CN108779422A - 细胞培养用容器及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种细胞培养用容器(1)，是具备容器主体(2)和注入注出用口(3a、3b)的细胞培养用容器(1)，将容器主体(2)的内部利用过滤器构件(4)划分为多个槽(1st、2nd)。由此，可以简便并且高效地进行细胞培养时进行的各种操作。

Description

细胞培养用容器及其使用方法
技术领域
本发明涉及为了简便并且高效地进行细胞培养时进行的各种操作而用于细胞培养的用途的细胞培养用容器及其使用方法。
背景技术
近年来，在医药品的生产、基因治疗、再生医疗、免疫疗法等医药学、生物化学领域中，要求在人工环境下高效地大量培养细胞(包括组织、微生物、病毒等)。
为了响应此种要求，本申请人对可以在构建封闭系统的环境而降低污染的风险的同时、有效地进行细胞培养的细胞培养系统反复进行了研究。
例如，专利文献1中，提出过一种细胞培养用试剂盒，其为将用于培养细胞的培养容器、用于贮存培养基等的培养基贮存容器、用于注入细胞的细胞注入容器、和回收培养后的细胞悬浮液的细胞回收容器利用导管连接，构建封闭系统的环境而成。根据此种细胞培养用试剂盒，能够在试剂盒内维持封闭系统的同时进行从细胞注入到培养基追加、取样、回收。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开2013/114845号小册子
发明内容
发明所要解决的问题
然而，专利文献1中给出如下的例子，即，在回收培养所得的细胞时，在静置培养容器而使细胞悬浮液中的细胞沉降后，排出细胞悬浮液的上清液，使液量减少，然后将经过浓缩的细胞悬浮液从培养容器移送到细胞回收容器。
另外，在细胞的培养中，通常需要数天～数周的期间，因此为了不使细胞的生长因培养基成分的枯竭、细胞的代谢物的蓄积而受到阻碍，在培养期间中，有时根据需要进行培养基更换。在进行培养基更换时，可以考虑通过排出细胞悬浮液的上清液而去除旧的培养基，同时取而代之地追加新的培养基。
然而，在如此所述地进行细胞的回收、培养基更换时，在排出细胞悬浮液的上清液之前，必须先静置培养容器而使细胞悬浮液中的细胞沉降，在使细胞沉降前需要花费时间。另一方面，即使花费足够的时间使细胞悬浮液中的细胞沉降，也有可能因排出操作而向上清液中混入细胞，将细胞与上清液一起排出。特别是，在进行培养基更换时，希望尽可能多地去除旧的培养基，更多地追加新的培养基，然而上清液的排出量越多，越无法避免细胞的混入。
另外，在进行培养基更换时，为了防止将细胞与旧的培养基一起排出，也可以考虑在设于培养容器的口的流路中安装过滤器。
然而，由于口的流路直径通常为1～10mm左右，过滤器的面积也比较小，因此容易因所捕捉到的细胞而在过滤器中产生堵塞，有可能妨碍旧的培养基的排出。此外，也有可能由过滤器捕捉到的细胞不会回到培养容器内，而是在一直由过滤器所捕捉的状态下死掉。
本发明是鉴于上述的情况而完成的，其目的在于，提供为了例如在进行培养基更换时，可以抑制将细胞与旧的培养基一起排出等，简便并且高效地进行细胞培养时进行的各种操作而用于细胞培养的用途的细胞培养用容器及其使用方法。
用于解决问题的方法
本发明的细胞培养用容器是用于细胞培养的用途的细胞培养用容器，采用了如下的构成，即，具备容器主体和注入注出用口，所述容器主体的内部由至少一个过滤器构件划分为多个槽。
发明效果
根据本发明，可以简便并且高效地进行细胞培养时进行的各种操作。
附图说明
图1是表示本发明的第一实施方式的细胞培养用容器的一例的说明图。
图2是表示本发明的第一实施方式的细胞培养用容器的使用例的说明图。
图3是表示本发明的第一实施方式的细胞培养用容器的另一使用例的说明图。
图4是表示本发明的第一实施方式的细胞培养用容器的另一使用例的说明图。
图5是表示本发明的第一实施方式的细胞培养用容器的另一使用例的说明图。
图6是表示本发明的第二实施方式的细胞培养用容器的一例的说明图。
图7是表示本发明的第二实施方式的细胞培养用容器的使用例的说明图。
图8是表示本发明的第三实施方式的细胞培养用容器的一例的说明图。
图9是表示本发明的第三实施方式的细胞培养用容器的使用例的说明图。
图10是表示本发明的第四实施方式的细胞培养用容器的一例的说明图。
图11是表示本发明的第四实施方式的细胞培养用容器的使用例的说明图。
图12是表示本发明的第五实施方式的细胞培养用容器的一例的说明图。
具体实施方式
以下，在参照附图的同时，对本发明的优选的实施方式进行说明。
[第一实施方式]
首先，对本发明的第一实施方式进行说明。
需要说明的是，图1是表示本实施方式的细胞培养用容器的一例的说明图。
作为本实施方式的一例，图1所示的容器1具备容器主体2和注入注出用口3a、3b。此外，容器主体2的内部由片状的过滤器构件4划分为顶面2a侧的第一槽1st和底面2b侧的第二槽2nd，在顶面2a侧的第一槽1st和底面2b侧的第二槽2nd，分别具备注入注出用口3a、3b。
容器主体2只要可以不对培养造成妨碍地收容培养基或在培养基中悬浮有细胞的细胞悬浮液，其具体形态就没有限定。例如，可以采用利用注射成形、吹塑成形等成形为给定的形状的容器，也可以采用重叠两片塑料膜并将周边部密封了的袋状的容器。
注入注出用口3a、3b是成为将培养基、细胞注入、排出等时的出入口的部位，例如，可以通过将能够流通培养基、细胞等的管状的构件安装于容器主体2而配备。
另外，虽然没有特别地图示，然而也可以在顶面2a侧的第一槽1st和底面2b侧的第二槽2nd，另行配备例如用于对培养中的培养基、细胞进行取样等的注入注出用口。
由过滤器构件4划分出的各个槽根据需要可以具备两个以上的注入注出用口。
在图1所示的一例中，容器主体2由塑料膜形成，周边部被密封，其顶面2a侧具有以台地状鼓出的鼓出形状，以使制成平坦面的顶面2a的边缘倾斜地与周边部相连的方式形成。此外，底面2b侧也具有以台地状鼓出的鼓出形状，以使制成平坦面的底面2b的边缘倾斜地与周边部相连的方式形成。
通过使容器主体2具有此种鼓出形状，可以抑制注入培养基、细胞时的变形。
即，在只是将两片塑料膜重叠并密封了周边部的平袋状的容器中，会按照随着容器内由内容液充满而周边部逐渐隆起的方式，底面发生变形，但通过考虑注入量地设计容器主体2的鼓出形状，可以抑制注入培养基、细胞时的容器主体2的变形，使容器主体2的底面2b保持为平坦面不变。
因而，图1所示的容器1使培养基中的细胞均匀地沉降于容器主体2的底面2b，适合用于要求在沉降于底面2b的细胞的密度(每单位面积的细胞数)方面不产生不均的情况。
图1所示的容器1例如可以如下所示地制造。
首先，准备两片塑料膜和片状的过滤器构件4，将它们根据需要裁割，统一其大小。此后，将一片塑料膜设为成为容器主体2的顶面2a侧的顶面侧塑料膜，将另一片塑料膜设为成为容器主体2的底面2b侧的底面侧塑料膜，将它们利用真空成形、压缩空气成形等以残留其周边部地以台地状鼓出的方式成形。
然后，向成形了的顶面侧塑料膜与底面侧塑料膜之间，插入片状的过滤器构件4，使它们的周边部重合。此后，在顶面侧塑料膜与过滤器构件4之间、和底面侧塑料膜与过滤器构件4之间，分别在周边部的给定的位置，夹入形成注入注出用口3a、3b的管状的构件，在该状态下将周边部利用热熔接密封，根据需要修剪周边部。由此，制造出图1所示的容器1。
形成容器主体2的塑料膜优选具有依照JIS K 7126的透气度试验方法在试验温度37℃测定出的氧的透过度为5000mL/(m2·day·atm)以上的透气性。
另外，为了可以确认细胞培养的进行状况、细胞的状态等，该塑料膜优选一部分或全部具有透明性。
作为形成容器主体2的塑料膜所用的材料，没有特别限定。例如，可以举出聚乙烯、聚丙烯、乙烯－乙酸乙烯酯共聚物、聚酯、聚酰胺、硅酮系弹性体、聚苯乙烯系弹性体、四氟乙烯－六氟丙烯共聚物(FEP)等热塑性树脂。它们可以以单层使用，也可以层叠使用同种或不同种的材料，优选具有给定的透气性。此外，如果考虑密封周边部时的热熔接性，则优选具有作为密封层发挥作用的层。
另外，为了在具有挠曲性的同时，具有可以保持容器主体2的鼓出形状的适度的形状保持性，形成容器主体2时所用的塑料膜的厚度优选为30～200μm。
另外，形成注入注出用口3a、3b的管状的构件例如可以使用聚乙烯、聚丙烯、氯乙烯、聚苯乙烯系弹性体、FEP等热塑性树脂，利用注射成形、挤出成形等，以给定的形状成形。
另外，过滤器构件4是使用具有至少容许培养基通过的细孔的多孔体形成，然而不适合为细胞进入细孔后不能脱出的材料。从此种观点考虑，优选使用编织由聚烯烃、聚酯、尼龙等聚酰胺、聚四氟乙烯等氟系树脂等形成的合成树脂纤维而得的网片等来形成。
过滤器构件4的细孔的大小可以根据容器1的使用方式适当地选择。为了提高培养基的通过性，优选对过滤器构件4实施亲水处理，通过实施亲水处理，也可以使细胞难以粘附。
另外，过滤器构件4只要不损害根据容器1的使用方式所要求的功能，则至少一部分使用如上所述的多孔体形成即可。例如，在如前所述地制造容器1时，将上述多孔体的周围用裁割为框状的塑料膜保持等而形成过滤器构件4，由此也可以使得与顶面侧及底面侧塑料膜的热熔接更加良好。
另外，容器主体2的大小没有特别限定，例如优选设为纵50～500mm、横50～500mm。
下面，作为本实施方式的一例对图1所示的容器1的使用例进行说明。
[第一实施方式的使用例1]
图2表示出将图1所示的容器1作为可以简便并且高效地进行培养基更换等操作的培养容器用于细胞培养的用途的例子。
本使用例中，从底面2b侧的第二槽2nd所具备的注入注出用口3b向由培养基充满了的容器主体2内注入作为培养对象的细胞C而进行培养。此时，考虑作为培养对象的细胞C的大小，选择具有不容许该细胞C通过的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4。由此，可以使培养中的细胞C停留于底面2b侧的第二槽2nd，而不会移动到顶面2a侧的第一槽1st(参照图2(a))。
在培养期间中进行培养基更换时，从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a排出旧的培养基(参照图2(b))。此时，由于可以使培养中的细胞C停留于底面2b侧的第二槽2nd，因此可以不将其与旧的培养基一起排出，能够更多地排出旧的培养基。在排出旧的培养基后，将与之相同量的新的培养基从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a注入(参照图2(c))，继续培养。
如此所述，在本使用例中，可以简便并且高效地进行培养期间中的培养基更换，特别是可以简便并且高效地进行旧的培养基的排出操作。
另外，本使用例的容器1可以在使细胞C停留于底面2b侧的第二槽2nd的状态下，从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a排出容器内的内容液。因此，例如如果作为专利文献1的细胞培养用试剂盒的培养容器来使用，则也可以不在细胞的沉降中花费时间地、简便并且高效地进行专利文献1所例示的细胞的回收操作。此外，通过作为专利文献1的细胞培养用试剂盒的细胞回收容器来使用，将从培养容器回收到的细胞悬浮液移送到底面2b侧的第二槽2nd，从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a反复进行清洗液的注入、排出而进行细胞的清洗操作，可以向专利文献1的细胞培养用试剂盒中导入清洗回收机构。
另外，也可以按照在底面2b侧的第二槽2nd中培养抗体产生细胞、将所产生的抗体从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a取出的方式，进行作为抗体产生容器的应用。
如此所述，本使用例中，选择具有不容许作为培养对象的细胞C通过的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4，向由过滤器构件4划分出的一个槽2nd注入细胞C而进行培养，由此可以在使细胞C停留于该槽2nd中的状态下，从由过滤器构件4划分出的另一个槽1st所具备的注入注出用口3a，注入注出培养基、清洗液等。
因而，在使用图1所示的容器1时，根据需要，也可以在顶面2a侧的第一槽1st进行细胞培养，从底面2b侧的第二槽2nd所具备的注入注出用口3b，进行培养基、清洗液等的注入注出。
[第一实施方式的使用例2]
图3表示出将图1所示的容器1作为可以简便并且高效地进行将细胞的凝聚块Cagg分割为所期望的大小的操作的凝聚块分割容器用于细胞培养的用途的例子。
本使用例中，从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a，将凝聚块Cagg与培养基一起压送到由培养基充满了的容器主体2内。此时，选择具有与意图分割凝聚块Cagg的大小对应的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4。由此，凝聚块Cagg在通过过滤器构件4时，在被分割为与过滤器构件4的细孔对应的大小的同时，被送向底面2b侧的第二槽2nd。
被分割为所期望的大小的凝聚块Cdiv可以从底面2b侧的第二槽2nd所具备的注入注出用口3b取出。
如此所述，本使用例中，选择具有与意图分割细胞的凝聚块Cagg的大小对应的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4，将凝聚块Cagg与培养基一起压送到由过滤器构件4划分出的一个槽1st，由此可以简便并且高效地进行将细胞的凝聚块Cagg分割为所期望的大小的操作。
因而，在使用图1所示的容器1时，根据需要，也可以从底面2b侧的第二槽2nd所具备的注入注出用口3b将凝聚块Cagg与培养基一起压送。
另外，虽然没有特别地图示，然而也可以将容器主体2的内部划分为三槽以上，适当地调整划分各槽的过滤器构件4的细孔的大小，由此可以分阶段地分割凝聚块Cagg。此外，也可以在各槽具备注入注出用口，由此将被分割为不同大小的凝聚块Cdiv分别取出。
[第一实施方式的使用例3]
图4表示出将图1所示的容器1作为可以简便并且高效地进行分离混杂的大小不同的两种细胞、例如单细胞Cs和其凝聚块Cagg的操作的细胞分离容器用于细胞培养的用途的例子。
本使用例中，从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a，将混杂有大小不同的两种细胞Cs、Cagg的细胞悬浮液注入由培养基充满了的容器主体2内(step1)。注入后，静置容器1，根据需要施加振动。此时，选择具有容许意图分离的两种细胞Cs、Cagg当中小的一方的细胞Cs通过、而不容许大的一方的细胞Cagg通过的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4。由此，可以使得小的一方的细胞Cs通过过滤器构件4的细孔而沉降于底面2b侧的第二槽2nd，大的一方的细胞Cagg停留于顶面2a侧的第一槽1st。
沉降于底面2b侧的第二槽2nd的小的一方的细胞Cs被与大的一方的细胞Cagg分离后，可以从底面2b侧的第二槽2nd所具备的注入注出用口3b取出(step2)。另一方面，与小的一方的细胞Cs分离而停留于顶面2a侧的第一槽1st的大的一方的细胞Cagg可以从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a取出(step3)。
如此所述，本使用例中，选择具有容许混杂的细胞当中的至少一种细胞通过、而不容许其以外的细胞通过的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4，向利用过滤器构件4划分出的一个槽1st注入混杂的大小不同的细胞，从利用过滤器构件4划分出的另一个槽2nd取出通过了过滤器构件4的细胞，由此可以简便并且高效地进行分离混杂的大小不同的细胞的操作。
因而，虽然没有特别地图示，然而也可以将容器主体2的内部划分为三槽以上，适当地调整划分各槽的过滤器构件4的细孔的大小，并且在各槽具备注入注出用口，由此分离大小不同的三种以上的细胞。
[第一实施方式的使用例4]
图5表示出将图1所示的容器1作为在同一容器内共培养不同种类的细胞Ca、Cb后、可以简便并且高效地进行将它们分别取出的操作的共培养容器用于细胞培养的用途的例子。
本使用例中，向由培养基充满了的容器主体2内，从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a注入细胞Ca，并且从底面2b侧的第二槽2nd所具备的注入注出用口3b注入细胞Cb，对细胞Ca和细胞Cb进行共培养。此时，选择具有不容许被共培养的任意一种细胞Ca、Cb通过的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4。由此，可以在一方的细胞Ca停留于顶面2a侧的第一槽1st、另一方的细胞Cb停留于底面2b侧的第二槽2nd的状态下，不将两者混合地在同一容器内进行共培养。
培养结束后，一方的细胞Ca可以从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a取出，另一方的细胞Cb可以从底面2b侧的第二槽2nd所具备的注入注出用口3b取出。
如此所述，在本使用例中，选择具有不容许被共培养的任意一种细胞Ca、Cb通过的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4，向利用过滤器构件4划分出的各个槽1st、2nd依照种类分别注入不同种类的细胞Ca、Cb，由此可以不将该细胞Ca、Cb混合地在同一容器内进行共培养，在培养结束后，可以简便并且高效地进行将它们分别取出的操作。
因而，虽然没有特别地图示，然而也可以将容器主体2的内部划分为三槽以上，在各槽具备注入注出用口，由此对三种以上的细胞进行共培养。
[第二实施方式]
下面，对本发明的第二实施方式进行说明。
需要说明的是，图6是表示本实施方式的细胞培养用容器的一例的说明图。
作为本实施方式的一例，图6所示的容器1具备容器主体2和注入注出用口3a。此外，容器主体2的内部由片状的过滤器构件4划分为顶面2a侧的第一槽1st和底面2b侧的第二槽2nd，在顶面2a侧的第一槽1st具备注入注出用口3a。
图6所示的容器1在底面2b侧的第二槽2nd不具备注入注出用口3b这一点上，与作为第一实施方式的一例表示于图1中的容器1不同，而除此外的构成是共通的。此种容器1可以与第一实施方式的图1所示的容器1相同地制造，此时，省略形成注入注出用口3b的管状的构件即可。
本实施方式与前述的第一实施方式不同之处在于底面2b侧的第二槽2nd不具备注入注出用口3b这一点，除此以外的构成与前述的第一实施方式是共通的，因此省略重复的说明。
需要说明的是，与第一实施方式相同，容器主体2的具体的形态当然不受限定。
下面，作为本实施方式的一例对图6所示的容器1的使用例进行说明。
[第二实施方式的使用例]
图7表示出将图6所示的容器1作为在培养形成凝聚块Cagg的细胞Cs时可以简便并且高效地进行该培养基更换等操作的培养容器用于细胞培养的用途的例子。
本使用例中，以形成凝聚块Cagg的细胞Cs作为培养对象，选择具有容许形成凝聚块Cagg前的细胞(单细胞)Cs通过、而不容许凝聚块Cagg通过的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4。
由此，当从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a向由培养基充满了的容器主体2内注入作为培养对象的细胞(单细胞)Cs时，细胞Cs就会通过过滤器构件4，沉降于底面2b侧的第二槽2nd(参照图7(a))。此后，当培养推进时，细胞Cs就会形成凝聚块Cagg，无法通过过滤器构件4，由此，就可以在使凝聚块Cagg停留于底面2b侧的第二槽2nd的状态下进行培养(参照图7(b))。
因而，在培养期间中进行培养基更换时，从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a排出旧的培养基，并且注入新的培养基(参照图7(c))，由此可以使凝聚块Cagg一直停留于底面2b侧的第二槽2nd地进行培养基更换。此外，也可以在培养结束后，从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a反复进行清洗液的注入、排出，由此在使凝聚块Cagg一直停留于底面2b侧的第二槽2nd地清洗凝聚块Cagg。
如此所述，在本使用例中，在培养形成凝聚块Cagg的细胞Cs时，选择具有容许形成凝聚块Cagg前的细胞Cs通过、而不容许凝聚块Cagg通过的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4，将细胞Cs注入第一槽1st，然后，使之沉降于第二槽2nd，在使所形成的凝聚块Cagg停留于第二槽2nd的状态下进行培养，由此可以简便并且高效地进行培养期间中的培养基更换、培养结束后的清洗等操作。
此后，也可以在清洗后，向容器主体2内注入保存液等，由此将容器1用于培养所得的细胞(凝聚块Cagg)的保管、运送。
需要说明的是，虽然没有特别地图示，然而与前述的第一实施方式相同，如果使底面2b侧的第二槽2nd具备注入注出用口3b，则也可以从注入注出用口3b取出培养所得的细胞(凝聚块Cagg)。
[第三实施方式]
下面，对本发明的第三实施方式进行说明。
需要说明的是，图8是表示本实施方式的细胞培养用容器的一例的说明图。
作为本实施方式的一例，图8所示的容器1具备容器主体2和注入注出用口3a。此外，容器主体2的内部由片状的过滤器构件4划分为顶面2a侧的第一槽1st和底面2b侧的第二槽2nd，在顶面2a侧的第一槽1st，具备注入注出用口3a，并且在容器主体2的底面2b设有多个凹部5。
图8所示的容器1在容器主体2的底面2b设有多个凹部5这一点上与作为第二实施方式的一例表示于图6中的容器1不同，而除此以外的构成是共通的。此种容器1可以与第二实施方式的图6所示的容器1相同地制造，在将底面侧塑料膜成形时，通过适当地调整模具等，可以将凹部5以所期望的形状、排列来成形。
通过在容器主体2的底面2b设置多个凹部5，在培养基中沉降的细胞就被集中于各个凹部5的底部，可以在提高了细胞密度的状态下高效地进行培养。为了使集中于各个凹部5的底部的细胞不会在容器主体2内移动，而是停留于一个凹部5，维持提高了细胞密度的状态，凹部5的开口径(直径)优选为0.3～10mm，更优选为0.3～5mm，进一步优选为0.5～4mm，特别优选为0.5～2mm，深度优选为0.1mm以上。
另外，虽然在图示的例子中，以碗状形成凹部5，然而根据需要，也可以以圆锥状、圆锥台状等形成。
本实施方式不同于前述的第二实施方式之处在于在容器主体2的底面2b设有多个凹部5这一点，除此以外的构成与前述的第二实施方式是共通的，因此省略重复的说明。
需要说明的是，与第一及第二实施方式相同，容器主体2的具体的形态当然不受限定。
下面，作为本实施方式的一例对图8所示的容器1的使用例进行说明。
[第三实施方式的使用例]
图9表示出将图8所示的容器1作为在培养形成凝聚块Cagg的细胞Cs时在提高了细胞密度的状态下高效地进行培养、并且可以简便并且高效地进行培养基更换等操作的培养容器用于细胞培养的用途的例子。
本使用例中，以形成凝聚块Cagg的细胞Cs作为培养对象，选择具有容许形成凝聚块Cagg前的细胞(单细胞)Cs通过、而不容许凝聚块Cagg通过的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4。
由此，当从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a向由培养基充满了的容器主体2内注入作为培养对象的细胞(单细胞)Cs时，细胞Cs就会通过过滤器构件4，沉降于底面2b侧的第二槽2nd。沉降了的细胞Cs被集中于各个凹部5的底部，可以在提高了细胞密度的状态下高效地进行培养。此后，当培养推进时，细胞Cs就会形成凝聚块Cagg，无法通过过滤器构件4，由此，就可以在使凝聚块Cagg停留于底面2b侧的第二槽2nd的状态下进行培养。
因而，在培养期间中进行培养基更换时，从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a排出旧的培养基，并且注入新的培养基，由此就可以使凝聚块Cagg一直停留于底面2b侧的第二槽2nd地进行培养基更换。此时，虽然没有特别地图示，然而例如优选在底面2b的凹部5的周围(位于相邻的凹部5之间的面)粘接过滤器构件4等，以覆盖凹部5的开口部的方式将过滤器构件4固定于容器主体2内。通过如此设置，就可以抑制集中于凹部5的底部的细胞(凝聚块Cagg)的移动，使之更加可靠地停留于一个凹部5。此外，可以在培养结束后，从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a反复进行清洗液的注入、排出，由此使凝聚块Cagg一直停留于底面2b侧的第二槽2nd地清洗凝聚块Cagg。
如此所述，在本使用例中，在培养形成凝聚块Cagg的细胞Cs时，选择具有容许形成凝聚块Cagg前的细胞Cs通过、而不容许凝聚块Cagg通过的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4，将细胞Cs注入第一槽1st，然后，使之沉降于第二槽2nd，将沉降了的细胞Cs集中于凹部5的底部，在提高了细胞密度的状态下高效地进行培养的同时，在使所形成的凝聚块Cagg停留于第二槽2nd的状态下进行培养，由此可以简便并且高效地进行培养期间中的培养基更换、培养结束后的清洗等操作。
此后，也可以在清洗后，向容器主体2内注入保存液等，由此将容器1用于培养所得的细胞(凝聚块Cagg)的保管、运送。
需要说明的是，虽然没有特别地图示，然而与前述的第一实施方式相同，如果使底面2b侧的第二槽2nd具备注入注出用口3b，则也可以从注入注出用口3b取出培养所得的细胞(凝聚块Cagg)。
[第四实施方式]
下面，对本发明的第四实施方式进行说明。
需要说明的是，图10是表示本实施方式的细胞培养用容器的一例的说明图。
作为本实施方式的一例，图10所示的容器1具备容器主体2和注入注出用口3a、3b、3c。此外，容器主体2的内部由两个片状的过滤器构件4划分为顶面2a侧的第一槽1st、底面2b侧的第二槽2nd、和位于它们之间的第三槽3rd。
另外，在顶面2a侧的第一槽1st，具备成为其流入流出口的注入注出用口3a(IN)、3a(OUT)，与之相同，在底面2b侧的第二槽2nd，具备成为其流入流出口的注入注出用口3b(IN)、3b(OUT)。此外，在第三槽3rd，具备注入注出用口3c。
图10所示的容器1将容器主体2的内部划分为三个槽，在各个槽具备注入注出用口，并且在顶面2a侧的第一槽1st具备两个注入注出用口3a(IN)、3a(OUT)，在底面2b侧的第二槽2nd具备两个注入注出用口3b(IN)、3b(OUT)，在这一点上，与作为第一实施方式的一例表示于图1中的容器1不同，然而除此以外的构成是共通的。此种容器1例如可以如下所示地制造。
首先，准备两片塑料膜和两片片状的过滤器构件4，根据需要裁割它们，统一其大小。此后，将一方的塑料膜作为成为容器主体2的顶面2a侧的顶面侧塑料膜，将另一方的塑料膜作为成为容器主体2的底面2b侧的底面侧塑料膜，将它们利用真空成形、压缩空气成形等以残留其周边部地以台地状鼓出的方式成形。
然后，向成形了的顶面侧塑料膜与底面侧塑料膜之间，插入两片片状的过滤器构件4，使它们的周边部重合。此后，在顶面侧塑料膜与过滤器构件4之间，在其周边部的给定的位置，夹入形成注入注出用口3a(IN)、3a(OUT)的管状的构件，在底面侧塑料膜与过滤器构件4之间，在其周边部的给定的位置，夹入形成注入注出用口3b(IN)、3b(OUT)的管状的构件，在两片片状的过滤器构件4之间，在其周边部的给定的位置，夹入形成注入注出用口3c的管状的构件，在该状态下将周边部利用热熔接密封，根据需要修剪周边部。由此，制造图10所示的容器1。
本实施方式与前述的第一实施方式不同之处在于，容器主体2的内部被划分为三个槽，各个槽具备注入注出用口，并且顶面2a侧的第一槽1st具备两个注入注出用口3a(IN)、3a(OUT)，底面2b侧的第二槽2nd具备两个注入注出用口3b(IN)、3b(OUT)，除该点以外的构成与前述的第一实施方式是共通的，因此省略重复的说明。
需要说明的是，与第一、第二、以及第三实施方相同，容器主体2的具体的形态当然不受限定。
下面，作为本实施方式的一例对图10所示的容器1的使用例进行说明。
[第四实施方式的使用例]
图11表示出将图10所示的容器1作为可以简便并且高效地进行再现作为培养对象的细胞C在生物体内生长、增殖、分化的环境的操作的培养容器用于细胞培养的用途的例子。
本使用例中，从第三槽3rd所具备的注入注出用口3c注入作为培养对象的细胞C而进行培养，然而，此时，在顶面2a侧的第一槽1st和底面2b侧的第二槽2nd中，分别使成分组成不同的培养基流通。更具体而言，从顶面2a侧的第一槽1st所具备的注入注出用口3a(IN)和底面2b侧的第二槽2nd所具备的注入注出用口3b(IN)分别流入的成分组成不同的培养基在第三槽3rd中混合的同时，从各自的注入注出用口3a(OUT)、3b(OUT)流出。
此时，考虑作为培养对象的细胞C的大小，选择具有不容许该细胞C通过的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4。此外，分别在顶面2a侧的第一槽1st和底面2b侧的第二槽2nd中流通的培养基包含控制细胞的生长、增殖、分化的各种细胞外基质、对细胞施加刺激的各种信号物质等，以在将它们在第三槽3rd中混合时使其浓度梯度、到达方向等与生物体内的环境同等的方式，调整成分组成、流量/流速等。由此，就可以在第三槽3rd中再现生物体内的环境的同时，在使细胞C停留于第三槽3rd的状态下进行培养。
如此所述，在本使用例中，选择具有不容许作为培养对象的细胞C通过的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4，在使第一槽1st和第二槽2nd中分别流通成分组成不同的培养基的同时，向第三槽3rd注入细胞C而进行培养，由此可以简便并且高效地进行再现作为培养对象的细胞C在生物体内生长、增殖、分化的环境的操作。
[第五实施方式]
下面，对本发明的第五实施方式进行说明。
需要说明的是，图12是表示本实施方式的细胞培养用容器的一例的说明图。
以往，在细胞培养时，广泛地使用孔板。例如，在从ES细胞、iPS细胞向神经干细胞、或心肌、胰脏、肝脏、软骨等分化诱导时，一般采用在孔板(例如96孔板)中接种细胞、在孔内形成凝聚块而推进分化诱导的方法。
然而，在使用孔板培养细胞时，必须对各个孔进行培养基更换。因此，需要如下所示地依照孔的个数反复进行若干次烦杂的移液操作，即，在注意不混入培养中的细胞的同时用移液管抽吸排出旧的培养基，然后，用移液管注入新的培养基。
本实施方式用于在使用像孔板那样具有多个细胞培养部的容器培养细胞时，可以简便并且高效地进行培养基更换等操作。
作为本实施方式的一例，图12所示的容器1具备具有成为细胞培养部的多个凹部6的容器主体2，各个凹部6的开口部被片状的过滤器构件4覆盖。将覆盖各个凹部6的开口部的过滤器构件4以密合于凹部6的周围(位于相邻的凹部6的开口部之间的面)的方式安装于容器主体2。优选能够剥离地粘接于容器主体2。
本实施方式中，容器主体2只要可以对培养没有妨碍地将细胞、培养基等收容于各个凹部6中，其具体的形态就没有限定，然而优选在容器主体2中设置包围其周围地立起的侧壁部7。
另外，对于过滤器构件4，如前述的第一实施方式中说明所示。本实施方式中，以形成凝聚块的细胞作为培养对象，选择具有不容许凝聚块通过的细孔的过滤器构件作为过滤器构件4。
在使用此种容器1培养作为培养对象的细胞时，将作为培养对象的细胞与培养基一起注入成为细胞培养部的各个凹部6后开始培养。此后，随着培养推进，注入凹部6的细胞逐渐形成凝聚块。
如果培养推进到更换培养基的时期，则从各个凹部6排出旧的培养基。此时，由于覆盖各个凹部6的开口部的过滤器构件4不容许凝聚块通过，因此在进行培养基更换时，只要倾斜容器1就可以仅使旧的培养基流出，可以不伴随移液操作地从各个凹部6排出旧的培养基。
另外，如果在容器主体2设置包围其周围地立起的侧壁部7，则只要向侧壁部7的内侧注入新的培养基，就可以使新的培养基流入各个凹部6。通过如此设置，就可以不伴随移液操作地向各个凹部6注入新的培养基。
此后，在培养结束后，将过滤器构件4从容器主体2取下，开放凹部6的开口部，由此就可以不破坏凝聚块地取出。
需要说明的是，也可以在培养结束后，与进行培养基更换相同地向各个凹部6注入、排出清洗液，由此来清洗凝聚块。
如此所述，根据本实施方式，在培养形成凝聚块的细胞时，可以简便并且高效地进行该培养期间中的培养基更换等操作。
以上，对本发明给出优选的实施方式而进行了说明，然而本发明当然并不限定于前述的实施方式，可以在本发明的范围中进行各种变更实施。
根据本发明，可以简便并且高效地进行在细胞培养、特别是ES细胞iPS细胞的继代、以及从这些干细胞向神经干细胞、或心肌、胰脏、肝脏、软骨等的分化诱导的过程中形成的细胞团(凝聚块)培养时进行的各种操作。另外，对于淋巴细胞或杂交瘤等抗体产生细胞、巨核细胞或红血球等悬浮细胞的培养，也可以简便并且高效地进行各种操作。
将该说明书中记载的文献及成为本申请的巴黎优先权的基础的日本申请说明书的内容全都引用到本文中。
产业上的可利用性
本发明在医药学、生物化学领域中可以作为高效地培养细胞的技术利用。
符号的说明
1容器(细胞培养用容器)，2容器主体，2a顶面，2b底面，3a、3b、3c注入注出用口，4过滤器构件，5凹部，6凹部，7侧壁部，1st第一槽，2nd第二槽，3rd第三槽。

Claims (14)

1.一种细胞培养用容器，其特征在于，
是用于细胞培养的用途的细胞培养用容器，
所述细胞培养用容器具备容器主体和注入注出用口，
所述容器主体的内部由至少一个过滤器构件划分为多个槽。
2.根据权利要求1所述的细胞培养用容器，其中，
所述容器主体的内部被划分为所述容器主体的顶面侧的第一槽和所述容器主体的底面侧的第二槽，
在所述顶面侧的第一槽和所述底面侧的第二槽的至少一方，具备至少一个所述注入注出用口。
3.根据权利要求1或2所述的细胞培养用容器，其中，
在所述容器主体的底面设有多个凹部。
4.根据权利要求1所述的细胞培养用容器，其中，
所述容器主体的内部被划分为所述容器主体的顶面侧的第一槽、所述容器主体的底面侧的第二槽、和位于所述顶面侧的第一槽与所述底面侧的第二槽之间的第三槽，
在所述顶面侧的第一槽和所述底面侧的第二槽具备至少两个所述注入注出用口，
在所述第三槽具备至少一个所述注入注出用口。
5.一种细胞培养用容器，其特征在于，
是用于细胞培养的用途的细胞培养用容器，
所述细胞培养用容器具备具有成为细胞培养部的多个凹部的容器主体，所述凹部的各个开口部被过滤器构件覆盖。
6.根据权利要求5所述的细胞培养用容器，其中，
在所述容器主体设有包围所述容器主体的周围地立起的侧壁部。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的细胞培养用容器，其中，
所述过滤器构件是编织合成树脂纤维而得的网片。
8.一种细胞培养用容器的使用方法，其特征在于，
是使用权利要求1～3中任一项所述的细胞培养用容器在进行培养基更换的同时培养细胞的该容器的使用方法，
作为所述过滤器构件，选择具有不容许作为培养对象的细胞通过的细孔的过滤器构件，
向利用所述过滤器构件划分出的一个槽注入所述细胞而进行培养，
从利用所述过滤器构件划分出的另一个槽所具备的所述注入注出用口，注入注出培养基而进行培养基更换。
9.一种细胞培养用容器的使用方法，其特征在于，
是使用权利要求1～3中任一项所述的细胞培养用容器进行细胞的清洗的该容器的使用方法，
作为所述过滤器构件，选择具有不容许作为培养对象的细胞通过的细孔的过滤器构件，
向利用所述过滤器构件划分出的一个槽注入所述细胞而进行培养，
从利用所述过滤器构件划分出的另一个槽所具备的所述注入注出用口注入注出清洗液而进行培养所得的细胞的清洗。
10.一种细胞培养用容器的使用方法，其特征在于，
是使用权利要求1或2所述的细胞培养用容器分割细胞的凝聚块的该容器的使用方法，
作为所述过滤器构件，选择具有与意图分割细胞的凝聚块的大小对应的细孔的过滤器构件，
将所述凝聚块与培养基一起向利用所述过滤器构件划分出的一个槽压送而分割所述凝聚块。
11.一种细胞培养用容器的使用方法，其特征在于，
是使用权利要求1或2所述的细胞培养用容器分离混杂的大小不同的细胞的该容器的使用方法，
作为所述过滤器构件，选择具有容许混杂的细胞当中至少一种细胞通过、而不容许其以外的细胞通过的细孔的过滤器构件，
向利用所述过滤器构件划分出的一个槽注入混杂的大小不同的细胞，
从利用所述过滤器构件划分出的另一个槽，取出通过了所述过滤器构件的细胞。
12.一种细胞培养用容器的使用方法，其特征在于，
是使用权利要求1或2所述的细胞培养用容器对不同种类的细胞进行共培养的该容器的使用方法，
作为所述过滤器构件，选择具有不容许被共培养的任意一种细胞通过的细孔的过滤器构件，
向利用所述过滤器构件划分出的各个槽依照种类分别注入所述细胞而进行共培养。
13.一种细胞培养用容器的使用方法，其特征在于，是使用权利要求2或3所述的细胞培养用容器培养形成凝聚块的细胞的该容器的使用方法，
作为所述过滤器构件，选择具有容许形成凝聚块前的细胞通过、而不容许凝聚块通过的细孔的过滤器构件，
将所述细胞注入所述第一槽，然后使之沉降于所述第二槽，在使所形成的凝聚块停留于所述第二槽的状态下进行培养。
14.一种细胞培养用容器的使用方法，其特征在于，
是使用权利要求4所述的细胞培养用容器培养细胞的该容器的使用方法，
作为所述过滤器构件，选择具有不容许作为培养对象的细胞通过的细孔的过滤器构件，
在使所述第一槽和所述第二槽中分别流通成分组成不同的培养基的同时，向所述第三槽注入所述细胞而进行培养。
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