、前記ポリペプチドが、
（ｉ）異種分泌シグナル、及び
（ｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分、を含む、前記ポリリボヌクレオチド。

実施形態６．ポリペプチドをコードするポリリボヌクレオチドであって、前記ポリペプチドが、
（ｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分、及び
（ｉｉ）異種膜貫通領域、を含む、前記ポリリボヌクレオチド。

実施形態７．前記ポリペプチドが、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の１つ以上の反復を含む、実施形態１、２、５、及び６のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態８．前記ポリペプチドが、前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の２つ以上の反復を含む、実施形態１～３及び５～７のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態９．前記ポリペプチドが、前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の２つ～１２の反復を含む、実施形態１～３及び５～８のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１０．前記ポリペプチドが、前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の正確に３つの反復を含む、実施形態１～３及び５～９のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１１．前記ポリペプチドが、前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の４つ～１２の反復を含む、実施形態１～３及び５～９のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１２．前記ポリペプチドが、
（ｉ）前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の正確に８つの反復、または
（ｉｉ）前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の正確に９つの反復、を含む、実施形態１～９及び１１のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１３．前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の前記反復が、全て互いに連続している、実施形態３、４、及び７～１２のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１４．前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の前記反復が、全て互いに連続しているわけではない、実施形態３、４、及び７～１２のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１５．前記ポリペプチドが、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチドの３つの部分を含み、各部分が、前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの連続した反復を含み、前記部分の各々が、互いに連続していない、実施形態１４に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１６．前記ポリペプチドが、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチドの４つの部分を含み、各部分が、前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の２つの連続した反復を含む、実施形態１～９、１１、１２、及び１４のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１７．前記ポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分を含む、実施形態１～１５のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１８．前記ポリペプチドが、正確に１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域を含み、前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域が、配列番号１によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１７に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１９．前記ポリペプチドが、２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域を含む、実施形態１７に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２０．前記ポリペプチドが、前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の１つ以上の部分を含み、前記１つ以上の部分の各々が、
（ｉ）配列番号１１１によるアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号１１４によるアミノ酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号１１７によるアミノ酸配列、
（ｉｖ）配列番号１２０によるアミノ酸配列、もしくは
（ｖ）それらの組み合わせ、を含むか、またはそれからなる、実施形態１７または１９に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２１．前記ポリペプチドが、前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の１つの部分を含み、前記部分が、
（ｉ）配列番号１１１によるアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号１１４によるアミノ酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号１１７によるアミノ酸配列、
（ｉｖ）配列番号１２０によるアミノ酸配列、もしくは
（ｖ）それらの組み合わせ、を含むか、またはそれからなる、実施形態１７または１９に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２２．前記ポリペプチドが、前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の１つ以上の部分を含み、前記１つ以上の部分が、まとめて、
（ｉ）配列番号１１１によるアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号１１４によるアミノ酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号１１７によるアミノ酸配列、及び
（ｉｖ）配列番号１２０によるアミノ酸配列、を含むか、またはそれからなる、実施形態１７または１９に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２３．前記ポリペプチドが、前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリンを含む、実施形態１７～２２いずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２４．前記ポリペプチドが、前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列を含む、実施形態１７～２２いずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２５．前記ポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域またはその部分を含む、実施形態１～２４のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２６．前記ポリペプチドが、２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域またはその部分を含む、実施形態２５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２７．前記ポリペプチドが、正確に１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域を含む、実施形態２５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２８．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域が、配列番号１２６によるアミノ酸配列からなる、実施形態２５または２７に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２９．前記ポリペプチドが、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の１つ以上の部分を含む、実施形態２５または２７に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態３０．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の１つ以上の部分が、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、Ｑ９６、及びＰ９７のうちの１つ以上の欠失を含み、アミノ酸番号付けが、配列番号１に対応する、実施形態２５または２９に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態３１．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の１つ以上の部分が、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、及びＱ９６の欠失を含み、前記アミノ酸番号付けが、配列番号１に対応する、実施形態２５、２９、及び３０のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態３２．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の１つ以上の部分が、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、Ｑ９６、及びＰ９７の欠失を含み、前記アミノ酸番号付けが、配列番号１に対応する、実施形態２５及び２９～３１のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態３３．ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の各部分が、配列番号１２９によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態２５及び２９～３１のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態３４．ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の各部分が、配列番号１３２によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態２５、２９、３０、及び３２のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態３５．前記２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域が、配列番号１２６によるアミノ酸配列からなる、実施形態２６に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態３６．前記ポリペプチドが、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の２つ以上の部分を含む、実施形態３５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態３７．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の２つ以上の部分が、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、Ｑ９６、及びＰ９７のうちの１つ以上の欠失を含み、アミノ酸番号付けが、配列番号１に対応する、実施形態３６に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態３８．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の２つ以上の部分が、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、及びＱ９６の欠失を含み、前記アミノ酸番号付けが、配列番号１に対応する、実施形態３６または３７に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態３９．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の２つ以上の部分が、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、Ｑ９６、及びＰ９７の欠失を含み、前記アミノ酸番号付けが、配列番号１に対応する、実施形態３６～３８のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態４０．ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の各部分が、配列番号１２９によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態３６～３８のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態４１．ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の各部分が、配列番号１３２によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態３６、３７、及び３９のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態４２．前記ポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアントを含む、実施形態１～２４のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態４３．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアントが、１つ以上の置換変異を含む、実施形態４２に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態４４．前記１つ以上の置換変異が、Ｋ９３Ａ変異、Ｌ９４Ａ変異、またはその両方を含み、アミノ酸番号付けが、配列番号１に対応する、実施形態４３に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態４５．各ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアントが、配列番号４２６のアミノ酸配列（ＡＡＫＱ）を含む、実施形態４３または４４に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態４６．前記ポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分を含む、実施形態１～４５のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態４７．前記ポリペプチドが、２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分を含む、実施形態４６に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態４８．各ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域が、配列番号１３５によるアミノ酸配列からなる、実施形態４６または４７に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態４９．前記ポリペプチドが、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその任意の部分を含まない、実施形態１～４８のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態５０．前記ポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分を含む、実施形態１～４９のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態５１．前記ポリペプチドが、２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分を含む、実施形態５０に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態５２．各ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域が、配列番号１３８によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態５０または５１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態５３．前記ポリペプチドが、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその任意の部分を含まない、実施形態１～４９のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態５４．前記ポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分を含む、実施形態１、２、及び４～５３のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態５５．前記１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分が、アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＡまたはＮＰＮＡＮＰを含む、実施形態５４に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態５６．前記ポリペプチドが、少なくとも２つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域部分を含み、各ＣＳＰの主要な反復領域部分が、配列ＮＡＮＰの少なくとも４つかつ最大で７つの反復を含む、実施形態５４または５５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態５７．前記ポリペプチドが、２つまたは３つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域部分を含み、各ＣＳＰの主要な反復領域部分が、前記配列ＮＡＮＰの６つの反復を含む、実施形態５４～５６のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態５８．前記ポリペプチドが、正確に１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分を含み、前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分が、アミノ酸配列ＮＡＮＰの合計少なくとも２つかつ最大で３５の反復を含む、実施形態５４に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態５９．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分が、前記アミノ酸配列ＮＡＮＰの反復の２つの連続したストレッチを含み、前記アミノ酸配列ＮＡＮＰの反復の前記２つの連続したストレッチが、ＮＶＤＰのアミノ酸配列に隣接する、実施形態５８に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態６０．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域が、Ｎ末端からＣ末端の順で、前記アミノ酸配列ＮＡＮＰの１７の反復、ＮＶＤＰのアミノ酸配列、及び前記アミノ酸配列ＮＡＮＰの１８の反復を含む、実施形態５９に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態６１．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域の部分が、前記アミノ酸配列ＮＡＮＰの最大で１８の連続した反復からなる、実施形態５８に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態６２．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域の部分が、前記アミノ酸配列ＮＡＮＰの２つの連続した反復からなる、実施形態５８に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態６３．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域が、配列番号１５６によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態５８に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態６４．前記ポリペプチド領域が、Ｎ末端からＣ末端の順で、
（ｉ）前記アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＶＤＰの３つの連続した反復、
（ｉｉ）前記アミノ酸配列ＮＡＮＰの６つの連続した反復、
（ｉｉｉ）前記アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＶＤＰの３つの連続した反復、
（ｉｖ）前記アミノ酸配列ＮＡＮＰの６つの連続した反復、及び
（ｖ）前記アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＶＤＰの３つの連続した反復、を含む、実施形態１、２、及び４～５７のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態６５．さらに、
（ｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域もしくはその部分、
（ｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域もしくはその部分、
（ｉｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、もしくはそのバリアント、
（ｉｖ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域もしくはその部分、または
（ｖ）それらの組み合わせ、をさらに含む、実施形態６４に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態６６．前記ポリペプチド領域が、Ｎ末端からＣ末端の順で、
（ｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、
（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＲ１領域またはその部分、
（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域またはその部分、
（ｉｖ）前記アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＶＤＰの３つの連続した反復、
（ｖ）前記アミノ酸配列ＮＡＮＰの６つの連続した反復、
（ｖｉ）前記アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＶＤＰの３つの連続した反復、
（ｖｉｉ）前記アミノ酸配列ＮＡＮＰの６つの連続した反復、
（ｖｉｉｉ）前記アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＶＤＰの３つの連続した反復、及び
（ｉｘ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分、を含む、実施形態６５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態６７．ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＧＰＩドメインをさらに含む、実施形態６６に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態６８．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分が、フコシル化部位に置換を含む、実施形態６６または６７に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態６９．前記ポリペプチド領域が、Ｎ末端からＣ末端の順で、３つの反復ドメインを含み、各反復ドメインが、
（ｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント、
（ｉｉ）前記アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＶＤＰの３つの連続した反復、
（ｉｉｉ）前記アミノ酸配列ＮＡＮＰの６つの連続した反復、を含む、実施形態１、２、４、７～９、１１～１２、１４～１５、及び２５～５７のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態７０．前記ポリペプチド領域が、Ｎ末端からＣ末端の順で、３つの反復ドメインを含み、各反復ドメインが、
（ｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＲ１領域またはその部分、
（ｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント、
（ｉｉｉ）前記アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＶＤＰの３つの連続した反復、
（ｉｖ）前記アミノ酸配列ＮＡＮＰの６つの連続した反復、を含む、実施形態１、２、４、７～９、１１～１２、１４～１５、及び２５～５７のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態７１．１つ以上のリンカー配列をさらに含む、実施形態６９または７０に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態７２．前記リンカーが、ｇｌｙ－ｓｅｒリンカーである、実施形態７１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態７３．前記ポリペプチドが、前記アミノ酸配列ＮＡＮＰの各６つの連続した反復後のリンカー配列を含む、実施形態７１または７２に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態７４．前記ポリペプチドが、（ｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその任意の部分、及び／または（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその任意の部分を含まない、実施形態６９～７３のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態７５．前記ポリペプチドが、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはアミノ酸配列ＮＰＮＡを含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域の部分を含まない、実施形態１、２、及び４～５３のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態７６．前記１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分が、存在する場合、以下のＮ末端からＣ末端の順で、
（ｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、
（ｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、
（ｉｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント、
（ｉｖ）前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の１つ以上の反復、
（ｖ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分、及び
（ｖｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分、である、実施形態１～７５のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態７７．前記１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分が、存在する場合、以下のＮ末端からＣ末端の順で、
（ｉ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、
（ｉｉ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、
（ｉｉｉ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント、
（ｉｖ）前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の１つ以上の反復、
（ｖ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分、及び
（ｖｉ）１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分、である、実施形態１～７６のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態７８．前記ポリペプチドが、１つ以上のヘルパー抗原を含む、実施形態１～７７のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態７９．前記１つ以上のヘルパー抗原が、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ抗原を含む、実施形態７８に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態８０．前記１つ以上のヘルパー抗原が、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸ヒドロリラーゼ抗原、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期抗原１（ａ）、（ＬＳＡ－１（ａ））、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期抗原１（ｂ）（ＬＳＡ－１（ｂ））、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍトロンボスポンジン関連匿名タンパク質（ＴＲＡＰ）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期関連タンパク質１（ＬＳＡＰ１）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期関連タンパク質２（ＬＳＡＰ２）、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＵＩＳ３、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＵＩＳ４、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＥＴＲＡＭＰ１０．３、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝特異的タンパク質１（ＬＩＳＰ－１）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝特異的タンパク質２（ＬＩＳＰ－２）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期抗原３（ＬＳＡ－３）、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＥＸＰ１、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＥ１４０、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ網状赤血球結合タンパク質ホモログ５（Ｒｈ５）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍグルタミン酸リッチタンパク質（ＧＡＲＰ）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫感染赤血球表面タンパク質２（ＰＩＥＳＰ２）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍシステインリッチ防御抗原（ＣｙＲＰＡ）、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＲｉｐｒ、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＰ１１３、またはそれらの組み合わせである、実施形態７８または７９に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態８１．前記１つ以上のヘルパー抗原が、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸ヒドロリラーゼ抗原を含むか、またはそれからなる、実施形態７８～８０のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態８２．前記Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸ヒドロリラーゼ抗原が、配列番号２４０によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態８１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態８３．前記１つ以上のヘルパー抗原が、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ肝病期抗原３を含むか、またはそれからなる、実施形態７８～８２のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態８４．前記Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ肝病期抗原３が、配列番号２４３によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態８３に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態８５．前記１つ以上のヘルパー抗原が、Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ抗原を含む、実施形態７８に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態８６．前記ヘルパー抗原が、ＡｎｏｐｈｅｌｅｓｇａｍｂｉａｅＴＲＩＯを含むか、またはそれからなる、実施形態７８または８５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態８７．前記ＡｎｏｐｈｅｌｅｓｇａｍｂｉａｅＴＲＩＯが、配列番号２４６によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態８６に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態８８．前記ポリペプチドが、分泌シグナルを含み、前記ヘルパー抗原が、前記分泌シグナルの直後である、実施形態７８～８７のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態８９．前記ポリペプチドが、前記ポリペプチドの前記Ｃ末端にヘルパー抗原を含む、実施形態７８～８８のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態９０．前記ポリペプチドが、多量体化領域を含む、実施形態１～８９のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態９１．前記多量体化領域が、三量体化領域を含むか、またはそれからなる、実施形態９０に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態９２．前記三量体化領域が、フィブリチン領域を含むか、またはそれからなる、実施形態９１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態９３．前記フィブリチン領域が、配列番号２５５によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態９２に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態９４．前記ポリペプチドが、前記ポリペプチドの前記Ｎ末端に多量体化領域を含む、実施形態９０～９３のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態９５．前記ポリペプチドが、分泌シグナルを含む、実施形態１～４、６～８７、及び８９～９４のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態９６．前記分泌シグナルが、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ分泌シグナルを含むか、またはそれからなる、実施形態９５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態９７．前記Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ分泌シグナルが、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ分泌シグナルを含むか、またはそれからなる、実施形態９６に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態９８．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ分泌シグナルが、配列番号１７４によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態９７に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態９９．前記分泌シグナルが、異種分泌シグナルを含むか、またはそれからなる、実施形態９５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１００．前記異種分泌シグナルが、非ヒト分泌シグナルを含むか、またはそれからなる、実施形態９９に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１０１．前記異種分泌シグナルが、ウイルス分泌シグナルを含むか、またはそれからなる、実施形態９９または１００に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１０２．前記ウイルス分泌シグナルが、ＨＳＶ分泌シグナルを含むか、またはそれからなる、実施形態１０１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１０３．前記ＨＳＶ分泌シグナルが、ＨＳＶ－１もしくはＨＳＶ－２分泌シグナル含むか、またはそれからなる、実施形態１０２に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１０４．前記ＨＳＶ分泌シグナルが、ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）分泌シグナルを含むか、またはそれからなる、実施形態１０２または１０３に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１０５．前記ＨＳＶｇＤ分泌シグナルが、配列番号１５９によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１０５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１０６．前記ＨＳＶｇＤ分泌シグナルが、配列番号１６５によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１０５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１０７．前記分泌シグナルが、Ｅｂｏｌａウイルス分泌シグナルを含むか、またはそれからなる、実施形態１０１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１０８．前記Ｅｂｏｌａウイルス分泌シグナルが、Ｅｂｏｌａウイルススパイク糖タンパク質（ＳＧＰ）分泌シグナルを含むか、またはそれからなる、実施形態１０７に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１０９．前記ＥｂｏｌａウイルスＳＧＰ分泌シグナルが、配列番号１７７によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１０８に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１１０．前記分泌シグナルが、前記ポリペプチドの前記Ｎ末端に位置する、実施形態９５～１０９のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１１１．前記ポリペプチドが、膜貫通領域を含む、実施形態１～５及び７～１１０のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１１２．前記膜貫通領域が、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ膜貫通領域を含むか、またはそれからなる、実施形態１１１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１１３．前記Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ膜貫通領域が、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー領域を含むか、またはそれからなる、実施形態１１２に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１１４．前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＧＰＩアンカー領域が、配列番号２３１によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１１３に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１１５．前記膜貫通領域が、異種膜貫通領域を含むか、またはそれからなる、実施形態１１１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１１６．前記異種膜貫通領域が、ヘマグルチニン膜貫通領域を含まない、実施形態１１５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１１７．前記異種膜貫通領域が、非ヒト異種膜貫通領域を含むか、またはそれからなる、実施形態１１５または１１６に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１１８．前記異種膜貫通領域が、ウイルス膜貫通領域を含むか、またはそれからなる、実施形態１１５～１１７のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１１９．前記異種膜貫通領域が、ＨＳＶ膜貫通領域を含むか、またはそれからなる、実施形態１１５～１１８のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１２０．前記ＨＳＶ膜貫通領域が、ＨＳＶ－１もしくはＨＳＶ－２膜貫通領域を含むか、またはそれらからなる、実施形態１１９に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１２１．前記ＨＳＶ膜貫通領域が、ＨＳＶｇＤ膜貫通領域を含むか、またはそれからなる、実施形態１１９または１２０に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１２２．前記ＨＳＶｇＤ膜貫通領域が、配列番号２３４によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１２１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１２３．前記異種膜貫通領域が、ヒト膜貫通領域を含むか、またはそれからなる、実施形態１１５または１１６に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１２４．前記ヒト膜貫通領域が、ヒト崩壊促進因子グリコシルホスファチジルイノシトール（ｈＤＡＦ－ＧＰＩ）アンカー領域を含むか、またはそれからなる、実施形態１２３に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１２５．前記ｈＤＡＦ－ＧＰＩアンカー領域が、配列番号２３７によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１２４に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１２６．前記ポリペプチドが、分泌シグナルを含まない、実施形態１～４、６～８７、８９～９４、及び１１１～１２５のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１２７．前記ポリペプチドが、膜貫通領域を含まない、実施形態１～５及び７～１１０のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１２８．前記ポリペプチドが、１つ以上のリンカーを含む、実施形態１～１２７のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１２９．前記１つ以上のリンカーが、配列番号２５８によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１２８に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１３０．前記１つ以上のリンカーが、配列番号２７９によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１２８に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１３１．前記１つ以上のリンカーが、配列番号２７０によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１２８に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１３２．前記１つ以上のリンカーが、配列番号２８２によるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１２８に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１３３．前記ポリペプチドが、Ｃ末端領域またはその部分と膜貫通領域との間にリンカーを含む、実施形態１１１～１３２のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１３４．前記ポリペプチドが、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の後にリンカーを含む、実施形態３～１３３のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１３５．前記ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態２５～４５のいずれか１つに記載の１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント、
（ｉｉ）実施形態４、７～１４、及び１６のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の１つ以上の反復、
（ｉｉｉ）実施形態１７～２２のいずれか１つに記載の１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分、
（ｉｖ）実施形態９５～１１０のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｖ）実施形態１１１～１２５のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、及び
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、を含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１３６．前記ポリペプチドが、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域を含まない、実施形態１３５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１３７．前記ポリペプチドが、実施形態４６～４８に記載の１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分を含む、実施形態１３５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１３８．前記ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態２５～４５のいずれか１つに記載の１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント、
（ｉｉ）実施形態４、７～９、１１～１２、及び１４～１５のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の１つ以上の反復、
（ｉｉｉ）実施形態１７～２２のいずれか１つに記載の１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分、
（ｉｖ）実施形態９５～１１０のいずれか１つに記載の分泌シグナル、を含む、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１３９．前記ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態２５～４５のいずれか１つに記載の３つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント、
（ｉｉ）実施形態４、７～９、１１～１２、及び１４～１５のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つ以上の反復、
（ｉｉｉ）実施形態５６または５７に記載の２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域部分、及び
（ｉｖ）実施形態９５～１１０のいずれか１つに記載の分泌シグナル、を含み、前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分、を含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１４０．前記ポリペプチドが、配列番号４３３の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１３８または１３９に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１４１．前記ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態２５～４５のいずれか１つに記載の１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント、
（ｉｉ）実施形態４、７～９、１１～１２、及び１４～１５に記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の１つ以上の反復、
（ｉｉｉ）実施形態１７～２２のいずれか１つに記載の１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分、
（ｉｖ）実施形態９５～１１０のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｖ）実施形態１１１～１１４のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含む、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１４２．前記ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態２５～４５のいずれか１つに記載の３つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント、
（ｉｉ）実施形態４、７～９、１１～１２、及び１４～１５のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つ以上の反復、
（ｉｉｉ）実施形態５６または５７に記載の２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域部分、
（ｉｖ）実施形態９５～１１０のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｖ）実施形態１１１～１１４のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分、を含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１４３．前記ポリペプチドが、配列番号４３２または４３４の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１４１または１４２に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１４４．前記ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態２５～４５のいずれか１つに記載の３つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント、
（ｉｉ）実施形態４、７～９、１１～１２、及び１４～１５のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つ以上の反復、
（ｉｉｉ）実施形態５６または５７に記載の２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域部分、及び
（ｉｖ）実施形態９５～１１０のいずれか１つに記載の分泌シグナル、を含み、前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分、を含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１４５．前記ポリペプチドが、配列番号４３５または４３６の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１４４に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１４６．前記ポリペプチドが、実施形態７８～８９に記載の１つ以上のヘルパー抗原を含む、実施形態１３５～１３７のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１４７．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｉｉ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｉｖ）実施形態４、７、８、９、１１、１２、及び１３のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の９つの反復、
（ｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、ならびに
（ｖｉ）５つの抗原反復領域であって、各抗原反復領域が、
（Ａ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、及び
（Ｂ）実施形態７８～８２のいずれか１つに記載のヘルパー抗原、を含む、前記５つの抗原反復領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び
（ｃ）膜貫通領域、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１４８．前記ポリペプチドが、配列番号３６によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１４７に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１４９．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態７８～８０、８３、及び８４のいずれか１つに記載のヘルパー抗原、
（ｉｉｉ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、
（ｉｖ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｖ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｖｉ）実施形態４、７、８、９、１１、１２、及び１３のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の９つの反復、
（ｖｉｉ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖｉｉｉ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｉｘ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、及び
（ｘ）実施形態１１１、１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、及び
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１５０．前記ポリペプチドが、配列番号３９によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１４９に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１５１．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態２９～３１及び３３のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の部分、
（ｉｉｉ）実施形態４及び７～１０のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの反復、
（ｉｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｖｉ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、及び
（ｖｉｉ）実施形態１１１及び１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び
（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１５２．前記ポリペプチドが、配列番号５７によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１５１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１５３．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態２９～３１及び３３のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の部分、
（ｉｉｉ）実施形態４、７、８、９、１１、１２、及び１３のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の９つの反復、
（ｉｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｖｉ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、及び
（ｖｉｉ）実施形態１１１及び１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び
（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１５４．前記ポリペプチドが、配列番号６０によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１５３に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１５５．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｉｉｉ）実施形態４及び７～１０のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの反復、
（ｉｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｖｉ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、及び
（ｖｉｉ）実施形態１１１及び１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び
（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１５６．前記ポリペプチドが、配列番号６３によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１５５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１５７．前記ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｉｉｉ）実施形態４、７、８、９、１１、１２、及び１３のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の９つの反復、
（ｉｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｖｉ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、及び
（ｖｉｉ）実施形態１１１及び１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び
（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１５８．前記ポリペプチドが、配列番号６６によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１５７に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１５９．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態３５～３８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアント、
（ｉｉｉ）実施形態４及び７～１０のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの反復、
（ｉｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｖｉ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、及び
（ｖｉｉ）実施形態１１１及び１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び
（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１６０．前記ポリペプチドが、配列番号６９によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１５９に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１６１．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナルと、
（ｉｉ）実施形態４２～４５のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアント、
（ｉｉｉ）実施形態４、７、８、９、１１、１２、及び１３のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の９つの反復、
（ｉｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｖｉ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、及び
（ｖｉｉ）実施形態１１１及び１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び
（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１６２．前記ポリペプチドが、配列番号７２によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１６１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１６３．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態２９～３２及び３４のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の部分、
（ｉｉｉ）実施形態４及び７～１０のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの反復、
（ｉｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｖｉ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、及び
（ｖｉｉ）実施形態１１１及び１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び
（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１６４．前記ポリペプチドが、配列番号７５によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１６３に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１６５．前記ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態２９～３２及び３４のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の部分、
（ｉｉｉ）実施形態４、７、８、９、１１、１２、及び１３のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の９つの反復、
（ｉｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｖｉ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、及び
（ｖｉｉ）実施形態１１１及び１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、及び
（ｃ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１６６．前記ポリペプチドが、配列番号７８によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１６５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１６７．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｉｉ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｉｖ）実施形態４、７、８、９、１１、１２、及び１３のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の９つの反復、
（ｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖｉ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｖｉｉ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、及び
（ｖｉｉｉ）実施形態１１１及び１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び
（ｂ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１６８．前記ポリペプチドが、配列番号８１によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１６７に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１６９．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｉｉ）実施形態４２～４５のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアント、
（ｉｖ）実施形態４、７、８、９、１１、１２、及び１３のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の９つの反復、
（ｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖｉ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｖｉｉ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、及び
（ｖｉｉｉ）実施形態１１１及び１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び
（ｂ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１７０．前記ポリペプチドが、配列番号８４によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１６９に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１７１．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｉｉ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｉｖ）実施形態４、７、８、９、１１、１２、及び１３のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の９つの反復、
（ｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖｉ）実施形態１１１～１１４のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び
（ｂ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１７２．前記ポリペプチドが、配列番号９６によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１７１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１７３．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５～９８のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｉｉ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｉｖ）実施形態４、７、８、９、１１、１２、及び１３のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の９つの反復、
（ｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、ならびに
（ｖｉ）実施形態１１１～１１４のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び
（ｂ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１７４．前記ポリペプチドが、配列番号９９によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１７３に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１７５．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナルと、
（ｉｉ）２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ中和領域反復であって、各ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ中和領域反復が、
（ａ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｂ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｃ）実施形態７～９のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の２つの反復、及び
（ｄ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、を含むか、それらからなる、前記２つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ中和領域反復と、
（ｉｉｉ）実施形態５５、５８、及び６２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域の部分と、
（ｉｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域と、
（ｖ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列と、
（ｖｉ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカーと、
（ｖｉｉ）実施形態１１１及び１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域と、を含み、
前記ポリペプチドが、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分を含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１７６．前記ポリペプチドが、正確に４つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ中和領域反復を含む、実施形態１７５に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１７７．前記ポリペプチドが、配列番号８７によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１７５または１７６に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１７８．前記ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載の１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｉｉｉ）実施形態４及び７～１０のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの反復、
（ｉｖ）実施形態５５～６０及び６３のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域、
（ｖ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載の１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖｉ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｖｉｉ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、及び
（ｖｉｉｉ）実施形態１１１及び１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び
（ｂ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、のいずれも含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１７９．前記ポリペプチドが、配列番号３０によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１７８に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１８０．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５～９８のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態５０及び５２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域、
（ｉｉｉ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｖ）実施形態２９～３２及び３４のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域の部分、
（ｖ）実施形態４及び７～１０のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの反復、
（ｖｉ）実施形態５４～６０及び６３のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域、
（ｖｉｉ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、ならびに
（ｖｉｉｉ）実施形態２３に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン、を含み、
前記ポリペプチドが、膜貫通領域を含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１８１．前記ポリペプチドが、配列番号２７によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１８０に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１８２．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５～９８のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態５０及び５２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域、
（ｉｉｉ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｖ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｖ）実施形態４及び７～１０のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの反復、
（ｖｉ）実施形態５４～６０及び６３のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域、
（ｖｉｉ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、ならびに
（ｖｉｉｉ）実施形態２３に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン、を含み、
前記ポリペプチドが、膜貫通領域を含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１８３．前記ポリペプチドが、配列番号６によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１８２に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１８４．前記ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び１０７～１１０のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態５０及び５２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域、
（ｉｉｉ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｖ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｖ）実施形態４及び７～１０のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの反復、
（ｖｉ）実施形態５４～６０及び６３のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域、
（ｖｉｉ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、ならびに
（ｖｉｉｉ）実施形態２３に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン、を含み、
前記ポリペプチドが、膜貫通領域を含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１８５．前記ポリペプチドが、配列番号２４によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１８４に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１８６．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態５０及び５２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域、
（ｉｉｉ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｖ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｖ）実施形態４及び７～１０のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの反復、
（ｖｉ）実施形態５４～６０及び６３のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域、
（ｖｉｉ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、ならびに
（ｖ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、を含み、
前記ポリペプチドが、膜貫通領域を含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１８７．前記ポリペプチドが、配列番号９３によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１８６に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１８８．前記ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５～９８のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態５０及び５２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域、
（ｉｉｉ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｖ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｖ）実施形態４及び７～１０のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの反復、
（ｖｉ）実施形態５４～６０及び６３のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域、
（ｖｉｉ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、ならびに
（ｖｉｉｉ）実施形態１１１～１１４のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含む、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１８９．前記ポリペプチドが、配列番号３３によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１８８に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１９０．前記ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び９９～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態５０及び５２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域、
（ｉｉｉ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｖ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｖ）実施形態４及び７～１０のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの反復、
（ｖｉ）実施形態５４～６０及び６３のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域、
（ｖｉｉ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖｉｉｉ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｉｘ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、
（ｘ）実施形態９０～９４のいずれか１つに記載の多量体化領域、を含み、
前記ポリペプチドが、膜貫通領域を含まない、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１９１．前記ポリペプチドが、配列番号４２によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１９０に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１９２．前記ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５～９９のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態５０及び５２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域、
（ｉｉｉ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｖ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｖ）実施形態４及び７～１０のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの反復、
（ｖｉ）実施形態５４～６０及び６３のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域、
（ｖｉｉ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖｉｉｉ）実施形態２３に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン、
（ｉｘ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、及び
（ｘ）実施形態１１１、１１５、１１６、及び１２３～１２５のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含む、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１９３．前記ポリペプチドが、配列番号４８によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１９２に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１９４．前記ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び１００～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態５０及び５２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域、
（ｉｉｉ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｖ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｖ）実施形態４及び７～１０のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの反復、
（ｖｉ）実施形態５４～６０及び６３のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域、
（ｖｉｉ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖｉｉｉ）実施形態２４に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｉｘ）実施形態１２８～１３２のいずれか１つに記載のリンカー、
（ｘ）実施形態１１１及び１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含む、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１９５．前記ポリペプチドが、配列番号９０によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１９４に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１９６．ポリペプチドが、
（ｉ）実施形態９５及び１００～１０６のいずれか１つに記載の分泌シグナル、
（ｉｉ）実施形態５０及び５２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域、
（ｉｉｉ）実施形態４６または４８に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｖ）実施形態２５、２７、及び２８のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｖ）実施形態４及び７～１０のいずれか１つに記載のＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の３つの反復、
（ｖｉ）実施形態５４～６０及び６３のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域、
（ｖｉｉ）実施形態１７、１８、及び２０～２２のいずれか１つに記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖｉｉｉ）実施形態２３に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン、及び
（ｉｘ）実施形態１１１及び１１５～１２２のいずれか１つに記載の膜貫通領域、を含む、実施形態１に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１９７．前記ポリペプチドが、配列番号２１によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態１９６に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１９８．存在する場合、特徴（ｉ）～（ｘ）が、前記ポリペプチドにおいて、Ｃ末端からＮ末端までの数順である、実施形態１３５～１９７に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態１９９．Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍが、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、実施形態１～１９８のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２００．前記１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分が、１つ以上のＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分である、実施形態１～１９８のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２０１．Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍが、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７である、実施形態１９９または２００に記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２０２．前記ポリリボヌクレオチドが、単離されたポリリボヌクレオチドである、実施形態１～２０１のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２０３．前記ポリリボヌクレオチドが、操作されたポリリボヌクレオチドである、実施形態１～２０２のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２０４．前記ポリリボヌクレオチドが、コドン最適化ポリリボヌクレオチドである、実施形態１～２０３のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド。

実施形態２０５．５’から３’の順で、
（ｉ）修飾ヒトアルファ－グロビン５’－ＵＴＲを含むか、またはそれからなる５’ＵＴＲ、
（ｉｉ）実施形態１～２０４のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチド、
（ｉｉｉ）スプリット（ＡＥＳ）メッセンジャーＲＮＡのアミノ末端エンハンサーからの第１の配列及びミトコンドリアでコードされた１２ＳリボソームＲＮＡからの第２の配列を含むか、またはそれらからなる３’ＵＴＲ、及び
（ｉｖ）ポリＡ尾部配列、を含む、ＲＮＡ構築物。

実施形態２０６．前記５’ＵＴＲが、配列番号４１５によるリボ核酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態２０５に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２０７．前記３’ＵＴＲが、配列番号４１６によるリボ核酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態２０５または２０６に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２０８．前記ポリＡ尾部配列が、スプリットポリＡ尾部配列である、実施形態２０５～２０７のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２０９．前記スプリットポリＡ尾部配列が、配列番号４１７によるリボ核酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態２０８に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２１０．５’キャップをさらに含む、実施形態２０５～２０９のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２１１．前記ポリリボヌクレオチドの＋１、＋２、＋３、＋４、及び＋５位を含むキャップ近位の配列をさらに含む、実施形態２０５～２１０のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２１２．前記５’キャップが、ｍ７（３’ＯＭｅＧ）（５’）ｐｐｐ（５’）（２’ＯＭｅＡ_１）ｐＧ_２を含むＣａｐ１構造を含むか、またはそれからなり、Ａ_１が、前記ポリリボヌクレオチドの＋１位であり、Ｇ_２が、前記ポリリボヌクレオチドの＋２位である、実施形態２１０または２１１に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２１３．前記キャップ近位の配列が、Ｃａｐ１構造のＡ_１及びＧ_２、ならびに前記ポリリボヌクレオチドの＋３、＋４、及び＋５位にてそれぞれＡ_３Ａ_４Ｕ_５（配列番号４２４）を含む配列を含む、実施形態２１２に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２１４．前記ポリリボヌクレオチドが、全てのウリジンの代わりに修飾ウリジンを含む、実施形態２０５～２１３のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２１５．前記修飾ウリジンが、各々Ｎ１－メチル－プソイドウリジンである、実施形態２１４に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２１６．実施形態１～２０４のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチドを含む、組成物。

実施形態２１７．実施形態２０５～２１４のいずれか１つに記載の１つ以上のＲＮＡ構築物を含む、組成物。

実施形態２１８．前記組成物が、脂質ナノ粒子、ポリプレックス（ＰＬＸ）、脂質化ポリプレックス（ＬＰＬＸ）、またはリポソームをさらに含み、前記１つ以上のポリリボヌクレオチドもしくは前記１つ以上のＲＮＡ構築物が、前記脂質ナノ粒子、前記ポリプレックス（ＰＬＸ）、前記脂質化ポリプレックス（ＬＰＬＸ）、または前記リポソーム内に完全にもしくは部分的にカプセル化されている、実施形態２１６または２１７に記載の組成物。

実施形態２１９．前記組成物が、脂質ナノ粒子をさらに含み、前記１つ以上のポリリボヌクレオチドまたは前記１つ以上のＲＮＡ構築物が、前記脂質ナノ粒子内に完全にもしくは部分的にカプセル化されている、実施形態２１６～２１８のいずれか１つに記載の組成物。

実施形態２２０．前記脂質ナノ粒子が、肝細胞を標的とする、実施形態２１８または２１９に記載の組成物。

実施形態２２１．前記脂質ナノ粒子が、二次リンパ器官細胞を標的とする、実施形態２１８または２１９に記載の組成物。

実施形態２２２．前記脂質ナノ粒子が、カチオン性脂質ナノ粒子である、実施形態２１８～２２１のいずれか１つに記載の組成物。

実施形態２２３．前記脂質ナノ粒子が、各々、
（ａ）ポリマーコンジュゲート脂質、
（ｂ）カチオン性にイオン化可能な脂質、及び
（ｃ）１つ以上の中性脂質、を含む、実施形態２１８～２２２のいずれか１つに記載の組成物。

実施形態２２４．前記ポリマーコンジュゲート脂質が、ＰＥＧコンジュゲート脂質を含む、実施形態２２３に記載の組成物。

実施形態２２５．前記ポリマーコンジュゲート脂質が、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミドを含む、実施形態２２３または２２４に記載の組成物。

実施形態２２６．前記１つ以上の中性脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＳＣ）を含む、実施形態２２３～２２５のいずれか１つに記載の組成物。

実施形態２２７．前記１つ以上の中性脂質が、コレステロールを含む、実施形態２２３～２２６のいずれか１つに記載の組成物。

実施形態２２８．前記カチオン性にイオン化可能な脂質が、［（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル］ジ（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）を含む、実施形態２２３～２２７のいずれか１つに記載の組成物。

実施形態２２９．前記脂質ナノ粒子が、約５０～１５０ｎｍの平均直径を有する、実施形態２２３～２２８のいずれか１つに記載の組成物。

実施形態２３０．実施形態２１６～２２９のいずれか１つに記載の組成物及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。

実施形態２３１．前記医薬組成物が、凍結保護剤を含み、任意選択的に前記凍結保護剤が、スクロースである、実施形態２３０に記載の医薬組成物。

実施形態２３２．前記医薬組成物が、水性緩衝溶液を含み、任意選択的に前記水性緩衝溶液が、トリス塩基、トリスＨＣｌ、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｎａ_２ＨＰＯ_４、及びＫＨ_２ＰＯ_４のうちの１つ以上を含む、実施形態２３０または２３１に記載の医薬組成物。

実施形態２３３．組み合わせであって、
（ｉ）第１のポリリボヌクレオチドを含む第１の医薬組成物であって、前記第１のポリリボヌクレオチドが、第１のポリペプチドをコードし、前記第１のポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含む、前記第１の医薬組成物と、
（ｉｉ）第２のポリリボヌクレオチドを含む第２の医薬組成物であって、前記第２のポリリボヌクレオチドが、第２のポリペプチドをコードし、前記第２のポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＴ細胞抗原を含む、前記第２の医薬組成物と、を含む、前記組み合わせ。

実施形態２３４．前記第１のポリリボヌクレオチドが、実施形態１～２０４のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチドまたは実施形態２０５～２１５のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物である、実施形態２３３に記載の、組み合わせ。

実施形態２３５．実施形態１～２０４のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチドを対象に投与することを含む、方法。

実施形態２３６．実施形態２０５～２１３のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物を対象に投与することを含む、方法。

実施形態２３７．実施形態２１８～２２９のいずれか１つに記載の組成物を対象に投与することを含む、方法。

実施形態２３８．１つ以上の用量の実施形態２３０～２３２のいずれか１つに記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。

実施形態２３９．１つ以上の用量の前記医薬組成物を対象に投与することを含む、マラリア感染の治療における使用のための、実施形態２３０～２３２のいずれか１つに記載の医薬組成物。

実施形態２４０．１つ以上の用量の前記医薬組成物を対象に投与することを含む、マラリア感染の予防における使用のための、実施形態２３０～２３２のいずれか１つに記載の医薬組成物。

実施形態２４１．２つ以上の用量の前記医薬組成物を対象に投与することを含む、実施形態２３８に記載の方法、または実施形態２３９もしくは２４０に記載の使用のための医薬組成物。

実施形態２４２．３つ以上の用量の前記医薬組成物を対象に投与することを含む、実施形態２３８もしくは２４１に記載の方法、または実施形態２３９～２４１のいずれか１つに記載の使用のための医薬組成物。

実施形態２４３．３つ以上の用量のうちの第２の用量が、前記３つ以上の用量のうちの第１の用量が前記対象に投与されてから少なくとも４週間後に前記対象に投与される、実施形態２４２に記載の使用のための方法または医薬組成物。

実施形態２４４．前記３つ以上の用量のうちの第３の用量が、前記３つ以上の用量のうちの前記第２の用量が前記対象に投与されてから少なくとも４週間後に前記対象に投与される、実施形態２４２または２４３記載の使用のための方法または医薬組成物。

実施形態２４５．第４の用量の前記医薬組成物を対象に投与することを含む、実施形態２３８または２４１～２４４のいずれか１つに記載の方法、または実施形態２３９～２４４のいずれか１つに記載の使用のための医薬組成物。

実施形態２４６．前記第４の用量が、前記３つ以上の用量のうちの前記第３の用量が前記対象に投与されてから少なくとも４週間後に前記対象に投与される、実施形態２４２に記載の使用のための方法または医薬組成物。

実施形態２４７．前記第４の用量が、前記３つ以上の用量のうちの前記第３の用量が前記対象に投与されてから少なくとも１年後に前記対象に投与される、実施形態２４５に記載の使用のための方法または医薬組成物。

実施形態２４８．実施形態２３３または２３４に記載の組み合わせを対象に投与することを含む、方法。

実施形態２４９．前記第１の医薬組成物及び前記第２の医薬組成物が、同じ日に投与される、実施形態２４８に記載の方法。

実施形態２５０．前記第１の医薬組成物及び前記第２の医薬組成物が、異なる日に投与される、実施形態２４８に記載の方法。

実施形態２５１．前記第１の医薬組成物及び前記第２の医薬組成物が、前記対象の体の異なる位置で前記対象に投与される、実施形態２４８～２５０のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２５２．前記方法が、マラリア感染を治療する方法である、実施形態２４８～２５１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２５３．前記方法が、マラリア感染を予防する方法である、実施形態２４８～２５２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２５４．前記対象が、マラリア感染を有するか、またはそれを発症するリスクにある、実施形態２４８～２５３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２５５．前記対象が、ヒトである、実施形態２４８～２５４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２５６．投与が、前記対象における抗マラリア免疫応答を誘導する、実施形態２３５～２３８及び２４１～２５５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２５７．前記対象における前記抗マラリア免疫応答が、適応免疫応答を含む、実施形態２５６に記載の方法。

実施形態２５８．前記対象における前記抗マラリア免疫応答が、Ｔ細胞応答を含む、実施形態２５６または２５７に記載の方法。

実施形態２５９．前記Ｔ細胞応答が、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答であるか、またはそれを含む、実施形態２５８に記載の方法。

実施形態２６０．前記Ｔ細胞応答が、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答であるか、またはそれを含む、実施形態２５８または２５９に記載の方法。

実施形態２６１．前記抗マラリア免疫応答が、Ｂ細胞応答を含む、実施形態２５６～２６０のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２６２．前記抗マラリア免疫応答が、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ抗原に対して指向される抗体の産生を含む、実施形態２５６～２６１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２６３．マラリア感染の治療における、実施形態２３０～２３２のいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。

実施形態２６４．マラリア感染の予防における、実施形態２３０～２３２のいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。

実施形態２６５．対象における抗マラリア免疫応答の誘導における、実施形態２３０～２３２のいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。

実施形態２６６．実施形態１～２０４のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチドによってコードされる、ポリペプチド。

実施形態２６７．実施形態２０５～２１５のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物によってコードされる、ポリペプチド。

実施形態２６８．実施形態１～２０４のいずれか１つに記載のポリリボヌクレオチドを含む、宿主細胞。

実施形態２６９．実施形態２０５～２１５のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物を含む、宿主細胞。

実施形態２７０．実施形態２６６または２６７に記載のポリペプチドを含む、宿主細胞。

実施形態２７１．５’から３’の順で、
（ｉ）修飾ヒトアルファ－グロビン５’－ＵＴＲを含むか、またはそれからなる５’ＵＴＲ、
（ｉｉ）配列番号３３または８１によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチドをコードするポリリボヌクレオチド、
（ｉｉｉ）スプリット（ＡＥＳ）メッセンジャーＲＮＡのアミノ末端エンハンサーからの第１の配列及びミトコンドリアでコードされた１２ＳリボソームＲＮＡからの第２の配列を含むか、またはそれらからなる３’ＵＴＲ、及び
（ｉｖ）ポリＡ尾部配列、を含む、ＲＮＡ構築物。

実施形態２７２．５’から３’の順で、
（ｉ）修飾ヒトアルファ－グロビン５’－ＵＴＲを含むか、またはそれからなる５’ＵＴＲ、
（ｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチドをコードするポリリボヌクレオチドであって、前記１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分が、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の１つ以上の反復を含み、前記Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチドが、ＮＰＮＡのアミノ酸配列を含まない、前記ポリリボヌクレオチドと、
（ｉｉｉ）スプリット（ＡＥＳ）メッセンジャーＲＮＡのアミノ末端エンハンサーからの第１の配列及びミトコンドリアでコードされた１２ＳリボソームＲＮＡからの第２の配列を含むか、またはそれらからなる３’ＵＴＲ、及び
（ｉｖ）ポリＡ尾部配列、を含む、ＲＮＡ構築物。

実施形態２７３．前記Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチドが、前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の５つ以上の反復を含む、実施形態２７２に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２７４．前記Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチドが、異種分泌シグナルを含む、実施形態２７２または２７３に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２７５．前記異種分泌シグナルが、ＨＳＶ分泌シグナルである、実施形態２７４に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２７６．前記ＨＳＶ分泌シグナルが、ＨＳＶｇＤ分泌シグナルである、実施形態２７５に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２７７．前記Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチドが、異種膜貫通ドメインを含む、実施形態２７２～２７６のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２７８．前記異種膜貫通ドメインが、ＨＳＶ膜貫通ドメインである、実施形態２７７に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２７９．前記ＨＳＶ膜貫通ドメインが、ＨＳＶｇＤ膜貫通ドメインである、実施形態２７８に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２８０．前記Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチドが、
（ｉ）異種分泌シグナル、
（ｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域、
（ｉｉｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、
（ｉｖ）前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の９つの反復、
（ｖ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域、
（ｖｉ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域の直後のセリン－バリン配列、
（ｖｉｉ）リンカー、及び
（ｖｉｉｉ）異種膜貫通領域、を含み、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、及び
（ｂ）ＮＰＮＡのアミノ酸配列、のいずれも含まない、実施形態２７２～２７９のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２８１．前記ポリペプチドが、配列番号８１によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態２７２～２８０のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２８２．前記Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍが、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、実施形態２７１～２８１のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２８３．Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍが、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７である、実施形態２８２に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２８４．前記ポリリボヌクレオチドが、単離されたポリリボヌクレオチドである、実施形態２７１～２８３のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２８５．前記ポリリボヌクレオチドが、操作されたポリリボヌクレオチドである、実施形態２７１～２８４のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２８６．前記ポリリボヌクレオチドが、コドン最適化ポリリボヌクレオチドである、実施形態２７１～２８５のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２８７．前記５’ＵＴＲが、配列番号４１５によるリボ核酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態２７１～２８６のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２８８．前記３’ＵＴＲが、配列番号４１６によるリボ核酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態２７１～２８７のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２８９．前記ポリＡ尾部配列が、スプリットポリＡ尾部配列である、実施形態２７１～２８８のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２９０．前記スプリットポリＡ尾部配列が、配列番号４１７によるリボ核酸配列を含むか、またはそれからなる、実施形態２８９に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２９１．５’キャップをさらに含む、実施形態２７１～２９０のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２９２．前記ポリリボヌクレオチドの＋１、＋２、＋３、＋４、及び＋５位を含むキャップ近位の配列をさらに含む、実施形態２７１～２９１のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２９３．前記５’キャップが、ｍ７（３’ＯＭｅＧ）（５’）ｐｐｐ（５’）（２’ＯＭｅＡ_１）ｐＧ_２を含むＣａｐ１構造を含むか、またはそれからなり、Ａ_１が、前記ポリリボヌクレオチドの＋１位であり、Ｇ_２が、前記ポリリボヌクレオチドの＋２位である、実施形態２９１または２９２に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２９４．前記キャップ近位の配列が、前記Ｃａｐ１構造のＡ_１及びＧ_２、ならびに前記ポリリボヌクレオチドの＋３、＋４、及び＋５位にて、Ａ_３Ａ_４Ｕ_５（配列番号４２４）を含む配列、を含む、実施形態２９２または２９３に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２９５．前記ＲＮＡ構築物が、１つ以上のウリジンの代わりに修飾ウリジンを含む、実施形態２７１～２９４のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２９６．前記ＲＮＡ構築物が、全てのウリジンの代わりに修飾ウリジンを含む、実施形態２７１～２９５のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２９７．前記修飾ウリジンが、各々、Ｎ１－メチル－プソイドウリジンである、実施形態２９５または２９６に記載のＲＮＡ構築物。

実施形態２９８．実施形態２７１～２９７のいずれか１つに記載の１つ以上のＲＮＡ構築物を含む、組成物。

実施形態２９９．脂質ナノ粒子、ポリプレックス（ＰＬＸ）、脂質化ポリプレックス（ＬＰＬＸ）、またはリポソームをさらに含み、

前記１つ以上のＲＮＡ構築物が、前記脂質ナノ粒子、前記ポリプレックス（ＰＬＸ）、前記脂質化ポリプレックス（ＬＰＬＸ）、または前記リポソーム内に完全にもしくは部分的にカプセル化されている、実施形態２９８に記載の組成物。

実施形態３００．脂質ナノ粒子をさらに含み、前記１つ以上のＲＮＡ構築物が、前記脂質ナノ粒子内に完全にまたは部分的にカプセル化されている、実施形態２９８または２９９に記載の組成物。

実施形態３０１．実施形態２９８～３００のいずれか１つに記載の組成物及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。

実施形態３０２．マラリア感染を治療または予防する方法であって、実施形態２７１～２９７のいずれか１つに記載のＲＮＡ構築物、実施形態２９８～３００のいずれか１つに記載の組成物、または実施形態３０１に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、前記方法。

実施形態３０３．１つ以上の用量の前記医薬組成物を対象に投与することを含む、マラリア感染の治療または予防における使用のための、実施形態３０１に記載の医薬組成物。

実施例１：Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードする例示的なポリリボヌクレオチドのインビトロ発現
本実施例は、本明細書に記載するように、異なるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードする例示的なポリリボヌクレオチドが、哺乳動物細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ細胞）においてインビトロ発現（例えば、細胞内表面）を呈することを実証する。

インビトロ発現アッセイを使用して、異なるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物の発現及び局在化を評価した。表５に示される様々なＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするポリリボヌクレオチドを生成し、ポリリボヌクレオチド（「ＲＮＡ構築物」）を、表５に示される対応するコードされた構築物番号に従って番号を付けた。上記の表５に示されるように、本明細書で使用する場合、「ＥＲＭＡ」構築物は、「ＲＮＡ構築物」であり、例えば、「ＥＲＭＡ１」は、「ＲＮＡ構築物１」に対応し、「ＥＲＭＡ２」は、「ＲＮＡ構築物２」に対応するなどである。アッセイは、当初、機能性を決定するために、非製剤化ＲＮＡ構築物を用いて実施された。製剤化ＲＮＡ構築物も評価した。

簡潔に述べると、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、（ｉ）３５０ｎｇのＲＮＡ構築物、または（ｉｉ）５ｎｇもしくは５０ｎｇのＬＮＰ製剤化ＲＮＡ構築物でトランスフェクトした。３５０ｎｇのＲＮＡ構築物または５ｎｇの製剤化ＲＮＡ構築物でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、抗体染色及びＦＡＣＳによってタンパク質発現について評価した。トランスフェクション率は、陽性細胞の割合を測定することによって決定され、総発現は、総ＨＥＫ集団の平均蛍光を測定することによって決定された。５０ｎｇの製剤化ＲＮＡ構築物でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、トランスフェクトした細胞の培養上清中のタンパク質を検出することによってタンパク質分泌について評価した。

（１）マルチウェルプレートにおける哺乳動物細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞）のトランスフェクション
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞のサブコンフルエントＴ１７５フラスコ（例えば、８０～９０％の培養密度）を、タンパク質分解及びコラーゲン分解酵素活性の酵素混合物（例えば、Ａｃｃｕｔａｓｅ（登録商標））を使用して細胞を分離することによって細胞播種に使用した。分離した細胞を収集し、トランスフェクションの日に、０．４×１０＾５細胞を１２ウェルプレートの１０００μＬ／ウェルに播種した。

非製剤化ＲＮＡによる哺乳動物細胞のトランスフェクションのためには、トランスフェクション剤の使用が必要であり、この場合、製造業者のプロトコルに従って、ＭｅｓｓｅｎｇｅｒＭａｘＴｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎＲｅａｇｅｎｔを用いて細胞トランスフェクションを実施した。１ウェル当たり２μｌのトランスフェクション剤が存在するように、ＭｅｓｓｅｎｇｅｒＭａｘをＯｐｔｉＭＥＭで希釈し、この混合物を室温（ＲＴ）で１０分間インキュベートした。各試験試料について、１ウェル当たり１００ｎｇのＲＮＡを、１００μｌのＯｐｔｉＭＥＭ及びＭｅｓｓｅｎｇｅｒＭａｘミックス中で希釈した。複合体形成を可能にするため、ＲＮＡ－ＭｅｓｓｅｎｇｅｒＭａｘ－Ｍｉｘを室温で５分間インキュベートした。約１００μＬ／ウェルのトランスフェクション混合物を細胞に滴下して添加した。次いで、トランスフェクトされた細胞を、加湿雰囲気下で、３７℃、５％のＣＯ２で一晩（例えば、１８時間）インキュベートした。

製剤化ＲＮＡによる哺乳動物細胞のトランスフェクションのために、製剤化産物を、ウェル当たり１００μｌのＯｐｔｉＭＥＭで（例えば、５ｎｇ～２００ｎｇの範囲で）希釈し、混合物を細胞に滴下して添加した。その後、培養プレートを２１℃で３００×ｇ、５分で遠心分離し、次いで、３７℃、５％ＣＯ２で、加湿雰囲気下で一晩（例えば、１８時間）インキュベートした。

（２）タンパク質発現の検出のためのフローサイトメトリー分析
トランスフェクトされた細胞を、タンパク質発現を定量化するフローサイトメトリー分析に供した。簡潔に述べると、トランスフェクトされた細胞をＤＰＢＳで洗浄し、染色のために９６ウェルプレートに移した。ＲＮＡ構築物１、２、４～９、２３～４１、５９、及び６０でトランスフェクトした細胞について、まず、生存率のために（ＦｉｘａｂｌｅＶｉａｂｉｌｉｔｙＤｙｅｅＦｌｕｏｒ（商標）４５０；１：５００）、次いで、ＰｆＰｆＣＳＰに対する一次抗体（少数の反復を標的とするヒト抗ＰｆＰｆＣＳＰＬ９（１：６０，０００）または主要な反復を標的とするマウス抗ＰｆＰｆＣＳＰ２Ａ１０（１：２０００）のいずれか）及び蛍光二次抗体（抗ヒト－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６７４（１：１０００）または抗マウス－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７（１：５００）のいずれか））で細胞を染色した。ＲＮＡ構築物５９、６０、８７、８８、９１、１００、及び１０４でトランスフェクトした細胞について、細胞をヒト抗ＣＳＰ、クローンＬ９で、希釈１：６０，０００で、次いで蛍光二次抗体（抗ヒト－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６７４（１：１０００））で染色した。抗体で染色する前に、透過処理ステップを含めた。染色後、細胞を１８０μｌのＦＡＣＳ緩衝液（１％のＢＳＡ、０．５ｍＭのＥＤＴＡを有するＤＰＢＳ）中に再懸濁し、ＢＤＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａＣｅｌｌＡｎａｌｙｚｅｒを使用してフローサイトメトリー分析のために７５μｌの細胞を取得した。

ＨＥＫ２９３Ｔ細胞における構築物の発現を、フローサイトメトリーを使用して、透過性ＨＥＫ２９３Ｔ細胞における総タンパク質を測定することによって評価した。全体として、トランスフェクション率は、問題の構築物によってコードされたタンパク質を発現する細胞の割合（陽性細胞（％））を示す。総発現は、翻訳されたタンパク質から測定されたシグナルの量を示す、総ＨＥＫ２９３Ｔ集団の平均蛍光（ＭｅｄｉａｎＦｌ）を示す。全ての構築物を、インビトロモデルで様々な程度に発現させた。

非製剤化（図１、図３、図４、及び図５）及び製剤化（図２及び図６）ＲＮＡ構築物の両方が、全体的に高いトランスフェクション率を有した。図１Ａに示されるように、ＲＮＡ構築物７、２５、２８、及び３０～４０は、最も高いトランスフェクション率（少なくとも約７０％の陽性細胞）を有した。さらに、ＴＭドメインまたはＧＰＩアンカー（ＲＮＡ構築物７、２３、２５、２８、及び３０～４１）を有するＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするポリリボヌクレオチドが表面上に発現したが、有しないもの（ＲＮＡ構築物１、２、４、５、６、８、９、２４、２６、２７、及び２９）は発現しなかった。図１Ｂに示されるように、ＲＮＡ構築物２８、３６、及び３７は、全体的に最も高い発現を有し、少なくとも約１５０，０００の平均蛍光強度を有する細胞内染色及び少なくとも約７５，０００の平均蛍光強度を有する表面染色を呈した。

図２Ａに示されるように、全てのＲＮＡ構築物が発現されたが、いくつかのＲＮＡ構築物（２２、２５、２６、２８、３２、３４、３６、３８、４２）は、５ｎｇの製剤化ＲＮＡ構築物で飽和トランスフェクション率（少なくとも９０％の陽性細胞）を実証した。他のもの（構築物６、２９、及び４１）は、低いトランスフェクション率（２５％未満の陽性細胞）を呈し、他のもの（ＲＮＡ構築物２、８、２３、２４、３０、３１、３２、３３、３５、３７、３９、４５）は、許容可能な（すなわち、中間）範囲（少なくとも４０％の陽性細胞）内であった。図２Ａに示されるように、ＴＭドメインまたはＧＰＩアンカー（ＲＮＡ構築物２２、２３、２５、２８、及び３０～４１）を有するＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードする全てのポリリボヌクレオチドは、陽性表面発現を実証した。図２Ｂに示されるように、ＴＭドメインまたはＧＰＩアンカー含有Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするこれらのポリリボヌクレオチドは、様々な程度の総発現を呈し、細胞内染色は、２０，０００～８０，０００の平均蛍光強度で検出され、表面染色は、０～約２０，０００の平均蛍光強度で検出された）。タンパク質分泌が、シグナル配列を含有するＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするポリリボヌクレオチドの培養上清中のタンパク質レベルを測定することによって評価された場合、構築物２４及び２９のみが培養上清中で検出された（図２Ｃ）。

興味深いことに、ウイルス分泌シグナル（例えば、ＨＳＶ分泌シグナル）を有する特定のＲＮＡ構築物が、それ以外の点では同一であるＰｆ分泌シグナルを有するＲＮＡ構築物と比較して増加した総発現を有していたことが観察された。例えば、構築物４５（ＨＳＶ分泌シグナルを含む）は、これらの構築物が同様のトランスフェクション率を有するにもかかわらず、構築物２（それ以外の点では同一であるＰｆ分泌シグナルを有する構築物）（図２Ｂ）と比較して、より高い総細胞内発現を有した（図２Ａ）。

また、ＲＮＡ構築物５９からのポリペプチド発現がＲＮＡ構築物６０よりも高いレベルであったことも観察された。ＲＮＡ構築物５９はまた、非透過性細胞の表面上で検出されたポリペプチド発現をもたらした（図３Ａ及び図３Ｂ）。

互いに比較して、ＲＮＡ構築物９１、１００、及び１０４のうち、ＲＮＡ構築物１００は、最も高いインビトロ発現を実証した。ＲＮＡ構築物１００及びＲＮＡ構築物１０４の両方が、強力かつ等しい表面発現を有した（図４Ａ及び図４Ｂ）。同様の発現は、互いに比較したときに、ＲＮＡ構築物８７及びＲＮＡ構築物８８の両方について見られた（図５Ａ及び図５Ｂ）が、しかしながら、両方とも表面上では発現されなかった。ＬＮＰ製剤化ＲＮＡ構築物８７、８８、９１、１００、及び１０４についても、５ｎｇ／ウェルの濃度で試験した。ＲＮＡ構築物１００及びＲＮＡ構築物１０４は、群の他の部分と比較して、最高レベルの発現を示した（図６Ａ及び図６Ｂ）。

実施例２：Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードする例示的なポリリボヌクレオチドの免疫原性研究
本実施例は、本開示によって提供される、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物
をコードする特定のポリリボヌクレオチドが、マウスで評価されるように、免疫応答を誘導する能力を文書化する。

Ｃ５７ＢＬ６雌マウス（１０～１２週齢）を、０日目及び２１日目に、１μｇの製剤化ＲＮＡ構築物（実施例１に記載）で筋肉内（ＩＭ）に２回免疫化するか、またはリン酸緩衝生理食塩水（ビヒクル）（ｎ＝８マウス／群）を注射した。血液試料を、免疫化前（０日目）及び第１の用量後（７、１４、２１、２８、及び３５日目）に採取して、様々な時点における血清試料を生成した。実験の終了時（３５日目）に、脾細胞を採取し、凍結保存した。動物を、以下の表１０に示されるように、治療を受ける複数の群に分けた。

免疫化した動物の各群から得られた血清試料を、以下の方法（複数可）：（１）酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、（２）多重アッセイ、（３）スポロゾイトＥＬＩＳＡ、（４）横断アッセイ、（５）肝病期発症アッセイ（ＩＬＳＤＡ）の阻害、及び／または（６）Ｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔアッセイのうちの１つ以上によって分析した。

（１）酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）
提供されるポリリボヌクレオチドは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）ＣＳＰ完全長タンパク質（「ＰｆＣＳＰ－ＦＬ」）、ＰｆＣＳＰＣ末端ドメイン（「ＰｆＣＳＰ－Ｃ」）、及び／または少数の反復の末端までＮ末端ドメインの末端に及ぶ領域（「ＰｆＣｓｐ－７６～１４０」）に結合し得る抗体の産生を誘導する能力について評価することができる。いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドは、そのような構築物で免疫化した対象（例えば、マウス）からの血清が、本明細書に記載されるようなＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ、ＰｆＣＳＰ－Ｃ、及び／またはＰｆＣｓｐ－７６～１４０に結合することが示されている場合、有用な免疫応答を誘導するように決定される。

（実施例１に記載されるように）ＲＮＡ構築物２、６、８、２２～２６、２８～３１、３３～３５、３７、３９、４１、４２、及び４５を、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ、ＰｆＣＳＰ－Ｃ、及び／またはＰｆＣｓｐ－７６～１４０に結合する抗体の産生を誘導するその能力について評価した（表１１を参照されたい）。

ＲＮＡ構築物８７、８８、９１、１００、及び１０４を、３Ｄ７株（ＰｆＣＳＰ－Ｃ末端３Ｄ７）からのＰｆＣＳＰ－ＦＬ及びＰｆＣＳＰＣ末端ドメインに結合する抗体の産生を誘導するその能力について評価した（表１１を参照されたい）。

簡潔に述べると、ＭａｘｉＳｏｒｐ９６ウェルプレートを、コーティング緩衝液（５０ｍＭの炭酸ナトリウム、ｐＨ９．６）中の１００ｎｇ／ウェルのＰｆＣＳＰ－ＦＬ、ＰｆＣＳＰ－Ｃ、またはＰｆＣＳＰ－Ｃ末端３Ｄ７でコーティングし、４℃で一晩、またはＰＢＳ中の２５０ｎｇ／ウェルのＰｆＣｓｐ－７６～１４０重複ペプチドで一晩インキュベートし、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、プレートを、ＰＢＳ中の１％ＢＳＡで、３７℃で１時間（ＰｆＣＳＰ－ＦＬ、ＰｆＣＳＰ－Ｃ、及びＰｆＣＳＰ－Ｃ末端３Ｄ７の場合）、または４℃で一晩（ＰｆＣｓｐ－７６～１４０重複ペプチドの場合）ブロックした。結合したＩｇＧを、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧを使用して検出した。シグナルは、基質３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）及び２５％の硫酸を添加した後に検出され、反応を停止させた。光学密度（ＯＤ）を４５０ｎｍで読み取った。

最も高い抗体応答を示したため、２回の免疫化後の３５日目の相互エンド力価を代表的として使用した。

図７Ａに示されるように、ＲＮＡ構築物２、８、２２～２６、２８～３１、３３～３５、３７、３９、４１、４２、及び４５は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬに対する高レベルの抗体を誘導した（約１０^５～約１０^７の平均相互エンド力価を呈する）。図７Ｂに示されるように、ＲＮＡ構築物２、８、２２～２６、２８～３１、３３～３５、３７、３９、４１、４２、及び４５は、ＰｆＣＳＰ－Ｃに対する強い抗体応答を誘導した（約１０^５～約１０^７の平均相互エンド力価を呈する）。図７Ｃに示されるように、試験したＲＮＡ構築物は、ＰｆＣｓｐ－７６～１４０に対する抗体を誘導する能力においてより可変であった。さらに、ＰｆＣＳＰ－７６～１４０に対する抗体応答において、同じＲＮＡ構築物で免疫化したマウスにおいてさえ、ＰｆＣＳＰ－ＦＬに対する応答に関して見られたよりも大きな可変性が観察された。依然として、大部分の試験したＲＮＡ構築物（例えば、ＲＮＡ構築物２、８、２２～２６、２８、２９、３３～３５、３７、３９、４１、４２、及び４５）は、ＰｆＣＳＰ－７６～１４０に対してさえ有意な抗体応答を誘導した（少なくとも約１０^３の平均相互エンド力価を呈する）（データは示されていない）。ＰｆＣＳＰ－７６～１４０の使用は、高い変動性のために中止された。

図８Ａに示されるように、ＲＮＡ構築物８７、８８、９１、１００、及び１０４は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬに対する高レベルの抗体を誘導した（約１０^５～約１０^６の平均相互エンド力価を呈する）。図８Ｂに示されるように、ＲＮＡ構築物８７、８８、及び９１は、ＰｆＣＳＰ－Ｃ末端３Ｄ７に対する強力な抗体応答を誘導した（約１０^４～約１０^６の平均相互エンド力価を呈する）。ＲＮＡ構築物１００及び１０４による免疫化は、これらの構築物のいずれもタンパク質のこの領域を発現しないため、予想されたように、ＰｆＣＳＰ－Ｃ末端３Ｄ７に対する抗体を誘発しなかった（図８Ｂ）。ＲＮＡ構築物８７による免疫化は、ＰｆＣＳＰのＣ末端ドメインに対する力価に対して、ＲＮＡ構築物８８及びＲＮＡ構築物９１よりも低い力価を誘発した。対照マウス（ビヒクルで注射した）については、力価は検出されなかった。

したがって、本実施例は、提供される特定のポリリボヌクレオチドが、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して評価されるように、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ、ＰｆＣＳＰ－Ｃ、ＰｆＣｓｐ－７６～１４０、及び／またはＰｆＣＳＰ－Ｃ末端３Ｄ７に結合する抗体の産生を誘導することによって特徴付けられる免疫応答を効果的に誘導することを実証する。１つを除く全ての構築物が、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ、ＰｆＣＳＰ－Ｃ、ＰｆＣｓｐ－７６～１４０、またはＰｆＣＳＰ－Ｃ末端３Ｄ７のうちの少なくとも１つに結合する抗体を誘導した。例えば、シグナルペプチド（ＲＮＡ構築物２、８、２３、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３３、３４、３５、３７、３９、４１、４２、８７、８８、８１、１００、及び１０４）を含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードしたポリリボヌクレオチドは、ＰｆＣＳＰ－ＦＬに対する強い抗体応答（約１０^５～約１０^７の平均相互エンド力価）を誘導したことが示され、シグナルペプチド（ＲＮＡ構築物２、２９、３０、３１、３３、３５、３７、８８、及び９１）を含んだＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするポリリボヌクレオチドは、ＰｆＣＳＰ－Ｃに対する強い抗体応答（約１０^５～約１０^７の平均相互エンド力価）を誘導したことが示され、タンパク質分解切断部位（ＫＬＫＱＰ（配列番号：４１３）を含んだポリリボヌクレオチド構築物２、８、２３、２４、２５、２６、２８、３３、３４、３９、４１、及び４２）をコードするポリリボヌクレオチド構築物は、ＰｆＣｓｐ－７６～１４０に対する強い抗体応答を誘導したことが示されている（少なくとも約１０^３の平均相互エンド力価）。

（２）多重アッセイ
提供されるポリリボヌクレオチドは、特定のＰｆＣＳＰエピトープに結合する抗体の産生を誘導するその能力について評価することができる。いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドは、そのような構築物で免疫化した対象（例えば、マウス）からの血清が、本明細書に記載されるように多重アッセイにおいて、ＰｆＣＳＰの中心領域からのペプチド（例えば、ＰｆＣＳＰペプチド１７Ｃ、１８Ｃ、１９Ｃ、２０Ｃ、２１Ｃ、２２Ｃ、２３Ｃ、２７Ｃ、２９Ｃ、及び／または４２Ｃ）を標的とすることが示される場合、有用な免疫応答を誘導するように決定される。

ＲＮＡ構築物（実施例１に記載するような）を、製造業者の指示に従って多重分析（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）を実施することによって、特定のＰｆＣＳＰエピトープに結合する抗体の産生を誘導するその能力（表１２を参照されたい）について評価した。簡潔に述べると、ＰｆＣＳＰの中心領域からの１０個のペプチド（ＰｆＣＳＰペプチド１７Ｃ、１８Ｃ、１９Ｃ、２０Ｃ、２１Ｃ、２２Ｃ、２３Ｃ、２７Ｃ、２９Ｃ、または４２Ｃ）をウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）とコンジュゲートし、次いで、ウェル上の特定の点で９６ウェルプレートのウェルに結合させた。免疫化したマウスからの血清でインキュベートした後、各特異的ペプチドに結合した抗体を「Ｓｕｌｆｏ－Ｔａｇ」コンジュゲート二次抗体で検出した。多重リーダー機器（ＭＥＳＯＱｕｉｃｋＰｌｅｘＳＱ１２０）を使用して、Ｓｕｌｆｏ－Ｔａｇから放出される光を定量化した。

ほとんどの試験したＲＮＡ構築物は、少なくともいくつかのエピトープへの結合を呈した抗体を生成した（図９～図１１）。

ペプチド１７Ｃ及び１８Ｃは、Ｎ末端ドメイン、Ｒ１、及びＰｆＣＳＰの接合部、ならびにこれらのペプチドに対する抗体に部分的に位置し、主に、完全長Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物（ＲＮＡ構築物２、８、２３、２６、２８、４２、４５）及びＲＮＡ構築物２２（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物ΔＮ末端をコードする）、２５（主要な反復を欠き、ＰｆＬＳＡ－３断片がＮ末端の代わりにあるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードする）、４１（Ｎ末端、Ｒ１、及び接合部領域が４回反復し、主要な反復が省略されるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードする）、及び１０４（Ｒ１、接合部領域、少数の反復、及び６つの主要な反復が３回反復するＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードする）をコードするポリリボヌクレオチドによって認識された（少なくとも約６０万のＡＵＣを示す）（図９～図１１、図５４も参照されたい）。

ペプチド１９Ｃ及び２０Ｃは、Ｒ１、接合部領域、及び少数の反復の一部に及び、完全長ＣＳＰ構築物（ＲＮＡ構築物２、８、２３、２６、２８、４２、及び４５）をコードするポリリボヌクレオチドから生成される抗体によって認識された（図９～図１１）。図９及び図１０に示されるように、ＲＮＡ構築物６、２９、及び３１のみが、１７Ｃ、１８Ｃ、１９Ｃ、または２０Ｃのうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導しなかった。

試験した全てのＲＮＡ構築物は、ＰｆＣＳＰの少数の反復または主要な反復の少なくともいくつかの部分をコードし、ペプチド２３Ｃ、４２Ｃ、及び２７Ｃに対する抗体は全て、異なるセクションにおける少数の反復及び主要な反復に及ぶが、大部分の構築物について観察された（少なくとも約６００，０００のＡＵＣを実証する）（図９～図１１）。

ペプチド２１Ｃ、２２Ｃ及び２９Ｃは、少数の反復または主要な反復に及び、それぞれ、既知の中和抗体であるＣＩＳ４３、Ｌ９、及びｍＡｂ３１７の主要な結合エピトープである。これらの領域に対する抗体は、ＲＮＡ構築物６、２９、及び３１を除く全てのＲＮＡ構築物で免疫化することによって産生され、これにより、抗体は２９Ｃまでのみ誘導された（主要な反復）（図９～図１１）。

したがって、本実施例は、提供される全てのポリリボヌクレオチドが、ＰｆＣＳＰの中央領域からの少なくとも１つの特異的ＰｆＣＳＰエピトープ（例えば、ＰｆＣＳＰペプチド１７Ｃ、１８Ｃ、１９Ｃ、２０Ｃ、２１Ｃ、２２Ｃ、２３Ｃ、２７Ｃ、２９Ｃ、及び／または４２Ｃ）に結合する抗体の産生を効果的に誘導することを実証する。

（３）スポロゾイトＥＬＩＳＡ
提供されるポリリボヌクレオチドは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）スポロゾイト溶解物から天然のＣＳＰ抗原に結合し得る抗体の産生を誘導する能力について評価することができる。いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドは、そのような構築物で免疫化した対象（例えば、マウス）からの血清が、本明細書に記載されるようなスポロゾイトＥＬＩＳＡアッセイにおいて、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）スポロゾイト溶解物からの天然ＣＳＰ抗原に結合することが示される場合、有用な免疫応答を誘導することが決定される。

（実施例１に記載されるように）ＲＮＡ構築物を、スポロゾイトＥＬＩＳＡアッセイを使用して、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）スポロゾイト溶解物からの天然のＣＳＰ抗原に結合する抗体の産生を誘導するその能力について評価した。具体的には、３８４ウェルプレートを、１ウェル当たり約２５０個のスポロゾイトに相当する量で、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）ＮＦ５４唾液腺スポロゾイトからの非変性総タンパク質溶解物でコーティングした。ブロック後、連続的に希釈された血清試料（試料当たり６希釈）を対応するウェルに添加した。ウェル中の天然ＰｆＣＳＰタンパク質への血清試料中に存在する抗体の結合を、ＡＰコンジュゲート二次抗体を使用して検出し、続いて発光定量化した。

図１２Ａに示されるように、試験したＲＮＡ構築物は、天然のＰｆＣＳＰ抗原に結合する抗体の産生を効果的に誘導した（少なくとも約２００ｃｐｓの発光を呈する）。全体として、完全長ＰｆＣＳＰ（ＲＮＡ構築物２、８、２３、２６、２８、４２、及び４５）を含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするＲＮＡ構築物は、他のものよりも良好に機能した（約３００ｃｐｓ～約７００ｃｐｓの発光を呈する）。興味深いことに、ウイルス分泌シグナル（例えば、ＨＳＶ分泌シグナル）を有する特定のＲＮＡ構築物が、Ｐｆ分泌シグナルを有する他の同一のＲＮＡ構築物と比較して、天然ＰｆＣＳＰ抗原に結合する抗体の産生を改善したことが観察された。例えば、図１２Ａは、構築物４５（ＨＳＶ分泌シグナルを含む）が、構築物２（それ以外の点ではＰｆ分泌シグナルを有する構築物）よりも高い発光を有したことを示す。図１２Ｂは、陰性対照として使用されるマウス抗Ｐｆｓ２５ｍＡｂ３２Ｆ８１と、陽性対照として使用されるマウス抗ＣＳＰｍＡｂ３ＳＰ２との結合を示す。

したがって、本実施例は、提供される特定のポリリボヌクレオチドが、スポロゾイトＥＬＩＳＡアッセイにおいて、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）スポロゾイト溶解物からの天然ＣＳＰ抗原に結合する抗体の産生を誘導することによって特徴付けられる免疫応答を効果的に誘導することを実証する。１つを除く全ての試験した構築物は、ビヒクルと比較してより高い抗体を示した。例えば、ＲＮＡ構築物２、８、２２、２３、２６、２８、２９、３３、３４、３５、３９、４１、４２、及び４５は、天然ＰｆＣＳＰ抗原に結合する抗体の産生を効果的に誘導し（少なくとも約２００ｃｐｓの発光を呈する）、特に、完全長ＰｆＣＳＰをコードするＲＮＡ構築物（構築物２、８、２３、２６、２８、４２、及び４５）は、約３００ｃｐｓ～約７００ｃｐｓの発光を呈した。

（４）横断アッセイ
提供されるポリリボヌクレオチドは、横断に対する阻害効果を有する抗体の産生を誘導するその能力（その感染性に不可欠であるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）スポロゾイトによって示される運動性のタイプ）について評価することができる。いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドは、そのような構築物で免疫化した対象（例えば、マウス）からの血清が、本明細書に記載されるように、横断アッセイにおいて肝細胞を横断するスポロゾイトの能力を低減させることが示される場合、有用な免疫応答を誘導するように決定される。

ＲＮＡ構築物（実施例１に記載されているように）を、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）スポロゾイト横断に阻害効果を有する抗体の産生を誘導する能力について評価した。簡潔に述べると、ヒト肝細胞株であるＨＣ－０４細胞をプレートに播種し、５％ＣＯ_２及び３７℃で２４時間インキュベートした。製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの連続的に希釈した（１：２０、１：８０、及び１：３２０）血清試料とともに、新たに単離したＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）唾液腺スポロゾイトを事前にインキュベートした。次いで、不浸透性染料デキストラン－ローダミンの存在下で、１：１の感染多重度（ＭＯＩ）で、スポロゾイトをＨＣ－０４細胞に添加した。阻害の陽性対照として、スポロゾイトをｍＡｂ３１７で事前処理した。未処理のスポロゾイトを、阻害のための陰性対照として使用した。蛍光顕微鏡によって、デキストラン－ローダミンを組み込んだ細胞の割合を決定することによって、細胞を横断するＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）スポロゾイトの能力を定量化した。ビヒクルを注射したマウスからの血清試料で事前にインキュベートしたスポロゾイト横断を、０％の横断阻害として設定した。

スポロゾイトを、ビヒクルを注射したマウスからの血清で予めインキュベートした場合、細胞の約５０％がデキストラン－ローダミンを組み込んで、それらがスポロゾイトによって横断されたことを示した（図１３Ｂを参照されたい）。全てのビヒクル試料の平均は、０％阻害とみなされ、ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの全ての試料の比較物であった。

低い（１：２０）希釈の血清では、ＲＮＡ構築物２、２３、２６、３３、３９、４１、及び４２で免疫化したマウスからの血清について、約６０～８０％の横断の阻害が観察され、他のＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの血清は、３０～５０％の横断を阻害した。希釈が増大するにつれて、ほとんどの構築物の阻害割合が低下した。１：８０の希釈で、ＲＮＡ構築物２、３３、または４２で免疫化したマウスからの血清は、約２０～３０％で横断を阻害することができ、ＲＮＡ構築物２３、３９、または４１で免疫化したマウスからの血清は、約５０～６０％で横断を阻害することができた。高い希釈率（１：３２０）では、ＲＮＡ構築物２３、３９、または４１で免疫化したマウスからの血清は、５０～６０％で横断を阻害することができ、他のＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの血清は、４０％未満で横断を阻害することができた。

図１３Ａに示されるように、異なる製剤化ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスから生成された抗体は、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍスポロゾイト横断を阻害することができる。結果は、０％の阻害として設定されたビヒクル対照と比較した横断活性の阻害の割合（平均及びＳＥＭ）として示される。ＲＮＡ構築物３９、４１、２３、２４、及び２５は、より高い横断阻害活性を有するものである。図１３Ｂは、ビヒクルについての横断された細胞の割合及びビヒクルに対するｍＡｂ３１７による横断の阻害を示す。

したがって、本実施例は、特定のポリリボヌクレオチドが、例えば、横断アッセイを使用して測定するときに、スポロゾイト横断を阻害する抗体の産生を誘導することによって特徴付けられる免疫応答を効果的に誘導することを実証する。例えば、ＲＮＡ構築物２、２３、２６、３３、３９、４１、及び４２で免疫化したマウスからの血清は、１：２０の血清希釈で約６０～８０％横断を阻害したが、ＲＮＡ構築物２３、３９、及び４１で免疫化したマウスからの血清は、１：３２０の希釈で約５０～６０％横断を阻害した。

（５）肝病期発症アッセイ（ＩＬＳＤＡ）の阻害
提供されるポリリボヌクレオチドは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）スポロゾイトによる初代ヒト肝細胞の感染を阻害する抗体の産生、及び／またはその中での発症を誘導するその能力について評価することができる。いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドは、そのような構築物で免疫化した対象（例えば、マウス）からの血清が、本明細書に記載されるようなＩＬＳＤＡアッセイにおいて、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）スポロゾイト感染及び／または発症を阻害することが示されている場合、有用な免疫応答を誘導するように決定される。

ＩＬＳＤＡアッセイにおいて、（実施例１に記載されるように）ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの血清の連続希釈された（８希釈）血清試料とともに、新たに単離された唾液腺スポロゾイトを予めインキュベートした。次いで、予めインキュベートしたスポロゾイトを、ガラス底の黒色の９６ウェルプレートに播種した初代ヒト肝細胞に添加した。感染を容易にするために遠心分離した後、細胞を５％ＣＯ_２及び３７℃で４日間インキュベートした。固定後、寄生虫細胞質を抗ＰｆＨｓｐ７０で染色し、ＤＮＡ（肝細胞から及び寄生虫から）をＤＡＰＩで染色した。肝細胞感染を阻害することが知られている抗体であるｍＡｂ３１７を陽性対照として使用した。ビヒクルを注射したマウスからの血清でインキュベートしたスポロゾイトを、阻害の陰性対照として使用した。蛍光顕微鏡によって、内側に寄生虫を有する細胞の割合を決定することによって、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｐｆ）スポロゾイトが肝細胞に感染する能力を定量化した。寄生虫の発達は、寄生虫の面積を測定することによっても評価される（抗ＰｆＨｓｐ７０で染色される）。

図１４Ａに示されるように、全ての試験したＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの血清のより低い（１：２０）希釈で、初代ヒト肝細胞感染は、約８０～１００％阻害された。血清希釈が１：８０に増加すると、阻害割合は、全ての試験試料について６０～８０％に低下した。１：３２０の血清希釈では、肝細胞阻害の割合に差が見られ、完全長ＣＳＰ構築物（ＲＮＡ構築物２及び２３）をコードするポリリボヌクレオチドで免疫化したマウスからの血清は、約５０～７０％の感染を阻害することができ、ＲＮＡ構築物３９、４１及び４２で免疫化したマウスからの血清は、約４０％の感染を阻害することができた。高い希釈率（１：１２８０）では、ＲＮＡ構築物２３で免疫化したマウスからの血清は、５０～６０％で免疫を阻害することができ、他のＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの血清は、４０％未満で免疫を阻害することができた。図１５Ａに示されるように、試験した全てのＲＮＡ構築物３９、２、２３、２６、４２、４５、２９、及び２２を阻害して免疫化したマウスからの血清のより低い（１：４０）希釈で、初代ヒト肝細胞感染は、５０％を超えて阻害され、ＲＮＡ構築物３１、３３、３４、３９、４１、２、８、２３、２６、２８、４２、４５、２９、３０、２２、２４及び２５ヒト肝細胞感染が観察され得る。ＲＮＡ構築物２、２３、２６、２８、４５、及び２９を用いた血清希釈の１：１６０への増加により、全ての試験試料について、阻害割合が低下し、４０％前後またはそれを超える阻害を示す。希釈１：６４０では、阻害は、構築物３９、２、２３、２６、２８、４５、２９、２２、及び２５についてのみ検出可能である。

したがって、本実施例は、特定のポリリボヌクレオチドが、例えば、肝病期発症アッセイの阻害を使用して測定されるように、初代ヒト肝細胞の侵入を阻害した抗体の産生を効果的に誘導したことを実証する。例えば、ＲＮＡ構築物２、２３、３９、４１、及び４２で免疫化したマウスからの血清は、低い希釈（１：２０）で感染を阻害することができ、ＲＮＡ構築物２３で免疫化したマウスからの血清は、高い希釈（１：１２８０）で４０％を超える感染を阻害した。

（６）スポロゾイトの補体媒介溶解
スポロゾイトを、ＲＮＡ構築物２、８、２２、２３、２４、２５、２６、２９、３０、３１、３３、３４、３５、３７、３９、４１、４２、及び４５で免疫化したマウスからの血清、ならびに補体の供給源としての正常ヒト血清（ＮＨＳ）と３７℃で３０分間インキュベートした（図１６Ａ～図１６Ｅ）。モノクローナル抗体ｍＡｂ１２４５及びｍＡｂ３１７（１０μｇ／ｍｌ）をそれぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した（図１６Ｅ）。ＰＢＳ／ＥＤＴＡによる相補体の不活性化後、スポロゾイトを３ＳＰ２－ＤｙＬｉｇｈｔ６５０で染色した。次いで、試料を洗浄し、固定し、再洗浄し、フローサイトメトリー分析のためにＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、分析は抗ＣＳＰ抗体で生存可能なスポロゾイト（溶解されていない）を検出することによって実施した。

希釈１：１０でプールされたマウス血清試料でインキュベートした後、スポロゾイトの生存率は、ＲＮＡ構築物３１及び３３を除くほとんどの構築物によって大きな影響を受けた（図１６Ａ）。希釈１：１００では、スポロゾイトの生存率は、ほとんどの構築物の影響を受けなかったが、Ｍｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）で観察されたものと同様に、ＲＮＡ構築物３５、３７、３９、４１、２、２３、２６、４５、２９、３０、２２、２４、及び２５は、スポロゾイトの生存率を低減させ、ＲＮＡ構築物２、２３、２９及び２２は、スポロゾイト生存率に非常に大きな影響を有する（図１６Ｂ）。１：１０００の希釈では、Ｍｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）で観察されたものと同様に、依然としてスポロゾイト生存率に影響を与えることができたＲＮＡ構築物３５、３７、２３、及び２２（図１６Ｃ）を除いて、プールされたマウス血清でインキュベートした後のスポロゾイト生存率は、ほとんどの構築物に対するビヒクルの生存率に類似する。低希釈でのビヒクル試料について、スポロゾイトの生存率に対する小さな非特異的効果が観察された（図１６Ｄ）。

（７）ＰｆＣＳＰ完全長タンパク質または特異的ペプチドからの総結合及び解離
ＲＮＡ構築物３１、３３、３５、３７、２９、３０、２、４２、８、２６、３４、３９、４１、２３、２４、２５、２２、及び４５（実施例１に記載するように）で免疫化したマウスからの血清中に存在する抗体の、ビオチン化完全長ＰｆＣＳＰ、接合部＋少数の反復ペプチドまたは主要な往復ペプチドへの結合及び解離を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定した。ＳＰＲ測定で使用されるポリペプチドを以下の表１３に示す。簡潔に述べると、ビオチン化完全長ＰｆＣＳＰ、接合部＋少数の反復ペプチド及び主要な反復ペプチドを各々、ＢｉａｃｏｒｅＴ２００機器の異なるフローセルに固定化し、第４のフローセルを基準として空のままにした。血清試料を、分析緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０、０．２２μｍろ過）で希釈し、分析物の相互作用分析（会合及び解離）のために１０μＬ／分の流速を使用して実行した。血清中の抗体の会合を５分間測定し、解離を１５分間測定した。分析は、個別に調製された希釈液を用いて３回実施した。緩衝液ブランクは、定期的に実装され、基準に使用された。血清試料結合データの評価は、２つのパラメータ：ａ）力価の相対比較としての結合シグナルの高さ、及びｂ）最大シグナル（残留応答％）に対する解離を計算することによって決定された、５分及び１５分後の結合シグナルを計算することによって、解離に基づく抗体：抗原複合体安定性の評価に関して実施した。残留応答％値が高いほど、複合体安定性が高い。

完全長ＰｆＣＳＰ、接合部＋少数の反復ペプチド、または主要な反復ペプチドに結合する、異なる構築物との免疫化時に生成される抗体の能力を、ＳＰＲによって評価した（図１７Ａ）。完全長ＰｆＣＳＰへの最も高い結合は、全ての完全長構築物（ＲＮＡ構築物２、４２、８、２６、２３、及び４５）、ＲＮＡ構築物３９、Ｍｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）及びＲＮＡ構築物２２について観察された。接合部＋少数の反復ペプチドへの最も高い結合は、ＲＮＡ構築物３９、ＲＮＡ構築物４１、全ての完全長構築物（ＲＮＡ構築物２、４２、８、２６、２３及び４５）、及びＲＮＡ構築物２５について観察された。最後に、全ての完全長構築物（ＲＮＡ構築物２、４２、８、２６、２３、及び４５）、Ｍｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）及びＲＮＡ構築物２２について、主要な反復ペプチドへの最も高い結合が観察された。

３つの抗原に対する異なる構築物による免疫化時に生成された抗体の解離は、抗体と抗原との間の相互作用の強度の測定として、解離の１５分後の残留結合の割合を決定することによっても評価された（図１７Ｂ）。試験した全ての構築物は、完全長ＰｆＣＳＰについて５０％以上の残留結合を示した。完全長ＰｆＣＳＰタンパク質からの最も高い残留結合（より遅い解離を反映する）は、Ｍｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）について、ＲＮＡ構築物２６、３９、８、２３、及び２２について観察された。接合部＋少数の反復ペプチドへの最も高い残存結合が、ＲＮＡ構築物３９、４１、２５、２６、２３、及び４２について観察された。最後に、Ｍｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）について、ＲＮＡ構築物２６、８、２３、２、３９及び２２について、主要な反復ペプチドへの最も高い残存結合が観察された。

（８）ＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔアッセイ
脾細胞全体からＴ細胞応答を誘発するＲＮＡ構築物の能力もまた、フルオロスポットアッセイによって評価した。このアッセイでは、異なるフルオロフォア結合抗体の使用は、免疫化したマウスの脾細胞によるインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、インターロイキン（ＩＬ）－２及び（腫瘍壊死因子アルファ）ＴＮＦαの産生を同時に定量化することを可能にする。特に、提供されるポリリボヌクレオチドは、組換えＰｆＣＳＰ、ＭＨＣ－Ｉ、及び／またはＭＨＣ－ＩＩペプチドに応答する抗体の産生を誘導するその能力について評価することができる。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドは、そのような構築物で免疫化した対象（例えば、マウス）からの脾細胞が、本明細書に記載されるようなペプチド（複数可）でインキュベートされた後、本明細書に記載されるようなフルオロスポットアッセイにおいて、１つ以上の炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、またはＩＬ－２）のＴ細胞分泌を呈す場合、有用な免疫応答を誘導することが決定される。

ＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔアッセイを、製造業者の指示（Ｍａｂｔｅｃｈ）に従って、マウスＩＦＮ－γ／ＩＬ－２／ＴＮＦ－α ＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔ^ＰＬＵＳキットを用いて実施した。ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの凍結脾細胞を解凍し、ＤＰＢＳで２回洗浄した後、培養培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％の熱不活性化仔牛胎仔血清（ＦＣＳ）＋１％の非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）＋１％のピルビン酸ナトリウム＋１％のＨＥＰＥＳ＋０．５％のペニシリン／ストレプトマイシン、＋０．１％のβ－メルカプトエタノール）に再懸濁した。

細胞カウンターを使用して各試料の細胞濃度を決定した後、合計５×１０^５個の脾細胞を各ウェルに添加し、表１４に示されるペプチドを用いて、３７℃にてエクスビボで一晩再刺激した。ＲＮＡ構築物２、６、８、２２～２６、２８～３１、３３～３５、３７、３９、４１、４２、及び４５について、ＰｆＣＳＰ－ＦＬペプチドプール（ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐ）、ＭＨＣ－Ｉペプチドプール、ＭＨＣ－ＩＩペプチドプールまたは対照（陰性対照：ｇｐ７０－ＡＨ１（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ；配列番号：４２５）、４μｇ／ｍＬ；陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ）を使用した。翌日、これらのサイトカインの産生を検出するために、抗ＩＦＮ－γ、抗ＩＬ－２、及び抗ＴＮＦ－α抗体をウェルに添加し、次いで、異なるフルオロフォアとコンジュゲートされた二次抗体を添加した。蛍光スポットを、ＭａｂｔｅｃｈＩＲＩＳＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔプレートリーダーを使用してカウントした。

ＲＮＡ構築物８７、８８、９１、１００、及び１０４について、ＰｆＣＳＰ－ＦＬペプチドプール（ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ＰＥＰ）または対照（陰性対照：Ｔｒｐ１（ＴＡＰＤＮＬＧＹＡ；配列番号４３８）、４μｇ／ｍＬ；陽性対照：コンカナバリンＡ、２μｇ／ｍＬ）を使用した。翌日、これらのサイトカインの産生を検出するために、抗ＩＦＮ－γ、抗ＩＬ－２、及び抗ＴＮＦ－α抗体をウェルに添加し、次いで、異なるフルオロフォアとコンジュゲートされた二次抗体を添加した。蛍光スポットを、ＭａｂｔｅｃｈＩＲＩＳＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔプレートリーダーを使用してカウントした。

ＲＮＡ構築物８７、８８、９１、１００、及び１０４について、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐによる刺激の前に、これらの細胞集団を分離するＭＡＣＳによって、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞応答を評価した。具体的には、脾細胞をＭＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、ビオチン標識抗体カクテルを細胞に添加し、混合し、２～８℃で５分間インキュベートした。次いで、ＭＡＣＳ緩衝液を再び添加し、続いて抗ビオチンマイクロビーズを添加して、２～８℃で１０分間インキュベートした。カラムを、それらにＭＡＣＳ緩衝液を添加し、ＭＡＣＳ緩衝液がカラムを完全に通過することを可能にすることによって調節した。次いで、細胞懸濁液をカラムに添加し、続いてＭＡＣＳ緩衝液で洗浄し、（ネガティブ選択法を使用するため）目的の集団を含むフロースルーをチューブに収集した。次いで、ＭＡＣＳ単離ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞を脾細胞全体についてカウントし、フルオロスポットプレート１ウェル当たり１×１０^５細胞を添加した。骨髄由来樹状細胞（ウェル当たり５×１０^４）を、抗原提示のためにＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞に添加した。

図１８に示されるように、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐ及び／またはＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドによる刺激時に、ＲＮＡ構築物２４を除いて、試験したＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞において、ＩＦＮ－γ産生細胞を検出した。試験したＲＮＡ構築物（ＲＮＡ構築物２４を除く）で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐによる刺激後、５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約１００のＩＦＮ－γ産生細胞の平均を有した。ＲＮＡ構築物２、２３、２８、または４１で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐで刺激した後、５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約６００のＩＦＮ－γ産生細胞で最も高い平均を有した。試験したＲＮＡ構築物（ＲＮＡ構築物２４を除く）で免疫化したマウス由来の脾細胞は、ＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドによる刺激後、５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約３００のＩＦＮ－γ産生細胞の平均を有した。ＲＮＡ構築物２、２８、３０、及び４１で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドで刺激した後、５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約６００のＩＦＮ－γ産生細胞で最も高い平均を有した。対照的に、ＭＨＣ－Ｉ特異的ペプチドでの刺激時に、試験したＲＮＡ構築物２、２３、または２８でのみ免疫化したマウス由来の脾細胞は、Ｔ細胞ＩＦＮ－γ分泌の活性化を呈した（５×１０^５の脾細胞当たり平均で少なくとも約３００のＩＦＮ－γ産生細胞を有する）。

図１９に示されるように、ＴＮＦ－α産生細胞は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐまたはＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドで刺激すると、全てのＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞において検出されたが、ＭＨＣ－Ｉ特異的ペプチドでは検出されなかった。試験したＲＮＡ構築物２３、２５、２８、３５、３７、３９、または４１で免疫化したマウス由来の脾細胞は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐでの刺激後、５×１０^５の脾細胞当たり平均で少なくとも５０のＴＮＦ－α産生細胞を有した。ＲＮＡ構築物２３で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐで刺激した後、５×１０^５の脾細胞当たり約１００のＴＮＦ－α産生細胞で最も高い平均を有した。試験したＲＮＡ構築物（ＲＮＡ構築物２４、２９、及び３４を除く）で免疫化したマウス由来の脾細胞は、ＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドによる刺激後、５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約５０のＴＮＦ－α産生細胞の平均を有した。ＲＮＡ構築物２８、３５、３７、４１、または４２で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドによる刺激後、５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約１００のＴＮＦ－α産生細胞で最も高い平均を有した。対照的に、ＭＨＣ－Ｉ特異的ペプチドで刺激すると、試験したＲＮＡ構築物２、８、２６、２８、３５、３７、または４２で免疫化したマウスからの脾細胞のみが、Ｔ細胞ＴＮＦ－α分泌の活性化を呈した。

図２０に示されるように、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐ及び／またはＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドによる刺激時に、ＩＬ－２産生細胞は、大部分のＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞において検出された。試験したＲＮＡ構築物（ＲＮＡ構築物２４を除く）で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐによる刺激後、５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約１００のＩＬ－２産生細胞の平均を有した。ＲＮＡ構築物２、２３、２８、または４１で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐで刺激した後、最も高い平均（５×１０^５個の脾細胞当たり少なくとも約３５０～約８００のＴＮＦ－α産生細胞）を有した。試験したＲＮＡ構築物（ＲＮＡ構築物２４を除く）で免疫化したマウス由来の脾細胞は、ＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドによる刺激後、５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約３００のＩＬ－２産生細胞の平均を有した。ＲＮＡ構築物３０または４１で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドによる刺激後、５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約８００のＴＮＦ－α産生細胞で最も高い平均を有した。ＭＨＣ－Ｉ特異的ペプチドによる刺激では、ほとんど応答がなかった。

図２１に示されるように、ＩＬ－２及びＩＦＮ－γの両方を分泌するＴ細胞は、ＭＨＣ－Ｉ特異的ペプチドではなく、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐまたはＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドで刺激したときに、大部分のＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞において検出された。試験したＲＮＡ構築物（ＲＮＡ構築物２４を除く）で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐによる刺激後、５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約５０のＩＬ－２及びＩＦＮ－γ産生細胞の平均を有した。ＲＮＡ構築物、２３または４１で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐで刺激した後、最も高い平均（５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約３００のＩＬ－２／ＩＦＮ－γ産生細胞を有した。試験したＲＮＡ構築物（ＲＮＡ構築物２４を除く）で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドによる刺激後、５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約１５０のＩＬ－２／ＩＦＮ－γ産生細胞の平均を有した。ＲＮＡ構築物２、２８、３０、または４１で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドで刺激した後、５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約３５０のＩＬ－２／ＩＦＮ－γ産生細胞で最も高い平均を有した。ＭＨＣ－Ｉ特異的ペプチドによる刺激では、ほとんど応答がなかった。

図２２及び図２３に示されるように、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αの両方を分泌するか、またはＩＬ－２及びＴＮＦ－αの両方を分泌するＴ細胞の数は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐ、ＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチド、またはＭＨＣ－Ｉ特異的ペプチドによる刺激時に、試験したＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞において低かった。例えば、試験したＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐでの刺激後、またはＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドでの刺激後に、５×１０^５の脾細胞当たり約２０のＩＦＮ－γ／ＴＮＦ－α産生細胞またはＩＬ－２／ＴＮＦ－α産生細胞未満の平均を有した。

図２４に示されるように、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、及びＴＮＦ－αを分泌するＴ細胞は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐまたはＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドによる刺激時に、大部分のＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの脾細胞において検出されたが、ＭＨＣ－Ｉ特異的ペプチドによる刺激時には検出されなかった。試験したＲＮＡ構築物（ＲＮＡ構築物２４、２９、及び３０を除く）で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐによる刺激後、５×１０^５の脾細胞当たりの少なくとも平均約１０のＩＦＮ－γ／ＩＬ－２／ＴＮＦ－α産生細胞を有した。ＲＮＡ構築物２３または４１で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＰｆＣＳＰ－ＦＬ＿ｐｅｐで刺激した後、最も高い平均を有した（それぞれ、５×１０^５の脾細胞当たり約５５及び約４０のＩＦＮ－γ／ＩＬ－２／ＴＮＦ－α産生細胞）。試験したＲＮＡ構築物（ＲＮＡ構築物２４及び２９を除く）で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドによる刺激後、５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約２５のＩＦＮ－γ／ＩＬ－２／ＴＮＦ－α産生細胞の平均を有した。ＲＮＡ構築物２、２８、３５、３７、４１、または４２で免疫化したマウスからの脾細胞は、ＭＨＣ－ＩＩ特異的ペプチドによる刺激後、５×１０^５の脾細胞当たり少なくとも約５０のＩＦＮ－γ／ＩＬ－２／ＴＮＦ－α産生細胞で最も高い平均を有した。ＭＨＣ－Ｉ特異的ペプチドによる刺激では、ほとんど応答がなかった。

図２５～図３１に示されるように、ＲＮＡ構築物１００及び１０４について観察された応答は、ＲＮＡ構築物８７、８８、及び９１について観察された応答よりも低かった。ビヒクル単独で注射したマウスからの脾細胞から応答は観察されなかった。免疫化したマウスからの脾細胞の非特異的ペプチドＴｒｐ１または培養培地のみとのインキュベーションも、細胞からの応答を誘発しなかった。

単離されたＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞からＴ細胞応答を誘発するＲＮＡ構築物８７、８８、９１、１００、及び１０４の能力を、これらの特定の細胞集団のＭＡＣＳ分離後に、フルオロスポットアッセイによって評価した。図３２～図４５に示されるように、ＰｆＣＳＰ－ＦＬタンパク質に及ぶ重複ペプチドでインキュベートすると、異なる構築物で免疫化したマウスからのＣＤ４Ｔ細胞は、単独で、または異なる組み合わせで、ＩＦＮγ、ＩＬ－２、及びＴＮＦαなどの炎症誘発性サイトカインを産生した（図３２～図３８）。全てのＲＮＡ構築物について同様のＣＤ４Ｔ細胞応答が観察された。一方で、ＣＤ８Ｔ細胞からは応答は観察されなかった（図３９～図４５）。応答は、ビヒクル群についても、または非特異的ペプチドＴｒｐ１または培養培地でのインキュベーション時にも観察されなかった。

したがって、本実施例は、特定のポリリボヌクレオチドが、例えば、フルオロスポットアッセイを使用して評価される、１つ以上の炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、及び／またはＩＬ－２）を分泌するＴ細胞の活性化によって特徴付けられる免疫応答を効果的に誘導することを実証する。１つのＲＮＡ構築物を除く全てのＲＮＡ構築物は、少なくとも１つの炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、またはＩＬ－２）に対して分泌するＴ細胞の活性化によって特徴付けられる免疫応答を誘導した。

結果を考慮して、ペプチドプール内のペプチドを分析し、ＭＨＣ－Ｉペプチドプールとのインキュベーション時に生成されたデータが、ＣＤ８Ｔ細胞応答を刺激する各構築物の能力を表していないことが見出だされた。個々のペプチドの分析後、ＣＳＰのＮ末端に存在する２つのペプチドのみが、細胞を刺激する能力を示した。したがって、Ｎ末端を有する構築物のみが検出可能な応答を有した。他の全ての構築物について、ＭＨＣ－Ｉペプチドプールによる応答の不在は、構築物がＣＤ８Ｔ細胞応答を誘発できなかったことを意味しなかった。

（９）スポロゾイト免疫蛍光アッセイ
提供されるポリリボヌクレオチドは、ＰｆＣＳＰ発現Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍベルゲイ（ＰｂＰｆ）スポロゾイト上で天然ＰｆＣＳＰに結合し得る抗体の産生を誘導するその能力について評価することができる。いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドは、そのようなポリリボヌクレオチドで免疫化した対象（例えば、マウス）からの血清が、本明細書に記載されるようなスポロゾイト免疫蛍光アッセイにおいて、ＰｂＰｆスポロゾイト上の天然ＰｆＣＳＰに結合することが示される場合、有用な免疫応答を誘導するように決定される。

スポロゾイト免疫蛍光アッセイにおいて、スポロゾイトをＰＢＳ中の２％のホルムアルデヒドで室温で２０分間固定した。次いで、スポロゾイトを、スピン－Ｘ遠心チューブフィルターで０．４５μｍの酢酸セルロースで洗浄し、さらなる実験のために４℃で維持した。試料当たり４，０００個のＰｆＣＳＰ発現Ｐ．ベルゲイスポロゾイトを、５μＬの総体積で１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）－ＰＢＳ中で調製した。スポロゾイトを、１％のＢＳＡ－ＰＢＳ（１０倍の段階希釈、１：１０^３～１：１０^８）中で希釈した５μＬの血清（陽性対照（例えば、抗ＰｆＣＳＰ２Ａ１０ｍＡｂＩＶ）、またはＲＮＡ構築物（実施例１に記載されるように）のいずれかで免疫化したマウスから）と混合した。試料を暗所にて湿度のあるチャンバ内で４℃で一晩インキュベートした。翌日、試料を、１％のＢＳＡ－ＰＢＳ（最終濃度２０μｇ／ｍＬ）中のＡｌｅｘａ６４７ロバ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）で暗所にて３０分間インキュベートした。フローサイトメトリーによる取得前に、試料を冷ＰＢＳで１１倍希釈した。異なる希釈でのスポロゾイト集団の平均抗原提示細胞（ＡＰＣ）強度を計算し、対数変換した。カットオフ値を、記載の方法（Ｆｒｅｙｅｔａｌ．１９９８）に従って決定し、線形回帰から力価値を補間するために使用した。

図４７Ａに示されるように、ＲＮＡ構築物３９は、ＰｂＰｆスポロゾイト上で天然のＰｆＣＳＰに対する高レベルの抗体を誘導した（少なくとも約１０^６（対数変換後少なくとも約６）の中央値相互エンド力価を呈する）。異なる希釈で、構築物３９で免疫化したマウスからの血清は、異なる希釈で抗ＰｆＣＳＰ２Ａ１０ｍＡｂＩＶで免疫化したマウスからの血清（少なくとも約対数１０^５～対数１０^６（対数変換後に少なくとも約５～６）の中央値相互エンド力価を呈する）と比較して、ＰｂＰｆスポロゾイト上で天然ＰｆＣＳＰに対する抗体を誘導する能力において、より可変であった（少なくとも約１０^５～１０^７（対数変換後、少なくとも約５～７の中央値相互エンド力価を呈する）。追加的に、図４９Ａに示されるように、残りのＲＮＡ構築物または１００μｇの２Ａ１０モノクローナル抗体を注射したマウスと比較して、ＲＮＡ構築物３９、４１、２、８、２３、２６、２８、４２、４５、２９、及び２２で免疫化したマウスについて、より高い力価のＰｆＣＳＰ結合抗体が観察された。

スポロゾイトＩＦＡ実験もまた、ＲＮＡ構築物２、２２、２３、２９、及び３９を評価するために実施した。図５０に示されるように、実験１において、全ての試験した構築物からの血清は、２Ａ１０を注射された対照からの血清よりも、スポロゾイト上のＰｆＣＳＰへのより高い結合を示した。実験２及び３では、ＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの血清及びＭｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）で免疫化したマウスからの血清について、同様の結合が観察された。

したがって、本実施例は、本明細書に提供されるＲＮＡ構築物が、スポロゾイト免疫蛍光アッセイを使用して評価されるように、ＰｂＰｆスポロゾイト上で天然ＰｆＣＳＰに結合する抗体の産生によって特徴付けられる免疫応答を効果的に誘導したことを実証する。例えば、ＲＮＡ構築物３９、４１、２、８、２３、２６、２８、４２、４５、２９、及び２２で免疫化したマウスからの血清は、抗ＰｆＣＳＰ２Ａ１０ｍＡｂＩＶで免疫化したマウスからの血清と比較して、ＰｂＰｆスポロザイト上で天然のＰｆＣＳＰに対するより強い抗体応答を誘導したことが示された（少なくともおよそ対数１０^５～対数^６の中央値相互エンド力価を呈す）。

（１０）サーカムスポロゾイト沈降反応（ＣＳＰＲ）アッセイ
提供されるポリリボヌクレオチドは、生存可能なスポロゾイト上でＣＳＰ反応を誘発することができる抗体の産生を誘導するその能力について評価することができる。いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドは、そのような構築物で免疫化した対象（例えば、マウス）からの血清が、本明細書に記載されるように、フローサイトメトリーによって測定されるように、生存可能なスポロゾイト上でのＣＳＰの沈降を誘導することが示されている場合、有用な免疫応答を誘導することが決定される。

サーカムスポロゾイト沈降反応（ＣＳＰＲ）アッセイでは、１２，０００個のＰｂＰｆスポロゾイトを、（陽性対照（例えば、抗ＰｆＣＳＰ２Ａ１０ｍＡｂＩＶ）またはＲＮＡ構築物（実施例１に記載されるように）のいずれかで免疫化したマウスからの）１７％の血清とともに３７℃で４５分間インキュベートした。次に、試料を氷上に置き、５μｇ／ｍＬのヨウ化プロピジウムで１０分間インキュベートし、フローサイトメトリーによって取得する前に、冷ＰＢＳで２１回希釈した。ＣＳＰＲは、前方散乱光幅（ＦＳＣ－Ｗ）によって評価される推定スポロゾイトによって測定した。データを、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＣｙｔＥｘｐｅｒｔ２．０ソフトウェアを使用して分析した。

図４７Ｂに示されるように、ＲＮＡ構築物３９で免疫化したマウスからの血清は、ビヒクルを投与されたマウスからの血清（少なくとも約１１７５の平均ＦＳＣ－Ｗによって示される）と比較して、サーカムスポロゾイト沈降（少なくとも約１２３０の平均ＦＳＣ－Ｗによって呈される）を増大させた。抗ＰｆＣＳＰ２Ａ１０ｍＡｂで免疫化したマウスからの血清は、ＲＮＡ構築物３９ＩＶで免疫化したマウスからの血清と比較して（少なくとも約１２２０の平均ＦＳＣ－Ｗによって呈される）、サーカムスポロゾイト沈降に対して同様の効果を有した。さらに、図４９Ｃに示されるように、ＲＮＡ構築物２、８、２３、２６、２８、４２、４５、２９、または２２で免疫化したマウスからの血清は、残りのＲＮＡ構築物２Ａ１０またはビヒクルで注射されたマウスからの血清よりも高いＣＳＰＲを誘発した。

ＣＳＰＲはまた、３つの実験にわたってＲＮＡ構築物２、２２、２３、２９、及び３９について評価した。実験１では、ビヒクルを注射したマウスからの血清と比較して、ＲＮＡ構築物２、２３、２９及び２２についてより高いＣＳＰＲが観察された。２Ａ１０を注射したマウスもまた、より高いＣＳＰＲを有した。実験２及び３では、ＲＮＡ構築物２及び２３について、ならびにＭｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）について観察されたものと同様のレベルで最も高いのＣＳＰＲが観察された。

したがって、本実施例は、本明細書に提供されるＲＮＡ構築物が、例えば、サーカムスポロゾイト沈降反応（ＣＳＰＲ）アッセイを使用して評価される、生存可能なスポロゾイト上でＣＳＰ沈降を誘発する抗体の産生によって特徴付けられる免疫応答を効果的に誘導したことを実証する。例えば、ＲＮＡ構築物２、８、２３、２６、２８、４２、４５、２９、及び２２で免疫化したマウスからの血清は、抗ＰｆＣＳＰ２Ａ１０ｍＡｂで免疫化したマウスからの血清と比較して、より強い応答を誘導したことが示された。

（１１）細胞毒性
提供されるポリリボヌクレオチドは、スポロゾイト生存率に対する阻害効果を有する抗体の産生を誘導するその能力について評価することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、提供されるポリリボヌクレオチドは、そのような構築物で免疫化した対象（例えば、マウス）からの血清が、細胞毒性アッセイにおいて生存可能なスポロゾイトを低減させることが示される場合、有用な免疫応答を誘導することが決定される。

細胞毒性アッセイにおいて、１２，０００個のＰｂＰｆスポロゾイトを、（陽性対照（例えば、抗ＰｆＣＳＰ２Ａ１０ｍＡｂＩＶ）またはＲＮＡ構築物（実施例１に記載されるように）のいずれかで免疫化したマウスからの）１７％の血清とともに３７℃で４５分間インキュベートした。次に、試料を氷上に置き、５μｇ／ｍＬのヨウ化プロピジウムで１０分間インキュベートし、フローサイトメトリーによって取得する前に、冷ＰＢＳで２１回希釈した。ＣＳＰＲは、ＦＳＣ－Ｗｉｄｔｈの平均によって評価される推定されるスポロゾイトの長さによって測定した。生存率は、ＧＦＰ^＋ＰＩ^－、ＧＦＰ^－ＰＩ^＋及びＧＦＰ^＋ＰＩ^＋スポロゾイトの合計に対するＧＦＰ^＋ＰＩ^－スポロゾイトの割合として定義した。データを、ＣｙｔＥｘｐｅｒｔ２．０ソフトウェアを使用して分析した。

以下の実験では、ＰｂＰｆスポロゾイトを、１：５の比でＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）マトリゲル（登録商標）マトリックスと氷上で混合した。各条件に対して、ミックスを１２，０００個のスポロゾイトを含有する５μＬの反応に分けた。３７℃で５分間重合した後、１μＬの血清（１７％の最終濃度、陽性対照（例えば、抗ＰｆＣＳＰ２Ａ１０ｍＡｂＩＶ）またはＲＮＡ構築物（実施例１に記載されるように）のいずれかで免疫化したマウスから）を添加した。３７℃で４５分後、試料を氷上に１０分間置いて解重合させ、続いて５μｇ／ｍＬのヨウ化プロピジウムで１０分間インキュベートし、フローサイトメトリーによって取得する前に、最終的に冷ＰＢＳで２１回希釈した。陰性対照群からのＧＦＰ^＋ＰＩ^－スポロゾイトの数を使用して、試料にわたるスポロゾイト回復を正規化した。生存率は、陰性対照と比較したＧＦＰ^＋ＰＩ^－スポロゾイトの割合として定義した。データを、ＣｙｔＥｘｐｅｒｔ２．０ソフトウェアを使用して分析した。

実証されるように、図４７Ｃ、ならびに図４９Ｄ及び図４９Ｅにおいて、様々なＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの血清は、ビヒクルを投与したマウスからの血清（少なくとも約９５％の生存可能なスポロゾイトの平均値によって呈される）と比較して、懸濁液中の生存可能なスポロゾイトを低減させた（少なくとも約８０％の生存可能なスポロゾイトの平均値によって呈される）。ＲＮＡ構築物２、８、２３、２６、２８、４２、４５、２９、及び２２で免疫化したマウスからの血清を用いたインキュベーションは、２Ａ１０モノクローナル抗体で受動的に免疫化したマウスからの血清についても観察されるように、スポロゾイトの生存率のより高い低下をもたらす。さらに、図４７Ｄ、図４９Ｄ、及び図４９Ｅに実証されるように、特定のＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの血清は、３Ｄ（すなわち、マトリゲル）において生存可能なスポロゾイトを大幅に低減させた（少なくとも約４０％の生存可能なスポロゾイトの平均値によって呈される）。抗ＰｆＣＳＰ２Ａ１０ｍＡｂＩＶで免疫化したマウスからの血清は、懸濁液（少なくとも約０％の生存可能なスポロゾイトの平均値によって呈される）及び３Ｄ（すなわち、マトリゲル）（少なくとも約１０％の生存可能なスポロゾイトの平均値によって呈される）中の生存可能なスポロゾイトを大幅に低減させた。スポロゾイトの生存率の低下は、インキュベーションがＰＢＳで行われたときよりもマトリゲルで行われたときにより顕著であった。

ＲＮＡ構築物２、２２、２３、２９、及び３９で免疫化したマウスからの血清の細胞毒性を、３つの実験にわたって上述のような懸濁液（ＰＢＳ中）及び３Ｄマトリゲルマトリックスの両方で評価した。図５３Ａ～図５３Ｂに示されるように、実験１では、ＰＢＳ中のスポロゾイト生存率における最も高い影響が、ＲＮＡ構築物２、２３及び２２について観察された。実験２及び３では、陽性対照であるＭｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）について観察されたものと同様に、ＲＮＡ構築物２、２３、２９及び２２で免疫化したマウスからの血清でインキュベートされたスポロゾイトについて最低の生存率が観察された。スポロゾイトの生存率の低下は、インキュベーションがＰＢＳで行われたときよりもマトリゲルで行われたときにより顕著であった。

したがって、本実施例は、試験したＲＮＡ構築物が、細胞毒性アッセイを使用して評価されるように、生存可能なスポロゾイトを差次的に低減させることが示されている抗体の産生によって特徴付けられる免疫応答を誘導したことを実証する。例えば、懸濁液中では、ほとんどのＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの血清は、ビヒクルと比較して、生存可能なスポロゾイト（少なくとも約８０％の生存可能なスポロゾイトの平均値によって呈される）を低減させ、全ての試験したＲＮＡ構築物で免疫化したマウスからの血清は、３Ｄで生存可能なスポロゾイト（すなわち、マトリゲル）を減少させた（少なくとも約４０％の生存可能なスポロゾイトの平均値によって呈される）。

（１２）インビトロ滑走アッセイ
提供されるポリリボヌクレオチドは、スポロゾイト運動性に対する阻害効果を有する抗体の産生を誘導するその能力について評価することができる。いくつかの実施形態では、ポリリボヌクレオチドは、そのような構築物で免疫化した対象（例えば、マウス）からの血清が、本明細書に記載されるように、インビトロ滑走アッセイにおいてスポロゾイト滑走速度を低減させることが示される場合、有用な免疫応答を誘導するように決定される。

滑走アッセイでは、５，０００個のＰｂＰｆのスポロゾイトをダルベッコ修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）中に再懸濁し、５％の血清（陽性対照抗ＰｆＣＳＰ２Ａ１０ｍＡｂＩＶまたはＲＮＡ構築物（実施例１に記載されるように）のいずれかで免疫化したマウスから）でインキュベートした。得られた懸濁液を１８ウェルスライドに移し、４℃で３分間４００×ｇで遠心分離した。次いで、スライドを、ＬＥＤ照明システム（Ｃｏｌｉｂｒｉ２）、ＣＣＤカメラ（ＡｘｉｏＣａｍＭＲ）を備え、ＡｘｉｏＶｉｓｉｏｎソフトウェア（バージョン４．８．２．０）によって制御される倒立落射蛍光ワイドフィールド顕微鏡（ＡｘｉｏＯｂｓｅｒｖｅｒＺ．１）のインキュベーションチャンバ（インキュベーションシステムＳ）内で３分間、３７℃、５％のＣＯ_２で平衡化した。次いで、４７０ｎｍのＬＥＤ及び一致するフィルターキューブ（４３ＨＥ）を使用して、ＥＣ「Ｐｌａｎ－Ｎｅｏｆｌｕａｒ」１０×／０．３対物レンズを用いて、タイムラプス動画を２分間、毎秒１枚の画像の速度で記録し、ＧＦＰを励起及び検出し、したがって、スポロゾイトを視覚化した。取得の最初の２分間の平均スポロゾイト速度は、ＦｉｊｉからのＭＴｒａｃｋ２プラグインを使用して決定した。

図４７Ｅに示されるように、ＲＮＡ構築物３９で免疫化したマウスからの血清（少なくとも約１．３μｍ／ｓの平均速度によって呈される）は、ビヒクルを投与されたマウスからの血清（少なくとも約１．１μｍ／ｓの平均速度によって呈される）と比較して、スポロゾイト滑走速度を低減させた。抗ＰｆＣＳＰ２Ａ１０ｍＡｂＩＶで免疫化したマウスからの血清は、（少なくとも約０．６μｍ／ｓの平均速度によって呈される）スポロゾイト滑走速度の最も大きな低減を示した。さらに、図４９Ｂに示されるように、ＲＮＡ構築物３１、４１、２、２３、２８、２９、及び２２で免疫化したマウスまたは２Ａ１０で受動的に免疫化したマウスからの血清でインキュベートしたスポロゾイトは、ビヒクル単独で免疫化したマウスからの血清でインキュベートしたスポロゾイトと比較して、滑走速度の同様の低下を示した。

ＲＮＡ構築物２、２２、２３、２９、及び３９を特異的に評価するために、３つのスポロゾイト滑走実験を実施した。図５１に示されるように、全ての実験において、全てのＲＮＡ構築物は、ビヒクル群と比較して、スポロゾイトの滑走運動性の阻害を示した。実験１では、ＲＮＡ構築物２３、２９、及び２２について、滑走の最も強い阻害が、２Ａ１０群について観察された阻害と同様の程度で観察された。実験２では、ＲＮＡ構築物２３について、Ｍｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）と同様に、最も強い阻害が観察された。実験３では、滑走の阻害は、試験した全ての構築物について、かつＭｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）についても非常に類似していた。

したがって、本実施例は、ほとんどのＲＮＡ構築物が、例えば、インビトロ滑走アッセイを使用して評価される、スポロゾイトの運動性を低減させることが示される抗体の産生によって特徴付けられる免疫応答を誘導したビヒクルと比較して実証する。例えば、ＲＮＡ構築物４１、２３、２８、２９、及び２２は、陽性対照と同様に、スポロゾイトの運動性を低減させることが示されている抗体の産生によって特徴付けられる免疫応答を誘導した。

実施例３：例示的なポリリボヌクレオチドエンコードＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物の保護研究
本実施例は、マウスで評価されるように、本開示によって提供される特定のポリリボヌクレオチドの免疫応答を誘導する能力を文書化する。

提供されるポリリボヌクレオチドは、対象をスポロゾイトチャレンジから保護する能力について評価することができる。いくつかの実施形態では、提供されるポリリボヌクレオチドは、ポリリボヌクレオチドで免疫化され、スポロゾイトで注射された対象（例えば、マウス）が、例えば、本明細書に記載されるようなチャレンジアッセイにおいて、血液寄生虫血症をモニタリングすることによって評価されるように、感染レベルの低減を実証する場合、有用な免疫応答を誘導することが決定される。

チャレンジアッセイを実施し、Ｃ５７ＢＬ／６雌マウス（０日目において７週齢、約２０ｇ）を、０日目及び２１日目に、１μｇのＲＮＡ構築物（実施例１に記載される）で、またはビヒクル（ｎ＝７マウス／群）で、筋肉内（ＩＭ）に２回免疫化した。血清中の抗体力価及び機能性の分析のために、血液試料を７、１４、２０、２８、３５、４２、及び４９日目に採取した。５０日目に、感染した雌Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ蚊の唾液腺から新たに解剖された５０００個のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ発現ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍベルゲイＡＮＫＡＧＦＰ蛍光スポロゾイトを微量注入することによって、スポロゾイトチャレンジを実施した。感染に対する保護を、実験６０日目（チャレンジ後１０日目）まで、フローサイトメトリーによって血液寄生虫血症をモニタリングすることによって評価した。陽性対照群を、感染の１日前に、１００μｇの抗ＰｆＣＳＰ２Ａ１０ｍＡｂＩＶで受動的に免疫化した。

実施例２に上述のように、抗体力価をＥＬＩＳＡによって評価した。チャレンジ前試料（４９日目）は、固定スポロゾイトアッセイ、スポロゾイト運動性アッセイの阻害、生成された抗体の細胞毒性活性を定量化するためのアッセイ、及び実施例２に上述のようなＣＳＰ沈降反応の発生を評価するアッセイを含む機能性試験でも使用される（データは実施例２に示される）。表１５に例示されるように、動物を複数の処置受容群に分けた。

図４６Ａに示されるように、ＲＮＡ構築物２をコードするポリリボヌクレオチドで免疫化したマウス（実施例１に記載されるように）は、ＰｆＣＳＰを発現するＰ．ベルゲイスポロゾイトでチャレンジした後、最も高いレベルの保護を呈し、７匹のマウスのうちの６匹が１０日目に生存した。ＲＮＡ構築物２６、２８、４２をコードするポリリボヌクレオチド、ΔＮ末端のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするポリリボヌクレオチド（ＲＮＡ構築物２２）、及び主要な反復及びＣ末端のみを含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド構築物をコードするポリリボヌクレオチド（ＲＮＡ構築物２９）で免疫化したマウスの約７０％を保護した。これは、陽性対照抗ＰｆＣＳＰ２Ａ１０ｍＡｂＩＶによる免疫化後の保護と同等であった。他の試験した構築物で免疫化したマウスの５０％未満が、チャレンジ後に保護を呈し、ＲＮＡ構築物３１、３３、３４、及び２４での免疫化は、保護を提供しなかった。図４６Ｂ及び図４６Ｃに示されるように、全ての試験したＲＮＡ構築物で免疫化したマウスは、それぞれ、３５日目及び４９日目のＰｆＣＳＰ完全長タンパク質に対するＥＬＩＳＡアッセイで測定したときに、高い力価を示した。図４６Ｄは、チャレンジ研究中のＲＮＡ構築物２、２３、及び３９による免疫化によって生成された抗体と、特異的ＰｆＣＳＰエピトープとの間の結合を示す。全体として、完全長ＲＮＡ構築物２及び２３は、主要な反復領域において、エピトープ４２Ｃ及び２７Ｃへのより高い結合を示した。

したがって、本実施例は、特定のポリリボヌクレオチドが、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍによる感染のレベルを阻害及び／または低減するのに十分な免疫応答を効果的に誘導したことを実証する。例えば、ＲＮＡ構築物２は、チャレンジ後、マウスの約８５％を保護し、ＲＮＡ構築物２２、２６、２８、２９、及び４２は、チャレンジ後、マウスの約７０％を保護した。

選択された構築物について、上述のように、チャレンジ実験を２回繰り返した（実験２及び実験３）。ただし、これらの２つの実験で陽性対照が変更され、マウスを、陽性対照として５μｇのＭｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）で２回ＩＭ免疫化した。

結果を図４８に示す。図４８Ａから明らかなように、ＲＮＡ構築物２、２２、２３、２９、及び３９を用いて、合計で３つのチャレンジ実験を実施した。実験１からの結果を上述した。実験２では、全てのビヒクルマウスが、スポロゾイト注射後４日目までに血液期寄生虫血症を有していたのに対し、ＲＮＡ構築物２２で免疫化した１／７匹のマウスが保護され、ＲＮＡ構築物２及びＲＮＡ構築物２９で免疫化した３／７匹のマウスが保護され、ＲＮＡ構築物３９で免疫化した４／７匹のマウスが感染から保護された。ＲＮＡ構築物２３免疫化群及びＭｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）免疫化群の両方からの全てのマウスは、スポロゾイトチャレンジ後１１日目まで感染しないままであり、したがって完全に保護された。実験３では、スポロゾイト注射後３日目に既に全てのビヒクル対照マウスにおいて血液期感染が検出された。Ｍｏｓｑｕｉｒｉｘ（登録商標）で免疫化した７匹のマウスのうち６匹が完全に保護され、ＲＮＡ構築物２で免疫化した５／７匹のマウスが保護され、ＲＮＡ構築物２３で免疫化した４／７匹のマウスが感染から保護され、ＲＮＡ構築物２９、ＲＮＡ構築物２２、及び３９で免疫化したマウスは、７匹中４匹未満しか保護されなかった。図４８Ｂに示されるように、ＲＮＡ構築物２、２２、２３、２９、及び３９で免疫化したマウスは、それぞれ、３５日目及び４９日目のＰｆＣＳＰ完全長タンパク質に対するＥＬＩＳＡアッセイで測定した場合、高い力価を示した。

実施例４：ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド構築物をコードする例示的なポリリボヌクレオチドの投与後のヒトにおけるインビボ免疫原性
本実施例は、本明細書に記載されるように、異なるマラリアポリペプチドをコードする例示的なポリリボヌクレオチドが、ヒトにおいてインビボで免疫原性であり得ることを実証する。具体的には、本実施例は、本明細書に提供されるような製剤化ＲＮＡ構築物の安全性、忍容性、及び免疫原性の評価のためのランダム化用量漸増試験を提供する。この実施例で評価される例示的な製剤化ＲＮＡ構築物は、ＲＮＡ構築物２３またはＲＮＡ構築物３９である。

試験参加基準
本実施例に記載されるように、試験に含まれる対象は：
ｉ．１８歳～５５歳。
ｉｉ．１８．５ｋｇ／ｍ^２超かつ３５ｋｇ／ｍ^２未満の肥満度指数を有し、初回来院時（「来院０」）に少なくとも４５ｋｇの体重を有する。
ｉｉｉ．報告された病歴データ、身体検査、１２誘導心電図（ＥＣＧ）、バイタルサイン、及び臨床検査結果に基づいて、医療従事者（例えば、治験責任医師）の臨床判断で健康である。来院０の前３ヶ月（例えば、９０日）の間に、疾患として定義されるが、療法の著しい変更または疾患の悪化に対する入院を必要としない、既存の安定した疾患（例えば、肥満、高血圧など）を有する健康な対象を含めることができる。
ｉｖ．来院０から開始し、第３の用量の製剤化ＲＮＡ構築物または製剤化ＲＮＡ構築物の組み合わせを受けた後１２週間まで、治験薬（「ＩＭＰ」）を用いた別の試験に登録しないことに同意する。
ｖ．来院０の６ヶ月前から開始して第３の用量の製剤化ＲＮＡ構築物または製剤化ＲＮＡ構築物の組み合わせを受けてから２８日後まで継続的に、ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ（ＣＤＣ）に定義されているマラリア流行地域に旅行していない、及び旅行しないことに同意する。
ｖｉ．来院０におけるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）－１及び－２の血液検査結果が、陰性である。
ｖｉｉ．来院０におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２について陰性の血液検査結果を有する。
ｖｉｉｉ．来院０におけるＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の血液検査結果が陰性であり、抗Ｃ型肝炎ウイルス（抗ＨＣＶ）抗体が陰性であるか、来院０における抗ＨＣＶが陽性である場合に、ＨＣＶＰＣＲ検査結果が陰性である。
ｉｘ．対象が妊娠可能性を有する場合、対象は、来院０における血清ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ＨＣＧ）妊娠検査結果が陰性であり、製剤化ＲＮＡ構築物または製剤化ＲＮＡ構築物の組み合わせの各投与前の尿妊娠検査結果が陰性である。閉経後または恒久的不妊化を受けた女性被験者は、妊娠可能性を有するとはみなされない。
ｘ．対象が妊娠可能性を有する場合、対象は、来院０から開始して第３の用量の製剤化ＲＮＡ構築物または製剤化ＲＮＡ構築物の組み合わせを受けてから９０日後まで継続的に、非常に有効な形態の避妊を実施することに同意する。
ｘｉ．対象が妊娠可能性を有する場合、対象は、来院０から開始して第３の用量の製剤化ＲＮＡ構築物または製剤化ＲＮＡ構築物の組み合わせを受けてから９０日後まで継続的に、試験中に生殖補助の目的で卵（卵子、卵母細胞）を供与または凍結保存しないことに同意する。
ｘｉｉ．対象が男性であり、精管切除術を受けておらず、妊娠可能性のあるパートナーと性的に活発である場合、来院０から開始して第３の用量の製剤化ＲＮＡ構築物または製剤化ＲＮＡ構築物の組み合わせを受けてから９０日後まで継続的に、試験中にコンドームを使用し、妊娠可能性のある性的パートナーと非常に効果的な形態の避妊を実践することに同意する。
ｘｉｉｉ．対象が男性である場合、来院０から開始して第３の用量の製剤化ＲＮＡ構築物または製剤化ＲＮＡ構築物の組み合わせを受けてから９０日後まで継続的に、精子提供を控える。

試験除外基準
以下を有する対象は、本実施例に記載される試験から除外される：
ｉ．被験者が報告した病歴に基づくＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫血症（任意の種）の病歴。
ｉｉ．ＣＤＣに定義されているマラリア流行地域に、自身の生涯のいずれかの時点で６ヶ月超継続的に居住していること。
ｉｉｉ．来院０から開始して第３の用量の製剤化ＲＮＡ構築物または製剤化ＲＮＡ構築物の組み合わせを受けてから９０日後まで継続的に、授乳育児に参加するか、または妊娠するもしくは子供の父親になる意思。
ｉｖ．ワクチンまたは脂質などのワクチン構成要素に対する重篤な有害反応の病歴、及びアナフィラキシーの病歴、ならびに蕁麻疹、呼吸困難、血管浮腫、及び／または腹痛などの関連症状を含む（参加から除外されない：小児として百日咳ワクチンに対するアナフィラキシー有害反応を有した対象）。
ｖ．以下の医学的状態の存在または病歴：
ａ．制御不能または中等度または重度の呼吸器疾患（例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患）；ＵＳＮａｔｉｏｎａｌＡｓｔｈｍａＥｄｕｃａｔｉｏｎａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎＰｒｏｇｒａｍＥｘｐｅｒｔＰａｎｅｌｒｅｐｏｒｔ，２０２０で定義される喘息重症度の症状－例えば、以下のボランティアを除外する：
ｉ．短時間作用型救急吸入器（通常はベータ２アゴニスト）を毎日使用するか、または
ｉｉ．高用量の吸入コルチコステロイド（ＡｍｅｒｉｃａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｌｌｅｒｇｙＡｓｔｈｍａ＆Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙによる）を使用するか、または
ｉｉｉ．過去１年間に以下のいずれかを有する：
１．経口／非経口コルチコステロイドで治療された症状の１回超の悪化、または
２．喘息のための入院または挿管の必要性。
ｂ．１型または２型糖尿病（スクリーニング時に食事のみまたはヘモグロビン上昇Ａ１Ｃ（ＨｂＡ１ｃ）≧６．５％で制御された症例を含む）（除外されない：単離された妊娠糖尿病の病歴）。
ｃ．高血圧：
ｉ．高血圧の病歴がある場合、またはスクリーニング中に血圧の上昇が検出された場合は、良好に制御されていない血圧を除外する。良好に制御された血圧は、投薬の有無にかかわらず、一貫して≦１４０ｍｍＨｇの収縮期かつ≦９０ｍｍＨｇの拡張期と定義され、単独のより高い数値の短い事例では、スクリーニング及び登録時に≦１５０ｍｍＨｇの収縮期及び≦１００ｍｍＨｇの拡張期でなければならない。
ｄ．スクリーニングの５年以内の悪性腫瘍（限局性基底細胞癌または皮膚の扁平上皮癌を除く）
ｅ．心血管疾患（例えば、心筋炎、心膜炎、心筋梗塞、うっ血性心不全、心筋症、または臨床的に顕著な不整脈）の現在または病歴（ただしそのような疾患が医療従事者（例えば、治験責任医師）の判断における本試験への参加に関連するとみなされなる場合を除く）。
ｆ．異常なスクリーニングＥＣＧ（すなわち、フリデリシア（ＱＴｃＦ）による補正ＱＴ間隔＞１５０ｍｓ、心筋虚血または急性または年齢判定不能の心筋梗塞を示唆する顕著なＳＴ－Ｔ波の変化、左心室肥大、単独の心室早期収縮を含む任意の非洞性リズム、完全な右脚または左脚ブロック［ＱＲＳ＞１２０ｍｓ］、第２度または第３度房室［ＡＶ］ブロック）、または治験責任医師の裁量によるＥＣＧの他の臨床的に顕著な異常。
ｇ．医師によって診断された出血障害（例えば、因子欠損症、凝固障害、または特別な予防措置を必要とする血小板障害）、または
ｈ．発作障害：過去３年以内の発作（複数可）の病歴。また、ボランティアが過去３年間の任意の時点で発作（複数可）を予防または治療するために薬を使用した場合は除外する。
ｖｉ．双極性障害、大うつ病性障害、統合失調症、自閉症、注意欠陥多動性障害を含む、試験によって概説されるように、治験責任医師の裁量にて、治験参加とフォローアップを妨げる可能性のある文書化された主要な精神疾患。
ｖｉｉ．免疫調節障害に関連する以下の疾患：
ａ．一次免疫不全、
ｂ．固形臓器または骨髄移植の病歴、
ｃ．無脾症：機能的脾臓の欠如をもたらす任意の状態、または
ｄ．甲状腺自己免疫疾患、多発性硬化症、乾癬などを含むがこれらに限定されない自己免疫疾患の存在または病歴。
ｖｉｉｉ．以前に任意の時点で承認または治験中のマラリアワクチンを接種したことがあるか、またはヒトマラリアチャレンジ研究に参加したことがある。
ｉｘ．来院０日前の２８日以内に治験薬を受ける。
ｘ．来院０から開始して第３の用量の製剤化ＲＮＡ構築物または製剤化ＲＮＡ構築物の組み合わせを受けてから２８日後まで継続的に、計画された任意の非試験ワクチン接種。季節性インフルエンザ及びＣＯＶＩＤ－１９ワクチンは許可されているが、ＩＭＰ投与の少なくとも１４日前か、またはその２８日後に投与する必要がある。破傷風などの緊急ワクチン接種は、医学的に指示された場合に投与することができる。
ｘｉ．来院１の前１２０日以内に受けたか、または来院０から開始して来院２１まで継続的に（例えば、第３の用量の投与の３６５日後）計画された、血液／血漿生成物、モノクローナル抗体または免疫グロブリン。
ｘｉｉ．各ＩＭＰ投与の前後２８日以内に抗原注射によるアレルギー治療を受けた。
ｘｉｉｉ．全身性コルチコステロイド（全身性コルチコステロイドが、≧２０ｍｇ／ｄ以上のプレドニゾンまたは同等物の用量で≧１４日間投与される場合）を含む、現在のまたは計画された免疫抑制療法による治療は、来院０で開始して、第３の用量の製剤化ＲＮＡ構築物または製剤化ＲＮＡ構築物の組み合わせまで継続的に行う。関節内、嚢内、または局所（皮膚または眼）コルチコステロイドは許可されている。
ｘｉｖ．来院０の前の１年以内にアルコール乱用または薬物中毒の病歴があるか、または（過去５年以内に）薬物乱用の病歴があり、医療従事者（例えば、治験責任医師）の意見では、被験者として試験に参加した場合、その福祉を損なう可能性があるか、またはプロトコル指定の評価を妨げる、制限する、または混乱させる可能性がある。
ｘｖ．ワクチン注射及び／または注射部位での局所反応の評価に影響を与え得る任意の既存の状態、例えば、入れ墨、重度の傷跡など。
ｘｖｉ．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｕｎｃｉｌｆｏｒＨａｒｍｏｎｉｓａｔｉｏｎ（ＩＣＨ）のＥ６の定義による脆弱な個人、すなわち、その臨床試験へのボランティアへの意志が正当化されているかどうかにかかわらず、参加に関連する利益の期待、または参加を拒否した場合の階層の上級メンバーからの報復的な反応によって不当に影響を受ける可能性がある個人。
ｘｖｉｉ．来院０時の医療従事者（例えば、治験責任医師）の裁量で、グレード≧２の異常またはグレード１の異常の定義を満たす任意のスクリーニング血液学及び／または血液化学検査値。毒性ガイダンスに含まれていない異常であるが臨床的に顕著なパラメータを有する被験者は、医療従事者（例えば、治験責任医師）の裁量で適格とみなされ得る。
ｘｖｉｉｉ．マラリア流行地域に６ヶ月超居住したことがある。
ｘｉｘ．鎌状赤血球症。

試験－ＲＮＡ構築物２３
ＲＮＡ構築物２３を、３用量スケジュールで異なる用量の組み合わせで評価して、安全、忍容性、及び免疫原性の用量の組み合わせを選択し、免疫原性に対する第３の用量の影響を評価する。

ＲＮＡ構築物２３の安全性、忍容性、及び免疫原性を評価するために、対象をコホートに分ける。コホートは、５：１の活性：プラセボにランダム化される。評価は、全てのコホートにおけるセンチネル対象に時間差用量漸増スキーマを使用する。異なるコホートは、異なる用量のＲＮＡ構築物２３を受ける。表１６は、使用される用量の組み合わせの概要を提供する。等張ＮａＣｌ溶液（０．９％）を受けるプラセボコホートも評価される。

第１の用量のＲＮＡ構築物２３を、１日目に対象に投与する。およそ８週間後、第２の用量のＲＮＡ構築物２３を対象に投与する。第３の用量のＲＮＡ構築物２３を、第２の用量のおよそ１８週間後に投与する。

試験－ＲＮＡ構築物３９
ＲＮＡ構築物３９を、３用量スケジュールで異なる用量の組み合わせで評価して、安全、忍容性、及び免疫原性の用量の組み合わせを選択し、免疫原性に対する第３の用量の影響を評価する。

ＲＮＡ構築物３９の安全性、忍容性、及び免疫原性を評価するために、対象をコホートに分ける。コホートは、４：１の活性：プラセボにランダム化される。評価は、全てのコホートにおけるセンチネル対象に時間差用量漸増スキーマを使用する。コホート１は、３μｇ用量の製剤化ＲＮＡ構築物３９構築物を受け、コホート２は、１０μｇ以下の用量の製剤化ＲＮＡ構築物３９構築物を受け、コホート３は、３０μｇ以下の用量の製剤化ＲＮＡ構築物３９構築物を受ける。プラセボコホートは、等張ＮａＣｌ溶液（０．９％）を受ける。

第１の用量のＲＮＡ構築物３９を、１日目に対象に投与する。第２の用量のＲＮＡ構築物３９を、およそ数週間後（例えば、５７日目頃）に対象に投与する。第２の用量のおよそ１８週間後（例えば、１８３日目頃）に、第３の用量のＲＮＡ構築物３９を投与する。

試験後の評価
対象は、製剤化ＲＮＡ構築物（例えば、ＲＮＡ構築物２３またはＲＮＡ構築物３９）の各用量後に、以下の一次転帰測定値について評価される：
ｉ．各用量の最大７日後に記録される注射部位における非自発的な報告による局所反応の頻度（例えば、疼痛、紅斑／赤み、及び／または硬結／腫れ）、
ｉｉ．各用量から最大７日後に記録される非自発的な報告による全身反応の頻度（嘔吐、下痢、頭痛、疲労、筋／関節痛、及び発熱）の頻度、
ｉｉｉ．各用量後２８日までに少なくとも１つのＡＥが発生する対象の頻度、及び
ｉｖ．各投与後２８日までに少なくとも１つの受診を要した有害事象（ＭＡＡＥ）を有する対象の頻度。

対象を評価して、第３の投与の２４週後までに少なくとも１つのＳＡＥが発生する各コホートの対象の頻度を決定する。

対象における抗体レベル（例えば、抗ＣＳＰ抗体）に関する記述統計は、様々な時点で評価され得る。例えば、抗原特異的血清及び／または血漿抗体のレベルは、ＥＬＩＳＡまたは同様のアッセイを使用して評価することができる。加えて、血清及び／または血漿抗体の機能性及び／または親和性を評価する。

１つ以上の用量の投与後の、対象の他の免疫応答もまた評価する。例えば、製剤化ＲＮＡ構築物中の抗原に対するＣＤ４＋及びＣＤ８＋のＴ細胞応答は、多重染色フローサイトメトリーを使用して測定することができる。ワクチン誘導形質芽細胞及び／またはメモリーＢ細胞は、フローサイトメトリーを使用して測定することができ、炎症マーカー、ケモカイン、及び／またはサイトカインのレベルを測定することができる。

１つ以上の用量の投与後の対象におけるＲＮＡ発現パターンは、例えば、ＲＮＡＳｅｑ技術を使用して評価することができる。

均等物
当業者であれば、本明細書に記載の技術の特定の実施形態の多くの均等物を認識するであろうし、または慣例的な実験しか用いずにそれらを確認することができるであろう。本開示の範囲は、上記の説明に限定されることを意図されているのではなく、以下の特許請求の範囲に明記されているとおりである。

Claims

１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含むポリペプチドをコードするポリリボヌクレオチドであって、前記ポリペプチドが、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の１つ以上の反復を含み、前記ポリペプチドが、ＮＰＮＡのアミノ酸配列を含まない、前記ポリリボヌクレオチド。
１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分を含むポリペプチドをコードするポリリボヌクレオチドであって、前記ポリペプチドが、ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の５つ以上の反復を含む、前記ポリリボヌクレオチド。
前記１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分の各々が、配列番号１によるアミノ酸配列の２５以上の連続したアミノ酸を含む、請求項１または２に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の２つ以上の反復を含む、請求項１または３に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域またはその部分を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域またはその部分のうちの少なくとも１つが、Ｋ９３、Ｌ９４、Ｋ９５、及びＱ９６の欠失を含み、アミノ酸番号付けが、配列番号１に対応する、請求項６に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアントを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域バリアントのうちの少なくとも１つが、Ｋ９３Ａ変異、Ｌ９４Ａ変異、またはその両方を含み、アミノ酸番号付けが、配列番号１に対応する、請求項８に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその任意の部分を含まない、請求項１～９のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその任意の部分を含まない、請求項１～１１のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分を含む、請求項２～１３のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分が、アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＡまたはＮＰＮＡＮＰを含む、請求項１４に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、正確に１つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分を含み、前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分が、アミノ酸配列ＮＡＮＰの合計少なくとも２つかつ最大で３５の反復を含む、請求項１４または１５に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、少なくとも２つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域部分を含み、前記ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域部分が、各々、アミノ酸配列ＮＡＮＰの少なくとも４つかつ最大で７つの反復を含む、請求項１４または１５に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、少なくとも２つのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの少数の反復領域を含み、各ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの少数の反復領域が、前記アミノ酸配列ＮＡＮＰＮＶＤＰの３つの反復を含む、請求項１７に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、前記アミノ酸配列ＮＰＮＡを含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその任意の部分を含まない、請求項２～１３のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分が、存在する場合、以下のＮ末端からＣ末端の順で、
（ｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端領域またはその部分、
（ｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＮ末端端部領域またはその部分、
（ｉｉｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ接合部領域、その部分、またはそのバリアント、
（ｉｖ）前記ＮＡＮＰＮＶＤＰのアミノ酸配列の１つ以上の反復、
（ｖ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰの主要な反復領域またはその部分、及び
（ｖｉ）１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰＣ末端領域またはその部分、である、請求項１～１９のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、１つ以上のヘルパー抗原を含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記１つ以上のヘルパー抗原が、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸ヒドロリラーゼ抗原、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期抗原１（ａ）、（ＬＳＡ－１（ａ））、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期抗原１（ｂ）（ＬＳＡ－１（ｂ））、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍトロンボスポンジン関連匿名タンパク質（ＴＲＡＰ）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期関連タンパク質１（ＬＳＡＰ１）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期関連タンパク質２（ＬＳＡＰ２）、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＵＩＳ３、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＵＩＳ４、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＥＴＲＡＭＰ１０．３、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝特異的タンパク質１（ＬＩＳＰ－１）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝特異的タンパク質２（ＬＩＳＰ－２）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ肝病期抗原３（ＬＳＡ－３）、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＥＸＰ１、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＥ１４０、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ網状赤血球結合タンパク質ホモログ５（Ｒｈ５）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍグルタミン酸リッチタンパク質（ＧＡＲＰ）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫感染赤血球表面タンパク質２（ＰＩＥＳＰ２）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍシステインリッチ防御抗原（ＣｙＲＰＡ）、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＲｉｐｒ、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＰ１１３、またはそれらの組み合わせである、請求項２１に記載のポリリボヌクレオチド。
前記１つ以上のヘルパー抗原が、Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ抗原を含み、好ましくは、前記１つ以上のヘルパー抗原が、ＡｎｏｐｈｅｌｅｓｇａｍｂｉａｅＴＲＩＯを含む、請求項２２に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、多量体化領域を含む、請求項１～２３のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、分泌シグナルを含む、請求項１～２４のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記分泌シグナルが、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ分泌シグナル、好ましくは、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰ分泌シグナルを含むか、またはそれからなる、請求項２５に記載のポリリボヌクレオチド。
前記分泌シグナルが、異種分泌シグナルを含むか、またはそれからなる、請求項２５に記載のポリリボヌクレオチド。
前記異種分泌シグナルが、非ヒト分泌シグナルを含むか、またはそれからなる、請求項２７に記載のポリリボヌクレオチド。
前記異種分泌シグナルが、ウイルス分泌シグナルを含むか、またはそれからなり、好ましくは、前記ウイルス分泌シグナルが、
（ａ）ＨＳＶ－１もしくはＨＳＶ－２分泌シグナルであって、さらにより好ましくは、前記ウイルス分泌シグナルが、ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）分泌シグナルを含むか、またはそれからなる、前記ＨＳＶ－１もしくはＨＳＶ－２分泌シグナル、あるいは、
（ｂ）Ｅｂｏｌａウイルス分泌シグナルであって、さらにより好ましくは、前記ウイルス分泌シグナルが、Ｅｂｏｌａウイルススパイク糖タンパク質（ＳＧＰ）分泌シグナルを含むか、またはそれからなる、前記Ｅｂｏｌａウイルス分泌シグナル、を含むか、またはそれからなる、請求項２７に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、膜貫通領域を含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記膜貫通領域が、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ膜貫通領域を含むか、またはそれからなり、好ましくは、前記Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ膜貫通領域が、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー領域を含むか、またはそれからなる、請求項３０に記載のポリリボヌクレオチド。
前記膜貫通領域が、異種膜貫通領域を含むか、またはそれからなり、好ましくは、前記異種膜貫通領域が、
（ａ）ヘマグルチン膜貫通領域を含まず、
（ｂ）ウイルス膜貫通領域を含むか、またはそれからなり、好ましくは、前記ウイルス膜貫通領域が、ＨＳＶ－１もしくはＨＳＶ－２膜貫通領域を含むか、またはそれからなり、さらにより好ましくは、前記ＨＳＶ膜貫通領域が、ＨＳＶｇＤ膜貫通領域を含むか、またはそれからなる、あるいは、
（ｃ）ヒト膜貫通領域を含むか、またはそれからなり、好ましくは、前記ヒト膜貫通領域が、ヒト崩壊促進因子グリコシルホスファチジルイノシトール（ｈＤＡＦ－ＧＰＩ）アンカー領域を含むか、またはそれからなる、請求項３０に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、分泌シグナルを含まない、請求項１～２４及び３０～３２のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、膜貫通領域を含まない、請求項１～２９のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、配列番号３３によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項１～３４のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、配列番号８１によるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項１～３４のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍが、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、請求項１～３６のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記１つ以上のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分が、１つ以上のＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍＣＳＰポリペプチド領域またはその部分であり、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍが、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ分離株３Ｄ７である、請求項１～３７のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリリボヌクレオチドが、単離されたポリリボヌクレオチドである、請求項１～３８のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリリボヌクレオチドが、操作されたポリリボヌクレオチドである、請求項１～３９のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
前記ポリリボヌクレオチドが、コドン最適化ポリリボヌクレオチドである、請求項１～４０のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド。
５’から３’の順で、
（ｉ）修飾ヒトアルファ－グロビン５’－ＵＴＲを含むか、またはそれからなる５’ＵＴＲ、
（ｉｉ）請求項１～４１のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド、
（ｉｉｉ）スプリットのアミノ末端エンハンサー（ＡＥＳ）メッセンジャーＲＮＡからの第１の配列及びミトコンドリアでコードされた１２ＳリボソームＲＮＡからの第２の配列を含むか、またはそれらからなる３’ＵＴＲ、及び
（ｉｖ）ポリＡ尾部配列、を含む、ＲＮＡ構築物。
５’キャップをさらに含む、請求項４２に記載のＲＮＡ構築物。
請求項１～３９のいずれか１項に記載の１つ以上のポリリボヌクレオチド、または請求項４２もしくは４３に記載の１つ以上のＲＮＡ構築物、を含む、組成物。
脂質ナノ粒子、ポリプレックス（ＰＬＸ）、脂質化ポリプレックス（ＬＰＬＸ）、またはリポソームをさらに含み、
前記１つ以上のポリリボヌクレオチドまたは前記１つ以上のＲＮＡ構築物が、前記脂質ナノ粒子、前記ポリプレックス（ＰＬＸ）、前記脂質化ポリプレックス（ＬＰＬＸ）、または前記リポソーム内に完全にもしくは部分的にカプセル化されている、請求項４４に記載の組成物。
請求項４４または４５に記載の組成物及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
請求項１～４１のいずれか１項に記載のポリリボヌクレオチド、請求項４２もしくは４３に記載のＲＮＡ構築物、請求項４４もしくは４５に記載の組成物、または請求項４６に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、マラリア感染を治療または予防する方法。
１つ以上の用量の前記医薬組成物を対象に投与することを含む、マラリア感染の治療または予防における使用のための、請求項４６に記載の医薬組成物。