CN120943942A - 特异性结合hpv的抗体 - Google Patents

特异性结合hpv的抗体

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CN120943942A
CN120943942A CN202511105972.1A CN202511105972A CN120943942A CN 120943942 A CN120943942 A CN 120943942A CN 202511105972 A CN202511105972 A CN 202511105972A CN 120943942 A CN120943942 A CN 120943942A
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hpv
antibodies
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黄维金
胡金盼
王萌
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Nanjing Novozan Biotechnology Co ltd
National Institutes for Food and Drug Control
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Abstract

本发明提供一组特异性结合HPV的抗体或其抗原结合片段。本发明还提供编码所述抗体或其抗原结合片段的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体、包含所述载体的宿主细胞、生成所述抗体的方法以及包含所述抗体的组合物。

Description

特异性结合HPV的抗体
技术领域
本发明提供一组特异性结合HPV的抗体或其抗原结合片段。本发明还提供编码所述抗体或其抗原结合片段的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体、包含所述载体的宿主细胞、生成所述抗体的方法以及包含所述抗体的组合物。
背景技术
宫颈癌和宫颈癌前病变严重威胁全世界妇女健康，临床学、分子生物学和流行病学调查已经证明人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是宫颈癌和宫颈非典型增生的主要病因。HPV是一组球形、微小、无包膜的环状双链DNA病毒，隶属于乳多空病毒科乳头瘤病毒属，其衣壳是由72个主要衣壳蛋白Ll蛋白五聚体构成的二十面体结构，1个病毒粒子上含有360个Ll蛋白单体，主要能引起人类皮肤、黏膜的增生性病变，目前HPV已经发现200多种亚型，根据致病性不同分为高危型(包括HPV16、18、31、33、35、39、45等)和低危型(包括HPV6、11等)。
目前中国批准上市的宫颈癌疫苗有多种，包括：葛兰素史克(GSK)公司的HPV 2价疫苗Cervarix(亚型为HPV 16、18)，默沙东公司HPV4价疫苗 和9价疫苗9(亚型为HPV 6、11、16、18、31、33、45、52、58)，万泰生物研发的二价HPV疫苗馨可宁，沃森生物研发的二价HPV疫苗沃泽惠。由于目前市售疫苗最多为9个亚型，因此越来越多的公司也在不断研发更多价型(如15价)的HPV疫苗。在疫苗研究中，单克隆抗体是疫苗抗原质控的重要工具，抗体水平是评价疫苗效果的标准，因此需要各种类型的特异性识别HPV的抗体，以能够对生产的疫苗以及疫苗保护效果进行更好的判断，并用于HPV的诊断、治疗和预防。
发明内容
一方面，本发明提供一种特异性结合HPV的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)如SEQ ID NO：1所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：2所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：3所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：4所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：5所示的CDR-L2，和如SEQ IDNO：6所示的CDR-L3；
(2)如SEQ ID NO：7所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：8所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：9所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：10所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：11所示的CDR-L2，和如SEQ IDNO：12所示的CDR-L3；
(3)如SEQ ID NO：13所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：14所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：15所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：16所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：17所示的CDR-L2，和如SEQID NO：18所示的CDR-L3；
(4)如SEQ ID NO：19所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：20所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：21所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：22所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：23所示的CDR-L2，和如SEQID NO：24所示的CDR-L3；
(5)如SEQ ID NO：25所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：26所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：27所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：28所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：29所示的CDR-L2，和如SEQID NO：30所示的CDR-L3；
(6)如SEQ ID NO：31所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：32所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：33所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：34所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：35所示的CDR-L2，和如SEQID NO：36所示的CDR-L3；
(7)如SEQ ID NO：37所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：38所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：39所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：40所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：41所示的CDR-L2，和如SEQID NO：42所示的CDR-L3；
(8)如SEQ ID NO：43所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：44所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：45所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：46所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：47所示的CDR-L2，和如SEQID NO：48所示的CDR-L3；
(9)如SEQ ID NO：49所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：50所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：51所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：52所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：53所示的CDR-L2，和如SEQID NO：54所示的CDR-L3；
在一个实施方案中，本发明抗体或其抗原结合片段包含：
(1)如SEQ ID NO：55所示的VH和如SEQ ID NO：56所示的VL；
(2)如SEQ ID NO：57所示的VH和如SEQ ID NO：58所示的VL；
(3)如SEQ ID NO：59所示的VH和如SEQ ID NO：60所示的VL；
(4)如SEQ ID NO：61所示的VH和如SEQ ID NO：62所示的VL；
(5)如SEQ ID NO：63所示的VH和如SEQ ID NO：64所示的VL；
(6)如SEQ ID NO：65所示的VH和如SEQ ID NO：66所示的VL；
(7)如SEQ ID NO：67所示的VH和如SEQ ID NO：68所示的VL；
(8)如SEQ ID NO：69所示的VH和如SEQ ID NO：70所示的VL；
(9)如SEQ ID NO：71所示的VH和如SEQ ID NO：72所示的VL；
在一个实施方案中，本发明抗体或其抗原结合片段包含：
(1)如SEQ ID NO：93所示的重链恒定区，和
(2)如SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92任一所示的轻链恒定区。
在一个实施方案中，本发明抗体或其抗原结合片段包含α重链、δ重链、ε重链、γ重链或μ重链。在一个实施方案中，本发明抗体或其抗原结合片段属于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类。在一个实施方案中，本发明抗体或其抗原结合片段包含λ轻链或κ轻链。在一个实施方案中，本发明抗体或其抗原结合片段为全长抗体。在一个实施方案中，本发明抗体或其抗原结合片段为选自Fv、scFv、Fab、Fab'、F(ab')2和xFab的抗体片段。在一个实施方案中，本发明抗体或其抗原结合片段为嵌合抗体或人抗体或其抗原结合片段。
一方面，本发明提供一种多核苷酸，其编码本发明的抗体或其抗原结合片段。
在一个实施方案中，本发明多核苷酸包含：
(1)SEQ ID NO：73和74；
(2)SEQ ID NO：75和76；
(3)SEQ ID NO：77和78；
(4)SEQ ID NO：79和80；
(5)SEQ ID NO：81和82；
(6)SEQ ID NO：83和84；
(7)SEQ ID NO：85和86；
(8)SEQ ID NO：87和88；
(9)SEQ ID NO：89和90；
一方面，本发明提供一种载体，其包含本发明的多核苷酸。
一方面，本发明提供一种宿主细胞，其包含本发明的多核苷酸或载体。在一个实施方案中，所述宿主细胞为真核细胞。在一个实施方案中，所述宿主细胞为CHO细胞。
一方面，本发明提供一种生成抗体或其抗原结合片段的方法，其包括：
(a)在适合于表达该抗体或其抗原结合片段的条件下培养本发明的宿主细胞，并
(b)任选地，回收该抗体或其抗原结合片段。
一方面，本发明提供一种组合物，其包含本发明的抗体或其抗原结合片段。
一方面，本发明提供本发明的抗体或其抗原结合片段或组合物，其用于检测用试剂。
一方面，本发明提供本发明的抗体或其抗原结合片段或组合物，其用于HPV疫苗的鉴别试验。
附图说明
图1-1显示本发明抗体F5-222的抗原结合曲线(ELISA)。
图1-2显示本发明抗体F5-422的抗原结合曲线(ELISA)。
图1-3显示本发明抗体F5-194的抗原结合曲线(ELISA)。
图1-4显示本发明抗体F5-212的抗原结合曲线(ELISA)。
图1-5显示本发明抗体F5-183的抗原结合曲线(ELISA)。
图1-6显示本发明抗体F5-155的抗原结合曲线(ELISA)。
图1-7显示本发明抗体F5-160的抗原结合曲线(ELISA)。
图1-8显示本发明抗体F5-398的抗原结合曲线(ELISA)。
图1-9显示本发明抗体F5-354的抗原结合曲线(ELISA)。
图2-1显示本发明抗体F5-222的病毒中和曲线。
图2-2显示本发明抗体F5-422的病毒中和曲线。
图2-3显示本发明抗体F5-194的病毒中和曲线。
图2-4显示本发明抗体F5-212的病毒中和曲线。
图2-5显示本发明抗体F5-183的病毒中和曲线。
图2-6显示本发明抗体F5-155的病毒中和曲线。
图2-7显示本发明抗体F5-160的病毒中和曲线。
图2-8显示本发明抗体F5-398的病毒中和曲线。
图2-9显示本发明抗体F5-354的病毒中和曲线。
具体实施方式
本文中的术语“抗体”以最广义使用,并且涵盖各种抗体结构,包括但不限于单克隆抗体,多克隆抗体,多特异性抗体(例如双特异性抗体),和抗体片段,只要它们展现出期望的抗原结合活性。
“抗原结合片段”指与完整抗体不同的分子,其包含完整抗体中结合完整抗体结合的抗原的部分。抗原结合片段的例子包括但不限于Fv,Fab,Fab’,Fab’-SH,F(ab’)2,xFab；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。
在用于本文时,术语“载体”指能够增殖与其连接的另一种核酸的核酸分子。该术语包括作为自身复制型核酸结构的载体及并入接受其导入的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导与其可操作连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
I.组合物和方法
在一个方面,本发明提供分离的结合HPV的抗体。
在某些实施方案中,提供了结合HPV的抗体。
A.例示性抗HPV抗体
在一个方面,本发明提供一种抗HPV抗体,其包含：
(1)如SEQ ID NO：1所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：2所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：3所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：4所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：5所示的CDR-L2，和如SEQ IDNO：6所示的CDR-L3；
(2)如SEQ ID NO：7所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：8所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：9所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：10所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：11所示的CDR-L2，和如SEQ IDNO：12所示的CDR-L3；
(3)如SEQ ID NO：13所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：14所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：15所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：16所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：17所示的CDR-L2，和如SEQID NO：18所示的CDR-L3；
(4)如SEQ ID NO：19所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：20所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：21所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：22所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：23所示的CDR-L2，和如SEQID NO：24所示的CDR-L3；
(5)如SEQ ID NO：25所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：26所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：27所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：28所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：29所示的CDR-L2，和如SEQID NO：30所示的CDR-L3；
(6)如SEQ ID NO:31所示的CDR-H1，如SEQ ID NO:32所示的CDR-H2，如SEQ ID NO:33所示的CDR-H3，如SEQ ID NO:34所示的CDR-L1，如SEQ ID NO:35所示的CDR-L2，和如SEQID NO:36所示的CDR-L3；
(7)如SEQ ID NO:37所示的CDR-H1，如SEQ ID NO:38所示的CDR-H2，如SEQ ID NO:39所示的CDR-H3，如SEQ ID NO:40所示的CDR-L1，如SEQ ID NO:41所示的CDR-L2，和如SEQID NO:42所示的CDR-L3；
(8)如SEQ ID NO:43所示的CDR-H1，如SEQ ID NO:44所示的CDR-H2，如SEQ ID NO:45所示的CDR-H3，如SEQ ID NO:46所示的CDR-L1，如SEQ ID NO:47所示的CDR-L2，和如SEQID NO:48所示的CDR-L3；
(9)如SEQ ID NO:49所示的CDR-H1，如SEQ ID NO:50所示的CDR-H2，如SEQ ID NO:51所示的CDR-H3，如SEQ ID NO:52所示的CDR-L1，如SEQ ID NO:53所示的CDR-L2，和如SEQID NO:54所示的CDR-L3；
在另一个方面,抗HPV抗体包含：
(1)如SEQ ID NO：55所示的VH和如SEQ ID NO：56所示的VL；
(2)如SEQ ID NO：57所示的VH和如SEQ ID NO：58所示的VL；
(3)如SEQ ID NO：59所示的VH和如SEQ ID NO：60所示的VL；
(4)如SEQ ID NO：61所示的VH和如SEQ ID NO：62所示的VL；
(5)如SEQ ID NO：63所示的VH和如SEQ ID NO：64所示的VL；
(6)如SEQ ID NO：65所示的VH和如SEQ ID NO：66所示的VL；
(7)如SEQ ID NO：67所示的VH和如SEQ ID NO：68所示的VL；
(8)如SEQ ID NO：69所示的VH和如SEQ ID NO：70所示的VL；
(9)如SEQ ID NO：71所示的VH和如SEQ ID NO：72所示的VL；
B.重组方法和组合物
可以使用重组方法和组合物来生成抗体,例如记载于US 4,816,567的。为了这些方法,提供了一种或多种编码抗体的分离的核酸。
在天然抗体或天然抗体片段的情况中需要两种核酸,一种用于轻链或其片段且一种用于重链或其片段。此类核酸编码包含抗体VL的氨基酸序列和/或包含VH的氨基酸序列(例如抗体的轻和/或重链)。这些核酸可以在相同的表达载体上或在不同的表达载体上。
在具有异二聚体重链的双特异性抗体的情况中,需要四种核酸,一种用于第一轻链,一种用于包含第一异单体Fc区多肽的第二轻链,一种用于第二轻链,而一种用于包含第二异单体Fc区多肽的第二重链。四种核酸可以包含在一种或多种核酸分子或表达载体中。此类核酸编码包含抗体的第一VL的氨基酸序列和/或包含包括第一异单体Fc区的第一VH的氨基酸序列和/或包含第二VL的氨基酸序列和/或包含包括第二异单体Fc区的第二VH的氨基酸序列(例如抗体的第一和/或第二轻和/或第一和/或第二重链)。这些核酸可以在相同的表达载体上或在不同的表达载体上,正常情况下,这些核酸位于两种或三种表达载体上,即一种载体可包含超过一种这些核酸。这些双特异性抗体的例子是CrossMab和T细胞双特异性药剂(见例如Schaefer,W.et al,PNAS,108(2011)11187-1191)。例如,异单体重链之一包含所谓的“节突变”(T366W和任选地S354C或Y349C之一)且另一包含所谓的“穴突变”(T366S,L368A和Y407V和任选地Y349C或S354C)(见例如Carter,P.et al.,Immunotechnol.2(1996)73)。
在一个实施方案中,提供了编码本文中报告的方法中使用的抗体的分离的核酸。
在又一个实施方案中,提供了包含此类核酸的一种或多种载体(例如表达载体)。
在又一个实施方案中,提供了包含此类核酸的宿主细胞。
在一个此类实施方案中,宿主细胞包含(例如已经用下述各项转化):
-在由形成二硫键的两条相同的轻链和两条相同的重链其包含VH和VL的片段构成的抗体的情况中:
(1)包含核酸的载体,所述核酸编码包含抗体VL的氨基酸序列和包含抗体VH的氨基酸序列,或
(2)第一载体和第二载体,所述第一载体包含编码包含抗体VL的氨基酸序列的核酸,所述第二载体包含编码包含抗体VH的氨基酸序列的核酸。
-在具有异二聚体重链的双特异性抗体的情况中:
(1)包含编码如下氨基酸序列的第一对核酸的第一载体,所述氨基酸序列之一包含抗体的第一VL且另一包含第一VH,和包含编码如下氨基酸序列的第二对核酸的第二载体,所述氨基酸序列之一包含抗体的第二VL且另一包含第二VH,或
(2)包含编码如下氨基酸序列的第一核酸的第一载体,所述氨基酸序列包含可变域之一(优选轻链可变域),包含编码如下氨基酸序列的一对核酸的第二载体,所述氨基酸序列之一包含轻链可变域且另一包含第一重链可变域,和包含编码如下氨基酸序列的一对核酸的第三载体,所述氨基酸序列之一包含与第二载体对应的另一轻链可变域且另一包含第二重链可变域,或
(3)包含编码如下氨基酸序列的核酸的第一载体,所述氨基酸序列包含抗体的第一VL,包含编码如下氨基酸序列的核酸的第二载体,所述氨基酸序列包含抗体的第一VH,包含编码如下氨基酸序列的核酸的第三载体,所述氨基酸序列包含抗体的第二VL,和包含编码如下氨基酸序列的核酸的第四载体,所述氨基酸序列包含抗体的第二VH。
在一个实施方案中,宿主细胞是真核的,例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如Y0,NS0,Sp20细胞)。在一个实施方案中,提供了生成抗HPV抗体的方法,其中该方法包括在适合于表达抗体的条件下培养包含编码抗体的核酸的宿主细胞,如上文提供的,并且任选地,自宿主细胞(或宿主细胞培养液)回收抗体。
对于抗HPV抗体的重组生成,将编码抗体的核酸(例如上文所描述的)分离,并插入一种或多种载体中,以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。此类核酸可以使用常规规程(例如通过使用能够特异性结合编码抗体重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)容易地分离和测序,或者通过重组方法生成或通过化学合成来获得。
适合于克隆或表达抗体编码载体的宿主细胞包括本文中所描述的原核或真核细胞。例如,可以在细菌中生成抗体,特别是在不需要糖基化和Fc效应器功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达,见例如US 5,648,237,US 5,789,199和US 5,840,523(还可见Charlton,K.A.,于Methods in Molecular Biology,第248卷,Lo,B.K.C.编,HumanaPress,Totowa,NJ(2003),第245-254页,其描述了抗体片段在大肠杆菌(E.coli.)中的表达)。表达后,可以将抗体在可溶性级分中自细菌细胞团糊分离,并可以进一步纯化。
在原核生物外,真核微生物诸如丝状真菌或酵母是适合于抗体编码载体的克隆或表达宿主,包括其糖基化途径已经“人源化”,导致生成具有部分或完全人的糖基化样式的抗体的真菌和酵母菌株。见Gerngross,T.U.,Nat.Biotech.22(2004)1409-1414；Li etal.,Nat.Biotech.24(2006)210-215。
适合于表达糖基化抗体的宿主细胞也自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)衍生。无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。已经鉴定出许多杆状病毒株,其可以与昆虫细胞一起使用,特别是用于转染草地夜蛾(Spodopterafrugiperda)细胞。
也可以利用植物细胞培养物作为宿主。见例如US 5,959,177,US 6,040,498,US6,420,548,US 7,125,978和US 6,417,429(其描述了用于在转基因植物中生成抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
也可以使用脊椎动物细胞作为宿主。例如,适应于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可以是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它例子是经SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚肾系(293或293细胞,如记载于例如Graham,F.L.et al.,J.Gen Virol.36(1977)59-74的)；幼年仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞托利(sertoli)细胞(TM4细胞,如记载于例如Mather,J.P.,Biol.Reprod.23(1980)243-252的)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；牛鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞,如记载于例如Mather,J.P.et al.,Annals N.Y.Acad.Sci.383(1982)44-68的；MRC 5细胞；和FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,包括DHFR-CHO细胞(Urlaub,G.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77(1980)4216-4220)；和骨髓瘤细胞系诸如Y0,NS0和Sp2/0。关于适合于抗体生成的某些哺乳动物宿主细胞系的综述,见例如Yazaki,P.and Wu,A.M.,Methods in Molecular Biology,第248卷,Lo,B.K.C.编,Humana Press,Totowa,NJ(2004),第255-268页。
C.测定法
可以通过本领域中已知的多种测定法对本文中提供的抗HPV抗体鉴定,筛选,或表征其物理/化学特性和/或生物学活性。
1.结合测定法和其它测定法
一方面,对本发明的抗体测试其抗原结合活性,例如通过已知的方法诸如ELISA,Western印迹等来进行。
另一方面,可使用竞争测定法来鉴定与参照抗HPV抗体竞争对HPV或其抗原的结合的抗体。在某些实施方案中,此类竞争性抗体结合与参照抗HPV抗体所结合表位相同的表位(例如线性或构象表位)。用于定位抗体所结合表位的详细例示性方法见Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols”,Methods inMolecular Biology vol.66(Humana Press,Totowa,NJ)。
在一种例示性竞争测定法中,在包含第一经标记抗体(其结合HPV或其抗原)(例如参照抗HPV抗体)和第二未标记抗体(其要测试与第一抗体竞争对HPV或其抗原的结合的能力)的溶液中温育固定化HPV或其抗原。第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照,在包含第一经标记抗体但不包含第二未标记抗体的溶液中温育固定化HPV或其抗原。在允许第一抗体结合HPV或其抗原的条件下温育后,除去过量的未结合抗体,并测量与固定化HPV或其抗原联合的标记物的量。如果测试样品中与固定化HPV或其抗原联合的标记物的量与对照样品相比实质性降低,那么这指示第二抗体与第一抗体竞争对HPV或其抗原的结合。参见Harlow and Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual ch.14(Cold Spring HarborLaboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
2.活性测定法
一方面,提供了用于鉴定具有生物学活性的抗HPV抗体的测定法。生物学活性可以包括例如抗HPV抗体抑制HPV感染宿主细胞。还提供了在体内和/或在体外具有此类生物学活性的抗体。
D.用于诊断和检测的方法和组合物
在某些实施方案中,本文中提供的任何抗HPV抗体可用于检测样品中HPV的存在。在用于本文时,术语“检测”涵盖定量或定性检测。在某些实施方案中,样品包含生物学样品，例如细胞或组织,诸如肿瘤组织；样品还包含疫苗成品或疫苗生产中HPV-VLP抗原原液。
在一个实施方案中,提供了在诊断或检测方法中使用的抗HPV抗体。在又一方面,提供了检测样品中HPV的存在的方法。在某些实施方案中,该方法包括在容许抗HPV抗体结合HPV或其抗原的条件下使样品与抗HPV抗体接触,如本文中所描述的,并检测是否在抗HPV抗体与HPV或其抗原之间形成复合物。此类方法可以是体外或体内方法。在一个实施方案中,使用抗HPV抗体来选择适合用抗HPV抗体治疗的受试者,例如其中患者感染了HPV，或怀疑感染HPV，或有接触HPV的风险。
在某些实施方案中,提供了经标记的抗HPV抗体。标记物包括但不限于直接检测的标记物或模块(诸如荧光,发色,电子致密,化学发光,和放射性标记物),和例如经由酶反应或分子相互作用间接检测的模块,诸如酶或配体。例示性的标记物包括但不限于放射性同位素32P,14C,125I,3H,和131I,荧光团诸如稀土螯合物或荧光素及其衍生物,罗丹明(rhodamine)及其衍生物,丹酰,伞形酮,萤光素酶,例如萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(美国专利No.4,737,456),萤光素,2,3-二氢酞嗪二酮,辣根过氧化物酶(HRP),碱性磷酸酶,β-半乳糖苷酶,葡糖淀粉酶,溶菌酶,糖类氧化酶,例如葡萄糖氧化酶,半乳糖氧化酶,和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,杂环氧化酶诸如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶(其与采用过氧化氢氧化染料前体的酶诸如HRP偶联),乳过氧化物酶,或微过氧化物酶,生物素/亲合素,自旋标记物,噬菌体标记物,稳定的自由基,等等。
E.药学配制剂
通过混合具有期望纯度的此类抗体与一种或多种任选的药学可接受载剂(Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编(1980))以冻干配制剂或水性溶液形式制备如本文中所描述的抗HPV抗体的药学配制剂。一般地,药学可接受载剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的,而且包括但不限于缓冲剂,诸如磷酸盐,柠檬酸盐,和其它有机酸；抗氧化剂,包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化己烷双胺；苯扎氯铵,苯索氯铵；酚,丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烃基酯,诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质,诸如血清白蛋白,明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物,诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸,诸如甘氨酸,谷氨酰胺,天冬酰胺,组氨酸,精氨酸或赖氨酸；单糖,二糖和其它碳水化合物,包括葡萄糖,甘露糖或糊精；螯合剂,诸如EDTA；糖类,诸如蔗糖,甘露醇,海藻糖或山梨醇；成盐相反离子,诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂,诸如聚乙二醇(PEG)。本文中的例示性的药学可接受载剂进一步包含间质药物分散剂诸如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP),例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白,诸如rHuPH20(Baxter International,Inc.)。某些例示性的sHASEGP和使用方法,包括rHuPH20记载于美国专利公开文本No.2005/0260186和2006/0104968。在一方面,将sHASEGP与一种或多种别的糖胺聚糖酶诸如软骨素酶组合。
例示性的冻干抗体配制剂记载于美国专利No.6,267,958。水性抗体配制剂包括那些记载于美国专利No.6,171,586和WO2006/044908的,后一种配制剂包含组氨酸-乙酸盐缓冲剂。
本文中的配制剂还可含有超过一种所治疗具体适应症所必需的活性组分,优选那些活性互补且彼此没有不利影响的组分。此类活性组分适于以有效用于所需目的的量而组合存在。
活性组分可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中(例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊),在胶状药物投递系统中(例如脂质体,清蛋白微球体,微乳剂,纳米颗粒和纳米胶囊),或在粗滴乳状液中。此类技术披露于Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版,Osol,A.编(1980)。
可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适的例子包括含有抗体的固体疏水性聚合物的半透性基质,该基质为成形商品形式,例如膜,或微胶囊。
用于体内施用的配制剂一般是无菌的。无菌性可容易地实现,例如通过穿过无菌滤膜过滤。
F.预防、治疗性方法和组合物
可以在预防或治疗性方法中使用本文中提供的任何抗HPV抗体。
在一个方面,提供了作为药物使用的抗HPV抗体。在又一些方面,提供了在预防或治疗HPV感染中使用的抗HPV抗体。在某些实施方案中,提供了在预防或治疗方法中使用的抗HPV抗体。在某些实施方案中,本发明提供了在预防具有HPV感染风险的个体的方法中使用的抗HPV抗体,所述预防包括对个体施用有效量的抗HPV抗体。在某些实施方案中,本发明提供了在治疗具有HPV感染的个体的方法中使用的抗HPV抗体,所述治疗包括对个体施用有效量的抗HPV抗体。在一个实施方案中,该抗体用于治疗HPV感染或延迟其进展。
依照任何上述实施方案的“个体”优选是人。在又一方面,本发明提供了抗HPV抗体在制造或制备药物中的用途。在一个实施方案中,所述药物用于治疗HPV感染。在又一个实施方案中,所述药物用于治疗HPV感染的方法,包括对具有HPV感染的个体施用有效量的所述药物。依照任何上述实施方案的“个体”可以是人。
如本文中使用的,术语“HPV感染”可以是例如口腔、皮肤表面、阴道、外阴、宫颈、肛门感染。
在又一方面,本发明提供了治疗HPV感染的方法。在一个实施方案中,所述方法包括对具有HPV感染的个体施用有效量的抗HPV。依照任何上述实施方案的“个体”可以是人。
在又一方面,本发明提供了药学配制剂,其包含本文中提供的任何抗HPV抗体,例如在任何上述治疗性方法中使用。在一个实施方案中,药学配制剂包含本文中提供的任何抗HPV抗体和药学可接受载剂。
在又一方面,本发明提供了药学配制剂,其包含本文中提供的任何抗HPV抗体,例如在任何上述治疗性方法中使用。在一个实施方案中,药学配制剂包含本文中提供的任何抗HPV抗体和药学可接受载剂。在另一个实施方案中,药学配制剂包含本文中提供的任何抗HPV抗体和至少一种别的治疗剂。在一个实施方案中,该至少一种别的治疗剂例如是另一种抗HPV抗体，其与本文中的抗HPV抗体结合HPV的不同表位。
可以单独或与疗法中的其它药剂组合使用本发明的抗体。例如,可以与至少一种别的治疗剂共施用本发明的抗体。
上文记录的此类联合疗法涵盖联合施用(其中两种或更多种治疗剂包含在相同或不同配制剂中),和分开施用,在该情况中,可以在施用一种或多种别的治疗剂之前,同时,和/或之后发生本发明的抗体的施用。在一个实施方案中,抗HPV抗体的施用和别的治疗剂的施用彼此在约一个月内,或在约一,二或三周内,或在约一,二,三,四,五,或六天内发生。
可以通过任何合适的手段,包括胃肠外,肺内,和鼻内,及若期望用于局部治疗的话,损伤内施用来施用本发明的抗体(和任何别的治疗剂)。胃肠外输注包括肌肉内,静脉内,动脉内,腹膜内,或皮下施用。部分根据施用是短暂的还是长期的,剂量给药可以通过任何合适的路径,例如通过注射,诸如静脉内或皮下注射进行。本文中涵盖各种剂量给药日程表,包括但不限于单次施用或在多个时间点里的多次施用,推注施用,和脉冲输注。
本发明的抗体应当以符合良好的医学实践的方式配制,确定剂量和给药。关于这一点考虑的因素包括在治疗的特定病症,在治疗的特定哺乳动物,患者个体的临床状态,病因,药物递送部位,给药方法,服药日程以及其它为开业医生所知的因素。抗体无需但可任选地与一种或多种目前用于预防或治疗所述病症的药剂一起配制。上述其它药剂的有效量取决于配方中所存在的抗体的量,病症或治疗的类型,以及其它上述讨论的因素。这些药剂通常以与本文所述相同的剂量和给药途径使用,或以约1-99％的本文所描述的剂量使用,或以任何剂量并通过任何途径使用,所述剂量和途径是凭经验/临床确定合适的。
G.制品
在本发明的另一方面,提供了一种制品,其含有可用于治疗,预防和/或诊断上文所描述的病症的材料。制品包含容器和容器上或与容器联合的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶,管形瓶,注射器,IV溶液袋,等等。容器可以由多种材料诸如玻璃或塑料形成。容器容纳单独或与另一种组合物组合有效治疗,预防和/或诊断状况的组合物,并且可以具有无菌存取口(例如,容器可以是具有由皮下注射针可穿过的塞子的管形瓶或静脉内溶液袋)。组合物中的至少一种活性剂是本发明的抗体。标签或包装插页指示使用组合物来治疗选择的状况。此外,制品可以包含:(a)其中装有组合物的第一容器,其中组合物包含本发明的抗体；和(b)其中装有组合物的第二容器,其中组合物包含别的治疗剂。在本发明的此实施方案中的制品可以进一步包含包装插页,其指示可以使用组合物来治疗特定的状况。或者/另外,制品可以进一步包含第二(或第三)容器,其包含药学可接受缓冲液,诸如抑菌性注射用水(BWFI),磷酸盐缓冲盐水,Ringer氏溶液和右旋糖溶液。它可以进一步包含从商业和用户观点看期望的其它材料,包括其它缓冲液,稀释剂,滤器,针,和注射器。
在本发明中，从14例完成HPV九价疫苗接种一个月后的成人志愿者采集外周血，通过密度梯度离心法获得上层的血浆和中间的PBMC。用荧光标记的HPV 6、11、16、18、31、33、45、52和58型L1蛋白通过流式分选从PBMC中分离出与上述9种型别蛋白特异性结合的记忆B细胞，并利用巢式PCR获得可转染的具有表达活性的PCR片段，转染CHO细胞进行表达，得到含有分泌抗体的细胞上清液，通过ELISA进行结合活性筛选，获得了2475株结合阳性克隆，其中90株克隆与HPV6型L1蛋白特异性结合，181株克隆与HPV11型L1蛋白特异性结合，130株克隆与HPV16型L1蛋白特异性结合，97株克隆与HPV18型L1蛋白特异性结合，94株克隆与HPV31型L1蛋白特异性结合，87株克隆与HPV33型L1蛋白特异性结合，88株克隆与HPV45型L1蛋白特异性结合，90株克隆与HPV52型L1蛋白特异性结合，79株克隆与HPV58型L1蛋白特异性结合。根据细胞上清液的结合和假病毒中和结果，以上9种类别抗体分别构建25株、20株、35株、44株、42株、37株、26株、40株、23株重组抗体。综合各重组抗体与对应型别蛋白的结合活性以及与各型别假病毒的中和活性，最终9种类型抗体分别选择1株，包括抗HPV6抗体F5-222，抗HPV11抗体F5-422，抗HPV16抗体F5-194，抗HPV18抗体F5-212、抗HPV31抗体F5-183、抗HPV33抗体F5-155、抗HPV45抗体F5-160、抗HPV52抗体F5-398、抗HPV58抗体F5-354。型特异抗体均特异性结合和中和该型别蛋白或假病毒，结合活性EC50均低于40ng/mL，中和活性IC50在0.25-51.60ng/mL之间。
表1.氨基酸序列和核酸序列的描述
实施例1：抗HPV抗体的制备
将抗体的轻、重链可变区的编码序列克隆到携带人IgG1恒定区编码序列的真核表达载体中，瞬时转染CHO细胞，进行分泌性表达，通过亲和纯化获得了纯度>90％的9个抗HPV抗体克隆，即F5-222、F5-194、F5-212、F5-398、、F5-422、F5-183、F5-155、F5-160、F5-354。
抗体的CDR的氨基酸序列显示于表1。
人IgG1恒定区的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
实施例2：抗HPV抗体的表征—通过ELISA表征抗原结合特异性
将分别用PBS稀释至2μg/mL的HPV 9型L1蛋白【HPV6(genbank号：UNG35082.1)、HPV11(genbank号：AAA46935.1)、HPV16(genbank号：QGC89586.1)、HPV18(genbank号：ACU01871.1)、HPV31(genbank号：OP900721.1)、HPV33(genbank号：WAN40740.1)、HPV45(genbank号：AAY86494.1)、HPV52(genbank号：BBD06702.1)和HPV58(genbank号：WAN40708.1)】以100μL/孔加入96孔酶标板(NEST，504201)，4℃包被过夜。去除溶液，用PBST清洗2次，并用封闭液(PBS+5％BSA)37℃封闭2小时。去除溶液，将用稀释液(PBS+5％BSA)稀释的抗体(浓度1μg/mL)以100μL/孔加入微孔板，37℃温育1小时。去除溶液，用PBST清洗3次，每孔加入100μL 1W倍稀释的小鼠抗人IgG Fc-HRP(Vazyme自产)，37℃温育1小时。去除溶液，用PBST清洗3次，每孔加入100μL显色底物TMB，37℃避光温育10分钟。去除溶液，用PBST清洗3次，每孔加入50μL 2M硫酸。在多功能酶标仪(Tecan，Spark)上测量450nm的OD值。结果如表2所示。
表2：抗HPV抗体的蛋白结合活性
HPV-6 HPV-11 HPV-16 HPV-18 HPV-31 HPV-33 HPV-45 HPV-52 HPV-58
F5-222 2.31 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
F5-422 0.08 1.04 0.08 0.08 0.07 0.08 0.08 0.09 0.10
F5-194 0.05 0.05 2.41 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
F5-212 0.06 0.05 0.06 2.61 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
F5-183 0.05 0.05 0.05 0.05 1.67 0.05 0.05 0.05 0.05
F5-155 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 3.21 0.05 0.04 0.05
F5-160 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 3.17 0.05 0.05
F5-398 0.06 0.07 0.08 0.08 0.07 0.08 0.07 0.27 0.09
F5-354 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 1.59
结果表明，F5-222、F5-422、F5-194、F5-212、F5-183、F5-155、F5-160、F5-398、F5-354只与单一型别蛋白结合，具有特异性。
实施例3：抗HPV抗体的表征—通过ELISA表征抗原结合活性
将分别用PBS稀释至2μg/mL的HPV 9型L1蛋白(HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV45、HPV52和HPV58)以100μL/孔加入96孔酶标板(NEST，504201)，4℃包被过夜。去除溶液，用PBST清洗2次，并用封闭液(PBS+5％BSA)37℃封闭2小时。去除溶液，将用稀释液(PBS+5％BSA)2倍连续稀释的抗体以100μL/孔加入微孔板，37℃温育1小时。去除溶液，用PBST清洗3次，每孔加入100μL 1W倍稀释的小鼠抗人IgG Fc-HRP(Vazyme自产)，37℃温育1小时。去除溶液，用PBST清洗3次，每孔加入100μL显色底物TMB，37℃避光温育10分钟。去除溶液，用PBST清洗3次，每孔加入50μL 2M硫酸。在多功能酶标仪(Tecan，Spark)上测量450nm的OD值。用GraphPad Prism 8.0对抗体浓度和OD值进行作图，结果如图1-1、图1-2、图1-3、图1-4、图1-5、图1-6、图1-7、图1-8、图1-9所示。进行四参数拟合，计算抗体的抗原结合活性的EC50值(ng/mL)，结果如表3所示。
表3：抗HPV抗体的蛋白结合活性的EC50值(ng/mL)
抗体 HPV-6 HPV-11 HPV-16 HPV-18 HPV-31 HPV-33 HPV-45 HPV-52 HPV-58
F5-222 11.90 / / / / / / / /
F5-422 / 16.70 / / / / / / /
F5-194 / / 12.70 / / / / / /
F5-212 / / / 13.90 / / / / /
F5-183 / / / / 11.71 / / / /
F5-155 / / / / / 26.96 / / /
F5-160 / / / / / / 8.13 / /
F5-398 / / / / / / / 5.07 /
F5-354 / / / / / / / / 7.62
结果表明，9株抗体均与结合型别蛋白有较强的结合活性。
实施例4：抗HPV抗体的表征—通过假病毒表征中和活性
参考中检院专利中所述方法(专利号：CN103333865A)分别制备9种型别假病毒，9种基因型的表达质粒分别是P6sheLLr、P11L1w、P16sheLL、P18sheLL、P31sheLL、P33sheLL、P45sheLL、P52sheLL和P58sheLL(上述质粒均购自addgene公司，货号分别是37318、37330、37320、37321、37322、52493、37323、46950和37324)。假病毒包装后测定其TCID50，根据TCID50值将病毒液进行稀释，获得假病毒稀释液。用DMEM培养基将抗体4倍连续稀释(起始稀释600倍，共7个梯度)，得到待测抗体稀释液。在96孔板中将60μL病毒液和60μL待测抗体稀释液等体积混合，并做重复孔；96孔板于4℃放置1个小时。将100μL假病毒与待测抗体混合物加入提前铺设好293TT细胞并放置6小时的培养板对应孔中，轻拍培养板四周使其混合，于细胞培养箱(37℃，5％CO2)中温育2小时。温育结束后，将细胞培养本各孔的上清分别转移15μL至化学发光检测板中，然后向检测板中加入15μL化学发光检测试剂BioLux GlucSubstrate，并立即将检测板放入GloMax化学发光检测仪中读数。感染抑制率(％)＝(1-待测血清组化学发光的细胞比值/阴性对照组化学发光的细胞比值)×100。将感染抑制率大于50％的血清样本按照4倍梯度继续进行系列稀释后再次进行中和试验。
用GraphPad Prism 8.0对抗体浓度和中和率进行作图，结果如图2-1、2-2、2-3、2-4、2-5、2-6、2-7、2-8、2-9所示。进行四参数拟合，计算抗体的病毒中和活性的IC50值(ng/mL)，结果如表4所示。
表4：抗HPV抗体的病毒中和活性的IC50值(ng/mL)
抗体 HPV-6 HPV-11 HPV-16 HPV-18 HPV-31 HPV-33 HPV-45 HPV-52 HPV-58
F5-222 1.25 / / / / / / / /
F5-422 / 28.67 / / / / / / /
F5-194 / / 5.48 / / / / / /
F5-212 / / / 0.25 / / / / /
F5-183 / / / / 2.56 / / / /
F5-155 / / / / / 8.51 / / /
F5-160 / / / / / / 6.17 / /
F5-398 / / / / / / / 1.44 /
F5-354 / / / / / / / / 51.60
结果表明，F5-222、F5-422、F5-194、F5-212、F5-183、F5-155、F5-160、F5-398和F5-354只中和单一型别的假病毒，具有特异性。

Claims (15)

1.一种特异性结合HPV的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)如SEQ ID NO：1所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：2所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：3所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：4所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：5所示的CDR-L2，和如SEQ ID NO：6所示的CDR-L3；
(2)如SEQ ID NO：7所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：8所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：9所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：10所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：11所示的CDR-L2，和如SEQ ID NO：12所示的CDR-L3；
(3)如SEQ ID NO：13所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：14所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：15所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：16所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：17所示的CDR-L2，和如SEQ IDNO：18所示的CDR-L3；
(4)如SEQ ID NO：19所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：20所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：21所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：22所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：23所示的CDR-L2，和如SEQ IDNO：24所示的CDR-L3；
(5)如SEQ ID NO：25所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：26所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：27所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：28所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：29所示的CDR-L2，和如SEQ IDNO：30所示的CDR-L3；
(6)如SEQ ID NO：31所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：32所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：33所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：34所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：35所示的CDR-L2，和如SEQ IDNO：36所示的CDR-L3；
(7)如SEQ ID NO：37所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：38所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：39所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：40所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：41所示的CDR-L2，和如SEQ IDNO：42所示的CDR-L3；
(8)如SEQ ID NO：43所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：44所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：45所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：46所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：47所示的CDR-L2，和如SEQ IDNO：48所示的CDR-L3；
(9)如SEQ ID NO：49所示的CDR-H1，如SEQ ID NO：50所示的CDR-H2，如SEQ ID NO：51所示的CDR-H3，如SEQ ID NO：52所示的CDR-L1，如SEQ ID NO：53所示的CDR-L2，和如SEQ IDNO：54所示的CDR-L3。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)如SEQ ID NO：55所示的VH和如SEQ ID NO：56所示的VL；
(2)如SEQ ID NO：57所示的VH和如SEQ ID NO：58所示的VL；
(3)如SEQ ID NO：59所示的VH和如SEQ ID NO：60所示的VL；
(4)如SEQ ID NO：61所示的VH和如SEQ ID NO：62所示的VL；
(5)如SEQ ID NO：63所示的VH和如SEQ ID NO：64所示的VL；
(6)如SEQ ID NO：65所示的VH和如SEQ ID NO：66所示的VL；
(7)如SEQ ID NO：67所示的VH和如SEQ ID NO：68所示的VL；
(8)如SEQ ID NO：69所示的VH和如SEQ ID NO：70所示的VL；
(9)如SEQ ID NO：71所示的VH和如SEQ ID NO：72所示的VL。
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)如SEQ ID NO：93所示的重链恒定区，和
(2)如SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92任一所示的轻链恒定区。
4.一种多核苷酸，其编码根据权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
5.根据权利要求4所述的多核苷酸，其包含：
(1)SEQ ID NO：73和74；
(2)SEQ ID NO：75和76；
(3)SEQ ID NO：77和78；
(4)SEQ ID NO：79和80；
(5)SEQ ID NO：81和82；
(6)SEQ ID NO：83和84；
(7)SEQ ID NO：85和86；
(8)SEQ ID NO：87和88；
(9)SEQ ID NO：89和90。
6.一种载体，其包含根据权利要求4或5所述的多核苷酸。
7.一种宿主细胞，其包含根据权利要求4或5所述的多核苷酸或根据权利要求6所述的载体。
8.根据权利要求7所述的宿主细胞，其为CHO细胞。
9.一种生成抗体或其抗原结合片段的方法，其包括：
(a)在适合于表达该抗体或其抗原结合片段的条件下培养根据权利要求7或8所述的宿主细胞，并
(b)任选地，回收该抗体或其抗原结合片段。
10.一种组合物，其包含根据权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
11.根据权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求10所述的组合物，其用作药物。
12.根据权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求10所述的组合物，其用于治疗疾病。
13.根据权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求10所述的组合物，其用于检测用试剂。
14.根据权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求10所述的组合物，其用于HPV疫苗的鉴别试验。
15.如说明书所述的发明。
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