CN109280075A - 肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途 - Google Patents

肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN109280075A
CN109280075A CN201810793881.5A CN201810793881A CN109280075A CN 109280075 A CN109280075 A CN 109280075A CN 201810793881 A CN201810793881 A CN 201810793881A CN 109280075 A CN109280075 A CN 109280075A
Authority
CN
China
Prior art keywords
amino
phenyl
tert
butoxycarbonylamino
hexanoyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810793881.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109280075B (zh
Inventor
张晨
黄安邦
黄正刚
严庞科
郑伟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tibet Haisike Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Sichuan Haisco Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan Haisco Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Sichuan Haisco Pharmaceutical Co Ltd
Publication of CN109280075A publication Critical patent/CN109280075A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109280075B publication Critical patent/CN109280075B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶及其组合物、制备方法和在医药上的用途，通式(I)如下所示：

Description

肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途
技术领域
本发明涉及一种具有镇痛作用的肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途。
背景技术
阿片类药物用于疼痛的治疗已有数千年的历史，其主要通过与已知的三种经典阿片受体μ,δ和κ相互结合而发挥生理作用。这三种受体都是G蛋白偶联受体家族的一员,主要分布在中枢神经系统，同时也存在于很多外周组织中。其中最为经典的药物属吗啡，其主要通过μ阿片受体的作用发挥镇痛效果。
此外常用的临床镇痛药物还包含其他μ阿片受体药物，如以二氢吗啡酮、芬太尼为代表的传统类阿片药物。
然而μ阿片受体类药物在长期使用后会产生多种副作用,例如耐受、依赖和呼吸抑制以及对胃肠运动的影响等,这不仅增加了治疗费用，更影响了患者康复周期。而一些非阿片类注射剂，如对乙酰氨基酚、NSAIDs(非甾体抗炎药),由于其镇痛效果差，限制了其使用范围和剂量；此外也有一定的副作用，如对乙酰氨基酚增加肝脏毒性，NSAIDs(非甾体抗炎药)导致各种胃肠道疾病。
随着现代社会生活工作压力的不断增大和老年社会的到来,以及阿片受体对于治疗不同类型的疼痛有着至关重要的作用,寻找具有高镇痛活性且低毒副作用的新型阿片药物具有重要的科学及社会意义。
研究发现通过使用κ阿片受体激动剂，可以将κ阿片受体作为干预的靶标以治疗疼痛和预防种类繁多的疾病和病况。如1993年Woold等在Anesthesia and Analgesia(1993，77,362-379)描述了将κ阿片受体激动剂用于治疗痛觉增敏在内的疼痛；1999年Wu等在Circulation Res(1999,84,1388-1395)提出将κ阿片受体激动剂作为预防和治疗心血管疾病的靶标；2003年Kaushik等在J.Postgraduate Medicine(2003，49(1),90-95)阐述了κ阿片受体激动剂的神经保护作用；2004年Potter等在.Pharmacol.Exp.Ther(2004，209,548-553)描述了κ阿片受体激动剂在眼部紊乱和眼部疼痛中的应用；2005年Wikstrom等在J.Am.Soc.Nephrol(2005,16，3742-3747.)描述了κ激动剂在治疗尿毒症和阿片引起的瘙痒的应用；2006年Bileviciute-Ljungar等在Rheumatology(2006,45，295-302)评估了κ阿片受体激动剂用于骨关节炎，类风湿性关节炎等炎性疾病的性质；2006年Lembo在Diges.Dis.(2006,24,91-98)中评估了κ阿片受体激动剂胃肠道疾病中的应用；2006年Jolivalt等在Diabetologia(2006,49(11)，2775-2785)描述了κ阿片受体激动剂阿西马朵林在啮齿动物糖尿病神经病变中的作用；2008年卡拉治疗学股份有限公司的Schteingart,Claudio,D等在WO2008057608A2中评估了κ阿片受体激动剂在内脏疼痛、pH敏感型伤害感受器活化的相关疼痛以及辣椒素引起的眼部疼痛中的作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种结构新颖、生物活性更好、镇痛效果更佳的κ阿片受体激动剂，及其制备方法和在医药上的用途。
本发明提供一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶：
其中，
R1独立选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基或3至8元杂环基，所述的烷基、烷氧基、烯基、炔基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、CF3、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R2、R3各自独立地选自H、C1-6烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基、-C(＝O)O-(CH2)q-C3-8碳环基或-C(＝O)O-(CH2)q-3至8元杂环基，所述的烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF3、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R4每个独自选自F、OH、CF3、C1-6烷基或C1-6烷氧基；
R7独立选自C1-6烷基，所述的烷基任选进一步被1-5个R7a所取代；
R7a独立选自F、OH、CF3、氰基、环丙基、C2-6烯基、C2-6炔基或-C(＝O)NR7bR7c，所述的环丙基、烯基或炔基任选进一步被0-5个F、Cl、Br、I、OH、CF3、硝基、氰基、C1-6烷基、C3-8碳环基得取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
R7b、R7c各自独立地选自H、C1-6烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基、-C(＝O)O-(CH2)q-C3-8碳环基或-C(＝O)O-(CH2)q-3至8元杂环基，所述的烷基、烷氧基、碳环基或者杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF3、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基或3至8元杂环基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
R5、R6、R11、R12各自独立地选自H、C1-6烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基、-C(＝O)O-(CH2)q-C3-8碳环基或-C(＝O)O-(CH2)q-3至8元杂环基，所述的烷基、碳环基和杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF3、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
q选自1、2、3或4；
a选自0、1、2、3或4；
b选自0、1、2或3；
c选自0、1、2、3、4或5；
d选自0、1、2、3、4或5；
R9、R10每个各自独立选自F、Cl、Br、I、CF3、氰基、硝基、C1-4烷基、-OR9a、-C(O)OR9b、-SR9c、-S(O)R9d、-S(O)2R9e或-NR9fR9g；
R9a、R9b、R9c、R9d、R9e、R9f和R9g各自独立选自H或C1-4烷基；
作为选择，R9f、R9g与其连接的氮原子形成5至6元杂环，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子。
本发明的优选方案，一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中：
R1独立选自H、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6碳环基或3至6元杂环基，优选OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基，所述的烷基、烷氧基、烯基、炔基、碳环基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、CF3、硝基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R2、R3各自独立地选自H、C1-4烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基、-C(＝O)O-(CH2)q-C3-6碳环基或-C(＝O)O-(CH2)q-3至6元杂环基，优选H、C1-4烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基或-C(＝O)O-(CH2)q-C3-6碳环基，所述的烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF3、硝基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R4每个独自选自F、OH、CF3、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选F、CF3或C1-4烷基；
R7独立选自C1-4烷基，所述的烷基任选进一步被1-3个R7a所取代；
R7a独立选自F、OH、CF3、氰基、环丙基、C2-4烯基、C2-4炔基或-C(＝O)NR7bR7c，所述的环丙基、烯基或炔基任选进一步被0-3个F、Cl、Br、I、OH、CF3、硝基、氰基、C1-4烷基、C3-6碳环基得取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
R7b、R7c各自独立地选自H、C1-4烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基、-C(＝O)O-(CH2)q-C3-6碳环基或-C(＝O)O-(CH2)q-3至6元杂环基，优选H或C1-4烷基，所述的烷基、烷氧基、碳环基或者杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF3、氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6碳环基或3至6元杂环基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
R5、R6、R11、R12各自独立地选自H、C1-4烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基、-C(＝O)O-(CH2)q-C3-6碳环基或-C(＝O)O-(CH2)q-3至6元杂环基，优选H、C1-4烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基、-C(＝O)O-(CH2)q-C3-6碳环基，所述的烷基、碳环基和杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF3、硝基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
q选自1、2、3或4，优选1；
a选自0、1、2、3或4，优选0或1；
b选自0、1、2或3，优选3；
c选自0、1、2、3、4或5，优选0或1；
d选自0、1、2、3、4或5，优选0或1；
R9、R10每个各自独立选自F、Cl、Br、I、CF3、氰基、硝基、C1-4烷基或-NR9fR9g，优选F、CF3或C1-4烷基；
R9f和R9g各自独立选自H或C1-4烷基。
本发明优选方案，本发明提供一种通式(I)所示化合物，其中该化合物选自通式(II)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中：
R1独立选自OH或甲氧基；
R2、R3各自独立地选自H、C1-4烷基、-C(＝O)O-叔丁基或-C(＝O)O-苄基；
R7独立选自C1-6烷基，所述的烷基任选进一步被1-3个R7a所取代；
R7a独立选自F、OH、CF3、氰基、C2-4烯基、C2-4炔基、-C(＝O)NH2或环丙基，所述的烯基、炔基或环丙基任选进一步被0-3个F、OH、CF3、甲基或苯基的取代基所取代；
R5、R6、R11、R12各自独立地选自H、C1-4烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基或-C(＝O)O-苄基。
本发明的优选方案，一种通式(II)所示的化合物或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中：
R1独立选自OH或甲氧基；
R2、R3各自独立地选自H、甲基或-C(＝O)O-叔丁基；
R7独立选自甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、异丙基或所述的甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、异丙基或任选进一步任选被1-3个R7a所取代；
R7a独立选自F、OH、CF3、氰基、-C(＝O)NH2或环丙基；
R5、R6、R11、R12各自独立地选自H、甲基、-C(＝O)O-叔丁基。
本发明优选方案，本发明提供一种通式(I)或(II)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中该化合物包括但不限于如下结构式所示化合物之一：
本发明提供一种药物组合物，所述的药物组合物包含通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，和一种或多种以上的药学上可接受的载体和/或赋形剂。
本发明通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶或包含通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶的药物组合物用于制造治疗或预防哺乳动物的κ阿片样物质受体相关的疾病或病况的药物的应用。
本发明的优选方案，其中所述κ阿片样物质受体相关的病况选自下组，其构成为：疼痛、炎症、瘙痒、水肿、低钠血症、低钾血症、肠梗阻、咳嗽和青光眼。
本发明的优选方案，其中所述疼痛选自下组，其构成为：神经性疼痛、躯体痛、内脏痛和皮肤痛。
本发明的优选方案，其中所述疼痛选自下组，其构成为：关节炎疼痛、肾结石疼痛、子宫痉挛、痛经、子宫内膜异位症、消化不良、外科手术后疼痛、医疗处理后疼痛、眼部疼痛、耳炎疼痛、爆发性癌症疼痛和GI紊乱相关的疼痛。
除非有相反的陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或卤素均包括它们的同位素，及本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或卤素任选进一步被一个或多个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括12C、13C和14C，氢的同位素包括氕(H)、氘(D，又称为重氢)、氚(T，又称为超重氢)，氧的同位素包括16O、17O和18O，硫的同位素包括32S、33S、34S和36S，氮的同位素包括14N和15N，氟的同位素19F，氯的同位素包括35Cl和37Cl，溴的同位素包括79Br和81Br。
“烷基”是指直链和支链的一价饱和烃基，主链包括1至10个碳原子，优选为1至8个碳原子，进一步优选为1至6个碳原子，更优选为1至4个碳原子的直链与支链基团，最优选1至2个碳原子，烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基等；所述的烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR19、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH2)a-C(＝O)-R19、-(CH2)k-C(＝O)-O-R19、-(CH2)k-C(＝O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(＝O)j-R19、-O-C(＝O)-O-R19或者-NR19R19a的取代基所取代，其中R19和R19a各自独立选自H、羟基、氨基、羧基、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C2-8烯基、C2-8炔基、3至10元碳环基、4至10元杂环基、3至10元碳环基氧基或者4至10元杂环基氧基，k选自0、1、2、3、4或者5，j选自0、1或者2。本文中出现的烷基、k、j、R19和R19a，其定义如上所述。
“亚烷基”是指直链和支链的二价饱和烃基，包括-(CH2)v-(v为1至10的整数)，亚烷基实施例包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基和亚丁基等；所述的亚烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR19、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH2)a-C(＝O)-R19、-(CH2)k-C(＝O)-O-R19、-(CH2)k-C(＝O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(＝O)j-R19、-O-C(＝O)-O-R19或者-NR19R19a的取代基所取代，当亚烷基中的取代基数量大于等于2个时，取代基可以稠合在一起形成环状结构。本文中出现的亚烷基，其定义如上所述。
“烷氧基”是指O-烷基的一价基团，其中，烷基如本文所定义，烷氧基实施例包括但不限于甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、1-丁氧基、2-甲基-1-丙氧基、2-丁氧基、2-甲基-2-丙氧基、1-戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、2-甲基-2-丁氧基、3-甲基-2-丁氧基、3-甲基-1-丁氧基和2-甲基-1-丁氧基等。
“烯基”是指直链和支链的一价不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳双键，主链包括2至10个碳原子，进一步优选2至6个碳原子，更优选在主链上有2至4个碳原子，烯基实施例包括但不限于乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-1-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-甲基-1-戊烯基、2-甲基-1-戊烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、1-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、4-癸烯基、1,3-丁二烯、1,3-戊二烯、1,4-戊二烯和1,4-己二烯等；所述的烯基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR19、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH2)a-C(＝O)-R19、-(CH2)k-C(＝O)-O-R19、-(CH2)k-C(＝O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(＝O)j-R19、-O-C(＝O)-O-R19或者-NR19R19a的取代基所取代。本文中出现的烯基，其定义如上所述。
“炔基”是指直链和支链的一价不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳三键，主链包括2至10个碳原子，进一步优选2至6个碳原子，更优选在主链上有2至4个碳原子，炔基实施例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、4-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-己炔基、3-己炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚炔基、3-辛炔基、3-壬炔基和4-癸炔基等；所述的炔基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR19、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH2)a-C(＝O)-R19、-(CH2)k-C(＝O)-O-R19、-(CH2)k-C(＝O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(＝O)j-R19、-O-C(＝O)-O-R19或者-NR19R19a的取代基所取代。本文中出现的炔基，其定义如上所述。
“环烷基”是指一价饱和的碳环烃基，通常有3至10个碳原子，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基等。所述的环烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR19、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH2)a-C(＝O)-R19、-(CH2)k-C(＝O)-O-R19、-(CH2)k-C(＝O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(＝O)j-R19、-O-C(＝O)-O-R19或者-NR19R19a的取代基所取代。本文中出现的环烷基，其定义如上所述。
“碳环”是指饱和或者不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香环可以是3至10元的单环、4至12元双环或者10至15元三环体系，碳环基可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊基-1-烯基、1-环戊基-2-烯基、1-环戊基-3-烯基、环己基、1-环己基-2-烯基、1-环己基-3-烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基、苯基或萘基。所述的碳环基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR19、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH2)a-C(＝O)-R19、-(CH2)k-C(＝O)-O-R19、-(CH2)k-C(＝O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(＝O)j-R19、-O-C(＝O)-O-R19或者-NR19R19a的取代基所取代。本文中出现的碳环，其定义如上所述。
“杂环”是指饱和或不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香环可以是3至10元的单环、4至12元双环或者10至15元三环体系，且包含1至4个选自N、O或S的杂原子，优选3至8元杂环基，杂环基的环中选择性取代的N、S可被氧化成各种氧化态。杂环基可以连接在杂原子或者碳原子上，杂环基可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环氧乙基、环氧丙基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、硫杂环丁基、1,3-二氧戊环基、1,4-二氧戊环基、1,3-二氧六环基、氮杂环庚基、氧杂环庚基、硫杂环庚基、氧氮杂卓基、二氮杂卓基、硫氮杂卓基、吡啶基、哌啶基、高哌啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、哌嗪基、高哌嗪基、咪唑基、哌啶基、哌叮基、吗啉基、硫代吗啉基、噻噁烷基、1,3-二噻基、二氢呋喃基、二氢吡喃基、二噻戊环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、四氢吡咯基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢吡喃基、苯并咪唑基、苯并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并二氢呋喃基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧杂环己基、1,3-二氧戊基、吡唑啉基、二噻烷基、二噻茂烷基、二氢噻吩基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、氮杂双环[2.2.2]己基、3H-吲哚基喹嗪基、N-吡啶基尿素、1,1-二氧硫代吗啉基、氮杂二环[3.2.1]辛烷基、氮杂二环[5.2.0]壬烷基、氧杂三环[5.3.1.1]十二烷基、氮杂金刚烷基和氧杂螺[3.3]庚烷基。所述的杂环基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR19、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH2)a-C(＝O)-R19、-(CH2)k-C(＝O)-O-R19、-(CH2)k-C(＝O)-NR19R19a、-(CH2)k-S(＝O)j-R19、-O-C(＝O)-O-R19或者-NR19R19a的取代基所取代。本文中出现的杂环，其定义如上所述。
“任选”或“任选地”是指随后所描述的事件或环境可以但不必须发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。如：“任选被F取代的烷基”指烷基可以但不必须被F取代，说明包括烷基被F取代的情形和烷基不被F取代的情形。
“药学上可接受的盐”或“其药学上可接受的盐”指的是保持游离酸或游离碱的生物有效性和特性，且所述的游离酸通过与无毒的无机碱或有机碱，或所述的游离酸通过与无毒的无机酸或有机酸反应获得的那些盐，包括碱金属盐，如钠盐、钾盐、锂盐等；碱土金属盐，如钙盐、镁盐等；其他金属盐，如铁盐、铜盐、钴盐等；有机碱盐，如铵盐、三乙胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、2,6-二甲基吡啶盐、乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、环己胺盐、乙二胺盐、胍盐、异丙基胺盐、三甲基胺盐、三丙基胺盐、三乙醇胺盐、二乙醇胺盐、乙醇胺盐、二甲基乙醇胺盐、二环己基胺盐、咖啡碱盐、普鲁卡因盐、胆碱盐、甜菜碱盐、苯明青霉素盐、葡萄糖胺盐、N-甲基葡糖胺盐、可可碱盐、氨丁三醇盐、嘌呤盐、哌嗪盐、吗啉盐、哌啶盐、N-乙基哌啶盐、四甲基胺盐、二苄基胺盐和苯基甘氨酸烷基酯盐等；氢卤酸盐，如氢氟酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、氢溴酸盐等；无机酸盐，如盐酸盐、硝酸盐、硫酸盐、高氯酸盐、磷酸盐等；低级烷磺酸盐，如甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、乙磺酸盐等；芳基磺酸盐，如苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等；有机酸盐，如乙酸盐、苯甲酸盐、富马酸盐、甲酸盐、三氟乙酸盐、糠酸盐、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酸盐、羟乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、扁桃酸盐、粘液酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺胺酸盐、酒石酸盐、丙二酸盐、2-羟基丙酸盐、柠檬酸盐、水杨酸盐、草酸盐、羟乙酸盐、葡萄糖醛酸盐、半乳糖醛酸盐、枸橼酸盐、赖氨酸盐、精氨酸盐、门冬氨酸盐、肉桂酸盐等。
“药物组合物”表示一种或多种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐与其他组成成分的混合物，其中其它组分包含生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。
“载体”指的是不会对生物体产生明显刺激且不会消除所给予化合物的生物活性和特性的载体或稀释剂。
“赋形剂”指的是加入到药物组合物中以进一步依赖于化合物给药的惰性物质。赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖和不同类型的淀粉、纤维素衍生物(包括微晶纤维素)、明胶、植物油、聚乙二醇类、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。
“前药”是指可以在生理条件下或通过溶剂解转化为具有生物活性的本发明化合物的化合物。本发明的前药通过修饰本发明化合物中的功能基团来制备，该修饰可以通过常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。
“共晶体”或“共晶”是指活性药物成分(active pharmaceutical ingredient,API)和共晶形成物(cocrystal former,CCF)在氢键或其他非共价键的作用下结合而成的晶体，其中API和CCF的纯态在室温下均为固体，并且各组分间存在固定的化学计量比。共晶是一种多组分晶体，既包含两种中性固体之间形成的二元共晶，也包含中性固体与盐或溶剂化物形成的多元共晶。所述“共晶形成物”包括但不限于各种药学上可接受的酸、碱、非离子化合物、水、氨基酸、醇或其他溶剂，其非限制性实例包括丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、蛋氨酸(Met)、甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、酪氨酸(Tyr)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)、组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、焦谷氨酸、硫酸、磷酸、硝酸、氢溴酸、盐酸、甲酸、乙酸、丙酸、苯磺酸、苯甲酸、苯乙酸、水杨酸、褐藻酸、氨茴酸、樟脑酸、柠檬酸、乙烯磺酸、蚁酸、富马酸、糠酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、粘液酸、双羟萘酸、泛酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、酒石酸、对甲苯磺酸、丙二酸、2-羟基丙酸、草酸、羟乙酸、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、枸橼酸、赖氨酸、精氨酸、门冬氨酸、肉桂酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸或三氟甲磺酸、氨、异丙基胺、三甲基胺、二乙胺、三乙胺、三丙基胺、二乙醇胺、乙醇胺、三乙醇胺、二甲基乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己基胺、咖啡碱、普鲁卡因、胆碱、甜菜碱、苯明青霉素、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、氨丁三醇、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、甲醇、乙醇、丁炔二醇、1,2-丙二醇、(R)1,2-丙二醇、(S)1,2-丙二醇或1-甲基-1,2-乙二醇。
“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。
“有效剂量”指引起组织、系统或受试者生理或医学翻译的化合物的量，此量是所寻求的，包括在受治疗者身上施用时足以预防受治疗的疾患或病症的一种或几种症状发生或使其减轻至某种程度的化合物的量。
“溶剂化物”指本发明化合物或其盐，它们还包括以分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量的溶剂。当溶剂为水时，则为水合物。
具体实施方式
以下通过具体实施例详细说明本发明的实施过程和产生的有益效果，旨在帮助阅读者更好地理解本发明的实质和特点，不作为对本案可实施范围的限定。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或(和)质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用(Bruker Avance III 400和Bruker Avance 300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用(Agilent 6120B(ESI)和Agilent 6120B(APCI))。
HPLC的测定使用安捷伦1260DAD高压液相色谱仪(Zorbax SB-C18 100×4.6mm)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明的己知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于泰坦科技、安耐吉化学、上海德默、成都科龙化工、韶远化学科技、百灵威科技等公司。
氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
实施例中无特殊说明，反应在氮气氛下进行。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温。
室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。
Boc:是指叔丁基氧基羰基。
Tf:是指三氟甲磺酰基。
M代表mol/L。
中间体1：
(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)
(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoic acid
第一步：(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸甲酯(1b)
methyl(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酸(1a)(3g，11.0mmol)、(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酸甲酯(2.02g，11mmol)、1-羟基苯并三唑(1.83g，13.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(2.6g，14mmol)和乙酸乙酯(60mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用1mol/L盐酸水溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，得到(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸甲酯(1b)粗品，白色固体(4.8g，产率100％)，并直接投入下一步。
MS m/z＝449.1[M+Na]+
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.28-7.16(m,8H),7.01-6.95(m,2H),6.26(d,1H),4.92(br,1H),4.79-4.77(m,1H),4.38-4.27(m,1H),3.67(s,3H),3.18-2.92(m,4H),1.41(s,9H).
第二步：(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)
(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸甲酯(1b)粗品(2.7g，6.3mmol)和甲醇(50mL)，然后滴加1mol/L氢氧化钠水溶液(10mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液(30mL)酸化，然后用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝60:1)，得到(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)，白色固体(1.85g，两步收率71％)。
MS m/z＝435.2[M+Na]+
中间体2：
1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)
methyl1-[(2R)-2-amino-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoyl]-4-(tert-butoxycarbonylamino)piperidine-4-carboxylate
第一步：1-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-羧酸甲酯(2c)
methyl1-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoyl]-4-(tert-butoxycarbonylamino)piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(2a)(4.61g，17.85mmol)、(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸(2b)(8.0g，21.03mmol)、1-羟基苯并三唑(3.24g，24mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(5.74g，29.94mmol)和乙酸乙酯(91mL)，然后在室温下搅拌反应24h。反应液依次用3mol/L盐酸水溶液(200mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)和氯化钠水溶液(200mL)各洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，滤液减压浓缩，得1-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-羧酸甲酯(2c)粗品，白色固体(8.9g，产率78％)，并直接投入下一步反应。
第二步：1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)
methyl1-[(2R)-2-amino-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoyl]-4-(tert-butoxycarbonylamino)piperidine-4-carboxylate
在100mL圆底烧瓶中，加入1-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-羧酸甲酯(2c)粗品，(8.9g，14mmol)、钯/碳(1.78g，20wt％)和乙酸乙酯(100mL)，在氢气(气球)氛围下，室温搅拌反应24h。然后反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩后得白色固体1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)粗品(6.8g，产率100％)。
MS m/z＝487.3[M+H]+
实施例1
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔基氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物1-1)4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]hex-4-ynoylamino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：4-甲基苯磺酸丁-2-炔基酯(1B)
but-2-ynyl 4-methylbenzenesulfonate
在250mL圆底烧瓶中，加入2-丁炔-1-醇(1A)(2.09g，29.8mmol)、对甲基苯磺酸(7.5g，39mmol)和四氢呋喃(100mL)，并在室温下搅拌溶解。然后冷却至-40℃，向反应液中分批多次加入氢氧化钾粉末(14.22g，253mmol)，加完后保持-40℃继续反应3h。然后升至室温，向反应液中加入水(100mL)，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取、分液，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝50:1)，得到4-甲基苯磺酸丁-2-炔基酯(1B)，黄色油状物(6.42g，产率96％)。
MS m/z＝225.0[M+H]+
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.81(d,2H),7.35(d,2H),4.67(q,2H),2.45(s,3H),1.72(t,3H).
第二步：2-(二苯亚甲基氨基)己-4-炔酸乙酯(1C)
Ethyl 2-(benzhydrylideneamino)hex-4-ynoate
在250mL的圆底烧瓶中，依次加入4-甲基苯磺酸丁-2-炔基酯(1B)(8.07g，36.0mmol)、二苯亚甲基甘氨酸乙酯(7.61g，28.5mmol)、碳酸铯(29.3g，89.9mmol)、四丁基溴化铵(1.06g，3.98mmol)和叔丁基甲醚(150mL)，然后加热回流反应7h。过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝500:1)，得到2-(二苯亚甲基氨基)己-4-炔酸乙酯(1C)，黄色油状物(7.2g，产率79％)。
MS m/z＝320.1[M+H]+
取2-(二苯亚甲基氨基)己-4-炔酸乙酯(1C)(7.0g)用于手性拆分。
制备条件：仪器：Thar 200preparative SFC(SFC-7)；柱：Pheno Lux Cellulose-2,300×50mm I.D.,10μm；流动相：A for CO2and B for methanol；梯度：B 15％；流量：180mL/min；背压：100bar；柱温：38℃；波长：220nm；周期：约5分钟；样品制备：2-(二苯亚甲基氨基)己-4-炔酸乙酯(1c)(7.0g)溶解于400mL甲醇中；注射：3mL/针。
分离后，将馏分在40℃下，经由旋转蒸发仪浓缩、干燥，得到两个光学异构体化合物1C-1(2.66g，e.e.(光学纯度对映体过量百分率)＝99.5％)，化合物1C-2(2.71g，e.e.＝97.9％)。
化合物1C-1：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.68-7.62(m,2H),7.49-7.42(m,3H),7.42-7.30(m,3H),7.27-7.21(m,2H),4.29-4.10(m,3H),2.95-2.75(m,1H),2.74-2.60(m,1H),1.72(t,3H),1.26(t,3H).
MS m/z＝320.2[M+H]+
手性HPLC保留时间：9.610min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
化合物1C-2：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.68-7.62(m,2H),7.49-7.42(m,3H),7.42-7.30(m,3H),7.27-7.21(m,2H),4.29-4.10(m,3H),2.95-2.75(m,1H),2.74-2.60(m,1H),1.72(t,3H),1.26(t,3H).
MS m/z＝320.1[M+H]+
手性HPLC保留时间：12.790min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
第三步：2-氨基己-4-炔酸乙酯(1D-1)
ethyl 2-aminohex-4-ynoate
在50mL的圆底烧瓶中，将2-(二苯亚甲基氨基)己-4-炔酸乙酯(1C-1)(1.94g，6.07mmol)溶于叔丁基甲醚(10mL)，室温下加入3mol/L盐酸水溶液(50mL)，然后在室温下搅拌反应过夜。反应液用氨水调节pH至约为13，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取、分液，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝150:1洗脱)，得到黄色油状产物2-氨基己-4-炔酸乙酯(1D-1)(0.65g，产率69％)。
MS m/z＝156.2[M+H]+
第四步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔酸乙酯(1E-1)
ethyl 2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]hex-4-ynoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(1.65g，4.0mmol)、2-氨基己-4-炔酸乙酯(1D-1)(0.6g，4.0mmol)、1-羟基苯并三唑(0.65g，4.8mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.92g，5.9mmol)和二氯甲烷(25mL)，加完后在室温下搅拌过夜。然后，反应液先用1mol/L盐酸水溶液(40mL)洗涤并分液，接着向有机相加入饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和三乙胺(1.9mL)，室温搅拌30分钟后分液。然后，有机相依次用1mol/L盐酸水溶液(40mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和饱和氯化钠水溶液(5mL)各洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔酸乙酯(1E-1)粗品，白色固体(1.8g，产率82％)，并直接投下一步反应。
MS m/z＝572.2[M+Na]+
第五步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔酸(1F-1)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]hex-4-ynoic acid
在50mL反应瓶中，加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔酸乙酯(1E-1)粗品(1.9g，3.5mmol)和甲醇(30mL)，在室温下搅拌溶解。然后滴加1mol/L氢氧化钠水溶液(5mL)，加完后在室温下搅拌过夜。将反应液减压浓缩除去甲醇，然后加入3mol/L盐酸水溶液(30mL)，并用乙酸乙酯(60mL×2)萃取、分液，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔酸(1F-1)粗品，白色固体(1.8g，产率98％)，并直接投下一步反应。
第六步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔基氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(1G-1)
methyl 4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]hex-4-ynoylamino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔酸(1F-1)粗品(0.63g，1.2mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.58g，1.2mmol)、1-羟基苯并三唑(0.20g，1.44mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.28g，1.78mmol)和二氯甲烷(25mL)，然后在室温下搅拌过夜。反应液依次用3mol/L盐酸水溶液(60mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)和饱和氯化钠水溶液(40mL)各洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1)，得4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔基氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(1G-1)，白色固体(1.08g，产率91％)。
第七步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔基氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯三三氟乙酸盐(1H-1)
methyl 4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]hex-4-ynoylamino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate；2，2，2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔基氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(1G-1)(0.92g，0.93mmol)和二氯甲烷(9mL)，在室温下搅拌溶解。然后滴加三氟乙酸(3.5mL)，加完后在室温下搅拌反应2h。将反应液直接减压浓缩，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]己-4-炔基氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯三三氟乙酸盐(1H-1)粗品，淡黄色油状物(0.64g，产率95％)，并直接投下一步反应。
MS m/z＝345.8[M+2H]+/2。
第八步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔酰基氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物1-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]hex-4-ynoylamino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]己-4-炔基氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(1H-1)粗品(0.64g，0.93mmol)和甲醇(6mL)，在室温下搅拌溶解。然后加入1mol/L氢氧化钠水溶液(5mL)，并在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5后，减压浓缩，残留物经制备液相分离纯化(制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔酰基氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(1I-1)，白色粉末(0.41g，产率43％)。
MS m/z＝676.4[M+H]+
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔酰基氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(1I-1)经离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂35mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(1000mL)洗脱)，并减压浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，冻干，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]己-4-炔基氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物1-1)，白色固体(0.13g，产率47.5％)。
MS m/z＝676.4[M+H]+
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.41-7.28(m,6H),7.23(d,2H),7.16(d,2H),4.83(dd,1H),4.63(dd,1H),4.38-4.30(m,1H),3.80-3.51(m,5H),3.20-3.03(m,1H),3.02-2.90(m,3H),2.85(d,2H),2.59(dd,2H),2.18-2.07(m,1H),2.07-1.96(m,1H),1.75(d,4H),1.73-1.52(m,5H),1.50-1.29(m,2H).
实施例2：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物2-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-cyclopropyl-propanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：2-(二苯亚甲基氨基)-3-环丙基-丙酸乙酯(2B)
ethyl 2-(benzhydrylideneamino)-3-cyclopropyl-propanoate
在250mL的圆底烧瓶中，加入二苯亚甲基甘氨酸乙酯(7.61g，28.5mmol)和四氢呋喃(150mL)，在室温下搅拌溶清，然后冷却至-78℃，再分批多次加入叔丁醇钾固体(3.36g，29.9mmol)，加完保持0℃搅拌1h。然后滴加溴甲基环丙烷(2A)(5g，3.6mL，37mmol)，加完后升至室温，并搅拌反应8h。然后向反应液中加入水(100mL)，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝100:1洗脱)，得到2-(二苯亚甲基氨基)-3-环丙基-丙酸乙酯(2B)，黄色油状物(5.1g，产率57％)。
MS m/z＝322.2[M+H]+
取2-(二苯亚甲基氨基)-3-环丙基-丙酸乙酯(2B)(5.1g)用于手性拆分。
制备条件：仪器：Thar 80 preparative SFC(SFC-16)；柱：Whelk O1(S,S),250×30mm I.D.,5μm；流动相：A for CO2and B for iso-propanol；梯度：B 40％；流量：70mL/min；背压：100bar；柱温：38℃；波长：220nm；周期：约5分钟；样品制备：2-(二苯亚甲基氨基)-3-环丙基-丙酸乙酯(2b)(5.1g)溶解于100mL甲醇中；注射：2mL/针。
分离后，将馏分在40℃下，经由旋转蒸发仪浓缩、干燥，得到两个光学异构体化合物2B-1(1.84g，e.e.＝100％)，化合物2B-2(1.68g，e.e.＝99.3％)。
化合物2B-1：
MS m/z＝322.2[M+H]+
手性HPLC保留时间：8.117min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
化合物2B-2：
MS m/z＝322.1[M+H]+
手性HPLC保留时间：9.229min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
第二步：2-氨基-3-环丙基-丙酸乙酯(2C-1)
ethyl 2-amino-3-cyclopropyl-propanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入2-(二苯亚甲基氨基)-3-环丙基-丙酸乙酯(化合物2B-1)(1.94g，6.07mmol)和叔丁基甲醚(10mL)，然后加入3mol/L盐酸水溶液(50mL)，在室温下搅拌过夜。氨水调节反应液的pH至约为13，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝150:1洗脱)，得到2-氨基-3-环丙基-丙酸乙酯(2C-1)，黄色油状物(0.28g，产率38％)。
MS m/z＝156.2[M-H]-
第三步：2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酸乙酯(2D-1)
Ethyl 2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-cyclopropyl-propanoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(1.21g，2.93mmol)、2-氨基-3-环丙基-丙酸乙酯(2C-1)(0.28g，1.8mmol)、1-羟基苯并三唑(0.40g，2.93mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.56g，2.9mmol)和二氯甲烷(50mL)，然后在室温下搅拌过夜。反应液中加入1mol/L盐酸水溶液(40mL)，分液。有机相中加入饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和三乙胺(1.38g，13.6mmol)，搅拌30分钟后分液。有机相依次用1mol/L盐酸水溶液(40mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和饱和氯化钠水溶液(40mL)各洗涤一次，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酸乙酯(2D-1)粗品，白色固体(0.81g，产率92％)，产物直接投下一步反应。
第四步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酸(2E-1)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-cyclopropyl-propanoic acid
在50mL反应瓶中，加入2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酸乙酯(2D-1)粗品(1.9g，3.5mmol)和甲醇(30mL)，然后滴加1mol/L氢氧化钠水溶液(4mL)，并在室温下搅拌过夜。将反应液减压减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液(30mL)酸化，然后用乙酸乙酯(60mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酸(2E-1)粗品，白色固体(1.8g，产率98％)，产物直接投下一步反应。
MS m/z＝522.3[M-H]-
第五步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(2F-1)
methyl 4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-cyclopropyl-propanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酸(2E-1)粗品(0.40g，0.8mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.428g，0.88mmol)、1-羟基苯并三唑(0.20g，1.44mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.28g，1.78mmol)和二氯甲烷(25mL)，然后在室温下搅拌过夜。反应液依次用3mol/L盐酸水溶液(60mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、饱和氯化钠水溶液(40mL)洗涤，合并有机相并用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩,残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝3:1)，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(2F-1)，白色固体(0.74g，产率93％)。
第六步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酰基]氨基]己酰]哌啶-4-羧酸甲酯三三氟乙酸盐(2G-1)
methyl 4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-cyclopropyl-propanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(2F-1)(0.60g，0.60mmol)和二氯甲烷(9mL)，在室温下滴加三氟乙酸(3.5mL)，加毕，反应液在室温下搅拌2h。然后，反应液直接减压浓缩，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酰基]氨基]己酰]哌啶-4-羧酸甲酯三三氟乙酸盐(2G-1)粗品，淡黄油状(0.4g，产率98％)，并直接投下一步反应。
MS m/z＝346.8[M+2H]/2
第七步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物2-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-cyclopropyl-propanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酰基]氨基]己酰]哌啶-4-羧酸甲酯三三氟乙酸(2G-1)粗品(0.4g，0.6mmol)、甲醇(2mL)和水(10mL)。反应液用1mol/L的NaOH溶液调节pH约为7，然后加入1mol/L的NaOH溶液(1.0mL)，加完后在室温下搅拌过夜。。反应液用三氟乙酸调节pH约为5后，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基-丙酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(2I-1)，白色粉末(0.24g，产率59％)。
MS m/z＝339.8[M+2H]+/2
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基丙酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(2I-1)经离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂25mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(800mL)洗脱)，并减压浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，冻干，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-环丙基丙酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物2-1)，白色固体(0.08g，产率67％)。
MS m/z＝339.8[M+2H]+/2
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.40-7.27(m,6H),7.22(d,2H),7.16(d,2H),4.83(q,1H),4.61(t,1H),4.30(t,1H),3.84-3.46(m,5H),3.13-2.90(m,4H),2.86(d,2H),2.25-1.97(m,2H),1.86-1.58(m,7H),1.58-1.49(m,1H),1.49-1.31(m,2H),0.75-0.60(m,1H),0.55-0.35(m,2H),0.14-0.03(m,2H).
实施例3：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(化合物3-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-fluoro-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
第一步：2-氟-2-甲基-丙-1-醇(3B)
2-fluoro-2-methyl-propan-1-ol
在1000mL的圆底烧瓶中，加入2-甲基环氧丙烷(3A)(100g，1.387mol)和甲基叔丁基醚(800mL)，反应液冷却至-78℃，然后缓慢滴加氟化氢吡啶(275g，2.775mol)，半小时内加完，加完后升至室温搅拌过夜。反应液中加入水(200mL)，分液，有机相用饱和食盐水(300mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-氟-2-甲基-丙-1-醇(3B)，黄色油状物(30.7g，产率24％)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.91(t,1H),3.35(dd,2H),1.26(d,6H).
第二步：(2-氟-2-甲基-丙基)三氟甲磺酸酯(3C)
(2-fluoro-2-methyl-propyl)trifluoromethanesulfonate
在250mL反应瓶中，加入2,6-二甲基吡啶(55.4mL，480mmol)和二氯甲烷(100mL)，反应液冷却至-25℃，然后滴加三氟乙酸酐(74.6g，443mmol)，加完后-25℃下继续反应10分钟，再缓慢滴加2-氟-2-甲基-丙-1-醇(3B)(27.1g，294mmol)，加完后升至室温搅拌反应过夜。反应液减压浓缩得到(2-氟-2-甲基-丙基)三氟甲磺酸酯(3C)粗品,黄色油状产物(6.7g，产率100％)。
第三步：2-(二苯亚甲基氨基)-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯(3D)
ethyl 2-(benzhydrylideneamino)-4-fluoro-4-methyl-pentanoate
在250mL的圆底烧瓶中，加入二苯亚甲基甘氨酸乙酯(32.04g，120mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(150mL)，然后反应液冷却至0℃，再分批多次加入叔丁醇钾(14.82g，132mmol)，加完后保持温度为0℃搅拌反应1h，再向反应液中滴加(2-氟-2-甲基-丙基)三氟甲磺酸酯(3C)粗品(29.6g，132mmol)，加完后升至室温搅拌反应8h。反应液加入水(150mL)，然后用乙酸乙酯(200mL×2)萃取，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝100:1)，得到2-(二苯亚甲基氨基)-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯(3D)，黄色油状产物(15g，产率29％)。
MS m/z＝342.1[M+H]+
取2-(二苯亚甲基氨基)-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯(3D)(10g)用于手性拆分。
制备条件：仪器：Thar 80preparative SFC(SFC-17)；柱：Phenomenex LuxCellulose-2,250×30mm I.D.,5μm.；流动相：A for CO2 and B for EtOH；梯度：B 15％；流量：50mL/min；背压：100bar；柱温：38℃；波长：220nm；周期：约3分钟；样品制备：2-(二苯亚甲基氨基)-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯(3D)(10g)溶解于400mL甲醇中；注射：2.5mL/针。
分离后，将馏分，在40℃下，经由旋转蒸发仪浓缩、干燥，得到两个光学异构体化合物3D-1(2.51g，e.e.＝100％)，化合物3D-2(3.65g，e.e.＝98.1％)。
化合物3D-1：
手性HPLC保留时间：23.612min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
化合物3D-2：
手性HPLC保留时间：25.688min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
第四步：2-氨基-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯(3E-1)
ethyl 2-amino-4-fluoro-4-methyl-pentanoate
在50mL的圆底烧瓶中，将2-(二苯亚甲基氨基)-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯(3D-1)(1.03g，2.95mmol)溶于叔丁基甲醚(10mL)，室温下加入3mol/L盐酸水溶液(30mL)，然后在室温下搅拌反应过夜。分液并弃去有机层，水相用氨水调节pH至约为13，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-氨基-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯(3E-1)，黄色油状产物(0.39g，产率74％)。
MS m/z＝178.2[M+H]+
第五步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯(3F-1)
ethyl2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-fluoro-4-methyl-pentanoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(0.825g，2.0mmol)、2-氨基-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯(3E-1)(0.354g，2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(0.297g，2.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.15g，6mmol)和二氯甲烷(45mL)，加完后在室温下搅拌过夜。反应液用依次用1mol/L盐酸水溶液(35mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(35mL)和饱和氯化钠水溶液(5mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝5:1)，得2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯(3F-1)，白色固体(0.65g，产率68％)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.33-7.09(m,10H),6.43(d,1H),6.34(br,1H),4.78(br,1H),4.60(dt,1H),4.57-4.49(m,1H),4.36-4.24(m,1H),4.21-4.12(m,2H),3.17-2.89(m,4H),2.16-2.01(m,1H),1.99-1.85(m,1H),1.40-1.20(m,18H).
第六步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酸(3G-1)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-fluoro-4-methyl-pentanoic acid
在50mL反应瓶中，加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯(3F-1)(0.65g，1.1mmol)和甲醇(30mL)，在室温下搅拌溶解。然后滴加1mol/L氢氧化钠水溶液(1.5mL)，加完后在室温下搅拌过夜。将反应液减压浓缩除去甲醇，然后加入3mol/L盐酸水溶液(30mL)，并用乙酸乙酯(60mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酸(3G-1)粗品，白色固体产物(0.62g，产率100％)，并直接投下一步反应。
MS m/z＝566.3[M+H]+
第七步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(3H-1)
methyl4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-fluoro-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酸(3G-1)粗品(0.62g，1.1mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.487g，1.0mmol)、1-羟基苯并三唑(0.155g，1.15mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.506g，2.64mmol)和二氯甲烷(25mL)，然后在室温下搅拌过夜。反应液依次用3mol/L盐酸水溶液(60mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)和饱和氯化钠水溶液(40mL)各洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1)，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(3H-1)，白色固体(0.87g，产率86％)。
第八步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三氟乙酸盐(3I-1)
methyl4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-fluoro-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(3H-1)(0.79g，0.78mmol)和二氯甲烷(9mL)，在室温下搅拌溶解。然后滴加三氟乙酸(2.0mL)，加完后在室温下搅拌反应2h。反应液直接浓缩干得淡黄色油状物4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸(3I-1)粗品，淡黄色固体(0.82g，100％)，并直接投下一步反应。
MS m/z＝356.8[M+2H]2+/2
第九步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(化合物3-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-fluoro-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylicacid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯；三三氟乙酸(3I-1)粗品(0.82g，0.78mmol)和甲醇(6mL)，在室温下搅拌溶解。然后加入1mol/L氢氧化钠水溶液(5mL)，并在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5后，减压浓缩，残留物通过制备液相纯化(制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-氟-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸(化合物3-1)，白色粉末(100mg，产率23％)。
MS m/z＝349.8[M+2H]+/2
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.44-7.27(m,6H),7.27-7.20(m,4H),4.69-4.63(m,2H),4.54-4.45(m,1H),4.26-4.19(m,1H),3.94-3.75(m,3H),3.73-3.50(m,2H),3.24-3.03(m,3H),3.03-2.91(m,3H),2.37-2.25(m,1H),2.24-2.07(m,2H),2.06-1.88(m,2H),1.88-1.57(m,6H),1.44(d,3H),1.38(d,3H).
实施例5：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物4-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6-fluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：2-(二苯亚甲基氨基)-6-氟-己酸乙酯(4B)
ethyl 2-(benzhydrylideneamino)-6-fluoro-hexanoate
在250mL的圆底烧瓶中，加入二苯亚甲基甘氨酸乙酯(7.61g，28.5mmol)和四氢呋喃(150mL)，反应液冷却至-78℃，然后分批多次加入叔丁醇钾(3.36g，29.9mmol)，加完升温至0℃搅拌1h，再滴加1-溴-4-氟丁烷(4A)(5.74g，37mmol)，加完后室温搅拌反应8h。反应液中加入水(100mL)，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝100:1)，得到2-(二苯亚甲基氨基)-6-氟-己酸乙酯(4B)，黄色油状物(8.0g，产率63％)。
MS m/z＝342.1[M+H]+
取2-(二苯亚甲基氨基)-6-氟-己酸乙酯(4B)(8.0g)用于手性拆分。
制备条件：仪器：MGⅡpreparative SFC(SFC-13)；柱：Whelk O1(S,S),250×30mmI.D.,5μm；流动相：A for CO2and B for iso-propanol；梯度：B 40％；流量：60mL/min；背压：100bar；柱温：38℃；波长：220nm；周期：约3.5分钟；样品制备：将2-(二苯亚甲基氨基)-6-氟-己酸乙酯(4B)(8.0g)溶解于150mL甲醇中；注射：1.2mL/针。
分离后，将馏分，在40℃下，经由旋转蒸发仪浓缩、干燥，得到两个光学异构体化合物4B-1(3.10g，e.e.＝100％)，化合物4B-2(3.04g，e.e.＝100％)。
化合物4B-1：
MS m/z＝342.1[M+H]+
手性HPLC保留时间：10.328min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm。
化合物4B-2：
MS m/z＝342.1[M+H]+
手性HPLC保留时间：12.028min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm。
第二步：2-氨基-6-氟-己酸乙酯(4C-1)
ethyl 2-amino-6-fluoro-hexanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入2-(二苯亚甲基氨基)-6-氟-己酸乙酯(4B-1)(205g，60mmol)和叔丁基甲醚(10mL)，然后加入3mol/L盐酸水溶液(50ml)，加完后在室温下搅拌反应过夜。氨水调节反应液的pH约为13，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝150:1)，得到2-氨基-6-氟-己酸乙酯(4C-1)，黄色油状物(0.59g，产率56％)。
MS m/z＝178.1[M+H]+
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.58-4.34(dt,2H),4.18(q,2H),3.44(dd,1H),1.82-1.72(m,4H)，1.72-1.66(m，1H)，1.66-1.58(m，1H)，1.58-1.45(m，2H)，1.28(t，3H).
第三步：2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酸乙酯(4D-1)
ethyl 2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6-fluoro-hexanoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(1.65g，4.0mmol)、2-氨基-6-氟-己酸乙酯(4C-1)(0.59g，3.3mmol)、1-羟基苯并三唑(0.65g，4.8mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.92g，4.8mmol)和二氯甲烷(50mL)，然后在室温下搅拌反应过夜。反应液中加入1mol/L盐酸水溶液(40mL)，分液。有机相中加入饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和三乙胺(1.38g，13.6mmol)，搅拌30分钟后分液。然后有机相用依次用1mol/L的盐酸水溶液(40mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和饱和氯化钠溶液(40mL)各洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酸乙酯(4D-1)粗品，白色固体(1.38g，产率72％)，直接投下一步反应。
第四步：2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酸(4E-1)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6-fluoro-hexanoic acid
在50mL反应瓶中，加入2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酸乙酯(4D-1)粗品(1.377g，2.4mmol)和甲醇(15mL)，然后滴加1mol/L氢氧化钠水溶液(2.5mL)，在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，并用乙酸乙酯(60mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酸(4E-1)粗品，白色固体(1.09g，产率79％)，并直接投下一步反应。
MS m/z＝542.2[M-H]-
第五步：(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酸甲酯(4F-1)
methyl(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6-fluoro-hexanoyl]amino]hexanoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酸(4E-1)粗品(1.09g，2.0mmol)、(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸甲酯()(0.59g，2.28mmol)、1-羟基苯并三唑(0.32g，2.4mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.58g，3.7mmol)和二氯甲烷(50mL)，然后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用3mol/L的盐酸水溶液(60mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、饱和氯化钠水溶液(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酸甲酯(4F-1)粗品，白色固体(1.2g，产率76％)，直接投下一步反应。
第六步：(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酸(4G-1)
(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6-fluoro-hexanoyl]amino]hexanoic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酸甲酯(4F-1)粗品(1.2g，1.5mmol)和甲醇(15mL)，然后滴加1mol/L氢氧化钠水溶液(2mL)，并在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，并用乙酸乙酯(60mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酸(4G-1)粗品，白色固体(1.10g，产率93％)，并直接投下一步反应。
第七步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(4H-1)
methyl 4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6-fluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酸(4G-1)粗品(0.55g，0.71mmol)、4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(2a)(0.18g，0.71mmol)、1-羟基苯并三唑(0.12g，0.85mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.27g，1.4mmol)和二氯甲烷(50mL)，并在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用3mol/L盐酸水溶液(60mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、饱和氯化钠水溶液(40mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(4H-1)粗品，白色固体(0.65g，产率90％)，并直接投下一步反应。
第八步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(4I-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6-fluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(4H-1)粗品(0.60g，0.60mmol)和二氯甲烷(9mL)，在室温下搅拌溶清，然后滴加三氟乙酸(3.5mL)，加完后室温下继续搅拌反应2h。反应液直接浓缩干得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(4I-1)粗品，，淡黄色油状物(0.632g，100％)并直接投下一步反应。
第九步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物4-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6-fluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(4H-1)粗品(0.63g，0.60mmol)、甲醇(2mL)和水(10mL)，反应液用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH约为7，再加入1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.5mL)，并在室温下搅拌过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5后，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到白色粉末4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(4J-1)(0.30g，产率45％)。
MS m/z＝696.3[M-H]-
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(化合物4J-1)经离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂35mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(1000mL)洗脱)，并浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，冻干，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物4-1)，白色固体(0.1g，产率74.5％，)。
MS m/z＝698.3[M+H]+
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.40-7.28(m,6H),7.22(d,2H),7.17(d,2H),4.82-4.78(m,1H),4.65-4.55(m,2H),4.50-4.42(m,1H),4.30-4.17(m,1H),3.85-3.74(m,2H),3.73-3.67(m,2H),3.67-3.50(m,1H),3.10-2.92(m,4H),2.88(d,2H),2.26-2.15(m,1H),2.15-2.05(m,1H),1.88-1.57(m,10H),1.55-1.31(m,4H).
实施例6：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物4-2)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6-fluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：2-氨基-6-氟-己酸乙酯(4C-2)
ethyl 2-amino-6-fluoro-hexanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入由实施例5第一步拆分得到的异构体2-(二苯亚甲基氨基)-6-氟-己酸乙酯(4B-2)(2.05g，6.0mmol)和乙酸乙酯(20mL)，然后加入1mol/L的盐酸水溶液(10mL)，在室温下搅拌反应3h。分液并弃去有机相，水相用氨水调节pH约为13，然后用二氯甲烷(25mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥后所得2-氨基-6-氟-己酸乙酯(4C-2)的溶液直接投下步反应。
第二步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酸乙酯(4D-2)
ethyl2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6-fluoro-hexanoate
在100mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(0.83g，2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(0.3g，2.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.58g，3.0mmol)和上一步所得2-氨基-6-氟-己酸乙酯(4C-2)溶液(50mL)，然后在室温下搅拌反应3h。反应毕，反应液依次用1mol/L盐酸水溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和饱和氯化钠水溶液(20mL)各洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝3:1)，得到2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酸乙酯(4D-2)，白色固体(0.8g，两步收率70％)。
第三步：2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酸(4E-2)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6-fluoro-hexanoic acid
在50mL反应瓶中，加入2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酸乙酯(4D-2)(0.8g，1.4mmol)和甲醇(10mL)，然后滴加1mol/L氢氧化钠水溶液(2mL)，并在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酸(4E-2)粗品，白色固体(0.57g，产率75％)。
MS m/z＝542.2[M-H]-
第四步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(4H-2)
methyl
4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6-fluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酸(4E-2)粗品(0.38g，0.7mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.34g，0.7mmol)、1-羟基苯并三唑(0.14g，1.05mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.21g，1.05mmol)和二氯甲烷(30mL)，然后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用1mol/L的盐酸水溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)、饱和氯化钠水溶液(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:1)，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(4H-2)，白色固体(0.64g，产率90％)。
第五步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯三三氟乙酸盐(4I-2)
methyl
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6-fluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(4H-2)(0.60g，0.60mmol)和二氯甲烷(9mL)，室温下滴加三氟乙酸(3.0mL)，加完后室温搅拌3h。反应液浓缩所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯三三氟乙酸盐(4I-2)粗品(0.632g，100％)，淡黄色油状物，直接投下一步反应。
第六步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物4-2)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6-fluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入上步反应粗品4-氨基-1-((2R)-6-氨基-2-(2-((R)-2-((R)-2-氨基-3-苯基丙酰氨基)-3-苯基丙酰胺基)-6-氟己酰胺)己酰基)哌啶-4-羧酸甲酯三三氟乙酸盐(4G-2)粗品(0.632g，0.6mmol)、甲醇(2mL)和水(10mL)，反应液先用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH为约为7，再加入1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.5mL)，并在室温下搅拌过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(4K-2)，白色固体(0.23g，产率37％)。
MS m/z＝698.3[M+H]+
上步所得白色固体4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(4K-2)，通过离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂35mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(1000mL)洗脱)，并浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，冻干，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6-氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物4-2)，白色固体(0.16g，产率39％)。
MS m/z＝698.4[M+H]+
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.35-7.28(m,6H),7.23-7.21(m,2H),7.16-7.14(m,2H),4.7(m,1H),4.53-4.46(m,2H),4.37-4.34(m,1H),4.10-4.09(m,1H),3.65-3.43(m,5H),3.05-2.87(m,6H),2.05-1.74(m,2H),1.55-1.4(m,10H),1.28-1.26(m,2H),0.89(m,2H).
实施例7：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物5-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6,6,6-trifluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：2-(二苯亚甲基氨基)-6,6,6-三氟己酸乙酯(5B)
ethyl 2-(benzhydrylideneamino)-6,6,6-trifluoro-hexanoate
在250mL的圆底烧瓶中，加入二苯亚甲基甘氨酸乙酯(9.28g，34.7mmol)和四氢呋喃(150mL)，然后冷却至-78℃，再分批多次加入叔丁醇钾(4.29g，38.2mmol)，加完后升至0℃搅拌反应1h。然后再滴加1-溴-4,4,4-三氟丁烷(5A)(5.0g，26.0mmol)，加完后升至室温搅拌反应8h。反应液中加入水(100mL)，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝100:1)，得到2-(二苯亚甲基氨基)-6,6,6-三氟己酸乙酯(5B)，黄色油状物(9.8g，产率100％)。
MS m/z＝378.2[M+H]+
取2-(二苯亚甲基氨基)-6,6,6-三氟己酸乙酯(5B)(9.8g)用于手性拆分。
制备条件：仪器：MGⅡpreparative SFC(SFC-1)；柱：Pheno Lux Cellulose-2,250×30mm I.D.,5μm；流动相：A for CO2 and B for iso-propanol；梯度：B 20％；流量：60mL/min；背压：100bar；柱温：38℃；波长：220nm；周期：2分钟；样品制备：2-(二苯亚甲基氨基)-6,6,6-三氟己酸乙酯(5B)(9.8g)溶解于250mL甲醇中；注射：1mL/针。
分离后，将馏分，在40℃下，经由旋转蒸发仪浓缩、干燥，得到两个光学异构体化合物5B-1(2.27g，e.e.＝99.7％)，化合物5B-2(2.81g，e.e.＝100％)。
化合物5B-1：
手性HPLC保留时间：7.086min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
化合物5B-2：
手性HPLC保留时间：8.895min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
第二步：2-氨基-6,6,6-三氟己酸乙酯(5C-1)
ethyl 2-amino-6,6,6-trifluoro-hexanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入2-(二苯亚甲基氨基)-6,6,6-三氟己酸乙酯(5B-1(0.9g，2.0mmol)和叔丁基甲醚(10mL)，然后加入3mol/L盐酸水溶液(50mL)，在室温下搅拌反应过夜。用氨水调节反应液的pH至约为13，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到2-氨基-6,6,6-三氟己酸乙酯(5C-1)，黄色油状(0.4g，产率78％)。
MS m/z＝214.1[M+H]+
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.28-4.11(m,2H),3.45-3.39(m,1H),2.22-2.03(m,2H),1.90-1.55(m,6H),1.28(t,3H).
第三步：2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟己酸乙酯(5D-1)
ethyl 2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6,6,6-trifluoro-hexanoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(0.825g，2.0mmol)、2-(二苯亚甲基氨基)-6，6，6-三氟己酸乙酯(5C-1)(0.4g，2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(0.30g，2.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.58g，3.0mmol)和二氯甲烷(50mL)，在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和1mol/L盐酸水溶液(40mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩得到2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟己酸乙酯(5D-1)粗品，白色固体(1.21g，产率100％)。
第四步：2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟己酸(5E-1)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6,6,6-trifluorohexanoic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟己酸乙酯(5D-1)粗品(1.21g，2.0mmol)和甲醇(15mL)，然后滴加1mol/L氢氧化钠水溶液(2.5mL)，在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，然后用乙酸乙酯(60mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟己酸(5E-1)粗品，白色固体(0.95g，产率82％)。
MS m/z＝578.2[M-H]-
第五步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(5F-1)
methyl 4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6,6,6-trifluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，加入2-[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟己酸(5E-1)粗品(0.51g，0.88mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.428g，0.88mmol)、1-羟基苯并三唑(0.20g，1.44mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.28g，1.78mmol)和二氯甲烷(25mL)，然后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)和3mol/L盐酸水溶液(40mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(5F-1)粗品，白色固体(0.90g，产率97％)。
第六步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-羧酸甲酯三三氟乙酸盐(5G-1)
methyl 4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6,6,6-trifluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(5F-1)粗品(0.60g，0.60mmol)和二氯甲烷(9mL)，在室温下滴加三氟乙酸(3.5mL)，加完后保持室温搅拌反应2h。反应液直接减压浓缩，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-羧酸甲酯三三氟乙酸盐(5G-1)粗品，淡黄油状物(0.4g，产率96％)。
MS m/z＝374.8[M+H]+。
第七步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-羧酸(化合物5-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6,6,6-trifluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-羧酸甲酯三三氟乙酸盐(5G-1)粗品(0.4g，0.6mmol)、甲醇(2mL)和水(10mL)，反应液用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH为约为7，再加入1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.5mL)，然后在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-羧酸三三氟乙酸盐(5H-1)，白色粉末(0.10g，产率15％)。
MS m/z＝734.4[M+H]+。
上步所得化合物4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-羧酸·三三氟乙酸盐(5H-1)(0.06g，0.06mmol)通过离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂35mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(1000mL)洗脱)，并浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，冻干得到得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物5-1)，白色固体(0.03g，产率67％)。
MS m/z＝734.3[M+H]+
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.42-7.30(m,6H),7.26-7.16(m,4H),4.65-4.56(m,1H),4.30-4.20(m,1H),3.93-3.55(m,5H),3.12-2.89(m,6H),2.36-2.10(m,4H),2.00-1.33(m,13H)。
实施例8：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物5-2)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6,6,6-trifluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：2-氨基-6,6,6-三氟-己酸乙酯(5C-2)
ethyl 2-amino-6,6,6-trifluoro-hexanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入由实施例7第一步拆分得到的异构体2-(二苯亚甲基氨基)-6,6,6-三氟己酸乙酯(5b-2)(0.75g，2.0mmol)和乙酸乙酯(10mL)，然后加入1mol/L盐酸水溶液(10mL)，并在室温下搅拌反应3h。分液，弃去有机相。水相用氨水调节pH约为13，再用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后得到的2-氨基-6,6,6-三氟-己酸乙酯(5C-2)溶液直接投入下一步反应。
第二步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟己酸乙酯(5D-2)
ethyl2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6,6,6-trifluoro-hexanoate
在100mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(0.83g，2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(0.3g，2.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.58g，3.0mmol)和上一步所得2-氨基-6,6,6-三氟-己酸乙酯(5C-2)的溶液(50mL)，然后在室温下搅拌反应3h。反应毕，反应液依次用1mol/L的盐酸水溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)、饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:1)，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟己酸乙酯(5D-2)粗品，白色固体(1.01g，两步收率83％)。
第三步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酸(5E-2)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6,6,6-trifluoro-hexanoic acid
在100mL圆底烧瓶中，加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟己酸乙酯(5D-2)粗品(0.97g，1.6mmol)和甲醇(12mL)，然后滴加1mol/L氢氧化钠水溶液(2.3mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，然后用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酸(5E-2)粗品，白色固体(0.92g，产率100％)。
第四步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(5F-2)
methyl4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6,6,6-trifluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酸(5E-2)粗品(0.40g，0.7mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.34g，0.7mmol)、1-羟基苯并三唑(0.14g，1.05mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.21g，1.05mmol)和二氯甲烷(30mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用1mol/L盐酸水溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和饱和氯化钠水溶液(10mL)各洗涤一次，无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝3:1)，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(5F-2)粗品，白色固体(0.59g，两步收率80％)。
第五步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(5G-2)
methyl 4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6,6,6-trifluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(5F-2)粗品(0.60g，0.60mmol)和二氯甲烷(9mL)，室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后室温搅拌反应3h。反应液直接浓缩干得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(5G-2)，淡黄色油状(0.8g，100％)，直接投下一步反应。
第六步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物5-2)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-6,6,6-trifluoro-hexanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入上步反应4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(5G-2)粗品(0.80g，0.60mmol)、甲醇(2mL)和水(10mL)，反应液先用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH约为7，再加入1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.5mL)，然后在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(5H-2)，白色粉末状固体。
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(5H-2)通过离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂35mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(1000mL)洗脱)，并浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，冻干，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-6,6,6-三氟-己酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物5-2)，白色固体(181mg，产率40％)。
MS m/z＝367.8[M+2H]+/2
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.46-7.01(m,10H),4.81(dd,1H),4.61-4.50(m,1H),4.18-4.07(m,1H),3.97(dt,1H),3.88-3.46(m,4H),3.17-2.79(m,6H),2.27-1.97(m,4H),1.87-1.81(m,1H),1.72-1.53(m,6H),1.46-1.39(m,1H),1.32-1.30(m,2H),1.08-1.06(m,2H).
实施例9：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物6-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7-fluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：2-(二苯亚甲基氨基)-7-氟-庚酸乙酯(6B)
ethyl 2-(benzhydrylideneamino)-7-fluoro-heptanoate
在250mL的圆底烧瓶中，加入二苯亚甲基甘氨酸乙酯(13.9g，52mmol)和四氢呋喃(150mL)，然后冷却至-78℃，再分批多次加入叔丁醇钾(7.59g，67.6mmol)，加完后升至0℃搅拌反应1h，然后再滴加1-溴-5-氟戊烷(6A)(9.67g，57.2mmol)，加完后升至室温搅拌反应8h。反应液中加入水(100mL)，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝100:1)，得到2-(二苯亚甲基氨基)-7-氟-庚酸乙酯(6B)，黄色油状物(16.7g，产率82％)。
MS m/z＝356.3[M+H]+
取2-(二苯亚甲基氨基)-7-氟-庚酸乙酯(6B)(10g)用于手性拆分。
制备条件：仪器：Thar 350preparative SFC(SFC-7)；柱：Phenomenex LuxCellulose-2,300×50mm I.D.,10μm；流动相：A for CO2 and B for iso-propanol；梯度：B 20％；流量：200mL/min；背压：100bar；柱温：38℃；波长：220nm；周期：约3.5分钟；样品制备：2-(二苯亚甲基氨基)-7-氟-庚酸乙酯(6B)(10g)溶解于500mL甲醇中；注射：3.0mL/针。
分离后，将馏分，在40℃下，经由旋转蒸发仪浓缩、干燥，得到两个光学异构体化合物6B-1(3.61g，e.e.＝99.5％)，化合物6B-2(3.75g，e.e.＝99.1％)。
化合物6B-1：
手性HPLC保留时间：12.231min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
化合物6B-2：
手性HPLC保留时间：15.539min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
第二步：2-氨基-7-氟-庚酸乙酯(6C-1)
ethyl 2-amino-7-fluoro-heptanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入2-(二苯亚甲基氨基)-7-氟-庚酸乙酯(6B-1)(071g，21mmol)和乙酸乙酯(10mL)，然后加入1mol/L盐酸水溶液(10ml)，在室温下搅拌反应3h。分液并弃去有机层，水相用氨水调节pH约为13，然后用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥后所得的2-氨基-7-氟-庚酸乙酯(6C-1)溶液直接投下步反应。
第三步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酸乙酯(6D-1)
ethyl2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7-fluoro-heptanoate
在100mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(0.83g，2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(0.3g，2.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.58g，3.0mmol)和上一步所得溶液2-氨基-7-氟-庚酸乙酯(6C-1)(50mL)，加完后在室温下搅拌反应3h。反应毕，反应液依次用1mol/L盐酸水溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)、饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝3:1)，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酸乙酯(6D-1)，白色固体(0.88g，两步收率75％)。
第四步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酸(6E-1)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7-fluoro-heptanoic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酸乙酯(6D-1)(0.88g，1.5mmol)和甲醇(12mL)，然后滴加1mol/L氢氧化钠水溶液溶液(2.2mL)，在室温下搅拌过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，然后用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酸(6E-1)粗品，白色固体(0.4g，产率100％)。
第五步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟庚基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(6F-1)
methyl4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7-fluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酸(6E-1)粗品(0.40g，0.7mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.34g，0.7mmol)、1-羟基苯并三唑(0.14g，1.05mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.21g，1.05mmol)和二氯甲烷(30mL)，在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用1mol/L的盐酸水溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)、饱和氯化钠水溶液(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1)，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟庚基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(6F-1)，白色固体(0.59g，两步收率80％)。
第六步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(6G-1)
methyl 4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7-fluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟庚基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(6F-1)(0.60g，0.60mmol)和二氯甲烷(9mL)，室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后室温下搅拌反应3h。反应液直接浓缩得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(6G-1)粗品，淡黄色油状(1.2g)后投下一步反应。
第七步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物6-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7-fluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入上步反应粗品4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(6G-1)粗品(1.2g)、甲醇(2mL)和水(10mL)，反应液先用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH约为7，再加入1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.5mL)，并在室温下搅拌过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，并浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐，白色粉末状固体。
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐通过离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂35mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(1000mL)洗脱)，冻干，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物6-1)，白色固体(148mg，产率37％)
MS m/z＝356.6[M+2H]+/2
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.32-7.26(m,6H),7.18(d,2H),7.13(d,2H),4.77-4.70(m,1H),4.55(dd,2H),4.43(t,1H),4.18(t,1H),3.68-3.47(m,5H),3.04-2.81(m,6H),2.12-2.20(m,2H),1.72-1.70(m,10H),1.41-1.28(m,6H).
实施例10：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物6-2)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7-fluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：2-氨基-7-氟-庚酸乙酯(6c-2)
ethyl 2-amino-7-fluoro-heptanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入2-(二苯亚甲基氨基)-7-氟-庚酸乙酯(6B-2)(0.95g，2.7mmol)和叔丁基甲醚(10mL)，然后加入3mol/L盐酸水溶液(50ml)，并在室温下搅拌反应过夜。氨水调节反应液的pH至约为13，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到2-氨基-7-氟-庚酸乙酯(6C-2)，黄色油状物(0.39g，产率76％)。
第二步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酸乙酯(6D-2)
ethyl 2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7-fluoro-heptanoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(0.536g，1.3mmol)、2-氨基-7-氟-庚酸乙酯(6C-2)(0.25g，1.3mmol)、1-羟基苯并三唑(0.193g，1.43mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.38g，2.0mmol)和二氯甲烷(50mL)，然后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和1mol/L盐酸水溶液(40mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酸乙酯(6D-2)，白色固体(0.68g，产率43％)。
第三步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酸(6E-2)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7-fluoro-heptanoic acid
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酸乙酯(6D-2)(0.67g，1.1mmol)和甲醇(15mL)，然后滴加1mo/L氢氧化钠水溶液(5mL)，并在室温下搅拌过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，然后用乙酸乙酯(60mL×2)萃取，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酸(6E-2)粗品，白色固体(0.72g，产率100％)。
MS m/z＝556.2[M-H]-
第四步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟庚基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(6F-2)
methyl 4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7-fluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酸(6E-2)粗品(0.54g，0.97mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.428g，0.88mmol)、1-羟基苯并三唑(0.16g，1.15mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.506g，2.64mmol)和二氯甲烷(25mL)，在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)和3mol/L盐酸水溶液(40mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟庚基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(6F-2)粗品，白色固体(0.78g，产率79％)。
第五步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(6G-2)
Methyl 4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7-fluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟庚基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(6F-2)粗品(0.70g，0.70mmol)和二氯甲烷(9mL)，然后在室温下滴加三氟乙酸(3.5mL)，加完后室温下搅拌反应2h。反应液直接浓缩得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(6G-2)粗品(0.74g，100％)，淡黄色油状，直接投下一步反应。
MS m/z＝363.9[M+2H]+/2。
第六步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物6-2)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7-fluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(6G-2)粗品(0.74g)，用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH约为7，再加入1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.5mL)，然后在室温下搅拌过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(6H-2)，白色粉末(0.10g，产率14％)。
MS m/z＝356.8[M+2H]+/2。
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(6G-2)通过离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂35mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(1000mL)洗脱)，浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，冻干，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基
-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7-氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物6-2)，白色固体(40mg，产率75％)
MS m/z＝356.7[M+2H]+/2
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.32-7.26(m,6H),7.18(d,2H),7.13(d,2H),4.77-4.70(m,1H),4.55(dd,2H),4.43(t,1H),4.18(t,1H),3.68-3.47(m,5H),3.04-2.81(m,6H),2.12-2.20(m,2H),1.72-1.70(m,10H),1.41-1.28(m,6H).
实施例11：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物7-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5,5,5-trifluoro-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：3,3,3-三氟丙基三氟甲磺酸酯(7B)
3,3,3-trifluoropropyl trifluoromethanesulfonate
在250mL单口瓶中，加入2,6-二甲基吡啶(17g，160mmol)和二氯甲烷(120mL)，反应液冷却至-25℃，然后滴加三氟乙酸酐(45.0g，160mmol)，加完后-25℃下继续反应2h，再缓慢滴加三氟乙醇(12.0g，105mmol)，加完后升至室温搅拌反应过夜。反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷洗脱)，得到3,3,3-三氟丙基三氟甲磺酸酯(7B)，黄色油状产物(6.6g，产率26％)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.70(t,2H),2.68(m,2H).
第二步：2-(二苯亚甲基氨基)-5,5,5-三氟-戊酸乙酯(7C)
ethyl 2-(benzhydrylideneamino)-5,5,5-trifluoro-pentanoate
在250mL的圆底烧瓶中，加入二苯亚甲基甘氨酸乙酯(13.9g，52.0mmol)和四氢呋喃(150mL)，然后反应液冷却至-78℃，再分批多次加入叔丁醇钾(7.59g，67.6mmol)，加完后升至0℃搅拌反应1h，再向反应液中滴加1-溴-5-氟戊烷(6A)(9.67g，57.2mmol)，加完后升至室温搅拌反应8h。反应液加入水(100mL)，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝100:1)，得到2-(二苯亚甲基氨基)-5,5,5-三氟-戊酸乙酯(7C)，黄色油状产物(16.7g，产率82％)。
MS m/z＝364.2[M+H]+
取2-(二苯亚甲基氨基)-5,5,5-三氟-戊酸乙酯(7C)(10g)用于手性拆分。
制备条件：仪器：Thar 200preparative SFC(SFC-10)；柱：Whelk O1(S,S),300×50mm I.D.,10μm；流动相：Afor CO2and B for iso-propanol；梯度：B 25％；流量：200mL/min；背压：100bar；柱温：38℃；波长：220nm；周期：约4分钟；样品制备：2-(二苯亚甲基氨基)-5,5,5-三氟-戊酸乙酯(7C)(10g)溶解于180mL甲醇中；注射：3.0mL/针。
分离后，将馏分，在40℃下，经由旋转蒸发仪浓缩、干燥，得到两个光学异构体化合物7C-1(1.87g，e.e.＝100％)，化合物7C-2(1.79g，e.e.＝100％)。
化合物7C-1：
手性HPLC保留时间：5.872min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
化合物7C-2：
手性HPLC保留时间：6.584min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
第三步：2-氨基-5,5,5-三氟-戊酸乙酯(7D-1)
ethyl 2-amino-5,5,5-trifluoro-pentanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入2-(二苯亚甲基氨基)-5,5,5-三氟-戊酸乙酯(7C-1)(0.76g，2.1mmol)和甲基叔丁基醚(10mL)，加入1mol/L盐酸水溶液(10mL)，并在室温下搅拌反应3h。分液并弃去有机层，水相用氨水调节pH约为13，然后用二氯甲烷(25mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥后所得的2-氨基-5,5,5-三氟-戊酸乙酯(7D-1)溶液(50mL)直接投下步反应。第四步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酸乙酯(7E-1)
ethyl2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5,5,5-trifluoro-pentanoate
在100mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(0.83g，2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(0.3g，2.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.58g，3.0mmol)和上一步所得2-氨基-5,5,5-三氟-戊酸乙酯(7D-1)溶液(50mL)，然后在室温下搅拌反应3h。反应毕，反应液依次用1mol/L盐酸水溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝3:1)，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酸乙酯(7E-1)，白色固体(0.83g，两步收率70％)。
第五步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酸(7F-1)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5,5,5-trifluoro-pentanoic acid
在100mL圆底烧瓶中，加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酸乙酯(7E-1)(0.83g，1.4mmol)和甲醇(10mL)，然后滴加1mol/L的氢氧化钠水溶液(2mL)，并在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，然后用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酸(7F-1)粗品，白色固体(0.4g，100％)。
第六步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(7G-1)
methyl4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5,5,5-trifluoro-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酸(7F-1)粗品(0.4g，0.7mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.34g，0.7mmol)、1-羟基苯并三唑(0.14g，1.05mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.21g，1.05mmol)和二氯甲烷(30mL)，在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用1mol/L盐酸水溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和饱和氯化钠水溶液(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1)，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(7G-1)，白色固体(0.66g，两步收率90％)。
第七步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(7H-1)
methyl 4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5,5,5-trifluoro-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate；2，2，2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(7G-1)(0.40g，0.60mmol)和二氯甲烷(9mL)，室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后室温搅拌反应3h。反应液减压浓缩得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(7H-1)粗品(0.65g，产率100％)，淡黄色油状，直接投下一步反应。
第八步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物7-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5,5,5-trifluoro-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(7H-1)粗品(0.65g)、甲醇(2mL)和水(10mL)，反应液先用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH约为7，然后加入1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.5mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5后，减压浓缩，残留物经制备液相分离纯化(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(7I-1),白色粉末。
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸；三三氟乙酸盐通过离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂35mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(1000mL)洗脱)，并浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，冻干，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物7-1)，白色固体(0.19g，产率40％)。
MS m/z＝360.8[M+2H]+/2
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.33-7.13(m,10H),4.71-4.70(m,1H),5.54(t,1H),4.72(t,1H),3.70-3.46(m,5H),2.99-2.83(m,6H),2.20-1.94(m,5H),1.88-1.82(m,1H),1.73-1.57(m,6H),1.44-1.36(m,2H).
实施例12：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(化合物7-2)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5,5,5-trifluoro-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
第一步：2-氨基-5,5,5-三氟-戊酸乙酯(7D-2)
ethyl 2-amino-5,5,5-trifluoro-pentanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入由实施例11第一步拆分得到的异构体2-(二苯亚甲基氨基)-5，5，5-三氟-戊酸乙酯(7C-2)(0.85g，2.3mmol)、叔丁基甲醚(10mL)和3mol/L盐酸水溶液(50mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。氨水调节反应液pH至约为13，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到2-氨基-5,5,5-三氟-戊酸乙酯(7D-2)，黄色油状物(0.30g，产率66％)。
MS：m/z＝200.2[M+H]+
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.24-4.16(m,2H),3.46(dd,1H),2.40-2.13(m,2H),2.07-1.94(m,1H),1.76(m,1H),1.67(br,2H),1.29(t,3H).
第二步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟戊酸乙酯(7E-2)
ethyl 2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5,5,5-trifluoro-pentanoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(0.536g，1.3mmol)、2-氨基-5,5,5-三氟-戊酸乙酯(7D-2)(0.258g，1.3mmol)、1-羟基苯并三唑(0.193g，1.43mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.38g，2.0mmol)和二氯甲烷(50mL)，然后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和1mol/L盐酸水溶液(40mL)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟戊酸乙酯(7E-2)粗品，白色固体(0.72g，产率93％)。
MS m/z＝616.3[M+Na]+
第三步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟戊酸(7F-2)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5,5,5-trifluoro-pentanoic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟戊酸乙酯(7E-2)粗品(0.67g，1.1mmol)和甲醇(15mL)，然后滴加1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.5mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸酸化(30mL)，然后用乙酸乙酯(60mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟戊酸(7F-2)粗品，白色固体(0.46g，产率74％)。
MS m/z＝588.8[M+Na]+
第四步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(7G-2)
methyl 4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5,5,5-trifluoro-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟戊酸(7F-2)粗品(0.46g，0.81mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.394g，0.81mmol)、1-羟基苯并三唑(0.155g，1.15mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.506g，2.64mmol)和二氯甲烷(25mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)和3mol/L盐酸水溶液(40mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(7G-2)粗品，白色固体(0.70g，产率84％)。
第五步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(7H-2)
Methyl 4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5,5,5-trifluoro-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(7G-2)粗品(0.70g，0.70mmol)和二氯甲烷(9mL)，然后室温下滴加三氟乙酸(3.5mL)，加完后室温搅拌反应2h。反应液直接浓缩得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(7H-2)粗品(0.76g，100％)，淡黄色油状，直接投下一步反应。
第六步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(化合物7-2)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5,5,5-trifluoro-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(7H-2)粗品(0.76g)用1mol/L的NaOH溶液调节pH约为7，加入1mol/L的NaOH溶液(1.5mL)，并在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5,5,5-三氟-戊酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(化合物7-2)，白色粉末(0.06g，产率8％)。
MS m/z＝360.7[M+H]/2。
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.63-6.98(m,10H),4.94-4.84(m,1H),4.62-4.58(m,1H),4.30-4.15(m,2H),3.89-3.47(m,4H),3.26-2.82(m,6H),2.34-1.23(m,14H).
实施例13：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物8-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7,7,7-trifluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：2-(二亚苄基氨基)-7,7,7-三氟-庚酸乙酯(8B)
ethyl 2-(benzhydrylideneamino)-7,7,7-trifluoro-heptanoate
在250mL的圆底烧瓶中，加入二苯亚甲基甘氨酸乙酯(11.38g，42.57mmol)和四氢呋喃(100mL)，并在室温下搅拌溶清，然后将反应液冷却至0℃，分批多次加入叔丁醇钾(6.21g，55.3mmol)，加完后保持0℃搅拌1h，再滴加1-溴-5-氟戊烷(8A)(9.60g，46.8mmol)，加完后升至室温搅拌反应8h。反应液加入水(100mL)，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相并用用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝100:1)，得到2-(二亚苄基氨基)-7,7,7-三氟-庚酸乙酯(8B)，黄色油状物(14.0g，产率84％)。
MS m/z＝392.1[M+H]+
取2-(二亚苄基氨基)-7,7,7-三氟-庚酸乙酯(8B)(9.2g)用于手性拆分。
制备条件：仪器：MGΠpreparative SFC(SFC-1)；柱：Phenomenex Lux Cellulose-2,250×30mm I.D.,5μm；流动相：A for CO2 and B for methanol；梯度：B 15％；流量：60mL/min；背压：100bar；柱温：38℃；波长：220nm；周期：约2.2分钟；样品制备：将2-(二亚苄基氨基)-7,7,7-三氟-庚酸乙酯(8B)(9.2g)溶解于50mL甲醇中；注射：0.5mL/针。
分离后，将馏分，在40℃下，经由旋转蒸发仪浓缩、干燥，得到两个光学异构体化合物8B-1(4.00g，e.e.＝99.5％)，化合物8B-2(4.00g，e.e.＝97.1％)。
化合物8B-1：
手性HPLC保留时间：7.896min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
化合物8B-2：
手性HPLC保留时间：8.803min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
第二步：2-氨基-7,7,7-三氟庚酸乙酯(8C-1)
ethyl 2-amino-7,7,7-trifluoro-heptanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入2-(二亚苄基氨基)-7,7,7-三氟-庚酸乙酯(8B-1)(0.76g，1.9mmol)和甲基叔丁基醚(10mL)，在室温下搅拌溶清，然后加入1mol/L的盐酸水溶液(10mL)，加完在室温下搅拌反应3h。分液并弃去有机层，水相用氨水调节pH约为13，然后用二氯甲烷(25mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，所得的2-氨基-7,7,7-三氟庚酸乙酯(8C-1)溶液直接投下步反应。
第三步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酸乙酯(8D-1)
Ethyl2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7,7,7-trifluoro-heptanoate
在100mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(0.78g，1.9mmol)、1-羟基苯并三唑(0.3g，2.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.58g，3.0mmol)和上一步所得2-氨基-7,7,7-三氟庚酸乙酯(8C-1)溶液(50mL)，加完后在室温下搅拌反应3h。反应液依次用1mol/L盐酸水溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝3:1)，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酸乙酯(8D-1)，白色固体(1.03g，两步收率90％)。
第四步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酸(8E-1)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7,7,7-trifluoro-heptanoic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酸乙酯(8D-1)(0.99g，1.6mmol)和甲醇(12mL)，在室温下搅拌溶清，然后滴加1mol/L的氢氧化钠水溶液(2.0mL)，加完后在室温下搅拌过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酸(8E-1)粗品，白色固体(0.94g，产率44％)。
第五步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯(8F-1)
methyl4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7,7,7-trifluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酸(8E-1)(0.40g，0.7mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.34g，0.7mmol)、1-羟基苯并三唑(0.14g，1.05mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.21g，1.05mmol)和二氯甲烷(30mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用1mol/L的盐酸水溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和饱和氯化钠水溶液(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1)，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯(8F-1)，白色固体(0.65g，两步产率90％)。
第六步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(8G-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7,7,7-trifluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯(8F-1)(0.50g，0.60mmol)和二氯甲烷(9mL)，室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后室温搅拌反应3h。反应液直接浓缩干得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯；三三氟乙酸盐(8G-1)粗品(0.66g，100％)，淡黄色油状，直接投下一步反应。
第七步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物8-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7,7,7-trifluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯；三三氟乙酸盐(8G-1)粗品(0.66g)、甲醇(2mL)和水(10mL)，反应液先用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH约为7，再加入1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.5mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5后，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐，白色粉末。
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐通过离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂35mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(1000mL)洗脱)，并浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，冻干，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物8-1)，白色固体(153mg，产率33％)。
MS m/z＝374.7[M+2H]+/2
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.34-7.12(m,10H),4.71-4.70(m,1H),4.53(t,1H),4.19(t,1H),3.69-3.48(m,5H),3.10-2.70(m,6H),2.22-2.08(m,3H),2.02-1.95(m,1H)，1.80-1.20(m,14H)
实施例14：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(化合物8-2)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7,7,7-trifluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylicacid；2,2,2-trifluoroacetic acid
第一步：2-氨基-7,7,7-三氟庚酸乙酯(8C-2)
ethyl 2-amino-7,7,7-trifluoro-heptanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入由实施例13第一步拆分得到的异构体2-(二苯亚甲基氨基)-7-氟-庚酸乙酯(8B-2)(1.55g，3.96mmol)、叔丁基甲醚(10mL)和3mol/L盐酸水溶液(50mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。氨水调节pH至约为13，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到2-氨基-7,7,7-三氟庚酸乙酯(8C-2)，黄色油状物(0.60g，产率67％)。
MS：m/z＝228.1[M+H]+
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.18(q,2H),3.48-3.39(m,1H),2.17-1.99(m,2H),1.82-1.39(m,8H),1.28(t,3H).
第二步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酸乙酯(8D-2)
ethyl 2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7,7,7-trifluoro-heptanoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(0.825g，2.0mmol)、2-氨基-7,7,7-三氟庚酸乙酯(8C-2)(0.454g，2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(0.297g，2.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.15g，6.0mmol)和二氯甲烷(20mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和1mol/L的盐酸水溶液(40mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酸乙酯(8D-2)粗品，白色固体(1.25g，产率100％)。
第三步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7三氟庚酸(8E-2)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7,7,7-trifluoro-heptanoic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酸乙酯(8D-2)粗品(1.25g，2.01mmol)和甲醇(15mL)，然后滴加1mol/L氢氧化钠水溶液(2.5mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，然后用乙酸乙酯(60mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7三氟庚酸(8E-2)粗品，白色固体(1.1g，产率92％)。
第四步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7三氟庚基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲基酯(8F-2)
4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7,7,7-trifluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7三氟庚酸(8E-2)粗品(0.59g，1.0mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.487g，1.0mmol)、1-羟基苯并三唑(0.16g，1.15mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.506g，2.64mmol)和二氯甲烷(25mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)和3mol/L盐酸水溶液(40mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7三氟庚基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲基酯(8F-2)粗品，白色固体(0.56g，产率52.7％)。
第五步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(8G-2)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7,7,7-trifluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7三氟庚基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲基酯(8F-2)粗品(0.55g，0.52mmol)和二氯甲烷(9mL)，室温下滴加三氟乙酸(3.5mL)，加完后在室温下搅拌反应2h。反应液直接减压浓缩，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(8G-2)粗品(574mg，100％)，淡黄色油状物，直接投下一步反应。
MS m/z＝381.8[M+2H]+/2。
第六步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(化合物8-2)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-7,7,7-trifluoro-heptanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL反应瓶中，加入4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(8G-2)粗品(0.55g)，然后用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH约为7，再加入1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.5mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到白色粉末4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-7,7,7-三氟-庚酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(化合物8-2)(0.14g，产率24.7％)。
MS m/z＝374.8[M+H]+/2
1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.46-7.20(m,10H),4.63-4.45(m,2H),4.37-4.05(m,4H),4.04-3.69(m,4H),3.68-3.51(m,2H),3.25-2.82(m,8H),2.40-2.00(m,6H),1.90-1.57(m,9H),1.57-1.30(m,7H),1.15-0.90(m,3H).
实施例15：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物9-1)4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-cyclopropyl-butanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：2-环丙基乙基三氟甲磺酸酯(9B)
2-cyclopropylethyl trifluoromethanesulfonate
在250mL单口瓶中，加入2，6-二甲基吡啶(5.1g，48.0mmol)和二氯甲烷(40mL)，反应液冷却至-25℃，然后滴加三氟乙酸酐(12.5g，44.3mmol)，加完在-25℃下继续搅拌反应2h。然后缓慢滴加三氟乙醇(2.71g，31.5mmol)，加完后升至室温搅拌过夜。反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷洗脱)，得到2-环丙基乙基三氟甲磺酸酯(9B)，黄色油状(4.8g，产率70％)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.60(t,2H),1.73(q,2H),0.86-0.71(m,1H),0.61-0.51(m,2H),0.17-0.10(m,2H).
第二步：2-(二苯亚甲基氨基)-4-环丙基-丁酸乙酯(9C)
ethyl 2-(benzhydrylideneamino)-4-cyclopropyl-butanoate
在250mL的圆底烧瓶中，加入二苯亚甲基甘氨酸乙酯(2.67g，10mmol)和四氢呋喃(100mL)，反应液冷却至-78℃，然后分批多次加入叔丁醇钾(1.46g，13mmol)，加完后升至0℃继续搅拌反应1h，再滴加2-环丙基乙基三氟甲磺酸酯(9B)(2.84g，13mmol)，加完后升至室温搅拌反应8h。反应液加入水(100mL)，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝100:1)，得到2-(二苯亚甲基氨基)-4-环丙基-丁酸乙酯(9C)，黄色油状(2.38g，产率89％)。
取2-(二苯亚甲基氨基)-4-环丙基-丁酸乙酯(9C)(9.9g)用于手性拆分。
制备条件：仪器：Thar 80preparative SFC(SFC-16)；柱：Phenomenex LuxCellulose-2,250×30mm I.D.,5μm；流动相：A for CO2 and B for ethanol；梯度：B15％；流量：60mL/min；背压：100bar；柱温：38℃；波长：220nm；周期：约4分钟；样品制备：将2-(二苯亚甲基氨基)-4-环丙基-丁酸乙酯(9C)(9.9g)溶解于100mL甲醇中；注射：1mL/针。
分离后，将馏分，在40℃下，经由旋转蒸发仪浓缩、干燥，得到两个光学异构体化合物9C-1(4.00g，e.e.＝99.5％)，化合物9C-2(4.00g，e.e.＝96.5％)。
化合物9C-1：
手性HPLC保留时间：7.757min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
化合物9C-2：
手性HPLC保留时间：8.518min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
第三步：2-氨基-4-环丙基-丁酸乙酯(9D-1)
ethyl 2-amino-4-cyclopropyl-butanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入2-(二苯亚甲基氨基)-4-环丙基-丁酸乙酯(9C-1)(0.8g，2.0mmol)、乙酸乙酯(10mL)和1mol/L的盐酸水溶液(10mL)，加完后在室温下搅拌反应3h。分液弃去有机层。水层用氨水调节pH约为13，然后用二氯甲烷(25mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥后所得2-氨基-4-环丙基-丁酸乙酯(9D-1)溶液(50mL)直接投下步反应。
第四步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基丁酸乙酯(9E-1)
ethyl2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-cyclopropyl-butanoate
在100mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(0.83g，2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(0.3g，2.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.58g，3.0mmol)和上一步所得2-氨基-4-环丙基-丁酸乙酯(9D-1)溶液(50mL)，加完后在室温下搅拌反应3h。反应液依次用1mol/L盐酸水溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝3:1)，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基丁酸乙酯(9E-1)，白色固体(0.79g，两步收率70％)。
第五步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基丁酸(9F-1)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-cyclopropyl-butanoic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基丁酸乙酯(9E-1)(0.79g，1.4mmol)和甲醇(12mL)，在室温下搅拌溶清，然后滴加1mol/L的氢氧化钠水溶液(2mL)，加完后室温搅拌过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，然后用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基丁酸(9F-1)粗品，白色固体(0.54g，产率71％)。
第六步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(9G-1)
methyl4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-cyclopropyl-butanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基丁酸(9F-1)粗品(0.40g，0.7mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.34g，0.7mmol)、1-羟基苯并三唑(0.14g，1.05mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.21g，1.05mmol)和二氯甲烷(30mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用1mol/L的盐酸水溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和饱和氯化钠水溶液(10mL)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:1)，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(9G-1)，白色固体(0.58g，产率80％)。
第七步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(9H-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-cyclopropyl-butanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(9G-1)(0.58g，0.60mmol)和二氯甲烷(9mL)，然后滴加三氟乙酸(3mL)，加完后室温搅拌反应3h。反应液直接浓缩得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(9H-1)粗品(628mg，100％)，淡黄色油状，然后直接投下一步反应。
第八步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物9-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-cyclopropyl-butanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入上步4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(9H-1)粗品(0.63g)、甲醇(2mL)和水(10mL)，反应液先用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH约为7，再加入1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.5mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5后，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到白色粉末4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(9I-1)。
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(9I-1)通过离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂35mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(1000mL)洗脱)，并浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，冻干，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物9-1)，白色固体(129mg，产率33％)。
MS m/z＝346.7[M+2H]+/2
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.41-7.05(m,10H),4.78-4.71(m,1H),4.57(t,1H),4.33-4.21(m,1H),3.84-3.38(m,5H),3.14-2.78(m,6H),2.23-1.93(m,2H),1.91-1.50(m,8H),1.25(m,4H),0.67(s,1H),0.41(d,2H),0.00(s,2H).
实施例16：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物9-2)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-cyclopropyl-butanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：2-氨基-4-环丙基-丁酸乙酯(9D-2)
ethyl 2-amino-4-cyclopropyl-butanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入加入由实施例15第一步拆分得到的异构体2-(二苯亚甲基氨基)-4-环丙基-丁酸乙酯(9C-2)(0.8g，2.0mmol)、叔丁基甲醚(10mL)和3mol/L盐酸水溶液(50mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜，然后分液并弃去有机相。水相用氨水调节pH至约为13，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩得到2-氨基-4-环丙基-丁酸乙酯(9D-2)，黄色油状物(0.35g，产率84％)。
MS：m/z＝172.1[M+H]+
第二步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基丁酸乙酯(9E-2)
ethyl 2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-cyclopropyl-butanoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(0.536g，1.3mmol)、2-氨基-4-环丙基-丁酸乙酯(9D-2)(0.223g，1.3mmol)、1-羟基苯并三唑(0.193g，1.43mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.38g，2.0mmol)和二氯甲烷(50mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)、和1mol/L盐酸水溶液(40mL)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基丁酸乙酯(9E-2)粗品，白色固体(0.5g，产率68％)。
第三步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基丁酸(9F-2)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-cyclopropyl-butanoic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基丁酸乙酯(9E-2)粗品(1.2g，2.1mmol)和甲醇(15mL)，然后滴加1mol/L氢氧化钠水溶液(2.5mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，然后用乙酸乙酯(60mL×2)萃取，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基丁酸(9f-2)粗品，白色固体(0.9g，产率80％)。
第四步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(9G-2)
methyl 4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-cyclopropyl-butanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基丁酸(9F-2)粗品(0.54g，1.0mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.487g，1.0mmol)、1-羟基苯并三唑(0.155g，1.15mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.506g，2.64mmol)和二氯甲烷(25mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)和3mol/L盐酸水溶液(40mL)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(9G-2)粗品，白色固体(0.70g，产率70％)。
第五步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(9H-2)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-cyclopropyl-butanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(9G-2)粗品(0.70g，0.70mmol)和二氯甲烷(9mL)，室温下滴加三氟乙酸(3.5mL)，加完后室温搅拌反应2h。反应液浓缩干得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(9H-2)粗品(0.73g，100％)，淡黄色油，然后直接投入下一步。
第六步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(化合物9-2)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-cyclopropyl-butanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL反应瓶中，加入上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(9H-2)粗品(0.73g)，然后用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH为7，再加入1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.5mL)，然后在室温下搅拌过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5后，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-环丙基-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸；三三氟乙酸盐(化合物9-2)，白色粉末(0.12g，产率16.6％)。
MS m/z＝346.8[M+H]+/2。
1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.44-7.18(m,10H),4.51(dd,1H),4.29-3.95(m,3H),3.90-3.44(m,4H),3.30-3.16(m,1H),3.17-2.81(m,5H),2.37-2.09(m,2H),1.99-1.47(m,8H),1.46-1.30(m,2H),1.00-0.71(m,2H),0.61-0.46(m,1H),0.46-0.30(m,2H),-0.03--0.16(m,2H)。
实施例18：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(化合物11-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-fluoro-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
第一步：2-(二苯亚甲基氨基)-5-氟-戊酸乙酯(11b)
ethyl 2-(benzhydrylideneamino)-5-fluoro-pentanoate
在250mL的圆底烧瓶中，加入二苯亚甲基甘氨酸乙酯(7.61g，28.5mmol)和四氢呋喃(150mL)，反应液冷却至-78℃，然后分批多次加入叔丁醇钾(3.36g，29.9mmol)，加完后升至0℃搅拌1h，再滴加1-溴-3-氟丙烷(11A)(5.21g，3.6mL，37mmol)，加完后升至室温搅拌反应8h。反应液中加入水(100mL)，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝100:1)，得到2-(二苯亚甲基氨基)-5-氟-戊酸乙酯(11B)，黄色油状物(5.2g，产率56％)。
MS:m/z＝328.1[M+H]+
取2-(二苯亚甲基氨基)-5-氟-戊酸乙酯(11B)(5.2g)用于手性拆分。
制备条件：仪器：MGⅡpreparative SFC(SFC-11)；柱：Whelk O1(S,S),250×30mmI.D.,5μm；流动相：A for CO2and B for ethanol；梯度：B 35％；流量：60mL/min；背压：100bar；柱温：38℃；波长：220nm；周期：约4分钟；样品制备：2-(二苯亚甲基氨基)-5-氟-戊酸乙酯(11B)(5.2g)溶解于100mL甲醇中；注射：2mL/针。
分离后，将馏分，在40℃下，经由旋转蒸发仪浓缩、干燥，得到两个光学异构体化合物11B-1(1.68g，e.e.＝100％)，化合物11B-2(2.41g，e.e.＝99.5％)。
化合物11B-1：
手性HPLC保留时间：9.846min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
化合物11B-2：
手性HPLC保留时间：12.375min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
第二步：2-氨基-5-氟-戊酸乙酯(11C-1)
ethyl 2-amino-5-fluoro-pentanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入2-(二苯亚甲基氨基)-5-氟-戊酸乙酯(11b-1)(1.4g，4.3mmol)、叔丁基甲醚(10mL)和3mol/L盐酸水溶液(50mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜，然后分液并弃掉有机相。水相用氨水调节pH至约为13，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-氨基-5-氟-戊酸乙酯(11C-1)，黄色油状物(0.70g，产率98％)。
第三步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氟-戊酸乙酯(11D-1)
ethyl 2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-fluoro-pentanoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(1.8g，4.4mmol)、2-氨基-5-氟-戊酸乙酯(11C-1)(0.7g，4.3mmol)、1-羟基苯并三唑(0.62g，4.6mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.2g，6.3mmol)和二氯甲烷(50mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和1mol/L盐酸水溶液(40mL)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝3:1)，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氟-戊酸乙酯(11D-1)粗品，白色固体(1.47g，产率62％)。
第四步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氟-戊酸(11E-1)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-fluoro-pentanoic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氟-戊酸乙酯(11D-1)粗品(1.47g，2.6mmol)、甲醇(15mL)和1mol/L氢氧化钠水溶液(3mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L的盐酸水溶液酸化(30mL)，然后用乙酸乙酯(60mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤后滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氟-戊酸(11E-1)粗品，白色固体(0.99g，产率71％)。
第五步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-((叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(11F-1)
methyl 4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-fluoro-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氟-戊酸(11E-1)粗品(0.99g，1.88mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.91g，1.88mmol)、1-羟基苯并三唑(0.25g，1.88mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.54g，2.8mmol)和二氯甲烷(50mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用3mol/L盐酸水溶液(60mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)和饱和氯化钠水溶液(40mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1)，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-((叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-5-氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(11F-1)，淡黄色固体(1.3g，产率69％)。
第六步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(11G-1)
Methyl 4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-fluoro-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-((叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-5-氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(11F-1)(1.3g，1.3mmol)和二氯甲烷(9mL)，室温下滴加三氟乙酸(3.5mL)，加完后室温反应2h。反应液直接浓缩干后得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(11G-1)粗品(1.35g，100％)，淡黄色油状，直接投下一步反应。
第七步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(化合物11-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-fluoro-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(11G-1)粗品(1.35g)、甲醇(2mL)和水(10mL)，反应液用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH约为7，加入1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.5mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氟-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(化合物11-1)，白色粉末(0.63g，产率58％)。
MS:m/z＝342.8[M+2H]+/2
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.52–7.11(m,10H),4.68–4.55(m,2H),4.50-4.43(m,1H),4.35-4.20(m,2H),4.05–3.65(m,4H),3.60-3.45(m,1H),3.18(d,2H),3.06–2.92(m,4H),2.43–2.18(m,2H),2.07–1.61(m,10H),1.55-1.30(m,2H).
实施例19：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟丁酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(化合物12-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4,4,4-trifluoro-butanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
第一步：2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(12B)
2,2,2-trifluoroethyl trifluoromethanesulfonate
在100mL反应瓶中，加入三乙胺(5.54mL，39.7mmol)和二氯甲烷(40mL)，反应液冷却至-25℃，然后滴加三氟乙酸酐(12.5g，44.3mmol)，加完后-25℃下继续反应2h，再缓慢滴加三氟乙醇(2.71g，27.1mmol)，加完后升至室温搅拌反应过夜。反应液减压浓缩得到3,3,3-三氟丙基三氟甲磺酸酯(7b)粗品，黄色油状产物(6.7g，产率100％)。
第二步：2-(二苯亚甲基氨基)-4,4,4-三氟丁酸乙酯(12C)
ethyl 2-(benzhydrylideneamino)-4,4,4-trifluoro-butanoate
在250mL的圆底烧瓶中，加入二苯亚甲基甘氨酸乙酯(5.47g，20.85mmol)和四氢呋喃(80mL)，然后反应液冷却至-78℃，再分批多次加入叔丁醇钾(2.57g，22.94mmol)，加完后升至0℃搅拌反应1h，再向反应液中滴加3,3,3-三氟丙基三氟甲磺酸酯(7B)粗品(6.7g，27.1mmol)，加完后升至室温搅拌反应8h。反应液加入水(100mL)，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝100:1)，得到2-(二苯亚甲基氨基)-4,4,4-三氟丁酸乙酯(12c)，黄色油状产物(2.5g，产率26％)。
MS m/z＝350.1[M+H]+
取2-(二苯亚甲基氨基)-4,4,4-三氟丁酸乙酯(12C)(2.5g)用于手性拆分。
制备条件：仪器：Shimadzu LC-20AP Prep HPLC(PrepL-GA)；柱：Phenomenex LuxCellulose-2,300×50mm I.D.,10μm；流动相：A for CO2and B for iso-propanol；梯度：B5％；流量：80mL/min；背压：100bar；柱温：38℃；波长：220nm；周期：约5分钟；样品制备：2-(二苯亚甲基氨基)-4,4,4-三氟丁酸乙酯(12C)(2.5g)溶解于40mL甲醇中；注射：2.0mL/针。
分离后，将馏分，在40℃下，经由旋转蒸发仪浓缩、干燥，得到两个光学异构体化合物12C-1(0.93g，e.e.＝99.2％)，化合物12C-2(1.06g，e.e.＝98.3％)。
化合物12C-1：
手性HPLC保留时间：5.631min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
化合物12C-2：
手性HPLC保留时间：6.658min
分析条件：仪器：HPLC安捷伦1260；柱：大赛璐CHIRALPAK，AD-H 4.6*250mm.,5μm；流动相：正己烷/异丙醇＝99：1；梯度：等度洗脱30分钟；流量：1.0mL/min；背压：35.28bar；柱温：35℃；波长：210nm；
第三步：2-氨基-4,4,4-三氟丁酸乙酯(12D-1)
ethyl 2-amino-4,4,4-trifluoro-butanoate
在50mL的圆底烧瓶中，加入2-(二苯亚甲基氨基)-4,4,4-三氟丁酸乙酯(12C-1)(0.73g，2.1mmol)、甲基叔丁基醚(10mL)和1mol/L盐酸水溶液(10mL)，并在室温下搅拌反应3h。分液并弃去有机层，水相用氨水调节pH约为13，然后用二氯甲烷(25mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥后所得2-氨基-4,4,4-三氟丁酸乙酯(12D-1)溶液(50mL)直接投下步反应。
第四步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟丁酸乙酯(12E-1)
ethyl2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4,4,4-trifluoro-butanoate
在100mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)(0.83g，2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(0.3g，2.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.58g，3.0mmol)和上一步所得2-氨基-4,4,4-三氟丁酸乙酯(12D-1)溶液(50mL)，加完后在室温下搅拌反应3h。反应毕，反应液依次用1mol/L盐酸水溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和饱和氯化钠水溶液(20mL)各洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，残留物通过硅胶分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝3:1)，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟丁酸乙酯(12E-1)，白色固体(0.81g，两步收率70％)。
MS m/z＝602.3[M+Na]+
第五步：2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟丁酸(12F-1)
2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4,4,4-trifluoro-butanoic acid
在100mL圆底烧瓶中，加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟丁酸乙酯(12E-1)(0.81g，1.4mmol)和甲醇(10mL)，然后滴加1mol/L的氢氧化钠水溶液(2mL)，并在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，然后用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，滤液减压浓缩，得到2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟丁酸(12F-1)粗品，白色固体(0.77g，产率100％)。
MS m/z＝574.3[M+Na]+
第六步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(12G-1)
methyl4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4,4,4-trifluoro-butanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟丁酸(12F-1)粗品(0.39g，0.7mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.34g，0.7mmol)、1-羟基苯并三唑(0.14g，1.05mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.21g，1.05mmol)和二氯甲烷(30mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用1mol/L盐酸水溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和饱和氯化钠水溶液(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1)，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(12G-1)，白色固体(0.38g，两步收率52％)。
第七步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-苯基-丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯三三氟乙酸盐(12H-1)
methyl4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4,4,4-trifluoro-butanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(12G-1)(0.38g，0.38mmol)和二氯甲烷(9mL)，室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后室温搅拌反应3h。反应液直接浓缩得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-苯基-丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯三三氟乙酸盐(12H-1)粗品(403mg，100％)，淡黄色油状，然后直接投下一步反应。
第八步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟丁酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸；三三氟乙酸盐(化合物12-1)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4,4,4-trifluoro-butanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-苯基-丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟-丁酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯三三氟乙酸盐(12H-1)粗品(0.4g)、甲醇(2mL)和水(10mL)，反应液先用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH约为7，然后加入1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.5mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5后，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4,4,4-三氟丁酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐，白色粉末(化合物12-1)(0.12g，产率30.7％)。
MS m/z＝353.8[M+2H]+/2
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.42-7.02(m,10H),4.89-4.81(m,1H),4.66-4.64(m,2H),4.19(t,1H),3.86-3.31(m,4H),3.19-2.85(m,6H),2.68-1.54(m,10H),1.46-1.24(m,2H).
实施例20：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-5-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物13)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-5-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-oxo-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-(9H-芴-9-基甲氧基)-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]己酸甲酯(13B)
methyl(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-(9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-oxo-5-(tritylamino)pentanoyl]amino]hexanoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸甲酯(13A)(11.73g，19.2mmol)、(2R)-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酸(5g，19.2mmol)、1-羟基苯并三唑(3.1g，23mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(3.4g，23mmol)和二氯甲烷(200mL)，加完后在室温下搅拌反应3h。反应液依次用1mol/L盐酸水溶液(50mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，得到(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-(9H-芴-9-基甲氧基)-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]己酸甲酯(13B)粗品，白色固体(16.53g，产率100％)。
第二步：(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸甲酯(13c)
methyl(2R)-2-[[(2R)-2-amino-5-oxo-5-(tritylamino)pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate
在50mL圆底烧瓶中，加入(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-(9H-芴-9-基甲氧基)-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]己酸甲酯(13B)粗品(10g，11.7mmol)、哌啶(4mL)和N,N-二甲基甲酰胺(100mL)，加完后在室温下搅拌6分钟。反应液中加入乙酸乙酯(500mL)，然后用饱和食盐水洗涤(100mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，得到(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸甲酯(13C)粗品，白色固体(7.3g，产率100％)，并直接投入下一步反应。
MS m/z＝631.4[M+H]+
第三步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸甲酯(13D)
methyl(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-oxo-5-(tritylamino)pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate
在100mL圆底烧瓶中，加入(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酸(0.66g，2.2mmol)、(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸甲酯(13C)粗品(1.4g，2.2mmol)、1-羟基苯并三唑(0.36g，2.7mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.51g，2.7mmol)和二氯甲烷(20mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液用依次用1mol/L盐酸水溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)和饱和氯化钠水溶液(5mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝3:1)，得白色固体(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸甲酯(13D)(0.98g，三步收率48％)。
第四步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸甲酯(13E)
methyl(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-oxo-5-(tritylamino)pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate
在100mL圆底烧瓶中，加入(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸甲酯(13D)(0.8g,7mmol)、钯碳(0.16g，20wt％)和甲醇(6mL)，在氢气(气球)氛围下，室温搅拌反应4h。然后反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩后得(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸甲酯(13E)粗品，白色固体(0.7g，产率100％)，并直接投下一步反应。
第五步：(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰胺基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]己酸甲酯(13F)
methyl(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-oxo-5-(tritylamino)pentanoyl]amino]hexanoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酸(1a)(0.11g，0.42mmol)、(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸甲酯(13E)粗品(0.35g，0.45mmol)、1-羟基苯并三唑(0.09g，0.67mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.1g，0.54mmol)和二氯甲烷(10mL)，加完后在室温下搅拌过夜。反应液依次用1mol/L盐酸水溶液(3mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(3mL)和饱和氯化钠水溶液(3mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，得到(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰胺基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]己酸甲酯(13F)粗品，白色固体(0.3g，两步收率65％)。
第六步：(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]己酸(13G)
(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-oxo-5-(tritylamino)pentanoyl]amino]hexanoic acid
在50mL圆底烧瓶中，将(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰胺基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]己酸甲酯(13F)粗品(3.4g，3.3mmol)溶于甲醇(30mL)，然后滴加1mol/L氢氧化钠水溶液(3.5mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，然后用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤后滤液减压浓缩得到(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]己酸(13G)粗品，白色固体(2.5g，产率75％)
第七步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(13H)
methyl4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-oxo-5-(tritylamino)pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入4-((叔丁氧基羰基氨基)氨基)哌啶-4-羧酸甲酯(0.21g，0.82mmol)、(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]己酸(13G)粗品(0.83g，0.82mmol)、1-羟基苯并三唑(0.13g，0.98mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.15g，0.98mmol)和二氯甲烷(10mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用1mol/L的HCl溶液(3mL)、饱和NaHCO3(3mL)和饱和NaCl(3mL)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩得白色固体4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(13H)粗品(0.8g，产率81％)。
第八步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-5-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(13I)
Methyl 4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-5-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-oxo-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(13H)粗品(0.80g，0.60mmol)和二氯甲烷(9mL)，然后室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后室温搅拌反应3h。反应液直接浓缩干得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-5-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(13I)粗品(630mg，100％)，淡黄色油状，然后直接投下一步反应。
第九步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-5-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物13)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-5-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-oxo-pentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-5-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(13I)粗品(0.63g)、甲醇(2mL)和水(10mL)，反应液先用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH约为7，再加入1mol/L氢氧化钠水溶液(1.5mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5后，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到白色粉末状4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-5-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐。
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-5-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸；三三氟乙酸盐通过离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂35mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(1000mL)洗脱)，并浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，冻干，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-5-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-氧代-戊酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物13)，白色固体(0.12g，产率36％)
MS m/z＝695.3[M+H]+
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.32-7.26(m,6H),7.18-7.12(m,4H),4.7(m,1H),4.56-4.52(m,1H),4.22-4.15(m,1H),3.70-3.63(m,5H),2.97-2.93(m,4H),2.83-2.81(m,2H),2.23-1.96(m,6H),1.72-1.64(m,6H),1.40-1.38(m,2H).
实施例21：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物14)4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]pent-4-ynoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：(2R)-2-氨基戊-4-烯酸甲酯(14B)
methyl(2R)-2-aminopent-4-ynoate
在50mL圆底烧瓶中，加入(2R)-2-氨基戊-4-炔酸(14A)(3g，26mmol)和甲醇(54mL)，反应液冷却至0℃，然后缓慢滴加二氯亚砜(3mL)，滴毕室温搅拌过夜。反应液减压浓缩得到(2R)-2-氨基戊-4-烯酸甲酯(14B)粗品，淡黄色油状(3.2g，25mmol,95％)。
第二步:(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酸甲酯(14C)
methyl(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]pent-4-ynoate YH2Z00000763
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酸(中间体1)粗品(7.26g，17.6mmol)、2(R)-2-氨基戊-4-炔酸甲酯(14B)粗品(2.88g，17.6mmol)、1-羟基苯并三唑(2.85g，21.1mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(3.28g，21.1mmol)和二氯甲烷(180mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用1mol/L盐酸水溶液(40mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和饱和氯化钠水溶液(40mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酸甲酯(14C)粗品，白色固体(8.1g，产率88％)。
MS m/z＝544.2[M+Na]+
第三步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酸(14D)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]pent-4-ynoic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酸甲酯(14C)粗品(4g，7.7mmol)和甲醇(77mL)，然后滴加NaOH溶液(1mol/L，8mL)，加完后在室温下搅拌过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液酸化(30mL)，然后用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酸(14D)粗品，白色固体(3.3g，产率85％)。
第四步:4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(14E)
methyl4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]pent-4-ynoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酸(14D)粗品(0.51g，1.0mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.49g，1.0mmol)、1-羟基苯并三唑(0.14g，1.03mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.17g，1.1mmol)和二氯甲烷(20mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用3mol/L盐酸水溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)和饱和氯化钠水溶液(5mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1)，得白色固体4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]戊-4-炔酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(14E)(0.75g，产率77％)。
第五步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(14F)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]pent-4-ynoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]戊-4-炔酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(14E)(0.70g，0.70mmol)、二氯甲烷(9mL)和三氟乙酸(3mL)，加完后室温搅拌3h。反应液直接浓缩干后得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(14F)粗品(712mg，100％)，淡黄色油状，然后直接投下一步反应。
第六步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物14)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]pent-4-ynoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入上步反应所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(14F)粗品(0.71g)、甲醇(2mL)和H2O(10mL)，室温搅拌溶清后用1mol/L的NaOH溶液调节pH约为7，再加入1mol/L的NaOH溶液(1.5mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5后，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)得到白色粉末状4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸；三三氟乙酸盐。
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸；三三氟乙酸盐通过离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂35mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(1000mL)洗脱)，并浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，进一步冻干得到白色固体4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-甲酸(化合物14)(0.12g，产率26％)
MS m/z＝331.7[M+2H]+/2
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.33-7.26(m,6H),7.20-7.18(m,2H),7.13-7.11(m,2H),4.59(t,1H),4.59(t,1H),4.38(t,1H),3.7-3.6(m,5H),3.05(dd,1H),2.95-2.89(m,3H),2.81(d,2H),2.63-2.62(m,2H),2.44-2.43(m,1H),2.18-2.03(m,2H),1.76-1.61(m,6H),1.41-1.34(m,2H)
实施例22：
4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物15)4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-phenyl-pent-4-ynoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
第一步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酸甲酯(15A)
Methyl(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-phenyl-pent-4-ynoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酸甲酯(14C)粗品(0.52g，1.0mmol)、乙腈(3mL)和碘苯(0.21g，1.0mmol)，室温下搅拌溶清，然后依次加入双三苯基膦二氯化钯(0.015g，0.02mmol)、碘化亚铜(0.0026g，0.014mmol)和三乙胺(0.45mL)，加完后在室温下搅拌反应1.5h。反应液加入饱和氯化铵水溶液(10mL)淬灭，然后用乙酸乙酯(6mL×3)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得白色固体(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酸甲酯(15A)，白色固体(0.5g,产率90％).
MS m/z＝620.3[M+Na]+
第二步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基戊-4-炔酸(15B)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-phenyl-pent-4-ynoic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酸甲酯(15A)(0.5g，0.8mmol)和甲醇(8mL)，然后滴加1mol/L的氢氧化钠水溶液(1.1mL)，加完后在室温下搅拌过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液(30mL)酸化，然后用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤后滤液减压浓缩，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基戊-4-炔酸(15B)粗品，白色固体(0.42g，产率86％)。
第三步：(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酸甲酯(15C)
methyl(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-phenyl-pent-4-ynoyl]amino]hexanoate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基戊-4-炔酸(15B)粗品(0.2g，0.7mmol)、1-羟基苯并三唑(0.11g，0.8mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.15g，0.8mmol)和二氯甲烷(20mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液中依次用1mol/L盐酸水溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)和饱和氯化钠水溶液(5mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)，得到(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酸甲酯(15C)，白色固体(0.5g，产率90％)。
第四步：(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酸(15D)
(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-phenyl-pent-4-ynoyl]amino]hexanoic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酸甲酯(15C)(0.5g，0.6mmol)、甲醇(6mL)和1mol/L氢氧化钠水溶液(0.8mL)，加完在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液(30mL)酸化，然后用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤后滤液减压浓缩，得到(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酸(15D)粗品，白色固体(0.45g，产率92％)。
第五步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(15E)
methyl4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-phenyl-pent-4-ynoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入4-((叔丁氧基羰基氨基)氨基)哌啶-4-羧酸甲酯(0.2g，0.7mmol)、(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酸(15D)粗品(0.4g，0.7mmol)、1-羟基苯并三唑(0.11g，0.8mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.15g，0.8mmol)和二氯甲烷(15mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用1mol/L盐酸水溶液(3mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(3mL)和饱和氯化钠水溶液(3mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(15E)粗品，白色固体(0.68g，产率90％)。
第六步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(15F)
methyl4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-phenyl-pent-4-ynoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(15E)粗品(0.48g，0.46mmol)和二氯甲烷(5mL)，然后室温下滴加三氟乙酸(1.5mL)，加完后室温搅拌3h。反应液直接浓缩干后得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(15F)粗品(503mg，100％)，淡黄色油状，然后直接投下一步反应。
第七步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物15)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-5-phenyl-pent-4-ynoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入上步反应所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐(15F)粗品(0.5g)、甲醇(2mL)和水(5mL)，反应液用1mol/L氢氧化钠水溶液调节pH约为7，再加入1mol/L氢氧化钠水溶液(0.8mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5后，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(液相制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐，白色粉末。
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐通过离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂35mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(1000mL)洗脱)，并浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，冻干，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-5-苯基-戊-4-炔酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸，白色固体(0.09g，产率26％)
MS m/z＝369.8[M+2H]+/2
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.43-7.26(m,11H),7.21-7.20(m,2H),7.09-7.07(m,2H),4.81-4.78(m,1H),4.64-4.60(m,1H),4.49-4.46(m,1H),3.62-3.46(m,5H),3.08-2.72(m,8H),2.09-1.97(m,2H),1.72-1.34(m,8H).
实施例23：
4-氨基-1-(R)-6-氨基-2-((R)-2-((R)-2-((R)-2-氨基-3-苯基丙酰氨基)-3-苯基丙酰氨基)戊酸-4-酰胺基)己酰基)哌啶-4-羧酸(化合物16)
4-amino-1-((R)-6-amino-2-((R)-2-((R)-2-((R)-2-amino-3-phenylpropanamido)-3-phenylpropanamido)pent-4-enamido)hexanoyl)piperidine-4-carboxylic acid
第一步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]烯酸甲酯(16A)
methyl(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]pent-4-enoate
在50mL圆底烧瓶中，加入钯/碳酸钙(34mg)、乙酸乙酯(10mL)和喹啉(58μl)，然后滴加(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-炔酸甲酯(14C)粗品(0.65g,1.2mmol)的乙酸乙酯(5mL)溶液，加完后室温搅拌反应3h。反应液通过硅藻土过滤，滤液分别用1mol/L盐酸水溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和饱和氯化钠水溶液(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:1)，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]烯酸甲酯(16A)，白色固体(0.58g，产率90％)。
MS m/z＝546.3[M+Na]+
第二步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]戊-4-烯酸(16B)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]pent-4-enoic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]烯酸甲酯(16A)(0.6g，1.0mmol)、甲醇(10mL)和1mol/L氢氧化钠水溶液(1.1mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液通过减压浓缩除去甲醇，水相用3mol/L盐酸水溶液(30mL)酸化，然后用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤后滤液减压浓缩，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]戊-4-烯酸(16B)粗品，白色固体(0.54g，产率93％)。
第三步：4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-烯酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(16C)
methyl4-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]pent-4-enoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylate
在50mL圆底烧瓶中，依次加入(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]戊-4-烯酸(16B)粗品(0.51g，1mmol)、1-[(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰基]-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-甲酸甲酯(中间体2)(0.49g，1mmol)、1-羟基苯并三唑(0.14g，1.03mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.17g，1.1mmol)和二氯甲烷(20mL)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液依次用3mol/L盐酸水溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)和饱和氯化钠水溶液(5mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)，得到4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-烯酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(16C)，白色固体(0.75g，产率77％)。
第四步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-烯酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(16D)
methyl4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]pent-4-enoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid；2,2,2-trifluoroacetic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-烯酰基]氨基]己酰基]哌啶-4-羧酸甲酯(16C)(0.75g，0.77mmol)和二氯甲烷(9mL)，然后室温下滴加三氟乙酸(3.0mL)，加完后室温搅拌反应3h。反应液直接浓缩干后得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-烯酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(16D)粗品(0.785g,100％)，淡黄色油状，然后直接投下一步反应。
第五步：4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-烯酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸(化合物16)
4-amino-1-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]pent-4-enoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid
在50mL圆底烧瓶中，加入上步反应所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-烯酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸甲酯三三氟乙酸盐(16D)粗品(0.785g)、甲醇(2mL)和水(10mL)，然后用1mol/L氢氧化钠水溶液调节pH约为7，再加入1mol/L氢氧化钠水溶液溶液(1.5mL)，在室温下搅拌反应过夜。反应液用三氟乙酸调节pH约为5后，减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：C18反相制备柱，流动相为含0.05％TFA的去离子水(A)，乙腈(B)，等度洗脱B:A＝25％，洗脱时间20分钟)，得到白色粉末状4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-烯酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐。
上步所得4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-烯酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸三三氟乙酸盐通过离子交换树脂进行离子交换(离子交换树脂35mL，氨水/蒸馏水(v/v)＝1:8(1000mL)洗脱)，并浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，冻干，得到4-氨基-1-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]戊-4-烯酰基]氨基]己酰]哌啶-4-甲酸，白色固体(0.16g，产率31％)。
MS m/z＝332.8[M+2H]+/2
1HNMR(400MHz,D2O)δ7.35-7.26(m,6H),7.20-7.18(m,2H),7.14-7.12(m,2H),5.74-5.60(m,1H),5.15-5.1(m,2H),4.79-4.74(m,1H),4.57(t,1H),4.27(t,1H),3.74-3.49(m,5H),3.06-2.81(m,6H),2.50-2.36(m,2H),2.18–1.98(m,2H),1.75-1.59(m,6H),1.41-1.38(m,2H)
生物测试例
测试1：对人κ-阿片受体的激动活性
Forskolin(毛喉素)能够刺激人κ-阿片受体高表达细胞株——OPRK1细胞(DiscoveRx)cAMP的释放，而κ-阿片受体激动剂能够抑制forskolin刺激的cAMP释放。通过检测受试化合物对forskolin刺激的cAMP释放的抑制作用，能够测定化合物对人κ-阿片受体的激动活性。首先用一定浓度的forskolin和不同浓度的受试化合物与人κ-阿片受体高表达细胞株一起孵育。使用基于时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)的cAMP免疫测试法(PerkinElmer)来确定所激发的OPRK1细胞中的cAMP水平。具体方法如下：
高表达人κ-阿片受体的OPRK1细胞(DiscoveRx)培养于含10％FBS(Gibco 10099-141)的McCoy's 5A(Gibco 16600-082)培养基中。实验当天，将在指数生长期的细胞，用PBS/5mM EDTA冲洗分离，离心收集，并用Stimulation Buffer重悬细胞并计数，调整细胞浓度至3*105cells/ml。用DMSO分别溶解Forskolin和受试化合物，使其母液浓度均为10mM，再用Stimulation Buffer稀释Forskolin至4μM，加入不同浓度受试化合物(浓度依次为80、16、3.2、0.64、0.128、0.0256、0.00512、0.001024、0μM)，以每孔5μl加入384孔板。再向每孔中加入5μl细胞悬液，室温孵育30min。随后，每孔分别加入5μl 4x Eu-cAMP tracer工作溶液(用cAMP Detection Buffer稀释Eu-cAMP stock solution 50倍)和5μl 4x Ulight-anti-cAMP工作溶液(用cAMP Detection Buffer稀释ULight-anti-cAMP stock solution150倍)，室温下孵育1小时。384孔板用酶标仪(Perkin Elmer，Envision)TR-FRET方法检测cAMP水平。所得数据用origin7.5软件处理和拟合EC50。本发明化合物人κ-阿片受体的激动活性通过以上的实验进行测定，测得的EC50值见表1。
Stimulation Buffer配制方法：将14mL 1*HBSS(invitrogen,cat.#14025-092)、75μL 1M HEPES(Invitrogen,cat.#15630-080)、30μL 250mM IBMX溶于DMSO(Sigma,cat.#17018)和200μL 7.5％BSA Stabilizer混合，用0.1N NaOH调节溶液pH到7.4，并用1*HBSS定容到15mL。
表1受试化合物对人κ-阿片受体的激动活性
化合物编号 EC<sub>50</sub>(nM)
化合物2-1 0.53
化合物4-1 0.91
化合物5-1 0.90
化合物6-1 0.44
化合物7-1 0.33
化合物9-1 0.31
化合物11-1 1.21
化合物16 5.30
结论：本发明化合物对人κ-阿片受体具有明显激动作用。
测试2：小鼠扭体实验
小鼠腹腔注射乙酸后，能够引起小鼠扭体行为。扭体反应指小鼠表现出典型的腹部肌肉收缩或伸张特征性的行为反应。通过检测化合物对乙酸引起的小鼠扭体行为的抑制作用，可以反应化合物的镇痛活性。具体方法如下：
8周龄ICR小鼠(购自成都达硕生物科技公司，许可证号：SCXK(川)2008-24(NO：51203500002150))。随机分组，每组10只动物，雌雄各半；实验前12h禁食不禁水。实验当天，分别静脉给予1.0mg/kg受试化合物，对照组给予空白试剂。给药后15min，以0.4mL/只的剂量腹腔内注射0.6％(v/v)醋酸溶液。分别记录注射醋酸后15min内的小鼠扭体次数，并分别计算受试化合物对乙酸引起的小鼠扭体行为的抑制百分率，分析结果如表2所示。
抑制百分率％＝(对照组扭体次数-给药组扭体次数)/对照组扭体次数。
表2受试化合物对乙酸引起的小鼠扭体行为的抑制百分率
结论：本发明化合物具有明显镇痛作用。

Claims (9)

1.一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶：
其中，
R1独立选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基或3至8元杂环基，所述的烷基、烷氧基、烯基、炔基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、CF3、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R2、R3各自独立地选自H、C1-6烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基、-C(＝O)O-(CH2)q-C3-8碳环基或-C(＝O)O-(CH2)q-3至8元杂环基，所述的烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF3、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R4每个独自选自F、OH、CF3、C1-6烷基或C1-6烷氧基；
R7独立选自C1-6烷基，所述的烷基任选进一步被1-5个R7a所取代；
R7a独立选自F、OH、CF3、氰基、环丙基、C2-6烯基、C2-6炔基或-C(＝O)NR7bR7c，所述的环丙基、烯基或炔基任选进一步被0-5个F、Cl、Br、I、OH、CF3、硝基、氰基、C1-6烷基、C3-8碳环基得取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
R7b、R7c各自独立地选自H、C1-6烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基、-C(＝O)O-(CH2)q-C3-8碳环基或-C(＝O)O-(CH2)q-3至8元杂环基，所述的烷基、烷氧基、碳环基或者杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF3、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基或3至8元杂环基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
R5、R6、R11、R12各自独立地选自H、C1-6烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基、-C(＝O)O-(CH2)q-C3-8碳环基或-C(＝O)O-(CH2)q-3至8元杂环基，所述的烷基、碳环基和杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF3、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
q选自1、2、3或4；
a选自0、1、2、3或4；
b选自0、1、2或3；
c选自0、1、2、3、4或5；
d选自0、1、2、3、4或5；
R9、R10每个各自独立选自F、Cl、Br、I、CF3、氰基、硝基、C1-4烷基、-OR9a、-C(O)OR9b、-SR9c、-S(O)R9d、-S(O)2R9e或-NR9fR9g；
R9a、R9b、R9c、R9d、R9e、R9f和R9g各自独立选自H或C1-4烷基；
作为选择，R9f、R9g与其连接的氮原子形成5至6元杂环，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子。
2.根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中，
其中，
R1独立选自OH或甲氧基；
R2、R3各自独立地选自H、C1-4烷基、-C(＝O)O-叔丁基或-C(＝O)O-苄基；
R7独立选自C1-6烷基，所述的烷基任选进一步被1-3个R7a所取代；
R7a独立选自F、OH、CF3、氰基、C2-4烯基、C2-4炔基、-C(＝O)NH2或环丙基，所述的烯基、炔基或环丙基任选进一步被0-3个F、OH、CF3、甲基或苯基的取代基所取代；
R5、R6、R11、R12各自独立地选自H、C1-4烷基、-C(＝O)O-C1-4烷基或-C(＝O)O-苄基。
3.根据权利要求2所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，
其中，
R1独立选自OH或甲氧基；
R2、R3各自独立地选自H、甲基或-C(＝O)O-叔丁基；
R7独立选自甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、异丙基或所述的甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、异丙基或任选进一步任选被1-3个R7a所取代；
R7a独立选自F、OH、CF3、氰基、-C(＝O)NH2或环丙基；
R5、R6、R11、R12各自独立地选自H、甲基、-C(＝O)O-叔丁基。
4.根据权利要求1-3所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，所述的化合物选自如下结构之一：
5.一种药物组合物，所述的药物组合物包含权利要求1～4任一项所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，和一种或多种以上的药学上可接受的载体和/或赋形剂。
6.权利要求1～4任一项所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，或者权利要求5所述的药物组合物用于制造治疗或预防哺乳动物的κ阿片样物质受体相关的疾病或病况的药物的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其中所述κ阿片样物质受体相关的病况选自下组，其构成为：疼痛、炎症、瘙痒、水肿、低钠血症、低钾血症、肠梗阻、咳嗽和青光眼。
8.如权利要求7所述的应用，其中所述疼痛选自下组，其构成为：神经性疼痛、躯体痛、内脏痛和皮肤痛。
9.如权利要求7所述的应用，其中所述疼痛选自下组，其构成为：关节炎疼痛、肾结石疼痛、子宫痉挛、痛经、子宫内膜异位症、消化不良、外科手术后疼痛、医疗处理后疼痛、眼部疼痛、耳炎疼痛、爆发性癌症疼痛和GI紊乱相关的疼痛。
CN201810793881.5A 2017-07-21 2018-07-19 肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途 Active CN109280075B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710598409 2017-07-21
CN2017105984091 2017-07-21

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109280075A true CN109280075A (zh) 2019-01-29
CN109280075B CN109280075B (zh) 2022-05-20

Family

ID=65183003

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810793881.5A Active CN109280075B (zh) 2017-07-21 2018-07-19 肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109280075B (zh)

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112442106A (zh) * 2019-09-03 2021-03-05 四川海思科制药有限公司 一种多肽化合物的固体形式和在医药上的应用
WO2021047470A1 (zh) * 2019-09-10 2021-03-18 四川海思科制药有限公司 一种肽酰胺类化合物及其中间体的制备方法
WO2021219134A1 (zh) * 2020-04-30 2021-11-04 南京明德新药研发有限公司 苯基丙酰胺类化合物及其应用
CN114502187A (zh) * 2019-08-23 2022-05-13 四川海思科制药有限公司 一种肽酰胺类组合物及其制备
CN114615976A (zh) * 2019-08-07 2022-06-10 人福医药美国公司 κ阿片受体肽酰胺激动剂
US11492374B2 (en) 2020-06-25 2022-11-08 Humanwell Pharmaceutical US Peptides for treatment of medical disorders
JP2024517498A (ja) * 2021-05-14 2024-04-22 インスセンセ アーペーエス 化合物
JP2025510081A (ja) * 2022-03-23 2025-04-14 チアンスー エヌエイチダブリュエー ファーマシューティカル カンパニー リミテッド ポリアミド化合物、その調製方法及びその医薬的使用
US12616732B2 (en) 2022-07-11 2026-05-05 Yichang Humanwell Pharmaceuticals Co., Ltd. Peptides for treatment of medical disorders

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101535336A (zh) * 2006-11-10 2009-09-16 卡拉治疗学股份有限公司 合成酞酰胺及其二聚体
CN101627049A (zh) * 2006-11-10 2010-01-13 卡拉治疗学股份有限公司 合成酞酰胺
US20210040150A1 (en) * 2019-08-07 2021-02-11 Humanwell Pharmaceutical US Kappa opioid receptor peptide amide agonists

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101535336A (zh) * 2006-11-10 2009-09-16 卡拉治疗学股份有限公司 合成酞酰胺及其二聚体
US20090264373A1 (en) * 2006-11-10 2009-10-22 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides and dimers thereof
CN101627049A (zh) * 2006-11-10 2010-01-13 卡拉治疗学股份有限公司 合成酞酰胺
US20210040150A1 (en) * 2019-08-07 2021-02-11 Humanwell Pharmaceutical US Kappa opioid receptor peptide amide agonists

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LEE R. ROBERTS 等: ""Kappa agonist CovX-Bodies"", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS》 *
张毅等: ""精神分裂症患者Δ阿片受体基因多态性与氯氮平诱导代谢综合征的关系"", 《临床精神医学杂志》 *

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114615976A (zh) * 2019-08-07 2022-06-10 人福医药美国公司 κ阿片受体肽酰胺激动剂
US12215173B2 (en) 2019-08-07 2025-02-04 HUMANWELL PHARMACEUTICAL US, Inc. Kappa opioid receptor peptide amide ligands
US12599647B2 (en) 2019-08-23 2026-04-14 Xizang Haisco Pharmaceutical Co., Ltd. Peptide amide composition and preparation method therefor
CN114502187A (zh) * 2019-08-23 2022-05-13 四川海思科制药有限公司 一种肽酰胺类组合物及其制备
CN112442106A (zh) * 2019-09-03 2021-03-05 四川海思科制药有限公司 一种多肽化合物的固体形式和在医药上的应用
WO2021047470A1 (zh) * 2019-09-10 2021-03-18 四川海思科制药有限公司 一种肽酰胺类化合物及其中间体的制备方法
JP2023525689A (ja) * 2020-04-30 2023-06-19 メッドシャイン ディスカバリー インコーポレイテッド フェニルプロピオンアミド系化合物及びその使用
JP7549439B2 (ja) 2020-04-30 2024-09-11 メッドシャイン ディスカバリー インコーポレイテッド フェニルプロピオンアミド系化合物及びその使用
US12479800B2 (en) 2020-04-30 2025-11-25 Medshine Discovery Inc. Phenylpropionamide compound and use thereof
WO2021219134A1 (zh) * 2020-04-30 2021-11-04 南京明德新药研发有限公司 苯基丙酰胺类化合物及其应用
EP4175944A4 (en) * 2020-06-25 2024-03-06 Humanwell Pharmaceutical US PEPTIDES FOR THE TREATMENT OF MEDICAL DISORDERS
US11492374B2 (en) 2020-06-25 2022-11-08 Humanwell Pharmaceutical US Peptides for treatment of medical disorders
JP2024517498A (ja) * 2021-05-14 2024-04-22 インスセンセ アーペーエス 化合物
JP2025510081A (ja) * 2022-03-23 2025-04-14 チアンスー エヌエイチダブリュエー ファーマシューティカル カンパニー リミテッド ポリアミド化合物、その調製方法及びその医薬的使用
US12616732B2 (en) 2022-07-11 2026-05-05 Yichang Humanwell Pharmaceuticals Co., Ltd. Peptides for treatment of medical disorders

Also Published As

Publication number Publication date
CN109280075B (zh) 2022-05-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109280075B (zh) 肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途
US12012397B2 (en) Sulphonyl urea derivatives as NLRP3 inflammasome modulators
WO2024118966A1 (en) Glutarimide-containing pan-kras-mutant degrader compounds and uses thereof
TWI809395B (zh) Gpr6的四氫吡啶並吡調節劑
AU2004226452B2 (en) Bicyclic piperidine derivatives as melanocortin-4 receptor agonists
JP3856815B2 (ja) メラノコルチン−４受容体アゴニストとしてのアシル化スピロピペリジン誘導体
CN110637025B (zh) 肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途
CN109280076B (zh) 肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途
TWI454468B (zh) 作為組織胺ｈ３受體拮抗劑之氮雜環丁烷及環丁烷
KR20190005838A (ko) 이중 lsd1/hdac 억제제로서 사이클로프로필-아마이드 화합물
EP4067344A1 (en) Cycloalkyl urea derivative
EA032356B1 (ru) Ингибиторы диацилглицеринацилтрансферазы 2 для применения в лечении метаболических и связанных с метаболизмом расстройств
IL302837A (en) Aryl derivatives for treating trpm3 mediated disorders
JP2017525677A (ja) 治療用化合物及びその使用方法
CN113717161B (zh) 含氮饱和杂环化合物及其制备方法、药物组合物和应用
JP7030776B2 (ja) アミノピリジン誘導体およびそれらの選択的ａｌｋ－２阻害剤としての使用
WO2021233427A1 (zh) 并环化合物及其制备方法、药物组合物和应用
KR20240000510A (ko) 소르틸린 활성 조절제
KR20170012388A (ko) 신규 화합물
TW201311667A (zh) 吡咯烷－３－基乙酸衍生物
TW201030000A (en) (Dihydro) naphthyridinone derivatives as histamine H3 receptor antagonists
CA2870527A1 (en) Nitrogenated bicyclic aromatic heterocyclic compound
CA2750699C (en) Oxyindole derivatives with motilin receptor agonistic activity
KR20250044657A (ko) 거대고리 bcl6 분해제
HK40041233A (zh) 作为nlrp3炎性小体调节剂的磺酰脲衍生物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20231212

Address after: 856099 Xingfu Jiayuan Economic Development Zone, Gyerba, Nedong District, Shannan City, Tibet Autonomous Region

Patentee after: Tibet Haisike Pharmaceutical Co.,Ltd.

Address before: 611130 No.136 Baili Road, Wenjiang cross strait science and Technology Park, Chengdu, Sichuan

Patentee before: SICHUAN HAISCO PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

TR01 Transfer of patent right