BR112020021266A2

BR112020021266A2 - anticorpo anti-tlr7 humano

Info

Publication number: BR112020021266A2
Application number: BR112020021266-0A
Authority: BR
Inventors: Kensuke Miyake; Jun Ishiguro; Kensuke Nakamura; Takashi Isobe; Yusuke Murakami; Yuji MOTOI; Atsuo KANNO; Toshiyuki Shimizu; Umeharu Ohto; Takaichi Shimozato; Atsushi Manno; Takashi Kagari
Original assignee: Daiichi Sankyo Company, Limited; The University Of Tokyo
Priority date: 2018-05-31
Filing date: 2019-05-30
Publication date: 2021-01-26
Also published as: AU2019279206B2; CN112204143B; CO2020015124A2; JP2021035378A; TWI833761B; JP6790307B2; EP3805389A1; IL318087A; KR20210018192A; US11578138B2; IL278962A; IL278962B2; TW202521585A; US20210040225A1; WO2019230869A1; IL278962B1; US11091560B2; MY208015A; KR102729319B1; CA3099900A1

Abstract

A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica que compreende um anticorpo que se liga especificamente ao TLR7 humano ou TLR7 de macaco e não se liga ao TLR7 de camundongo ou TLR7 de rato e tem uma atividade de inibir uma função do TLR7 humano ou TLR7 de macaco e assim por diante.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTI- CORPO ANTI-TLR7 HUMANO", Campo Técnico

[0001] A presente invenção se refere a anticorpos antirreceptor Toll- like humano (TLR) 7 para o tratamento de transtornos e doenças. Estado da Técnica

[0002] Em seres humanos, sabe-se que 10 tipos de TLRs, os quais são moléculas de reconhecimento de padrões, estão presentes e for- mam uma família. Dentre eles, o TLR7 (variante 1) é uma única proteína transmembrana composta por 1.049 aminoácidos e a possibilidade de desempenhar um papel importante na patogênese de diversas doenças inflamatórias e autoimunes, por meio da detecção de RNAs fita simples e participação na reação de defesa biológica através da produção de interferons de tipo | e citocinas e assim por diante, foi sugerida (Litera- tura Não Patente 1). Além disso, o TLR7 (variante 2), o qual é uma única proteína transmembrana que consiste em 1049 aminoácidos, também é conhecido por ter a mesma função que o TLR7 (variante 1) acima (Lite- ratura de Não Patente 2). Em particular, há muitos relatórios sugerindo o envolvimento de TLR7 em doenças tais como psoríase e lúpus erite- matoso sistêmico e espera-se que seja possível tratar tais doenças ao inibir as funções do TLR7 (Literatura de Não Patente 3).

[0003] Embora a deficiência de TLR7 atue para reduzir os sintomas em modelos de doença, medicamentos capazes de inibir especifica- mente o TLR7 são considerados promissores no tratamento de doenças inflamatórias ou similar com base em relatórios que sugerem que a de- ficiência de TLR9 está envolvida na progressão da doença (Literatura de Não Patente 4).

[0004] Até agora, a pesquisa e o desenvolvimento de ácidos nuclei- cos, compostos de baixo peso molecular e assim por diante para inibir o TLR7 humano têm sido tentados, mas é difícil inibir o TLR7 humano especificamente usando ácidos nucleicos ou compostos de baixo peso molecular. Além disso, um anticorpo anti-TLR7 de camundongo é co- nhecido como um anticorpo ao TLR7 (Literatura de Patente 1), porém, tem sido necessária pesquisa e o desenvolvimento de novos inibidores específicos de TLR7 humano.

Lista de Citações Literatura de Patente

[0005] Literatura de Patente 1: Publicação Internacional Nº WO 2014/174704 Literatura Não Patente

[0006] Literatura de Não Patente 1: Takeuchi O., Akira S. Cell. 19 de março de 2010; 140 (6): 805-2

[0007] Literatura de Não Patente 2: Chuang T.H., Ulevitech R.J., Eur Cytokine Netw. Setembro de 2000; 11 (3): 372-8

[0008] Literatura de Não P atente 3: Lyn-Cook B.D., Xie C., Oates )., Treadwell E., Word B., Hammons G., Wiley K. Mol Immunol. Setembro de 2014; 61 (1): 38-43.

[0009] Literatura de Não Patente 4: Christensen S.R., Shupe )., Nickerson K., Kashgarian M., Flavell R.A., Shlomchik M.J., Immunity.

Setembro de 2006; 25 (3): 417-28.

Sumário da Invenção Problema Técnico

[0010] É um objetivo da presente invenção fornecer um agente para o tratamento e/ou prevenção de doenças relacionadas à inflamação imune, doenças alérgicas, infecções e cânceres.

Solução Para o Problema

[0011] A fim de resolver os problemas supracitados, os inventores procuraram por uma substância com o efeito de tratar e/ou prevenir do- enças relacionadas à inflamação imune, doenças alérgicas, infecções e cânceres e adquiriram um anticorpo anti-TLR7 humano de camun- dongo. Eles conseguiram a presente invenção ao humanizar o anticorpo anti-TLR7 humano de camundongo obtido e modificar ainda mais as CDRs, regiões estruturais e regiões variáveis do anticorpo humanizado.

[0012] Isto é, a presente invenção inclui os seguintes aspectos.

[0013] (1) Um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do an- ticorpo que tem as propriedades de: (a) ligação específica ao TLR7 humano ou TLR7 de macaco e ausência de ligação ao TLR7 de camundongo ou TLR7 de rato; e (b) inibição de uma função do TLR7 humano ou TLR7 de ma- caco.

[0014] (2) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (1) acima, em que o TLR7 humano é uma molé- cula que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 4, o TLR7 de macaco é uma molécula que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 85, o TLR7 de camundongo é uma molécula que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 83 ou o TLR7 de rato é uma molécula que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 84.

[0015] (3) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (1) ou (2) acima que tem uma atividade inibidora competitiva pela ligação ao TLR7 humano com: um anticorpo que compreende uma cadeia pesada com uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de amino- ácidos apresentada em SEQ ID NO: 5 e uma cadeia leve com uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 11; um anticorpo que compreende uma cadeia pesada com uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de amino- ácidos apresentada em SEQ ID NO: 7 e uma cadeia leve com uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 13; ou um anticorpo que compreende uma cadeia pesada com uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de amino- ácidos apresentada em SEQ ID NO: 9 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 15.

[0016] (4) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com qualquer um de (1) a (3) acima que compreende: (a) CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 17, CDRH2 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 e CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 como regi- ões determinantes de complementaridade na cadeia pesada e CDRL1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20, CDRL?2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 21 e CDRL3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 22 como regiões determinantes de com- plementaridade na cadeia leve; (b) CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 23, CDRH2 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 24 e CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 25 como regi- ões determinantes de complementaridade na cadeia pesada e CDRL1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 26, CDRL?2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 27 e CDRL3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 28 como regiões determinantes de com- plementaridade na cadeia leve; ou

(c) CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 29, CDRH2 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 30 e CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 31 como regi- ões determinantes de complementaridade na cadeia pesada e CDRL1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 32, CDRL?2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 33 e CDRL3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 34 como regiões determinantes de com- plementaridade na cadeia leve.

[0017] (5) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (4) acima que compreende: CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 17, CDRH2 que consiste na sequência de amino- ácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 e CDRH3 que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 como regiões determinantes de complementaridade na cadeia pesada, e CDRLI1 que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 20, CDRL2 que consiste na sequência de amino- ácidos apresentada em SEQ ID NO: 21 e CDRL3 que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 22 como regiões determinantes de complementaridade na cadeia leve.

[0018] (6) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com qualquer um de (1) a (5) acima que compreende: (a) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 5 e uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 11; (b) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7 e uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 13; ou (c) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 9 e uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 15.

[0019] (7) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com qualquer um de (1) a (6) acima, em que uma re- gião constante é uma região constante derivada de ser humano.

[0020] (8) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (7) acima que compreende: (a) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 35 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 36; (b) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 471 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 37 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 38, ou (c) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 470 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 39 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 234 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 40.

[0021] (9) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com qualquer um de (1) a (8) acima que é humanizado.

[0022] (10) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (9) acima que compreende:

(1) uma região variável de cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que con- siste em:

(a) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 41;

(b) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42;

(c) uma sequência de aminoácidos que tem uma homologia de pelo menos 95 % ou mais com a sequência (a) ou (b); e

(d) uma sequência de aminoácidos derivada da sequência (a) ou (b) por meio de eliminação, substituição ou adição de 1a 10 ami- noácidos; e uma região variável de cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em:

(e) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43;

(f) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44;

(9) uma sequência de aminoácidos que tem uma homologia de pelo menos 95 % ou mais com a sequência (e) ou (f); e

(h) uma sequência de aminoácidos derivada da sequência (e) ou (f) por meio de eliminação, substituição ou adição de 1 a 10 ami- noácidos; ou

(Il) uma região variável de cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que con- siste em:

(a) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 50;

(b) uma sequência de aminoácidos que tem uma homologia de pelo menos 95 % ou mais com a sequência (a); e

(c) uma sequência de aminoácidos derivada da sequência (a) por meio de eliminação, substituição ou adição de 1 a 10 aminoáci- dos; e uma região variável de cadeia leve que consiste em uma sequên- cia de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: (d) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 51; (e) uma sequência de aminoácidos que tem uma homologia de pelo menos 95 % ou mais com a sequência (d); e (f) uma sequência de aminoácidos derivada da sequência (d) por meio de eliminação, substituição ou adição de 1 a 10 aminoácidos.

[0023] (11) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (10) acima que compreende: (a) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 41 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43; (b) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 41 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44; (c) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43; (d) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44; ou (e) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 50 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 51.

[0024] (12) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (11) acima que compreende uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve que con- siste da sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44.

[0025] (13) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (11) acima que compreende: (a) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 45 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 48; (b) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 45 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 49; (c) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 48; (d) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 49;

(e) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 462 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 47 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 48; (f) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 462 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 47 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 49; (g) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 471 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 52 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 53; ou (h) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 468 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 54 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 53.

[0026] (14) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (13) acima que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posi- ções 21 a 233 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 49.

[0027] (15) Um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do an- ticorpo que tem as propriedades de: (a) ligação específica ao TLR7 humano,

(b) inibição de uma função do TLR7 humano, e (c) que compreende:

(1) CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 17, CDRH2 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 e CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 como regi- ões determinantes de complementaridade na cadeia pesada e CDRL1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20, CDRL?2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 21 e CDRL3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 22 como regiões determinantes de com- plementaridade na cadeia leve;

(2) CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 23, CDRH2 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 24 e CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 25 como regi- ões determinantes de complementaridade na cadeia pesada e CDRL1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 26, CDRL?2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 27 e CDRL3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 28 como regiões determinantes de com- plementaridade na cadeia leve; ou

(3) CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 29, CDRH2 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 30 e CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 31 como regi- ões determinantes de complementaridade na cadeia pesada e CDRL1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 32, CDRL?2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 33 e CDRL3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 34 como regiões determinantes de com- plementaridade na cadeia leve.

[0028] (16) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (15) acima que compreende: CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 17, CDRH2 que consiste na sequência de amino- ácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 e CDRH3 que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 como regiões determinantes de complementaridade na cadeia pesada, e CDRLI1 que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 20, CDRL2 que consiste na sequência de amino- ácidos apresentada em SEQ ID NO: 21 e CDRL3 que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 22 como regiões determinantes de complementaridade na cadeia leve.

[0029] (17) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (15) ou (16) acima que compreende: (a) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 5 e uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 11; (b) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7 e uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 13; ou (c) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 9 e uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 15.

[0030] (18) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com qualquer um de (15) a (17) acima, em que uma região constante é uma região constante derivada de seres humanos.

[0031] (19) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (18) acima que compreende: (a) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 35 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 36; (b) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 471 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 37 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 38, ou (c) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 470 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 39 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 234 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 40.

[0032] (20) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com qualquer um de (15) a (19) acima que é humani- zado.

[0033] (21) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (20) acima que compreende: (1) uma região variável de cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que con- siste em: (a) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 41; (b) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42;

(e) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43;

(f) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44;

(a) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 50;

(c) uma sequência de aminoácidos derivada da sequência (a) por meio de eliminação, substituição ou adição de 1 a 10 aminoáci- dos; e uma região variável de cadeia leve que consiste em uma sequên- cia de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em:

(d) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 51;

(e) uma sequência de aminoácidos que tem uma homologia de pelo menos 95 % ou mais com a sequência (d); e (f) uma sequência de aminoácidos derivada da sequência (d) por meio de eliminação, substituição ou adição de 1 a 10 aminoácidos.

[0034] (22) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (21) acima que compreende: (a) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 41 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43; (b) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 41 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44; (c) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43; (d) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44; ou (e) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 50 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 51.

[0035] (23) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (22) acima que compreende uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve que con- siste da sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44.

[0036] (24) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (22) acima que compreende:

(a) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 45 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 48;

(b) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 45 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 49;

(c) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 48;

(d) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 49;

(e) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 462 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 47 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 48;

(f) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 462 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 47 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 49; (g) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 471 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 52 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 53; ou (h) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 468 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 54 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 53.

[0037] (25) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com (24) acima que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posi- ções 21 a 233 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 49.

[0038] (26) Um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do an- ticorpo que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma se- quência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 45 e uma cadeia leve que con- siste em um amino sequência de ácido nas posições 21 a 233 na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 48.

[0039] (27) Um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do an- ticorpo que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma se- quência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que con-

siste em um amino sequência de ácido nas posições 21 a 233 na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 48.

[0040] (28) Um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do an- ticorpo que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma se- quência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que con- siste de um aminoácido sequência de ácido nas posições 21 a 233 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 49.

[0041] (29) Um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do an- ticorpo que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma se- quência de aminoácidos nas posições 20 a 462 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 47 e uma cadeia leve que con- siste em um aminoácido sequência de ácido nas posições 21 a 233 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 49.

[0042] (30) Um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do an- ticorpo que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma se- quência de aminoácidos nas posições 20 a 471 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 52 e uma cadeia leve que con- siste em um aminoácido sequência de ácido nas posições 21 a 233 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 53.

[0043] (31) Um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do an- ticorpo que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma se- quência de aminoácidos nas posições 20 a 468 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 54 e uma cadeia leve que con- siste em um aminoácido sequência de ácido nas posições 21 a 233 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 53.

[0044] (32) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com qualquer um de (26) a (31) acima, tendo as pro- priedades de: (a) ligação específica ao TLR7 humano; e

(b) inibição de uma função do TLR7 humano.

[0045] (33) O fragmento de ligação a antígeno do anticorpo de acordo com qualquer um de (1) a (32) acima, em que o fragmento de ligação a antígeno é selecionado a partir do grupo que consiste em Fab, F(ab)2, Fab'eFv.

[0046] (34) Um polinucleotídeo que compreende uma sequência de polinucleotídeos que codifica o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do anticorpo de acordo com qualquer um de (1) a (33) acima.

[0047] (35) O polinucleotídeo de acordo com (34) acima que com- preende: (1) uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 17, uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRL1 que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20, uma sequên- cia de polinucleotídeos que codifica CDRL2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 21 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRL3 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 22; (2) uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 23, uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 24 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 25 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRL1 que consiste na se-

quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 26, uma sequên- cia de polinucleotídeos que codifica CDRL2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 27 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRL3 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 28; ou (3) uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 29, uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 30 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 31 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRL1 que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 32, uma sequên- cia de polinucleotídeos que codifica CDRL2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 33 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRL3 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 34.

[0048] (36) O polinucleotídeo de acordo com (35) acima que com- preende: (1) uma sequência de polinucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em: (a) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 77; (b) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 78; e (c) uma sequência de polinucleotídeos de um polinucleotídeo que hibridiza com um polinucleotídeo que consiste em uma sequência de polinucleotídeos complementar à sequência de polinucleotídeos (a) ou (b) sob condições rigorosas; e uma sequência de polinucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em:

(d) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 79; (e) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 80; e (f) uma sequência de polinucleotídeos de um polinucleotídeo que hibridiza com um polinucleotídeo que consiste em uma sequência de polinucleotídeos complementar à sequência de polinucleotídeos (d) ou (e) sob condições rigorosas; ou (Il) uma sequência de polinucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em: (a) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 81; e (b) uma sequência de polinucleotídeos de um polinucleotí- deo que hibridiza com um polinucleotídeo que consiste em uma sequên- cia de polinucleotídeos complementar à sequência de polinucleotídeos (a) sob condições rigorosas; e uma sequência de polinucleotídeos sele- cionada a partir do grupo que consiste em: (c) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 82; e (d) uma sequência de polinucleotídeos de um polinucleotí- deo que hibridiza com um polinucleotídeo que consiste em uma sequên- cia de polinucleotídeos complementar à sequência de polinucleotídeos (c) sob condições rigorosas.

[0049] (37) O polinucleotídeo de acordo com (36) acima que com- preende: (a) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 77 e uma se- quência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 79; (b) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 77 e uma se- quência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 80; (c) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 78 e uma se- quência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 79; (d) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 78 e uma se- quência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 80; ou (e) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 81 e uma se- quência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 82.

[0050] (38) Um vetor de expressão que compreende o polinucleotí- deo de acordo com qualquer um de (34) a (37) acima.

[0051] (39) Uma célula hospedeira transformada com o vetor de ex- pressão de acordo com (38) acima.

[0052] (40) A célula hospedeira de acordo com (39) acima, em que a célula hospedeira é uma célula eucariota.

[0053] (41) Um método para a produção de um anticorpo ou frag- mento de ligação a antígeno do anticorpo que compreende as etapas de: cultivar a célula hospedeira de acordo com (39) ou (40) acima; e coletar o anticorpo ou o fragmento de interesse da cultura obtida na etapa acima.

[0054] (42) Um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do anticorpo obtido por meio do método de produção de acordo com (41).

[0055] (43) O anticorpo, de acordo com qualquer um de (1) a (32) acima, que compreende uma ou mais modificações selecionadas a par- tir do grupo que consiste em glicosilação N-ligada, glicosilação O-ligada, processamento de N-terminal, processamento C-terminal, desamida- ção, isomerização de ácido aspártico, oxidação de metionina, adição de um resíduo de metionina ao N-término, amidação de um resíduo de pro- lina e eliminação de um ou dois aminoácidos no terminal carboxila da cadeia pesada.

[0056] (44) O anticorpo de acordo com (43) acima que compreende: duas cadeias pesadas que consiste em um tipo de ou uma combinação de quaisquer dois tipos de cadeias pesadas selecionadas a partir do grupo que consiste em variantes de comprimento total e com eliminação com um ou dois aminoácidos eliminados do terminal carboxila.

[0057] (45) O anticorpo, de acordo com (44) acima, em que um ami- noácido é eliminado do terminal carboxila em cada uma das duas ca- deias pesadas.

[0058] (46) O anticorpo, de acordo com qualquer um de (43) a (45) acima, em que um resíduo de prolina no terminal carboxila da cadeia pesada é ainda amidado.

[0059] (47) Uma composição farmacêutica para tratar e/ou prevenir uma doença que compreende: pelo menos um dos anticorpos ou os fra- gmentos de ligação a antígeno dos anticorpos de acordo com (1) a (33) e (42) a (46) acima ou o vetor de expressão de acordo com (38) como um ingrediente ativo.

[0060] (48) A composição farmacêutica de acordo com (47) acima para o tratamento de uma doença causada por uma função do TLR7 humano.

[0061] (49) A composição farmacêutica, de acordo com (48) acima, em que a doença causada por uma função do TLR7 humano é uma doença relacionada à inflamação imune, uma doença alérgica, uma in- fecção ou um câncer.

[0062] (50) A composição farmacêutica, de acordo com (49) acima, em que a doença relacionada à inflamação imune é lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatoide, artrite idiopática juvenil, doença de Still em adultos, espondilite anquilosante, esclerodermia sistêmica, polimiosite, dermatomiosite, artrite psoriática, osteoartrite, doença mista do tecido conjuntivo ou distrofia muscular.

[0063] (51) A composição farmacêutica de acordo com (49) ou (50) acima, em que a doença relacionada à inflamação imune é lúpus erite- matoso sistêmico.

[0064] (52) A composição farmacêutica, de acordo com qualquer um de (47) a (51) acima, a ser usada em combinação com um imunos- supressor, um medicamento anti-inflamatório, um agente antialérgico, um agente anti-infeccioso ou um agente anticâncer.

[0065] (53) Um método para tratar uma doença causada por uma função do TLR7 humano caracterizado pelo fato de que compreende: administrar pelo menos um dos anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos anticorpos de acordo com (1) a (33) e (42) a (46) acima a um indivíduo.

[0066] (54) Um método para tratar uma doença causada por uma função do TLR7 humano que compreende administrar pelo menos um dos anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos anticorpos de acordo com (1) a (33) e (42) a (46) acima, juntamente com um imunos- supressor, um medicamento anti-inflamatório, um agente antialérgico, um agente anti-infeccioso ou um agente anticâncer, simultânea, sepa- rada ou sequencialmente a um indivíduo.

[0067] (55) O método de tratamento, de acordo com (53) ou (54) acima, em que a doença causada por uma função do TLR7 humano é uma doença relacionada à inflamação imune, uma doença alérgica, uma infecção ou um câncer.

[0068] (56) O método de tratamento de acordo com (55) acima, em que a doença relacionada à inflamação imune é lúpus eritematoso sis- têmico, artrite reumatoide, artrite idiopática juvenil, doença de Still em adultos, espondilite anquilosante, esclerodermia sistêmica, polimiosite, dermatomiosite, artrite psoriática, osteoartrite, doença mista do tecido conjuntivo ou distrofia muscular.

[0069] (57) O método de tratamento de acordo com (55) ou (56) acima, em que a doença relacionada à inflamação imune é lúpus erite- matoso sistêmico.

[0070] (58) O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com qualquer um de (1) a (33) e (42) a (46) acima ou o vetor de expressão de acordo com (38) acima, a ser usado para tratar ou prevenir uma doença causada por uma função do TLR7 humano.

[0071] (59) O anticorpo, o fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo ou o vetor de expressão de acordo com (58) acima, em que a doença causada por uma função do TLR7 humano é uma doença rela- cionada à inflamação imune, uma doença alérgica, uma infecção ou um câncer.

[0072] (60) O anticorpo, o fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo ou o vetor de expressão de acordo com (59) acima, em que a doença relacionada à inflamação imune é lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatoide, artrite idiopática juvenil, doença de Still de início na idade adulta, espondilite anquilosante, esclerodermia sistêmica, polimi- osite, dermatomiosite, artrite psoriática, osteoartrite, doença mista do tecido conjuntivo ou distrofia muscular.

[0073] (61) O anticorpo, o fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo ou o vetor de expressão de acordo com (59) ou (60) acima, em que a doença relacionada à inflamação imune é lúpus eritematoso sis- têmico.

[0074] (62) O anticorpo, o fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo ou o vetor de expressão de acordo com qualquer um de (58) a (61) acima, a ser usado em combinação com um imunossupressor, um medicamento anti-inflamatório, um agente antialérgico, um agente anti- infeccioso ou um agente anticâncer.

[0075] (63) O uso do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anticorpo de acordo com qualquer um de (1) a (33) e (42) a (46) acima ou do vetor de expressão de acordo com (38) acima para produzir um agente terapêutico ou um agente preventivo para uma doença cau- sada por uma função do TLR7 humano.

[0076] (64) O uso de acordo com (63) acima, em que a doença cau- sada por uma função do TLR7 humano é uma doença relacionada à inflamação imune, uma doença alérgica, uma infecção ou um câncer.

[0077] (65) O uso de acordo com (64) acima, em que a doença re- lacionada à inflamação imune é lúpus eritematoso sistêmico, artrite reu- matoide, artrite idiopática juvenil, doença de Still em adultos, espondilite anquilosante, esclerodermia sistêmica, polimiosite, dermatomiosite, ar- trite psoriática, osteoartrite, doença mista do tecido conjuntivo ou distro- fia muscular.

[0078] (66) O uso de acordo com (64) ou (65) acima, em que a do- ença relacionada à inflamação imune é lúpus eritematoso sistêmico.

[0079] (67) O uso de acordo com qualquer um de (63) a (66) acima, em que o agente terapêutico ou o agente preventivo é usado em com- binação com um imunossupressor, um medicamento anti-inflamatório, um agente antialérgico, um agente anti-infeccioso ou um agente anti- câncer. Efeitos Vantajosos da Invenção

[0080] De acordo com a presente invenção, um agente com um me- canismo de ação de inibir uma função do TLR7 para tratar e/ou prevenir doenças relacionadas à inflamação imune, doenças alérgicas, infecções e cânceres pode ser obtido. Breve Descrição dos Desenhos

[0081] A Figura 1 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 2) do TLR7 humano (variante 1).

[0082] A Figura 2 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 4) do TLR7 humano (variante 2).

[0083] A Figura 3 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 83) do TLR7 de camundongo.

[0084] A Figura 4 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 84) do TLR7 de rato.

[0085] A Figura 5 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 85) do TLR7 de macaco.

[0086] A Figura 6 é um gráfico que mostra que o anticorpo ATO1, o anticorpo NB7 e o anticorpo FAN2 suprimem a produção de IL-6 a partir de células mononucleares de sangue periférico humano (as quais serão, daqui em diante, denominadas como PBMCs) tratadas com CL-264 de uma maneira dependente da concentração.

[0087] A Figura 7 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 35) da cadeia pesada do anticorpo cATO1 que inclui a sequência sinali- zadora do mesmo e a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 36) da cadeia leve do anticorpo cATO1 que inclui a sequência sinalizadora do mesmo. Na sequência de aminoácidos da cadeia pesada, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 19 é a sequência sinalizadora, a se- quência de aminoácidos nas posições 20 a 135 é a região variável de cadeia pesada e a sequência de aminoácidos nas posições 136 a 465 é a região constante de cadeia pesada. Na sequência de aminoácidos da cadeia leve, a sequência de aminoácidos nas posições 1a 20éa sequência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições 21 a 126 é a região variável de cadeia leve e a sequência de aminoácidos nas posições 127 a 233 é a região constante de cadeia leve.

[0088] A Figura 8 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 37) da cadeia pesada do anticorpo cNB7 que inclui a sequência sinali- zadora do mesmo e a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 38) da cadeia leve do anticorpo cNB7 que inclui a sequência sinalizadora do mesmo. Na sequência de aminoácidos da cadeia pesada, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 19 é a sequência sinalizadora, a se- quência de aminoácidos nas posições 20 a 141 é a região variável de cadeia pesada e a sequência de aminoácidos nas posições 142 a 471 é a região constante de cadeia pesada. Na sequência de aminoácidos da cadeia leve, a sequência de aminoácidos nas posições 1a 20 é a sequência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições 21 a 126 é a região variável de cadeia leve e a sequência de aminoácidos nas posições 127 a 233 é a região constante de cadeia leve.

[0089] A Figura 9 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 39) da cadeia pesada do anticorpo cFAN?2 que inclui a sequência sina- lizadora do mesmo e a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 40) da cadeia leve do anticorpo cFAN2 que inclui a sequência sinalizadora do mesmo. Na sequência de aminoácidos da cadeia pesada, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 19 é a sequência sinalizadora, a se- quência de aminoácidos nas posições 20 a 140 é a região variável de cadeia pesada e a sequência de aminoácidos nas posições 141 a 470 é a região constante de cadeia pesada. Na sequência de aminoácidos da cadeia leve, a sequência de aminoácidos nas posições 1a 20 é a sequência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições 21 a 127 é a região variável de cadeia leve e a sequência de aminoácidos nas posições 128 a 234 é a região constante de cadeia leve.

[0090] A Figura 10 é um gráfico que mostra que cATO1, cNB7 e CFAN2, os quais são anticorpos quiméricos anti-TLR7 humano, supri- mem a produção de IL-6 a partir de PBMCs humanas tratadas com CL- 264 de uma maneira dependente da concentração.

[0091] A Figura 11 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 45) da cadeia pesada de huATO1 H1 IQG1LALA que inclui a se- quência sinalizadora do mesmo e que é uma cadeia pesada humani- zada. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 19 é a sequência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições a 135 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 136 a 465 é a região constante. Além disso, a sequência de aminoáci- dos nas posições 45 a 54 é CDRH1, a sequência de aminoácidos nas posições 69 a 78 é CDRH2 e a sequência de aminoácidos nas posições 118 a 124 é CDRH3.

[0092] A Figura 12 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 46) da cadeia pesada de huATO1 H3 IgG1LALA que inclui a se- quência sinalizadora do mesmo e que é uma cadeia pesada humani- zada. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 19 é a sequência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições 20 a 135 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 136 a 465 é a região constante. Além disso, a sequência de aminoáci- dos nas posições 45 a 54 é CDRH1, a sequência de aminoácidos nas posições 69 a 78 é CDRH2 e a sequência de aminoácidos nas posições 118 a 124 é CDRH3.

[0093] A Figura 13 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 47) da cadeia pesada de huATO1 H3 IgG4Pro que inclui a sequên- cia sinalizadora do mesmo e que é uma cadeia pesada humanizada. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 19 é a se- quência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições 20 a 135 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 136 a 462 é a região constante. Além disso, a sequência de aminoácidos nas posições 45 a 54 é CDRH1, a sequência de aminoácidos nas posi- ções 69 a 78 é CDRH2 e a sequência de aminoácidos nas posições 118 a 124 é CDRH3.

[0094] A Figura 14 mostra a comparação da sequência de aminoá- cidos (SEQ ID NO: 5) da região variável de cCATO1 H, a qual é a cadeia pesada do anticorpo quimérico cATO1 (a qual será, daqui em diante, denominada como cATO1 H), a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 41) da região variável de cadeia pesada do anticorpo humanizado huATO1 H1 IQGILALA (a qual será, daqui em diante, denominada como huATO1 H1) e a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 42) da região variável de cadeia pesada do anticorpo humanizado huATO1 H3 IQGILALA (a qual será, daqui em diante, denominada como huATO1 H3). Nas sequências de huATO1 H1 e huATO1 H3, o símbolo "o" representa o mesmo resíduo de aminoácido que cATO1 H e um resíduo de aminoácido substituído é mostrado no local onde o re- síduo de aminoácido é descrito.

[0095] A Figura 15 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 48) da cadeia leve de huATO1 L1 que inclui a sequência sinaliza- dora do mesmo e que é uma cadeia leve humanizada. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 20 é a sequência sinaliza- dora, a sequência de aminoácidos nas posições 21 a 126 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 127 a 233 é a re- gião constante. Além disso, a sequência de aminoácidos nas posições 44 a 54 é CDRL1, a sequência de aminoácidos nas posições 70 a 76 é CDRL2 e a sequência de aminoácidos nas posições 109 a 116 é CDRL3.

[0096] A Figura 16 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 49) da cadeia leve de huATO1 L2 que inclui a sequência sinaliza- dora do mesmo e que é uma cadeia leve humanizada. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 20 é a sequência sinaliza- dora, a sequência de aminoácidos nas posições 21 a 126 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 127 a 233 é a re- gião constante. Além disso, a sequência de aminoácidos nas posições

44 a 54 é CDRL1, a sequência de aminoácidos nas posições 70 a 76 é CDRL2 e a sequência de aminoácidos nas posições 109 a 116 é CDRL3.

[0097] A Figura 17 mostra a comparação da sequência de aminoá- cidos (SEQ ID NO: 11) da região variável de CATO1 L, a qualé a cadeia leve do anticorpo quimérico cATO1 (a qual será, daqui em diante, deno- minada como cATO1 L), a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 43) da região variável de cadeia leve do anticorpo humanizado huATO1 L1 (a qual será, daqui em diante, denominada como huATO1 L1) e a se- quência de aminoácidos (SEQ ID NO: 44) da região variável de cadeia leve do anticorpo humanizado huATO1 L2 (a qual será, daqui em diante, denominada como huATO1 L2). Nas sequências de huATO1 L1 e huATO1 L2, o símbolo "O" representa o mesmo resíduo de aminoácido que cATO1 L e um resíduo de aminoácido substituído é mostrado no local onde o resíduo de aminoácido é descrito.

[0098] A Figura 18 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 52) da cadeia pesada de huNB7 H3 IgG1LALA que inclui a se- quência sinalizadora do mesmo e que é uma cadeia pesada humani- zada. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 19 é a sequência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições a 141 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 142 a 471 é a região constante. Além disso, a sequência de aminoáci- dos nas posições 45 a 55 é CDRH1, a sequência de aminoácidos nas posições 70 a 78 é CDRH2 e a sequência de aminoácidos nas posições 118 a 130 é CDRH3.

[0099] A Figura 19 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 54) da cadeia pesada de huNB7 H3 IgG4Pro que inclui a sequên- cia sinalizadora do mesmo e que é uma cadeia pesada humanizada. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 19 é a se- quência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições 20 a

141 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 142 a 468 é a região constante. Além disso, a sequência de aminoácidos nas posições 45 a 55 é CDRH1, a sequência de aminoácidos nas posi- ções 70 a 78 é CDRH2 e a sequência de aminoácidos nas posições 118 a 130 é CDRH3.

[0100] A Figura 20 mostra a comparação da sequência de aminoá- cidos (SEQ ID NO: 7) da região variável de cCNB7 H, a qual é a cadeia pesada do anticorpo quimérico cNB7 (a qual será, daqui em diante, de- nominada como cNB7 H) e a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 50) da região variável de cadeia pesada do anticorpo humanizado huNB7 H3 IgG1LALA (a qual será, daqui em diante, denominada como huNB7 H3). Em huNB7 H3,o símbolo "O" representa o mesmo resíduo de aminoácido que o de cNB7 H e um resíduo de aminoácido substitu- ido é mostrado no local onde o resíduo de aminoácido é descrito.

[0101] A Figura 21 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 53) da cadeia leve de huNB7 L3 que inclui a sequência sinaliza- dora do mesmo e que é uma cadeia leve humanizada. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 20 é a sequência sinaliza- dora, a sequência de aminoácidos nas posições 21 a 126 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 127 a 233 é a re- gião constante. Além disso, a sequência de aminoácidos nas posições 44 a 54 é CDRL1, a sequência de aminoácidos nas posições 70 a 76 é CDRL2 e a sequência de aminoácidos nas posições 109 a 116 é CDRL3.

[0102] A Figura 22 mostra a comparação da sequência de aminoá- cidos (SEQ ID NO: 13) da região variável de cCNB7 L, a qual é a cadeia leve do anticorpo quimérico cNB7 (a qual será, daqui em diante, deno- minada como cNB7 L) e a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 51) da região variável de cadeia leve do anticorpo humanizado huNB7 L3 (a qual será, daqui em diante, denominada como huNB7 L3). Em huNB7 L3, o símbolo "DO" representa o mesmo resíduo de aminoácido que o de cNB7 L e um resíduo de aminoácido substituído é mostrado no local onde o resíduo de aminoácido é descrito.

[0103] A Figura 23 é um gráfico que mostra que anticorpos humani- zados TLR7 anti-humano (huATO1 HIL1 IQGILALA, huATO1 H3L1 IQGILALA, huATO1 H3L2 IGGILALA, huATO1 H3L2 IgG4Pro, hunB7 H3L3 IGGI1LALA e hunNB7 H3L3 IgG4Pro) suprimem a produção de IL-6 a partir de PBMCs humanas tratadas com CL-264 de uma maneira dependente da concentração.

[0104] A Figura 24-1 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 17) de CDRH1 do anticorpo ATO1, a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 18) de CDRH2 do mesmo, a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 19) de CDRH3 do mesmo, a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 20) de CDRL1 do mesmo, a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 21) de CDRL? deste e a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 22) de CDRL3 do mesmo. A Figura 24-2 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 23) de CDRH1 do anticorpo NB7, a sequên- cia de aminoácidos (SEQ ID NO: 24) de CDRH2 do mesmo, a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 25) de CDRH3 do mesmo, a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 26) de CDRL1 do mesmo, a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 27) de CDRL?2 deste e a sequência de ami- noácidos (SEQ ID NO: 28) de CDRL3 do mesmo. A Figura 24-3 mostra a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 29) de CDRH1 do anticorpo FAN2, a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 30) de CDRH2 do mesmo, a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 31) de CDRH3 do mesmo, a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 32) de CDRL1 do mesmo, a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 33) de CDRL?2 deste e a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 34) de CDRL3 do mesmo.

[0105] A Figura 25 mostra os resultados de uma análise de citome- tria de fluxo da ligação a um antígeno (TLR7 humano: variante 1) do anticorpo anti-TLR7 humano humanizado (huATO1 H3L2 IQG1LALA) e é um gráfico que mostra a ligação específica ao antígeno.

[0106] A Figura 26 mostra os resultados de uma análise de citome- tria de fluxo da ligação a um antígeno (TLR7 humano: variante 2) do anticorpo anti-TLR7 humano humanizado (huATO1 H3L2 IQG1LALA) e é um gráfico que mostra a ligação específica ao antígeno.

[0107] A Figura 27 mostra os resultados de uma análise de citome- tria de fluxo da ligação a um antígeno (TLR7 de macaco) do anticorpo anti-TLR7 humano humanizado (huATO1 H3L2 IQGILALA) e é um grá- fico que mostra a ligação específica ao antígeno.

[0108] A Figura 28 mostra os resultados de uma análise de citome- tria de fluxo da ligação a um antígeno (TLR7 de camundongo) do anti- corpo anti-TLR7 humano humanizado (huATO1 H3L2 IQGILALA) e é um gráfico que mostra a não ligação ao antígeno.

[0109] A Figura 29 mostra os resultados de uma análise de citome- tria de fluxo da ligação a um antígeno (TLR7 de rato) do anticorpo anti- TLR7 humano humanizado (huATO1 H3L2 IGG1LALA) e é um gráfico que mostra a não ligação ao antígeno. Descrição de Modalidades

[0110] Na presente invenção, o termo "gene" inclui não apenas DNA, mas também mRNA, cDNA e cRNA.

[0111] Na presente invenção, o termo "polinucleotídeo" é usado com o mesmo significado que "ácido nucleico" e também inclui DNA, RNA, sondas, oligonucleotídeos e iniciadores.

[0112] Na presente invenção, os termos "polipeptídeo" e "proteína" são usados sem distinção.

[0113] Na presente invenção, o termo "fração de RNA" significa uma fração que contém RNA.

[0114] Na presente invenção, o termo "células" inclui células em in- divíduos animais e células em cultura.

[0115] Na presente invenção, o termo "TLR7" é usado com o mesmo significado que proteína TLR7.

[0116] Na presente invenção, o termo "fragmento de ligação a antí- geno de um anticorpo" significa um fragmento parcial de um anticorpo que tem atividade de ligação a um antígeno e inclui Fab, F(ab')2, Fv, scF v, diacorpos, anticorpos lineares, anticorpos multiespecíficos forma- dos a partir de fragmentos de anticorpos e assim por diante. Além disso, um fragmento de ligação a antígeno de um anticorpo também inclui Fab', o qual é um fragmento monovalente em uma região variável de um an- ticorpo obtido por meio de tratamento de F(ab')2 sob condições reduti- vas. No entanto, não há limitação para estas moléculas, contanto que o fragmento tenha a capacidade de se ligar a um antígeno. Além disso, o fragmento de ligação a antígeno inclui não apenas aqueles obtidos por meio de tratamento de uma molécula de comprimento total de uma pro- teína de anticorpo com uma enzima adequada, mas também uma pro- teína produzida em uma célula hospedeira adequada usando um gene de anticorpo geneticamente modificado.

[0117] As regiões determinantes de complementaridade (CDRs: Complementarity Determining Regions) são conhecidas por estarem presentes em três pontos em cada uma das cadeias pesada e leve de uma molécula de anticorpo. As regiões determinantes de complemen- taridade, as quais também são denominadas de regiões hipervariáveis, estão presentes nas regiões variáveis das cadeias pesadas e leves de um anticorpo em locais onde a variabilidade da estrutura primária é par- ticularmente alta. Na estrutura primária da cadeia polipeptídica em cada uma das cadeias pesada e leve, as regiões determinantes de comple- mentaridade estão separadamente presentes em três pontos. Em rela- ção às regiões determinantes de complementaridade de um anticorpo,

as regiões determinantes de complementaridade da cadeia pesada são expressas como CDRH1, CDRH2 e CDRH3 a partir do lado amino ter- minal da sequência de aminoácidos da cadeia pesada e as regiões de- terminantes de complementaridade da cadeia leve são expressas como CDRL1, CDRL2 e CDRL3 da partir do lado amino terminal amino da sequência de aminoácidos da cadeia leve na presente invenção. Estes locais são adjacentes uns aos outros na estrutura tridimensional e de- terminam a especificidade do antígeno a ser ligado. Além disso, a se- quência da cadeia de aminoácidos de cada CDR é descrita de acordo com a definição ADM (Martin, A.C.R., Cheetham, J .C. e Rees, A.R. (1989) Proc. Natl Acad. Sci. USA, 86, 9268-9272).

[0118] Na presente invenção, a frase "hibridização sob condições rigorosas" significa hibridização a 68 ºC em uma solução de hibridização comercialmente disponível, ExpressHyb Hybridization Solution (Clon- tech Laboratories, Inc.) ou hibridização sob condições que permitam a hibridização a 68 ºC na presença de NaCl 0,7 a 1,0 M usando um filtro ao qual o DNA é imobilizado e subsequentemente identificado por meio de lavagem a 68 ºC usando uma solução de SSC em uma concentração de 0,1 a 2 vezes (SSC em uma concentração de 1 vez composta por NaCl a 150 mM e citrato de sódio a 15 mM) ou condições equivalentes.

1. TLR7

[0119] O TLR7 humano usado na presente invenção pode ser puri- ficado diretamente a partir de células B humanas ou células dendríticas ou preparado ao ajustar as frações da membrana celular das células supracitadas para uso. Além disso, o TLR7 humano pode ser obtido por meio de síntese in vitro ou produção em células hospedeiras através de engenharia genética. Na engenharia genética, o TLR7 humano é ex- presso especificamente ao ser integrado em um vetor capaz de expres- sar o CDNA do TLR7 humano, seguido por síntese em uma solução que contém enzimas, substratos e substâncias energéticas que são neces- sárias para a transcrição e tradução ou o TLR7 humano é expresso por meio de transformação de células hospedeiras de outros procariotas ou eucariotas, de modo que tal proteína possa ser obtida.

[0120] Da mesma forma, TLR7 de macaco, TLR7 de camundongo e TLR7 de rato podem ser purificados diretamente a partir de células de macacos, camundongos e ratos que expressam TLR7, respectiva- mente, e usados ou preparados ao ajustar as frações de membrana ce- lular das células supracitadas para uso. Além disso, TLR7 de macaco, TLR7 de camundongo e TLR7 de rato podem ser obtidos por meio de síntese in vitro ou produção em células hospedeiras através de enge- nharia genética.

[0121] As sequências polinucleotídicas que codificam as sequên- cias de aminoácidos do TLR7 humano (variante 1) e TLR7 humano (va- riante 2) são apresentadas em SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 3, respec- tivamente, na Listagem de Sequências e as sequências de aminoácidos do TLR7 humano (variante 1) e TLR7 humano (variante 2) são apresen- tados em SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 4, respectivamente, na Listagem de Sequências.

[0122] O cDNA de TLR7 humano pode ser obtido, por exemplo, através do assim denominado método de PCR, com reação em cadeia da polimerase (a qual será, daqui em diante, denominada como "PCR") (Saiki, RK, et al., Science, (1988) 239, 487-49) usando uma biblioteca de cDNA de um órgão que expressa o MRNA de TLR7 humano como um modelo e um iniciador que amplifica especificamente o cDNA de TLR7 humano.

[0123] O cDNA de TLR7 humano também inclui um polinucleotídeo que hibridiza com um polinucleotídeo que consiste em uma sequência de nucleotídeos complementar à sequência de nucleotídeos que codi- fica o TLR7 humano sob condições rigorosas e codifica uma proteína que tem uma atividade biológica equivalente ao TLR7 humano. Além disso, o CDONA do TLR7 humano também inclui uma variante de emenda (splicing) transcrita a partir do locus do gene de TLR7 humano ou um polinucleotídeo que hibridiza com a variante de emenda (splicing) sob condições rigorosas e codifica uma proteína que tem uma atividade bi- ológica equivalente ao TLR7 humano.

[0124] Além disso, o TLR7 humano também inclui uma proteína que consiste na sequência de aminoácidos de TLR 7 humano ou a sequência de aminoácidos excluindo a sequência sinalizadora com um, dois, três, quatro ou cinco aminoácidos substituídos, eliminados ou adicionados e tem uma atividade equivalente ao TLR7 humano. Além disso, o TLR7 humano também inclui uma proteína que consiste na sequência de ami- noácidos codificada pela variante de emenda (splicing) transcrita a partir do locus do gene de TLR7 humano ou a sequência de aminoácidos com um, dois, três, quatro ou cinco aminoácidos substituídos, eliminados ou adicionados e tem uma atividade biológica equivalente ao TLR7 hu- mano.

[0125] A sequência de polinucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos de TLR7 de macaco é apresentada em SEQ ID NO: 58 na Listagem de Sequências e a sequência de aminoácidos de TLR7 de macaco é apresentada em SEQ ID NO: 85 na Listagem de Sequências.

[0126] O cDNA de TLR7 de macaco pode ser obtido, por exemplo, por meio do método de PCR usando uma biblioteca de cCDNA de um órgão que expressa o MRNA de TLR7 de macaco como um modelo e um iniciador que amplifica especificamente o cDNA de TLR7 de ma- caco.

[0127] O cDNA de TLR7 de macaco também inclui um polinucleotí- deo que hibridiza com um polinucleotídeo que consiste em uma sequên- cia de nucleotídeos complementar à sequência de nucleotídeos que co-

difica o TLR7 de macaco sob condições rigorosas e codifica uma prote- Ína que tem uma atividade biológica equivalente ao TLR7 de macaco. Além disso, o CDNA de TLR7 de macaco também inclui uma variante de emenda (splicing) transcrita a partir do locus do gene de TLR7 de ma- caco ou um polinucleotídeo que hibridiza com a variante de emenda (splicing) sob condições rigorosas e codifica uma proteína que tem uma atividade biológica equivalente ao TLR7 de macaco.

[0128] Além disso, o TLR7 de macaco também inclui uma proteína que consiste na sequência de aminoácidos de TLR7 de macaco ou a sequência de aminoácidos excluindo a sequência sinalizadora com um, dois, três, quatro ou cinco aminoácidos substituídos, eliminados ou adi- cionados e tem uma atividade equivalente ao TLR7 de macaco. Além disso, o TLR7 de macaco também inclui uma proteína que consiste na sequência de aminoácidos codificada pela variante de emenda (spli- cing) transcrita a partir do locus do gene de TLR7 de macaco ou a se- quência de aminoácidos com um, dois, três, quatro ou cinco aminoáci- dos substituídos, eliminados ou adicionados e tem uma atividade bioló- gica equivalente ao macaco TLR7.

[0129] A sequência de polinucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos de TLR7 de macaco é apresentada em SEQ ID NO: 58 na Listagem de Sequências e a sequência de aminoácidos de TLR7 de macaco é apresentada em SEQ ID NO: 85 na Listagem de Sequências.

[0130] O cDNA de TLR7 de macaco pode ser obtido, por exemplo, por meio do método de PCR usando uma biblioteca de cCDNA de um órgão que expressa o MRNA de TLR7 de macaco como um modelo e um iniciador que amplifica especificamente o cDNA de TLR7 de ma- caco.

[0131] A sequência de polinucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos de TLR7 de camundongo é apresentada em SEQ ID NO: 56 na Listagem de Sequências e a sequência de aminoácidos de TLR7 de camundongo é apresentada em SEQ ID NO: 83 na Listagem de Se- quências.

[0132] O cDNA de TLR7 de camundongo pode ser obtido, por exemplo, por meio do método de PCR usando uma biblioteca de CDNA de um órgão que expressa o MRNA de TLR7 de camundongo como um modelo e um iniciador que amplifica especificamente o cDNA de TLR7 de camundongo.

[0133] A sequência de polinucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos de TLR7 de rato é apresentada em SEQ ID NO: 57 na Lis- tagem de Sequências e a sequência de aminoácidos de TLR7 de rato é apresentada em SEQ ID NO: 84 na Listagem de Sequências.

[0134] O cDNA de TLR7 de rato pode ser obtido, por exemplo, por meio do método de PCR usando uma biblioteca de cCDNA de um órgão que expressa o MRNA de TLR7 de rato como um modelo e um iniciador que amplifica especificamente o cDNA de TLR7 de rato.

2. Anticorpo Anti-TLR7 e Produção do Mesmo

[0135] A presente invenção fornece um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anticorpo que tem as propriedades de: (a) ligação específica ao TLR7 humano ou TLR7 de macaco e ausência de ligação ao TLR7 de camundongo ou TLR7 de rato; e (b) inibição de uma função do TLR7 humano ou TLR7 de ma- caco.

[0136] O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anticorpo da presente invenção se liga especificamente ao TLR7 humano ou TLR7 de macaco e inibe as funções dos mesmos.

[0137] A atividade de ligação do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anticorpo anti-TLR7 é avaliada por meio de análise de citometria de fluxo de acordo com um método convencional.

[0138] Na presente invenção, inibição de uma função do TLR7 sig- nifica suprimir a produção de IL-6 e/ou interferon de tipo | por células que expressam TLR7. A atividade de inibição de uma função do TLR7 é avaliada ao incubar células que expressam TLR7 (por exemplo, PBMCs) in vitro na presença do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anticorpo e medir a concentração de IL-6 ou interferon de tipo | no sobrenadante de cultura.

[0139] Em uma modalidade da presente invenção, o TLR7 humano é uma molécula que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 4, o TLR7 de macaco é uma molécula que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 85, o TLR7 de camundongo é uma molécula que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 83 ou o TLR7 de rato é uma molécula que consiste na sequência de aminoáci- dos apresentada em SEQ ID NO: 84. Por exemplo, o TLR7 humano pode ser uma molécula que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 4, o TLR7 de macaco pode ser uma molécula que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 85, o TLR7 de camundongo pode ser uma molécula que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 83 e o TLR7 de rato pode ser uma molécula que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 84 na pre- sente invenção.

[0140] Por exemplo, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anticorpo da presente invenção pode ser um anticorpo anti-TLR7 hu- mano ou um fragmento de ligação a antígeno do anticorpo que tem as propriedades de: (a) ligação específica ao TLR7 humano e ausência de liga- ção ao TLR7 de camundongo e/ou TLR7 de rato; e (b) inibição de uma função do TLR7 humano, em que o TLR7 humano é uma molécula que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 4, o TLR7 de camun- dongo é uma molécula que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 83 e o TLR7 de rato é uma molécula que con- siste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 84.

[0141] Por exemplo, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anticorpo da presente invenção pode ser um anticorpo anti-TLR 7 de macaco ou um fragmento de ligação a antígeno do anticorpo que tem as propriedades de: (a) ligação específica ao TLR7 de macaco e ausência de |i- gação ao TLR7 de camundongo e/ou TLR7 de rato; e (b) inibição de uma função do TLR7 de macaco, em que o TLR7 de macaco é uma molécula que consiste na sequência de amino- ácidos apresentada em SEQ ID NO: 85, o TLR7 de camundongo é uma molécula que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 83 e o TLR7 de rato é uma molécula que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 84.

[0142] Daqui em diante, o anticorpo anti-TLR7 da presente inven- ção e um método de produção do mesmo são descritos com referência ao caso do anticorpo anti-TLR7 humano como um exemplo. O anticorpo anti-TLR7 de macaco também pode ser produzido da mesma maneira que o método de produção do anticorpo anti-TLR7 humano.

[0143] O anticorpo anti-TLR7 humano da presente invenção pode ser obtido ao imunizar um animal com TLR7 humano ou qualquer poli- peptídeo selecionado a partir da sequência de aminoácidos de TLR7 humano e coletar e purificar o anticorpo produzido in vivo usando méto- dos convencionais.

[0144] O TLR7 humano que serve como um antígeno pode ser ob- tido por meio de expressão de um gene de TLR7 humano em uma célula hospedeira através de engenharia genética. Especificamente, um vetor capaz de expressar o gene de TLR7 pode ser preparado e introduzido em uma célula hospedeira para expressar o gene e o TLR7 expresso pode ser purificado.

[0145] O anticorpo anti-TLR7 humano da presente invenção tam- bém pode ser obtido por meio de imunização com DNA. A imunização com DNA é uma técnica para induzir à imunidade a um antígeno através de transfecção de um plasmídeo que expressa o antígeno em um indi- víduo animal, tal como um camundongo ou um rato, deste modo, permi- tindo que o indivíduo expresse o antígeno.

[0146] Exemplos da técnica de transfecção incluem um método de injeção direta do plasmídeo em um músculo, um método de injeção de um conjugado do plasmídeo com um lipossoma, polietilenoimina ou si- milar em uma veia, uma técnica que usa vetores virais, uma técnica de injeção de partículas de ouro com o plasmídeo preso usando uma Pis- tola Gênica e um método hidrodinâmico de injetar rapidamente uma grande quantidade de uma solução do plasmídeo em uma veia.

[0147] Para melhorar o nível de expressão no método de transfec- ção através de injeção intramuscular do plasmídeo de expressão, uma técnica de injeção intramuscular do plasmídeo e, posteriormente, apli- cação de eletroporação no mesmo local (Aihara H, Miyazaki). Nat Bio- technol. Setembro de 1998; 16 (9): 867-70 ou Mir L.M., Bureau M.F., Gehl )., Rangara R., Rouy D., Caillaud J .M., Delaere P., Branellec D., Schwartz B., Scherman D. Proc Natl Acad Sci USA. 13 de abril de 1999; 96 (8): 4262-7) é conhecido como eletroporação in vivo. Nesta técnica, o nível de expressão é ainda mais aprimorado por meio de tratamento de um músculo com hialuronidase antes de injeção intramuscular do plasmídeo (McMahon) .M,,Signori E., Wells K.E., Fazio V.M., Wells DJ. Gene Ther. Agosto de 2001; 8 (16): 1264 -70).

[0148] Além disso, um anticorpo monoclonal também pode ser ob- tido, de acordo com um método conhecido (por exemplo, Kohler e Mils- tein, Nature (1975) 256, páginas 495-497, Kennet, R. ed., Monoclonal

Antibodies, páginas 365-367, Plenum Press, NY (1980)), por meio de fusão de uma célula produtora de anticorpos que produz um anticorpo anti-TLR7 com uma célula de mieloma para estabelecer um hibridoma. Exemplos específicos de tal método incluem aqueles descritos na publi- cação internacional Nº WO 09/48072 (publicada em 16 de abril de 2009) e na Publicação Internacional Nº WO 10/117011 (publicada em 14 de outubro de 2010).

[0149] Exemplos do anticorpo anti-TLR7 humano de camundongo apresentado conforme acima podem incluir o anticorpo ATO1, o anti- corpo NB7 e o anticorpo FAN?2.

[0150] A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada do anticorpo ATO1 é apresentada em SEQ ID NO: 5 na Listagem de Sequências e a sequência de polinucleotídeos que codifica a se- quência de aminoácidos é apresentada em SEQ ID NO: 6 na Sequência Listagem. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pe- sada do anticorpo NB7 é apresentada em SEQ ID NO: 7 na Listagem de Sequências e a sequência de polinucleotídeos que codifica a se- quência de aminoácidos é apresentada em SEQ ID NO: 8 na Sequência Listagem. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pe- sada do anticorpo FAN2 é apresentada em SEQ ID NO: 9 na Listagem de Sequências e a sequência de polinucleotídeos que codifica a se- quência de aminoácidos é apresentada em SEQ ID NO: 10 na Sequên- cia Listagem.

[0151] Além disso, a sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve do anticorpo ATO1 é apresentada em SEQ ID NO: 11 na Listagem de Sequências e a sequência de polinucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos é apresentada em SEQ ID NO: 12 ema listagem de sequência. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve do anticorpo NB7 é apresentada em SEQ ID NO: 13 na Listagem de Sequências e a sequência de polinucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos é apresentada em SEQ ID NO: 14 na Se- quência Listagem. A sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve do anticorpo FAN? é apresentada em SEQ ID NO: 15 na Listagem de Sequências e a sequência de polinucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos é apresentada em SEQ ID NO: 16 na Se- quência Listagem.

[0152] A região variável de cadeia pesada do anticorpo ATO1 com- preende CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 17 (GYTFTNNWLH), CDRH2 que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 (DIYPSN- GRTN) e CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 19 (ERGYFDY). Além disso, a região variável de cadeia leve do anticorpo compreende CDRL1 que consiste na sequên- cia de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20 (KASQDINKYIA), CDRL?2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 21 (YTSTLQP) e CDRL3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 22 (LQYDYLLT). As sequên- cias de aminoácidos das CDRs supracitadas são mostradas também na Figura 24-1.

[0153] A região variável de cadeia pesada do anticorpo NB7 com- preende CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 23 (GYSITSDYAWN), CDRH2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 24 (HIS- YRGNTN) e CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 25 (WNYYGYVDYAMDY). Além disso, a região variável de cadeia leve do anticorpo compreende CDRL1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 26 (RAS- QDISNYLN), CDRL?2 que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 27 (YTSRLHS) e CDRL3 que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 28 (QQGDTFPT).

As sequências de aminoácidos das CDRs supracitadas são mostradas também na Figura 24-2.

[0154] A região variável de cadeia pesada do anticorpo FAN2 com- preende CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 29 (GFSLTGYGVN), CDRH2 que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 30 (MIWGD- GSTD) e CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 31 (DKGYDGYYYAMDY). Além disso, a região variável de cadeia leve do anticorpo compreende CDRL1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 32 (RASE- NIYSYLA), CDRL?2 que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 33 (DAKTLAE) e CDRL3 que consiste na sequên- cia de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 34 (QHHYGIPYT). As sequências de aminoácidos das CDRs supracitadas são mostradas também na Figura 24-3.

[0155] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do anticorpo da presente invenção pode ter uma atividade inibidora competitiva pela ligação ao TLR7 humano com um anticorpo que compreende as sequências de aminoácidos da região variável de cadeia pesada e da região variável de cadeia do anticorpo ATO1, anti- corpo NB7 ou anticorpo FAN2.

[0156] Em outra modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anticorpo da presente invenção pode ser um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anticorpo que compreende CDRH1 à CDRH3 do anticorpo ATO1 como regiões determinantes de comple- mentaridade na cadeia pesada e CDRL1 à CDRL3 do anticorpo ATO1 como regiões determinantes de complementaridade na cadeia leve, um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do anticorpo que com- preende CDRH1 à CDRH3 do anticorpo NB7 como regiões determinan-

tes de complementaridade na cadeia pesada e CDRL1 à CDRL3 do an- ticorpo NB7 como regiões determinantes de complementaridade na ca- deia leve ou um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do anticorpo que compreende CDRH1 à CDRH3 do anticorpo FAN2 como regiões determinantes de complementaridade na cadeia pesada e CDRL1 à CDRL3 do anticorpo FAN2 como regiões determinantes de complementaridade na cadeia leve. Em um aspecto preferido, o anti- corpo ou fragmento de ligação a antígeno do anticorpo da presente in- venção pode ser um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anticorpo que compreende CDRH1 à CDRH3 do anticorpo ATO1 como regiões determinantes de complementaridade na cadeia pesada e CDRL1 à CDRL3 do anticorpo ATO1 como regiões determinantes de complementaridade na cadeia leve.

[0157] Em ainda outra modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do anticorpo da presente invenção pode ser um an- ticorpo que compreende as sequências da região variável de cadeia pe- sada e da região variável de cadeia leve do anticorpo ATO1, anticorpo NB7 ou anticorpo FAN2?2.

[0158] O anticorpo da presente invenção inclui anticorpos recombi- nantes artificialmente modificados com a finalidade de reduzir a hetero- antigenicidade para seres humanos e assim por diante, tais como anti- corpos quiméricos, anticorpos humanizados e anticorpos humanos, além dos anticorpos monoclonais anti-TLR7 humano supracitados. Es- tes anticorpos podem ser produzidos usando métodos conhecidos.

[0159] Exemplos de anticorpos quiméricos podem incluir um anti- corpo no qual a região variável e a região constante do anticorpo são heterogêneas entre si, tal como um anticorpo quimérico que tem uma região variável de um anticorpo derivado de camundongo ou rato unido a uma região constante derivada de anticorpo humano (consulte Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 6851-6855, (1984)). Exemplos de anticorpo quimérico de camundongo anti-TLR7 humano (anticorpo ATO1) podem incluir um anticorpo que consiste em uma cadeia pesada que compre- ende uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 e uma cadeia leve que compreende uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO: 11. Exemplos do anticorpo quimérico derivado de anticorpo ATO1 podem incluir um anticorpo que consiste em uma ca- deia pesada que consiste na sequência de aminoácidos nas posições a 465 em SEQ ID NO: 35 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 em SEQ ID NO: 36. Na presente invenção, tal anticorpo é denominado como "cATO1" ou "anticorpo cATO1".

[0160] Além disso, exemplos do anticorpo quimérico derivado de anticorpo anti-TLR7 humano de camundongo (anticorpo NB7) podem incluir um anticorpo que consiste em uma cadeia pesada que compre- ende uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 e um cadeia que compreende uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoáci- dos de SEQ ID NO: 13. Exemplos do anticorpo quimérico derivado de anticorpo NB7 podem incluir um anticorpo que consiste em uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 471 em SEQ ID NO: 37 e uma cadeia leve que consiste de uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 em SEQ ID NO: 38. Na presente invenção, tal anticorpo é denominado como "cNB7" ou "an- ticorpo cNB7".

[0161] Além disso, exemplos do anticorpo quimérico derivado de anticorpo anti-TLR7 humano de camundongo (anticorpo FAN2) podem incluir um anticorpo que consiste em uma cadeia pesada que compre- ende uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 9 e um cadeia que compreende uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoáci- dos de SEQ ID NO: 15. Exemplos do anticorpo quimérico derivado de anticorpo FAN2 podem incluir um anticorpo que consiste em uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições a 470 em SEQ ID NO: 39 e uma cadeia leve que consiste de uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 234 em SEQ ID NO: 40. Na presente invenção, tal anticorpo é denominado como "cFAN2" ou "anticorpo cFAN2".

[0162] Os anticorpos humanizados que são anticorpos recombinan- tes podem ser produzidos pela modificação artificial das sequências dos anticorpos quiméricos anti-TLR7 humano supracitados com a finalidade de reduzir a heteroantigenicidade para seres humanos e assim por di- ante. Além disso, o anticorpo da presente invenção inclui anticorpos com CDRs modificadas dos anticorpos humanizados. Estes anticorpos podem ser produzidos usando métodos conhecidos.

[0163] Exemplos de anticorpos humanizados podem incluir um an- ticorpo com apenas as CDRs integradas em um anticorpo derivado de ser humano (consulte Nature (1986) 321, páginas 522-525) e um anti- corpo não apenas as sequências de CDRs, mas também os resíduos de aminoácido de algumas partes da região estrutural enxertada em um anticorpo humano (Publicação Internacional Nº WO 90/07861).

[0164] Por exemplo, os anticorpos humanizados derivados do anti- corpo cATO1 e do anticorpo cNB7 retêm todas as 6 sequências de CDR derivadas de cATO1 ou cNB7 e têm a atividade de inibição de uma fun- ção do TLR7 humano.

[0165] Casos adequados dos anticorpos humanizados supracitados podem incluir anticorpos humanizados derivados do anticorpo cATO1 (anticorpos huATO1), tais como: um anticorpo que consiste em uma ca- deia pesada que compreende uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID

NO: 41 e uma cadeia leve que compreende uma região variável de ca- deia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43; um anticorpo que consiste em uma cadeia pesada que compreende uma região variável de cadeia pesada que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 41 e uma cadeia leve que compreende uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44; um an- ticorpo que consiste em uma cadeia pesada que compreende uma re- gião variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoá- cidos apresentada em SEQ ID NO: 42 e uma cadeia leve que compre- ende uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43; e um anticorpo que con- siste em uma cadeia pesada que compreende uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42 e uma cadeia leve que compreende uma região va- riável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 44.

[0166] Além disso, um anticorpo que tem uma atividade equivalente aos anticorpos huATO1 supracitados pode ser selecionado ao combinar sequências que exibem alta homologia com a sequência de aminoáci- dos da região variável de cadeia pesada e a sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve do anticorpo huATO1 supracitado, res- pectivamente. A homologia é, em geral, uma homologia de 80 % ou mais, de preferência uma homologia de 90 % ou mais, mais preferivel- mente uma homologia de 95 % ou mais, ainda mais preferivelmente uma homologia de 99 % ou mais (no entanto, as CDRs são as mesmas conforme nos anticorpos supracitados). Além disso, um anticorpo que tem uma atividade equivalente aos anticorpos supracitados também pode ser selecionado ao combinar uma sequência de aminoácidos com um a vários (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) resíduos de ami- noácidos substituídos, eliminados ou adicionados na sequência de ami- noácidos da região variável de cadeia pesada ou da região variável de cadeia leve (no entanto, excluindo os locais das CDRs).

[0167] Outros casos adequados podem incluir: um anticorpo que consiste em uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoá- cidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 45 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 48; um anticorpo que consiste em uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 45 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos nas posi- ções 21 a 233 no aminoácido sequência apresentada em SEQ ID NO: 49; um anticorpo que consiste em uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que con- siste na sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 no aminoá- cido sequência apresentada em SEQ ID NO: 48; um anticorpo que con- siste em uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que consiste na sequência de ami- noácidos nas posições 21 a 233 no aminoácido sequência apresentada em SEQ ID NO: 49; um anticorpo que consiste em uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 20 a 462 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 47 e uma ca- deia leve que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 no aminoácido sequência apresentada em SEQ ID NO: 48; ou um anticorpo que consiste em uma cadeia pesada que consiste na sequên- cia de aminoácidos nas posições 20 a 462 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 47 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 no aminoácido se- quência de ácido apresentada em SEQ ID NO: 49.

[0168] Além disso, exemplos do anticorpo humanizado derivado do anticorpo cNB7 (anticorpo huNB7) podem incluir um anticorpo que con- siste em uma cadeia pesada que compreende uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50 e uma cadeia leve que compreende uma região variável de ca- deia que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 51.

[0169] Além disso, um anticorpo que tem uma atividade equivalente ao anticorpo huNB7 supracitado pode ser selecionado ao combinar se- quências que exibem alta homologia com a sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada e a sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve do anticorpo huNB7 supracitado. A ho- mologia é, em geral, uma homologia de 80 % ou mais, de preferência uma homologia de 90 % ou mais, mais preferivelmente uma homologia de 95 % ou mais, ainda mais preferivelmente uma homologia de 99 % ou mais (no entanto, as CDRs são as mesmas conforme nos anticorpos supracitados). Além disso, um anticorpo que tem uma atividade equiva- lente ao anticorpo supracitado também pode ser selecionado ao combi- nar uma sequência de aminoácidos com um a vários (por exemplo, 2, 3,4,5,6,7,8,9 ou 10) resíduos de aminoácidos substituídos, elimina- dos ou adicionados na sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada ou da região variável de cadeia leve (no entanto, exclu- indo os locais das CDRs).

[0170] Outros casos adequados podem incluir: um anticorpo que consiste em uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoá- cidos nas posições 20 a 471 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 52 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 53; ou um anticorpo que consiste em uma ca- deia pesada que consiste na sequência de aminoácidos nas posições a 468 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 54 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos nas posi- ções 21 a 233 no aminoácido sequência de ácido apresentada em SEQ ID NO: 53.

[0171] O anticorpo da presente invenção pode ser obtido através da introdução de mais mutação nos anticorpos humanizados supracitados para alterar a capacidade de ligação em relação ao TLR7 humano. Esta técnica é denominada de maturação por afinidade e exemplos específi- cos da mesma podem incluir o método de exibição em ribossomos. O método de exibição em ribossomos é um método de isolamento de uma sequência gênica de uma proteína que se liga a uma molécula alvo usando um complexo tripartido no qual a proteína e o MRNA que trans- porta a informação genética da proteína são unidos por meio de ribos- somos (Stafford R.L. et al. Protein Eng. Des. Sel. 2014 (4): 97-109).

[0172] A fim de evitar lesões em células que expressam TLR7 hu- mano normais, o anticorpo tem, desejavelmente, baixa atividade efe- tora. A atividade efetora é conhecida por diferir dependendo da sub- classe do anticorpo. Por exemplo, uma característica do I9G4 é que ele tem baixas atividades de ADCC e CDC e uma característica do I9G2 é que ele tem atividade de CDC, embora tenha baixa atividade de ADCC. Com base em tais características, um anticorpo com atividades de ADCC e CDC reduzidas pode ser produzido ao substituir a região cons- tante de IQG1 pela região constante de I9G2 ou IgG4. Além disso, um anticorpo IgG 1 que tem atividades de ADCC e CDC reduzidas pode ser produzido ao substituir parcialmente a sequência da região constante de I9gG1 com referência a IgG2 ou I9G4. Como um exemplo, Marjan He- zareh et. al. | ournal of Virology, 75 (24): 12161-12168 (2001) mostraram que as atividades de ADCC e CDC são reduzidas ao substituir os resí- duos de leucina 234 e 235 (os números representam os Índices EU de Kabat et al.) de IQG1, respectivamente, por resíduos de alanina.

[0173] A presente invenção inclui formas modificadas do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anticorpo. Formas modificadas significam aquelas formadas através de modificação química ou bioló- gica do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anticorpo da presente invenção. As formas quimicamente modificadas incluem for- mas quimicamente modificadas de cadeias de carboidratos através de ligação de uma porção química à estrutura do aminoácido, N-ligação ou O-ligação. As formas biologicamente modificadas incluem aquelas mo- dificadas após a tradução (por exemplo, através de glicosilação para N- ligação ou O-ligação, processamento N-terminal ou C-terminal, desami- dação, isomerização de ácido aspártico e oxidação de metionina) e aqueles com um resíduo de metionina adicionado ao N-término por meio de expressão usando células hospedeiras procariotas. Além disso, o significado dos produtos modificados também inclui aqueles marcados para permitir a detecção ou isolamento do anticorpo da presente inven- ção ou antígeno, tais como anticorpos marcados com enzima, anticor- pos marcados com fluorescência e anticorpos marcados por afinidade. Estes produtos modificados do anticorpo ou fragmento de ligação a an- tígeno do anticorpo da presente invenção são úteis para melhorar a es- tabilidade e a retenção sanguínea do anticorpo original da presente in- venção, reduzir a antigenicidade e detectar ou isolar o anticorpo ou an- tígeno.

[0174] É sabido que um resíduo de lisina no terminal carboxila da cadeia pesada de anticorpos produzidos em células de mamíferos em cultura é eliminado (/ournal of Chromatography A, 705: 129-134 (1995)). Além disso, também é sabido que dois resíduos de aminoáci- dos, glicina e lisina, no terminal carboxila da mesma cadeia pesada são eliminados e um resíduo de prolina localizado no terminal carboxila é amidado (Analytical Biochemistry, 360: 75-83 (2007)).

[0175] No entanto, tais eliminações e modificações da sequência da cadeia pesada não têm influência sobre a capacidade de ligação a an- tígeno e as funções efetoras (tais como ativação do complemento e ci- totoxicidade celular dependente de anticorpo) do anticorpo.

[0176] Consequentemente, exemplos de formas modificadas do an- ticorpo e do fragmento de ligação a antígeno do anticorpo da presente invenção podem incluir: variantes com eliminação que têm um ou dois aminoácidos eliminados no terminal carboxila da cadeia pesada; e vari- antes com eliminação amidadas (tal como uma cadeia pesada com um resíduo de prolina amidado na parte do terminal carboxila). No entanto, as variantes com eliminação no terminal carboxila da cadeia pesada do anticorpo de acordo com a presente invenção não estão limitadas aos tipos supracitados, contanto que a capacidade de ligação a antígeno e as funções efetoras sejam mantidas.

[0177] Duas cadeias pesadas que constituem o anticorpo de acordo com a presente invenção podem ser uma combinação de qualquer um ou dois tipos de cadeias pesadas selecionadas a partir do grupo que consiste na variante de comprimento total e variantes com eliminação supracitadas. A proporção quantitativa das variantes com eliminação pode ser afetada pelo tipo de células de mamífero cultivadas e condi- ções de cultura para a produção do anticorpo de acordo com a presente invenção, porém, exemplos do componente principal do anticorpo de acordo com a presente invenção podem incluir um componente que tem um resíduo de aminoácido eliminado no terminal carboxila em cada uma das duas cadeias pesadas. Isto é, cadeias pesadas que consistem em sequências de aminoácidos com um ou dois aminoácidos eliminados no terminal carboxila de cada sequência de cadeia pesada representada por uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 em SEQ ID

NO: 35, uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 471 em SEQ ID NO: 37, uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 470 em SEQ ID NO: 39, uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 em SEQ ID NO: 45, uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 em SEQ ID NO: 46, uma sequência de aminoácidos nas posições a 462 em SEQ ID NO: 47, uma sequência de aminoácidos nas posi- ções 20 a 471 em SEQ ID NO: 52 e uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 468 em SEQ ID NO: 54, na Listagem de Sequências, também pode ser usada para o anticorpo da presente invenção.

[0178] Os anticorpos obtidos por meio dos métodos supracitados são avaliados quanto à sua propriedade de ligação em relação a um antígeno, de modo que um anticorpo adequado possa ser selecionado a partir dos mesmos. Outro indicador para comparar as propriedades dos anticorpos pode ser a estabilidade dos anticorpos, por exemplo. Ca- lorimetria de varredura diferencial (DSC) é um método que permite a medição rápida e precisa do ponto médio de desnaturação térmica (Tm), o qual é um bom indicador da estabilidade estrutural relativa das prote- Ínas. As diferenças na termoestabilidade podem ser comparadas ao me- dir os valores de Tm usando DSC e comparar os valores. Sabe-se que a estabilidade ao armazenamento de anticorpos mostra alguma corre- lação com a termoestabilidade de anticorpos (Lori Burton, et al., Phar- maceutical Development and Technology (2007) 12, páginas 265-273) e um anticorpo adequado pode ser selecionado usando a termoestabi- lidade como indicador. Exemplos de outros indicadores para selecionar um anticorpo podem incluir alto rendimento em uma célula hospedeira adequada e baixa agregabilidade em uma solução aquosa. Uma vez que o anticorpo, por exemplo, que tem o rendimento mais alto não mos- tra necessariamente a maior termoestabilidade, uma determinação abrangente precisa ser feita com base nos indicadores supracitados para selecionar um anticorpo que seja mais adequado para administra- ção a seres humanos.

[0179] Além disso, um método de obtenção de uma imunoglobulina com uma única cadeia ligando as sequências de comprimento total das cadeias pesadas e leves de um anticorpo usando um ligante adequado também é conhecido (Lee, H.S., et al., Molecular Immunology (1999) 36, páginas 61-71; Schirrmann, T. et al,, mAbs (2010), 2, (1) páginas 73-76). Tal imunoglobulina com uma única cadeia é dimerizada e, por- tanto, pode manter uma estrutura e uma atividade que são similares àqgielas de um anticorpo que era originalmente um tetrâmero. Além disso, o anticorpo da presente invenção pode ser um anticorpo que com- preende uma única região variável de cadeia pesada e nenhuma se- quência de cadeia leve. Tal anticorpo é denominado anticorpo com um único domínio (sdAb), ou nanocorpo, e é relatado como realmente ob- servado em camelos ou lhamas e retém a capacidade de ligação a an- tígeno (Muyldermans S. et al., Protein Eng. (1994) 7 (9), 1129-35, Ha- mers-Casterman C. et al., Nature (1993) 363 (6428) 446-8). O anticorpo supracitado também pode ser entendido como um tipo de fragmento de ligação a antígeno do anticorpo da presente invenção.

[0180] Além disso, a citotoxicidade celular dependente de anticor- pos pode ser aumentada ao ajustar a glicosilação ligada ao anticorpo da presente invenção. Publicação internacional Nº WO 99/54342, Publi- cação Internacional Nº WO 00/61739, Publicação Internacional Nº WO 02/31140, Publicação Internacional Nº WO 2007/133855, Publicação |In- ternacional Nº WO 2013/120066 e assim por diante são conhecidas como técnicas para ajustar a glicosilação de anticorpos, mas não há limitação para as mesmas.

[0181] No caso da produção de um anticorpo ao isolar um gene de anticorpo uma vez e depois introduzi-lo em uma célula hospedeira ade- quada, uma combinação de tal célula hospedeira adequada e um vetor de expressão pode ser usada.

[0182] Exemplos específicos do gene do anticorpo podem incluir uma combinação de um gene que codifica a sequência da cadeia pe- sada e um gene que codifica a sequência da cadeia leve dos anticorpos no presente relatório descritivo. Mais especificamente, exemplos do gene do anticorpo podem incluir uma combinação de um polinucleotídeo que compreende uma sequência de polinucleotídeos que codifica o an- ticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do anticorpo da presente invenção, um polinucleotídeo que compreende uma sequência de poli- nucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos do região variá- vel de cadeia do anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do an- ticorpo da presente invenção e um polinucleotídeo que compreende uma sequência de polinucleotídeos que codifica a sequência de amino- ácidos da região variável de cadeia leve do anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno de o anticorpo da presente invenção. O gene da se- quência da cadeia pesada que constitui o gene do anticorpo também inclui um polinucleotídeo que compreende uma sequência de polinucle- otídeos de um polinucleotídeo que hibridiza com um polinucleotídeo que consiste em uma sequência de polinucleotídeos complementar à se- quência de polinucleotídeos supracitada que codifica a região variável de cadeia pesada sob condições rigorosas. Além disso, o gene da se- quência de cadeia leve que constitui o gene do anticorpo também inclui um polinucleotídeo que compreende uma sequência de polinucleotí- deos de um polinucleotídeo que hibridiza com um polinucleotídeo que consiste em uma sequência de polinucleotídeos complementar à se- quência de polinucleotídeos supracitada que codifica a região variável de cadeia leve sob condições rigorosas.

[0183] Ao transformar a célula hospedeira, o gene da sequência da cadeia pesada e o gene da sequência da cadeia leve podem ser inseri-

dos no mesmo vetor de expressão ou em vetores de expressão separa- dos. No caso de usar uma célula eucariota como célula hospedeira, po- dem ser usadas células animais, células vegetais e micro-organismos eucariotas. Exemplos de células animais podem incluir (1) células de mamíferos, tais como células COS (Gluzman, Y . Cell (1981) 23, páginas 175-182, ATCC CRL-1650), as quais são células de macaco e linhagens deficientes na enzima di-hidrofolato redutase (Urlaub, G. e Chasin, L.A. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1980) 77, páginas 4126-4220) de fibroblas- tos de camundongo NIH3T3 (ATCC Nº CRL-1658) e células de ovário de hamster Chinês (células CHO, ATCC CCL-61). Além disso, no caso do uso de células procariotas, exemplos podem incluir Escherichia coli e Bacillus subtilis. Um anticorpo é obtido por meio da introdução de um gene de anticorpo alvo em tal célula através de transformação e cultura da célula transformada in vitro. Uma vez que o rendimento pode diferir dependendo da sequência do anticorpo no método de cultura supraci- tado, aqueles facilmente produzidos como produtos farmacêuticos po- dem ser selecionados dentre os anticorpos que têm a mesma atividade de ligação usando o rendimento como um indicador.

[0184] Não há limitação quanto ao isotipo do anticorpo da presente invenção e exemplos do mesmo podem incluir IgG (IgG1,1gG2,19G3 e I9G4), IGM, IgA (I9A1 e IgA2), IgD ou IgE, de preferência IgG ou IgM, ainda mais preferivelmente IgG1 ou I9G4.

[0185] Além disso, o anticorpo da presente invenção pode ser um fragmento de ligação a antígeno de um anticorpo que compreende um sítio de ligação a antígeno do anticorpo ou um produto modificado do mesmo. Um fragmento do anticorpo pode ser obtido ao tratar o anticorpo com uma protease, tal como papaína e pepsina, ou modificar o gene do anticorpo com uma técnica geneticamente modificada para permitir a expressão em uma célula de cultura adequada. Dentre tais fragmentos de anticorpo, os fragmentos que retêm todas ou parte das funções das moléculas de comprimento total do anticorpo podem ser denominados fragmentos de ligação a antígeno do anticorpo.

[0186] Exemplos das funções dos anticorpos podem, em geral, in- cluir a atividade de ligação a antígeno, a atividade de neutralização de atividade do antígeno, a atividade de intensificação de atividade do an- tígeno, citotoxicidade dependente de anticorpos, citotoxicidade depen- dente de complemento e citotoxicidade celular dependente de comple- mento. A função do fragmento de ligação a antígeno do anticorpo na presente invenção é a atividade de ligação ao TLR7 humano, de prefe- rência a atividade de inibição de uma função do TLR7 humano, mais preferivelmente a atividade de suprimir a produção de IL-6 e/ou interfe- ron de tipo | por células que expressam TLR7.

[0187] Exemplos do fragmento do anticorpo podem incluir Fab, F(ab')2, Fv ou Fv com uma única cadeia (scFv) obtido por meio da liga- ção de Fvs de cadeia pesada e leve com um ligante adequado, diacor- pos, anticorpos lineares e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpos. Além disso, o fragmento do anticorpo tam- bém inclui um fragmento Fab' monovalente em uma região variável do anticorpo obtido por meio de tratamento de F (ab')2 sob condições redu- tivas.

[0188] Além disso, o anticorpo da presente invenção pode ser um anticorpo multiespecífico que tem especificidade por pelo menos dois tipos de antígenos diferentes. E m geral, tal molécula se liga a dois tipos de antígenos (isto é, um anticorpo biespecífico), porém, o "anticorpo multiespecífico" na presente invenção inclui anticorpos que têm especi- ficidade por mais (por exemplo, três tipos) antígenos.

[0189] O anticorpo multiespecífico da presente invenção pode ser um anticorpo que consiste no comprimento total ou um fragmento de tal anticorpo (por exemplo, anticorpo biespecífico F(ab')2). O anticorpo bi- específico pode ser produzido também ao ligar as cadeias pesadas e leves (pares H-L) de dois tipos de anticorpos entre si ou produzir uma célula de fusão produtora de anticorpos biespecíficos através de fusão de hibridomas que produzem diferentes anticorpos monoclonais (Mills- tein et al., Nature (1983) 305, páginas 537-539).

[0190] O anticorpo da presente invenção também pode ser um an- ticorpo com uma única cadeia (o qual também pode ser denominado como scFv). O anticorpo com uma única cadeia pode ser obtido ao ligar a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve de um anticorpo através de um ligante polipeptídico (Pluckthun, The Phar- macology of Monoclonal Antibodies, 113 (editado por Rosenberg e Mo- ore), Springer Verlag, New York, páginas 269-315 (1994), Nature Bio- technology (2005), 23, páginas 1126-1136). Além disso, um fragmento BiscFv produzido pela ligação de dois scFvs com um ligante polipeptí- dico também pode ser usado como um anticorpo biespecífico.

[0191] Métodos para a produção de anticorpos com uma única ca- deia são conhecidos neste campo técnico (por exemplo, consulte Pa- tente Norte-Americana Nº 4.946.778, Patente Norte-Americana Nº

5.260.203, Patente Norte-Americana Nº 5.091.513 e Patente Norte- Americana Nº 5.455.030). Em tal scFv, a região variável de cadeia pe- sada e a região variável de cadeia leve são ligadas por meio de um ligante que não produz conjugados, de preferência um ligante polipeptí- dico (Huston, J .S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1988), 85, páginas 5879-5883). A região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve no scFv podem ser derivadas do mesmo anticorpo ou anti- corpos separados. Qualquer peptídeo com uma única cadeia que con- siste em 12 a 19 resíduos é, por exemplo, usado como o ligante poli- peptídico que liga as regiões variáveis.

[0192] O DNA que codifica o scF v é obtido por meio de amplificação através de PCR usando um elemento de DNA que codifica a totalidade ou uma parte desejada da sequência de aminoácidos do DNA que co- difica a cadeia pesada ou a região variável de cadeia pesada do anti- corpo e o DNA que codifica à cadeia leve ou cadeia leve variável do mesmo como um modelo e um par de iniciadores que define ambas as extremidades e amplificação adicional através de combinação do DNA que codifica uma porção ligante polipeptídica e um par de iniciadores que define ambas as extremidades do mesmo de modo à serem ligados, respectivamente, com a cadeia pesada e a cadeia leve.

[0193] Além disso, uma vez que o DNA que codifica o scFv é pro- duzido, um vetor de expressão que contém o DNA e uma célula hospe- deira transformada pelo vetor de expressão podem ser obtidos de acordo com métodos convencionais. Além disso, o scFv pode ser obtido usando a célula hospedeira de acordo com um método convencional. Tal fragmento de anticorpo pode ser produzido ao obter e expressar um gene do mesmo em uma célula hospedeira conforme descrito acima.

[0194] O anticorpo da presente invenção pode ser um anticorpo multimerizado para aumentar a afinidade pelo antígeno. O anticorpo a ser multimerizado pode ser um anticorpo ou uma pluralidade de anticor- pos que reconhecem uma pluralidade de epítopos do mesmo antígeno. Exemplos do método para multimerizar o anticorpo podem incluir a liga- ção de um domínio CH3 de IgG a dois scF vs, ligação à estreptavidina e introdução de um motivo de hélice-volta-hélice.

[0195] O anticorpo da presente invenção pode ser um anticorpo po- liclonal que é uma mistura de uma pluralidade de tipos de anticorpos anti-TLR7 humano que compreende diferentes sequências de aminoá- cidos. Como um exemplo do anticorpo policlonal, há uma mistura de uma pluralidade de tipos de anticorpos que compreende diferentes CDRs. Como tal um anticorpo policlonal, um anticorpo purificado a partir de uma cultura obtida através de cultura de uma mistura de células que produzem diferentes anticorpos pode ser usado (consulte Publicação

Internacional Nº WO 2004/061104).

[0196] Como um produto modificado do anticorpo, um anticorpo |i- gado a várias moléculas, tal como polietileno glicol (PEG), também pode ser usado.

[0197] O anticorpo da presente invenção pode ainda ser um imu- noconjugado formado por tal anticorpo e outro fármaco. Exemplos do anticorpo podem incluir o anticorpo ligado a uma substância radioativa ou um composto que tem uma ação farmacológica (Nature Biotechno- logy (2005) 23, páginas 1137-1146).

[0198] O anticorpo obtido pode ser purificado até a homogeneidade. Para separar e purificar o anticorpo, podem ser usados métodos co- muns de separação e purificação usados para proteínas. Por exemplo, o anticorpo pode ser separado e purificado por meio da seleção e com- binação adequadas de cromatografia em coluna, filtração em filtro, ul- trafiltração, dessalinização, diálise, eletroforese em gel de poliacrilamida preparativa, focagem isoelétrica e assim por diante (Strategies for Pro- tein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual, Da- niel R. Marshak et al. eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1996); Antibodies: A Laboratory Manual. Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)), mas não há limitação para os mes- mos.

[0199] Exemplos da cromatografia podem incluir cromatografia de afinidade, cromatografia de permuta iônica, cromatografia hidrofóbica, cromatografia de filtração em gel, cromatografia de fase reversa e cro- matografia de adsorção. Tal cromatografia pode ser realizada usando cromatografia líquida, tal como HPLC e FPLC. Exemplos da coluna usada para a cromatografia de afinidade podem incluir uma coluna de proteína A e uma coluna de proteína G. Exemplos de uma coluna que é uma coluna de proteína A podem incluir Hyper D, POROS, Sepharose F. F. (Pharmacia). Além disso, o anticorpo também pode ser purificado usando um suporte com um antígeno imobilizado ao empregar a propri- edade de ligação a antígeno.

3. Produto Farmacêutico que Contém Anticorpo Anti-TLR7 Hu- mano

[0200] Os anticorpos que inibem uma função do TLR7 humano po- dem ser obtidos a partir dos anticorpos anti-TLR7 humanos obtidos por meio dos métodos descritos em "2. Anticorpo anti-TLR7 e Produção do Mesmo" acima. Estes anticorpos que inibem uma função do TLR7 hu- mano podem inibir a atividade biológica de TLR7 humano in vivo, isto é, ativação de células que expressam o TLR7 humano tipificadas por cé- lulas sanguíneas através de ligantes de TLR7 humanos e, portanto, po- dem ser usados como produtos farmacêuticos, como agentes para tra- tar e/ou prevenir doenças causadas por uma função do TLR7 humano.

[0201] As doenças e condições causadas por uma função do TLR7 humano podem incluir doenças relacionadas à inflamação imune, doen- ças alérgicas, infecções ou cânceres.

[0202] Exemplos de doenças relacionadas à inflamação imune po- dem incluir doenças do tecido conjuntivo e do sistema musculoesquelé- tico (tais como lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatoide, artrite idiopática juvenil, doença de Still em adultos, espondilite anquilosante, esclerodermia sistêmica, polimiosite, dermatomiosite, psicosite artrite, osteoartrite, doença mista do tecido conjuntivo e distrofia muscular), do sistema sanguíneo (tais como anemia hemolítica autoimune, anemia aplástica e púrpura trombocitopênica idiopática), do sistema do trato di- gestivo (tais como doença de Crohn, colite ulcerativa e ileíte), do sis- tema hepatobiliar pancreático e do sistema endócrino (tais como hepa- tite autoimune, hepatite viral, hepatite alcoólica, esteato-hepatite não al- coólica, colangite esclerosante primária, cirrose biliar primária, síndrome de Sjogren, diabetes tipo 1, tireoidite autoimune, doença de Graves e tireoidite de Graves e tireoidite de Hashimoto), do sistema respiratório

(tais como obstrução crônica doença pulmonar, fibrose cística e pneu- monia intersticial), do sistema nervoso craniano (tais como esclerose múltipla, miastenia gravis, meningite, encefalomielite e encefalite autoi- mune), do sistema visual (tais como uveíte, tracoma e endoftalmite), do sistema cardiovascular sistema (tais como a síndrome vasculite, polian- giíte, granulomatose de Wegener, miocardite, doença cardíaca isquê- mica e aterosclerose), do sistema de epiderme da pele (tais como pso- ríase, pênfigo, vitiligo, dermatite de contato e eczema), do sistema renal (tal como glomerulonefrite), nefropatia diabética, nefropatia por IgA, ne- frite púrpura, nefrose e cistite intersticial) e do sistema endócrino (tais como diabetes tipo 1, tireoidite autoimune, doença de Graves e tireoidite de Hashimoto) e inflamação sistêmica (tais como doença de Behcet, síndrome antifosfolídeo, doenças relacionadas à IQGA4, sepse, hemorra- gia, hipersensibilidade, rejeição de transplante e sintomas de choque causados , por exemplo, por quimioterapia em câncer).

[0203] Exemplos de doenças alérgicas podem incluir dermatite ató- pica, asma, anafilaxia, reações anafilactoides, alergia alimentar, rinite, otite média, reações a medicamentos, reações a picadas de insetos, reações a plantas, alergia ao látex, conjuntivite e urticária.

[0204] Exemplos de infecções podem incluir doenças causadas por infecções por vírus (tal como um vírus de RNA fita simples, um vírus de RNA fita dupla, um vírus de DNA fita simples e um vírus de DNA fita dupla), bactérias (tais como bactérias Gram negativas, bactérias Gram positivas, bactérias resistentes a ácido, actinomicetos, espiroquetas, bactérias espirais, Rickettsia, Chlamydia e Mycoplasma), fungos (tais como Trichophyton, Candida, Cryptococcus, Aspergillus, Pneumocystis e Malassezia) e parasitas ( tais como filarias, trematoides, cestoides, Distoma, E chinococcus, E ntamoeba histolytica, pulgas, piolhos, ácaros, Ascaridida e Oxyuridae).

[0205] Exemplos do tratamento para câncer podem incluir tratamen- tos para linfoma, leucemia, câncer de mama, câncer de pulmão e câncer de pele.

[0206] Exemplos de anticorpos anti-TLR7 humano como produtos farmacêuticos podem incluir anticorpos quiméricos e anticorpos huma- nizados, os quais são produzidos a partir do anticorpo ATO1 e/ou do anticorpo NB7 e formas modificadas por CDR dos mesmos.

[0207] A atividade inibidora contra uma função do TLR7 humano pelos anticorpos anti-TLR7 humano in vitro pode ser medida, por exem- plo, com base na atividade de suprimir a ativação de células sanguíneas que expressam o TLR7 humano. Por exemplo, à atividade de suprimir a liberação de IL-6 de PBMCs humanas por meio de estimulação CL264 pode ser medida ao adicionar cada anticorpo anti-TLR7 humano a PBMCs humanas em várias concentrações.

[0208] Foi experimentalmente provado e amplamente reconhecido que, em várias doenças relacionadas à inflamação imune, incluindo lú- pus eritematoso sistêmico, a concentração de ligante de TLR7 humano é aumentada, a expressão de TLR7 humano é aumentada ou ocorre a estimulação de TLR7 humano. Respostas inflamatórias em virtude de citocinas inflamatórias, tal como a interleucina 6 (IL-6), produzidas pela ação de ligantes de TLR7 humano em células humanas que expressam TLR7 e liberação de interferons de tipo | em virtude de aumento e ativa- ção da produção de anticorpos causam respostas inflamatórias imunes sistêmicas e causam desenvolvimento ou agravamento da autoimuni- dade, tal como lúpus eritematoso sistêmico. Consequentemente, supri- mir a produção de citocinas que dependem da estimulação de TLR7 humano leva à prevenção e ao tratamento de lúpus eritematoso sistê- mico e assim por diante e a utilidade de um anticorpo anti-TLR7 humano como um medicamento pode ser determinada usando a atividade de supressão como um indicador.

[0209] Exemplos de um anticorpo adequado na presente invenção podem incluir um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do anticorpo que se liga especificamente ao TLR7 humano que compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 2 ou 4 e reduz a quantidade de IL-6 liberada por PBMCs humanas tratadas com CL264 de uma maneira dependente da concentração.

[0210] Além disso, o tratamento ou os efeitos de prevenção pelo anticorpo anti-TLR7 humano em várias doenças podem ser verificados com base em um sistema de avaliação in vivo ou um sistema de avalia- ção ex vivo ao administrar o anticorpo anti-TLR7 humano a macacos com reatividade cruzada com o anticorpo ou também com base no sis- tema de avaliação in vivo ao administrar o anticorpo anti-TLR7 humano a camundongos transgênicos para o TLR7 humano e camundongos com silenciamento (knockout) de TLR7.

[0211] Os efeitos sobre a produção de citocinas inflamatórias são avaliados ao comparar a capacidade de produzir citocinas no sangue periférico entre o grupo de anticorpos anti-TLR7 e o grupo que não re- cebeu, na inflamação induzida através de administração intraperitoneal ou intravenosa de ligantes de TLR7 a camundongos.

[0212] Os efeitos sobre a dermatite atópica são avaliados ao quan- tificar o comportamento causado pela dermatite atópica desenvolvida espontaneamente ou induzida por um método tal como a aplicação re- petida de um creme antigênico de ácaros na orelha ou nas costas 3 a 6 vezes a cada 3 dias a 2 semanas, aplicar haptenos à aurícula, abdômen ou costas diariamente a uma vez por semana, administrar um indutor de prurido intradermicamente na orelha, subcutaneamente nas costas ou intratecalmente ou usando camundongos NC/Nga que são camun- dongos atópicos espontâneos, através de medição da frequência de prurido usando ímãs montados em ambas as plantas das patas dos ca- mundongos e um dispositivo de medição do comportamento do prurido ou inspeção das características patológicas da pele, sangue periférico, tecido da medula espinhal e assim por diante e comparar os resultados entre o grupo que recebeu anticorpo anti-TLR7 humano e o grupo que não recebeu.

[0213] Os efeitos sobre a psoríase são avaliados ao quantificar a dermatite psoriasiforme induzida através de um método tal como a apli- cação de Imiquimod ou R848 na orelha e nas costas após raspar os pelos, administrar citocinas, tal como IL-23, a camundongos intradermi- camente na orelha, medir o peso e a espessura do local da inflamação ou a atividade de mieloperoxidase dos neutrófilos que infiltram o local, análise de citometria de fluxo das células infiltradas, análise gênica ou medir a concentração de citocinas e comparar os resultados entre o grupo que recebeu anticorpos anti-TLR7 e o grupo que não recebeu.

[0214] Os efeitos sobre a artrite são avaliados ao induzir à artrite através de um método tal como administrar uma emulsão obtida pela mistura de uma solução de colágeno bovino de tipo Il e um adjuvante completo de Freund intradermicamente na base da cauda de camun- dongos e, em seguida, administrar uma emulsão obtida pela mistura de uma solução de colágeno bovino de tipo Il e um adjuvante incompleto de Freund 2 a 3 semanas depois ou administrar um anticorpo anti-colá- geno bovino de tipo Il e ligantes de TLR e comparar a pontuação do subsequente edema articular, medir a espessura da planta do pé, as concentrações de anticorpos, citocinas ou biomarcadores sanguíneos no sangue ou tecidos ou a atividade proliferativa, a capacidade de pro- duzir citocinas ou antígenos na superfície das células obtidas a partir do sangue periférico, do baço, dos nódulos linfáticos, da medula óssea, dos locais de articulação ou similar, entre o grupo que recebeu anticorpo anti-TLR7 humano e o grupo que não recebeu.

[0215] Os efeitos sobre a colite são avaliados ao induzir à colite através de um método tal como administrar ácido trinitrobenzenossulfô- nico no intestino de camundongos em jejum durante 24 horas, permitir acesso ad libitum a uma solução aquosa de sulfato de sódio e dextrana a l1a1l0% a partir de um frasco de abastecimento durante 4 dias a 2 semanas ou transferência de células T CD4+CD25-CD45RBhi coleta- das dos gânglios linfáticos e do baço de camundongos transgênicos para o TLR7 humano após purificação intraperitoneal para camundon- gos deficientes em Rag2 e comparar o peso corporal durante o período de observação, o grau de espessamento, número e tamanho dos póli- pos e as características histopatológicas do intestino através de autóp- sia após conclusão do teste, as concentrações de anticorpos, citocinas ou biomarcadores sanguíneos no sangue ou tecidos, a atividade proli- ferativa, a capacidade de produzir citocinas ou os antígenos na superfí- cie das células obtidas a partir do intestino, do sangue periférico, do timo, do baço, dos gânglios linfáticos, da medula óssea ou das placas de Peyer ou similar entre o grupo que recebeu anticorpo anti-TLR7 hu- mano e o grupo que não recebeu.

[0216] Os efeitos sobre o lúpus eritematoso sistêmico são avaliados ao comparar o grupo que recebeu anticorpos anti-TLR7 humano e o grupo que não recebeu: as concentrações de anticorpos, citocinas ou biomarcadores sanguíneos no sangue ou tecidos coletados de camun- dongos NZB/WF1, camundongos MRL/lpr e camundongos BXSB que são modelos espontâneos ao longo do tempo, a titulação de anticorpos ou a concentração de biomarcador em sua urina ou um sintoma induzido pela transferência de células preparadas a partir de um órgão, tal como o baço e os nódulos linfáticos, coletado após a conclusão do teste acima a ratos não tratados ou similar.

[0217] Os efeitos sobre a hepatite são avaliados ao induzir à hepa- tite através de um método tal como administrar D-galactosamina apenas ou em combinação com lipopolissacarídeo intraperitonealmente a ca- mundongos e administrar concanavalina A apenas na veia da cauda e comparar as concentrações de AST e ALT no sangue coletado 1 hora à 1 semana após a administração de uma substância inflamatória, a con- centração de citocinas e a condição histopatológica das lesões hepáti- cas entre o grupo que recebeu anticorpo anti-TLR7 humano e o grupo que não recebeu.

[0218] O anticorpo assim obtido que inibe a atividade biológica de TLR7 humano é útil como um fármaco, particularmente como um anti- corpo para prevenir ou tratar doenças inflamatórias imunes, incluindo lúpus eritematoso sistêmico, doenças alérgicas, infecções ou cânceres.

[0219] Como um exemplo, o anticorpo anti-TLR7 humano pode ser administrado individualmente ou em combinação com pelo menos um outro agente terapêutico para tratar ou prevenir doenças relacionadas à inflamação imune, doenças alérgicas, infecções ou cânceres. Exemplos do outro agente terapêutico que pode ser administrado em combinação com o anticorpo anti-TLR7 humano podem incluir corticosteroides, me- dicamentos anti-inflamatórios não esteroidais, antimetabólitos de ácido nucleico, inibidores da síntese de ácido nucleico, antifolatos, inibidores de calcineurina, medicamentos antimaláricos, globulinas de antitimóci- tos, produtos biológicos direcionados a antígenos na superfície celular ou produtos biológicos direcionados a interferons e citocinas ou recep- tores de interferons e citocinas, mas não há limitação a estes exemplos.

[0220] Exemplos específicos do agente terapêutico podem incluir metilprednisolona como um corticosteroide, hidrato de loxoprofeno só- dico, diclofenaco sódico, indometacina e ácido acetilsalicílico como fár- macos anti-inflamatórios não esteroidais, micofenolato mofetil como um antimetabólito de ácido nucleico, ciclofosfamida como um inibidor da síntese de ácido nucleico, Ciclosporina e Taclorim como inibidores de calcineurina, Hidroxicloroquina como um medicamento antimalárico,

Metotrexato como um antifolato, Zetbulina, Linfoglobulina e Timoglobu- lina como globulinas de antitimócitos, Etuzumabe, Ritubebe e Abatace- bite como antígenos na superfície celular e Abatacebímero como antí- genos biológicos, Tocilizumabe, Belimumabe e Anifrolumabe como pro- dutos biológicos direcionados a interferons e citocinas ou receptores de interferons e citocinas.

[0221] Dependendo da condição de doenças relacionadas à infla- mação imune, doenças alérgicas, infecções ou cânceres e o grau de tratamento e/ou prevenção direcionado, dois, três ou mais tipos de ou- tros agentes terapêuticos também podem ser administrados e os outros agentes terapêuticos podem ser encapsulados na mesma preparação para serem administrados ao mesmo tempo. Os outros agentes tera- pêuticos e o anticorpo anti-TLR7 humano também podem ser encapsu- lados na mesma preparação de modo a serem administrados ao mesmo tempo. Além disso, o anticorpo anti-TLR7 humano e os outros agentes terapêuticos também podem ser encapsulados em preparações sepa- radas e administrados ao mesmo tempo. Além disso, os outros agentes terapêuticos e o anticorpo anti-TLR7 humano também podem ser admi- nistrados separadamente um após o outro. Isto é, um agente terapêutico que contém o anticorpo anti-TLR7 humano ou o fragmento de ligação a antígeno do anticorpo como um ingrediente ativo pode ser administrado após os outros agentes terapêuticos serem administrados ou os outros agentes terapêuticos podem ser administrados após um agente tera- pêutico que contém o anticorpo anti-TLR7 humano ou o fragmento de ligação a antígeno do anticorpo como um ingrediente ativo ser adminis- trado. No caso de administração em terapia gênica, o gene de um agente terapêutico de proteína e o gene do anticorpo anti-TLR7 humano podem ser inseridos a jusante das mesmas ou em regiões promotoras separadas e podem ser introduzidos nos mesmos vetores ou em vetores separados.

[0222] Os conjugados de fármaco direcionados descritos em M.

C.

Garnet "Targeted Drug Conjugates: Principles and Progress", Advanced Drug Delivery Reviews, (2001) 53, 171-216 podem ser produzidos ao ligar os agentes terapêuticos ao anticorpo anti-TLR7 humano ou frag- mento do mesmo.

Para esta finalidade, qualquer fragmento de anticorpo pode ser aplicado, exceto moléculas de anticorpo, contanto que não perca completamente o reconhecimento de células T.

Exemplos dos mesmos podem incluir fragmentos, tais como Fab, F(ab')2 eFv, eo an- ticorpo e tais fragmentos podem ser usados da mesma maneira con- forme na presente invenção.

O modo de ligação do anticorpo anti-TLR7 humano ou fragmento do anticorpo aos agentes terapêuticos pode ser através de várias formas descritas em M.C.

Garnet "Targeted Drug Con- jugates: Sources and Progress", Advanced Drug Delivery Reviews, (2001) 53, 171-216, G.T.

Hermanson "Bioconjugate Techniques" Aca- demic Press, Califórnia (1996), Putnam e J . Kopecek "Polymer Conju- gates with Anticancer Activity", Advances in Polymer Science (1995) 122, 55-123, etc.

Isto é, exemplos do mesmo pode incluir um modo em que o anticorpo anti-TLR7 humano é quimicamente ligado aos agentes terapêuticos diretamente ou por meio de um espaçador, tal como um oligopeptídeo, ou ligado por meio de um suporte de fármaco adequado.

Exemplos de suportees de fármaco podem incluir lipossomas e políme- ros solúveis em água.

Mais especificamente, exemplos do modo de |i- gação por meio de um tal suporte de fármaco podem incluir um modo em que o anticorpo e os agentes terapêuticos são incluídos em um |i- possoma e o lipossoma é ligado ao anticorpo e um modo em que os agentes terapêuticos são quimicamente ligados a um polímero solúvel em água (composto que tem um peso molecular de cerca de 1000 à 100000) diretamente ou por meio de um espaçador, tal como um oli- gopeptídeo, e o anticorpo é ligado ao polímero solúvel em água.

O an- ticorpo (ou o fragmento) pode ser ligado aos agentes terapêuticos ou aos suportes de fármaco, tais como lipossomas e polímeros solúveis em água, por meio de um método conhecido por aqueles versados na téc- nica, tal como o método de acordo com G.T. Hermanson "Bioconjugate Techniques", Academic Press, California (1996), Putnam e J. Kopecek "Polymer Conjugates with Anticancer Activity", Advances in Polymer Sci- ence (1995) 122, 55-123. Os agentes terapêuticos podem ser incluídos no lipossoma através de um método conhecido por aqueles versados na técnica, tal como o método de acordo com D. D. Lasic "Liposomes: From Physics to Applications", Elsevier Science Publishers B. V., Ams- terdam (1993). Os agentes terapêuticos podem ser ligados ao polímero solúvel em água através de um método conhecido por aqueles versados na técnica, tal como o método de acordo com D. Putnam e J . Kopecek, "Polymer Conjugates with Anticancer Activity", Advances in Polymer Sci- ence (1995) 122, 55-123. Os conjugados do anticorpo (ou o fragmento) e um agente terapêutico de proteína (ou o fragmento) podem ser produ- zidos por meio de um método de engenharia genética conhecido por aqueles versados na técnica diferente do método supracitado.

[0223] A presente invenção também fornece uma composição far- macêutica que compreende um vetor de expressão que compreende um polinucleotídeo que compreende uma sequência de polinucleotí- deos que codifica pelo menos um ou qualquer um dos anticorpos anti- TLR7 humano ou o fragmento de ligação a antígeno do anticorpo como um ingrediente ativo em uma quantidade eficaz para tratar e/ou prevenir doenças e um diluente, um carreador, um solubilizante, um emulsifi- cante, um conservante e/ou um aditivo, os quais são farmaceuticamente aceitáveis.

[0224] A presente invenção também fornece uma composição far- macêutica que compreende um vetor de expressão que compreende um polinucleotídeo que compreende uma sequência de polinucleotí- deos que codifica pelo menos um ou qualquer um dos anticorpos anti-

TLR7 humano ou o fragmento de ligação a antígeno do anticorpo em uma quantidade eficaz para o tratamento e/ou prevenir doenças, pelo menos um agente terapêutico em uma quantidade eficaz para tratar e/ou prevenir doenças e um diluente, um carreador, um solubilizante, um emulsificante, um conservante e/ou um aditivo, os quais são farma- ceuticamente aceitáveis.

[0225] Exemplos do agente terapêutico podem incluir antifolatos, inibidores de calcineurina, corticosteroides, globulinas de antitimócitos, antimetabólitos de ácido nucleico, inibidores da síntese de ácido nu- cleico, produtos biológicos direcionados a antígenos na superfície celu- lar ou produtos biológicos direcionados a citocinas ou receptores de ci- tocinas descritos acima, mas não há limitação a estes exemplos.

[0226] As substâncias usadas para preparações que são aceitáveis na composição farmacêutica da presente invenção são, de preferência, não tóxicas, mais preferivelmente na dosagem de administração e na concentração de administração para uma pessoa a quem a composição farmacêutica é administrada.

[0227] A composição farmacêutica da presente invenção pode con- ter substâncias usadas para preparações para alterar ou manter o pH, a pressão osmótica, a viscosidade, a transparência, a cor, a isotonici- dade, a esterilidade, a estabilidade, a taxa de dissolução, a taxa de libe- ração sustentada, a taxa de absorção e a taxa de penetração. Exemplos das substâncias usadas para preparações podem incluir, porém sem limitações: aminoácidos, tais como glicina, alanina, glutamina, aspara- gina, arginina ou lisina, agentes antibacterianos, antioxidantes, tais como ácido ascórbico, sulfato de sódio ou bissulfito de sódio, tampões, tais como ácido fosfórico, ácido cítrico, tampão de ácido bórico, bicar- bonato de sódio ou uma solução de tris-ácido clorídrico (Tris-HCl), ma- teriais de enchimento, tais como manitol ou glicina, agentes quelantes, tal como ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA), agentes de formação de complexos, tais como cafeína, polivinil pirrolidina, B-ciclodextrina ou hidroxipropil-B-ciclodextrina, extensores, tais como glicose, manose ou dextrina, outros carboidratos, tais como monossacarídeos ou dissacarí- deos, agentes corantes, agentes aromatizantes, diluentes, emulsifican- tes, polímeros hidrofílicos, tal como polivinil pirrolidina, conservantes, tais como polipeptídeos de baixo peso molecular, contra-íons formado- res de sal, cloreto de benzalcônio, ácido benzoico, ácido salicílico, time- rosal, álcool fenetílico, metilparabeno, propilparabeno, clorexidina, ácido sórbico ou peróxido de hidrogênio, solventes, tais como glicerina, propi- leno glicol ou polietileno glicol, álcoois de açúcar, tais como manitol ou sorbitol, agentes de suspensão, polissorbatos, tais como éster de sorbi- tano, polissorbato 20 ou polissorbato 80, tensoativo, tais como Triton, trometamina, lecitina ou colesterol, intensificadores de estabilidade, tais como sacarose ou sorbitol, intensificadores de elasticidade, tais como cloreto de sódio, cloreto de potássio, manitol ou sorbitol, agentes de transporte, excipientes e/ou agentes auxiliares farmacêuticos. A quanti- dade das substâncias usadas nas preparações a ser adicionada deve, de preferência, ser de 0,01 a 100 vezes, particularmente 0,1 a 10 vezes, em relação ao peso do anticorpo anti-TLR 7 humano. A composição ade- quada da composição farmacêutica em preparações pode ser determi- nada apropriadamente por aqueles versados na técnica de acordo com a doença a ser tratada, a via de administração a ser aplicada ou similar.

[0228] E xcipientes ou carreadores na composição farmacêutica po- dem ser líquidos ou sólidos. E xcipientes ou carreadores adequados po- dem ser água para injeção, solução salina normal, fluido cérebro-espi- nhal artificial ou outras substâncias geralmente usadas para administra- ção parentérica. Solução salina normal neutra ou solução salina normal que contém albumina sérica também pode ser usada como carreador. A composição farmacêutica pode conter um tampão de Tris com um pH de 7,0 a 8,5, um tampão de acetato com um pH de 4,0 a 5,5 ou um tampão de ácido cítrico com um pH de 3,0 a 6,2. Além disso, estes tam- pões também podem conter sorbitol ou outros compostos. Exemplos da composição farmacêutica da presente invenção podem incluir uma com- posição farmacêutica que compreende anticorpo anti-TLR7 humano e uma composição farmacêutica que compreende anticorpo anti-TLR7 humano e pelo menos um agente terapêutico e a composição farma- cêutica da presente invenção é preparada como um medicamento que tem uma composição selecionada e uma pureza necessária na forma de um produto liofilizado ou líquido. Uma composição farmacêutica que compreende anticorpo anti-TLR7 humano e uma composição farmacêu- tica que compreende anticorpo anti-TLR7 humano e pelo menos um fár- maco terapêutico para um transtorno do metabolismo ósseo pode ser formado como um produto liofilizado usando um excipiente adequado, tal como sacarose.

[0229] A composição farmacêutica da presente invenção pode ser preparada para administração parentérica ou pode ser preparada para absorção gastrintestinal e oral. A composição e a concentração da pre- paração podem ser determinadas dependendo do método de adminis- tração. Alternativamente, uma afinidade que é uma afinidade mais alta (menor valor de Kd), em termos da constante de dissociação (valor de Kd) para o TLR7 humano dos anticorpos anti-TLR7 humanos contidos na composição farmacêutica da presente invenção, permite que a eficá- cia do medicamento seja exercida com uma dosagem reduzida em se- res humanos e, portanto, a dosagem da composição farmacêutica da presente invenção em seres humanos também pode ser determinada com base nesta afinidade. A dosagem na presente invenção pode ser de cerca de 0,1 a 100 mg/kg uma vez a cada 1 a 180 dias quando o anticorpo anti-TLR7 humano é administrado a um ser humano.

[0230] Exemplos de modalidades da composição farmacêutica da presente invenção podem incluir injeções, incluindo para infusão intra- venosa, supositórios, preparações nasais, preparações sublinguais e medicamentos transdérmicos.

[0231] Embora a maioria das preparações de anticorpos aprovadas sejam administradas através da via intravenosa, a administração sub- cutânea é preferida em muitos ambientes médicos. Neste caso, o vo- lume é limitado a 1,0 a 1,5 mL e, portanto, uma solução de anticorpo de alta concentração é necessária dependendo da dosagem. No entanto, quando a concentração é aumentada, a viscosidade da solução do me- dicamento aumenta e, portanto, a injeção pode ser impossível em vir- tude da alta viscosidade com a espessura das agulhas para injeção co- mumente usadas. Isto é, no caso de selecionar injeção, a propriedade de baixa viscosidade tem um significado importante a ser priorizado como uma modalidade da composição farmacêutica e um anticorpo adequado possa ser selecionado usando a viscosidade como um indi- cador. Exemplos

[0232] A seguir, a presente invenção será especificamente descrita por meio de exemplos, mas a presente invenção não está limitada a estes exemplos. Nos exemplos a seguir, cada operação relacionada à engenharia genética é realizada de acordo com o método descrito em "Molecular Cloning" (Sambrook, J., Fritsch, E.F. e Maniatis, T., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989) ou realizada usando um rea- gente ou kit comercialmente disponível de acordo com as instruções do produto comercialmente disponível, a menos que especificado de outra forma. Exemplo 1 Produção de Anticorpo Anti-TLR7 Humano de Camundongo 1)-1 Imunização 1)-1-1 Estabelecimento da linhagem de células Ba/F3 que expressa

TLR7-Flag-His-6 humano/U nc93B1-HAx2 humano

[0233] O gene de TLR7 humano (variante 2) (SEQ ID NO: 3) foi in- tegrado em vetores retrovirais, pMXs (Cell Biolabs, Inc.) marcado com Flag-Hisx6 adicionado ao C-término do gene usando uma enzima, in Fusion (marca registrada) (Takara Bio Inc). Os vetores retrovirais foram transfectados em uma linhagem de células de empacotamento com base na linhagem de células HEK293, Plat-E (Cell Biolabs, Inc.) usando um reagente de transfecção, Fugene (marca registrada) 6 (Roche). O sobrenadante da cultura foi coletado 24 horas depois e usado como uma suspensão viral. A suspensão viral foi misturada com um reagente de transfecção, DOTAP (Roche), a mistura foi adicionada a uma linhagem de células Ba/F3 (RIKEN, BRC) e centrifugação em alta velocidade foi realizada a 2.000 rom durante 1 hora para estabelecer uma linhagem de células Ba/F3 que expressa TLR7-Flag-Hisx6 humano.

[0234] O TLR7 humano codificado pelo gene de TLR7 humano (va- riante 2) (SEQ ID NO: 3) compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4. A sequência é mostrada na Figura 2.

[0235] O gene Unc93B1 humano (SEQ ID NO: 55) foi integrado em vetores retrovirais, pMXs (Cell Biolabs, Inc.) marcado com HAX?2 adici- onado ao C-término do gene usando uma enzima, In Fusion (marca re- gistrada) (Takara Bio Inc). Os vetores retrovirais foram transfectados em uma linhagem de células de empacotamento com base na linhagem de células HEK293, Plat-E (Cell Biolabs, Inc.) usando um reagente de transfecção, Fugene (marca registrada) 6 (Roche). O sobrenadante da cultura foi coletado 24 horas depois e usado como uma suspensão de vírus. A suspensão de vírus foi misturada com um reagente de transfec- ção, DOTAP (Roche), a mistura foi adicionada à linhagem de células Ba/F3 que expressa TLR7-Flag-Hisx6 humano estabelecida acima e a centrifugação de alta velocidade foi realizada a 2.000 rpm por 1 hora, para estabelecer uma linhagem de células Ba/F3 que expressa TLR7-

Flag-Hisx6 humano/Unc93B1-HAX2 humano.

1)-1-2 Imunização de camundongo

[0236] A linhagem de células Ba/F3 que expressa TLR7-Flag-Hisx6 humano/Unc93B1-HAX2 humano estabelecida acima em 1)-1-1 foi mis- turada com um adjuvante, TiterMAX (marca registrada) Gold (TiterMax USA, Inc.) e a mistura foi administrada como um antígeno na sola das patas, na base da cauda e na cavidade peritoneal de camundongos de- ficientes em TLR9 com fundo BALB/c produzido pelo Medical Science of the University of Tokyo em um total de 3 vezes por semana.

[0237] Na 4º vez, a linhagem de células Ba/F3 que expressa TLR 7- Flag-Hisx6 humano/Unc93B1-HAX2 humano suspensa em 1xPBS foi administrada através da via intraperitoneal.

[0238] O baço foi removido 5 dias após a última imunização e usado para a produção de hibridomas.

1)-2 Produção de hibridomas

[0239] As células do baço após a imunização foram misturadas com a linhagem de células Sp2/0 (ATCC) e a fusão celular foi realizada usando um kit de fusão celular HVJ -E (ISHIHARA SANGYO KAISHA, LTDA.). A fim de selecionar hibridomas, as células foram cultivadas a partir do dia após a operação de fusão celular em RPM/I1640 (Life Technologies) que contém uma solução de cultura contendo HAT (Thermo Fisher Scientific) (FBS a 10 %), 2-Mercaptoetanol a 50 uM (Life Technologies), 50 U/mL de penicilina e 50 ug/mL de estreptomicina (Life Technologies) e as colônias de hibridoma que surgiram foram coletadas para produzir hibridomas monoclonais.

1)-3 Triagem de ligação de anticorpo a TLR7 humano através de cito- metria de fluxo

[0240] O sobrenadante da cultura foi coletado a partir de hibridomas que formaram colônias sob um microscópio e usado para triagem. Uma linhagem de células Ba/F3 que expressa hTLR7-Flag-Hisx6/hUnc93B1-

HAX?2 foi submetida à permeação de membrana com saponina a 0,1 % (Sigma-Aldrich Co. LLC) e células Ba/F3 que não expressam nada fo- ram coradas com o sobrenadante da cultura e analisadas através de citometria de fluxo (LSRFortessaTMX-20, Becton, Dickinson and Com- pany) para selecionar hibridomas produtores de anticorpo anti-hTLR7. 1)-4 Triagem de inibição do anticorpo anti-TLR7 humano da função de TLR7 humano através de citometria de fluxo

[0241] O gene de TLR7 humano (variante 2) (SEQ ID NO: 3) e o gene Unc93B1 humano D34A mutante-HAX2 (SEQ ID NO: 86) foram introduzidos em uma linhagem de células Ba/F3 (RIKEN, BRC) usando um retrovírus. Além disso, um plasmídeo repórter de proteína de fluo- rescência NF-xB-Green (GFP) (STRATAGENE ) foi transfectado nas cé- lulas por meio do método de eletroporação, de modo que uma linhagem de células Ba/F3 que expressa hTLR7/hUnc93B1 D34A mutante-HAX2 e capaz de análise da ativação de NF-xB foi estabelecida e o sobrena- dante da cultura de hibridoma foi adicionado à linhagem de células. As células foram estimuladas 4 horas depois com 25 ng/ml de um ligante TLR7, R848 (InvivoGen). Como um resultado de análise dos efeitos ini- bidores da resposta de TLR7 humano ao medir a intensidade de fluo- rescência de GFP usando citometria de fluxo 24 horas depois, três hi- bridomas produtores de anticorpos anti-TLR7 humano de camundongo foram selecionados e foram denominados ATO1, NB7 e FAN2, respec- tivamente.

[0242] Na presente invenção, os anticorpos produzidos pelos hibri- domas ATO1, NB7 e FAN2 são denominados como anticorpo ATO1, an- ticorpo NB7 e anticorpo FAN2, respectivamente. 1)-5 Determinação do isotipo do anticorpo

[0243] Os isotipos dos anticorpos produzidos pelos hibridomas pro- dutores de anticorpo anti-TLR7 humano de camundongo (ATO1, NB7 e FAN2) obtidos em 1)-4 foram determinados usando um kit de isotipagem de anticorpo monoclonal de camundongo IsoStrip (Merck KGaA). Como um resultado, os isotipos do anticorpo ATO1, anticorpo NB7 e anticorpo FAN? foram, cada um, determinados como sendo uma cadeia IgG 1/x. 1)-6 Preparação de anticorpo anti-TLR7 humano de camundongo

[0244] O anticorpo monoclonal de camundongo anti-TLR7 humano foi purificado a partir de ascites coletadas cerca de 10 dias após cada hibridoma ter sido administrado intraperitonealmente a camundongos nus ICR-CD1-Foxnl (ICR-nu, CHARLES RIVER LABORATORIES J A- PAN, INC.) pré-tratados com pristano (Sigma-Aldrich Co. LLC., Atual- mente, Merck KGaA).

[0245] Primeiro, o pristano foi administrado intraperitonealmente aos camundongos ICR-nus e os camundongos foram criados por 7 dias ou mais. Depois disso, o hibridoma produtor de ATO1, NB7 ou FAN? foi cultivado em RP MI1640 (Life Technologies) que contém FBS a 10 % de, 2-Mercaptoetanol a 50 uM (Life Technologies), 50-U/mL de penicilina e 50 ug/mL de Estreptomicina (Life Technologies), seguido de prolifera- ção até um volume suficiente. P osteriormente, o hibridoma foi suspenso em 1xPBS e administrado intraperitonealmente aos camundongos ICR- nus.

[0246] A ascite foi coletada 10 dias depois e as células sanguíneas foram sedimentadas por uma centrífuga de alta velocidade para coletar o sobrenadante. Após diluição de 10 vezes com 1xPBS, a ascite foi pas- sada através de um filtro de 0,45 um (Millipore).

[0247] O anticorpo foi purificado a partir da ascite supracitada em uma coluna de proteína G (GE Healthcare J apan Corporation) usando um AKTAprime plus (GE Healthcare J apan Corporation).

[0248] Posteriormente, a substituição do tampão por solução salina foi realizada juntamente com o enriquecimento usando PD-10 (GE Heal- thcare J apan Corporation) para preparar o anticorpo em uma concen- tração de 1,0 mg/mL ou mais.

[0249] Finalmente, foi realizada esterilização com Millex-GV 0,22 um (Millipore) para fornecer uma amostra purificada. Exemplo 2 Avaliação In Vitro de Anticorpo Anti-TLR7 Humano de Camundongo 2)-1 Avaliação da seletividade de ligação do anticorpo anti-TLR7 hu- mano de camundongo 2)-1-1 Estabelecimento de linhagem de células Ba/F3 que expressa TLR7-Flag-Hisx6 de camundongo

[0250] O gene de TLR7 de camundongo (SEQ ID NO: 56) foi inte- grado em vetores retrovirais, pMXs (Cell Biolabs, Inc.) marcado com Flag-Hisx6 adicionado ao C-término do gene usando uma enzima, In Fusion (marca registrada) (Takara Bio Inc). Os vetores retrovirais foram transfectados para uma linhagem de células de empacotamento com base na linhagem de células HEK293, Plat-E (Cell Biolabs, Inc.) usando um reagente de transfecção, Fugene (marca registrada) 6 (Roche). O sobrenadante da cultura foi coletado 24 horas depois e usado como uma suspensão viral. A suspensão viral foi misturada com um reagente de transfecção, DOTAP (Roche), a mistura foi adicionada a uma linhagem de células Ba/F3 (RIKEN, BRC) e centrifugação em alta velocidade foi realizada a 2.000 rom durante 1 hora para estabelecer uma linhagem de células Ba/F3 que expressa TLR7-Flag-Hisx6 de camundongo.

[0251] O TLR7 de camundongo codificado pelo gene de TLR7 de camundongo (SEQ ID NO: 56) compreende a sequência de aminoáci- dos de SEQ ID NO: 83. A sequência é mostrada na Figura 3.

[0252] 2)-1-2 Estabelecimento de linhagem de células Ba/F3 que expressa TLR7-Flag-Hisx6 de rato

[0253] O gene de TLR7 de rato (SEQ ID NO: 57) foi integrado em vetores retrovirais, pMXs (Cell Biolabs, Inc.) marcado com Flag-Hisx6 adicionado ao C-término do gene usando uma enzima, In Fusion (marca registrada) (Takara Bio Inc). Os vetores retrovirais foram transfectados em uma linhagem de células de empacotamento com base na linhagem de células HEK293, Plat-E (Cell Biolabs, Inc.) usando um reagente de transfecção, Fugene (marca registrada) 6 (Roche). O sobrenadante da cultura foi coletado 24 horas depois e usado como uma suspensão viral. A suspensão viral foi misturada com um reagente de transfecção, DO- TAP (Roche), a mistura foi adicionada a uma linhagem de células Ba/F3 (RIKEN, BRC) e centrifugação em alta velocidade foi realizada a 2.000 rpm durante 1 hora para estabelecer um Ba/Linhagem de células F3 que expressa TLR7-Flag-Hisx6 de rato.

[0254] O TLR7 de rato codificado pelo gene de TLR7 de rato (SEQ ID NO: 57) compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

84. A sequência é mostrada na Figura 4. 2)-1-3 Estabelecimento da linhagem de células Ba/F3 que expressa TLR7-Flag-Hisx6 de macaco

[0255] O gene de TLR7 de macaco (SEQ ID NO: 58) foi integrado em vetores retrovirais, pMXs (Cell Biolabs, Inc.) marcado com Flag- Hisx6 adicionado ao C-término do gene usando uma enzima, In Fusion (marca registrada) (Takara Bio Inc). Os vetores retrovirais foram trans- fectados em uma linhagem de células de empacotamento com base na linhagem de células HEK293, Plat-E (Cell Biolabs, Inc.) usando um rea- gente de transfecção, Fugene (marca registrada) 6 (Roche). O sobrena- dante da cultura foi coletado 24 horas depois e usado como uma sus- pensão viral. A suspensão viral foi misturada com um reagente de trans- fecção, DOTAP (Roche), a mistura foi adicionada a uma linhagem de células Ba/F3 (RIKEN, BRC) e centrifugação em alta velocidade foi re- alizada a 2.000 rom durante 1 hora para construir uma linhagem de cé- lulas Ba/F3 que expressa TLR 7-Flag-Hisx6 de macaco.

[0256] O TLR7 de macaco codificado pelo gene de TLR7 de macaco (SEQ ID NO: 58) compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID

NO: 85. A sequência é mostrada na Figura 5. 2)-1-4 Avaliação da seletividade de ligação do anticorpo anti-TLR7 hu- mano de camundongo através de citometria de fluxo

[0257] A linhagem de células Ba/F3 que expressa TLR7-Flag-Hisx6 humano/Unc93B1-HAX2 humano estabelecida acima em 1)-1-1, a |li- nhagem de células Ba/F3 que expressa TLR7-Flag-Hisx6 de camun- dongo estabelecida acima em 2)-1-1, a linhagem de células Ba/F3 que expressa TLR 7-Flag-Hisx6-2 de rato estabelecida acima em 2)-1-2e a linhagem de células Ba/F3 que expressa TLR7-Flag-Hisx6 de macaco estabelecidos acima em 2)-1-3 foram submetidas à permeação de mem- brana com saponina a 0,1 % e coradas usando anticorpo ATO1, anti- corpo NB7 e anticorpo FAN2 e um anticorpo secundário, IgG (H+L)-PE de cabra anticamundongo (eBioscience). A seletividade de ligação de cada anticorpo foi avaliada ao comparar a intensidade média de fluores- cência (MFI) com base na análise de citometria de fluxo.

[0258] Os resultados indicam que o anticorpo ATO1, o anticorpo NB7 e o anticorpo FAN2 se ligaram especificamente ao TLR7 humano ou TLR7 de macaco e não se ligaram ao TLR7 de camundongo ou TLR7 de rato. 2)-2 Avaliação da capacidade de ligação do anticorpo anti-TLR7 hu- mano de camundongo

[0259] A linhagem de células Ba/F3 que expressa TLR7-Flag-Hisx6 humano/Unc93B1-HAX2 humano estabelecida acima em 1)-1-1 foi sub- metida à permeação de membrana com saponina a 0,1 % e corada usando uma série de diluições de anticorpo ATO1, anticorpo 7 NB e an- ticorpo FAN2 e um anticorpo secundário, IgG anti-rato de cabra (H+L)- PE (eBioscience). A atividade de ligação de cada anticorpo foi avaliada ao comparar a intensidade média de fluorescência (MFI) com base na análise de citometria de fluxo.

[0260] Os resultados indicam que o anticorpo com a atividade de ligação mais alta era, na ordem, anticorpo ATO1, anticorpo NB7 e anti- corpo FAN2. 2)-3 Atividade inibidora do anticorpo anti-TLR7 humano de camundongo na produção de citocinas

[0261] PBMCs humanas foram adquiridas da Cellular Technology Limited como um produto congelado e descongeladas de acordo com as instruções de uso.

[0262] As PBMCs suspensas em uma concentração de 2,5 x 105 células/ml em RPMI1640 (Life Technologies Corp.) que contém FBS a %, piruvato de sódio a 1 mM (Life Technologies Corp.), aminoácidos não essenciais MEM a 0,1 mM (Life Technologies Corp.), 2-Mercaptoe- tanol a 50 uM (Life Technologies Corp.), Penicilina a 50 U/mL e Estrep- tomicina a 50 ug/mL (Life Technologies Corp.) foram semeadas em uma placa de cultura de células com 96 cavidades a 100 uL cada e o anti- corpo anti-TLR7 humano de camundongo, anticorpo ATO1, anticorpo NB7 ou anticorpo FAN2 ou um anticorpo de controle de IgG de camun- dongo (BioLegend, Inc.) foi adicionado a 80 uL/cavidade, seguido por pré-tratamento em uma incubadora a 37 ºC durante 4 horas.

[0263] Depois disso, 1 mg/mL de CL-264 (InvivoGen) foi adicionado a 20 uL/cavidade e a mistura foi bem agitada, seguido por cultura a 37ºC durante cerca de 20 horas sob 5 % de CO. A placa foi bem agitada e depois centrifugada a 1500 rpm durante 5 minutos e a concentração de interleucina-6 (IL-6) contida no sobrenadante foi medida por meio do método FRET (Cisbio Bioassay. Inc).

[0264] A Figura 6 mostra os resultados. O anticorpo anti-TLR 7 hu- mano de camundongo suprimiu a produção de IL-6 a partir de PBMCs humanas tratadas com CL-264 de uma maneira dependente da concen- tração. O anticorpo ATO1, o anticorpo NB7 e o anticorpo FAN? inibiram a produção de IL-6 a partir de PBMCs humanas de uma maneira depen-

dente da concentração. As concentrações semi-inibidoras (IC50) do an- ticorpo ATO1, anticorpo NB7 e anticorpo FAN2 foram 192 ng/mL, 771 ng/mL e 8389 ng/mL, respectivamente, as quais foram calculadas a par- tir das concentrações dos dois valores, que são a atividade inibidora de 50 % e a atividade inibidora quando cada uma das duas concentrações foi adicionada.

[0265] Entretanto, inibição não foi observada no anticorpo de con- trole IgG de camundongo, mesmo em uma concentração de 10 ug/mL.

Exemplo 3 Determinação da Sequência de Nucleotídeos e da Sequência de Aminoácidos do cDNA que Codifica a Região Variável do Anticorpo Anti-TLR7 Humano de Camundongo 3)-1 Síntese de CDONA

[0266] O RNA total foi coletado a partir dos hibridomas de ATO1, NB7 e FAN2 usando um reagente TRIzol (Ambion). Subsequentemente, o CDNA foi sintetizado usando um kit PrimeScript 1st Strand cCDNA Synthesis (TAKARA).

3)-2 Amplificação e sequenciamento de fragmentos gênicos da região variável de cadeias pesada e leve de imunoglobulina de camundongo

[0267] As sequências de nucleotídeos que codificam as regiões va- riáveis do anticorpo contido no cDNA sintetizado foram determinadas pela GenScript Corporation.

3)-2-1 Anticorpo anti-TLR7 humano de camundongo (ATO1)

[0268] A sequência de aminoácidos codificada pela sequência de nucleotídeos do cCDNA que codifica a região variável de cadeia pesada do anticorpo ATO1 determinada acima é apresentada em SEQ ID NO: 5 na Listagem de Sequências.

[0269] A sequência de aminoácidos codificada pela sequência de nucleotídeos do cCDNA que codifica a região variável de cadeia leve do anticorpo ATO1 determinada acima é apresentada em SEQ ID NO: 11 na Listagem de Sequências.

3)-2-2 Anticorpo anti-TLR7 humano de camundongo (NB7)

[0270] A sequência de aminoácidos codificada pela sequência de nucleotídeos do cCDNA que codifica a região variável de cadeia pesada do anticorpo NB7 determinada acima é apresentada em SEQ ID NO: 7 na Listagem de Sequências.

[0271] A sequência de aminoácidos codificada pela sequência de nucleotídeos do cCDNA que codifica a região variável de cadeia leve do anticorpo NB7 determinada acima é apresentada em SEQ ID NO: 13 na Listagem de Sequências.

3)-2-3 Anticorpo anti-TLR7 humano de camundongo (FAN2)

[0272] A sequência de aminoácidos codificada pela sequência de nucleotídeos do cCDNA que codifica a região variável de cadeia pesada do anticorpo FAN2 determinada acima é apresentada em SEQ ID NO: 9 na Listagem de Sequências.

[0273] A sequência de aminoácidos codificada pela sequência de nucleotídeos do cCDNA que codifica a região variável de cadeia leve do anticorpo FAN2 determinada acima é apresentada em SEQ ID NO: 15 na Listagem de Sequências.

Exemplo 4 Produção de Anticorpo Anti-TLR7 Humano Quimérico 4)-1 Construção de vetor de expressão de anticorpo anti-TLR7 quimé- rico 4)-1-1 Construção de vetor de expressão de cadeia leve quimérica PpCMA-LK

[0274] Um fragmento de DNA (SEQ ID NO: 59) que contém um fra- gmento de aproximadamente 5,4 kb obtido por m eio de digestão do plasmídeo pcDNA3.3-TOPO/LacZ (Invitrogen Corp.) com enzimas de restrição Xbal e Pmel e uma sequência de DNA que codifica a cadeia leve humana, a sequência sinalizadora e a região constante de cadeia capa humana foram ligadas juntas usando um kit de clonagem HD PCR In-Fusion (Clontech Laboratories, Inc.) para produzir pcDNA3.3/LK. O pCMA-LK foi construído ao remover a unidade de expressão de neomi- cina do pcDNA3.3/LK. 4)-1-2 Construção do vetor de expressão de cadeia pesada de IgG1 quimérico, pcCMA-G1

[0275] Um fragmento de DNA (SEQ ID NO: 60) que contém um fra- gmento de DNA foi obtido por meio de digestão de pCMA-LK com Xbal e Pmel e ao remover a sequência sinalizadora da cadeia leve e a região constante de cadeia capa humana foi ligada a uma sequência de DNA que codifica a sequência sinalizadora de cadeia pesada humana e a região constante de IgG1 humana usando um kit de clonagem HD PCR In-Fusion (Clontech Laboratories, Inc.) para construir pCMA-G1. 4)-1-3 Construção do vetor de expressão de anticorpo anti-TLR7 hu- mano quimérico ATO1

[0276] Um fragmento de DNA que compreende a sequência de nu- cleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada do anticorpo cCATO1 representado pelos nucleotídeos 36 a 422 na sequência de nu- cleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 61 foi sintetizado (Geneart AG). O fragmento de DNA sintetizado foi inserido no local onde o pcCMA-G1 foi cortado com uma enzima de restrição, Blpl, usando um kit de clona- gem HD PCR In-Fusion (Clontech Laboratories, Inc.), deste modo, cons- truindo um vetor de expressão de cadeia pesada de anticorpo cATO1. A cadeia pesada do anticorpo CATO1 compreende a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NO: 35 que inclui a sequência sinalizadora. A sequên- cia é mostrada na Figura 7.

[0277] O fragmento de DNA (SEQ ID NO: 62) que compreende uma sequência de DNA que codifica a cadeia leve do anticorpo cATO1 foi sintetizado (Geneart AG). Usando o pCMA-LK produzido no Exemplo 4)-1-1, um vetor de expressão da cadeia leve do anticorpo cATO1 foi construído da mesma maneira conforme acima. A cadeia leve do anti- corpo cATO1 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 36 que inclui a sequência sinalizadora. A sequência é mostrada na Fi- gura 7. 4)-1-4 Construção do vetor de expressão de anticorpo anti-TLR7 hu- mano quimérico NB7

[0278] Um fragmento de DNA que compreende a sequência de nu- cleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada do anticorpo cNB7 representado pelos nucleotídeos 36 a 440 na sequência de nucle- otídeos apresentada em SEQ ID NO: 63 foi sintetizado (Geneart AG). Um vetor de expressão de cadeia pesada cNB7 foi construído da mesma maneira conforme no Exemplo 4)-1-3. A cadeia pesada do anti- corpo cNB7 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37 que inclui a sequência sinalizadora. A sequência é mostrada na Fi- gura 8.

[0279] Um fragmento de DNA (SEQ ID NO: 64) que compreende a sequência de DNA que codifica a cadeia leve cNB7 foi sintetizado (Ge- neart AG). Usando o pCMA-LK produzido no Exemplo 4)-1-1, um vetor de expressão de cadeia leve cNB7 foi construído da mesma maneira conforme no Exemplo 4)-1-3. A cadeia leve do anticorpo cNB7 compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38 que inclui a se- quência sinalizadora. A sequência é mostrada na Figura 8. 4)-1-5 Construção de vetor de expressão de anticorpo anti-TLR7 hu- mano quimérico FAN2

[0280] Um fragmento de DNA que compreende a sequência de nu- cleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada do anticorpo CFAN2? representado pelos nucleotídeos 36 a 437 na sequência de nu- cleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 65 foi sintetizado (Geneart AG). Um vetor de expressão de cadeia pesada cFAN2 foi construído da mesma maneira conforme no Exemplo 4)-1-3. A cadeia pesada do anti- corpo cFAN2 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 39 que inclui a sequência sinalizadora. A sequência é mostrada na Fi- gura 9.

[0281] Um fragmento de DNA (SEQ ID NO: 66) que compreende a sequência de DNA que codifica a cadeia leve cF AN? foi sintetizado (Ge- neart AG). Usando o pCMA-LK produzido no Exemplo 4)-1-1, um vetor de expressão de cadeia leve cF AN? foi construído da mesma maneira conforme no Exemplo 4)-1-3. A cadeia leve do anticorpo cFAN2 com- preende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 40 que inclui a sequência sinalizadora. A sequência é mostrada na Figura 9. 4)-2 Produção de anticorpo anti-TLR7 humano quimérico 4)-2-1 Produção de anticorpo ATO1 quimérico

[0282] Células FreeStyle 293F (Invitrogen Corp.) foram passadas e cultivadas de acordo com o manual. 1,2 x 10º células FreeStyle 293F (Invitrogen Corp.) na fase de crescimento logarítmico foram semeadas em um frasco de Fernbach Erlenmeyer de 3 L (Corning Incorporated) e diluídas com um meio de expressão FreeStyle293 (Invitrogen Corp.) em uma concentração de 2,0 x 10º células/mL. 0,24 mg do vetor de expres- são de cadeia pesada construído acima em 4)-1-3, 0,36 mg do vetor de expressão de cadeia leve construído acima em 4)-1-3 e 1,8 mg de Poli- etilenoimina (Polyscience %24765) foram adicionados a 40 mL de um meio Opti-Pro SFM (Invitrogen Corp.), seguido de agitação suave e re- pouso adicional durante 5 minutos. Depois disso, a mistura foi adicio- nada às células FreeStyle 293F. Após agitação da cultura em uma incu- badora a 37ºC sob 8 % de CO, durante 4 horas a 90 rom, 600 ml de meio EX-CELL VPRO (SAFC Biosciences), 18 ml de GlutaMAX | (Gibco) e 30 ml de ultrafitrado de levedura (Gibco) foram adicionados ao mesmo, seguido por agitação da cultura em uma incubadora a 37 ºC sob 8% de CO2 a 90 rom durante 7 dias e o sobrenadante da cultura obtido foi filtrado com um Filtro de Cápsula Descartável (Advantec HCCS-045-E 1H) para produzir um anticorpo ATO1 quimérico. 4)-2-2 Produção de anticorpo NB7 quimérico

[0283] Usando o vetor de expressão de cadeia pesada e o vetor de expressão de cadeia leve construídos em 4)-1-4 acima, um anticorpo NB7 quimérico foi produzido por meio do método de acordo com 4)-2-1. 4)-2-3 Produção de anticorpo FAN2 quimérico

[0284] Usando o vetor de expressão de cadeia pesada e o vetor de expressão de cadeia leve construídos em 4)-1-5 acima, um anticorpo FAN2 quimérico foi produzido por meio do método de acordo com 4)-2-

1. 4)-3 Purificação de anticorpo anti-TLR7 humano quimérico

[0285] Um anticorpo de interesse foi purificado de cada sobrena- dante de cultura obtido no Exemplo 4)-2 através de um processo em uma etapa de cromatografia de afinidade de rProteína A. O sobrena- dante da cultura foi aplicado a uma coluna (GE Healthcare Bioscience) enchida com MabSelectSuRe equilibrada com PBS e, em seguida, a coluna foi lavada com PBS em um volume de duas ou mais vezes o volume da coluna. Em seguida, a eluição foi realizada com uma solução de cloridrato de arginina a 2M (pH de 4,0) para coletar uma fração que contém o anticorpo. A fração foi submetida à substituição do tampão por PBS(-) para diálise (Slide-A-Lyzer Dialysis Cassette, Thermo Scientific). O anticorpo foi concentrado com um dispositivo de filtro UF centrífugo, VIVASPIN2O (peso molecular da fração UF 10K, Sartorius AG) para pre- parar a IgG em uma concentração de 10 mg/mL ou mais. Finalmente, filtração foi realizada com um filtro Minisart-Plus (Sartorius AG) para for- necer uma amostra purificada. Exemplo 5 Atividade In Vitro de Anticorpo Anti-TLR7 Humano Quimérico

5)-1 Atividade de ligação a antígeno do anticorpo anti-TLR7 humano quimérico por citometria de fluxo

[0286] Uma linhagem de células Ba/F3 que expressa TLR7-Flag- Hisx6/hUnc93B1-HAX2 humano foi submetida a permeação de mem- brana com saponina a 0,1 % e corada usando a série de diluições de anticorpo quimérico ATO1, anticorpo NB7 e anticorpo FAN2 nas concen- trações de anticorpo obtidas no Exemplo 4 e o anticorpo secundário Fc- PE de cabra anti-lgG humana (eBioscience). A atividade de ligação de cada anticorpo foi avaliada ao comparar a MFI com base na análise de citometria de fluxo. Os resultados indicam que o anticorpo com a ativi- dade de ligação mais elevada era, na ordem, o anticorpo quimérico ATO1 (cATO1), anticorpo NB7 quimérico (cNB7) e anticorpo FAN2 qui- mérico (cFAN2). 5)-2 Atividade inibidora do anticorpo anti-TLR7 humano quimérico na produção de citocinas

[0287] PBMCs humanas foram adquiridas a partir da Cellular Technology Limited como um produto congelado e descongeladas de acordo com as instruções de uso. As PBMCs suspensas em uma con- centração de 2,5 x 105 células/ml em RPMI1640 (Life Technologies Corp.) que contém FBS a 10 %, piruvato de sódio a 1 mM (Life Techno- logies Corp.), aminoácidos não essenciais MEM a 0,1 mM (Life Techno- logies Corp.), 2-Mercaptoetanol a 50 uM (Life Technologies Corp.), Pe- nicilina a 50 U/mL e estreptomicina a 50 ug/mL (Life Technologies Corp.) foram semeadas em uma placa de cultura de células com 96 cavidades a 100 ul cada e o anticorpo anti-TLR7 humano quimérico, cATO1, cNB7 ou cFAN?2 ou um anticorpo de controle de IgG humana (Eureka Thera- peutics) foi adicionado a 80 uL/cavidade, seguido por pré-tratamento em uma incubadora a 37 ºC durante 4 horas. Depois disso, 1 mg/mL de CL- 264 (InvivoGen) foi adicionado a 20 ul/cavidade e a mistura foi bem agitada, seguido por cultura a 37 ºC durante cerca de 20 horas sob 5%

de CO». A placa foi bem agitada e depois centrifugada a 1500 rpm du- rante 5 minutos e a concentração de IL-6 contida no sobrenadante foi medida por meio do método FRET (Cisbio Bioassay. Inc).

[0288] A Figura 10 mostra que o anticorpo anti-TLR7 humano qui- mérico suprime a produção de IL-6 a partir de PBMCs humanas tratadas com CL-264 dependendo de uma maneira dependente da concentra- ção. Os anticorpos cATO1, cNB7 e cFAN? inibiram à produção de IL-6 a partir de PBMCs humanas dependendo da concentração adicionada.

As concentrações semi-inibidoras (ICso) dos anticorpos cATO1, cNB7 e CFAN2 foram de 35 ng/mL, 196 ng/mL, 10000 ng/mL ou mais, respecti- vamente, as quais foram calculadas a partir das concentrações dos dois valores, que são a atividade inibidora de 50 % e a atividade inibidora quando cada uma das duas concentrações for adicionada.

[0289] Entretanto, inibição não foi observada no anticorpo de con- trole IGG humano, mesmo em uma concentração de 10 ug/mL.

Exemplo 6 Produção de Anticorpo Anti-TLR7 Humano Humanizado 6)-1 Concepção de anticorpo anti-TLR7 humano humanizado 6)-1-1 Modelagem molecular de regiões variáveis de anticorpos

[0290] A modelagem molecular das regiões variáveis foi realizada por meio de um método conhecido como modelagem de homologia (Me- thods in Enzymology, 203, 121-153, (1991)) usando um programa de análise de estrutura tridimensional de proteínas comercialmente dispo- nível, BioLuminate (S chrodinger K.K). O modelo usado foi uma estrutura registrada no Protein Data Bank (Nuc. Acid Res. 35, D301-D303 (2007)) com alta identidade de sequência com as regiões variáveis das cadeias pesadas e leves.

6)-1-2 Concepção da sequência de aminoácidos humanizada

[0291] Uma técnica conhecida como enxertia de CDR (Proc. Natl.

Acad. Sci. USA 86, 10029-10033 (1989)) foi usada para humanização.

Aceitadores com alta identidade foram selecionados a partir das se- quências de consenso definidas em Kabat et al. (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5º Ed. Public Health Service National Insti- tutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) e as sequências da linhagem germinativa humana registradas em IMGT (THE INTERNATIONAL IMMUNOGENETICS INFORMATION SYSTEM (marca registrada), http://www.imgt.org) e os resíduos do doador a serem transferidos para os aceitadores foram selecionados por meio de análise dos modelos tridimensionais com referência aos padrões fornecidos por Queen etal. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 10029-10033 (1989)). 6)-1-3 Concepção da sequência de aminoácidos humanizada do anti- corpo ATO1

[0292] As sequências de consenso do subgrupo 1 da cadeia gama humana e do subgrupo 1 da cadeia capa que têm alta identidade com as regiões estruturais de CATO1 foram selecionadas como os aceitado- res de CATO1. Na modelagem molecular das regiões variáveis, uma es- trutura conhecida (PDB ID:) 1E4W) foi usada como modelo. 6)-1-3-1 Humanização da cadeia pesada do anticorpo ATO1

[0293] (1) A cadeia pesada concebida foi denominada huATO1 H1 IQGILALA. huATO1 H1 IgGILALA compreende à se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 45 que inclui a sequência sinalizadora como uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada de comprimento total. A sequência é mostrada na Figura 11. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 19 é a se- quência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições 20 a 135 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 136 a 465 é a região constante. Além disso, a sequência de aminoácidos nas posições 45 a 54 é CDRH1, a sequência de aminoácidos nas posi- ções 69 a 78 é CDRH2 e a sequência de aminoácidos nas posições 118 a 124 é CDRH3.

[0294] A sequência de nucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 45 compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 67. Além disso, a sequência de nucleotídeos que codi- fica a região variável de cadeia pesada compreende a sequência apre- sentada em SEQ ID NO: 77 $ (n34).

[0295] (2) A cadeia pesada concebida foi denominada huATO1 H3 IQGILALA. huATO1 H3 IGgGI1LALA que inclui a sequência sinalizadora como uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada de comprimento completo compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 46. A sequência é mostrada na Figura 12. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 19 é a se- quência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições 20 a 135 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 136 a 465 é a região constante. Além disso, a sequência de aminoácidos nas posições 45 a 54 é CDRH1, a sequência de aminoácidos nas posi- ções 69 a 78 é CDRH2 e a sequência de aminoácidos nas posições 118 a 124 é CDRH3.

[0296] A sequência de nucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 46 compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 68. Além disso, a sequência de nucleotídeos que codi- fica a região variável de cadeia pesada compreende a sequência apre- sentada em SEQ ID NO: 78.

[0297] (3) A cadeia pesada concebida foi denominada huATO1 H3 IgG4Pro. huATO1 H3 IgG4Pro que inclui a sequência si- nalizadora como uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada de comprimento total compreende a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 47. A sequência é mostrada na Figura 13. Na se- quência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 19 é a sequência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições 20 a 135 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 136 a 462 é a região constante. Além disso, a sequência de aminoácidos nas po- sições 45 a 54 é CDRH1, a sequência de aminoácidos nas posições 69 a 78 é CDRH2 e a sequência de aminoácidos nas posições 118 a 124 é CDRH3.

[0298] A sequência de nucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 47 compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 69. Além disso, a sequência de nucleotídeos que codi- fica a região variável de cadeia pesada compreende a sequência apre- sentada em SEQ ID NO: 78.

[0299] A Figura 14 mostra a comparação da sequência de aminoá- cidos (SEQ ID NO: 5) da região variável de cATO1 H que é a cadeia pesada do anticorpo quimérico cATO1 (a qual será, daqui em diante, denominada como cATO1 H), a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 41) da região variável de cadeia pesada do anticorpo humanizado, huATO1 H1 IQGILALA (a qual será, daqui em diante, denominada como huATO1 H1) e a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 42) da região variável de huATO1 H3 IQGI1LALA (a qual será, daqui em diante, denominada como huATO1 H3). Nas sequências de huATO1 H1 e huATO1 H3, o símbolo "." representa o mesmo resíduo de aminoácido que cATO1 H e um resíduo de aminoácido substituído é mostrado no local onde o resíduo de aminoácido é descrito. 6)-1-3-2 Humanização da cadeia leve do anticorpo ATO1

[0300] A cadeia leve concebida foi denominada huATO1 L1. huATO1 L1 compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 48 que inclui a sequência sinalizadora como uma sequên- cia de aminoácidos de cadeia leve de comprimento total. A sequência é mostrada na Figura 15. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 20 é a sequência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições 21 a 126 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 127 a 233 é a região constante. Além disso, a sequência de aminoácidos nas posições 44 a 54 é CDRL1, a sequência de amino- ácidos nas posições 70 a 76 é CDRL2 e a sequência de aminoácidos nas posições 109 a 116 é CDRL3.

[0301] A sequência de nucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 48 compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 70. Além disso, a sequência de nucleotídeos que codi- fica a região variável de cadeia leve compreende a sequência apresen- tada em SEQ ID NO: 79.

[0302] A cadeia leve concebida foi denominada huATO1 L?2. huATO1 L2 compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 49 que inclui a sequência sinalizadora como uma sequên- cia de aminoácidos de cadeia leve de comprimento total. A sequência é mostrada na Figura 16. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 20 é a sequência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições 21 a 126 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 127 a 233 é a região constante. Além disso, a sequência de aminoácidos nas posições 44 a 54 é CDRL1, a sequência de amino- ácidos nas posições 70 a 76 é CDRL2 e a sequência de aminoácidos nas posições 109 a 116 é CDRL3.

[0303] A sequência de nucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 49 é apresentada em SEQ ID NO: 71. Além disso, a sequência de nucleotídeos que codifica a região variável de ca- deia leve compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 80.

[0304] A Figura 17 mostra a comparação da sequência de aminoá- cidos (SEQ ID NO: 11) da região variável de CATO1 L, a qualé a cadeia leve do anticorpo quimérico cATO1 (a qual será, daqui em diante, deno- minada como cATO1 L), a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 43) da região variável de cadeia leve do anticorpo humanizado huATO1 L1 (a qual será, daqui em diante, denominada como huATO1 L1) e a se- quência de aminoácidos (SEQ ID NO: 44) da região variável de huATO1 L2 (a qual será, daqui em diante, denominada como huATO1 L2). Nas sequências de huATO1 L1 e huATO1 L2, o símbolo "." representa o mesmo resíduo de aminoácido que cATO1 L e um resí- duo de aminoácido substituído é mostrado no local onde o resíduo de aminoácido é descrito. 6)-1-4 Concepção da sequência de aminoácidos humanizada de NB7

[0305] As sequências da linhagem germinativa humana IGHV4-30- 4*02 e IGHJ 6*01 com alta identidade com as regiões estruturais de cNB7 foram selecionadas como aceitadores de cNB7. Na modelagem molecular das regiões variáveis, uma estrutura conhecida (PDB ID: 3CDF) foi usada como modelo. 6)-1-4-1 Humanização da cadeia pesada do anticorpo NB7

[0306] (1) A cadeia pesada concebida foi denominada huNB7 H3 IgG1LALA. huNB7 H3 IgGILALA compreende a sequên- cia de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 52 que inclui a se- quência sinalizadora como uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada de comprimento total. A sequência é mostrada na Figura 18. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 19 é a se- quência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições 20 a 141 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 142 a 471 é a região constante. Além disso, a sequência de aminoácidos nas posições 45 a 55 é CDRH1, a sequência de aminoácidos nas posi- ções 70 a 78 é CDRH2, a sequência de aminoácidos nas posições 118 a 130 é CDRH3.

[0307] A sequência de nucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52 é apresentada em SEQ ID NO: 72. Além disso, a sequência de nucleotídeos que codifica a região variável de ca- deia pesada compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 81.

[0308] (2) A cadeia pesada concebida foi denominada hunNB7 H3 IgG4Pro. hunB7 H3 IgG4Pro compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 54 que inclui a sequência sinalizadora como uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada de comprimento total. A sequência é mostrada na Figura 19. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 19 é a sequência sinali- zadora, a sequência de aminoácidos nas posições 20 a 141 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 142 a 468 é a re- gião constante. Além disso, a sequência de aminoácidos nas posições 45 a 55 é CDRH1, a sequência de aminoácidos nas posições 70 a 78 é CDRH2, a sequência de aminoácidos nas posições 118 a 130 é CDRH3.

[0309] A sequência de nucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54 é apresentada em SEQ ID NO: 73. Além disso, a sequência de nucleotídeos que codifica a região variável de ca- deia pesada compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 81.

[0310] A Figura 20 mostra a comparação da sequência de aminoá- cidos (SEQ ID NO: 7) da região variável de cNB7 H, que é a cadeia pesada do anticorpo quimérico cNB7 (a qual será, daqui em diante, de- nominada como cNB7 H) e a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 50) da região variável de cadeia pesada do anticorpo humanizado huNB7 H3 IgG1LALA (a qual será, daqui em diante, denominada como huNB7 H3). Em huNB7 H3,o símbolo "3" representa o mesmo resíduo de aminoácido que aquele de cNB7 H e um resíduo de aminoácido substituído é mostrado no local onde o resíduo de aminoácido é des- crito.

6)-1-4-2 Humanização da cadeia leve do anticorpo NB7

[0311] A cadeia leve concebida foi denominada huNB7 L3. huNB7 L3 compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 53 que inclui a sequência sinalizadora como uma sequên- cia de aminoácidos de cadeia leve de comprimento total. A sequência é mostrada na Figura 21. Na sequência, a sequência de aminoácidos nas posições 1 a 20 é a sequência sinalizadora, a sequência de aminoácidos nas posições 21 a 126 é a região variável e a sequência de aminoácidos nas posições 127 a 233 é a região constante. Além disso, a sequência de aminoácidos nas posições 44 a 54 é CDRL1, a sequência de amino- ácidos nas posições 70 a 76 é CDRL2 e a sequência de aminoácidos nas posições 109 a 116 é CDRL3.

[0312] A sequência de nucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 53 é apresentada em SEQ ID NO: 74. Além disso, a sequência de nucleotídeos que codifica a região variável de ca- deia leve compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 82.

[0313] A Figura 22 mostra a comparação da sequência de aminoá- cidos (SEQ ID NO: 13) da região variável de cCNB7 L, a qual é a cadeia leve do anticorpo quimérico cNB7 (a qual será, daqui em diante, deno- minada como cNB7 L) e a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 51) da região variável de cadeia leve do anticorpo humanizado huNB7 L3 (a qual será, daqui em diante, denominada como huNB7 L3). Em hunNB7 L3, o símbolo "." representa o mesmo resíduo de aminoácido que aquele de cNB7 L e um resíduo de aminoácido substituído é mos- trado no local onde o resíduo de aminoácido é descrito. 6)-2 Concepção de anticorpo humanizado ao combinar cadeias pesa- das e leves 6)-2-1 Concepção de anticorpo anti-TLR7 ATO1 humanizado

[0314] (1) Um anticorpo que compreende huATO1 H1 IgGILALA que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 em SEQ ID NO: 45 como a cadeia pesada e huATO1 L1 que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 em SEQ ID NO: 48 como a cadeia leve foi denominado "anticorpo huATO1 H1L1 IQGILALA" ou "huATO1 HIL1 IGGILALA".

[0315] (2) Um anticorpo que compreende huATO1 H3 IgGILALA que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 em SEQ ID NO: 46 como a cadeia pesada e huATO1 L1 que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 em SEQ ID NO: 48 como a cadeia leve foi denominado "anticorpo huATO1 H3L1 IGGILALA" ou "huATO1 H3L1 IQGILALA".

[0316] (3) Um anticorpo que compreende huATO1 H3 IgGILALA que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 em SEQ ID NO: 46 como a cadeia pesada e huATO1 L2 que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 em SEQ ID NO: 49 como a cadeia leve foi denominado "anticorpo huATO1 H3L2 IGGILALA" ou "huATO1 H3L2 IQGILALA".

[0317] (4) Um anticorpo que compreende huATO1 H3 IgG4Pro que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 20 a 462 em SEQ ID NO: 47 como a cadeia pesada e huATO1 L2 que consiste na sequên- cia de aminoácidos nas posições 21 a 233 em SEQ ID NO: 49 como a cadeia leve foi denominado "anticorpo huATO1 H3L2 IgG4Pro" ou "huATO1 H3L2 IgG4Pro". 6)-2-2 Concepção de anticorpo anti-TLR7 humanizado NB7

[0318] (1) Um anticorpo que consiste em huNB7 H3 IgGILALA que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 20 a 471 em SEQ ID NO: 52 como a cadeia pesada e huNB7 L3 que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 em SEQ ID NO: 53 como a a cadeia leve foi denominado "anticorpo hunNB7 H3L3 IGGI1LALA" ou "huNB7 H3L3 IQGI1LALA".

[0319] (2) Um anticorpo que consiste em huNB7 H3 IgG4Pro que consiste na sequência de aminoácidos nas posições 20 a 468 em SEQ ID NO: 54 como a cadeia pesada e huNB7 L3 que consiste na sequên- cia de aminoácidos nas posições 21 a 233 em SEQ ID NO: 53 como o a cadeia leve foi denominada "anticorpo huNB7 H3L3 IgG4Pro" ou "hunB7 H3L3 IgG4Pro". 6)-3 Produção de anticorpo anti-TLR7 humano humanizado 6)-3-1 Construção de vetor de expressão de cadeia pesada de tipo

IgG1LALA humanizado, pcCMA-GI1LALA

[0320] PpCMA-GILALA foi construído da mesma maneira conforme no Exemplo 4)-1-2 usando fragmentos de DNA que compreendem as sequências de nucleotídeos que codificam as sequências de aminoáci- dos da sequência sinalizadora de cadeia pesada humana e a região constante de IGG1LALA humana (SEQ ID NO: 75) 6)-3-2 Construção de vetor de expressão de cadeia pesada de tipo IgG4Pro humanizado, pc MA-G4Pro

[0321] pCMA-G4Pro foi construído da mesma maneira conforme no Exemplo 4)-1-2 usando fragmentos de DNA que compreendem as se- quências de nucleotídeos que codificam as sequências de aminoácidos da sequência sinalizadora de cadeia pesada humana e a região cons- tante de I9gG4Pro humana (SEQ I1D6)-3-3 Construção do vetor de ex- pressão de cadeia pesada humanizado ATO1 6)-3-3-1 Construção do vetor de expressão huATO1 H1 IgGILALA

[0322] Um fragmento de DNA representado pelos nucleotídeos 36 a 422 na sequência de nucleotídeos de huATO1 H1 IGgGI1LALA apre- sentada em SEQ ID NO: 46 foi sintetizado (Geneart AG). O fragmento de DNA sintetizado foi inserido no local onde pcCMA-GILALA foi cortado com uma enzima de restrição, Blpl, usando um kit de clonagem HD PCR In-Fusion (Clontech Laboratories, Inc.), deste modo, construindo um ve- tor de expressão huATO1 H1 IgG1LALA. 6)-3-3-2 Construção do vetor de expressão huATO1 H3 IgGILALA

[0323] Um fragmento de DNA representado pelos nucleotídeos 36 a 422 na sequência de nucleotídeos de huATO1 H3 IgG1LALA apre- sentada em SEQ ID NO: 68 foi sintetizado (Geneart AG). Um vetor de expressão huATO1 H3 IgGI1LALA foi construído da mesma maneira conforme no Exemplo 6)-3-3-1. 6)-3-3-3 Construção do vetor de expressão huATO1 H3 IgG4Pro

[0324] Um fragmento de DNA representado pelos nucleotídeos 36 a 422 na sequência de nucleotídeos de huATO1 H3 IgG4Pro apresen- tada em SEQ ID NO: 69 foi sintetizado (Geneart AG). O fragmento de DNA sintetizado foi inserido no local onde pc MA-G4Pro foi cortado com uma enzima de restrição, Blpl, usando um kit de clonagem HD PCR In- Fusion (Clontech Laboratories, Inc.), deste modo, construindo um vetor de expressão huATO1 H3 IgG4Pro.

6)-3-4 Construção do vetor de expressão de cadeia leve humanizado ATO1 6)-3-4-1 Construção do vetor de expressão huATO1 L1

[0325] Um fragmento de DNA representado pelos nucleotídeos 37 a 399 na sequência de nucleotídeos de huATO1 L1 apresentada em SEQ ID NO: 70 foi sintetizado (Geneart AG). O fragmento de DNA sin- tetizado foi inserido no local onde pC MA-LK foi cortado com uma enzima de restrição, BsiW|l, usando um kit de clonagem HD PCR In-Fusion (Clontech Laboratories, Inc.), deste modo, construindo um vetor de ex- pressão huATO1 L1.

6)-3-4-2 Construção do vetor de expressão huATO1 L2

[0326] Um fragmento de DNA representado pelos nucleotídeos 37 a 399 na sequência de nucleotídeos de huATO1 L2 apresentada em SEQ ID NO: 71 foi sintetizado (Geneart AG). Um vetor de expressão huATO1 L1 foi construído da mesma maneira conforme no Exemplo 6)- 3-4-1 usando um kit de clonagem HD PCR In-Fusion (Clontech Labora- tories, Inc).

6)-3-5 Construção do vetor de expressão de cadeia pesada humanizado NB7 6)-3-5-1 Construção do vetor de expressão huNB7 H3 IgG1ILALA

[0327] Um fragmento de DNA representado pelos nucleotídeos 36 a 440 na sequência de nucleotídeos de huNB7 H3 IgG1LALA apresen- tada em SEQ ID NO: 72 foi sintetizado (Geneart AG). Um vetor de ex-

pressão huNB7 H3 IgG1LALA foi construído da mesma maneira con- forme no Exemplo 6)-3-3-1. 6)-3-5-2 Construção do vetor de expressão huNB7 H3 IgG4Pro

[0328] Um fragmento de DNA representado pelos nucleotídeos 36 a 440 na sequência de nucleotídeos de huNB7 H3 IgG4Pro apresen- tada em SEQ ID NO: 73 foi sintetizado (Geneart AG). Um vetor de ex- pressão hunNB7 H3 IgG4Pro foi construído da mesma maneira con- forme no Exemplo 6)-3-3-3. 6)-3-6 Construção do vetor de expressão de cadeia leve humanizado NB7 6)-3-6-1 Construção do vetor de expressão huNB7 L3

[0329] Um fragmento de DNA representado pelos nucleotídeos 37 a 399 na sequência de nucleotídeos de huNB7 L3 apresentada em SEQ ID NO: 74 foi sintetizado (Geneart AG). Um vetor de expressão hunNB7 L3 foi construído da mesma maneira conforme no Exemplo 6)- 3-4-1 usando um kit de clonagem HD PCR In-Fusion (Clontech Labora- tories, Inc). 6)-3-7 Preparação de anticorpos humanizados 6)-3-7-1 Produção de anticorpos humanizados

[0330] Os anticorpos humanizados huATO1l HI1L1 IGGILALA, huATO1 H3L1 IQGILALA, huATO1 H3L2 IgGI1LALA, huATO1 H3L2 IgG4Pro, huNB7 H3L3 IQGILALA e huNnNB7 H3L3 IgG4Pro foram produzidos ao combinar as cadeias pesa- das e cadeias leves concebidas no Exemplo 6)-2 usando os vetores de expressão construídos nos Exemplos 6)-3-1 a 6)-3-6 da mesma maneira conforme no Exemplo 4)-2. 6)-3-7-2 Purificação de anticorpos humanizados

[0331] O sobrenadante da cultura obtido no Exemplo 6)-3-7-1 foi purificado por meio de um processo em duas etapas de cromatografia por afinidade de rProteína A e cerâmica hidroxiapatita.

[0332] O sobrenadante da cultura foi aplicado a uma coluna (GE Healthcare Bioscience) enchida com MabSelectSuRe equilibrada com PBS e, em seguida, a coluna foi lavada com PBS em um volume de duas ou mais vezes o volume da coluna. A seguir, cada anticorpo foi eluído com uma solução de cloridrato de arginina a 2M (pH de 4,0).

[0333] A fração que contém o anticorpo foi submetida à substituição de tampão por PBS para diálise (Slide-A-Lyzer Dialysis Cassette, Thermo Scientific), diluído 5 vezes com um tampão de fosfato de sódio a 5 MM/MES a 50 mM/pH de 7,0 e aplicada a uma coluna de cerâmica hidroxiapatita (| apan Bio-Rad Laboratories, Inc., Bio-Scale CHT Type-1 Hydroxyapatite Column) equilibrada com um tampão de NaPi a 5 MM/MÊS a 50 MM/NaCl a 30 mMM/pH de 7,0.

[0334] Foi realizada eluição em gradiente de uma concentração |i- near com cloreto de sódio e coletada uma fração que contém o anti- corpo. A fração foi submetida à substituição do tampão por HBSor (his- tidina a 25 mM/sorbitol a 5 %, pH de 6,0) para diálise (Slide-A-Lyzer Dialysis Cassette, Thermo Scientific). O anticorpo foi concentrado com um dispositivo de filtro UF centrífugo, VIVASPIN20 (peso molecular da fração UF10K, Sartorius AG) para preparar a IgG na concentração de 50 mg/mL. Finalmente, filtração foi realizada com um filtro Minisart-Plus (Sartorius AG) para fornecer uma amostra purificada. Exemplo 7 Atividade In Vitro de Anticorpo Anti-TLR7 Humano Humanizado 7)-1 Atividade inibidora do anticorpo anti-TLR7 humano humanizado na produção de citocinas

[0335] PBMCs humanas foram adquiridas a partir da Cellular Technology Limited como um produto congelado e descongeladas de acordo com as instruções de uso.

[0336] As PBMCs suspensas em uma concentração de 2,5 x 105 células/ml em RPMI1640 (Life Technologies Corp.) que contém FBS a

%, piruvato de sódio a 1 mM (Life Technologies Corp.), aminoácidos não essenciais MEM a 0,1 mM (Life Technologies Corp.), 2-Mercaptoe- tanol a 50 uM (Life Technologies Corp.), 50 U/mL de Penicilina e 50 upg/mL de E streptomicina (Life Technologies Corp.) foram semeadas em uma placa de cultura de células com 96 cavidades a 100 ul cada e o anticorpo anti-TLR7 humano humanizado, huATO1 H1L1 IgGILALA, huATO1 H3L1 IQGILALA, huATO1 H3L2 IQGILALA, huATO1 H3L2 IgG4Pro, hunB7 H3L3 IQGILALA ou hunNB7 H3L3 IgG4Pro ou um anticorpo de controle de IgG humana (Eureka Therapeutics) foi adicionado a 80 uL/cavidade, seguido de pré- tratamento em uma incubadora a 37 ºC durante 4 horas.

[0337] Posteriormente, 1 mg/mL de CL-264 (InvivoGen) foi adicio- nado a 20 uL/cavidade e a mistura foi bem agitada, seguido por cultura a 37ºC durante cerca de 20 horas sob 5 % de CO».

[0338] A placa foi bem agitada e depois centrifugada a 1500 rom durante 5 minutos e a concentração de IL-6 contida no sobrenadante foi medida por meio do método FRET (Cisbio Bioassay. Inc).

[0339] A Figura 23 mostra que o anticorpo anti-TLR7 humano hu- manizado suprime a produção de IL-6 a partir de PBMCs humanas tra- tadas com CL-264 de uma maneira dependente da concentração.

[0340] Os anticorpos huATO1 HI1L1 IQGILALA, huATO1 H3L1 IQGILALA, huATO1 H3L2 IQGILALA, huATO1 H3L2 IgG4Pro, hunB7 H3L3 IgGILALA e hunNB7 H3L3 IgG4Pro inibiram a produção de IL-6 a partir das PBMC humanas de um modo dependente da concentração.

[0341] As concentrações semi-inibidoras (ICso) dos anticorpos huATO1 HI1L1 IQGILALA, huATO1 H3L1 IQGILALA, huATO1 H3L2 IQGILALA, huATO1 H3L2 IgG4Pro, hunNB7 H3L3 IgGI1LALA e huNB7 H3L3 IgG4Pro foram de 74 ng/ml, 138 ng/ml, 38 ng/ml, 24 ng/ml, 307 ng/mL e 31 ng/mL, respectivamente,

as quais foram calculadas a partir das concentrações dos dois valores, os quais são ambos a atividade inibidora de 50 % e a atividade inibidora quando cada uma das duas concentrações foi adicionada. Exemplo 8 Confirmação da Ligação do Antígeno ao Anticorpo Anti-TLR7 Hu- mano Humanizado 8)-1 Preparação de células HE K293 que expressam TLR7 humano (va- riante 1)-Flag

[0342] Células T HEK293 Lenti? X (marca registrada) (Clontech La- boratories, Inc.) em uma concentração de 4,5 x 1056 células/frasco foram semeadas em um frasco de 75 cm? (Sumitomo Bakelite Co., Ltda.) e cultivadas durante a noite em um meio DMEM (FUJ IFILM Wako Pure Chemical Corporation) que contém FBS a 10 %, 50 U/mL de penicilina e 50 ug/mL de estreptomicina (Life Technologies Corp.) sob condições de 37ºC e 5% de CO».

[0343] No dia seguinte, plasmídeos que expressam pcDNA3.1? TLR7 humano (variante 1)-Flag, produzidos pela GenScript Corporation, foram transfectados em células T Lenti? X (marca registrada) HEK293 (Clontech Laboratories, Inc.) usando um reagente de transfecção, Lipo- fectamine (marca registrada) 2000 (Life Technologies Corp.) e as célu- las foram posteriormente cultivadas durante a noite sob condições de 37ºC e 5% de CO».

[0344] No dia seguinte, as células introduzidas através do plasmí- deo de expressão foram tratadas com TrypLE Express (Life Technolo- gies Corporation) e as células, após o tratamento, foram lavadas com um tampão de coloração para citometria de fluxo (Life Technologies Corporation) e posteriormente suspensas em um tampão de coloração para citometria de fluxo (Life Technologies Corporation). A suspensão celular obtida foi usada na análise de citometria de fluxo.

[0345] Foi confirmado que o TLR7 humano foi expresso nas células transfectadas com os plasmídeos que expressam pcDNA3.1? TLR7 hu- mano (variante 1)-Flag através de citometria de fluxo (Miltenyi Biotec K.K.) usando um anticorpo anti-Flag-PE (BioLegend, Inc.) ou um anti- corpo de controle de isotipo (BioLegend, Inc.) como um controle nega- tivo.

[0346] A sequência de aminoácidos de TLR7 humano (variante 1) e uma sequência de polinucleotídeo que codifica a sequência de aminoá- cidos são apresentadas em SEQ ID NOs: 2 e 1 na Listagem de Sequên- cias, respectivamente. 8)-2 Preparação de células HEK293 que expressam forçosamente TLR7 humano (variante 2)-Flag

[0347] Células T HEK293 Lenti? X (marca registrada) (Clontech La- boratories, Inc.) em uma concentração de 4,5 x 1056 células/frasco foram semeadas em um frasco de 75 cm? (Sumitomo Bakelite Co., Ltda.) e cultivadas durante a noite em um meio DMEM (FUJ IFILM Wako Pure Chemical Corporation) que contém FBS a 10 %, 50 U/mL de penicilina e 50 ug/mL de estreptomicina (Life Technologies Corp.) sob condições de 37 ºC e 5% de CO».

[0348] No dia seguinte, plasmídeos que expressam pcDNA3.1? TLR7 humano (variante 2)-Flag, produzidos pela GenScript Biotech Cor- poration, foram transfectados em células T Lenti? X (marca registrada) HEK293 (Clontech Laboratories, Inc.) usando um reagente de transfec- ção, Lipofectamine (marca registrada) 2000 (Life Technologies Corp.) e as células foram posteriormente cultivadas durante a noite sob condi- ções de 37 ºC e 5% de CO».

[0349] No dia seguinte, as células transfectadas com o vetor de ex- pressão foram tratadas com TrypLE Express (Life Technologies Corpo- ration) e as células, após o tratamento, foram lavadas com um tampão de coloração para citometria de fluxo (Life Technologies Corporation) e depois suspensas em um tampão de coloração para citometria de fluxo

(Life Technologies Corporation). A suspensão celular obtida foi usada na análise de citometria de fluxo.

[0350] Foi confirmado que o TLR7 humano foi expresso nas células transfectadas com os plasmídeos que expressam pcDNA3.1? TLR7 hu- mano (variante 2)-Flag através de citometria de fluxo (Miltenyi Biotec K.K.) usando um anticorpo anti-Flag-PE (BioLegend, Inc.) ou um anti- corpo de controle de isotipo (BioLegend, Inc.) como um controle nega- tivo. 8)-3 Preparação de células HEK293 que expressam TLR7-Flag de ma- caco

[0351] Células T HEK293 Lenti? X (marca registrada) (Clontech La- boratories, Inc.) em uma concentração de 4,5 x 10º células/frasco foram semeadas em um frasco de 75 cm? (Sumitomo Bakelite Co., Ltda.) e cultivadas durante a noite em um meio DMEM (FUJ IFILM Wako Pure Chemical Corporation) que contém FBS a 10 %, 50 U/mL de penicilina e 50 ug/mL de estreptomicina (Life Technologies Corp.) sob condições de 37 ºC e 5% de CO».

[0352] No dia seguinte, plasmídeos que expressam pcDNA3.1? ma- caco TLR7-Flag, produzidos pela GenScript Corporation, foram trans- fectados em células T Lenti? X (marca registrada) HEK293 (Clontech Laboratories, Inc.) usando um reagente de transfecção, Lipofectamine (marca registrada) 2000 (Life Technologies Corp.) e as células foram posteriormente cultivadas durante a noite sob condições de 37 ºCe5% de CO».

[0353] No dia seguinte, as células transfectadas com o vetor de ex- pressão foram tratadas com TrypLE Express (Life Technologies Corpo- ration) e as células, após o tratamento, foram lavadas com um tampão de coloração para citometria de fluxo (Life Technologies Corporation) e depois suspensas em um tampão de coloração para citometria de fluxo (Life Technologies Corporation). A suspensão celular obtida foi usada na análise de citometria de fluxo.

[0354] Foi confirmado que o TLR7 de macaco foi expresso nas cé- lulas transfectadas com os plasmídeos que expressam pcDNA3.1? TLR7-Flag de macaco através de citometria de fluxo (Miltenyi Biotec K.K.), usando um anticorpo anti-Flag-PE (BioLegend, Inc.) ou um anti- corpo de controle de isotipo (BioLegend, Inc.) como controle negativo. 8)-4 Preparação de células HEK293 que expressam TLR7-Flag de ca- mundongo

[0355] Células T HEK293 Lenti? X (marca registrada) (Clontech La- boratories, Inc.) em uma concentração de 4,5 x 1056 células/frasco foram semeadas em um frasco de 75 cm? (Sumitomo Bakelite Co., Ltda.) e cultivadas durante a noite em um meio DMEM (FUJ IFILM Wako Pure Chemical Corporation) que contém FBS a 10 %, 50 U/mL de penicilina e 50 ug/mL de estreptomicina (Life Technologies Corp.) sob condições de 37 ºC e 5% de CO».

[0356] No dia seguinte, plasmídeos que expressam pcDNA3.1? ca- mundongo TLR7-Flag, produzidos pela GenScript Corporation, foram transfectados em células T Lenti? X (marca registrada) HEK293 (Clon- tech Laboratories, Inc.) usando um reagente de transfecção, Lipofecta- mine (marca registrada) 2000 (Life Technologies Corp.) e as células fo- ram posteriormente cultivadas durante a noite sob condições de 37 ºC e 5% de CO>.

[0357] No dia seguinte, as células transfectadas com o vetor de ex- pressão foram tratadas com TrypLE Express (Life Technologies Corpo- ration) e as células, após o tratamento, foram lavadas com um tampão de coloração para citometria de fluxo (Life Technologies Corporation) e depois suspensas em um tampão de coloração para citometria de fluxo (Life Technologies Corporation). A suspensão celular obtida foi usada na análise de citometria de fluxo.

[0358] Foi confirmado que o TLR7 de macaco foi expresso nas cé- lulas transfectadas com os plasmídeos que expressam pcDNA3.1? TLR7-Flag de camundongo através de citometria de fluxo (Miltenyi Bio- tec K.K.), usando um anticorpo anti-Flag-PE (BioLegend, Inc.) ou um anticorpo de controle de isotipo (BioLegend, Inc.) como controle nega- tivo. 8)-5 Preparação de células HEK293 que expressam TLR7-Flag de rato

[0359] Células T HEK293 Lenti? X (marca registrada) (Clontech La- boratories, Inc.) em uma concentração de 4,5 x 10º células/frasco foram semeadas em um frasco de 75 cm? (Sumitomo Bakelite Co., Ltda.) e cultivadas durante a noite em um meio DMEM (FUJIFI LM Wako Pure Chemical Corporation) que contém FBS a 10 %, 50 U/mL de penicilina e 50 ug/mL de estreptomicina (Life Technologies Corp.) sob condições de 37 ºC e 5% de CO».

[0360] No dia seguinte, plasmídeos que expressam pcDNA3.1? TLR7-Flag de rato, produzidos pela GenScript Corporation, foram trans- fectados em células T Lenti? X (marca registrada) HEK293 (Clontech Laboratories, Inc.) usando um reagente de transfecção, Lipofectamine (marca registrada) 2000 (Life Technologies Corp.) e as células foram posteriormente cultivadas durante a noite sob condições de 37 ºCe5% de CO».

[0361] No dia seguinte, as células transfectadas com o vetor de ex- pressão foram tratadas com TrypLE Express (Life Technologies Corpo- ration) e as células, após o tratamento, foram lavadas com um tampão de coloração para citometria de fluxo (Life Technologies Corporation) e depois suspensas em um tampão de coloração para citometria de fluxo (Life Technologies Corporation). A suspensão celular obtida foi usada na análise de citometria de fluxo.

[0362] Foi confirmado que o TLR7 de macaco foi expresso nas cé- lulas transfectadas com os plasmídeos que expressam pcDNA3.1? rato

TLR7-Flag através de citometria de fluxo (Miltenyi Biotec K.K.), usando um anticorpo anti-Flag-PE (BioLegend, Inc.) ou um anticorpo de controle de isotipo (BioLegend, Inc.) como um controle negativo. 8)-6 Avaliação da seletividade de ligação do anticorpo anti-TLR7 hu- mano humanizado através de citometria de fluxo

[0363] Células HEK293 que expressam TLR7 humano (variante 1)- Flag preparadas em 8)-1, células HEK293 que expressam TLR7 hu- mano (variante 2)-Flag preparadas em 8)-2, células HEK293 que ex- pressam TLR7-Flag de macaco preparadas em 8)-3, células HEK293 que expressam TLR7-Flag de camundongo preparadas em 8)-4 e célu- las HEK293 que expressam TLR 7-Flag de rato preparadas em 8)-5 fo- ram imobilizadas/submetidas à permeação de membrana com Fixation and Permeabilization S olution (Becton, Dickinson e Company) e, poste- riormente, coradas usando huATO1 H3L2 IgGI1LALA, o qual é um dos anticorpos anti-TLR7 humano humanizados e Alexa Fluor (marca regis- trada) 647 AffiniPure Cabra anti-lgG + IgM humana (H + L) (Jackson ImmunoR esearch Inc.), o qual é o anticorpo secundário.

[0364] A ligação do anticorpo anti-TLR7 humano humanizado ao TLR7 humano foi detectada com base em citometria de fluxo (Miltenyi Biotec K.K.) e os dados foram analisados usando um software (Flowjo) que analisa os dados de citometria de fluxo.

[0365] Os resultados indicam que huATO1 H3L2 IGgGI1LALA, o qual é um dos anticorpos anti-TLR7 humano humanizados, se ligou especi- ficamente ao TLR7 humano (variante 1), TLR7 humano (variante 2) ou TLR7 de macaco e não se ligou ao TLR7 de camundongo ou TLR7 de rato. As Figuras 25 a 29 mostram os resultados. Aplicabilidade Industrial

[0366] O anticorpo anti-TLR7 humanizado da presente invenção tem uma ação supressora de atividade inibidora da função do TLR7 hu- mano e, portanto, pode ser um agente para tratar ou prevenir doenças relacionadas à inflamação imune e assim por diante.

Listagem de Sequências

SEQ ID NO: 1: Sequência de nucleotídeos que codifica o TLR7 humano (variante 1)

SEQ ID NO: 2: sequência de aminoácidos de TLR7 humano (variante 1)

SEQ ID NO: 3: sequência de nucleotídeos que codifica o TLR7 humano (variante 2)

SEQ ID NO: 4: sequência de aminoácidos de TLR7 humano (variante 2)

SEQ ID NO: 5: sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada do anticorpo ATO1

SEQ ID NO: 6: sequência de nucleotídeos que codifica a re- gião variável de cadeia pesada do anticorpo cATO1

SEQ ID NO: 7: sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada do anticorpo NB7

SEQ ID NO: 8: sequência de nucleotídeos que codifica a re- gião variável de cadeia pesada do anticorpo cNB7

SEQ ID NO: 9: sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada do anticorpo FAN2

SEQ ID NO: 10: Sequência de nucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada do anticorpo cFAN2

SEQ ID NO: 11: sequência de aminoácidos da região variá- vel de cadeia leve do anticorpo ATO1

SEQ ID NO: 12: Sequência de nucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve do anticorpo cATO1

SEQ ID NO: 13: sequência de aminoácidos da região variá- vel de cadeia leve do anticorpo NB7

SEQ ID NO: 14: Sequência de nucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve do anticorpo cNB7

SEQ ID NO: 15: sequência de aminoácidos da região variá- vel de cadeia leve do anticorpo FAN2

SEQ ID NO: 16: Sequência de nucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve do anticorpo cFAN2

SEQ ID NO: 17: sequência de aminoácidos de CDRH1 do anticorpo ATO1

SEQ ID NO: 18: sequência de aminoácidos de CDRH2 do anticorpo ATO1

SEQ ID NO: 19: sequência de aminoácidos de CDRH3 do anticorpo ATO1

SEQ ID NO: 20: sequência de aminoácidos de CDRL1 do anticorpo ATO1

SEQ ID NO: 21: sequência de aminoácidos de CDRL2 do anticorpo ATO1

SEQ ID NO: 22: sequência de aminoácidos de CDRL3 do anticorpo ATO1

SEQ ID NO: 23: sequência de aminoácidos de CDRH1 do anticorpo NB7

SEQ ID NO: 24: sequência de aminoácidos de CDRH2 do anticorpo NB7

SEQ ID NO: 25: sequência de aminoácidos de CDRH3 do anticorpo NB7

SEQ ID NO: 26: sequência de aminoácidos de CDRL1 do anticorpo NB7

SEQ ID NO: 27: sequência de aminoácidos de CDRL2 do anticorpo NB7

SEQ ID NO: 28: sequência de aminoácidos de CDRL3 do anticorpo NB7

SEQ ID NO: 29: sequência de aminoácidos de CDRH1 de anticorpo FAN2

SEQ ID NO: 30: sequência de aminoácidos de CDRH2 do anticorpo FAN2

SEQ ID NO: 31: sequência de aminoácidos de CDRH3 do anticorpo FAN2

SEQ ID NO: 32: sequência de aminoácidos de CDRL1 do anticorpo FAN2

SEQ ID NO: 33: sequência de aminoácidos de CDRL2 do anticorpo FAN2

SEQ ID NO: 34: sequência de aminoácidos de CDRL3 do anticorpo FAN2

SEQ ID NO: 35: sequência de aminoácidos da cadeia pe- sada do anticorpo anti-TLR7 humano quimérico ATO1 (cATO1)

SEQ ID NO: 36: sequência de aminoácidos da cadeia leve do anticorpo anti-TLR7 humano quimérico ATO1 (cATO1)

SEQ ID NO: 37: sequência de aminoácidos da cadeia pe- sada do anticorpo anti-TLR7 humano quimérico NB7 (cNB7)

SEQ ID NO: 38: sequência de aminoácidos da cadeia leve do anticorpo anti-TLR7 humano quimérico NB7 (cNB7)

SEQ ID NO: 39: sequência de aminoácidos da cadeia pe- sada do anticorpo anti-TLR7 humano quimérico FAN2 (cFAN2)

SEQ ID NO: 40: Sequência de aminoácidos da cadeia leve do anticorpo anti-TLR7 humano quimérico FAN2 (cFAN2)

SEQ ID NO: 41: Sequência de aminoácidos da região variá- vel de cadeia pesada de huATO1 H1 IgG1ILALA

SEQ ID NO: 42: Sequência de aminoácidos da região variá- vel de cadeia pesada de huATO1 H3 IgG1LALA

SEQ ID NO: 43: Sequência de aminoácidos da região variá- vel de cadeia leve de huATO1 L1

SEQ ID NO: 44: Sequência de aminoácidos da região variá- vel de cadeia leve de huATO1 L2

SEQ ID NO: 45: Sequência de aminoácidos de huATO1 H1 IGG1LALA

SEQ ID NO: 46: Sequência de aminoácidos de huATO1 H3 IGG1LALA

SEQ ID NO: 47: Sequência de aminoácidos de huATO1 H3 IgG4Pro

SEQ ID NO: 48: Sequência de aminoácidos de huATO1 L1

SEQ ID NO: 49: Sequência de aminoácidos de huATO1 L2

SEQ ID NO: 50: Sequência de aminoácidos da região variá- vel de cadeia pesada de huNB7 H3 IgG1ILALA

SEQ ID NO: 51: Sequência de aminoácidos da região variá- vel de cadeia leve de huNB7 L3

SEQ ID NO: 52: Sequência de aminoácidos de hunB7 H3 IgGILALA

SEQ ID NO: 53: Sequência de aminoácidos de huNB7 L3

SEQ ID NO: 54: Sequência de aminoácidos de hunNB7 H3 IgG4Pro

SEQ ID NO: 55: Sequência de nucleotídeos do gene Unc93B1 humano

SEQ ID NO: 56: Sequência de nucleotídeos do gene de TLR7 de camundongo

SEQ ID NO: 57: Sequência de nucleotídeos do gene de TLR7 de rato

SEQ ID NO: 58: Sequência de nucleotídeos do gene de TLR7 de macaco

SEQ ID NO: 59: Sequências de nucleotídeos de fragmentos de DNA que compreendem sequências de nucleotídeos que codificam a sequência sinalizadora de cadeia leve humana e a região constante de cadeia capa humana

SEQ ID NO: 60: Sequências de nucleotídeos de fragmentos de DNA que compreendem sequências de nucleotídeos que codificam a sequência sinalizadora de cadeia pesada humana e região constante de I9G1 humana

SEQ ID NO: 61: Sequência de nucleotídeos que codifica a cadeia pesada do anticorpo cATO1

SEQ ID NO: 62: Sequência de nucleotídeos do fragmento de DNA que compreende a sequência de nucleotídeos que codifica a ca- deia leve do anticorpo cCATO1

SEQ ID NO: 63: Sequência de nucleotídeos que codifica a cadeia pesada do anticorpo cNB7

SEQ ID NO: 64: Sequência de nucleotídeos do fragmento de DNA que compreende a sequência de nucleotídeos que codifica a ca- deia leve do anticorpo cNB7

SEQ ID NO: 65: Sequência de nucleotídeos que codifica a cadeia pesada do anticorpo cFAN2

SEQ ID NO: 66: Sequência de nucleotídeos do fragmento de DNA que compreende a sequência de nucleotídeos que codifica a ca- deia leve do anticorpo cFAN2

SEQ ID NO: 67: Sequência de nucleotídeos que codifica huATO1 H1 IgGI1LALA

SEQ ID NO: 68: Sequência de nucleotídeos que codifica huATO1 H3 IGG1LALA

SEQ ID NO: 69: Sequência de nucleotídeos que codifica huATO1 H3 IgG4Pro

SEQ ID NO: 70: Sequência de nucleotídeo que codifica huATO1 L1

SEQ ID NO: 71: Sequência de nucleotídeos que codifica huATO1 L2

SEQ ID NO: 72: Sequência de nucleotídeos que codifica hunB7 H3 IQGILALA

SEQ ID NO: 73: Sequência de nucleotídeos que codifica hunNB7 H3 IgG4Pro

SEQ ID NO: 74: Sequência de nucleotídeo que codifica hunB7 L3

SEQ ID NO: 75: Sequências de nucleotídeos de fragmentos de DNA que compreendem sequências de nucleotídeos que codificam a sequência sinalizadora de cadeia pesada humana e a região cons- tante de IGG1LALA humana

SEQ ID NO: 76: Sequências de nucleotídeos de fragmentos de DNA que compreendem sequências de nucleotídeos que codificam a sequência sinalizadora de cadeia pesada humana e a região cons- tante de IgG4Pro humana

SEQ ID NO: 77: Sequência de nucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada de huATO1 H1

SEQ ID NO: 78: Sequência de nucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada de huATO1 H3

SEQ ID NO: 79: Sequência de nucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve de huATO1 L1

SEQ ID NO: 80: Sequência de nucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve de huATO1 L2

SEQ ID NO: 81: Sequência de nucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada de huNB7 H3

SEQ ID NO: 82: Sequência de nucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve de huNB7 L3

SEQ ID NO: 83: Sequência de aminoácidos de TLR7 de ca- mundongo

SEQ ID NO: 84: Sequência de aminoácidos de TLR7 de rato

SEQ ID NO: 85: Sequência de aminoácidos de macaco TLR7

SEQ ID NO: 86: Sequência de nucleotídeos do gene HAD2 mutante D34A de Unc93B1 humano uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que con- siste em: (a) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 50; (b) uma sequência de aminoácidos que tem uma homologia de pelo menos 95 % ou mais com a sequência (a); e (c) uma sequência de aminoácidos derivada da sequência (a) por meio de eliminação, substituição ou adição de 1 a 10 aminoáci- dos; e uma região variável de cadeia leve que consiste em uma sequên- cia de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: (d) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 51; (e) uma sequência de aminoácidos que tem uma homologia de pelo menos 95 % ou mais com a sequência (d); e (f) uma sequência de aminoácidos derivada da sequência (d) por meio de eliminação, substituição ou adição de 1 a 10 aminoácidos.

11. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 41 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43; (b) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 41 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44; (c) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43; (d) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44; ou (e) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 50 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 51.

12. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia pesada que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 44.

13. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 45 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 48; (b) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 45 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 49; (c) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 48;

(f) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 462 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 47 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 49;

(g) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 471 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 52 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 53; ou

(h) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 468 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 54 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 53.

14. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 49.

15. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo caracterizado pelo fato de que tem as propriedades de: (a) ligação específica ao TLR7 humano, (b) inibição de uma função do TLR7 humano, e (c) que compreende: (1) CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 17, CDRH2 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 e CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 como regi- ões determinantes de complementaridade na cadeia pesada e CDRL1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20, CDRL?2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 21 e CDRL3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 22 como regiões determinantes de com- plementaridade na cadeia leve; (2) CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 23, CDRH2 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 24 e CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 25 como regi- ões determinantes de complementaridade na cadeia pesada e CDRL1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 26, CDRL?2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 27 e CDRL3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 28 como regiões determinantes de com- plementaridade na cadeia leve; ou (3) CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 29, CDRH2 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 30 e CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 31 como regi- ões determinantes de complementaridade na cadeia pesada e CDRL1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 32, CDRL?2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 33 e CDRL3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 34 como regiões determinantes de com- plementaridade na cadeia leve.

16. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que compreende: CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 17, CDRH2 que consiste na sequência de amino- ácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 e CDRH3 que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 como regiões determinantes de complementaridade na cadeia pesada, e CDRLI1 que consiste na sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 20, CDRL2 que consiste na sequência de amino- ácidos apresentada em SEQ ID NO: 21 e CDRL3 que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 22 como regiões determinantes de complementaridade na cadeia leve.

17. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, de acordo com a reivindicação 15 ou 16, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 5 e uma região

Claims

variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 11; (b) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7 e uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 13; ou (c) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 9 e uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 15.

18. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 17, carac- terizado pelo fato de que uma região constante é uma região constante derivada de humanos.

19. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 35 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 36; (b) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 471 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 37 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 38, ou (c) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 470 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 39 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 234 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 40.

20. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 19, carac- terizado pelo fato de que é humanizado.

21. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que compreende: (1) uma região variável de cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que con- siste em: (a) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 41; (b) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42; (c) uma sequência de aminoácidos que tem uma homologia de pelo menos 95 % ou mais com a sequência (a) ou (b); e (d) uma sequência de aminoácidos derivada da sequência (a) ou (b) por meio de eliminação, substituição ou adição de 1a 10 ami- noácidos; e uma região variável de cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: (e) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43; (f) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44; (9) uma sequência de aminoácidos que tem uma homologia de pelo menos 95 % ou mais com a sequência (e) ou (f); e (h) uma sequência de aminoácidos derivada da sequência

(e) ou (f) por meio de eliminação, substituição ou adição de 1 a 10 ami- noácidos; ou (Il) uma região variável de cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que con- siste em: (a) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 50; (b) uma sequência de aminoácidos que tem uma homologia de pelo menos 95% ou mais com a sequência (a); e (c) uma sequência de aminoácidos derivada da sequência (a) por meio de eliminação, substituição ou adição de 1 a 10 aminoáci- dos; e uma região variável de cadeia leve que consiste em uma sequên- cia de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: (d) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 51; (e) uma sequência de aminoácidos que tem uma homologia de pelo menos 95% ou mais com a sequência (d); e (f) uma sequência de aminoácidos derivada da sequência (d) por meio de eliminação, substituição ou adição de 1 a 10 aminoácidos.

22. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 41 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43; (b) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 41 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44;

(c) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43; (d) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44; ou (e) uma região variável de cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 50 e uma re- gião variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 51.

23. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia pesada que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 44.

24. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 45 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 48; (b) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 45 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 49;

(c) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 48;

(d) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 49;

(e) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 462 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 47 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 48;

(f) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 462 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 47 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 49;

(g) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 471 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 52 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 53; ou

(h) uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 468 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 54 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 53.

25. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 21 a 233 na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 49.

26. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 45 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos em posi- ções 21 a 233 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 48.

27. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos em posi- ções 21 a 233 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 48.

28. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 465 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos em posi- ções 21 a 233 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 49.

29. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 462 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 47 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos em posi- ções 21 a 233 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 49.

30. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 471 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 52 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos em posi- ções 21 a 233 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 53.

31. Anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do an- ticorpo caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada que consiste em uma sequência de aminoácidos nas posições 20 a 468 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 54 e uma cadeia leve que consiste em uma sequência de aminoácidos em posi- ções 21 a 233 na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 53.

32. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 26 a 31, carac- terizado pelo fato de que tem as propriedades de: (a) ligação específica ao TLR7 humano; e (b) inibição de uma função do TLR7 humano.

33. Fragmento de ligação a antígeno do anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, caracterizado pelo fato de que o fragmento de ligação a antígeno é selecionado a partir do grupo que consiste em Fab, F(ab)2, Fab'eFv.

34. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que compre- ende uma sequência de polinucleotídeo que codifica o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33.

35. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 34, ca- racterizado pelo fato de que compreende: (1) uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 17, uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRL1 que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20, uma sequên- cia de polinucleotídeos que codifica CDRL2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 21 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRL3 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 22; (2) uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 23, uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 24 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 25 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRL1 que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 26, uma sequên- cia de polinucleotídeos que codifica CDRL2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 27 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRL3 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 28; ou

(3) uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH1 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 29, uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 30 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRH3 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 31 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRL1 que consiste na se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 32, uma sequên- cia de polinucleotídeos que codifica CDRL2 que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 33 e uma sequência de polinucleotídeos que codifica CDRL3 que consiste na sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 34.

36. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 35, ca- racterizado pelo fato de que compreende: (1) uma sequência de polinucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em: (a) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 77; (b) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 78; e (c) uma sequência de polinucleotídeos de um polinucleotídeo que hibridiza com um polinucleotídeo que consiste em uma sequência de polinucleotídeos complementar à sequência de polinucleotídeos (a) ou (b) sob condições rigorosas; e uma sequência de polinucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em: (d) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 79; (e) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 80; e (f) uma sequência de polinucleotídeos de um polinucleotídeo que hibridiza com um polinucleotídeo que consiste em uma sequência de polinucleotídeos complementar à sequência de polinucleotídeos (d) ou (e) sob condições rigorosas; ou (Il) uma sequência de polinucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em: (a) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 81; e (b) uma sequência de polinucleotídeos de um polinucleotí- deo que hibridiza com um polinucleotídeo que consiste em uma sequên- cia de polinucleotídeos complementar à sequência de polinucleotídeos (a) sob condições rigorosas; e uma sequência de polinucleotídeos sele- cionada a partir do grupo que consiste em: (c) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 82; e (d) uma sequência de polinucleotídeos de um polinucleotí- deo que hibridiza com um polinucleotídeo que consiste em uma sequên- cia de polinucleotídeos complementar à sequência de polinucleotídeos (c) sob condições rigorosas.

37. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 36, ca- racterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 77 e uma se- quência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 79; (b) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 77 e uma se- quência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 80; (c) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 78 e uma se- quência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 79; (d) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 78 e uma se- quência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 80; ou (e) uma sequência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 81 e uma se- quência de polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 82.

38. Vetor de expressão, caracterizado pelo fato de que com- preende o polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 34 a 37.

39. Célula hospedeira caracterizada pelo fato de que é trans- formada com o vetor de expressão de acordo com a reivindicação 38.

40. Célula hospedeira, de acordo com a reivindicação 39, ca- racterizada pelo fato de que a célula hospedeira é uma célula eucariota.

41. Método para produzir um anticorpo ou fragmento de liga- ção a antígeno do anticorpo caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: cultivar a célula hospedeira de acordo com a reivindicação 39 ou 40; e coletar o anticorpo ou o fragmento de interesse da cultura obtida na etapa acima.

42. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do anti- corpo caracterizado pelo fato de que é obtido por meio do método de produção de acordo com a reivindicação 41.

43. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 32, caracterizado pelo fato de que compreende uma ou mais modificações selecionadas a partir do grupo que consiste em glicosila- ção N-ligada, glicosilação O-ligada, processamento N-terminal, proces- samento C-terminal, desamidação, isomerização de aspártico ácido, oxidação de metionina, adição de um resíduo de metionina ao N-tér- mino, amidação de um resíduo de prolina e eliminação de um ou dois aminoácidos no terminal carboxila da cadeia pesada.

44. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 43, caracteri- zado pelo fato de que compreende duas cadeias pesadas que consiste em um tipo ou uma combinação de quaisquer dois tipos de cadeias pe- sadas selecionadas a partir do grupo que consiste nas variantes de comprimento total e eliminação com um ou dois aminoácidos eliminados no terminal carboxila.

45. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 44, caracteri- zado pelo fato de que um aminoácido é eliminado no terminal carboxila em cada uma das duas cadeias pesadas.

46. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 43 a 45, caracterizado pelo fato de que um resíduo de prolina no terminal carboxila da cadeia pesada é ainda amidado.

47. Composição farmacêutica para tratar e/ou prevenir uma doença, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um dos anticorpos ou os fragmentos de ligação a antígeno dos anticorpos de acordo com as reivindicações 1 a 33 e 42 a 46 ou o vetor de expressão de acordo com a reivindicação 38 como um ingrediente ativo.

48. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 47 caracterizada pelo fato de que é para o tratamento de uma doença causada por uma função do TLR7 humano.

49. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindica- ção 48, caracterizada pelo fato de que a doença causada por uma fun- ção do TLR7 humano é uma doença relacionada à inflamação imune, uma doença alérgica, uma infecção ou um câncer.

50. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindica- ção 49, caracterizada pelo fato de que a doença relacionada à inflama- ção imune é lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatoide, artrite idio- pática juvenil, doença de Still de início na idade adulta, espondilite an- quilosante, esclerodermia sistêmica, polimiosite, dermatomiosite, artrite psoriática, osteoartrite, artrite conjuntiva mista, doença dos tecidos ou distrofia muscular.

51. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindica- ção 49 ou 50, caracterizada pelo fato de que a doença relacionada à inflamação imune é lúpus eritematoso sistêmico.

52. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 51, caracterizada pelo fato de que é para ser usada em combinação com um imunossupressor, um medicamento anti-inflamatório, um agente antialérgico, um agente anti-infeccioso ou um agente anticâncer.

53. Método para tratar uma doença causada por uma função do TLR7 humano caracterizado pelo fato de que compreende adminis- trar pelo menos um dos anticorpos ou o fragmento de ligação a antígeno dos anticorpos de acordo com as reivindicações 1 a 33 e 42 a 46 a um indivíduo.

54. Método para tratar uma doença causada por uma função do TLR7 humano caracterizado pelo fato de que compreende adminis- trar pelo menos um dos anticorpos ou o fragmento de ligação a antígeno dos anticorpos de acordo com as reivindicações 1 a 33 e 42 a 46, jun- tamente com um imunossupressor, um medicamento anti-inflamatório, um agente antialérgico, um agente anti-infeccioso ou um agente anti- câncer, simultânea, separada ou sequencialmente a um indivíduo.

55. Método de tratamento, de acordo com a reivindicação 53 ou 54, caracterizado pelo fato de que a doença causada por uma função do TLR7 humano é uma doença relacionada à inflamação imune, uma doença alérgica, uma infecção ou um câncer.

56. Método de tratamento, de acordo com a reivindicação 55, caracterizado pelo fato de que a doença relacionada à inflamação imune é lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatoide, artrite idiopática juve- nil, doença de Still de início na idade adulta, espondilite anquilosante, esclerodermia sistêmica, polimiosite, dermatomiosite, artrite psoriática, osteoartrite, artrite conjuntiva mista, doença dos tecidos ou distrofia muscular.

57. Método de tratamento, de acordo com a reivindicação 55 ou 56, caracterizado pelo fato de que a doença relacionada à inflamação imune é lúpus eritematoso sistêmico.