CN114831216B - 一种枯草芽孢杆菌amep412蛋白在调节动物免疫中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还涉及了上述枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白在调节动物免疫中的应用。本发明发现了枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白在动物免疫调节方面的新功能；该蛋白能够激活血清相关免疫分子的表达，降低动物的发病率，提高动物生长性能；本发明为动物饲料添加剂积累了新的材料。
Description
技术领域
本发明属于动物饲料领域，涉及一种枯草芽孢杆菌来源的AMEP412蛋白在调节动物免疫中的应用。
背景技术
抗生素作为饲料添加剂在动物饲料中大量应用以降低动物疾病的发生，然而抗生素的长期使用，会引起细菌耐药性和造成动物食品中抗生素残留等诸多问题。新的替代物亟待开发以减少抗生素的使用。
目前，在饲料添加剂领域有一些抗生素的替代品，主要为以芽孢杆菌、乳杆菌等为代表的益生菌和以黄连、马齿苋、黄芩、地黄等为代表的中草药。这两者作用机制不同，益生菌主要靠抑制病原菌发挥作用，而中草药主要靠调节动物机体免疫达到效果。但这两者都存在共同的缺陷：益生菌主要依靠其所分泌的次生代谢物发挥作用，但在进入动物消化道和肠道后，益生菌不再处于最佳生长环境，产次生代谢物能力受到大幅度抑制，造成活性成分量过低，不能发挥完整功能。中草药中的活性成分不仅含量微少，还由于动物消化系统对植物组织的分解不完全，导致不能完全释放，这都限制了其功能发挥。
综上所述，理想的抗生素替代品应该不局限在组织和细胞层面，直接摄入分子水平的活性物质更为直接有效。
在之前的研究中，我们从枯草芽孢杆菌BU412中分离鉴定了AMEP412蛋白，具有抗菌肽的生物活性，具有作为抗生素替代品的潜质，可以直接对动物体内病原菌进行抑制。但是，AMEP412蛋白对动物机体免疫调节的作用并未见报道。
在本发明中，我们旨在提供AMEP412蛋白在动物免疫调节方面的新用途。
发明内容
本发明的目的是提供一种枯草芽孢杆菌蛋白AMEP412的新功能，主要涉及该蛋白对动物机体免疫调节的功能。
本发明通过以下技术方案来实现：
一种枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
进一步的，所述的AMEP412蛋白在调节动物免疫中的应用。
进一步的，所述的免疫调节功能为提高动物血清免疫指标。
进一步的，所述的免疫调节功能为提高动物抗病性。
进一步的，所述的免疫调节功能为提高动物生长性能。
采用上述技术方案的积极效果：本发明发现了枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白在动物免疫调节方面的新功能；该蛋白能够激活血清相关免疫分子的表达，降低动物的发病率，提高动物生长性能；本发明为动物饲料添加剂积累了新的材料。
具体实施方式
以下通过实施例来进一步描述本发明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，绝不限制本发明的范围。
本发明中生物材料的来源：
1、所用的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BU412于2016年3月30日在中国典型培养物保藏中心进行保藏，保藏编号为CCTCC M 2016142。
实施例1
枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白饲喂鸡对血清相关免疫分子表达的影响。
选取 30 日龄的幼鸡作为处理对象，分为对照组（CK）和处理组（AMEP），每组15只，共3个重复。对照组饲喂商品饲料，处理组在对照的基础上每公斤饲料中添加0.1g的AMEP412蛋白。待实验鸡生长至90日龄，采用肱静脉穿刺法在不含肝素化的管内采集血液，离心分离血清进行后续分析。
使用试剂盒测定免疫球蛋白G （IgG）、免疫球蛋白A （IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素6（IL-6）。
检测结果见表1。结果显示，枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白饲喂显著提高了免疫球蛋白G （IgG）、免疫球蛋白A （IgA）、免疫球蛋白M（IgM）和白细胞介素2（IL-2）在血清内的含量。而白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素6（IL-6）的变化差异不显著。以上结果说明AMEP412蛋白饲喂显著提高了鸡的血清免疫水平。
表1 枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白饲喂对鸡血清免疫分子表达量的影响
| 指标 | CK | AMEP |
| 免疫球蛋白G （IgG）g/L | 10.12±0.51 b | 13.11±0.27 a |
| 免疫球蛋白A （IgA）g/L | 3.46±0.25 b | 3.90±0.08 a |
| 免疫球蛋白M（IgM）g/L | 1.38±0.18 b | 1.52±0.27 a |
| 白细胞介素1β（IL-1β）ng/L | 22.32±1.85 | 21.83±0.88 |
| 白细胞介素2（IL-2）ng/L | 242.36±5.86 b | 289.63±11.28 a |
| 白细胞介素6（IL-6）ng/L | 102.23±7.88 | 101.74±10.51 |
实施例2
枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白饲喂猪对血清相关免疫分子表达的影响。
选取平均体重为7kg 的健康断奶仔猪作为处理对象，分为对照组（CK）和处理组（AMEP），每组10只，共3个重复。对照组饲喂商品饲料，处理组在对照的基础上每公斤饲料中添加0.1g的AMEP412蛋白。饲喂30天后，采用肱静脉穿刺法在不含肝素化的管内采集血液，离心分离血清进行后续分析。
使用试剂盒测定免疫球蛋白G （IgG）、免疫球蛋白A （IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素6（IL-6）。
检测结果见表2。结果显示，AMEP412蛋白饲喂显著提高了免疫球蛋白G （IgG）、免疫球蛋白A （IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素2（IL-2）和白细胞介素6（IL-6）在血清内的含量。而白细胞介素1β（IL-1β）的变化差异不显著。以上结果说明AMEP412蛋白饲喂显著提高了仔猪的血清免疫水平。
表2 枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白饲喂对猪血清免疫分子表达量的影响
| 指标 | CK | AMEP |
| 免疫球蛋白G （IgG）g/L | 8.15±1.31 b | 9.56±0.45 a |
| 免疫球蛋白A （IgA）g/L | 2.18±0.11 b | 2.55±0.10 a |
| 免疫球蛋白M（IgM）g/L | 1.32±0.11 b | 1.86±0.16 a |
| 白细胞介素1β（IL-1β）ng/L | 28.53±2.37 | 29.04±1.68 |
| 白细胞介素2（IL-2）ng/L | 465.08±16.56 b | 489.93±22.33 a |
| 白细胞介素6（IL-6）ng/L | 95.32±16.21 b | 103.45±12.24 a |
实施例3
枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白饲喂对鸡发病情况的影响。
实验鸡的分组预处理情况同实施例1。
记录从30日龄至90日龄各处理组中鸡群的发病、腹泻、死亡等情况。
经统计分析，结果如表3所示。AMEP412蛋白饲喂显著降低了鸡群的发病率、腹泻率和病死率。其中发病率降低了42.9%，腹泻率降低了62.5%，病死率降低了63.6%。以上结果说明AMEP412蛋白饲喂显著提高了鸡的抗病性，进而改善了鸡的发病情况。
表3 枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白饲喂对鸡发病率的影响
| 指标 | CK | AMEP |
| 发病率% | 4.19±0.43 a | 2.39±0.15 b |
| 腹泻率% | 3.33±0.12 a | 1.25±0.09 b |
| 病死率% | 2.2±0.13 a | 0.8±0.06 b |
实施例4
枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白饲喂对猪发病情况的影响。
实验仔猪的分组预处理情况同实施例2。
实验过程中记录各处理组中仔猪的发病、腹泻、死亡等情况。
经统计分析，结果如表4所示。AMEP412蛋白饲喂显著降低了仔猪的发病率、腹泻率和病死率。其中发病率降低了56.9%，腹泻率降低了56%，病死率降低了66.7%。以上结果说明AMEP412蛋白饲喂显著提高了仔猪的抗病性，进而改善了仔猪的发病情况。
表4 枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白饲喂对猪发病率的影响
| 指标 | CK | AMEP |
| 发病率% | 5.45± 0.65 a | 2.35± 0.35 b |
| 腹泻率% | 14.13±0.12 a | 6.21±0.09 b |
| 病死率% | 1.2±0.12 a | 0.4±0.09 b |
实施例5
枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白饲喂对鸡生长性能的影响。
实验鸡的分组预处理情况同实施例1。
待幼鸡生长至90日龄，调查各处理组中鸡的初重和末重，计算增重。经统计分析，结果如表5所示。
经统计分析， AMEP412蛋白饲喂显著提高了鸡的增重指标，增重提高了10.8%。以上结果说明AMEP412蛋白饲喂显著改善了鸡的生长性能，进而提高了鸡的增重指标。
表5 枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白饲喂对鸡生长性能的影响
| 指标 | CK | AMEP |
| 初重g | 35.1±0.87 | 35.4±0.69 |
| 末重g | 963.6±5.6 b | 1063.9±8.6 a |
| 增重g | 928.5±4.8 b | 1028.5±7.9 a |
实施例6
枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白饲喂对猪生长性能的影响。
实验仔猪的分组预处理情况同实施例2。
饲喂30天后，调查各处理组中猪的初重和末重，计算增重。经统计分析，结果如表6所示。
经统计分析， AMEP412蛋白饲喂显著提高了仔猪的增重指标，增重提高了32.3%。以上结果说明AMEP412蛋白饲喂显著改善了仔猪的生长性能，进而提高了仔猪的增重指标。
表6 枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白饲喂对仔猪生长性能的影响
| 指标 | CK | AMEP |
| 初重 kg | 7.34±0.42 | 7.28±0.35 |
| 末重kg | 12.79±0.35 b | 14.49± 0.36 a |
| 增重kg | 5.45±0.28 b | 7.21±0.38 a |
本发明发现了枯草芽孢杆菌蛋白AMEP412对动物免疫调节的功能。AMEP412通过激活血清水平的免疫相关分子，提高动物的抗病性，促进动物生长性能。本发明为动物饲料添加剂提供了新的材料。
序列表
<110> 黑龙江权晟生物科技有限公司
黑龙江八一农垦大学
<120> 一种枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白在调节动物免疫中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 76
<212> PRT
<213> 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
<400> 1
Met Phe Gly Pro Ile Leu Lys Ala Leu Lys Ala Leu Val Ser Lys Val
1 5 10 15
Pro Trp Gly Lys Val Ala Ser Phe Leu Lys Trp Ala Gly Asn Leu Ala
20 25 30
Ala Ala Ala Ala Lys Tyr Ser Tyr Thr Ser Gly Lys Lys Ile Leu Ala
35 40 45
Tyr Ile Gln Lys His Pro Gly Lys Ile Val Asp Trp Phe Leu Lys Gly
50 55 60
Tyr Ser Val Tyr Asp Val Ile Lys Met Ile Leu Gly
65 70 75
Claims (3)
1.一种氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白，其特征在于：所述的枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白在提高鸡和仔猪的血清免疫指标中的应用。
2.一种氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白，其特征在于：所述的枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白在促进鸡和仔猪的生长中的应用。
3.一种氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白，其特征在于：所述的枯草芽孢杆菌AMEP412蛋白在提高鸡和仔猪的抗病性中的应用。
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